CN116990397A - 一种4-正丁基间苯二酚的含量测定方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种4‑正丁基间苯二酚含量测定方法，该方法操作简单、便捷、快速、准确，其包括以下步骤：a)将4‑正丁基间苯二酚标准品溶于溶剂中，配制成一定浓度的4‑正丁基间苯二酚标准品溶液，浓度记为Cref；b)在常压下，采用高效液相色谱分析法测定4‑正丁基间苯二酚标准品溶液的峰面积Aref；c)将4‑正丁基间苯二酚待测样品溶于溶剂中，配制成一定浓度的4‑正丁基间苯二酚供试品溶液；d)在常压下，采用高效液相色谱分析法测定4‑正丁基间苯二酚供试品溶液的峰面积A供；e)按照以下公式、计算待测4‑正丁基间苯二酚的药物浓度C药和药物含量。本发明的检测方法，可以快速定量检测4‑正丁基间苯二酚的含量，实现快速对4‑正丁基间苯二酚原料药、制剂和化妆品的质量控制。
Description
技术领域
本发明涉及有机化学分析领域，具体而言涉及4-正丁基间苯二酚的含量测定方法。
背景技术
色素沉着过度疾病(如黄褐斑、光化性和老年斑)是目前广泛受关注的损容性疾病。黑色素细胞内酪氨酸酶在黑色素生成中具有关键性作用，因为它调节黑色素生成的限速步骤。因此，酪氨酸酶是黑色素生成的关键调节剂，也是色素沉着过度疾病抑制剂的最突出靶点。
4-正丁基间苯二酚是一种间苯二酚衍生物，又名丁雷锁辛，化学式为C10H14O2，结构式如下所示。
4-正丁基间苯二酚对酪氨酸酶和酪氨酸酶相关蛋白-1具有抑制作用，它可以减少黑色素的产生和色素沉着，作为一种新型的色素减退剂受到了越来越多的关注，常被用作护肤产品的美白添加剂。同时也可用于合成FER激动剂中间体，治疗胆汁淤积症、高胆固醇、心脏病等疾病，主要用于香料、医药、染料等领域。
4-正丁基间苯二酚属于间苯二酚的衍生物，具有如下优点：1、两个酚羟基的存在使其拥有良好的抗氧化性能；2、苯环的存在，使其拥有优良的抗紫外性能，具有一定的光稳定性。此外，4-正丁基间苯二酚对黑色素生成过程中起关键作用的酪氨酸酶和酪氨酸酶相关蛋白-1均具有很好的抑制作用，具有美白作用，且4-正丁基间苯二酚没有对苯二酚和熊果苷对人体产生的副作用，同时美白效果惊人，在酪氨酸酶的体外等实验中，显示出强大的效果。
对药物制剂和化妆品进行质量控制一直是药物和化妆品研发过程中的重点和难点，目前4-正丁基间苯二酚的含量测定方法鲜有报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种4-正丁基间苯二酚的含量测定方法，该方法可以广泛的用于4-正丁基间苯二酚原料药、制剂或者化妆品中4-正丁基间苯二酚含量的测定，该4-正丁基间苯二酚的含量测定方法操作简单、便捷、快速、准确。
为了实现本发明的目的，
第一方面，本发明提供了一种4-正丁基间苯二酚的含量测定方法，包括以下步骤：
a)将4-正丁基间苯二酚标准品溶于溶剂中，配制成一定浓度的4-正丁基间苯二酚标准品溶液，浓度记为Cref；
b)在常压下，采用高效液相色谱分析法测定4-正丁基间苯二酚标准品溶液的峰面积Aref；
c)将4-正丁基间苯二酚待测样品溶于溶剂中，配制成一定浓度的4-正丁基间苯二酚供试品溶液；
d)在常压下，采用高效液相色谱分析法测定4-正丁基间苯二酚供试品溶液的峰面积A供；
e)按照以下公式①、②计算待测4-正丁基间苯二酚待测样品的药物浓度C药和药物含量。
①4-正丁基间苯二酚待测样品的药物浓度计算公式为：
②4-正丁基间苯二酚待测样品的药物含量计算公式为：
上式中：A供为供试品溶液峰面积，Aref为标准品溶液峰面积，
Cref为标准品溶液的浓度，N为供试品溶液的稀释倍数，
C为制剂标示量。
在上述测定方法的一些实施方案中，其中，步骤a)中，所述溶剂为50％的乙腈溶液；所述的4-正丁基间苯二酚标准品溶液浓度选自8μg/ml～12μg/ml，优选地，4-正丁基间苯二酚标准品溶液浓度选自8μg/ml、10μg/ml、12μg/ml中的一种；更优选地，4-正丁基间苯二酚标准品溶液浓度为10μg/ml。
本发明中，标准品溶液浓度是通过准确称量一定量的标准品并配制成溶液而得到的；例如，本发明中4-正丁基间苯二酚标准品溶液浓度为10μg/ml应理解为4-正丁基间苯二酚标准品溶液浓度为10μg/ml附近(范围为10±20％μg/ml)的一个准确数值。
