CN116999619A - 一种软骨用胶原凝胶及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种软骨用胶原凝胶及其制备方法，涉及软骨修复技术领域。本发明所述的软骨用胶原凝胶的制备方法，包括步骤：将胶原蛋白溶液和缓冲液分装于双筒注射器中，同步挤出后形成胶原前驱体；胶原前驱体静置后，形成具有内部网格结构的胶原凝胶；所述缓冲液的组分选自NaCl、KCl、NaHCO3、KH2PO4、Na2HPO4、4‑羟乙基哌嗪乙磺酸、葡萄糖、葡聚糖中的至少两种。所述胶原前驱体有很好的流动性，凝胶化后形成原位胶原凝胶，锚定在软骨缺损部位。本发明的胶原凝胶可应用于制备软骨修复材料、软骨损伤填充材料、软骨润滑材料中，促进软骨微骨折手术后创面的加速修复，且起到软骨润滑功效。
Description
技术领域
本发明属于软骨修复技术领域，具体涉及一种软骨用胶原凝胶及其制备方法。
背景技术
胶原蛋白是一种生物相容性极佳、致敏性极低，可降解的天然高分子材料，广泛应用于生物组织工程产品。随着高浓度、高纯度、高活性、低免疫原性的胶原的开发，胶原蛋白在各个领域得到了广泛的使用，用于制备胶原蛋白植入剂、胶原蛋白贴敷料、以及胶原凝胶等。由于胶原对软骨细胞具有良好的诱导、增殖、分化的功能，可用于制备胶原蛋白软骨修复支架。
有研究表明，猪皮I型胶原的对软骨细胞的迁移增殖分化功能，虽然可以在微骨折手术中作为软骨修复支架进行使用，但仍存在对患者造成二次伤害的风险。经调研发现，除了微骨折手术外，目前治疗软骨损伤的治疗手段，主要分为以下两个方面：自体软骨移植手术和自体软骨细胞移植。自体软骨移植被称为重建关节软骨局部缺损和缓解疼痛的有效疗法，但是该手术的弊端在于需自体软骨作为供体，患者不仅要承受高昂的治疗费用，而且患者往往需要承受极大的心理和生理上的痛苦。自体软骨细胞移植相对来说是一种比较安全有效的方法，但是，移植后的软骨细胞无法像正常的软骨细胞一样，在软骨关节缺损部位定向生长，导致局部增生。如何有效的解决软骨细胞在软骨缺损部位定向生长，成为胶原修复软骨治疗领域的关键技术。
Gavenis K等人(Gavenis K,Schmidt-Rohlfing B,Mueller-Rath R,et al.Invitro comparison of six different matrix systems for the cultivation of humanchondrocytes[J].In vitro cellular&developmental biology.Animal,2006:159-167.)指出，利用牛I型胶原蛋白构建凝胶网络结构能促进软骨细胞均匀分布，形成的软骨结构优于其他基质。但是该研究并未提到如何在软骨关节中锚定在软骨缺损部位。中国发明专利CN113398335A公开了一种用于软骨再生修复的可注射性温敏型水凝胶及其制备方法，将壳聚糖溶液、甘油磷酸钠溶液、胶原蛋白溶解液和脱钙骨颗粒合并后，于30-40℃下反应制成凝胶，可以填充任意形状的软骨缺损，实现原位软骨诱导再生，但是，该凝胶并不具备定向引导软骨细胞迁移、增殖、分化的功能。
中国发明专利CN202111067165.7提供了一种胶原蛋白植入剂及其制备方法。该发明以牛跟腱为原料，采用精准酶切技术和超滤纯化技术等得到了一种较高纯度的I型胶原蛋白产品。但该产品属于预灌封单针注射产品，单针注射不能形成凝胶，最终得到的混悬液只作用于纠正面部软组织缺陷，同样不具备定向引导细胞，定向增殖迁移分化的作用。
发明内容
本发明针对现有技术存在的问题，提供了一种软骨用胶原凝胶及其制备方法，将胶原蛋白和特定种类的缓冲液分别置于注射器中，通过双筒注射器的同步挤出，在短时间内缓冲液中的缓冲离子引发胶原迁移，快速在软骨缺损部位形成胶原凝胶，所得到的胶原凝胶锚定在软骨缺损部位，完整的内部网格结构能够在缺损部位定向引导软骨细胞迁移、增殖、分化。同时，本发明的胶原凝胶通过将胶原蛋白和特定种类、配比、pH的缓冲溶液快速混合后，缩短凝胶化时间，提高凝胶存储模量和强度；利用双筒注射器的同步挤出实现高稳定性胶原凝胶的制备。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
