CN117017894A - 一种抗皮肤衰老的试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种抗皮肤衰老的试剂盒,属于医学美容技术领域。本发明提供的试剂盒包括含虾青素的固体和包括寡肽等的液体。本发明提供的试剂盒可以消除、减轻和/或改善皮肤的衰老老化现象,如干燥,粗糙,色素沉着,和/或细纹等现象。
Description
技术领域
本发明属于医学美容技术领域,具体涉及一种抗皮肤衰老的试剂盒,更具体地涉及包括细胞外囊泡和虾青素的固体和包括寡肽等的液体的组合试剂盒;所述的试剂盒可以用于消除、减轻和/或改善皮肤的炎性,衰老老化现象,如痤疮,干燥,粗糙,色素沉着,细纹等现象,具有抗衰老等用途。
背景技术
随着年龄和/或环境的变化,人体的皮肤等器官或组织会发生衰老,表现出皮肤干燥、粗糙、脂溢性角化、色素沉着等现象或状态。随着社会发展,人们生活水平提高,对美的追求也随之提升,因此,抗衰老,提升皮肤健康状态,特别是消除、减少皮肤色素沉着,减少细纹或阻止细纹形成等抗衰老途径,是追求美丽健康抗衰老的直接快速的方式。
皱纹,由皮肤老化引起,皮肤老化是随时间流逝、环境变化影响(如紫外线照射)自然变化发生的。一般来说,皮肤的水分含量、胶原蛋白含量和对外部环境的免疫反应,胶原蛋白酶的表达水平和活性对皱纹的形成有最大影响。
皮肤的外在颜色,特别是偏深偏暗的肤色和色斑,与黑色素的含量与分布有关;黑色素是通过黑色素细胞产生的,并且经过系列生理过程运输至皮肤角质层,表现为皮肤深颜色或色斑,大部分黑色素最后随着角质层脱落而排出体外。因此,根据皮肤黑色素的形成、运输和代谢(排出)过程,消除、减少色素沉着的方法可以包括:抑制黑色素的生成,如控制外源性刺激影响因素如减少紫外线照射,或加入酪氨酸结构类似物,抑制酪氨酸酶与酪氨酸结合,抑制酪氨酸酶的活性等;或抑制黑色素运输至角质细胞;或加快黑色素向角质层方向转移,并加强角质层代谢,从而加快黑色素代谢。在这些可能的方法中,有多种可能的原材料及其组合,然而,限于各种因素相互影响或制约(如氢醌副作用大,维生素C稳定性差,烟酰胺刺激性大,部分药物溶解性差),高性能的优越产品,市场上仍然稀缺。
对于水溶性差的或者稳定性差的药物/活性成分/原料,为了解决其递送问题,有使用纳米技术,脂质体微球,或者细胞外囊泡等技术递送药物/活性成分/原料,但是基于纳米颗粒和脂质体的药物递送方法可导致形成瘤体(如由几种不同类型的组织组成的肿瘤),基于脂质体的药物递送方法存在内化至特定细胞、组织或器官中的效率较低的问题,而细胞外囊泡在各种生物液体中天然稳定,具有免疫学惰性,表现出器官特异性靶向能力。细胞外囊泡是细胞释放到细胞外空间的双层纳米小泡。细胞外囊泡含有内源性脂质、核酸和蛋白质,富含胆固醇、磷酸甘油酯和神经酰胺等物质。为了用于皮肤,采用细胞外囊泡递送活性成分/原料,也已成为研究热点,但适宜来源的细胞外囊泡及其与其他功能性成分的适宜组合及形式,仍然是难以获知,成熟的、高性能的产品仍然少见。
发明内容
基于目前存在的问题和需求,本发明提供了一种可以消除、减轻和/或改善皮肤的炎性状态(如痤疮、痤疮后的疤痕),衰老老化现象如干燥,粗糙,色素沉着,细纹等现象的试剂盒;还提供具有较好的稳定性,较低的刺激性和较高的功效和使用顺应性的试剂盒。
由此,本发明提供一种试剂盒,其包括:固体和液体;所述固体基本上由人参细胞外囊泡,虾青素,人参细胞外囊泡包封的虾青素,甘露醇和海藻糖组成;所述液体包括:寡肽-1,寡肽-2,寡肽-5,精氨酸/赖氨酸多肽,九肽-1,乙酰基八肽-3,二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐,甘油葡糖苷,燕麦β-葡聚糖,对羟基苯乙酮,1,3-丁二醇,1,2-己二醇和水;所述固体和液体在使用前是物理分离状态的。
本发明提供的试剂盒,在使用前,固体和液体处于物理分离状态,有利于保持各物料稳定,在临用前,将所述固体和所述液体混合均匀或溶解,然后可以以涂抹方式或其他方式作用于面部皮肤或其他有需要的皮肤表面或表皮内。
本发明中,人参细胞外囊泡,是人参细胞释放到细胞外空间的双层纳米小泡,具有脂质双分子层结构,膜含有胆固醇、磷酸甘油酯和神经酰胺等物质,囊泡内含有脂质、核酸和蛋白质等,具有极高的生物相容性,极强的渗透能力和靶向性,可以向下调节黑色素形成相关蛋白,被皮肤吸收后,对皮肤保湿、皮肤美白、减少皱纹、抗衰老等表现出很好的效果。
本发明中,所述人参细胞外囊泡或包封有虾青素的外囊泡,直径为50nm-150nm,或者50nm-120nm。在一些实施方式中,所述人参细胞外囊泡或包封有虾青素的外囊泡,直径为65nm-116nm。在一些实施方式中,所述人参细胞外囊泡或包封有虾青素的外囊泡,直径为65nm-100nm。在一些实施方式中,所述人参细胞外囊泡或包封有虾青素的外囊泡,直径为85nm。在一些实施方式中,所述人参细胞外囊泡或包封有虾青素的外囊泡,直径为70nm。
虾青素,又名3,3′-二羟基-4,4′-二酮基-β,β′-胡萝卜素,具有极强的抗氧化作用;其难溶于水,稳定性极差,易氧化、见光易分解,且其为红色,在溶剂中容易显示出不利于外用的不愉悦的颜色,不利于用于制剂。
本发明中,至少大部分虾青素被人参细胞外囊泡包封,其仍然可以呈分子状态,因人参细胞外囊泡的渗透性和靶向性,可以被快速地吸收和靶向至作用位点(如浅层或深层皮肤的细胞中),更好地发挥作用;并且人参细胞外囊泡包封虾青素可以显著提高虾青素的稳定性,提高虾青素的皮肤渗透率和使虾青素更易于被吸收利用。
本发明中,包封的虾青素,可以是包封于人参细胞外囊泡内部空腔中,也可以是被包封于人参细胞外囊泡的膜结构内。