在上述测定方法的一些实施方案中，其中，4-正丁基间苯二酚待测样品可以是4-正丁基间苯二酚原料药、4-正丁基间苯二酚制剂和4-正丁基间苯二酚化妆品中的一种；优选地，4-正丁基间苯二酚待测样品为4-正丁基间苯二酚外用制剂；更优选地，4-正丁基间苯二酚待测样品为4-正丁基间苯二酚乳膏。
上述测定方法的一些实施方案中，其中，所述高效液相色谱分析法的条件为：高效液相色谱仪、检测器为二极管阵列检测器(DAD检测器)、色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，优选地色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱或与其效能相当色谱柱，进一步优选地色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18 3.5μm 4.6×150mm或与其效能相当色谱柱；流动相A为甲酸水溶液，优选地所述甲酸水溶液的体积浓度(以体积百分比表示)为0.05％-3％，更优选地所述甲酸水溶液的体积浓度(以体积百分比表示)为0.1％；流动相B为乙腈溶液；洗脱条件为A相：B相＝60:40等度洗脱；柱温35℃，流速1.0ml/min，进样量为10μl。
第二方面，本发明提供了一种4-正丁基间苯二酚乳膏的含量测定方法，其包括以下步骤：
a)将4-正丁基间苯二酚标准品溶于溶剂中，配制成一定浓度的4-正丁基间苯二酚标准品溶液，浓度记为Cref；
b)在常压下，采用高效液相色谱分析法测定4-正丁基间苯二酚标准品溶液的峰面积Aref；
c)将4-正丁基间苯二酚乳膏待测样品溶于溶剂中，配制成一定浓度的4-正丁基间苯二酚供试品溶液；
d)在常压下，采用高效液相色谱分析法测定4-正丁基间苯二酚供试品溶液的峰面积A供；
e)按照以下公式①、②计算待测4-正丁基间苯二酚乳膏的药物浓度C药和药物含量。
①4-正丁基间苯二酚乳膏待测样品的药物浓度计算公式为：
②4-正丁基间苯二酚乳膏待测样品的药物含量计算公式为：
上式中：A供为供试品溶液峰面积，Aref为标准品溶液峰面积，
Cref为标准品溶液的浓度，N为供试品溶液的稀释倍数，
C为制剂标示量，10mg/ml。
在上述测定方法的一些实施方案中，其中，步骤a)中，所述溶剂为50％的乙腈溶液；所述的4-正丁基间苯二酚标准品溶液浓度选自8μg/ml～12μg/ml，优选地，4-正丁基间苯二酚标准品溶液浓度选自8μg/ml、10μg/ml、12μg/ml中的一种；更优选地，4-正丁基间苯二酚标准品溶液浓度为10μg/ml。
本发明中，标准品溶液浓度是通过准确称量一定量的标准品并配制成溶液而得到的；例如，本发明中4-正丁基间苯二酚标准品溶液浓度为10μg/ml应理解为4-正丁基间苯二酚标准品溶液浓度为10μg/ml附近(范围为10±20％μg/ml)的一个准确数值。
上述测定方法的一些实施方案中，其中，所述高效液相色谱分析法的条件为：高效液相色谱仪、检测器为二极管阵列检测器(DAD检测器)、色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，优选地色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱或与其效能相当色谱柱，进一步优选地色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18 3.5μm 4.6×150mm或与其效能相当色谱柱；流动相A为甲酸水溶液，优选地所述甲酸水溶液的体积浓度(以体积百分比表示)为0.05％-3％，更优选地所述甲酸水溶液的体积浓度(以体积百分比表示)为0.1％；流动相B为乙腈溶液；洗脱条件为A相：B相＝60:40等度洗脱；柱温35℃，流速1.0ml/min，进样量为10μl。
有益效果
本发明提供了一种4-正丁基间苯二酚的药物含量测定方法，特别是提供了一种4-正丁基间苯二酚乳膏的药物含量测定方法。本发明方法在于，配制一定浓度的4-正丁基间苯二酚标准品溶液，用高效液相色谱法测定4-正丁基间苯二酚标准品溶液的4-正丁基间苯二酚峰面积和4-正丁基间苯二酚供试品溶液的4-正丁基间苯二酚峰面积，并通过外标一点法得到供试品中的4-正丁基间苯二酚的药物浓度和药物含量。
本发明提供的4-正丁基间苯二酚的药物含量测定方法准确度高，适应性好，能够快速定量，单次高效液相分析时间仅为10分钟，能快速的完成4-正丁基间苯二酚原料药、乳膏和或化妆品中的4-正丁基间苯二酚药物含量测定，适用于工业化大生产
附图说明
图1为实施例1所述本发明方法测定4-正丁基间苯二酚乳膏含量的色谱图；
图2为实施例1所述本发明方法测定的4-正丁基间苯二酚标准品含量的色谱图；
图3为实施例3所述的空白辅料的色谱图；
图4为实施例3所述的空白溶剂的色谱图；
图5为实施例8中的线性回归方程(五点法)的线性曲线。
具体实施方式
定义和说明
除非另有说明，本文所用的下列术语和短语旨在含有下列含义。一个特定的短语或术语在没有特别定义的情况下不应该被认为是不确定的或不清楚的，而应该按照普通的含义去理解。当本文出现商品名时，旨在指代其对应的商品或其活性成分。
本发明中，术语“系统适用性实验”按中国药典规定的含义，色谱系统的适用性实验通常包括理论板数、分离度、灵敏度、拖尾因子和重复性等五个参数。本发明系统适用性评价指标主要包括进样重复性(精密度)。本发明中系统适用性可接受标准为：5针标准品溶液的4-正丁基间苯二酚峰面积的RSD应不得大于3.0％，保留时间的RSD应不得大于1.0％。
本发明中，术语“准确度”系指用所建立方法测定的结果与真实值或参比值接近的程度，一般用回收率(％)表示。
本发明中，术语“质控回收率”是指用回收率对实验过程进行质量控制。质控回收率主要是保证整个实验过程结果可信准确。
本发明中，术语“含量”是指4-正丁基间苯二酚乳膏实测含量与其标示量的比值，单位为％。
本发明中，“本发明含量测定方法”、“本发明分析方法”、“4-正丁基间苯二酚的药物含量测定方法”可以替换使用，均是指本发明的发明内容中的4-正丁基间苯二酚的药物含量测定方法。
本发明中的4-正丁基间苯二酚乳膏可以按照常规方法自行配制得到，该4-正丁基间苯二酚乳膏的处方为：4-正丁基间苯二酚乳膏中含1％w/w的4-正丁基间苯二酚、6％w/w的黄原胶、8％w/w的矿物油、1％w/w的司盘80、5％w/w的甘油、2％w/w的苯氧乙醇、0.5％w/w的α-生育酚醋酸酯、0.05％w/w的尼泊金甲酯和余量的纯化水，使用盐酸和氢氧化钠调节pH至5.0～7.0。
本发明中空白辅料是指在4-正丁基间苯二酚乳膏处方的基础上不含有4-正丁基间苯二酚原料药的产品，其中包含6％w/w的黄原胶、8％w/w的矿物油、1％w/w的司盘80、5％w/w的甘油、2％w/w的苯氧乙醇、0.5％w/w的α-生育酚醋酸酯、0.05％w/w的尼泊金甲酯和余量的纯化水，使用盐酸和氢氧化钠调节pH至5.0～7.0。
下面会通过实施例具体描述本发明，这些实施例并不意味着对本发明的任何限制。
本发明所使用的所有溶剂是市售的，无需进一步纯化即可使用。
本发明采用下述缩略词：DAD检测器代表二极管阵列检测器；μg/ml代表微克/毫升；r代表线性相关系数，线性相关系数越大，定量能力越好；RSD代表相对标准偏差；。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。
下面结合具体实施例，进一步阐述本申请。应理解，这些实施例仅用于说明本申请而不用于限制本申请的保护范围。
下列实施例中未注明具体条件的试验方法，可按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。除非另行定义，本文所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。
实施例1外标一点法测定4-正丁基间苯二酚乳膏含量的方法
1.仪器与分析条件
高效液相色谱仪(Waters e2695)，DAD检测器，色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C183.5μm 4.6×150mm，流动相A为0.1％甲酸水溶液，流动相B为乙腈溶液，柱温35℃，流速1.0ml/min，进样量为10μl，运行时间10分钟。洗脱条件为A相：B相＝60：40等度洗脱。
2.溶剂、标准溶液及供试品溶液的配制
溶剂：50％甲醇溶液，以量筒分别量取500ml乙腈和500ml水，超声混匀，放冷，即得50％的乙腈溶液。
标准品溶液：取4-正丁基间苯二酚标准品约25mg，精密称定，置50ml容量瓶中，加溶剂使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取上述溶液1.0ml，置50ml容量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，即得标准品溶液。平行配制两份，分别作为标准品溶液1和标准品溶液2。
