CN116948832A - 微结节霉、菌剂及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及土壤和地下水污染修复技术和生物工程技术领域，公开了一种微结节霉(Microdochium sp.)、菌剂及其应用。本发明的微结节霉的保藏编号为CGMCC No.23200。使用本发明的微结节霉或菌剂对石油烃进行降解，降解效率高，可以用于石油烃污染土壤或地下水的修复，在石油烃污染场地绿色、可持续修复上具有良好的应用前景。
Description
技术领域
本发明属于土壤和地下水污染修复技术和生物工程技术领域，具体涉及一种微结节霉、菌剂、降解石油烃的方法及应用。
背景技术
石油及其制品通过多种途径不断进入环境，对土壤和水体造成污染，石油烃已成为环境中广泛存在的有机污染物之一。目前，常用的石油烃污染修复方法主要有物理、化学和生物修复法。相较于物理和化学修复，生物修复具有成本低，操作简便，二次污染小等优点，是绿色、可持续的环境治理技术。
CN103992976B公开了一株石油烃降解菌DL5-3，为Winogradskyella sp.；能够以柴油、液态烷烃等烃类化合物为碳源和能源进行生长，6天对无机盐培养基中的5g/L的石油与柴油的混合物(V:V＝1:1)降解率达到52.2％，可用于含油废水、受石油类污染的水体和土壤的生物强化处理与修复。
现有技术中菌株对石油烃的降解率大多在50％-85％之间，修复效率不高成为微生物修复技术应用的瓶颈。因此，挖掘高效的石油烃降解菌，对于促进微生物修复的应用意义重大。
发明内容
本发明的目的是为了克服现有技术的存现有石油烃降解菌对石油烃的降解率不高、对石油烃污染土壤修复效率不高的问题，提供一种微结节霉、菌剂、降解石油烃的方法及应用。使用本发明的微结节霉或菌剂对石油烃进行降解，降解效率高。
为了实现上述目的，本发明第一方面提供一种微结节霉(Microdochium sp.)，该微结节霉的保藏编号为CGMCC No.23200。
本发明第二方面提供一种菌剂，该菌剂含有如上所述的微结节霉。
本发明第三方面提供如上所述微结节霉或如上所述的菌剂在降解石油烃中的应用。
本发明第四方面提供一种降解石油烃的方法，其特征在于，该方法包括：将如上所述微结节霉或如上所述的菌剂与含石油烃的污染物接触。
本发明第五方面提供如上所述微结节霉或如上所述的菌剂在修复石油烃污染土壤或石油烃污染地下水中的应用。
本发明所述的微结节霉或菌剂具有较高的石油烃降解率。本发明提供的微结节霉11-1B，在石油烃含量为10g/L的无机盐液体培养基中，温度30.0±2.0℃、pH 7.0±0.2条件下，7天石油烃降解率达到85％以上。在石油烃含量为10g/kg的污染土壤中，温度30.0±2.0℃、pH 7.0±0.2条件下，30天石油烃降解率达到80％以上。
本发明所述的微结节霉或菌剂可用于石油烃污染土壤或地下水的修复，在石油烃污染场地绿色、可持续修复上具有良好的应用前景。本发明所述的微结节霉或菌剂对成分比较复杂的原油、柴油、煤油等也具有较高的降解率。
生物保藏
本发明的微结节霉(Microdochium sp.)11-1B，于2021年08月26日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101)(保藏单位的缩写为CGMCC)，保藏编号CGMCC No.23200。
附图说明
图1为微结节霉11-1B在琼脂固体培养基平板上菌落形态。
具体实施方式
在本文中所披露的范围的端点和任何值都不限于该精确的范围或值，这些范围或值应当理解为包含接近这些范围或值的值。对于数值范围来说，各个范围的端点值之间、各个范围的端点值和单独的点值之间，以及单独的点值之间可以彼此组合而得到一个或多个新的数值范围，这些数值范围应被视为在本文中具体公开。