首先，本发明提供一种软骨用胶原凝胶的制备方法，包括步骤：
(1)将胶原蛋白溶液和缓冲液分装于双筒注射器中；所述缓冲液中的组分选自NaCl、KCl、NaHCO3、KH2PO4、Na2HPO4、4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)、葡萄糖、葡聚糖中的至少两种；
(2)同步挤出双筒注射器中的胶原蛋白溶液和缓冲液，混合形成胶原前驱体；
(3)胶原前驱体静置后，形成具有内部网格结构的胶原凝胶。
优选地，步骤(1)中，所述胶原蛋白溶液为I型胶原蛋白溶液。
优选地，步骤(1)中，所述胶原蛋白溶液中的蛋白含量为5-18mg/mL。
优选地，步骤(1)中，所述缓冲液中的组分选自NaCl、KCl、KH2PO4、Na2HPO4、4-羟乙基哌嗪乙磺酸和葡聚糖中的至少两种。
进一步优选地，所述缓冲液为缓冲液1和缓冲液2的混合物；所述缓冲液1为NaCl、KCl和Na2HPO4的混合物；所述缓冲液2中的组分选自KH2PO4、4-羟乙基哌嗪乙磺酸、葡聚糖中的至少一种。
更进一步优选地，所述缓冲液2中的组分为4-羟乙基哌嗪乙磺酸，或为4-羟乙基哌嗪乙磺酸和葡聚糖的混合物。
更进一步优选地，当缓冲液中的组分为NaCl、KCl、Na2HPO4和4-羟乙基哌嗪乙磺酸的混合物时，NaCl、KCl、Na2HPO4和4-羟乙基哌嗪乙磺酸的质量比为6-10:0.1-0.3:3-5:0.24；当缓冲液中的组分为NaCl、KCl、Na2HPO4、4-羟乙基哌嗪乙磺酸和葡聚糖的混合物时，NaCl、KCl、Na2HPO4、4-羟乙基哌嗪乙磺酸和葡聚糖的质量比为6-10:0.1-0.3:3-5:3-5:0.2。
优选地，步骤(1)中，所述缓冲液的浓度为11-17％，g/mL。
优选地，步骤(1)中，所述缓冲液的pH为6.0-9.0。
更进一步优选地，所述缓冲液的pH为8-8.3。
优选地，步骤(3)中，所述静置，温度为30-36℃，静置的时间为5-30min。
本发明中，所述I型胶原蛋白溶液的来源为牛跟腱提取的I型胶原蛋白溶液，或牛皮提取的I型胶原蛋白溶液。
本发明中，步骤(1)中所述的分装，需在无菌条件下灌装。
本发明中，所述缓冲液需经过0.22μm滤膜过滤后进行使用。
再者，本发明提供上述制备方法所得到的胶原凝胶在制备软骨修复材料、软骨损伤填充材料、软骨润滑材料中的应用。
本发明所述的应用，所制备的材料可以起到促进软骨微骨折手术后创面的加速修复作用，还可以起到软骨润滑的作用。
最后，本发明提供一种制备胶原凝胶的双筒注射器，包括胶原蛋白溶液注射器、缓冲液注射器、双筒注射器混合器、针头、胶原蛋白溶液注射器推杆、缓冲液注射器推杆、双管注射器连接器和同步挤出器。
优选地，所述胶原蛋白溶液注射器和缓冲液注射器并列，通过双管注射器连接器固定；所述胶原蛋白溶液注射器和缓冲液注射器下端通过双筒注射器混合器的一端连通；所述针头与双筒注射器混合器的另一端连接；所述胶原蛋白溶液注射器推杆置于胶原蛋白溶液注射器的上端，所述缓冲液注射器推杆置于缓冲液注射器的上端，所述胶原蛋白溶液注射器推杆和缓冲液注射器推杆通过同步挤出器连接，起到同步推出胶原蛋白溶液和缓冲液的作用。
优选地，所述针头的规格选自26G、28G、30G、32G和34G中的任一种。
相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：
1、本发明的软骨用胶原凝胶由胶原蛋白溶液和缓冲液组成，以上两种溶液分装在注射器中，借助双筒注射器连接器同步挤出，将胶原蛋白溶液和缓冲液均匀混合，形成胶原前驱体，具有很好的流动性；胶原前驱体5-30min形成凝胶化网络，且锚定在软骨缺损部位，形成内部网络结构完整的凝胶。
2、本发明的软骨用胶原凝胶中的缓冲液为多种离子成分混合的缓冲液，在特定种类、特定pH的缓冲液作用下，促进特定浓度下的胶原蛋白溶液中胶原发生迁移，快速在软骨缺损部位形成原位胶原凝胶，进而定向诱导软骨细胞在凝胶网络中迁移、增殖、分化；同时，本发明胶原凝胶中的缓冲液，可以缩短凝胶化时间，提高胶原凝胶的存储模量和强度。
