CN117031035A - 抗链球菌脱氧核糖核酸酶b抗体的检测试剂盒及方法 - Google Patents

抗链球菌脱氧核糖核酸酶b抗体的检测试剂盒及方法 Download PDF

Info

Publication number
CN117031035A
CN117031035A CN202310977696.2A CN202310977696A CN117031035A CN 117031035 A CN117031035 A CN 117031035A CN 202310977696 A CN202310977696 A CN 202310977696A CN 117031035 A CN117031035 A CN 117031035A
Authority
CN
China
Prior art keywords
reagent
deoxyribonuclease
antibody
buffer
streptococcal
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202310977696.2A
Other languages
English (en)
Inventor
邹继华
邵绯霞
黄盖鹏
仇玲玲
刘献文
方亮
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Medical System Biotechnology Co ltd
Original Assignee
Medical System Biotechnology Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Medical System Biotechnology Co ltd filed Critical Medical System Biotechnology Co ltd
Priority to CN202310977696.2A priority Critical patent/CN117031035A/zh
Publication of CN117031035A publication Critical patent/CN117031035A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6854—Immunoglobulins
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/54313—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form
    • G01N33/54346—Nanoparticles
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G01N33/56911—Bacteria
    • G01N33/56944—Streptococcus
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/573—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for enzymes or isoenzymes
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
    • G01N2333/914—Hydrolases (3)
    • G01N2333/916—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1), e.g. phosphatases (3.1.3), phospholipases C or phospholipases D (3.1.4)
    • G01N2333/922—Ribonucleases (RNAses); Deoxyribonucleases (DNAses)
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2469/00—Immunoassays for the detection of microorganisms