本发明第一方面提供一种微结节霉(Microdochium sp.)，该微结节霉的保藏编号为CGMCC No.23200。
本发明的微结节霉筛选自北京地区受柴油污染的土壤。
所述筛选的方法可以为本领域常规的用于新菌株筛选的方法，例如，所述筛选方法可以为：采集污染土壤，加入灭菌后的去离子水中，制成接种液；将接种液接种于以柴油为唯一碳源的无机盐培养基中，传代3-5次；将上述培养液进行浓度梯度稀释，连续划线培养至单菌落被分离；采用LB培养基对上述单菌落进行扩大化培养，离心得到菌体，即待鉴定菌株。将得到的菌体用灭菌后的生理盐水重悬得到菌悬液，将菌悬液以1:1的体积比例混合于70％甘油中，-80℃冰箱内保存。所述待鉴定菌株在琼脂固体培养基平板上菌落形态规则，呈白色，小圆珠状，菌落表面光滑湿润，有光泽感，不透明，如图1所示。通过16S rDNA测序方法鉴别该菌株的种属，将该菌株确定为微结节霉，命名为11-1B。
将微结节霉11-1B保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101)(保藏单位的缩写为CGMCC)，保藏编号CGMCC No.23200，保藏日期为2021年08月26日。
本发明中，所述LB培养基为本领域常规技术选择，在此不再赘述。
本发明第二方面提供一种菌剂，该菌剂含有如上所述的微结节霉。
本发明的一些实施方式中，该菌剂为液体菌剂和/或固体菌剂。本发明中，在所述菌剂中，所述微结节霉的浓度没有特别的限制，可以根据具体的情况进行具体的选择。本发明的一些实施方式中，所述液体菌剂中的活菌数为109cfu/mL以上。本发明的一些实施方式中，所述固体菌剂中的活菌数为109cfu/g以上。
本发明的一些实施方式中，该菌剂中还可以含有辅料。所述辅料可以为不会对微结节霉的活性造成影响的、本领域常用的辅料。具体的选择为本领域技术人员所公知，本发明在此不再详细赘述。
另外，根据预定用途不同，本发明提供的菌剂可以制备为不同的剂型。具体的选择为本领域技术人员所公知，本发明在此不再详细赘述。
所述菌剂的制备方法可以为本领域常规的制备方法。优选的情况下，所述制备方法包括：将如上所述的微结节霉活化后在培养基中进行培养，得到菌液原液；将菌液原液离心后得到的菌体以无菌水制备成菌悬液并使菌悬液中的活菌数达到109cfu/mL以上，得到菌剂。其中，所述培养基可以为本领域常规用于培养微结节霉的培养基，例如可以为LB培养基、马铃薯蔗糖培养基。发明人研究发现，本发明所述微结节霉可以在LB培养基中进行培养。优选的情况下，出于生产成本、操作便利性等方面的考虑，所述培养基为LB培养基。
本发明中，所述培养的条件可以为本领域公知的常规的用于微结节霉培养的条件，本发明在此不再赘述。
本发明第三方面提供如上所述微结节霉或如上所述的菌剂在降解石油烃中的应用。
本发明中，所述石油烃指的是石油中的烃类化合物中的至少一种，或多种烃类(正烷烃、支链烷烃、环烷烃、芳烃)和少量其他有机物，如硫化物、氮化物、环烷酸类等的混合物。本发明中，所述石油烃可以为石油中的烃类化合物的复杂混合物如原油、柴油、煤油等，也可以为烃类化合物如正十二烷、正十六烷、正二十烷、正二十八烷等及它们中任意几种的混合。本发明的一些实施方式中，所述石油烃为液态烷烃、固态烷烃、柴油、原油和煤油中的至少一种。
本发明的一些实施方式中，所述液态烷烃可以包括本领域常见的碳原子数为10-16的常温(25℃)下呈液态的直链或支链烷烃中的至少一种，例如可以为正十二烷、正十六烷。所述固态烷烃可以包括本领域常见的碳原子数为17-40的常温(25℃)下呈固态的直链或支链烷烃中的至少一种，例如可以为正二十烷、正二十八烷。
本发明第四方面提供一种降解石油烃的方法，其特征在于，该方法包括：将如上所述微结节霉或如上所述的菌剂与含石油烃的污染物接触。