所述固体中,人参细胞外囊泡包封的虾青素,相对于游离的虾青素,更易于被吸收和利用;相对游离的人参外囊泡和/或游离的虾青素,人参细胞外囊泡和人参细胞外囊泡包封的虾青素,进入和作用于皮肤后,具有更好的对皮肤保湿、皮肤美白、减少皱纹、抗衰老等作用(也即相对各自的游离体,具有协同作用);而且刺激性更低,稳定性更高。相对游离的人参细胞外囊泡和游离的虾青素的组合,本发明提供的固体,在同等剂量条件下,具有更好的皮肤保湿、皮肤美白、减少皱纹、抗衰老等作用(也即具有协同作用);而且刺激性更低,稳定性更高。本发明提供的固体,
根据本发明,根据质量比计算,相对虾青素的总质量,至少80%的虾青素被人参细胞外囊泡包封。在一些实施方式中,根据质量比计算,相对虾青素的总质量,至少85%的虾青素被人参细胞外囊泡包封。在一些实施方式中,根据质量比计算,相对虾青素的总质量,至少90%的虾青素被人参细胞外囊泡包封。在一些实施方式中,根据质量比计算,相对虾青素的总质量,至少95%的虾青素被人参细胞外囊泡包封。在一些实施方式中,根据质量比计算,相对虾青素的总质量,至少97%的虾青素被人参细胞外囊泡包封。在一些实施方式中,根据质量比计算,相对虾青素的总质量,至少99%的虾青素被人参细胞外囊泡包封。在一些实施方式中,根据质量比计算,相对虾青素的总质量,至少99.5%的虾青素被人参细胞外囊泡包封。在一些实施方式中,全部虾青素被部分人参细胞外囊泡包封。
根据本发明,所述固体中,虾青素的总质量(即游离的虾青素和被包封的虾青素的总质量),与人参细胞外囊泡和虾青素的总质量(即游离的人参细胞外囊泡,游离的虾青素和包封有虾青素的包封体的总质量)之比不低于0.2%。在一些实施方式中,所述固体中,虾青素的总质量与人参细胞外囊泡和虾青素的总质量之比不低于0.25%。在一些实施方式中,所述固体中,虾青素的总质量与人参细胞外囊泡和虾青素的总质量之比不低于0.3%。在一些实施方式中,所述固体中,虾青素的总质量与人参细胞外囊泡和虾青素的总质量之比不低于0.5%。在一些实施方式中,所述固体中,虾青素的总质量与人参细胞外囊泡和虾青素的总质量之比不低于1.0%。
在一些实施方式中,所述固体中,虾青素的总质量与人参细胞外囊泡和虾青素的总质量之比为0.26%。在一些实施方式中,所述固体中,虾青素的总质量与人参细胞外囊泡和虾青素的总质量之比为0.3%。
所述固体中,适宜量的甘露醇和/或海藻糖,有利于各原料的稳定,也有利于所述固体与所述液体形成适宜粘稠度的溶液或混合液,如果混合液粘稠度过低,使用时则感觉过于稀薄,使用体验感差;如果混合液粘稠度过高,则使用时黏腻,且不利于成分的吸收。
使用人参细胞外囊泡包封的虾青素,复配甘露醇和海藻糖,有利于固体的稳定和吸收利用,进一步地复配本发明所述的液体,可以更高效地发挥人参细胞外囊泡和虾青素的美白、抗衰老等改善皮肤状态的作用,并且,刺激性低,基本无刺激性,使用体验感也更好。
根据本发明,所述固体中,海藻糖与甘露醇的质量比可以为1:1-1:10,优选为1:3-1:6,进一步优选为1:5;适宜的比例,有助于人参细胞外囊泡和虾青素的溶解或分散以及功效的发挥。
根据本发明,所述固体中,人参细胞外囊泡和虾青素的总质量与海藻糖的质量之比可以为1:1-1:10,优选为1:2-1:6,进一步优选为1:5;适宜的比例,有助于人参细胞外囊泡和虾青素的溶解或分散以及功效的发挥。
所述固体可以由制备原料的水溶液经过冻干获得。
在一些实施方式中,所述固体的制备原料包括:以质量百分数计,2%-10%的甘露醇,0.5%-10%的海藻糖,人参细胞外囊泡和虾青素共0.2%-5%,其余为水。
在一些实施方式中,所述固体的制备原料包括:以质量百分数计,5%的甘露醇和1%的海藻糖。
在一些实施方式中,所述固体的制备原料包括:以质量百分数计,人参细胞外囊泡和虾青素共0.2%,0.5%,1%,1.5%,2%,2.5%,3%,或4%。
在一些实施方式中,所述固体的制备原料包括:以质量百分数计,5%的甘露醇,1%的海藻糖,人参细胞外囊泡和虾青素共0.2%,其余为水。在一些实施方式中,所述固体的制备原料包括:以质量百分数计,5%的甘露醇,1%的海藻糖,人参细胞外囊泡和虾青素共0.5%,其余为水。在一些实施方式中,所述固体的制备原料包括:以质量百分数计,5%的甘露醇,1%的海藻糖,人参细胞外囊泡和虾青素共1%,其余为水。以上述配比的原料制备所述固体,可以得到分散性好,无不良感受颜色的混合物。
在一些实施方式中,所述固体的制备原料包括:以质量百分数计,5%的甘露醇,1%的海藻糖,人参细胞外囊泡和虾青素共2%,其余为水。在一些实施方式中,所述固体的制备原料包括:以质量百分数计,5%的甘露醇,1%的海藻糖,人参细胞外囊泡和虾青素共5%,其余为水。以上述配比的原料制备所述固体,虽因虾青素较多,带来混合物略微呈红色,但仍然可以得到分散均匀的混合物,且功效更强。
所述固体中,还可含有少量水;根据本发明,所述固体中,以质量百分数计,水含量低于5%。在一些实施方式中,所述固体中,以质量百分数计,水含量低于3%。在一些实施方式中,所述固体中,以质量百分数计,水含量低于2%。在一些实施方式中,所述固体中,以质量百分数计,水含量在2%-1%。在一些实施方式中,所述固体中,以质量百分数计,水含量低于1%。
根据本发明,所述固体还可以与其他适宜溶剂混匀后外用。本发明提供的所述固体,还可以口服使用。
根据发明人的研究,所述试剂盒的功效,不仅与组分及其组成相关,还与各组分的含量比例相关。本发明中,为了使所述试剂盒既提供高效的抗衰老作用,又能够保持高稳定性,以及尽可能低的刺激性等不期望的作用,需控制各组分在一定的含量范围。根据本发明的实施例,所述固体的质量(mg)与所述液体的体积(mL)之比可以为10mg/mL-100mg/mL。在一些实施方式中,所述固体的质量(mg)与所述液体的体积(mL)之比为12mg/mL,15.5mg/mL,23mg/mL,31mg/mL,或46.5mg/mL,或62mg/mL,或77.5mg/mL,或93mg/mL,有利于固体的溶解或分散,提供高效的抗衰老作用,又能够保持高稳定性和低刺激性(包括无红色的颜色刺激性)。