    • G01N2469/20—Detection of antibodies in sample from host which are directed against antigens from microorganisms
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Nanotechnology (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明提供了一种抗链球菌脱氧核糖核酸酶B抗体的检测试剂盒及方法，检测试剂盒包括：试剂一，试剂一包括缓冲液一，表面活性剂，盐类物质，防腐剂；试剂二，试剂二包括缓冲液二，包被有链球菌脱氧核糖核酸酶B的聚苯乙烯胶乳微球蛋白复合物，保护剂，防腐剂；校准物质。本发明解决了现有抗链球菌脱氧核糖核酸酶B抗体检测试剂盒操作复杂，检测速度慢的技术问题，实现了操作简便，检测速度快且检测灵敏度高的技术效果。

Description

抗链球菌脱氧核糖核酸酶B抗体的检测试剂盒及方法
技术领域
本发明涉及生物检测技术领域，具体而言，涉及一种抗链球菌脱氧核糖核酸酶B抗体的检测试剂盒及方法。
背景技术
人类约90％的链球菌感染是由A族链球菌引起的，其感染主要可以引起人体化脓性感染、中毒性疾病(猩红热和链球菌毒性休克综合征等)和变态反应性疾病(风湿热和急性肾小球肾炎等)。
研究证实，乙型溶血链球菌能产生A、B、C、D四种抗原性不同的脱氧核糖核酸酶(DNase)。其中最重要的是DNase B，它生成的数量远多于A、C、D型，以致人体感染乙型溶血链球菌后，由于DNase B的抗原性作用，能很快产生DNaseB的抗体ADNaseB，并持续升高数月后下降。ADNaseB均可作为链球菌感染的诊断指标，可用于诊断由链球菌感染引发的各种疾病。
目前，对于抗DNA酶B抗体的检测多采用天然DNaseB，然而，天然DNaseB的纯化工艺复杂，获取成本昂贵。因此，为解决上述问题，授权公告号为CN111218438B的中国专利“一种链球菌脱氧核糖核酸酶B抗原及其应用”，其抗DNaseB抗体检测试剂盒采用的试剂主要为包被DNase B融合优势表位抗原的酶联板、辣根过氧化物酶(HRP)标记的DNase B融合优势表位抗原、样品稀释液、洗涤液、TMB显色底物A液、TMB显色底物B液和反应终止液。存在的问题是：采用上述检测试剂盒检测操作过于复杂，检测速度慢，且人工操作容易出现检测误差。
为解决上述问题，本发明提供一种操作简便，检测速度快且灵敏度高的抗链球菌脱氧核糖核酸酶B抗体的检测试剂盒。
发明内容
本发明解决了现有抗链球菌脱氧核糖核酸酶B抗体检测试剂盒操作复杂，检测速度慢的技术问题，实现了操作简便，检测速度快且检测灵敏度高的技术效果。
为解决上述问题，本发明提供一种抗链球菌脱氧核糖核酸酶B抗体的检测试剂盒，包括：试剂一，试剂一包括缓冲液一，表面活性剂，盐类物质，防腐剂；试剂二，试剂二包括缓冲液二，包被有链球菌脱氧核糖核酸酶B的聚苯乙烯胶乳微球蛋白复合物，保护剂，防腐剂；校准物质。
与现有技术相比，采用该技术方案所达到的技术效果：试剂一和试剂二中的缓冲液能够提供相对稳定的离子环境和pH缓冲能力，防腐剂能够使试剂具有内在的抵抗微生物污染的能力，能够杀灭或抑制微生物生长，具有防腐作用。试剂一中含有的盐类物质和表面活性剂可以有效地抑制血液样本中结合胆红素，非结合胆红素，甘油三酯和血红蛋白等物质吸附到微球蛋白复合物上。试剂二中的保护剂可增加试剂的长期稳定性，同时试剂二具有高特异性和高灵敏度，血液样本中抗链球菌脱氧核糖核酸酶B抗体能够与试剂二中包被有链球菌脱氧核糖核酸酶B的聚苯乙烯胶乳微球蛋白复合物特异性结合，进而形成乳浊液，产生一定的浊度，其浊度高低与血液样本中的抗链球菌脱氧核糖核酸酶B抗体浓度成正比关系，在一定波长下进行浊度测定，即可测得血液样本中被检测抗链球菌脱氧核糖核酸酶B抗体的含量，操作简便灵敏度、准确度高，精密度好，检测线性宽，稳定性好且抗干扰能力强。
在本发明的一个实例中，聚苯乙烯胶乳微球蛋白复合物为聚苯乙烯胶乳微球通过羧基与惰性蛋白结合的复合物。