本发明的一些实施方式中，所述石油烃为液态烷烃、固态烷烃、柴油、原油、煤油中的至少一种。
本发明的一些实施方式中，所述液态烷烃可以包括本领域常见的碳原子数为10-16的常温(25℃)下呈液态的直链或支链烷烃中的至少一种，例如可以为正十二烷、正十六烷。所述固态烷烃可以包括本领域常见的碳原子数为17-40的常温(25℃)下呈固态的直链或支链烷烃中的至少一种，例如可以为正二十烷、正二十八烷。
本发明的一些实施方式中，所述含石油烃的污染物为含石油烃的土壤或含石油烃的地下水。
本发明的一些实施方式中，当所述含石油烃的污染物为含石油烃的土壤时，以石油烃(C10-C40)计，所述石油烃的含量为2-50g/kg土壤，例如可以为2g/kg土壤、5g/kg土壤、7g/kg土壤、10g/kg土壤、12g/kg土壤、15g/kg土壤、17g/kg土壤、20g/kg土壤、22g/kg土壤、25g/kg土壤、27g/kg土壤、30g/kg土壤、32g/kg土壤、35g/kg土壤、37g/kg土壤、40g/kg土壤、42g/kg土壤、45g/kg土壤、47g/kg土壤、50g/kg土壤中任意一个值或上述任意两个值组成的范围内的数值。其中，所述土壤重量以干基计。
本发明中，所述菌株或所述菌剂的使用量可以在较宽的范围内进行选择。本发明的一些实施方式中，所述含石油烃的污染物为含石油烃的土壤时，所述菌株或所述菌剂的使用量使得所述含石油烃的土壤中活菌数为106-108cfu/g。其中，所述土壤重量以干基计。
本发明的一些实施方式中，所述接触的条件包括：温度为20-40℃，pH值为5-10。其中，所述温度可以为20℃、22℃、25℃、27℃、30℃、32℃、35℃、37℃、40℃中任意一个值或上述任意两个值组成的范围内的数值。其中，所述pH可以为5、5.2、5.5、5.8、6、6.2、6.5、6.8、7、7.2、7.5、7.8、8、8.2、8.5、8.8、9、9.2、9.5、9.8、10中任意一个值或上述任意两个值组成的范围内的数值。优选的情况下，为了进一步提高石油烃降解率，所述接触的条件为：温度23-32℃，pH5.8-7.2。发明人发现，当所述接触条件在上述优选的范围内时，石油烃降解率能够进一步提高。
本发明的一些实施方式中，当所述含石油烃的污染物为含石油烃的地下水时，以石油烃(C10-C40)计，所述石油烃的浓度为2-50g/L地下水，例如可以为2g/L地下水、5g/L地下水、7g/L地下水、10g/L地下水、12g/L地下水、15g/L地下水、17g/L地下水、20g/L地下水、22g/L地下水、25g/L地下水、27g/L地下水、30g/L地下水、32g/L地下水、35g/L地下水、37g/L地下水、40g/L地下水、42g/L地下水、45g/L地下水、47g/L地下水、50g/L地下水中任意一个值或上述任意两个值组成的范围内的数值。
本发明的一些实施方式中，所述含石油烃的污染物为含石油烃的地下水时，所述菌株或所述菌剂的使用量使得所述含石油烃的地下水中活菌数为106-108cfu/mL。
本发明第五方面提供如上所述微结节霉或如上所述的菌剂在修复石油烃污染土壤或石油烃污染地下水中的应用。
本发明的一些实施方式中，所述石油烃为液态烷烃、固态烷烃、柴油、原油、煤油中的至少一种。
本发明的一些实施方式中，所述液态烷烃可以包括本领域常见的碳原子数为10-16的常温(25℃)下呈液态的直链或支链烷烃中的至少一种，例如可以为正十二烷、正十六烷。所述固态烷烃可以包括本领域常见的碳原子数为17-40的常温(25℃)下呈固态的直链或支链烷烃中的至少一种，例如可以为正二十烷、正二十八烷。
以下将通过实施例对本发明进行详细描述。以下实施例中，除特殊说明外，所用试剂和原料均可通过商购得到，所用方法均为本领域常规方法。
以下实施例中：
LB培养基：酵母膏5g/L，蛋白胨10g/L，NaCl 10g/L，去离子水1L。
无机盐培养基：NH4Cl 0.67g/L，NaNO31.06g/L，MgSO4·7H2O 0.1g/L，CaCl2 0.1g/L，K2HPO4·3H2O 1.5g/L，KH2PO4 0.5g/L，FeCl3·6H2O 0.1g/L，去离子水1L。
原油取自中国石油化工股份有限公司北京燕山分公司。
柴油购自中国石化销售股份有限公司北京石油分公司，牌号为0#。
煤油购自北京伊诺凯科技有限公司。
正十二烷购自北京伊诺凯科技有限公司。
正十六烷购自北京伊诺凯科技有限公司。
正二十烷购自北京伊诺凯科技有限公司。
正二十八烷购自北京伊诺凯科技有限公司。
微结节霉(Microdochium sp.)11-1B，于2021年08月26日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101)(保藏单位的缩写为CGMCC)，保藏编号CGMCC No.23200。
污染土壤中的石油烃含量的检测方法参照《土壤、沉积物石油烃(C10-C40)的测定气相色谱法》HJ1021-2019进行检测。其中，使用正己烷对石油烃进行加压流体萃取。当定容体积为1.0mL，进样体积为1.0μL时，测定石油烃的方法检出限为6mg/kg，测定下限为24mg/kg。
无机盐培养基中的石油烃浓度的检测方法参照《水质可萃取石油烃(C10-C40)的测定气相色谱法》HJ894-2017进行检测。
污染土壤中的石油烃降解率(％)＝(初始石油烃含量－剩余石油烃含量)/初始石油烃含量。其中，所述初始石油烃含量指的是未接种菌悬液的污染土壤中石油烃含量。
无机盐培养基中的石油烃降解率(％)＝(初始石油烃浓度－剩余石油烃浓度)/初始石油烃浓度。其中，所述初始石油烃浓度指的是未接种菌悬液的无机盐培养基中的石油烃浓度。
实施例1
本实施例用于说明微结节霉11-1B对原油的降解效果。
模拟石油烃污染地下水的制备：将原油添加至无机盐培养基中使得原油浓度(以石油烃(C10-C40)计)为10g/L，得到原油浓度(以石油烃(C10-C40)计)为10g/L的无机盐培养基。
将保藏的微结节霉11-1B菌体活化后，在LB培养基中培养得到菌液原液；将菌液原液离心后得到的菌体以无菌水制备成菌悬液，其活菌含量约为109cfu/mL。
将菌悬液按1vol.％的接种量(109cfu)接种于上述原油浓度(以石油烃(C10-C40)计)为10g/L的无机盐培养基中，以温度和pH为影响因素，设置实验组和对照组(对照组不接种微结节霉11-1B)，定期检测剩余原油浓度(以石油烃(C10-C40)计)，计算石油烃降解率，测定微结节霉11-1B对无机盐培养基中的原油的最佳降解条件以及在最佳降解条件下7天降解效果。结果发现，微结节霉11-1B的最佳降解条件为温度30.0±2.0℃、pH 7.0±0.2。微结节霉11-1B在最佳条件(温度30.0±2.0℃、pH 7.0±0.2)下7天的原油降解效果见表1。
模拟石油烃污染土壤的制备：取未被石油烃污染的土壤，经过预处理过筛去除土壤中的小石块、草根等杂质并自然风干，将原油添加至未被石油烃污染的土壤中使得原油含量(以石油烃(C10-C40)计)为10g/kg(其中，土壤的重量以干基计)，得到原油含量(以石油烃(C10-C40)计)为10g/kg的污染土壤。
将菌悬液按1(v/w)％的接种量(109cfu)接种于上述原油含量(以石油烃(C10-C40)计)为10g/kg的污染土壤中，以温度和pH为影响因素，设置实验组和对照组(对照组不接种微结节霉11-1B)，定期检测剩余原油含量(以石油烃(C10-C40)计)，计算石油烃降解率，测定微结节霉11-1B对污染土壤中原油的最佳降解条件以及在最佳降解条件下30天降解效果。结果发现，微结节霉11-1B的最佳降解条件为30.0±2.0℃、pH 7.0±0.2。微结节霉11-1B在最佳条件(温度30.0±2.0℃、pH 7.0±0.2)下30天的原油降解效果见表1。
实施例2
本实施例用于说明微结节霉11-1B对柴油的降解效果。
模拟石油烃污染地下水的制备：将柴油添加至无机盐培养基中使得柴油浓度(以石油烃(C10-C40)计)为10g/L，得到柴油浓度(以石油烃(C10-C40)计)为10g/L的无机盐培养基。
将保藏的微结节霉11-1B菌体活化后，在LB培养基中培养得到菌液原液；将菌液原液离心后得到的菌体以无菌水制备成菌悬液，其活菌含量约为109cfu/mL。
将菌悬液按1vol.％的接种量(109cfu)接种于上述柴油浓度(以石油烃(C10-C40)计)为10g/L的无机盐培养基中，以温度和pH为影响因素，设置实验组和对照组(对照组不接种微结节霉11-1B)，定期检测剩余柴油浓度(以石油烃(C10-C40)计)，计算石油烃降解率，测定微结节霉11-1B对无机盐培养基中柴油的最佳降解条件以及在最佳降解条件下7天降解效果。结果发现，微结节霉11-1B的最佳降解条件为30.0±2.0℃、pH 7.0±0.2。微结节霉11-1B在最佳条件(温度30.0±2.0℃、pH 7.0±0.2)下7天的柴油降解效果见表1。
模拟石油烃污染土壤的制备：取未被石油烃污染的土壤，经过预处理过筛去除土壤中的小石块、草根等杂质并自然风干，将柴油添加至未被石油烃污染的土壤中使得柴油含量(以石油烃(C10-C40)计)为10g/kg(其中，土壤的重量以干基计)，得到柴油含量(以石油烃(C10-C40)计)为10g/kg的污染土壤。
将菌悬液按1(v/w)％的接种量(109cfu)接种于上述柴油含量(以石油烃(C10-C40)计)为10g/kg的污染土壤中，以温度和pH为影响因素，设置实验组和对照组(对照组不接种微结节霉11-1B)，定期检测剩余柴油含量(以石油烃(C10-C40)计)，计算石油烃降解率，测定微结节霉11-1B对污染土壤中柴油的最佳降解条件以及在最佳降解条件下30天降解效果。结果发现，微结节霉11-1B的最佳降解条件为30.0±2.0℃、pH 7.0±0.2。微结节霉11-1B在最佳条件(温度30.0±2.0℃、pH 7.0±0.2)下30天的柴油降解效果见表1。
实施例3
本实施例用于说明微结节霉11-1B对煤油的降解效果。
模拟石油烃污染地下水的制备：将煤油添加至无机盐培养基中使得煤油浓度(以石油烃(C10-C40)计)为10g/L，得到煤油浓度(以石油烃(C10-C40)计)为10g/L的无机盐培养基。
将保藏的微结节霉11-1B菌体活化后，在LB培养基中培养得到菌液原液；将菌液原液离心后得到的菌体以无菌水制备成菌悬液，其活菌含量约为109cfu/mL。
将菌悬液按1vol.％的接种量(109cfu)接种于上述煤油浓度(以石油烃(C10-C40)计)为10g/L的无机盐培养基中，以温度和pH为影响因素，设置实验组和对照组，(对照组不接种微结节霉11-1B)，定期检测剩余煤油浓度(以石油烃(C10-C40)计)，计算石油烃降解率，测定微结节霉11-1B对无机盐培养基中煤油的最佳降解条件以及在最佳降解条件下7天降解效果。结果发现，微结节霉11-1B的最佳降解条件为30.0±2.0℃、pH 7.0±0.2。微结节霉11-1B在最佳条件(温度30.0±2.0℃、pH 7.0±0.2)下7天的煤油降解效果见表1。
模拟石油烃污染土壤的制备：取未被石油烃污染的土壤，经过预处理过筛去除土壤中的小石块、草根等杂质并自然风干，将煤油添加至未被石油烃污染的土壤中使得煤油含量(以石油烃(C10-C40)计)为10g/kg(其中，土壤的重量以干基计)，得到煤油含量(以石油烃(C10-C40)计)为10g/kg的污染土壤。
将菌悬液按1(v/w)％的接种量(109cfu)接种于上述煤油含量(以石油烃(C10-C40)计)为10g/kg的污染土壤中，以温度和pH为影响因素，设置实验组和对照组(对照组不接种微结节霉11-1B)，定期检测剩余煤油含量(以石油烃(C10-C40)计)，计算石油烃降解率，测定微结节霉11-1B对污染土壤中煤油的最佳降解条件以及在最佳降解条件下30天降解效果。结果发现，微结节霉11-1B的最佳降解条件为30.0±2.0℃、pH 7.0±0.2。微结节霉11-1B在最佳条件(温度30.0±2.0℃、pH 7.0±0.2)下30天的煤油降解效果见表1。
实施例4
本实施例用于说明微结节霉11-1B对正十二烷的降解效果。
模拟石油烃污染地下水的制备：将正十二烷添加至无机盐培养基中使得正十二烷浓度(以石油烃(C10-C40)计)为10g/L，得到正十二烷浓度(以石油烃(C10-C40)计)为10g/L的无机盐培养基。
将保藏的微结节霉11-1B菌体活化后，在LB培养基中培养得到菌液原液；将菌液原液离心后得到的菌体以无菌水制备成菌悬液，其活菌含量约为109cfu/mL。
将菌悬液按1vol.％的接种量(109cfu)接种于上述正十二烷浓度(以石油烃(C10-C40)计)为10g/L的无机盐培养基中，以温度和pH为影响因素，设置实验组和对照组(对照组不接种微结节霉11-1B)，定期检测剩余正十二烷浓度(以石油烃(C10-C40)计)，计算石油烃降解率，测定微结节霉11-1B对无机盐培养基中正十二烷的最佳降解条件以及在最佳降解条件下7天降解效果。结果发现，微结节霉11-1B的最佳降解条件为30.0±2.0℃、pH 7.0±0.2。微结节霉11-1B在最佳条件(温度30.0±2.0℃、pH 7.0±0.2)下7天的正十二烷降解效果见表1。
模拟石油烃污染土壤的制备：取未被石油烃污染的土壤，经过预处理过筛去除土壤中的小石块、草根等杂质并自然风干，将正十二烷添加至未被石油烃污染的土壤中使得正十二烷含量(以石油烃(C10-C40)计)为10g/kg(其中，土壤的重量以干基计)，得到正十二烷含量(以石油烃(C10-C40)计)为10g/kg的污染土壤。
将菌悬液按1(v/w)％的接种量(109cfu)接种于上述正十二烷含量(以石油烃(C10-C40)计)为10g/kg的污染土壤中，以温度和pH为影响因素，设置实验组和对照组(对照组不接种微结节霉11-1B)，定期检测剩余正十二烷含量(以石油烃(C10-C40)计)，计算石油烃降解率，测定微结节霉11-1B对污染土壤中正十二烷的最佳降解条件以及在最佳降解条件下30天降解效果。结果发现，微结节霉11-1B的最佳降解条件为30.0±2.0℃、pH 7.0±0.2。微结节霉11-1B在最佳条件(温度30.0±2.0℃、pH 7.0±0.2)下30天的正十二烷降解效果见表1。
实施例5
本实施例用于说明微结节霉11-1B对正十六烷的降解效果。
模拟石油烃污染地下水的制备：将正十六烷添加至无机盐培养基中使得正十六烷浓度(以石油烃(C10-C40)计)为10g/L，得到正十六烷浓度(以石油烃(C10-C40)计)为10g/L的无机盐培养基。
将保藏的微结节霉11-1B菌体活化后，在LB培养基中培养得到菌液原液；将菌液原液离心后得到的菌体以无菌水制备成菌悬液，其活菌含量约为109cfu/mL。
将菌悬液按1vol.％的接种量(109cfu)接种于上述正十六烷浓度(以石油烃(C10-C40)计)为10g/L的无机盐培养基中，以温度和pH为影响因素，设置实验组和对照组(对照组不接种微结节霉11-1B)，定期检测剩余正十六烷浓度(以石油烃(C10-C40)计)，计算石油烃降解率，测定微结节霉11-1B对无机盐培养基中正十六烷的最佳降解条件以及在最佳降解条件下7天降解效果。结果发现，微结节霉11-1B的最佳降解条件为30.0±2.0℃、pH 7.0±0.2。微结节霉11-1B在最佳条件(温度30.0±2.0℃、pH 7.0±0.2)下7天的正十六烷降解效果见表1。
模拟石油烃污染土壤的制备：取未被石油烃污染的土壤，经过预处理过筛去除土壤中的小石块、草根等杂质并自然风干，将正十六烷添加至未被石油烃污染的土壤中使得正十六烷含量(以石油烃(C10-C40)计)为10g/kg(其中，土壤的重量以干基计)，得到正十六烷含量(以石油烃(C10-C40)计)为10g/kg的污染土壤。
将菌悬液按1(v/w)％的接种量(109cfu)接种于上述正十六烷含量(以石油烃(C10-C40)计)为10g/kg的污染土壤中，以温度和pH为影响因素，设置实验组和对照组(对照组不接种微结节霉11-1B)，定期检测剩余正十六烷含量(以石油烃(C10-C40)计)，计算石油烃降解率，测定微结节霉11-1B对污染土壤中正十六烷的最佳降解条件以及在最佳降解条件下30天降解效果。结果发现，微结节霉11-1B的最佳降解条件为30.0±2.0℃、pH 7.0±0.2。微结节霉11-1B在最佳条件(温度30.0±2.0℃、pH 7.0±0.2)下30天的正十六烷降解效果见表1。
实施例6
本实施例用于说明微结节霉11-1B对正二十烷的降解效果。
模拟石油烃污染地下水的制备：将正二十烷添加至无机盐培养基中使得正二十烷浓度(以石油烃(C10-C40)计)为10g/L，得到正二十烷浓度(以石油烃(C10-C40)计)为10g/L的无机盐培养基。
将保藏的微结节霉11-1B菌体活化后，在LB培养基中培养得到菌液原液；将菌液原液离心后得到的菌体以无菌水制备成菌悬液，其活菌含量约为109cfu/mL。
将菌悬液按1vol.％的接种量(109cfu)接种于上述正二十烷浓度(以石油烃(C10-C40)计)为10g/L的无机盐培养基中，以温度和pH为影响因素，设置实验组和对照组(对照组不接种微结节霉11-1B)，定期检测剩余正二十烷浓度(以石油烃(C10-C40)计)，计算石油烃降解率，测定微结节霉11-1B对无机盐培养基中正二十烷的最佳降解条件以及在最佳降解条件下7天降解效果。结果发现，微结节霉11-1B的最佳降解条件为30.0±2.0℃、pH 7.0±0.2。微结节霉11-1B在最佳条件(温度30.0±2.0℃、pH 7.0±0.2)下7天的正二十烷降解效果见表1。
模拟石油烃污染土壤的制备：取未被石油烃污染的土壤，经过预处理过筛去除土壤中的小石块、草根等杂质并自然风干，将正二十烷添加至未被石油烃污染的土壤中使得正二十烷含量(以石油烃(C10-C40)计)为10g/kg(其中，土壤的重量以干基计)，得到正二十烷含量(以石油烃(C10-C40)计)为10g/kg的污染土壤。
将菌悬液按1(v/w)％的接种量(109cfu)接种于上述正二十烷含量(以石油烃(C10-C40)计)为10g/kg的污染土壤中，以温度和pH为影响因素，设置实验组和对照组(对照组不接种微结节霉11-1B)，定期检测剩余正二十烷含量(以石油烃(C10-C40)计)，计算石油烃降解率，测定微结节霉11-1B对污染土壤中正十二烷的最佳降解条件以及在最佳降解条件下30天降解效果。结果发现，微结节霉11-1B的最佳降解条件为30.0±2.0℃、pH 7.0±0.2。微结节霉11-1B在最佳条件(温度30.0±2.0℃、pH 7.0±0.2)下30天的正二十烷降解效果见表1。
实施例7
本实施例用于说明微结节霉11-1B对正二十八烷的降解效果。
模拟石油烃污染地下水的制备：将正二十八烷添加至无机盐培养基中使得正二十八烷浓度(以石油烃(C10-C40)计)为10g/L，得到正二十八烷浓度(以石油烃(C10-C40)计)为10g/L的无机盐培养基。
将保藏的微结节霉11-1B菌体活化后，在LB培养基中培养得到菌液原液；将菌液原液离心后得到的菌体以无菌水制备成菌悬液，其活菌含量约为109cfu/mL。
将菌悬液按1vol.％的接种量(109cfu)接种于上述正二十八烷浓度(以石油烃(C10-C40)计)为10g/L的无机盐培养基中，以温度和pH为影响因素，设置实验组和对照组(对照组不接种微结节霉11-1B)，定期检测剩余正二十八烷浓度(以石油烃(C10-C40)计)，计算石油烃降解率，测定微结节霉11-1B对无机盐培养基中正二十八烷的最佳降解条件以及在最佳降解条件下7天降解效果。结果发现，微结节霉11-1B的最佳降解条件为30.0±2.0℃、pH7.0±0.2。微结节霉11-1B在最佳条件(温度30.0±2.0℃、pH 7.0±0.2)下7天的正二十八烷降解效果见表1。
模拟石油烃污染土壤的制备：取未被石油烃污染的土壤，经过预处理过筛去除土壤中的小石块、草根等杂质并自然风干，将正二十八烷添加至未被石油烃污染的土壤中使得正二十八烷含量(以石油烃(C10-C40)计)为10g/kg(其中，土壤的重量以干基计)，得到正二十八烷含量(以石油烃(C10-C40)计)为10g/kg的污染土壤。
将菌悬液按1(v/w)％的接种量(109cfu)接种于上述正二十八烷含量(以石油烃(C10-C40)计)为10g/kg的污染土壤中，以温度和pH为影响因素，设置实验组和对照组(对照组不接种微结节霉11-1B)，定期检测剩余正二十八烷含量(以石油烃(C10-C40)计)，计算石油烃降解率，测定微结节霉11-1B对污染土壤中正二十八烷的最佳降解条件以及在最佳降解条件下30天降解效果。结果发现，微结节霉11-1B的最佳降解条件为30.0±2.0℃、pH 7.0±0.2。微结节霉11-1B在最佳条件(温度30.0±2.0℃、pH 7.0±0.2)下30天的正二十八烷降解效果见表1。
表1微结节霉11-1B的石油烃降解效果
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于此。在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，包括各个技术特征以任何其它的合适方式进行组合，这些简单变型和组合同样应当视为本发明所公开的内容，均属于本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种微结节霉(Microdochium sp.)，其特征在于，该微结节霉的保藏编号为CGMCCNo.23200。
2.一种菌剂，其特征在于，该菌剂含有权利要求1所述的微结节霉。
3.根据权利要求2所述的菌剂，其中，该菌剂为液体菌剂和/或固体菌剂。
4.根据权利要求3所述的菌剂，其中，所述液体菌剂中的活菌数为109cfu/mL以上；
所述固体菌剂中的活菌数为109cfu/g以上。
5.权利要求1所述的微结节霉或权利要求2-4中任意一项所述的菌剂在降解石油烃中的应用。
6.一种降解石油烃的方法，其特征在于，该方法包括：将权利要求1所述的微结节霉或权利要求2-4中任意一项所述的菌剂与含石油烃的污染物接触。
7.根据权利要求6所述的方法，其中，所述石油烃为液态烷烃、固态烷烃、柴油、原油和煤油中的至少一种。
8.根据权利要求6或7所述的方法，其中，所述含石油烃的污染物为含石油烃的土壤或含石油烃的地下水。
9.根据权利要求6-8中任意一项所述的方法，其中，所述接触的条件包括：温度为20-40℃，pH值为5-10。
10.权利要求1所述的微结节霉或权利要求2-4中任意一项所述的菌剂在修复石油烃污染土壤或石油烃污染地下水中的应用。
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