供试品溶液：取4-正丁基间苯二酚乳膏(4-正丁基间苯二酚的标示浓度为1％)约25mg，置25ml容量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，离心(转速10000rpm)5min后，滤膜过滤，即得供试品溶液。平行配制2份。
3.实验过程及结果
取溶剂10μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，溶剂应无干扰。
取10μl标准品溶液1连续进样6针考察进样精密度。
进样精密度可接受标准为：6针标准品溶液1的4-正丁基间苯二酚峰面积的RSD应不得大于3.0％，保留时间的RSD应不得大于1.0％。
标准品溶液1第一针的4-正丁基间苯二酚峰拖尾因子应不得大于1.8。
取10μl标准品溶液2注入高效液相色谱仪，计算回收率作为质控。回收率应在98.0％～102.0％。
取供试品溶液10μl注入高效液相色谱仪，记录色谱图。每份供试品溶液进样1针，利用以下公式计算供试品溶液中4-正丁基间苯二酚的浓度和含量。
①4-正丁基间苯二酚乳膏的药物浓度计算公式为：
②4-正丁基间苯二酚乳膏的药物含量计算公式为：
上式中：A供为供试品溶液峰面积，Aref为标准品溶液峰面积，
Cref为标准品溶液的浓度，N为供试品溶液的稀释倍数，
C为制剂标示量，10mg/ml。
实施例2本发明含量测定方法的系统适用性考察试验
本实验的目的在于确认实施例1的含量测试方法的是否符合系统适用性的要求，系统适用性考察实验的可接受标准为：5针标准品溶液1的4-正丁基间苯二酚峰面积的RSD应≤3.0％，保留时间的RSD应≤1.0％，标准品溶液2第一针的4-正丁基间苯二酚峰拖尾因子应≤1.8。
1.仪器及分析条件：同实施例1.
2.溶液配制：参照实施例1方法配制标准品溶液及供试品溶液。
3.实验过程：
取溶剂25μ1，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，溶剂应无干扰。取25μ1标准品溶液2注入高效液相色谱仪，连续进样6针考察进样精密度及拖尾因子，具体结果见下表1。
表1系统进样精密度结果
经过实验色谱图和表2实验结果可知，溶剂在4-正丁基间苯二酚峰位置无干扰，5针标准品溶液的4-正丁基间苯二酚峰面积的RSD为0.50％，4-正丁基间苯二酚保留时间的RSD为0.1％，第一针4-正丁基间苯二酚峰的拖尾因子为1.3，明显优于可接受标准(4-正丁基间苯二酚峰面积的RSD应≤3.0％，保留时间的RSD应≤1.0％，拖尾因子应≤1.8)。
实施例3本发明含量测定方法的专属性考察
本实验的目的在于：验证本发明含量测定方法可以完全分离4-正丁基间苯二酚峰与所有的已知辅料与溶剂峰，含量测试不受辅料和溶剂的干扰，以证明本发明含量测试方法的专属性良好。
1.仪器及分析条件同实施例1。
2.溶液配制
空白辅料溶液：精密量取空白辅料5.0ml，置50ml容量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，精密量取上述溶液1.0ml，置100ml容量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，即得。
标准品溶液及溶剂配制：参照实施例1方法配制标准品溶液及溶剂。
3.实验过程及结果
系统适用性按实施例2方法验证合格后，取空白辅料溶液和溶剂各25μ1进样，空白辅料溶液和溶剂在4-正丁基间苯二酚峰位置应无干扰，具体结果见下表2，相关具体色谱图见附图3、图4。
表2空白辅料、溶剂干扰试验结果
| 检测试样 | 空白辅料溶液 | 溶剂 |
| 检测结果 | 6.330处未检出色谱峰 | 6.330处未检出色谱峰 |
通过上述试验和结果可知，空白辅料溶液和溶剂在保留时间6.330分钟(4-正丁基间苯二酚保留时间)附近未检出色谱峰，说明空白辅料溶液和溶剂在4-正丁基间苯二酚峰位置无干扰，证明该方法的专属性良好。
实施例4本发明含量测定方法的溶液稳定性考察
本实验的目的在于：确定本发明含量测定方法中所使用的标准品溶液在一定条件下、放置一段时间后，测试结果不受影响的程度。
1.仪器及分析条件同实施例1。
2.溶液配制参照实施例1方法配制标准品溶液及供试品溶液。
3.实验过程及结果
系统适用性按实施例2方法验证合格后，取各自于室温放置的标准品溶液1进样25μ1，分别在0h、2h、4h、6h、8h、10h、12h和24h进样，考察各溶液4-正丁基间苯二酚峰面积的变化，与0h相比，各溶液4-正基间苯二酚峰面积的回收率应为97.0％～103.0％。溶液稳定性结果见表3。
表3标准品溶液稳定性实验结果
通过以上试验和结果可知，标准品溶液在室温条件下24小时内稳定，说明本发明的标准品溶液在24小时内能够有效、准确的用于样品含量的测试。
实施例5本发明含量测定方法的重复性考察实验
确定同一操作者对于同一批样品多次测量结果的重现程度。
1.仪器及分析条件同实施例1。
2.溶液配制参见实施例1方法配制标准品溶液。
供试品溶液配制方法：取4-正丁基间苯二酚乳膏(规格：2ml:20mg)，混匀，精密量取4-正丁基间苯二酚乳膏25mg，置25ml容量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，即得。平行配制6份。
3.实验过程及结果
系统适用性按实施例2方法验证合格后，取6份供试品溶液各进样25μ1，分别进样1针，计算每份供试品溶液含量平均值，6份供试品溶液含量测定结果的RSD应≤3.0％。通过系统适用性试验获得Cref/Aref为1.1066E-07，经过实施例1中公式计算，重复性结果见下表4。
表4供试品溶液重复性实验结果
通过试验和以上结果可知，供试品溶液的含量的RSD为0.78％，远小于可接受限度3.0％，该方法的分析重复性符合接受标准，证明本方法重复性良好。
实施例6本发明含量测定方法准确度考察试验
本实验的目的在于：确定该色谱方法在预期线性范围内的测定结果与真实值的差异，从而确认是否该方法可以获得准确的测试结果。
1.仪器及分析条件同实施例1。
2.溶液配制
空白辅料溶液：精密量取空白辅料25mg，置25ml容量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，即得。
对照品储备液配制：取4-正丁基间苯二酚对照品25mg，精密称定，置50ml容量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，即得。
80％水平加样回收溶液：取对照品储备液1.6ml，精密移取，置100ml容量瓶中，精密加入空白辅料25mg至上述容量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀。平行配制3份。
100％水平加样回收溶液：取对照品储备液2.0ml，精密移取，置100ml容量瓶中，精密加入空白辅料25mg至上述容量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀。平行配制3份。
120％水平加样回收溶液：取对照品储备液2.4ml，精密移取，置100ml容量瓶中，精密加入空白辅料25mg至上述容量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀。平行配制3份。
3.实验过程及结果
系统适用性按实施例2方法验证合格后，取空白辅料溶液25μ1，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，应无干扰。取80％水平加样回收溶液，100％水平加样回收溶液和120％水平加样回收溶液各进样25μ1，计算浓度平均值，各浓度项下回收率的平均值应为97.0％～103.0％，回收率的RSD应≤3.0％。准确度结果见下表5。
表5准确度试验结果
通过试验可知，4-正丁基间苯二酚各浓度项下回收率的平均值为99.8％～100.0％，回收率的RSD为0.28％，准确度良好，证明本方法对4-正丁基间苯二酚的测定准确可行。
实施例8本发明含量测定方法的线性试验
本实验的目的在于：确定在预先设定的范围内，本发明的药物含量测定方法的被测溶液的测定结果与浓度之间的线性关系。
1.仪器及分析条件同实施例1。
2.溶液配制
线性储备液：取4-正丁基间苯二酚对照品25mg，精密称定，置50ml容量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，即得。
80％线性溶液：精密量取线性储备液0.8ml，置50ml容量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀。
90％线性溶液：精密量取线性储备液0.9ml，置50ml容量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀。
100％线性溶液：精密量取线性储备液1.0ml，置50ml容量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀。
110％线性溶液：精密量取线性储备液1.1ml，置50ml容量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀。
120％线性溶液：精密量取线性储备液1.2ml，置50ml容量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀。
3.实验过程及结果
系统适用性按实施例2方法验证合格后，依次取80％、90％、100％、110％、120％各浓度的线性溶液各进样1针，计算峰面积平均值，以峰面积平均值(A均)对浓度(CS，μg/ml)作线性回归方程(五点)，相关系数r应≥0.995。线性结果见下表6，线性曲线见附图4。
表6线性试验结果
通过上述试验和结果可知，4-正丁基间苯二酚在8.288～12.432μg/ml浓度范围内与峰面积呈良好线性关系，五点回归曲线的相关系数r为0.9995，本发明含量测定方法的定量能力高。
以上，对本发明的实施方式进行了说明。但是，本发明不限定于上述实施方式。凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种4-正丁基间苯二酚的含量测定方法，包括以下步骤：
a)将4-正丁基间苯二酚标准品溶于溶剂中，配制成一定浓度的4-正丁基间苯二酚标准品溶液，浓度记为Cref；
b)在常压下，采用高效液相色谱分析法测定4-正丁基间苯二酚标准品溶液的峰面积Aref；
c)将4-正丁基间苯二酚待测样品溶于溶剂中，配制成一定浓度的4-正丁基间苯二酚供试品溶液；
d)在常压下，采用高效液相色谱分析法测定4-正丁基间苯二酚供试品溶液的峰面积A供；
e)按照以下公式①、②计算4-正丁基间苯二酚待测样品的药物浓度C药和药物含量；
①4-正丁基间苯二酚待测样品的药物浓度计算公式为：
②4-正丁基间苯二酚待测样品的药物含量计算公式为：
上式中：A供为供试品溶液峰面积，Aref为标准品溶液峰面积，
Cref为标准品溶液的浓度，N为供试品溶液的稀释倍数，
C为制剂标示量，10mg/ml。
2.根据权利要求1所述的含量测定方法，其中，所述溶剂为50％的乙腈溶液；步骤a)中，所述的4-正丁基间苯二酚标准品溶浓度选自8μg/ml～12μg/ml。
3.根据权利要求2所述的含量测定方法，其中，4-正丁基间苯二酚标准品溶浓度选自8μg/ml、10μg/ml、12μg/ml中的一种。
4.根据权利要求2所述的含量测定方法，其中，4-正丁基间苯二酚标准品溶浓度选自10μg/ml。
5.根据权利要求1所述的含量测定方法，其中，所述4-正丁基间苯二酚待测样品可以是4-正丁基间苯二酚原料药、4-正丁基间苯二酚制剂和4-正丁基间苯二酚化妆品中的一种。
6.根据权利要求1所述的含量测定方法，其中，所述4-正丁基间苯二酚待测样品为4-正丁基间苯二酚外用制剂。
7.根据权利要求1所述的含量测定方法，其中，所述4-正丁基间苯二酚待测样品为4-正丁基间苯二酚乳膏。
8.根据权利要求1所述的含量测定方法，其中，所述高效液相色谱分析法的条件为：高效液相色谱仪、检测器为二极管阵列检测器；色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相A为甲酸水溶液，流动相B为乙腈，洗脱条件为A相：B相＝60：40、等度洗脱；柱温35℃，流速1.0ml/min，进样量为10μl。
9.根据权利要求8所述的含量测定方法，其中，所述色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱；所述甲酸水溶液的体积浓度为0.05％-3％。
10.根据权利要求8所述的含量测定方法，其中，所述色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C183.5μm 4.6×150mm色谱柱，所述甲酸水溶液的体积浓度为0.1％。
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