3、本发明所制备的胶原凝胶用于软骨修复材料、骨损伤填充材料、软骨润滑材料的制备中，促进软骨微骨折手术后创面的加速修复，且起到软骨润滑功效；相对于传统的修复材料，成本低；且在软骨损伤患者的治疗过程中，能够减少对患者的二次创伤。
附图说明
图1是本发明所用双筒注射器的示意图；
其中，1、胶原蛋白溶液注射器；2、缓冲液注射器；3、双筒注射器混合器；4、针头；5、胶原蛋白溶液注射器推杆；6、缓冲液注射器推杆；7、双管注射器连接器；8、同步挤出器。图2是本发明所制备的样品的存储模量G'和损耗模量G”对比图。
图3是本发明实施例2的缓冲液经稀释不同的倍数后所制备的样品的存储模量G'和损耗模量G”对比图。
图4是本发明实施例2的样品在不同时间下的存储模量G'和损耗模量G”对比图。
图5是本发明实施例2的胶原凝胶的最终状态图。
图6是本发明对比例2-4的样品的存储模量G'和损耗模量G”对比图。
具体实施方式
以下非限制性实施例可以使本领域的普通技术人员更全面的理解本发明，但不以任何方式限制本发明。下述内容仅仅是对本发明要求保护的范围的示例性说明，本领域技术人员可以根据所公开的内容对本发明做出多种改变和修饰，而其也应当属于本发明要求保护的范围之中。当实施例给出数值范围时，应理解，除非本发明另有说明，每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用。除非另外定义，本发明中使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同意义。
下面以具体实施例的方式对本发明作进一步的说明。本发明实施例中所使用的各种化学试剂如无特殊说明均通过常规商业途径获得。本发明中，所使用的化学试剂，不同厂家的产品对效果不具有显著性影响。本发明中所述的优选实施方法与材料仅做示范作用。
本发明的实施例中，所使用的胶原蛋白溶液为I型胶原蛋白溶液，其来源为牛跟腱提取的I型胶原蛋白溶液，或牛皮提取的I型胶原蛋白溶液。所述牛跟腱提取的I型胶原蛋白溶液和牛皮提取的I型胶原蛋白溶液的，参照中国发明专利CN113768815A中公开的方法进行制备。以下仅给出示例性的胶原蛋白的制备方法，包括步骤：
(1)动物跟腱或动物皮的前处理：取牛跟腱或牛皮在5％的盐酸中浸泡120h，剔除跟腱中的筋膜并进行切片，用0.9％NaCl溶液浸泡、清洗，去除上清液并收集沉淀物A，备用。
(2)酶解消化：将(1)中收集的沉淀物A捣碎溶解在0.1M盐酸溶液中，加入胃蛋白酶(与沉淀物A的质量比为0.01:1)在进行酶解，得到酶解产物；调节pH为7反应，然后离心沉淀，收集沉淀物B，备用。
(3)助滤吸附：将(2)中收集的沉淀物B用0.1M盐酸溶解后，加入活性炭(与沉淀物B的质量比为1:1)搅拌后过滤，收集上清液，备用。
(4)分离纯化：将步骤(3)中的上清液进行浓缩后，通过阳离子交换介质吸附胶原蛋白后再洗脱分离，最后得到洗脱液。
(5)除菌过滤：将(4)中收集的洗脱液用超滤系统进行浓缩后，用0.22μm的过滤膜除菌过滤，得到无菌可溶性I型胶原蛋白溶液。
实施例1
(1)将牛跟腱经酶解、纯化处理后(参照CN113768815A中公开的方法，详见上述示例性的胶原蛋白的制备方法)，得到的I型胶原蛋白溶液，使用0.22μm滤膜过滤，过滤后蛋白含量为4mg/mL，转移至料筒中，通过无菌灌装机分装至5mL针管中，备用。
(2)将8gNaCl、0.2gKCl、4gNa2HPO4、0.24gHEPES(4-羟乙基哌嗪乙磺酸)溶于水，定容至100mL，使用0.22μm的滤膜过滤，通过无菌灌装机灌装至5mL针管中，备用，标为缓冲液A。
(3)将上述两步骤胶原蛋白溶液和缓冲液A分别装置于胶原蛋白溶液注射器1和缓冲液注射器2中，胶原蛋白溶液注射器1和缓冲液注射器2使用双管注射器连接器7、双筒注射器混合器3和针头4固定组装，胶原蛋白溶液注射器推杆5和缓冲液注射器推杆6分别置于胶原蛋白溶液注射器1和缓冲液注射器2的上方，与同步挤出器8固定组装，如图1所示；在35℃条件下，使用30G针头，按动同步挤出器8同步挤出胶原蛋白溶液和缓冲液A，得到胶原前驱体，测试样品存储模量G'和损耗模量G”(图2)；10min后形成的胶原凝胶的G'和G”达到稳定值，此时胶原凝胶形成稳定的网络结构。