在一些实施方式中,所述固体的质量(mg)与所述液体的体积(mL)之比为10mg/mL-31mg/mL,有利于固体的溶解或分散,提供高效的抗衰老作用,又能够保持高稳定性和低刺激性以及良好的使用体验感。
所述液体包括了多种肽和溶剂等,其可以溶解或分散所述固体,使各原料更好地被吸收;这些肽和溶剂等成分组合使用,还有利于为皮肤提供营养成分,有助于保湿和皮肤吸收补充水分,改善皮肤炎性状态,提升皮肤屏障功能,刺激、促进弹性蛋白的形成,可以使皮肤弹性提升,减少皮肤细纹,改善皮肤因痤疮等造成的疤痕、红肿;并且,这些液体和前述的固体复配组合后,可以发挥协同作用,相对使用单独的固体的溶液/混悬液,或者单独使用所述液体,使用组合后的试剂,具有更低的刺激性和更强的改善色素沉着,改善细纹等改善衰老状态的作用,更有利于抗皮肤衰老,以及改善皮肤因痤疮等造成的疤痕、红肿等。
根据本发明的实施例,所述液体中,基于液体的总质量,所述寡肽-1的质量分数不超过0.01%,或者所述寡肽-2的质量分数不超过0.002%,或者所述寡肽-5的质量分数不超过0.004%;这些组分的含量过高,则安全风险和质量等控制难度大幅提高,不适于本发明的试剂盒,过低,则难以发挥相应作用。
根据本发明的实施例,所述液体中,基于液体的总质量,所述乙酰基八肽-3或精氨酸/赖氨酸多肽的质量分数不超过0.02%,或者所述二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐的质量分数不超过0.05%;这些组分的含量过高,则安全风险和质量等控制难度大幅提高,不适于本发明的试剂盒,过低,则难以发挥相应作用。
在一些实施方式中,基于液体的总质量,所述液体中寡肽-1的质量分数为0.001%,寡肽-2的质量分数为0.0002%,寡肽-5的质量分数为0.0004%,精氨酸/赖氨酸多肽的质量分数为0.0015%,乙酰基八肽-3的质量分数为0.0015%,和二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐的质量分数为0.0045%。
基于液体的总质量,所述液体中,所述九肽-1的质量分数可以为0.0005%-0.05%。在一些实施方式中,基于液体的总质量,所述液体中九肽-1的质量分数为0.001%-0.01%。在一些实施方式中,基于液体的总质量,所述液体中九肽-1的质量分数为0.005%。
基于液体的总质量,所述液体中,所述甘油葡糖苷的质量分数可以为0.05%-5%。在一些实施方式中,基于液体的总质量,所述液体中甘油葡糖苷的质量分数为0.1%-1%。在一些实施方式中,基于液体的总质量,所述液体中甘油葡糖苷的质量分数为0.5%。
基于液体的总质量,所述液体中,所述燕麦β-葡聚糖的质量分数可以为0.001%-0.5%。在一些实施方式中,基于液体的总质量,所述液体中所述燕麦β-葡聚糖的质量分数为0.005%-0.02%。在一些实施方式中,基于液体的总质量,所述液体中所述燕麦β-葡聚糖的质量分数为0.01%。
在一些实施方式中,基于液体的总质量,所述液体中,甘油葡糖苷的质量分数为0.5%和燕麦β-葡聚糖的质量分数为0.01%。
在一些实施方式中,基于液体的总质量,所述液体中,寡肽-1的质量分数为0.001%,寡肽-2的质量分数为0.0002%,寡肽-5的质量分数为0.0004%,精氨酸/赖氨酸多肽的质量分数为0.0015%,乙酰基八肽-3的质量分数为0.0015%,二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐的质量分数为0.0045%,九肽-1的质量分数为0.005%,甘油葡糖苷的质量分数为0.5%和燕麦β-葡聚糖的质量分数为0.01%。
基于液体的总质量,所述液体中,所述1,3-丁二醇的质量分数可以为1%-10%,所述1,2-己二醇的质量分数可以为0.1%-2%和所述对羟基苯乙酮的质量分数可以为0.1%-2%。
在一些实施方式中,基于液体的总质量,所述液体中,所述1,3-丁二醇的质量分数为5%,所述1,2-己二醇的质量分数为0.5%和所述对羟基苯乙酮的质量分数为0.5%。
为进一步提升试剂盒的抗衰老作用,所述液体可以含有肌肽。基于液体的总质量,所述液体中,所述肌肽的质量分数可以为0.01%-1.5%。在一些实施方式中,基于液体的总质量,所述液体中肌肽的质量分数为0.08%-0.15%。在一些实施方式中,基于液体的总质量,所述液体中肌肽的质量分数为0.11%。
为了更全面和更高效地提供减少色素沉着的作用,所述液体中可以含有烟酰胺。基于液体的总质量,所述液体中,烟酰胺的质量分数可以为0.01%-0.5%。在一些实施方式中,基于液体的总质量,所述液体中烟酰胺的质量分数为0.11%。
根据本发明的实施例,所述试剂盒的液体任选含有透明质酸或其盐,如透明质酸钠或透明质酸锌。
透明质酸钠或透明质酸锌可以使试剂盒具有保湿作用,有利于保湿和改善干燥粗糙,同时可以作为增稠剂。在一些实施方式中,基于液体的总质量,所述液体可以含有透明质酸钠或透明质酸锌,质量分数可以为0.01%-0.1%。在一些实施方式中,所述液体含有透明质酸钠,质量分数为0.05%。所述透明质酸钠或透明质酸锌分子量可以为100万道尔顿-150万道尔顿。
根据本发明的实施例,所述试剂盒的液体任选含有甘油磷酸肌醇胆碱盐,苯氧乙醇或乙基己基甘油;所述液体可以含有这些成分中的一种或多种,也可以不含这些成分中的一种或多种。
在一些实施方式中,基于液体的总质量,所述液体可以含有甘油磷酸肌醇胆碱盐,质量分数可以为0.005%-0.1%。在一些实施方式中,基于液体的总质量,所述液体含有质量分数为0.02%的甘油磷酸肌醇胆碱盐。在一些实施方式中,基于液体的总质量,所述液体可以含有苯氧乙醇或乙基己基甘油,质量分数可以为0.0001%-0.05%。在一些实施方式中,基于液体的总质量,所述液体含有质量分数为0.002%的苯氧乙醇或乙基己基甘油。
在一些实施方式中,基于液体的总质量,所述液体中,寡肽-1的质量分数为0.001%,寡肽-2的质量分数为0.0002%,寡肽-5的质量分数为0.0004%,精氨酸/赖氨酸多肽的质量分数为0.0015%,乙酰基八肽-3的质量分数为0.0015%,二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐的质量分数为0.0045%和九肽-1的质量分数为0.005%;所述甘油葡糖苷的质量分数为0.5%和所述燕麦β-葡聚糖的质量分数为0.01%;所述1,3-丁二醇的质量分数为5%,所述1,2-己二醇的质量分数为0.5%和所述对羟基苯乙酮的质量分数为0.5%。
在一些实施方式中,基于液体的总质量,所述液体中,寡肽-1的质量分数为0.001%,寡肽-2的质量分数为0.0002%,寡肽-5的质量分数为0.0004%,精氨酸/赖氨酸多肽的质量分数为0.0015%,乙酰基八肽-3的质量分数为0.0015%,二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐的质量分数为0.0045%,肌肽的质量分数为0.11%和九肽-1的质量分数为0.005%;所述甘油葡糖苷的质量分数为0.5%和所述燕麦β-葡聚糖的质量分数为0.01%;所述1,3-丁二醇的质量分数为5%,所述1,2-己二醇的质量分数为0.5%和所述对羟基苯乙酮的质量分数为0.5%。
在一些实施方式中,基于液体的总质量,所述液体中,寡肽-1的质量分数为0.001%,寡肽-2的质量分数为0.0002%,寡肽-5的质量分数为0.0004%,精氨酸/赖氨酸多肽的质量分数为0.0015%,乙酰基八肽-3的质量分数为0.0015%,二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐的质量分数为0.0045%,肌肽的质量分数为0.11%和九肽-1的质量分数为0.005%;所述烟酰胺的质量分数为0.11%;所述甘油葡糖苷的质量分数为0.5%,所述燕麦β-葡聚糖的质量分数为0.01%;所述1,3-丁二醇的质量分数为5%,所述1,2-己二醇的质量分数为0.5%和所述对羟基苯乙酮的质量分数为0.5%。
在一些实施方式中,基于液体的总质量,所述液体中寡肽-1的质量分数为0.001%,寡肽-2的质量分数为0.0002%,寡肽-5的质量分数为0.0004%,精氨酸/赖氨酸多肽的质量分数为0.0015%,乙酰基八肽-3的质量分数为0.0015%,二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐的质量分数为0.0045%,肌肽的质量分数为0.11%和九肽-1的质量分数为0.005%;所述烟酰胺的质量分数为0.11%;所述甘油葡糖苷的质量分数为0.5%,所述燕麦β-葡聚糖的质量分数为0.01%;所述1,3-丁二醇的质量分数为5%,所述1,2-己二醇的质量分数为0.5%,和所述对羟基苯乙酮的质量分数为0.5%;任选含有质量分数为0.05%的透明质酸钠,和/或质量分数为0.02%的甘油磷酸肌醇胆碱盐。
在一些实施方式中,基于液体的总质量,所述液体中寡肽-1的质量分数为0.001%,寡肽-2的质量分数为0.0002%,寡肽-5的质量分数为0.0004%,精氨酸/赖氨酸多肽的质量分数为0.0015%,乙酰基八肽-3的质量分数为0.0015%,二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐的质量分数为0.0045%,肌肽的质量分数为0.11%和九肽-1的质量分数为0.005%;所述烟酰胺的质量分数为0.11%;所述甘油葡糖苷的质量分数为0.5%,所述燕麦β-葡聚糖的质量分数为0.01%;所述1,3-丁二醇的质量分数为5%,所述1,2-己二醇的质量分数为0.5%,和所述对羟基苯乙酮的质量分数为0.5%;任选含有质量分数为0.05%的透明质酸钠,质量分数为0.02%的甘油磷酸肌醇胆碱盐,和/或质量分数为0.002%的苯氧乙醇或乙基己基甘油。
所述液体,可以直接涂抹于面部等有需要的皮肤表面,具有一定的改善面部等皮肤干燥、细纹等抗衰老作用。
上述的液体与前述的固体混合后,可形成溶解或分散好,渗透性强,易被吸收,无刺激性或低刺激性的具有更好抗衰老等作用的混合物,可以用于皮肤健康状态改善。
本发明提供的试剂盒,为外用或局部使用的试剂盒。
本发明提供的试剂盒,在使用前,所述固体和液体处于物理分离状态,临用时,将所述固体和所述液体混合均匀或溶解,然后所得的混合液可涂抹于有需要的皮肤表面或者以其他方式(如仪器导入)分布于面部或有需要的皮肤表面或内部。所述固体和液体混合后,为了保证安全性和有效性,所得的混合液需在不超过72小时使用完全,或者需将所得的混合液存放于0℃-15℃避光环境。为了更好地保证功效发挥和保证使用安全性,所述固体和液体混合后,所得的混合液可以在24小时或以内分2次使用完,第一次使用后余下的部分,可以存放于0℃-15℃避光环境。为了更好地保证功效发挥和保证使用安全性,在一些实施方式中,本发明提供的试剂盒是在所述固体和所述液体混合后使用一次或两次后就抛弃的型式。在一些实施方式中,本发明提供的试剂盒是在所述固体和所述液体混合后24小时后就抛弃的型式。在一些实施方式中,本发明提供的试剂盒是在所述固体和所述液体混合后48小时或72小时后就抛弃的型式。
本发明的试剂盒,能够发挥人参细胞外囊泡和虾青素的协同作用,并且其中的人参细胞外囊泡和虾青素易于渗透至皮肤内,被皮肤吸收和发挥作用,具有较好的消除、减轻和/或改善皮肤的色素沉着、细纹的作用,对促进皮肤的胶原蛋白和弹性蛋白的形成,减少细纹,抗衰老作用有协同作用,同时具有较好的稳定性,较低的刺激性和较高的使用顺应性,能够较好地改善皮肤的衰老现象,并且易于生产中质量控制,存储和转移等。
另一方面,本发明还提供了所述试剂盒的制备方法。
一种制备前述试剂盒的方法,包括:制备得到所述固体,制备得到所述液体,使所述固体和液体处于物理分离状态;得到试剂盒。
根据本发明,制备得到所述固体的方法,包括:将甘露醇,海藻糖用水溶解,灭菌,然后在0℃-35℃条件下,加入含有人参外囊泡包封的虾青素,人参外囊泡和虾青素的混合物,混合,灌入容器,得到灌装半成品;将所得半成品置入冻干机,预冻至低于-38℃(如-40℃),保温0.5小时-1.5小时;然后抽真空至低于50Pa,升温至-30℃±2℃,在温度-30℃±2℃保温6小时-10小时;升温至-5℃±2℃,保温3小时-8小时;升温至10℃±2℃,保温10小时-15小时;升温至25℃±2℃,保温8小时-12小时;任选地,再升温至25℃-35℃;然后取出,得到所述固体。
在一些实施方式中,制备得到所述固体的方法,包括:将甘露醇,海藻糖用水溶解,湿热灭菌,然后降温至室温;再加入人参外囊泡包封的虾青素,人参外囊泡和虾青素的混合物,混合,灌入容器,得到灌装半成品;将所得半成品置入冻干机,预冻至-40℃,保温1小时;然后抽真空至30Pa,升温至-30℃,在温度-30℃保温8小时;升温至-5℃,保温5小时;升温至10℃,保温13小时;升温至25℃,保温10小时;任选地,再升温至35℃;然后取出,得到所述固体。
在一些实施方式中,制备得到所述固体的方法,包括:将甘露醇,海藻糖用水溶解,经过121℃,0.1mPa,30分钟湿热灭菌。
在一些实施方式中,制备得到所述固体的方法,包括:将甘露醇,海藻糖用水溶解,经过121℃,0.1mPa,30分钟湿热灭菌,然后降温至室温;加入人参外囊泡包封的虾青素,人参外囊泡和虾青素的混合物,混合,灌入容器,得到灌装半成品;将所得半成品置入冻干机,预冻至-40℃,保温1小时;然后抽真空至30Pa,加热至-30℃,在-30℃保温8小时;升温至-5℃,保温5小时;升温至10℃,保温13小时;升温至25℃,保温10小时;然后取出;得到所述固体。
所述灭菌可以采用过滤除菌的方式或湿热灭菌的方式。
根据本发明,制备得到所述液体的方法,包括:在加热条件和搅拌条件下,混合水,部分1,3-丁二醇,任选加入透明质酸钠或透明质酸锌;然后在加热条件和搅拌条件下,加入剩余的1,3-丁二醇,1,2-己二醇和对羟基苯乙酮,任选加入肌肽和烟酰胺;然后控温,搅拌条件下,加入寡肽-1,寡肽-2,寡肽-5,乙酰基八肽-3,精氨酸/赖氨酸多肽,二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐,九肽-1,甘油葡糖苷和燕麦β-葡聚糖,任选加入甘油磷酸肌醇胆碱盐,苯氧乙醇和/或乙基己基甘油;混合均匀,得到所述液体。
所述加热条件为温度控制为35℃-100℃。在一些实施方式中,所述加热条件为温度控制为45℃-90℃,或者50℃-75℃;或者40℃-65℃,或者45℃-65℃。在一些实施方式中,所述加热条件为温度控制为85℃,65℃或45℃。
所述控温为将混合体系温度控制为15℃-50℃。在一些实施方式中,所述控温为将混合体系温度控制为15℃-45℃,或15℃-35℃,或20℃-40℃,或20℃-45℃,或30℃-50℃。
在一些实施方式中,一种制备前述试剂盒的方法,包括:在40℃-90℃条件和搅拌条件下,混合水,部分1,3-丁二醇,任选加入透明质酸钠或透明质酸锌;然后在50℃-75℃条件和搅拌条件下,加入剩余的1,3-丁二醇,1,2-己二醇和对羟基苯乙酮,任选加入肌肽和烟酰胺;然后控温15℃-50℃,搅拌条件下,加入寡肽-1,寡肽-2,寡肽-5,乙酰基八肽-3,精氨酸/赖氨酸多肽,二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐,九肽-1,甘油葡糖苷和燕麦β-葡聚糖,任选加甘油磷酸肌醇胆碱盐,苯氧乙醇和/或乙基己基甘油;混合均匀,得到所述液体。
在一些实施方式中,一种制备前述试剂盒的方法,包括:在40℃-90℃条件和搅拌条件下,混合水,部分1,3-丁二醇,透明质酸钠或透明质酸锌;然后在50℃-75℃条件和搅拌条件下,加入剩余的1,3-丁二醇,1,2-己二醇,对羟基苯乙酮,烟酰胺和肌肽;然后控温15℃-50℃,搅拌条件下,加入寡肽-1,寡肽-2,寡肽-5,乙酰基八肽-3,精氨酸/赖氨酸多肽,二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐,九肽-1,甘油葡糖苷和燕麦β-葡聚糖和甘油磷酸肌醇胆碱盐;混合均匀,得到所述液体。
在一些实施方式中,一种制备前述试剂盒的方法,包括:在85℃条件和搅拌条件下,混合水,部分1,3-丁二醇,透明质酸钠或透明质酸锌;然后在65℃条件和搅拌条件下,加入剩余的1,3-丁二醇,1,2-己二醇,对羟基苯乙酮,烟酰胺和肌肽;然后控温45℃,搅拌条件下,加入寡肽-1,寡肽-2,寡肽-5,乙酰基八肽-3,精氨酸/赖氨酸多肽,二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐,九肽-1,甘油葡糖苷和燕麦β-葡聚糖和甘油磷酸肌醇胆碱盐;混合均匀,得到所述液体。
所述制备试剂盒的方法,简便、可控,易于操作,可以简便地获得试剂盒,并且使其中的成分不会发生降解、变性等不符合质量要求的现象。
具体实施方式
术语“包含”或“包括”为开放式表达,即包括本发明所指明的内容,但并不排除其他方面的内容。
本发明中,“基本上由······组成”表示还可以含有不可避免的杂质和/或水。
本发明中,ppm表示百万分之一,基于质量计算。
本发明中,任选表示可以有也可以没有。
在本说明书的描述中,参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“一些实施方式”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中,对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且,描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外,在不相互矛盾的情况下,本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。
本发明中,室温为环境温度,在20℃-30℃,或者22℃-28℃,或者25℃。
为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案,下面进一步披露一些非限制实施例,对本发明作进一步的详细说明。
以下实施例中,烟酰胺中烟酸低于50ppm。
以下实施例中,原料虾青素混合物(可从市场购买获得或根据现有技术的方法制备得到),即人参细胞外囊泡包封的虾青素、人参细胞外囊泡和虾青素的混合物;虾青素质量与虾青素混合物总质量之比为0.3%,不低于80%的虾青素被包封于人参细胞外囊泡。将虾青素混合物1g用15mL超纯水复溶,所得溶液中颗粒数(即囊泡数)为1.06*1012个/mL。
实施例I-1:试剂盒配方的筛选
1)不同的液体配方:
液体制备方法:
将水,部分1,3-丁二醇(约一半),任选的透明质酸钠,混合,搅拌,加热到85℃,保温搅拌20分钟;然后降温至65℃,加入剩余的1,3-丁二醇,1,2-己二醇,对羟基苯乙酮,烟酰胺和肌肽(如有),搅拌,溶解;再降温至45℃,加入寡肽-1,寡肽-2,寡肽-5,二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐,乙酰基八肽-3,精氨酸/赖氨酸多肽,九肽-1,甘油葡糖苷,燕麦(AVENASATIVA)β-葡聚糖,甘油磷酸肌醇胆碱盐,搅拌,溶解;再降温至35℃以下,得到液体。
液体与虾青素混合物的混合(按照15mg/mL混合)及使用情况:
配方1:与虾青素混合物能够混合均匀,质地浓、稠,肤感厚重;
配方2:与虾青素混合物能够混合均匀,质地较稠,使用肤感偏厚重,也可接受;
配方3:与虾青素混合物能够混合均匀,使用顺滑,肤感舒适;
配方3-2:与虾青素固体能够混合均匀,使用顺滑,肤感舒适。
2)制备固体的原料配方
固体制备方法:
按照配方,将甘露醇,海藻糖用水溶解,经过121℃,0.1mPa,30分钟湿热灭菌,然后降温至室温;加入虾青素混合物,混合均匀,灌入容器,得到灌装半成品;将所得灌装半成品置入冻干机,预冻至-40℃,保温1小时;然后抽真空至30Pa,加热至-30℃,在温度-30℃保温8小时;升温至-5℃,保温5小时;升温至10℃,保温13小时;升温至25℃,保温10小时;然后取出;得到固体。
卡尔费休滴定法(KF法)检测:所得固体含水量,在1%-2%之间。
所得固体与液体配方3的混合所得混合液(按照30mg/mL配制)情况:
配方4:可溶,无色,粘稠;配方5:可溶,无色,稠度合适;配方6:需较长时间溶解,混合液轻微显黄色;配方7:能够混合均匀,混合液呈浅黄色,静置一段时间后有少量不溶物。
3)不同固液比例的配方及其溶解情况
将根据配方5制备得到的固体和根据配方3制备得到的液体按照配方比混合溶解/分散,得到各配方。
根据混合过程和结果,认为配方12混合时间、粘稠度等相对更优,除配方12外的其他配方可接受,粘稠度差异带来使用舒适度略有差别。
实施例I-2:试剂盒的制备
配方:使用配方5和配方3,分别采用实施例I-1的方法,得到固体和精华液体,然后按照每毫升液体配套24mg固体的比例,分别灌装,每瓶72mg固体,每支3mL精华液体,得到1套试剂盒。
使用:将所述液体和固体混合均匀,涂抹于手臂内侧,粘稠度合适,使用肤感舒适。
实施例I-3:试剂盒的制备
配方:使用配方5和配方3,分别采用实施例I-1的方法,得到固体和精华液体,然后按照每毫升液体配套31mg固体的比例,分别灌装,每瓶93mg固体,每支3mL精华液体,得到1套试剂盒。
使用:将所述液体和固体混合均匀,涂抹于手臂内侧,粘稠度合适,使用肤感舒适。
实施例I-4:试剂盒的制备
配方:使用配方5和配方3,分别采用实施例I-1的方法,得到固体和精华液体,然后按照每毫升液体配套62mg固体的比例,分别灌装,每瓶186mg固体,每支3mL精华液体,得到1套试剂盒。
使用:将所述液体和固体混合均匀,涂抹于手臂内侧,部分人使用后认为略厚重,部分人使用认为肤感舒适;此试剂盒仍然可接受。
实施例II-1:原料虾青素混合物改善色素沉着测试
采用斑马鱼试验方法,使用斑马鱼测试原料虾青素混合物样品是否可以抑制酪氨酸激酶活性及抑制率情况;使用野生型AB品系斑马鱼,鱼龄:受精后6小时(6hpf);按照实验室标准饲养和繁殖方法,符合国际AAALAC认证的要求,饲养和繁殖成鱼。
1)酪氨酸激酶活性抑制率测试
随机选取斑马鱼于6孔板中,每孔30尾;按照设定浓度(质量分数),将测试样品用水溶解,同时设置正常对照组(不加测试样品),每孔容量为3mL,并且三次生物学重复;28℃条件下避光孵育45h;收样后使用研磨仪研磨匀浆,离心取上清,用BCA蛋白浓度测定试剂盒,测定各实验组蛋白质浓度;取250μg斑马鱼样品总蛋白质,按体积比1:1加入1mmol/L的左旋多巴溶液,混匀;将液体转移至96孔板中,200μL/孔,利用酶标仪在475nm波长处测定吸光度值(OD475);根据公式计算样品的抑制酪氨酸激酶活性的抑制率,抑制率(%)=(正常对照组的OD475-样品组的OD475)/正常对照组的OD475*100%;统计学分析p<0.05,判定为有显著性差异;结果见下表。
根据实验结果可知,所述虾青素混合物可以明显抑制酪氨酸激酶活性。
2)对黑色素蛋白的抑制率
随机选取斑马鱼于6孔板中,每孔30尾;按照设定浓度(质量分数),将测试样品用水溶解,同时设置正常对照组(不加测试样品),每孔容量为3mL,并且三次生物学重复;28℃条件下避光孵育45h;用1.5mL离心管收样,每管加RIPA裂解液,用研磨仪研磨匀浆,离心取上清;每管加入0.2mol/L的NaOH溶液350μL,60℃水浴1h;用0.2mol/L的NaOH溶液按照一定浓度配制黑色素蛋白标准溶液;将标准溶液及待测样品转移至96孔板中,100μL/孔,利用酶标仪在405nm波长处测定吸光度值(OD405),再根据标准曲线得到各样品组黑色素蛋白含量(C),根据公式计算样品对黑色素蛋白的抑制率,抑制率(%)=(正常对照组的含量C-样品组的含量C)/正常对照组的含量C*100%;统计学分析p<0.05,判定为有显著性差异;结果见下表。
根据实验结果可知,一定浓度的虾青素混合物和精华液都可以明显抑制黑色素蛋白生成,降低黑色素蛋白含量。
实施例II-2:弹性蛋白酶抑制测试
样品:临用前,用62mg固体(配方5)溶于3mL液体(配方3),取0.3mL,固体浓度计为20.7mg/mL。
脂质体:取虾青素脂质体(质量比计,虾青素含量为0.2%)配制成750mg/mL的水溶液,取0.3mL。
弹性蛋白酶抑制实验原理是弹性蛋白酶与酶底物发生反应,添加活性物质后吸光度发生变化,通过测定吸光度变化的大小可以反映弹性蛋白酶抑制剂抑制率的大小。
参照《化妆品抗皱紧致功效体外测试方法(弹性蛋白酶抑制法)》设计、进行实验:在96孔板中加入适量的缓冲溶液、待测样品溶液或对照溶液、底物,振荡混匀后孵育20分钟,随后加入弹性蛋白酶溶液,立即振荡孵育10分钟,用酶标仪在410nm处测定吸光度,分析处理数据计算待测样品对弹性蛋白酶的抑制率;弹性蛋白酶抑制率(%)=[1-(A-B)/(C-D)]*100%,式中:
A为实验组吸光度(含底物、缓冲溶液、弹性蛋白酶溶液,含待测样品溶液);
B为实验空白组吸光度(含底物、缓冲溶液,不含弹性蛋白酶溶液,含待测样品溶液);
C为对照组吸光度(含底物、缓冲溶液、弹性蛋白酶溶液,不含待测样品溶液);
D为空白组吸光度(含底物、缓冲溶液,不含弹性蛋白酶溶液,不含待测样品溶液);
实验结果见下表。
实验分组 | 实验浓度 | 弹性蛋白酶抑制率(%) | P值 | 差异性分析 |
样品 | 20.7mg/mL | 14.49 | <0.05 | 有统计学差异 |
虾青素脂质体 | 750mg/mL | 14.02 | <0.05 | 有统计学差异 |
阳性对照组:槲皮素溶液 | 200μg/mL | 94.57 | <0.05 | 有统计学差异 |
阴性对照组:水 | / | 3.62 | / | / |
备注:p<0.05说明与阴性对照组相比有统计学差异,p≥0.05说明与阴性对照组相比无统计学差异。
阳性对照组浓度为200μg/mL时,弹性蛋白酶抑制率≥90%,说明反应体系有效;根据实验结果可知,本发明的试剂盒可以有效抑制弹性蛋白酶,具有紧致抗皱作用,且本发明的试剂盒比虾青素脂质体的弹性蛋白酶抑制作用更强。
实施例II-3:刺激性测试
按照《化妆品安全技术规范》(2015年版)的相关方法,采用皮肤封闭型斑贴试验,设计、进行实验。
试验样品:临用前,用93mg固体(配方5)溶于3mL液体(配方3)。
受试者:选择健康成人男性和女性受试者,年龄在20岁-40岁,平均年龄28岁。
方法:选用合格的斑贴试器材,面积不超过50mm2,深度约1mm,圆形直径为8mm,用封闭性斑贴试验方法进行测试;将受试物约0.02mL-0.025mL置于斑试器内,外用低致敏胶带贴敷于受试者前臂,左右各3个,各个小室边缘间隔不小于3cm,用手掌轻压使之均匀贴敷于皮肤上,持续24小时;然后在符合标准的实验室区域去除斑试器,在符合标准的测试区域中静坐30min,并分别于自去除斑贴试器起后0.5h、24h、48h观察皮肤反应,按照《化妆品安全技术规范》(2015年版)的相关评级标准(参见下表)评分评级,得到测试结果。
具体测试结果见下表。
根据实验结果可知,本发明的试剂盒在此模型下温和无刺激。
实施例II-4:稳定性测试
参照《中国药典》2020年版四部附录原料药与制剂稳定性试验指导原则设计进行试验,考察各测试样品的高温稳定性情况,具体条件如下:高温试验(高温45℃):样品置于棕色避光玻璃瓶中,密封,在45±2℃,75%±5%RH(相对湿度)下放置,于0天、30天分别取样,观察,检测。
高温试验液体样品:按照配方3和实施例I-1的方法,得到液体。
固体样品:按照配方5得到固体,分别取93mg固体,检测时,用5毫升液体稀释。
抗紫外实验方法/条件:将按照配方5所得固体和游离虾青素分别用二甲基亚砜溶解,配制成120微克/毫升(以虾青素计)的溶液,然后在紫外灯下照射2天,分别检测照射前后的虾青素含量。
检测结果:参见下表。
根据检测结果可知,本发明提供的固体和液体,稳定性高,且相对游离的虾青素,具有更好的抗紫外能力。
本发明的方案已经通过较佳实施例进行了描述,相关人员明显能在本发明内容和范围内对本文所述的方案或应用进行改动或适当变更与组合,来实现和应用本发明技术。本领域技术人员可以借鉴本文内容,适当改进条件/参数来实现和/或应用本发明技术。特别需要指出的是,所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的,它们都被视为包括在本发明内。
Claims (10)
1.一种试剂盒,其包括:固体和液体;其中,
所述固体基本上由人参细胞外囊泡,虾青素,人参细胞外囊泡包封的虾青素,甘露醇和海藻糖组成;
所述液体包括:寡肽-1,寡肽-2,寡肽-5,精氨酸/赖氨酸多肽,九肽-1,乙酰基八肽-3,二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐,甘油葡糖苷,燕麦β-葡聚糖,对羟基苯乙酮,1,3-丁二醇,1,2-己二醇和水;所述液体任选含有肌肽,烟酰胺,透明质酸钠,透明质酸锌,甘油磷酸肌醇胆碱盐,苯氧乙醇或乙基己基甘油中的一种或多种;和
所述固体和液体在使用前是物理分离状态的。
2.权利要求1所述的试剂盒,包括以下条件中的至少之一:
虾青素的总质量与人参细胞外囊泡和虾青素的总质量之比不低于0.2%或0.25%;
人参细胞外囊泡和虾青素的总质量与海藻糖的质量之比为1:1-1:10;
海藻糖与甘露醇的质量比为1:1-1:10;
根据质量比计算,相对虾青素的总质量,至少80%或90%或95%或97%或99%的虾青素被人参细胞外囊泡包封;
以质量百分数计,所述固体中水分含量低于5%或3%或2%;
所述固体的质量与所述液体的体积之比为10mg/mL-100mg/mL或10mg/mL-31mg/mL;和
所述液体或烟酰胺中,烟酸的含量低于80ppm或者低于50ppm。
3.权利要求1或2所述的试剂盒,其中,所述固体由制备原料经过冻干获得;所述的制备原料为:以质量百分数计,2%-10%的甘露醇和0.5%-10%的海藻糖,或者5%的甘露醇和1%的海藻糖,以及人参细胞外囊泡和虾青素共0.2%-5%,其余为水。
4.权利要求1-3任一所述的试剂盒,所述液体中,基于液体的总质量,所述寡肽-1的质量分数不超过0.01%,所述寡肽-2的质量分数不超过0.002%,所述寡肽-5的质量分数不超过0.004%,所述乙酰基八肽-3或精氨酸/赖氨酸多肽的质量分数不超过0.02%,所述二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐的质量分数不超过0.05%,所述九肽-1的质量分数为0.0005%-0.05%,所述甘油葡糖苷的质量分数为0.05%-5%,所述燕麦β-葡聚糖的质量分数为0.001%-0.5%,所述1,3-丁二醇的质量分数为1%-10%,所述1,2-己二醇的质量分数为0.1%-2%,和所述对羟基苯乙酮的质量分数为0.1%-2%。
5.权利要求1-4任一所述的试剂盒,所述液体中,基于液体的总质量,所述肌肽的质量分数为0.01%-1.5%,或者所述烟酰胺的质量分数为0.01%-0.5%,或者所述透明质酸钠或透明质酸锌的质量分数为0.01%-0.1%,或者甘油磷酸肌醇胆碱盐的质量分数为0.005%-0.1%,或者苯氧乙醇或乙基己基甘油的质量分数为0.0001%-0.05%。
6.权利要求1-5任一所述的试剂盒,所述液体中,基于液体的总质量,寡肽-1的质量分数为0.001%,寡肽-2的质量分数为0.0002%,寡肽-5的质量分数为0.0004%,精氨酸/赖氨酸多肽的质量分数为0.0015%,乙酰基八肽-3的质量分数为0.0015%,二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐的质量分数为0.0045%,九肽-1的质量分数为0.005%,甘油葡糖苷的质量分数为0.5%,燕麦β-葡聚糖的质量分数为0.01%,1,3-丁二醇的质量分数为5%,1,2-己二醇的质量分数为0.5%和对羟基苯乙酮的质量分数为0.5%;任选地,所述液体中,基于液体的总质量,肌肽的质量分数为0.11%,烟酰胺的质量分数为0.11%,透明质酸钠的质量分数为0.05%,和/或甘油磷酸肌醇胆碱盐的质量分数为0.02%。
7.权利要求1-6任一所述的试剂盒,所述试剂盒是在所述固体和所述液体混合后使用一次或两次后就抛弃的型式,或者所述试剂盒是在所述固体和所述液体混合后24小时或48小时或72小时后就抛弃的型式。
8.一种制备权利要求1-7任一所述的试剂盒的方法,包括:制备得到所述固体和制备得到所述液体,使所述固体和液体处于物理分离状态,得到试剂盒;其中,
制备得到所述固体包括:将甘露醇,海藻糖用水溶解,灭菌,然后在0℃-35℃条件下,加入含有人参外囊泡包封的虾青素,人参外囊泡和虾青素的混合物,混合,灌入容器,得到灌装半成品;将所得半成品置入冻干机,预冻至低于-38℃,保温0.5小时-1.5小时;然后抽真空至低于50Pa,升温至-30℃±2℃,在温度-30℃±2℃保温6小时-10小时;升温至-5℃±2℃,保温3小时-8小时;升温至10℃±2℃,保温10小时-15小时;升温至25℃±2℃,保温8小时-12小时;任选地,再升温至25℃-35℃;然后取出,得到所述固体;和
制备得到所述液体包括:在加热条件和搅拌条件下,混合水,部分1,3-丁二醇,任选加入透明质酸钠或透明质酸锌;然后在加热条件和搅拌条件下,加入剩余的1,3-丁二醇,1,2-己二醇和对羟基苯乙酮,任选加入肌肽和烟酰胺;然后控温,在搅拌条件下,加入寡肽-1,寡肽-2,寡肽-5,乙酰基八肽-3,精氨酸/赖氨酸多肽,二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐,九肽-1,甘油葡糖苷和燕麦β-葡聚糖,任选加入甘油磷酸肌醇胆碱盐,苯氧乙醇和/或乙基己基甘油;混合均匀,得到所述液体;所述加热条件为温度控制为35℃-100℃;所述控温为将混合体系温度控制为15℃-50℃。
9.一种液体组合物,包括:寡肽-1,寡肽-2,寡肽-5,精氨酸/赖氨酸多肽,九肽-1,乙酰基八肽-3,二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐,甘油葡糖苷,燕麦β-葡聚糖,对羟基苯乙酮,1,3-丁二醇,1,2-己二醇和水;任选含有肌肽,烟酰胺,透明质酸钠,透明质酸锌,甘油磷酸肌醇胆碱盐,苯氧乙醇或乙基己基甘油中的一种或多种。
10.一种组合物,其基本上由以下组分组成:人参细胞外囊泡,虾青素,人参细胞外囊泡包封的虾青素,甘露醇和海藻糖;其还包括以下条件中的至少之一:
虾青素的总质量与人参细胞外囊泡和虾青素的总质量之比不低于0.2%或0.25%;
所述固体由制备原料经过冻干获得,所述的制备原料包括:以质量百分数计,2%-10%的甘露醇和0.5%-10%的海藻糖,或者5%的甘露醇和1%的海藻糖;以及人参细胞外囊泡和虾青素共0.2%-5%;其余为水;
以质量百分数计,所述固体中水分含量低于5%或3%或2%;
人参细胞外囊泡和虾青素的总质量与海藻糖的质量之比为1:1-1:10;
海藻糖与甘露醇的质量比为1:1-1:10;和
根据质量比计算,相对虾青素的总质量,至少80%或90%或95%或97%或99%的虾青素被人参细胞外囊泡包封。
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