与现有技术相比，采用该技术方案所达到的技术效果：包被有链球菌脱氧核糖核酸酶B的聚苯乙烯胶乳微球蛋白复合物，其包被方法为聚苯乙烯胶乳微球表面的羧基通过1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(EDC)和N-羟基丁二酰亚胺(NHS)活化，然后与惰性蛋白上的氨基结合，从而形成聚苯乙烯胶乳微球蛋白复合物，这种复合物表面的功能基团相对单独的聚苯乙烯胶乳微球而言，有更大的偶联抗原的空间和更多的功能团。
在本发明的一个实例中，聚苯乙烯胶乳微球的粒径为60-400nm。
与现有技术相比，采用该技术方案所达到的技术效果：此粒径范围内的聚苯乙烯胶乳微球结合抗体效率高，能够提高试剂灵敏度。
在本发明的一个实例中，聚苯乙烯胶乳微球的粒径为220-300nm。
与现有技术相比，采用该技术方案所达到的技术效果：此粒径范围内的胶乳羧基含量更高，结合抗体效率更高，进而提高试剂灵敏度效果更佳。
在本发明的一个实例中，惰性蛋白为牛血清白蛋白，卵清蛋白，酪蛋白中的任一种。
与现有技术相比，采用该技术方案所达到的技术效果：惰性蛋白可以选择上述任一种，这些蛋白含有多种氨基酸，可以与聚苯乙烯胶乳微球表面的羧基结合。惰性蛋白优选为牛血清白蛋白。
在本发明的一个实例中，缓冲液一和缓冲液二为4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液，磷酸盐缓冲液，三羟基氨基甲烷盐酸缓冲液中的任一种。
与现有技术相比，采用该技术方案所达到的技术效果：缓冲液可以选择上述任一种，能够提供相对稳定的离子环境和pH缓冲能力。
在本发明的一个实例中，表面活性剂为十二烷基苯磺酸钠，烷基葡糖苷和聚山梨酯中的至少一种；保护剂为蔗糖，甘油，牛血清白蛋白，甘氨酸中的至少一种；盐类物质为氯化钠，氯化钾，乙二胺四乙酸二钠中的至少一种；防腐剂为Proclin-300或叠氮化钠。
与现有技术相比，采用该技术方案所达到的技术效果：上述试剂容易得到，可以根据实际需求进行选择。
在本发明的一个实例中，校准物质包括浓度范围在0-600U/mL的添加不同浓度水平的抗链球菌脱氧核糖核酸酶B抗体的溶液。
与现有技术相比，采用该技术方案所达到的技术效果：通过校准物质，采用6点定标法，以样条函数作为计算模式，绘制出校准曲线，进而能够根据校准曲线得到检测样本中抗链球菌脱氧核糖核酸酶B抗体的含量。
在本发明的一个实例中，链球菌脱氧核糖核酸酶B为天然抗原或重组抗原。
本发明还提供一种抗链球菌脱氧核糖核酸酶B抗体的检测方法，采用上述任一实例的检测试剂盒，检测方法包括以下步骤：S10：将血液样本与试剂一混合，得到混合溶液；S20：将试剂二与混合溶液混合，得到乳浊液；
S20：对乳浊液进行浊度测定，得到血液样本中抗链球菌脱氧核糖核酸酶B抗体的含量。
与现有技术相比，采用该技术方案所达到的技术效果：上述检测方法采用上述任一实例的检测试剂盒，具有检测试剂盒所有的有益效果，在此不再赘述。并且本发明使用胶乳增强免疫比浊法，适用于全自动生化分析仪，操作方便，检测快速，减低成本的同时还可以大大提高检测效率，更好地满足临床应用。
附图说明
本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中：
图1为本发明实施例提供的标准曲线；
图2为发明实施例提供的相关性分析曲线。
具体实施方式
为使本发明的上述目的、特征和优点能够更为明显易懂，下面对本发明的具体实施例做详细的说明。
实施例一：
本发明提供一种抗链球菌脱氧核糖核酸酶B抗体的检测试剂盒，包括：试剂一，试剂一包括缓冲液一，表面活性剂，盐类物质，防腐剂；试剂二，试剂二包括缓冲液二，包被有链球菌脱氧核糖核酸酶B的聚苯乙烯胶乳微球蛋白复合物，保护剂，防腐剂；校准物质。
具体的，试剂一和试剂二中的缓冲液能够提供相对稳定的离子环境和pH缓冲能力，防腐剂能够使试剂具有内在的抵抗微生物污染的能力，能够杀灭或抑制微生物生长，具有防腐作用。试剂一中含有的盐类物质和表面活性剂可以有效地抑制血液样本中结合胆红素，非结合胆红素，甘油三酯和血红蛋白等物质吸附到微球蛋白复合物上。试剂二中的保护剂可增加试剂的长期稳定性，同时试剂二具有高特异性和高灵敏度，血液样本中抗链球菌脱氧核糖核酸酶B抗体能够与试剂二中包被有链球菌脱氧核糖核酸酶B的聚苯乙烯胶乳微球蛋白复合物特异性结合，进而形成乳浊液，产生一定的浊度，其浊度高低与血液样本中的抗链球菌脱氧核糖核酸酶B抗体浓度成正比关系，在一定波长下进行浊度测定，即可测得血液样本中被检测抗链球菌脱氧核糖核酸酶B抗体的含量，操作简便灵敏度、准确度高，精密度好，检测线性宽，稳定性好且抗干扰能力强。
进一步的，聚苯乙烯胶乳微球蛋白复合物为聚苯乙烯胶乳微球通过羧基与惰性蛋白结合的复合物。
具体的，包被有链球菌脱氧核糖核酸酶B的聚苯乙烯胶乳微球蛋白复合物，其包被方法为聚苯乙烯胶乳微球表面的羧基通过1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(EDC)和N-羟基丁二酰亚胺(NHS)活化，然后与惰性蛋白上的氨基结合，从而形成聚苯乙烯胶乳微球蛋白复合物，这种复合物表面的功能基团相对单独的聚苯乙烯胶乳微球而言，有更大的偶联抗原的空间和更多的功能团。之后加入链球菌脱氧核糖核酸酶B，使其通过化学键结合到微球和惰性蛋白复合物表面的羧基功能团上。该偶联方法可以使更多的抗原结合到胶乳微球蛋白复合物上，而且结合也更为牢固，从而增加试剂的灵敏度和稳定性。
进一步的，聚苯乙烯胶乳微球的粒径为60-400nm。
具体的，此粒径范围内的聚苯乙烯胶乳微球结合抗体效率高，能够提高试剂灵敏度。
进一步的，聚苯乙烯胶乳微球的粒径为220-300nm。
具体的，此粒径范围内的胶乳羧基含量更高，结合抗体效率更高，进而提高试剂灵敏度效果更佳。
进一步的，惰性蛋白为牛血清白蛋白(BSA)，卵清蛋白，酪蛋白中的任一种。
具体的，惰性蛋白可以选择上述任一种，这些蛋白含有多种氨基酸，可以与聚苯乙烯胶乳微球表面的羧基结合。优选的，惰性蛋白为BSA。
进一步的，缓冲液一和缓冲液二为4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)缓冲液，磷酸盐缓冲液，三羟基氨基甲烷盐酸(Tris-HCl)缓冲液中的任一种。
进一步的，表面活性剂为十二烷基苯磺酸钠，烷基葡糖苷(APG)和聚山梨酯(吐温)中的至少一种；保护剂为蔗糖，甘油，牛血清白蛋白，甘氨酸中的至少一种；盐类物质为氯化钠，氯化钾，乙二胺四乙酸二钠中的至少一种；防腐剂为Proclin-300或叠氮化钠。
进一步的，校准物质包括浓度范围在0-600U/mL的添加不同浓度水平的抗链球菌脱氧核糖核酸酶B抗体的溶液。
具体的，校准物质中还包括缓冲液，盐类物质，保护剂，防腐剂。缓冲液，盐类物质，保护剂，防腐剂选自上述溶剂，在此不再赘述。
进一步的，链球菌脱氧核糖核酸酶B为天然抗原或重组抗原。
实施例二：
本实施例提供一种检测抗链球菌脱氧核糖核酸酶B抗体的检测试剂盒的校准物质，原料组分及用量如下：
校准物质1：15mmol/L 4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)缓冲液(pH7.4)、9g/L氯化钠、50g/L BSA、20g/L蔗糖、0.1g/L Proclin-300；
校准物质2：15mmol/L 4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)缓冲液(pH7.4)、9g/L氯化钠、50g/L BSA、20g/L蔗糖、0.1g/L Proclin-300，50U/ml天然抗链球菌脱氧核糖核酸酶B抗体；
校准物质3：15mmol/L 4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)缓冲液(pH7.4)、9g/L氯化钠、50g/L BSA、20g/L蔗糖、0.1g/L Proclin-300，100U/ml天然抗链球菌脱氧核糖核酸酶B抗体；
校准物质4：15mmol/L 4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)缓冲液(pH7.4)、9g/L氯化钠、50g/L BSA、20g/L蔗糖、0.1g/L Proclin-300，200U/ml天然抗链球菌脱氧核糖核酸酶B抗体；
校准物质5：15mmol/L 4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)缓冲液(pH7.4)、9g/L氯化钠、50g/L BSA、20g/L蔗糖、0.1g/L Proclin-300，400U/ml天然抗链球菌脱氧核糖核酸酶B抗体；
校准物质6：15mmol/L 4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)缓冲液(pH7.4)、9g/L氯化钠、50g/L BSA、20g/L蔗糖、0.1g/L Proclin-300，600U/ml天然抗链球菌脱氧核糖核酸酶B抗体。
实施例三：
本实施例提供一种检测抗链球菌脱氧核糖核酸酶B抗体的检测试剂盒，其各试剂原料组分及配置工艺如下：
试剂一包括：
100mmol/L 4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)缓冲液，3％氯化钠，0.3％乙二胺四乙酸二钠，0.1％ Proclin 300，5％十二烷基苯磺酸钠和0.2％聚山梨酯20(吐温20)。
试剂二通过以下方法制备得到：
标记有链球菌脱氧核糖核酸酶B的聚苯乙烯胶乳微球蛋白复合物的制备：将粒径为220nm的聚苯乙烯胶乳颗粒用15mM HEPES(pH 7.4)缓冲液稀释到0.25％的浓度，加入0.5mg/mLEDAC，0.3mg/mLNHS和3.5mg/mLBSA，室温反应8小时，制备得到胶乳微球蛋白复合物活化液。然后在胶乳微球蛋白复合物活化液中加入0.3mg/mL的链球菌脱氧核糖核酸酶B，室温反应8小时。然后，12000rpm转速离心30min，去上清，沉淀悬浮于50mM HEPES(pH7.8)中，超声分散，加入2％ BSA和3.75％甘氨酸室温封闭2小时。离心去上清，加入50mM HEPES(pH7.8)，0.4％BSA，20％甘油，2％蔗糖，0.2％甘氨酸和0.1％ Proclin 300，以溶解胶乳，超声分散，制备得到试剂二。
实施例四；
本发明还提供一种抗链球菌脱氧核糖核酸酶B抗体的检测方法，采用上述任一实例的检测试剂盒，检测方法包括以下步骤：
S10：将血液样本与试剂一混合，得到混合溶液；
S20：将试剂二与混合溶液混合，得到乳浊液；
S20：对乳浊液进行浊度测定，得到血液样本中抗链球菌脱氧核糖核酸酶B抗体的含量。
具体的，采用本发明提供的检测试剂盒测定血液样本中抗链球菌脱氧核糖核酸酶B抗体含量时，测定方法是两点终点法，检测波长为600nm。试剂一和试剂二的用量分别为200μL和50μL，血液样本用量为3μL；反应方向向上，测定温度为37℃。
首先将血液样本与试剂一混匀后孵育5分钟，然后加入试剂二，立即读取第一点吸光度值(A1)，计时反应5分钟后，读取第二点吸光度值(A2)，计算两点吸光度差值，得到反应吸光度，并根据校准曲线得到血液样本中抗链球菌脱氧核糖核酸酶B抗体的含量。
通过校准物质，采用上述检测方法，本发明采用6点定标法，以样条函数作为计算模式，绘制出校准曲线，参见图1，图1为标准曲线。
本发明使用胶乳增强免疫比浊法，适用于全自动生化分析仪，操作方便，检测快速，减低成本的同时还可以大大提高检测效率，更好地满足临床应用。
实施例五：
对上述实施例提供的检测抗链球菌脱氧核糖核酸酶B抗体的检测试剂盒进行性能试验。
(1)灵敏度试验
以水为空白样本，选取一份低值样本按比例进行稀释，配制出不同浓度的样本，每个样本重复测定10次，计算平均值和标准差(SD)，测定结果参见表1。灵敏度为50U/mL。
表1
(2)稳定性试验
1.在2-8℃贮存条件下，分别在0月、4月、8月、12月和14月对同一样本进行测定，每个样本重复测定10次，测定结果参见表2。样本分装后，储存于-80℃。4月，8月，12月，14月与0月相比，测得值差异小，说明本发明的检测试剂盒在2-8℃贮存条件下可稳定存放一年。
表2
ADNaseB 0月 4月 8月 12月 14月
试剂空白吸光度A0 1.2427 1.2478 1.2692 1.3242 1.3334
样本1测得值 215.5 224.8 217.8 210.5 208.7
与0月偏差(％) 4.32％ 1.07％ -2.32％ -3.16％
样本2测得值 523.7 524.9 521.7 519.7 520.7
与0月偏差(％) 0.23％ -0.38％ -0.76％ -0.57％
2.试剂开封后放在全自动生化仪上，分别在0天、3天、7天、14天、21天和30天对同一样本进行测定，每个样本重复测定10次，测定结果参见表3。样本分装后，储存于-80℃。3天、7天、14天、21天、30天与0天相比，测得值差异小，说明本发明的检测试剂盒开瓶后在2-8℃条件下可稳定存放一个月。
表3
ADNaseB 0月 3天 7天 14天 21天 30天
试剂空白吸光度A0 1.2418 1.2321 1.2435 1.2530 1.2601 1.2752
样本测得值 214.8 217.8 216.9 219.6 223.4 225.1
与0月偏差(％) 1.40％ 0.98％ 2.23％ 4.00％ 4.80％
样本测得值 508.4 509.4 508.6 511.3 514.8 517.2
与0月偏差(％) 0.20％ 0.04％ 0.57％ 1.26％ 1.73％
(4)相关性分析
采用本发明提供的检测试剂盒和市场上的A试剂盒分别检测同一血液样本，对测定样本的值进行相关分析，结果参见表4和图2。由图2可知，本发明提供的检测试剂盒和市场上的A试剂盒测定血液样本的相关系数为R2＝0.995，回归方程为y＝0.9886x+2.7199。该结果表明本发明提供的检测试剂盒准确度可靠。
表4
综上所述，本发明提供的检测试剂盒灵敏度高、重复性好、测试结果准确、性能稳定。
虽然本发明披露如上，但本发明并非限定于此。任何本领域技术人员，在不脱离本发明的精神和范围内，均可作各种更动与修改，因此本发明的保护范围应当以权利要求所限定的范围为准。

Claims (10)

1.一种抗链球菌脱氧核糖核酸酶B抗体的检测试剂盒，其特征在于，包括：
试剂一，所述试剂一包括缓冲液一，表面活性剂，盐类物质，防腐剂；
试剂二，所述试剂二包括缓冲液二，包被有链球菌脱氧核糖核酸酶B的聚苯乙烯胶乳微球蛋白复合物，保护剂，所述防腐剂；
校准物质。
2.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述聚苯乙烯胶乳微球蛋白复合物为聚苯乙烯胶乳微球通过羧基与惰性蛋白结合的复合物。
3.根据权利要求2所述的检测试剂盒，其特征在于，所述聚苯乙烯胶乳微球的粒径为60-400nm。
4.根据权利要求2所述的检测试剂盒，其特征在于，所述聚苯乙烯胶乳微球的粒径为220-300nm。
5.根据权利要求2所述的检测试剂盒，其特征在于，所述惰性蛋白为牛血清白蛋白，卵清蛋白，酪蛋白中的任一种。
6.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述缓冲液一和所述缓冲液二为4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液，磷酸盐缓冲液，三羟基氨基甲烷盐酸缓冲液中的任一种。
7.根据权利要求7所述的检测试剂盒，其特征在于，所述表面活性剂为十二烷基苯磺酸钠，烷基葡糖苷和聚山梨酯中的至少一种；
所述保护剂为蔗糖，甘油，牛血清白蛋白，甘氨酸中的至少一种；
所述盐类物质为氯化钠，氯化钾，乙二胺四乙酸二钠中的至少一种；
所述防腐剂为Proclin-300或叠氮化钠。
8.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述校准物质包括浓度范围在0-600U/mL的添加不同浓度水平的抗链球菌脱氧核糖核酸酶B抗体的溶液。
9.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述链球菌脱氧核糖核酸酶B为天然抗原或重组抗原。
10.一种抗链球菌脱氧核糖核酸酶B抗体的检测方法，其特征在于，采用权利要求1-9中任一项所述的检测试剂盒，所述检测方法包括以下步骤：
S10：将血液样本与试剂一混合，得到混合溶液；
S20：将试剂二与所述混合溶液混合，得到乳浊液；
S20：对所述乳浊液进行浊度测定，得到所述血液样本中抗链球菌脱氧核糖核酸酶B抗体的含量。
CN202310977696.2A 2023-08-04 2023-08-04 抗链球菌脱氧核糖核酸酶b抗体的检测试剂盒及方法 Pending CN117031035A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202310977696.2A CN117031035A (zh) 2023-08-04 2023-08-04 抗链球菌脱氧核糖核酸酶b抗体的检测试剂盒及方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202310977696.2A CN117031035A (zh) 2023-08-04 2023-08-04 抗链球菌脱氧核糖核酸酶b抗体的检测试剂盒及方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN117031035A true CN117031035A (zh) 2023-11-10

Family

ID=88644042

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202310977696.2A Pending CN117031035A (zh) 2023-08-04 2023-08-04 抗链球菌脱氧核糖核酸酶b抗体的检测试剂盒及方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN117031035A (zh)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102759631B (zh) 一种定量检测降钙素原pct的胶乳增强免疫比浊试剂盒
US20220163534A1 (en) Kit for detecting soluble growth stimulation expressed gene 2 protein
CN109613259A (zh) 一种高灵敏度、宽检测范围的人肝素结合蛋白测定试剂盒
CN111057150B (zh) 一种乳胶微球及其应用以及糖化血红蛋白检测试剂盒
CN111562372B (zh) 一种检测肌酸激酶同工酶ck-mb的胶乳增强免疫比浊法试剂盒
CN110687286A (zh) 胶乳增强免疫比浊法试剂盒
CN110806487A (zh) 一种用于人肝素结合蛋白检测的试剂盒及其制备方法
CN111610335A (zh) 时间分辨荧光免疫层析试纸条、包含其的试剂盒及其应用
CN108445230B (zh) 基于纳米抗体的降钙素原化学发光检测试剂及检测方法
CN202916286U (zh) 一种定量检测降钙素原pct的胶乳增强免疫比浊试剂盒
CN103308681A (zh) 胰蛋白酶原-2检测试剂盒及制备方法
CN112816698A (zh) 提高检测临床相关性的缓冲试剂和胶乳免疫比浊试剂盒
CN114544934A (zh) 一种曲霉半乳甘露聚糖检测试纸条及其应用
CN114487420A (zh) 一种肌酸激酶同工酶检测试剂盒
CN112698034B (zh) 一种癌胚抗原cea的检测试剂盒
CN111999505A (zh) 检测抗链球菌溶血素o的试剂及其制备方法
CN114200129B (zh) 组织金属蛋白酶抑制剂-2胶乳免疫比浊法血尿同检试剂盒
EP0241140A1 (en) Assay method with a multivalently labelled reagent, and means therefor
CN117031035A (zh) 抗链球菌脱氧核糖核酸酶b抗体的检测试剂盒及方法
CN115236325A (zh) 一种胶乳增强免疫比浊法测定ctx的试剂盒及其制备检测方法
CN112710841B (zh) St2蛋白检测试剂盒和检测方法
CN111208292B (zh) 肺炎支原体抗体IgM的免疫检测试剂盒、其制备方法及使用方法
CN111239411A (zh) 肺炎支原体抗体IgG的免疫检测试剂盒、其制备方法及使用方法
CN112485441A (zh) 一种抗链球菌溶血素o检测试剂盒
CN112763724A (zh) 同时测定血清和尿液中视黄醇结合蛋白含量的试剂组合及试剂盒

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination