CN116920164B - 一种含重组ⅲ型人源化胶原蛋白的修复水及其制备方法 - Google Patents
一种含重组ⅲ型人源化胶原蛋白的修复水及其制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN116920164B CN116920164B CN202310624205.6A CN202310624205A CN116920164B CN 116920164 B CN116920164 B CN 116920164B CN 202310624205 A CN202310624205 A CN 202310624205A CN 116920164 B CN116920164 B CN 116920164B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- solution
- water
- standby
- purified water
- recombinant
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 118
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 title claims abstract description 61
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 title claims abstract description 61
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 title claims abstract description 61
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 53
- 230000008439 repair process Effects 0.000 title claims abstract description 50
- 239000008213 purified water Substances 0.000 claims abstract description 48
- 229920000663 Hydroxyethyl cellulose Polymers 0.000 claims abstract description 47
- 239000004354 Hydroxyethyl cellulose Substances 0.000 claims abstract description 47
- 235000019447 hydroxyethyl cellulose Nutrition 0.000 claims abstract description 47
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 45
- UWJJYHHHVWZFEP-UHFFFAOYSA-N pentane-1,1-diol Chemical compound CCCCC(O)O UWJJYHHHVWZFEP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 15
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims abstract description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 41
- 238000005303 weighing Methods 0.000 claims description 40
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 28
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 claims description 24
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims description 16
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 16
- 238000010992 reflux Methods 0.000 claims description 16
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 claims description 9
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 8
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 8
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims description 6
- 201000004624 Dermatitis Diseases 0.000 abstract description 2
- 230000035876 healing Effects 0.000 abstract description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 37
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 31
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 13
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 11
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 10
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 8
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 6
- 206010070834 Sensitisation Diseases 0.000 description 5
- 230000008313 sensitization Effects 0.000 description 5
- 206010070835 Skin sensitisation Diseases 0.000 description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 239000000306 component Substances 0.000 description 4
- 239000013022 formulation composition Substances 0.000 description 4
- 231100000370 skin sensitisation Toxicity 0.000 description 4
- 206010015150 Erythema Diseases 0.000 description 3
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 3
- 206010040880 Skin irritation Diseases 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 3
- 230000002980 postoperative effect Effects 0.000 description 3
- 231100000475 skin irritation Toxicity 0.000 description 3
- 230000036556 skin irritation Effects 0.000 description 3
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 3
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N Acrylic acid Chemical compound OC(=O)C=C NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 206010058679 Skin oedema Diseases 0.000 description 2
- 229920002125 Sokalan® Polymers 0.000 description 2
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 2
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 229960001631 carbomer Drugs 0.000 description 2
- 238000002784 cytotoxicity assay Methods 0.000 description 2
- 231100000263 cytotoxicity test Toxicity 0.000 description 2
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 2
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 2
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 2
- 238000002386 leaching Methods 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 1
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 208000012641 Pigmentation disease Diseases 0.000 description 1
- 208000028990 Skin injury Diseases 0.000 description 1
- 206010072170 Skin wound Diseases 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000002146 bilateral effect Effects 0.000 description 1
- CDQSJQSWAWPGKG-UHFFFAOYSA-N butane-1,1-diol Chemical compound CCCC(O)O CDQSJQSWAWPGKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 239000008358 core component Substances 0.000 description 1
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000003628 erosive effect Effects 0.000 description 1
- 231100000321 erythema Toxicity 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 230000007794 irritation Effects 0.000 description 1
- 238000013532 laser treatment Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000019612 pigmentation Effects 0.000 description 1
- 230000004537 potential cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 238000011076 safety test Methods 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 208000017520 skin disease Diseases 0.000 description 1
- 230000037394 skin elasticity Effects 0.000 description 1
- 235000010226 sodium ethyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004402 sodium ethyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 235000010268 sodium methyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004290 sodium methyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- QYNMSPKSYXPZHG-UHFFFAOYSA-M sodium;4-ethoxycarbonylphenolate Chemical compound [Na+].CCOC(=O)C1=CC=C([O-])C=C1 QYNMSPKSYXPZHG-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- PESXGULMKCKJCC-UHFFFAOYSA-M sodium;4-methoxycarbonylphenolate Chemical compound [Na+].COC(=O)C1=CC=C([O-])C=C1 PESXGULMKCKJCC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 1
- 238000005491 wire drawing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L26/00—Chemical aspects of, or use of materials for, wound dressings or bandages in liquid, gel or powder form
- A61L26/0009—Chemical aspects of, or use of materials for, wound dressings or bandages in liquid, gel or powder form containing macromolecular materials
- A61L26/0028—Polypeptides; Proteins; Degradation products thereof
- A61L26/0033—Collagen
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L26/00—Chemical aspects of, or use of materials for, wound dressings or bandages in liquid, gel or powder form
- A61L26/0009—Chemical aspects of, or use of materials for, wound dressings or bandages in liquid, gel or powder form containing macromolecular materials
- A61L26/0023—Polysaccharides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L26/00—Chemical aspects of, or use of materials for, wound dressings or bandages in liquid, gel or powder form
- A61L26/0061—Use of materials characterised by their function or physical properties
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
本发明提供一种含重组Ⅲ型人源化胶原蛋白的修复水及其制备方法。该含重组Ⅲ型人源化胶原蛋白的修复水，由以下质量百分比的原料组成：0.08%~0.12%重组III型人源化胶原蛋白、0.13%~0.18%羟乙基纤维素、1.9%~2.1%丙二醇、1.9%~2.1%戊二醇、0.3%~0.4% PE9010和余量的纯化水。本发明所制含重组Ⅲ型人源化胶原蛋白的修复水，不但安全性良好，而且对皮肤浅表创面修复速度快，能够满足皮肤过敏、激光、光子术后创面愈合修复要求。
Description
技术领域
本发明涉及皮肤修复敷料领域，特别涉及一种含重组Ⅲ型人源化胶原蛋白的修复水及其制备方法。
背景技术
皮肤激光、光子术后，往往造成浅表皮肤损伤，对其创面进行修复，有助提高术后效果。
胶原蛋白是细胞外基质的主要组成成分，起支撑、稳定等作用。细胞外基质的数量和质量决定了皮肤的屏障功能。重组胶原蛋白和天然胶原蛋白一样其具有独特的三螺旋基本结构和交联成网状的高级结构，这就是胶原蛋白纤维。当皮肤角质层细胞受损时，胶原蛋白纤维不再牢固，出现断裂、拉丝、失去支撑稳定特性等情况，从而引起皮肤弹性降低、老化、干燥、屏障功能受损，产生色素沉着、炎症和衰老等皮肤疾病。
重组Ⅲ型人源化胶原蛋白作为核心成分的制备皮肤修复敷料，具有一定优势，但其修复速度不够理想，而且对皮肤存在一定刺激性。
发明内容
鉴于此，本发明提出一种含重组Ⅲ型人源化胶原蛋白的修复水及其制备方法，不但安全性良好，而且对皮肤浅表创面修复速度快。
本发明的技术方案是这样实现的：
一种含重组Ⅲ型人源化胶原蛋白的修复水，由以下质量百分比的原料组成：0.08%~0.12%重组III型人源化胶原蛋白、0.13%~0.18%羟乙基纤维素、1.9%~2.1%丙二醇、1.9%~2.1%戊二醇、0.3%~0.4% PE9010和余量的纯化水。
进一步的，所述含重组Ⅲ型人源化胶原蛋白的修复水由以下质量百分比的原料组成：0.1%重组III型人源化胶原蛋白、0.15%羟乙基纤维素、2%丙二醇、2%戊二醇、0.35%PE9010和余量的纯化水。
进一步的，所述重组Ⅲ型人源化胶原蛋白的分子量为50000~60000Da。更进一步的，所述重组Ⅲ型人源化胶原蛋白的分子量为58000~59000Da。
进一步的，所述羟乙基纤维素由羟乙基纤维素A和羟乙基纤维素B组成，所述羟乙基纤维素A的粘度为20000~30000cP，和所述羟乙基纤维素B的粘度为60000~80000cP，所述羟乙基纤维素A和羟乙基纤维素B的质量比为0.3~0.4：0.6~0.7。
本发明提供一种含重组Ⅲ型人源化胶原蛋白的修复水的制备方法，包括以下步骤：
（1）预处理：
称取配制水总质量5-6%的纯化水，溶解重组Ⅲ型人源化胶原蛋白，成均匀透明溶液，得备用1溶液；
用丙二醇、戊二醇预分散羟乙基纤维素，成均匀混悬液，得备用2溶液；
（2）溶液1的配制：称取配制水总质量的79-81%的纯化水，加入配液罐中，35~45r/min搅拌加热至80~90℃搅拌，加入备用2溶液，用配制水总质量的9-11%的纯化水冲洗称量桶，一并加入配液锅中，开启回流降温，温度降至55~65℃时，加入备用1溶液，称取配制水总质量剩余的纯化水用于冲洗备用1的容器，冲洗液加入配液锅中，继续搅拌，得无色透明溶液；
（3）中间体的配制：转速不变，开启回流降温至40~55℃时，加入称量好的PE9010，保温搅拌，制得目标修复水。
进一步的，所述制备方法包括以下步骤：
（1）预处理：
称取配制水总质量5-6%的纯化水，溶解重组Ⅲ型人源化胶原蛋白，成均匀透明溶液，得备用1溶液；
用丙二醇、戊二醇预分散羟乙基纤维素，成均匀混悬液，得备用2溶液；
（2）溶液1的配制：称取配制水总质量的79-81%的纯化水，加入配液罐中，35~45r/min搅拌加热至80~90℃搅拌20~25min，加入备用2溶液，用配制水总质量的9-11%的纯化水冲洗称量桶，一并加入配液锅中，开启回流降温，温度降至55~65℃时，加入备用1溶液，称取配制水总质量剩余的纯化水用于冲洗备用1的容器，冲洗液加入配液锅中，继续搅拌10~15min，得无色透明溶液；
（3）中间体的配制：转速不变，开启回流降温至40~55℃时，加入称量好的PE9010，保温搅拌10~15min，制得目标修复水。
更进一步的，所述制备方法包括以下步骤：
（1）预处理：称取配制水总质量5%的纯化水，溶解重组Ⅲ型人源化胶原蛋白，成均匀透明溶液，得备用1溶液；用丙二醇、戊二醇预分散羟乙基纤维素，成均匀混悬液，得备用2溶液；
（2）溶液1的配制：称取配制水总质量的80%的纯化水，加入配液罐中，40±5r/min搅拌加热至85±5℃搅拌20min，加入备用2溶液，用配制水总质量的10%的纯化水冲洗称量桶，一并加入配液锅中，开启回流降温，温度降至60℃±5℃时，加入备用1溶液，称取配制水总质量5%的纯化水用于冲洗备用1的容器，冲洗液加入配液锅中，继续搅拌10min，得无色透明溶液；
（3）中间体的配制：转速不变，开启回流降温至45℃±5℃时，加入称量好的PE9010，保温搅拌10min，制得目标修复水。
进一步的，先以750~850rpm中速分散1~2min，再以1400~1600rpm 高速分散8~12min，再以400~600rpm低速分散4~6min。
进一步的，中速分散后pH值控制在6.0~6.5。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
（1）本发明所制的含重组Ⅲ型人源化胶原蛋白的修复水，由重组Ⅲ型人源化胶原蛋白、羟乙基纤维素、丙二醇、戊二醇、PE9010和纯化水组成，优化配比，能明显加快浅表创面修复，适用于皮肤激光、光子术后等创面愈合修复。
（2）本发明所制的含重组Ⅲ型人源化胶原蛋白的修复水，对皮肤无刺激、无毒性、无致敏性，具有良好的生物安全性，能够满足皮肤过敏、激光、光子术后创面愈合修复要求。
（3）本发明以特定分子量的重组Ⅲ型人源化胶原蛋白为核心原料，结合羟乙基纤维素等，具有更加良好的成膜性，更好在皮肤表面形成保护膜，更好抵御外界细菌、致敏源的伤害，继而加快促进创面愈合，保护新生组织，提高创面防护效果。
（4）本发明采用特定粘度组合的羟乙基纤维素，结合中速分散-高速分散-低速分散的工艺，进一步提高体系的稳定性，同时进一步提高产品的成模性，有助提高创面愈合效果。
具体实施方式
为了更好理解本发明技术内容，下面提供具体实施例，对本发明做进一步的说明。
本发明实施例所用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
本发明实施例所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1-含重组Ⅲ型人源化胶原蛋白的修复水制备
配方：
表1配方组成
重组Ⅲ型人源化胶原蛋白的分子量为58000~59000Da；
羟乙基纤维素由羟乙基纤维素A（20000~30000cP）和羟乙基纤维素B（60000~80000cP）组成，两者质量比为0.3：0.7；
配液：
（1）预处理：称取配制水总质量5%的纯化水，溶解重组Ⅲ型人源化胶原蛋白，成均匀透明溶液，得备用1溶液。用丙二醇、戊二醇预分散羟乙基纤维素，先以800rpm中速分散1.5min，中速分散后pH值控制在6.0~6.5，再以1500rpm 高速分散10min，再以500rpm低速分散5min，制成均匀混悬液，得备用2溶液。
（2）溶液1的配制：称取配制水总质量的80%的纯化水，加入配液罐中，40±5r/min搅拌加热至85±5℃搅拌20min，加入备用2溶液，用剩余10%的纯化水冲洗称量桶，一并加入配液锅中，开启回流降温，温度降至60℃±5℃时，加入备用1溶液，称取配制水总质量5%的纯化水用于冲洗备用1的容器，冲洗液加入配液锅中，继续搅拌10min，得无色透明溶液。
（3）中间体的配制：转速不变，开启回流降温至45℃±5℃时，加入称量好的PE9010，保温搅拌10min，目视溶液为无色至微黄色液体，无异味，无可见异物，得中间体，检验合格后灌装、密封。
实施例2-含重组Ⅲ型人源化胶原蛋白的修复水制备
配方：
表2配方组成
重组Ⅲ型人源化胶原蛋白的分子量为58000~59000Da；
羟乙基纤维素由羟乙基纤维素A（20000~30000cP）和羟乙基纤维素B（60000~80000cP）组成，两者质量比为0.3：0.7；
配液工艺与实施例1一致。
实施例3-含重组Ⅲ型人源化胶原蛋白的修复水制备
配方：
表3 配方组成
重组Ⅲ型人源化胶原蛋白的分子量为58000~59000Da；
羟乙基纤维素由羟乙基纤维素A（20000~30000cP）和羟乙基纤维素B（60000~80000cP）组成，两者质量比为0.4：0.6；
配液工艺与实施例1一致。
实施例4-含重组Ⅲ型人源化胶原蛋白的修复水制备
配方与实施例1一致，与实施例1主要区别在于，用丙二醇、戊二醇预分散羟乙基纤维素，采用匀速分散，具体配液工艺：
（1）预处理：称取配制水总质量5%的纯化水，溶解重组Ⅲ型人源化胶原蛋白，成均匀透明溶液，得备用1溶液。用丙二醇、戊二醇预分散羟乙基纤维素，以1000rpm匀速分散20min，制成均匀混悬液，得备用2溶液。
（2）溶液1的配制：称取配制水总质量的80%的纯化水，加入配液罐中，40±5r/min搅拌加热至85±5℃搅拌20min，加入备用2溶液，用剩余10%的纯化水冲洗称量桶，一并加入配液锅中，开启回流降温，温度降至60℃±5℃时，加入备用1溶液，称取配制水总质量5%的纯化水用于冲洗备用1的容器，冲洗液加入配液锅中，继续搅拌10min，得无色透明溶液。
（3）中间体的配制：转速不变，开启回流降温至45℃±5℃时，加入称量好的PE9010，保温搅拌10min，目视溶液为无色至微黄色液体，无异味，无可见异物，得中间体，检验合格后灌装、密封。
对比例1
对比例1与实施例1主要区别在于，配方中重组Ⅲ型人源化胶原蛋白的分子量为65000~70000Da。其他原料以及配液工艺与实施例1一致。
对比例2
对比例2与实施例1主要区别在于，配方中羟乙基纤维素中替换为卡波姆。其他原料以及配液工艺与实施例1一致。具体配方如下：
表4配方组成
试验例
1激光术后皮肤创面愈合试验
1.1模型制备：取小鼠于背部剃毛，均为雌性，将脊柱两侧左右对称设计成长轴与脊柱平行的剃毛区域（1.5cm×1.5cm）。给予CO2点阵激光照射，CO2点阵激光能量10mJ/cm2，矩形光斑10mm×20mm，扫描间距0.3mm，覆盖率25%，扫描模式：顺序扫描，均匀照射两遍不重复。点阵激光照射后第1天，小鼠皮肤表面发红；第2天皮肤发红，轻度水肿；第3天炎症反应最为明显，表现为红斑、糜烂渗出。
1.2分组与给药：将激光治疗建模成功后小鼠随机分组，分别为空白对照组、阳性对照组和试验组1-6组，每组10只。其中，试验组1-6分别对应使用实施例1-4、对比例1-2所制含重组Ⅲ型人源化胶原蛋白的修复水，浸润纱布后外敷创面。阳性对照组：使用市售医用重组Ⅲ型人源化胶原蛋白修复液，由重组Ⅲ型人源化胶原蛋白、注射用水、卡波姆、甘油、丁二醇、对羟基苯甲酸甲酯钠、对羟基苯甲酸乙酯钠构成。每天用药1次。空白对照组：直接用干纱布包扎。每次用药后记录皮肤形态并测量创面大小，计算术后7天的创面面积，并计算创面愈合速度。
创面愈合速度提高百分比=（试验组创面愈合速度-空白对照组创面愈合速度）/空白对照组创面愈合速度*100%。
结果如下表5：
| 创面愈合速度（cm2/d） | 创面愈合速度提高百分比 | |
| 空白对照组 | 0.48±0.11 | —— |
| 阳性对照组 | 0.79±0.10 | 64.6% |
| 实施例1 | 0.95±0.05 | 97.9% |
| 实施例2 | 0.92±0.04 | 91.7% |
| 实施例3 | 0.94±0.06 | 95.8% |
| 实施例4 | 0.90±0.05 | 87.5% |
| 对比例1 | 0.89±0.08 | 85.4% |
| 对比例2 | 0.87±0.07 | 81.3% |
点阵激光术后，使用实施例1-4、对比例1-2所制含重组Ⅲ型人源化胶原蛋白的修复水修复7天后，小鼠创面完全愈合。与空白对照组比较，试验组1-6的平均创面愈合速度明显提高，有显著性差异（P<0.05）；与阳性对照组比较，试验组1-4平均创面愈合速度明显提高，有显著性差异（P<0.05）。综上，本发明所制的含重组Ⅲ型人源化胶原蛋白的修复水能明显加快激光术后创面的修复。
2安全试验
2.1体外细胞毒性试验
检测样品：实施例1-4所制含重组Ⅲ型人源化胶原蛋白的修复水
检测项目：体外细胞毒性试验
检测依据： GB/T 16886.5-2017
检测结论：
该试验是为了评价试验样品的潜在细胞毒性。将试验样品浸提液与生长旺盛的L-929细胞培养(37℃，5%CO2) 24小时后，观察细胞形态，用MTT法检测结果。结果显示100%样品浸提液的存活率为88.7%，对照组结果显示本次试验结果有效。
在本试验条件下，试验样品的浸提液对L-929细胞无潜在毒性影响。
2.2皮肤刺激试验
检测样品：实施例1-4所制含重组Ⅲ型人源化胶原蛋白的修复水
检测项目：皮肤刺激试验 重复接触试验
检测依据：GB/T 16886.10-2017
检测结论：
试验样品与试验系统直接接触，观察其潜在的皮肤刺激反应。
将医用纱布敷料裁剪成适宜大小，分别浸透0.5ml试验样品和对照样品。直接敷贴在动物背部相应区域，用半封闭性绷带覆盖固定4h，去除敷贴后1h、24h、48h和72h，观察并记录皮肤红斑和水肿等反应情况。首次接触完毕后进行第二次、第三次敷贴。末次接触后，分别在去除敷贴后1h、24h、48h和72h，观察并记录皮肤红斑和水肿等反应情况。
在本次试验条件下，试验样品对兔皮肤累积刺激指数为0，试验样品未见引起皮肤刺激反应。
2.3皮肤致敏试验
检测样品：实施例1-4所制含重组Ⅲ型人源化胶原蛋白的修复水
检测项目：皮肤致敏试验一封闭贴敷法
检测依据：GB/T 16886.10-2017
检测结论：
试验样品采用豚鼠封闭贴敷法致敏试验，评价其潜在的皮肤致敏反应。
将医用纱布敷料裁剪成适宜大小，分别浸透试验样品和对照样品。封闭包扎固定于豚鼠左上背皮肤，试图诱发致敏。恢复期内，采用试验样品对试验组和对照组的所有动物进行激发。
在本次试验条件下，试验样品未引起皮肤致敏反应，致敏阳性率为0%。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (8)
1.一种含重组Ⅲ型人源化胶原蛋白的修复水，其特征在于，由以下质量百分比的原料组成：0.08%~0.12%重组III型人源化胶原蛋白、0.13%~0.18%羟乙基纤维素、1.9%~2.1%丙二醇、1.9%~2.1%戊二醇、0.3%~0.4% PE9010和余量的纯化水；所述重组Ⅲ型人源化胶原蛋白的分子量为50000~60000Da；所述羟乙基纤维素由羟乙基纤维素A和羟乙基纤维素B组成，所述羟乙基纤维素A的粘度为20000~30000cP，和所述羟乙基纤维素B的粘度为60000~80000cP，所述羟乙基纤维素A和羟乙基纤维素B的质量比为0.3~0.4：0.6~0.7。
2.根据权利要求1所述的含重组Ⅲ型人源化胶原蛋白的修复水，其特征在于，由以下质量百分比的原料组成：0.1%重组III型人源化胶原蛋白、0.15%羟乙基纤维素、2%丙二醇、2%戊二醇、0.35% PE9010和余量的纯化水。
3.根据权利要求1所述的含重组Ⅲ型人源化胶原蛋白的修复水，其特征在于，所述重组Ⅲ型人源化胶原蛋白的分子量为58000~59000Da。
4.根据权利要求1-3任一项所述的含重组Ⅲ型人源化胶原蛋白的修复水的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）预处理：
称取配制水总质量5-6%的纯化水，溶解重组Ⅲ型人源化胶原蛋白，成均匀透明溶液，得备用1溶液；
用丙二醇、戊二醇预分散羟乙基纤维素，成均匀混悬液，得备用2溶液；
（2）溶液1的配制：称取配制水总质量的79-81%的纯化水，加入配液罐中，35~45r/min搅拌加热至80~90℃搅拌，加入备用2溶液，用配制水总质量的9-11%的纯化水冲洗称量桶，一并加入配液锅中，开启回流降温，温度降至55~65℃时，加入备用1溶液，称取配制水总质量剩余的纯化水用于冲洗备用1的容器，冲洗液加入配液锅中，继续搅拌，得无色透明溶液；
（3）中间体的配制：转速不变，开启回流降温至40~55℃时，加入称量好的PE9010，保温搅拌，制得目标修复水。
5.根据权利要求4所述的含重组Ⅲ型人源化胶原蛋白的修复水的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）预处理：
称取配制水总质量5-6%的纯化水，溶解重组Ⅲ型人源化胶原蛋白，成均匀透明溶液，得备用1溶液；
用丙二醇、戊二醇预分散羟乙基纤维素，成均匀混悬液，得备用2溶液；
（2）溶液1的配制：称取配制水总质量的79-81%的纯化水，加入配液罐中，35~45r/min搅拌加热至80~90℃搅拌20~25min，加入备用2溶液，用配制水总质量的9-11%的纯化水冲洗称量桶，一并加入配液锅中，开启回流降温，温度降至55~65℃时，加入备用1溶液，称取配制水总质量剩余的纯化水用于冲洗备用1的容器，冲洗液加入配液锅中，继续搅拌10~15min，得无色透明溶液；
（3）中间体的配制：转速不变，开启回流降温至40~55℃时，加入称量好的PE9010，保温搅拌10~15min，制得目标修复水。
6.根据权利要求5所述的含重组Ⅲ型人源化胶原蛋白的修复水的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）预处理：称取配制水总质量5%的纯化水，溶解重组Ⅲ型人源化胶原蛋白，成均匀透明溶液，得备用1溶液；用丙二醇、戊二醇预分散羟乙基纤维素，成均匀混悬液，得备用2溶液；
（2）溶液1的配制：称取配制水总质量的80%的纯化水，加入配液罐中，40±5r/min搅拌加热至85±5℃搅拌20min，加入备用2溶液，用配制水总质量的10%的纯化水冲洗称量桶，一并加入配液锅中，开启回流降温，温度降至60℃±5℃时，加入备用1溶液，称取配制水总质量5%的纯化水用于冲洗备用1的容器，冲洗液加入配液锅中，继续搅拌10min，得无色透明溶液；
（3）中间体的配制：转速不变，开启回流降温至45℃±5℃时，加入称量好的PE9010，保温搅拌10min，制得目标修复水。
7.根据权利要求4-6任一项所述的含重组Ⅲ型人源化胶原蛋白的修复水的制备方法，其特征在于，先以750~850rpm中速分散1~2min，再以1400~1600rpm 高速分散8~12min，再以400~600rpm低速分散4~6min。
8.根据权利要求7所述的含重组Ⅲ型人源化胶原蛋白的修复水的制备方法，其特征在于，中速分散后pH值控制在6.0~6.5。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202310624205.6A CN116920164B (zh) | 2023-05-30 | 2023-05-30 | 一种含重组ⅲ型人源化胶原蛋白的修复水及其制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202310624205.6A CN116920164B (zh) | 2023-05-30 | 2023-05-30 | 一种含重组ⅲ型人源化胶原蛋白的修复水及其制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN116920164A CN116920164A (zh) | 2023-10-24 |
| CN116920164B true CN116920164B (zh) | 2024-03-08 |
Family
ID=88383342
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202310624205.6A Active CN116920164B (zh) | 2023-05-30 | 2023-05-30 | 一种含重组ⅲ型人源化胶原蛋白的修复水及其制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN116920164B (zh) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1874740A (zh) * | 2003-10-10 | 2006-12-06 | 奥来克西公司 | 经皮高分子量和低分子量化合物 |
| CN107714504A (zh) * | 2017-08-01 | 2018-02-23 | 杭州惠博士健康产业有限公司 | 一种同人源胶原蛋白组合物及其在化妆品中应用 |
| CN115804864A (zh) * | 2023-01-29 | 2023-03-17 | 南京天纵易康生物科技股份有限公司 | 一种协同促修复热稳定重组ⅲ型人源化胶原蛋白凝胶及其制备方法 |
-
2023
- 2023-05-30 CN CN202310624205.6A patent/CN116920164B/zh active Active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1874740A (zh) * | 2003-10-10 | 2006-12-06 | 奥来克西公司 | 经皮高分子量和低分子量化合物 |
| CN107714504A (zh) * | 2017-08-01 | 2018-02-23 | 杭州惠博士健康产业有限公司 | 一种同人源胶原蛋白组合物及其在化妆品中应用 |
| CN115804864A (zh) * | 2023-01-29 | 2023-03-17 | 南京天纵易康生物科技股份有限公司 | 一种协同促修复热稳定重组ⅲ型人源化胶原蛋白凝胶及其制备方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN116920164A (zh) | 2023-10-24 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Jiang et al. | Salt‐assisted toughening of protein hydrogel with controlled degradation for bone regeneration | |
| CA1261760A (en) | Implant tissue | |
| CN106902381A (zh) | 重组人源胶原蛋白原液、敷料以及它们的制备方法 | |
| CN115337392B (zh) | 一种重组iii型人源化胶原蛋白凝胶及其制备方法、应用 | |
| CN106309150B (zh) | 一种医用胶原蛋白敷料及其制备方法和应用 | |
| CN104055795A (zh) | 一种可注射植入剂及其制备方法 | |
| CN115804864A (zh) | 一种协同促修复热稳定重组ⅲ型人源化胶原蛋白凝胶及其制备方法 | |
| CN103159967A (zh) | 一种具有自抗炎功能的胶原基海绵伤口敷料的制备方法 | |
| CN116920164B (zh) | 一种含重组ⅲ型人源化胶原蛋白的修复水及其制备方法 | |
| CN107320419A (zh) | 一种温和修复尿素霜 | |
| CN109195642B (zh) | 包含核酸、壳聚糖和透明质酸的组织增强用填充组合物及其制备方法 | |
| CN108977488B (zh) | 皮肤密集修复用弹性蛋白及其制备方法 | |
| KR102583416B1 (ko) | 저분자 콜라겐, 엘라스틴 및 글리코사미노글리칸을 포함하는 화장료 조성물 | |
| CN112957275A (zh) | 一种自体胶原赋活方法 | |
| CN100402097C (zh) | 琼脂/胶原皮肤创伤修复敷料及其制备方法和应用 | |
| Baikulov et al. | RESEARCH RESULTS OF REPARATIVE REGENERATION OF CHITOSAN DERIVATIVES IN EXPERIMENTAL THERMAL BURNS | |
| CN115350321B (zh) | 水凝胶敷料及其制备方法 | |
| CN107412867A (zh) | 一种异种脱细胞真皮基质的制备方法 | |
| CN116617278A (zh) | 一种医用海藻糖生物膜及其制备方法 | |
| CN109820801A (zh) | 一种温和修复型美白面膜及其制备工艺 | |
| CN108853369B (zh) | 天然植物抗菌液PAMs水凝胶贴剂的制备方法及应用 | |
| CN109701089B (zh) | 一种可降解组织再生屏障膜及其制备方法 | |
| CN112760351A (zh) | 一种鱼皮胶原蛋白的提取方法及应用 | |
| CN1363398A (zh) | 以壳多糖或其衍生物为基质网架的复层人工皮肤 | |
| CN116942562B (zh) | 一种用于高热状态的皮肤屏障受损的皮肤修护水及其制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| CB02 | Change of applicant information |
Address after: No. 3701, 37th Floor, Building 2, No. 666, Middle Tianfu Avenue, Chengdu High-tech Zone, China (Sichuan) Pilot Free Trade Zone, Chengdu, Sichuan 610000 Applicant after: Chunyan Biotechnology Co.,Ltd. Address before: 37th floor, building 2, No. 666, middle section of Tianfu Avenue, Chengdu hi tech Zone, China (Sichuan) pilot Free Trade Zone, Chengdu, Sichuan 610000 Applicant before: Chayan Biotechnology Co.,Ltd. |
|
| CB02 | Change of applicant information | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |