CN116908077B - 一种流式细胞仪及其控制方法 - Google Patents

Abstract

本申请公开了一种流式细胞仪及其控制方法，涉及细胞分析仪技术领域，本申请的流式细胞仪，包括至少两个激光光源以及设置于激光光源出光侧的合束镜，每个激光光源出射不同波长的激光束，合束镜的出光侧设置有流动室，流动室的前散光路上设置前散检测组件，前散检测组件包括对应每个激光光源的第一检测器，用于检测各个激光光源出射的激光束经过待测样品散射后的前散光，流动室的侧散光路上设置有侧散光检测器和荧光检测器，侧散光检测器用于根据前散光的信号检测各个激光光源经过待测样品散射后的侧散光，荧光检测器用于根据前散光的信号检测每个激光光源经过待测样品散射后的荧光。本申请提供的流式细胞仪，能够提高流式细胞仪检测的准确性。

Description

一种流式细胞仪及其控制方法

技术领域

本申请涉及细胞分析仪技术领域，具体而言，涉及一种流式细胞仪及其控制方法。

背景技术

流式细胞仪(FlowCytometer，FCM)是一种常用的单细胞、多参数、高通量的检测仪器。通过鞘液将样本压缩聚焦在一条流线上，使得细胞排队逐个通过激光检测区域。探测器接收细胞发射的散色光信号和荧光信号来对细胞的物理、化学、生物特性进行分析。在空间激发的多激光流式细胞仪中，相邻两个激光的光斑之间的距离大约为100～200微米之间。粒子进入测试区，采集到第一个激光器的有效前散信号后，识别为有效粒子，将前散信号的宽度定此粒子的信号宽度，用于提取此粒子被第一个激光器激发的荧光信号数据和侧散数据，根据固定的信号延时和此粒子的信号宽度提取此粒子被后续激光器激发的荧光信号数据。结合同一粒子的多激光激发的荧光信号数据和第一激光器的前散和侧散信号数据，进行有效的数据分析，从而获得检测结果。

但是鞘液瓶和废液瓶内液体液位变化以及过滤器的使用都会造成的液流流速变化，会引起信号延时的变化，造成提取的后续激光器激发的荧光信号数据不准确，而且液流流速变化过大，会造成流动池中样本流截面尺寸波动，造成检测信号的变异系数（CV）变大。不同激光束的聚焦光斑尺寸不一致，即同一粒子被不同激光器激发的荧光信号的信号宽度不一致，以第一激光器的前散信号宽度提取后续激光器激发的荧光信号数据，也会造成提取的荧光信号数据不准确,从而无法进行有效的数据分析，造成检测结果不准确。

发明内容

本申请的目的在于提供一种流式细胞仪及其控制方法，能够提高流式细胞仪检测的准确性。

本申请的实施例一方面提供了一种流式细胞仪，包括至少两个激光光源以及设置于激光光源出光侧的合束镜，每个激光光源出射不同波长的激光束，合束镜的出光侧设置有流动室，流动室内流通含有待测样品的检测液，流动室的前散光路上设置前散检测组件，前散检测组件包括对应每个激光光源的第一检测器，用于检测各个激光光源出射的激光束经过待测样品散射后的前散光，流动室的侧散光路上设置有侧散光检测器和荧光检测器，侧散光检测器用于根据前散光的信号检测各个激光光源经过待测样品散射后的侧散光，荧光检测器用于根据前散光的信号检测每个激光光源经过待测样品散射后的荧光。

作为一种可实施的方式，流式细胞仪还包括分别与第一检测器连接的控制器，以及与流动室连接的第一蠕动泵和第二蠕动泵，第一蠕动泵用于向流动室注入鞘液，第二蠕动泵用于向流动室注入待测样品，以在流动室内混合形成检测液，控制器根据相邻两个第一检测器的信号控制第一蠕动泵和第二蠕动泵以调节检测液的流速。

作为一种可实施的方式，前散检测组件还包括第一分光器，第一分光器设置于流动室与第一检测器之间，用于将各个激光光源的前散光分离，第一检测器分别设置于分光器的各个出光光路上。

作为一种可实施的方式，流动室与第一分光器之间依次设置有会聚透镜和光阑，光阑用于过滤透射待测样品的中心激光束和大角度散射光。

作为一种可实施的方式，流式细胞仪包括两组侧散光检测器和荧光检测器，且分别位于流动室的两侧，用于分别对两侧的侧散光和荧光进行检测。

作为一种可实施的方式，流式细胞仪还包括第二分光器，第二分光器设置于流动室与侧散光检测器和荧光检测器之间，用于将侧散光和荧光分离，侧散光检测器和荧光检测器分别设置于第二分光器的出光光路上。

作为一种可实施的方式，第二分光器为二向色镜，二向色镜与流动室之间还设置有准直镜，用于对侧散光和荧光进行准直。

作为一种可实施的方式，流式细胞仪包括两个激光光源，合束镜为二向色镜，两个激光光源出射的激光束分别入射二向色镜的两侧面，并由同一侧面出射。

作为一种可实施的方式，合束镜与流动室之间还设置有整形模块，用于对合束镜出射的激光束进行整形后出射。

本申请的实施例另一方面提供了一种流式细胞仪的控制方法，包括：控制第一激光光源和第二激光源开启向流动室出射第一激光束和第二激光束，第一激光束和第二激光束波长不同且在流动室内投射的光斑间隔，并控制第一蠕动泵和第二蠕动泵以使检测液由流动室流过；检测液中的待测样品流动至第一激光束的光斑内，第一激光束经过待测样品散射后形成第一前散光、第一侧散光以及第一荧光；对应第一激光光源的第一检测器、侧散光检测器和荧光检测器分别接收第一前散光、第一侧散光以及第一荧光，并获取第一前散光的光信号宽度；根据第一前散光的光信号宽度，提取第一侧散光和第一荧光信号中的有效光信号；检测液中的待测样品流动至第二激光束的光斑内，第二激光束经过待测样品散射后形成第二前散光、第二侧散光以及第二荧光；对应第二激光光源的第一检测器、侧散光检测器和荧光检测器分别接收第二前散光、第二侧散光以及第二荧光，并获取第二前散光的光信号宽度；根据第二前散光的信号宽度，提取第二侧散光和第二荧光信号中的有效光信号；根据第一侧散光、第一荧光以及第二侧散光和第二荧光的有效光信号获取待测样品的结构。

作为一种可实施的方式，在根据第二前散光的信号宽度，提取第二侧散光和第二荧光信号中的有效光信号后，流式细胞仪控制方法还包括：根据第一前散光和第二前散光的信号宽度获取第一前散光和第二前散光的信号波峰；根据第一前散光信号和第二前散光的信号波峰的时间确定时间差；根据时间差计算流动室内待测样品的实时流速；根据实时流速控制第一蠕动泵和第二蠕动泵的转速以调节待测样品的流动速度。

本申请实施例的有益效果包括：

本申请提供的流式细胞仪，包括至少两个激光光源以及设置于激光光源出光侧的合束镜，每个激光光源出射不同波长的激光束，合束镜的出光侧设置有流动室，流动室内流通含有待测样品的检测液，流动室的前散光路上设置前散检测组件，前散检测组件包括对应每个激光光源的第一检测器，用于接收各个激光光源出射的激光束经过待测样品散射后的前散光，本申请对应每一个激光光源设置第一检测器，第一检测器分别接收前散光，流动室的侧散光路上设置有侧散光检测器和荧光检测器，侧散光检测器用于根据前散光的信号接收各个激光光源经过待测样品散射后的侧散光，荧光检测器用于根据前散光的信号接收每个激光光源经过待测样品散射后的荧光。根据每一激光光源对应的前散光的信号宽度获取每一个激光光源对应的侧散光和荧光，使得侧散光和荧光能够准确的反应细胞流过每个激光光源时的状态，消除固定信号宽度对检测精度的影响，从而提高检测精度。

附图说明

为了更清楚地说明本申请实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本申请的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。

图1为本申请实施例提供的一种流式细胞仪的光路示意图之一；

图2为本申请实施例提供的一种流式细胞仪的光路示意图之二；

图3为本申请实施例提供的一种流式细胞仪的光路示意图之三；

图4为本申请实施例提供的一种侧散光和荧光检测装置的结构示意图；

图5为本申请实施例提供的流式细胞仪的控制方法流程图。

图标：11-激光光源；12-合束镜；13-流动室；14-待测样品；15-前散检测组件；151-第一检测器；152-第一分光器；153-会聚透镜；154-光阑；16-侧散光检测器；161-第二分光器；163-准直镜；164-整形模块；17-荧光检测器；181-第一蠕动泵；182-第二蠕动泵；183-鞘液瓶；184-过滤器；185-样品管；186-上样针管；187-回流块；188-废液瓶。

具体实施方式

为使本申请实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本申请实施例中的附图，对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本申请一部分实施例，而不是全部的实施例。通常在此处附图中描述和示出的本申请实施例的组件可以以各种不同的配置来布置和设计。

因此，以下对在附图中提供的本申请的实施例的详细描述并非旨在限制要求保护的本申请的范围，而是仅仅表示本申请的选定实施例。基于本申请中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本申请保护的范围。

应注意到：相似的标号和字母在下面的附图中表示类似项，因此，一旦某一项在一个附图中被定义，则在随后的附图中不需要对其进行进一步定义和解释。

在本申请的描述中，需要说明的是，术语“中心”、“竖直”、“水平”、“内”、“外”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，或者是该申请产品使用时惯常摆放的方位或位置关系，仅是为了便于描述本申请和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本申请的限制。此外，术语“第一”、“第二”、“第三”等仅用于区分描述，而不能理解为指示或暗示相对重要性。

流式细胞仪具有分析和分选细胞的功能，当流式细胞仪包括多个出射不同波长激光束的激光光源时，能够提高分析和分选的精确性。多个激光光源采用待测样品通过第一个激光光源的时间作为固定信号宽度进行分析，但是，待测样品的流速通常会有一些波动，使得检测结果不够精确。

本申请实施例提供了一种流式细胞仪，如图1和图2所示，包括至少两个激光光源11以及设置于激光光源11出光侧的合束镜12，每个激光光源11出射不同波长的激光束，合束镜12的出光侧设置有流动室13，流动室13内流通含有待测样品14的检测液，流动室13的前散光路上设置前散检测组件15，前散检测组件15包括对应每个激光光源11的第一检测器151，用于接收各个激光光源11出射的激光束经过待测样品14散射后的前散光，流动室13的侧散光路上设置有侧散光检测器16和荧光检测器17，侧散光检测器16用于根据前散光的信号接收各个激光光源11经过待测样品14散射后的侧散光，荧光检测器17用于根据前散光的信号接收每个激光光源11经过待测样品14散射后的荧光。

本申请实施例的流式细胞仪工作时，多个激光光源11朝向流动室13内发射激光束，多个激光光源11在流动室13内形成的光斑相互分离，如图4所示，鞘液在第一蠕动泵181的作用下由鞘液瓶183流动至回流块187中，待测样品14在第二蠕动泵182的作用下由样品管185通过上样针管186进入回流块187中，鞘液和待测样品14汇流成层流，并基于水力聚焦原理，使待测样品14被鞘液包裹居中，流过流动池，流入废液瓶188。当待测样品14中的一个细胞流动至第一个激光光源11的光斑内时，第一个激光光源11出射的激光束经过细胞的散射形成第一前散光、第一侧散光以及第一荧光，对应第一个激光光源11的第一检测器151接收到第一前散光，控制器根据第一检测器151的检测结果，确定为有效细胞，并将第一前散光形成的电信号的信号宽度作为此有效细胞的信号宽度，与此同时，侧散光检测器16和荧光检测器17分别接受侧散光和荧光，并将侧散光和荧光转换为电信号，控制器根据有效细胞的信号宽度获侧散光和荧光的有效信号，并根据侧散光和荧光的有效信号确定有效细胞的在第一个激光光源11下的各个参数。当有效细胞继续流动至第二个激光光源11的光斑内时，第二个激光光源11出射的激光束经过有效细胞的散射形成第二前散光、第二侧散光以及第二荧光，对应第二个激光光源11的第一检测器151接收到第二前散光，控制器根据第一检测器151的检测结果，确定为有效细胞，并将第二前散光形成的电信号的信号宽度作为此有效细胞的信号宽度，与此同时，侧散光检测器16和荧光检测器17分别接受侧散光和荧光，并将侧散光和荧光转换为电信号，控制器根据有效细胞的信号宽度获取侧散光和荧光的有效信号，并根据侧散光和荧光的有效信号确定有效细胞的在第二个激光光源下的各个参数，依次类推，确定有效细胞在多个激光光源11的各个参数，并根据在每个激光光源11下的各个参数确定待测样品14的待测数据，实现对待测样品14的精确检测。

由流式细胞仪的工作过程可知，本申请实施例中在每个激光光源11下，侧散光和荧光的获取均采用对应的激光光源11的前散光的信号宽度进行，从而避免了固定信号宽度对检测精度的影响，提高检测精度。

另外，激光光源11的具体个数本申请实施例不做具体限定，本领域技术人员可以根据实际情况进行设定，示例的，如图1所示的两个激光光源11，或者如图3所示的三个激光光源11，或者本领域技术人员可以根据实际情况进行设置。

本申请提供的流式细胞仪，对应每一个激光光源11设置第一检测器151，第一检测器151分别接收各个激光光源11对应的前散光，根据每一激光光源11对应的前散光的信号宽度获取每一个激光光源11对应的侧散光和荧光，使得侧散光和荧光能够准确的反应细胞流过每个激光光源11时的状态，消除固定信号宽度对检测精度的影响，从而提高检测精度。

可选的，如图3所示，流式细胞仪还包括分别与第一检测器151连接的控制器，以及与流动室13连接的第一蠕动泵181和第二蠕动泵182，第一蠕动泵181用于向流动室13注入鞘液，第二蠕动泵182用于向流动室13注入待测样品14，以在流动室13内混合形成检测液，控制器根据相邻两个第一检测器151的信号控制第一蠕动泵181和第二蠕动泵182以调节检测液的流速。

由上述可知，多个激光光源11在流动室13内形成的光斑相互分离，当相邻两个光斑对应的激光光源11形成的前散光的时间差即为待测样品14由第一光斑位置流动至第二光斑位置的时间差，为了使得待测样品14稳定流动，本申请实施例，根据相邻两个第一检测器151的电信号的波峰中心的时间差来控制第一蠕动泵181和第二蠕动泵182以调节检测液的流速，具体的，当相邻两个第一检测器151的电信号的波峰中心的时间差在预设阈值范围内时，则不需要调整第一蠕动泵181和第二蠕动泵182的转速；当相邻两个第一检测器151的电信号的波峰中心的时间差超出预设阈值范围内时，则根据两者之间的差值调整第一蠕动泵181和第二蠕动泵182的转速，从而调节检测液的流速，实现待测样品14稳定的流动。

本申请实施例的一种可实现的方式中，如图1和图2所示，前散检测组件15还包括第一分光器152，第一分光器152设置于流动室13与第一检测器151之间，用于将各个激光光源11的前散光分离，第一检测器151分别设置于分光器的各个出光光路上。

为了避免各个激光光源11形成的前散光之间相互干扰，本申请实施例的前散检测组件15还包括第一分光器152，第一分光器152将各个激光光源11形成的前散光分离，避免了各个激光光源11形成的前散光之间相互干扰。

其中，第一分光器152的具体结构本申请实施例不做限制，只要能够将不同波长的前散光分离即可，示例的，本申请实施例采用二向色镜，当激光光源11包括两个时，对应第一检测器151包括两个，两个前散光由二向色镜的一侧面入射，并由两个侧面出射，使得两个前散光分离。当激光光源11包括多于两个时，对应第一检测器151包括多个，第一分光器152可以设置为多个二向色镜，如图2所示，其中一个前散光直接穿透所有的二向色镜，其余前散光透射前面的二向色镜并在对应的二向色镜处反射出射。

可选的，流动室13与第一分光器152之间依次设置有会聚透镜153和光阑154，光阑154用于过滤透射待测样品14的中心激光束和大角度散射光。

为了提高检测精度，在流动室13与第一分光器152之间依次设置有会聚透镜153和光阑154，其中会聚透镜153用于收集前散光，使得更多的前散光进入第一检测器151，光阑154用于过滤透射待测样品14的中心激光束和大角度散射光，用于避免透射过待测样品14的激光束和大角度散射光影响检测的精确性。

本申请实施例的一种可实现的方式中，如图3所示，流式细胞仪包括两组侧散光检测器16和荧光检测器17，且分别位于流动室13的两侧，用于分别对两侧的侧散光和荧光进行检测。

两组侧散光检测器16和荧光检测器17分别设置流动室13的两侧，其中一组侧散光检测器16和荧光检测器17用于检测一个激光光源11形成的侧散光和荧光，另一组侧散光检测器16和荧光检测器17用于检测另一个激光光源11形成的侧散光和荧光，能够充分利用流动室13两侧的空间，使得流式细胞仪的布局更加合理，另外，还能够避免一个激光光源11形成的侧散光和荧光对另一个激光光源11形成的侧散光和荧光的影响。

需要说明的是，一个侧散光检测器16和一个荧光检测器17作为一组，用于接收一个激光光源11形成的侧散光和荧光。还需要说明的是，为了更清楚的展示两组侧散光检测器16和荧光检测器17，图3仅仅示例了两组侧散光检测器16和荧光检测器17，在实际应用中，图3设置于图1或者图2中，形成流式细胞仪的光路。

可选的，如图1和图2所示，流式细胞仪还包括第二分光器161，第二分光器161设置于流动室13与侧散光检测器16和荧光检测器17之间，用于将侧散光和荧光分离，侧散光检测器16和荧光检测器17分别设置于第二分光器161的出光光路上。

为了避免侧散光和荧光之间的相互干扰，在流动室13与侧散光检测器16和荧光检测器17之间设置第二分光器161，第二分光器161将侧散光和荧光分离，侧散光检测器16和荧光检测器17分别设置于第二分光器161的出光光路上，从而避免侧散光和荧光之间的相互干扰。

本申请实施例的一种可实现的方式中，如图1、图2和图3所示，第二分光器161为二向色镜，二向色镜与流动室13之间还设置有准直镜163，用于对侧散光和荧光进行准直。

激光光源11照射至待测样品14上时，向前形成前散光，向两侧形成侧散光，另外，激光光束能够激发待测样品14的荧光物质，形成荧光，荧光与激光光束的波长不同，侧散光与激光光束的波长相同，因此荧光和侧散光的波长不同，采用二向色镜能够将不同波长的光束分离，实现侧散光和荧光的分离。

侧散光个荧光出射后具有较大的发散角，为了增多进入侧散光检测器16和荧光检测器17的光束，本申请实施例在二向色镜与流动室13之间还设置有准直镜163，用于对侧散光和荧光进行准直收拢，从而增多进入侧散光检测器16和荧光检测器17的光束。

可选的，如图1所示，流式细胞仪包括两个激光光源11，合束镜12为二向色镜，两个激光光源11出射的激光束分别入射二向色镜的两侧面，并由同一侧面出射。

激光光源11越多，对待测样品14检测的次数越多，得到的检测结果越精确，但同时会使得流式细胞仪的零部件增多、计算量增大、占用体积增大。本申请实施例将激光光源11设置为两个，能够在计算精度较大的情况下减少流式细胞仪的零部件的个数、减小计算量。

当激光光源11包括两个时，如图1所示，合束镜12为二向色镜，两个激光光源11出射的激光束分别入射二向色镜的两侧面，并由同一侧面出射。

当然，当激光光源11包括多于两个时，合束镜12可以设置为多个二向色镜，如图2所示，其中一个激光光源11直接穿透所有的二向色镜，其余激光光源11在对应的二向色镜处反射并透射剩余的二向色镜。

本申请实施例的一种可实现的方式中，如图1和图2所示，合束镜12与流动室13之间还设置有整形模块164，用于对合束镜12出射的激光束进行整形后出射。

为了避免杂散光对检测精度的影响，在合束镜12与流动室13之间还设置有整形模块164，整形模块164对激光束进行整形并将整形后的激光束入射流动室13，与待测样品14接触。

另外，对于本申请中的第一检测器151、侧散光检测器16以及荧光检测器17的具体结构本申请实施例不做限制，只要能够将光信号转换为电信号即可，示例的，可以是PD、APD、PMT、SiPM、CMOS、CCD。

本申请实施例还公开了一种流式细胞仪的控制方法，如图5所示，包括：

S10：控制第一激光光源和第二激光源开启向流动室13出射第一激光束和第二激光束，第一激光束和第二激光束波长不同且在流动室13内投射的光斑间隔，并控制第一蠕动泵181和第二蠕动泵182以使检测液由流动室13流过；

如图3所示，鞘液在第一蠕动泵181的作用下由鞘液瓶183流动至回流块187中，待测样品14在第二蠕动泵182的作用下由样品管185通过上样针管186进入回流块187中，鞘液和待测样品14汇流成层流，并基于水力聚焦原理，使待测样品14被鞘液包裹居中，流过流动池，流入废液瓶188。为了提高鞘液的纯净度，可以在第一蠕动泵181与回流块187之间设置过滤器184。

S20：检测液中的待测样品14流动至第一激光束的光斑内，第一激光束经过待测样品14散射后形成第一前散光、第一侧散光以及第一荧光；

S30：对应第一激光光源的第一检测器151、侧散光检测器16和荧光检测器17分别接收第一前散光、第一侧散光以及第一荧光的光信号，并获取第一前散光的光信号宽度；

对应第一激光光源的第一检测器151接收到第一前散光，控制器根据第一检测器151的检测结果，确定为有效细胞，并将第一前散光形成的电信号的信号宽度作为此有效细胞的信号宽度。

S40：根据第一前散光的光信号宽度，提取第一侧散光和第一荧光信号中的有效光信号；

S50：检测液中的待测样品14流动至第二激光束的光斑内，第二激光束经过待测样品14散射后形成第二前散光、第二侧散光以及第二荧光；

S60：对应第二激光光源的第一检测器151、侧散光检测器16和荧光检测器17分别接收第二前散光、第二侧散光以及第二荧光的光信号，并获取第二前散光的光信号宽度；

对应第二激光光源的第一检测器151接收到第二前散光，控制器根据第一检测器151的检测结果，确定为有效细胞，并将第二前散光形成的电信号的信号宽度作为此有效细胞的信号宽度。

S70：根据第二前散光的信号宽度，提取第二侧散光和第二荧光信号中的有效光信号；

S80：根据第一侧散光、第一荧光以及第二侧散光和第二荧光的有效光信号获取待测样品14的结构。

并根据在每个激光光源11下的各个参数确定待测样品14的待测数据，实现对待测样品14的精确检测。

申请实施例中在每个激光光源11下，侧散光和荧光的获取均采用对应的激光光源11的前散光的信号宽度进行，从而避免了固定信号宽度对检测精度的影响，提高检测精度。

可选的，在根据第二前散光的信号宽度，提取第二侧散光和第二荧光信号中的有效光信号后，流式细胞仪控制方法还包括：

S61：根据第一前散光和第二前散光的信号宽度获取第一前散光和第二前散光的信号波峰；

S62：根据第一前散光信号和第二前散光的信号波峰的时间确定时间差；根据时间差计算流动室13内待测样品14的实时流速；

第一前散光信号和第二前散光的信号波峰的时间差即为待测样品14由第一光斑运动至第二光斑的时间，由于第一光斑与第二光斑之间的距离为已知，根据时间与距离即可计算实时流速。

S63：根据实时流速控制第一蠕动泵181和第二蠕动泵182的转速以调节待测样品14的流动速度。

具体的，当相邻两个第一检测器151的电信号的波峰中心的时间差在预设阈值范围内时，则不需要调整第一蠕动泵181和第二蠕动泵182的转速；当相邻两个第一检测器151的电信号的波峰中心的时间差超出预设阈值范围内时，则根据两者之间的差值调整第一蠕动泵181和第二蠕动泵182的转速，从而调节检测液的流速，实现待测样品14稳定的流动。

以上所述仅为本申请的优选实施例而已，并不用于限制本申请，对于本领域的技术人员来说，本申请可以有各种更改和变化。凡在本申请的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本申请的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种流式细胞仪，其特征在于，包括至少两个激光光源以及设置于所述激光光源出光侧的合束镜，每个所述激光光源出射不同波长的激光束，所述合束镜的出光侧设置有流动室，所述流动室内流通含有待测样品的检测液，所述流动室的前散光路上设置前散检测组件，所述前散检测组件包括对应每个所述激光光源的第一检测器，用于接收各个所述激光光源出射的激光束经过所述待测样品散射后的前散光，所述流动室的侧散光路上设置有侧散光检测器和荧光检测器，所述侧散光检测器用于根据所述前散光的信号宽度接收各个所述激光光源经过所述待测样品散射后的侧散光，所述荧光检测器用于根据所述前散光的信号宽度接收每个所述激光光源经过所述待测样品散射后的荧光。

2.根据权利要求1所述的流式细胞仪，其特征在于，还包括分别与所述第一检测器连接的控制器，以及与所述流动室连接的第一蠕动泵和第二蠕动泵，所述第一蠕动泵用于向所述流动室注入鞘液，所述第二蠕动泵用于向所述流动室注入待测样品，以在所述流动室内混合形成检测液，所述控制器根据相邻两个第一检测器的信号控制所述第一蠕动泵和第二蠕动泵以调节所述检测液的流速。

3.根据权利要求1所述的流式细胞仪，其特征在于，所述前散检测组件还包括第一分光器，所述第一分光器设置于所述流动室与所述第一检测器之间，用于将各个所述激光光源的前散光分离，所述第一检测器分别设置于所述分光器的各个出光光路上。

4.根据权利要求3所述的流式细胞仪，其特征在于，所述流动室与所述第一分光器之间依次设置有会聚透镜和光阑，所述光阑用于过滤透射所述待测样品的中心激光束和大角度散射光。

5.根据权利要求1所述的流式细胞仪，其特征在于，包括两组所述侧散光检测器和荧光检测器，且分别位于所述流动室的两侧，用于分别对两侧的侧散光和荧光进行检测。

6.根据权利要求1所述的流式细胞仪，其特征在于，还包括第二分光器，所述第二分光器设置于所述流动室与所述侧散光检测器和荧光检测器之间，用于将侧散光和荧光分离，所述侧散光检测器和所述荧光检测器分别设置于所述第二分光器的出光光路上。

7.根据权利要求6所述的流式细胞仪，其特征在于，所述第二分光器为二向色镜，所述二向色镜与所述流动室之间还设置有准直镜，用于对侧散光和荧光进行准直。

8.根据权利要求2所述的流式细胞仪，其特征在于，包括两个所述激光光源，所述合束镜为二向色镜，两个所述激光光源出射的激光束分别入射所述二向色镜的两侧面，并由同一侧面出射，所述合束镜与所述流动室之间还设置有整形模块，用于对所述合束镜出射的激光束进行整形后出射。

9.一种流式细胞仪的控制方法，其特征在于，包括：

控制第一激光光源和第二激光源开启向流动室出射第一激光束和第二激光束，所述第一激光束和第二激光束波长不同且在所述流动室内投射的光斑间隔，并控制第一蠕动泵和第二蠕动泵以使检测液由流动室流过；

所述检测液中的待测样品流动至所述第一激光束的光斑内，所述第一激光束经过所述待测样品散射后形成第一前散光、第一侧散光以及第一荧光；

对应所述第一激光光源的第一检测器、侧散光检测器和荧光检测器分别接收第一前散光、第一侧散光以及第一荧光，并获取所述第一前散光的光信号宽度；

根据所述第一前散光的光信号宽度，提取所述第一侧散光和所述第一荧光信号中的有效光信号；

所述检测液中的待测样品流动至所述第二激光束的光斑内，所述第二激光束经过所述待测样品散射后形成第二前散光、第二侧散光以及第二荧光；

对应第二激光光源的第一检测器、侧散光检测器和荧光检测器分别接收第二前散光、第二侧散光以及第二荧光，并获取所述第二前散光的光信号宽度；

根据所述第二前散光的信号宽度，提取所述第二侧散光和所述第二荧光信号中的有效光信号；

根据所述第一侧散光、所述第一荧光以及第二侧散光和所述第二荧光的有效光信号获取待测样品的结构。

10.根据权利要求9所述流式细胞仪的控制方法，其特征在于，在所述根据所述第二前散光的信号宽度，提取所述第二侧散光和所述第二荧光信号中的有效光信号后，所述方法还包括：

根据所述第一前散光和所述第二前散光的信号宽度获取第一前散光和第二前散光的信号波峰；

根据所述第一前散光的信号和所述第二前散光的信号波峰的时间确定时间差；

根据时间差计算流动室内待测样品的实时流速；

根据实时流速控制第一蠕动泵和第二蠕动泵的转速以调节所述待测样品的流动速度。