实施例2
(1)将牛皮经酶解、纯化处理后(同实施例1)，得到的I型胶原蛋白溶液，使用0.22μm滤膜过滤，过滤后蛋白含量为16mg/mL，转移至料筒中，通过无菌灌装机分装至5mL针管中，备用。
(2)将8gNaCl、0.1gKCl、4gNa2HPO4、0.2g葡聚糖和4gHEPES溶于90mL蒸馏水中，用0.5mol/L的NaOH调节pH至8.2，使用注射用水定容至100mL，使用0.22μm的滤膜过滤，通过无菌灌装机灌装至5mL针管中，备用，标为缓冲液B。
(3)将上述两步骤胶原蛋白溶液和缓冲液B分别装置于胶原蛋白溶液注射器1和缓冲液注射器2中，胶原蛋白溶液注射器1和缓冲液注射器2使用双管注射器连接器7、双筒注射器混合器3和针头4固定组装，胶原蛋白溶液注射器推杆5和缓冲液注射器推杆6分别置于胶原蛋白溶液注射器1和缓冲液注射器2的上方，与同步挤出器8固定组装，如图1所示；在35℃条件下，使用30G针头，按动同步挤出器8同步挤出胶原蛋白溶液和缓冲液B，得到胶原前驱体，测试样品存储模量G'和损耗模量G”(图2)；10min后形成的胶原凝胶的G'和G”达到稳定值(图4)，30min后观察胶原凝胶的状态，此时胶原凝胶形成稳定的网络结构(图5)。
缓冲液B经稀释不同倍数后所制备的样品的存储模量G'和损耗模量G”对比图见图3。
本实施例所得样品在不同时间下的存储模量G'和损耗模量G”对比图见图4。
实施例3
(1)将牛跟腱经酶解、纯化处理后(同实施例1)，得到的I型胶原蛋白溶液，使用0.22μm滤膜过滤，过滤后蛋白含量为10mg/mL，转移至料筒中，通过无菌灌装机分装至5mL针管中，备用。
(2)将8gNaCl、0.2gKCl、4gNa2HPO4、0.24gHEPES(4-羟乙基哌嗪乙磺酸)溶于水，使用注射用水定容至100mL，使用0.22μm的滤膜过滤，通过无菌灌装机灌装至5mL针管中，备用，标为缓冲液C。
(3)将上述两步骤胶原蛋白溶液和缓冲液C分别装置于胶原蛋白溶液注射器1和缓冲液注射器2中，胶原蛋白溶液注射器1和缓冲液注射器2使用双管注射器连接器7、双筒注射器混合器3和针头4固定组装，胶原蛋白溶液注射器推杆5和缓冲液注射器推杆6分别置于胶原蛋白溶液注射器1和缓冲液注射器2的上方，与同步挤出器8固定组装，如图1所示；在35℃条件下，使用28G针头，按动同步挤出器8同步挤出胶原蛋白溶液和缓冲液C，得到胶原前驱体，测试样品存储模量G'和损耗模量G”(图2)；10min后形成的胶原凝胶的G'和G”达到稳定值，20min后观察胶原凝胶的状态，此时胶原凝胶形成稳定的网络结构。
实施例4
(1)将牛跟腱经酶解、纯化处理后(同实施例1)，得到的I型胶原蛋白溶液，使用0.22μm滤膜过滤，过滤后蛋白含量为10mg/mL，转移至料筒中，通过无菌灌装机分装至5mL针管中，备用。
(2)将10gNaCl、0.1gKCl、3gNa2HPO4、0.2g葡聚糖和3gHEPES溶于90mL蒸馏水中，用0.5mol/L的NaOH调节pH至7.5，使用注射用水定容至100mL，使用0.22μm的滤膜过滤，通过无菌灌装机灌装至5mL针管中，备用，标为缓冲液D。
(3)同实施例2，在35℃条件下，使用30G针头，按动同步挤出器8同步挤出胶原蛋白溶液和缓冲液D，得到胶原前驱体；测试样品存储模量G'和损耗模量G”(图2)；30min后形成的胶原凝胶的G'和G”达到稳定值，30min后观察胶原凝胶的状态，此时胶原凝胶形成稳定的网络结构。
实施例5
(1)将牛跟腱经酶解、纯化处理后(同实施例1)，得到的I型胶原蛋白溶液，使用0.22μm滤膜过滤，过滤后蛋白含量为5mg/mL，转移至料筒中，通过无菌灌装机分装至5mL针管中，备用。
(2)将6gNaCl、0.2gKCl、4gNa2HPO4、0.2g葡聚糖和5gHEPES溶于90mL蒸馏水中，用0.5mol/L的NaOH调节pH至8.0，使用注射用水定容至100mL，使用0.22μm的滤膜过滤，通过无菌灌装机灌装至5mL针管中，备用，标为缓冲液E。
(3)同实施例2，在33℃条件下，使用32G针头，按动同步挤出器8同步挤出胶原蛋白溶液和缓冲液E，得到胶原前驱体；测试样品存储模量G'和损耗模量G”(图2)；20min后形成的胶原凝胶的G'和G”达到稳定值，20min后观察胶原凝胶的状态，此时胶原凝胶形成稳定的网络结构。
对比例1
与实施例2不同的是，未使用双筒注射器，将双筒注射器替换为单筒单针注射器。将胶原蛋白溶液和缓冲液B混合后，单筒单针注射，仅能得到含有胶原蛋白的混悬液，流动性过高，不能形成稳定的胶原凝胶结构。在软骨修复中，不具备定向引导细胞，定向增殖迁移分化的作用。该对比例无完整的凝胶结构。使用单针筒所制备的样品并不产生模量。
对比例2
与实施例2不同的是，缓冲液不同。该对比例的缓冲液为0.8M的Na2HPO4，缓冲液的pH为8.2。使用0.22μm的滤膜过滤，通过无菌灌装机灌装至5mL针管中，备用，制得缓冲液D2。
在35℃条件下，使用30G针头，按动同步挤出器8同步挤出胶原蛋白溶液(同实施例2)和缓冲液D2，测试该对比例样品的存储模量G'为385.5pa，损耗模量G"为55.2pa(图6)。
1h后观察产品的状态，仍未形成稳定的胶原凝胶结构。
对比例3
与实施例2不同的是，缓冲液不同。该对比例中的缓冲液D2为NaCl和Na2HPO4溶液的混合物，其中NaCl的浓度为80mg/mL，Na2HPO4的浓度为80mg/mL，缓冲液的pH为8.2。使用0.22μm的滤膜过滤，通过无菌灌装机灌装至5mL针管中，备用，制得缓冲液D3。
在35℃条件下，使用30G针头，按动同步挤出器8同步挤出胶原蛋白溶液(胶原蛋白溶液同实施例2)和缓冲液D3，测试样品的存储模量G'和损耗模量G”，分别为350.0pa、50.8pa(图6)。
30min后观察样品形成不稳定的凝胶结构。
对比例4
与实施例2不同的是，缓冲液的浓度不同。该对比例中的缓冲液D4具体为：将0.8gNaCl、0.1gKCl、0.4gNa2HPO4、0.2g葡聚糖和0.4gHEPES溶于90mL蒸馏水中，用0.5mol/L的NaOH调节pH至8.2，使用注射用水定容至100mL，使用0.22μm的滤膜过滤，通过无菌灌装机灌装至5mL针管中，备用，制得缓冲液D4。
在35℃条件下，使用30G针头，按动同步挤出器8同步挤出胶原蛋白溶液(同实施例2)和缓冲液D4，测试样品的存储模量G'和损耗模量G”，分别为365.0pa、40.0pa(图6)。
30min后观察样品形成不稳定的凝胶结构。
检测试验
将所制备的样品进行存储模量G'和损耗模量G”的对比，检测结果见图2。
其中，存储模量G'和损耗模量G”的检测方法为：采用动态振荡测试测量胶原前驱体到胶原凝胶形成过程，在恒定的应变、频率条件下，通过模量G'、G”随时间的变化描述样品的变化过程。
将实施例2中的缓冲液B分别稀释1.25倍、1.5倍和2倍后，与胶原蛋白溶液经过双管注射器的同时挤出，对制得的样品进行存储模量G'和损耗模量G”的对比，检测结果见图3。从图3中可以看出，对缓冲液进行一定倍数的稀释后，与胶原溶液所形成的样品仍然具有较高的存储模量G'和损耗模量G”，胶原凝胶产品稳定。
从图4中可以看出，本发明的胶原前驱体在10min中内形成内部网络结构性能稳定的胶原凝胶，放置40min后，存储模量G'和损耗模量G”几乎无变化。
从图5中可以看出，本发明所制备的胶原凝胶，状态稳定，表面光滑，凝胶结构完整，色泽均一，无各向异性。
从上述检测结果中可以看出，本发明的制备方法所制备得到的软骨用胶原凝胶，相较于对比例，具有模量实现从无到有，从有到精。相较于现有技术，具有能够满足缺损面的各种形状要求，且治疗成本降低，患者无需二次手术。
最后应当说明的是，以上内容仅用以说明本发明的技术方案，而非对本发明保护范围的限制，本领域的普通技术人员对本发明的技术方案进行的简单修改或者等同替换，均不脱离本发明技术方案的实质和范围。
Claims (10)
1.一种软骨用胶原凝胶的制备方法，其特征在于，包括步骤：
(1)将胶原蛋白溶液和缓冲液分装于双筒注射器中；所述缓冲液中的组分选自NaCl、KCl、NaHCO3、KH2PO4、Na2HPO4、4-羟乙基哌嗪乙磺酸、葡萄糖、葡聚糖中的至少两种；
(2)同步挤出双筒注射器中的胶原蛋白溶液和缓冲液，混合形成胶原前驱体；
(3)胶原前驱体静置后，形成具有内部网格结构的胶原凝胶。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述胶原蛋白溶液为I型胶原蛋白溶液，蛋白含量为5-18mg/mL。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述缓冲液中的组分选自NaCl、KCl、KH2PO4、Na2HPO4、4-羟乙基哌嗪乙磺酸和葡聚糖中的至少两种。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述缓冲液为缓冲液1和缓冲液2的混合物；所述缓冲液1为NaCl、KCl和Na2HPO4的混合物；所述缓冲液2中的组分选自KH2PO4、4-羟乙基哌嗪乙磺酸、葡聚糖中的至少一种。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，当缓冲液中的组分为NaCl、KCl、Na2HPO4和4-羟乙基哌嗪乙磺酸的混合物时，NaCl、KCl、Na2HPO4和4-羟乙基哌嗪乙磺酸的质量比为6-10:0.1-0.3:3-5:0.24；当缓冲液中的组分为NaCl、KCl、Na2HPO4、4-羟乙基哌嗪乙磺酸和葡聚糖的混合物时，NaCl、KCl、Na2HPO4、4-羟乙基哌嗪乙磺酸和葡聚糖的质量比为6-10:0.1-0.3:3-5:3-5:0.2。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述缓冲液的浓度为11-17％，g/mL；所述缓冲液的pH为6.0-9.0。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述缓冲液的pH为8-8.3。
8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，所述静置，温度为30-36℃，静置的时间为5-30min。
9.权利要求1-8任一项所述制备方法所得到的胶原凝胶在制备软骨修复材料、软骨损伤填充材料、软骨润滑材料中的应用。
10.一种制备胶原凝胶的双筒注射器，其特征在于，包括胶原蛋白溶液注射器(1)、缓冲液注射器(2)、双筒注射器混合器(3)、针头(4)、胶原蛋白溶液注射器推杆(5)、缓冲液注射器推杆(6)、双管注射器连接器(7)和同步挤出器(8)；所述针头的规格选自26G、28G、30G、32G和34G中的任一种。
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Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20130324473A1 (en) * | 2011-02-09 | 2013-12-05 | Amedrix Gmbh | Coagulating Collagen and Means for Preparing Same |
| US20150141344A1 (en) * | 2012-05-16 | 2015-05-21 | Sewon Cellontech Co., Ltd. | Composition for repairing cartilage tissue, method for producing same, and use thereof |
| US20150202364A1 (en) * | 2012-07-31 | 2015-07-23 | Amedrix Gmbh | Kit, use thereof and method for filling connective tissue of the skin |
| JP2016106775A (ja) * | 2014-12-04 | 2016-06-20 | 学校法人北里研究所 | 軟骨再生用移植材料、軟骨再生用移植材料の製造方法 |
| US20200246507A1 (en) * | 2017-01-31 | 2020-08-06 | Geniphys, Llc | Methods and compositions for matrix preparation |
| CN111529692A (zh) * | 2020-04-30 | 2020-08-14 | 刘雨升 | 一种稳定的胶原体系及其制备方法和用途 |
| CN113768815A (zh) * | 2021-09-13 | 2021-12-10 | 浙江崇山生物制品有限公司 | 一种胶原蛋白植入剂及其制备方法 |
| CN115335035A (zh) * | 2020-01-27 | 2022-11-11 | 格尼菲斯公司 | 用于恢复和再生组织的生物填充物 |
-
2023
- 2023-08-03 CN CN202310972981.5A patent/CN116999619B/zh active Active
Patent Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20130324473A1 (en) * | 2011-02-09 | 2013-12-05 | Amedrix Gmbh | Coagulating Collagen and Means for Preparing Same |
| US20150141344A1 (en) * | 2012-05-16 | 2015-05-21 | Sewon Cellontech Co., Ltd. | Composition for repairing cartilage tissue, method for producing same, and use thereof |
| US20150202364A1 (en) * | 2012-07-31 | 2015-07-23 | Amedrix Gmbh | Kit, use thereof and method for filling connective tissue of the skin |
| JP2016106775A (ja) * | 2014-12-04 | 2016-06-20 | 学校法人北里研究所 | 軟骨再生用移植材料、軟骨再生用移植材料の製造方法 |
| US20200246507A1 (en) * | 2017-01-31 | 2020-08-06 | Geniphys, Llc | Methods and compositions for matrix preparation |
| CN115335035A (zh) * | 2020-01-27 | 2022-11-11 | 格尼菲斯公司 | 用于恢复和再生组织的生物填充物 |
| CN111529692A (zh) * | 2020-04-30 | 2020-08-14 | 刘雨升 | 一种稳定的胶原体系及其制备方法和用途 |
| CN113768815A (zh) * | 2021-09-13 | 2021-12-10 | 浙江崇山生物制品有限公司 | 一种胶原蛋白植入剂及其制备方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| CB03 | Change of inventor or designer information | ||
| CB03 | Change of inventor or designer information |
Inventor after: Chen Guan Inventor after: Lu Huanhuan Inventor after: Zhang Zhiwu Inventor before: Chen Guan Inventor before: Zhang Zhiwu |
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| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |