CN116904321A - 一株篮状菌属真菌w10及其应用 - Google Patents
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Abstract
一株篮状菌属真菌W10及其应用，属于农业微生物技术领域。为了筛选到具有高效溶磷活性且能耐盐的真菌，进而为溶磷真菌在农业上的应用提供备选菌株，本发明从磷矿植物根际土壤中筛选得到一株高效溶磷真菌W10，经形态学鉴定及分子生物学鉴定，将菌株W10鉴定为篮状菌属真菌。经过溶磷效果研究和促生效果研究发现，菌株W10对于多种难溶性磷均具有较好的溶磷效果，且最高能耐受4％的盐浓度，在4％的盐浓度条件下仍具有较好的溶磷活性，具有开发为盐碱地微生物肥料的潜力；此外菌株W10能够促进玉米幼苗的生长，提高玉米幼苗根际土壤中有效磷含量及脲酶与蔗糖酶活性。可见，菌株W10在农业生产中具有广阔的应用前景。
Description
技术领域
本发明属于农业微生物技术领域，具体涉及一株篮状菌属真菌W10及其应用。
背景技术
磷是植物生长必不可少的营养元素之一，土壤中磷素含量直接影响植物的生长发育与品质，磷肥在农业生产中具有举足若轻的地位，磷肥的施用是保障粮食产量的重要举措(Saber K，Nahla L，Ahmed D，et al.Effect ofP on nodule formation and Nfixation in bean[J].Agron Sustain Dev,2005,25:389-393.)。然而，磷肥施加到土壤中通常很快被Ca2+、Mg2+、Al3+、Fe3+等离子固化，以难溶性的金属螯合物存在于土壤中，致使磷肥的有效利用率不超过20％(秦利均,杨永柱,杨星勇.土壤溶磷微生物溶磷、解磷机制研究进展[J].生命科学研究,2019,23(01):59-64+86.)。长此以往下去，不仅造成磷素资源的严重浪费，使本就稀少的高品位磷矿资源面临挑战，而且磷肥的过量使用还会造成地下水污染和水体富营养化(Wen Weijia,Zhuang Yanhua,Zhang Liang et al.Preferredhierarchical control strategy of phosphorus from non-point source pollutionat regional scale[J].Environ Sci Pollut Res Int,2021,28:60111-60121.)。因此，合理使用磷肥，减少磷肥使用量，提高磷肥当季的利用率，延长磷矿资源使用年限，对我国农业可持续发展具有重要的意义。
研究表明，土壤中存在一种微生物能够将难溶性的磷转化为植物可以吸收的有效磷，许多学者希望得到高效的溶磷微生物能够提高磷肥在农业生产中的利用率。溶磷微生物主要包括细菌和真菌，有研究表明，其中真菌的溶磷性能要远大于细菌，而真菌在实际农业生产中的应用较少，所以近些年来溶磷真菌也逐渐成为研究热点(Kucey R M N etal.,Increased yields and phosphorous uptake by westar canola(Brassicanapus L.)inoculated with a phosphate-solubilizing isolate of Penicilliumbilai.Canadian Journal of Soil Science,1989,69:425-432.)。目前，已经分离得到的溶磷真菌包含数十个属，其中，研究较多的集中于青霉菌属和曲霉菌属的真菌(许昌超,张俊涛,叶少萍等.土壤中一株溶磷青霉菌的分离鉴定及其应用效果研究[J].中国土壤与肥料,2020,290(06):272-278.)。Yue Sang等从杨树根际土壤中分离得到4株溶磷真菌均属于被孢霉属，其中溶磷效果最好的为L4，最大溶磷量为180mg/L(Sang Yue,Jin Long,Zhu Ruiet al.MortierellaPhosphorus-Solubilizing Capacity of Species Isolated fromRhizosphere Soil of a Poplar Plantation.[J].Microorganisms,2022,10:undefined.)。Xue-Li Wang等从磷尾矿渣场土壤中得到一株淡紫拟青霉菌PSF7，在经过培养基优化后，该菌株最大溶磷量能达到122.17mg/L(Wang Xue-Li,Qiu Shu-Yi,Zhou Shao-Qi et al.Paecilomyces lilacinusPhosphate-Solubilizing Capacity of PSF7 andOptimization Using Response Surface Methodology.[J].Microorganisms,2023,11:undefined.)。Laura Bononi等从亚马逊雨林土壤中分离得到木霉属的真菌中有19.5％的菌株具有溶磷效果，盆栽实验中大豆对磷的吸收提升了2.1％-41.1％不等(Bononi Laura,Chiaramonte Josiane Barros,Pansa Camila Cristiane et al.Phosphorus-solubilizing Trichoderma spp.from Amazon soils improve soybean plant growth.[J].Sci Rep,2020,10:2858.)。Wang Liyan等研究黑曲霉属的溶磷真菌对小麦秸秆的降解效能与磷的释放，结果表明黑曲霉释放的葡聚糖酶和葡萄糖苷酶有助于秸秆降解与有机磷的释放，分泌的草酸促进了无机磷的释放(Wang Liyan,Guan Hao,Hu Jun etal.Aspergillus niger Enhances Organic and Inorganic Phosphorus Release fromWheat Straw by Secretion ofDegrading Enzymes and Oxalic Acid.[J].JAgric FoodChem,2022,70:10738-10746.)。Vessey等在实验室和大田试验中将一株拜莱青霉(Penicillium bilaii)接种于豌豆上，接菌处理植株的根长、根重和茎部磷含量等均显著增加，能够有效促进豌豆的生长，目前，该菌株已在加拿大实现商品化生产(Vessey J K,Heisinger K G.Effect of Penicillium bilaii inoculation and phosphorusfertilization on root and shoot parameters offield growth pea[J].CanadianJournal ofPlant science,2001,81(3):361-366.)。尚晓静等从蓝莓内生真菌中筛选出具有溶磷、耐盐功能的烟管菌G14与阿达青霉FG54，实验室条件下最高有效磷含量于5天后分别达到587.315μg/mL与523.730μg/mL(尚晓静,侯瑞,徐芳玲等.2株蓝莓溶磷内生真菌的筛选、鉴定及溶磷效果评价[J].江苏农业科学,2022,50(20):246-252.)。李静等从小麦田土壤中分离得到一株具有溶磷效果的产红青霉(Penicillium rubens)，该菌株对Ca3(PO4)2、AlPO4和FePO4均有一定的溶解能力，最大溶磷量分别为382.79mg/L、95.99mg/L和75.39mg/L，且对小麦有明显的促生特性，小麦株高、根长、鲜重、和叶绿素含量最高可分别提升至35.65％、50.44％、50.94％、19.57％(李静,艾加敏,余天飞等.一株溶磷真菌的鉴定及其促生特性研究[J].福建农业学报,2021,36(10):1224-1230.)。因此，寻找更多种类的溶磷真菌可以为微生物肥料的开发提供优质的菌种资源。
篮状菌(Talaromyces sp.)是一类广泛分布于自然界的腐生真菌，除少数具有条件致病性外，大多数有益于人类的生产活动，已发现篮状菌有产抗菌物质、植物抗病抗逆、降解木质纤维素以及生产天然着色剂等功能(孙剑秋,阮永明,金世宇等.篮状菌属的重要性及其分类学研究概况[J].菌物研究,2021,19(02):83-93.)。Li Hong-Lei等从海洋红藻组织中分离得到篮状菌Talaromyces islandicus EN-501，从该菌株培养提取物中分离出5种具有抗菌、抗氧化活性的蒽醌衍生物(Li Hong-Lei,Li Xiao-Ming,Li Xin etal.Antioxidant Hydroanthraquinones from the Marine Algal-Derived EndophyticFungus Talaromyces islandicus EN-501.[J].J Nat Prod,2017,80:162-168.)。Madi L等发现黄篮状菌Talaromycesflavus可以减少葡萄球菌引起的豆茎腐病并分泌抗大丽黄萎病的抗真菌物质(Madi L,Katan T,Katan J et al.Biological Control of Sclerotiumrolfsii and Verticillium dahliae by Talaromycesflavus Is Mediatedby DifferentMechanisms.[J].Phytopathology,1997,87:1054-60.)。篮状菌中有许多产纤维素酶的菌，如嗜松篮状菌(Talaromyces pinophilus)、绳状篮状菌(Talaromyces funiculosus)、产紫篮状菌(Talaromyces purpureogenus)、小疣篮状菌(Talaromyces verruculosus)等可以分泌大量纤维素酶降解植物残体中的木质纤维素，从而增强土壤肥力(Fujii T，HoshinoT，Inoue H，et al.Taxonomic revision of the cellulose-degrading fungusAcremonium cellulolyticus nomen nu dum to Talaromyces based on phylogeneticanalysis[J].FEMS Microbiology Letters，2014，351:32-41.)(Morozova V V，GusakovAV，AndrianovRM，et al.Cellulases of Penicillium verruculosum[J].JournalofBiotechnology，2010，5:871-880.)。篮状菌大多产黄色和红色色素，其中，暗玫瑰篮状菌(Talaromyces atroroseus)和白双轮篮状菌(Talaromyces bobiverticillius)等某些菌株能够在产生色素的同时不产生任何真菌毒素，有可能应用到食用色素行业(Frisvad JC，Yilmaz N，Thrane U，et al.Talaromyces atroroseus，a new species efficientlyproducing industrially relevant red pigments[J].PLoS One，2013，8(12):e84102.)。篮状菌的溶磷性能早有报道，尹小嫚等从杨树根部土壤中分离得到一株具有溶磷效果的黄篮状菌(Talaromycesflavus)，其最大溶磷量为660.9mg/L，
目前，关于溶磷真菌的研究报道较多，但大多数真菌的筛选主要来源于各种农作物根际土壤，对磷矿及其附近植被根际土壤中溶磷真菌的研究较少，且目前，我国沿海地区土壤盐碱化问题比较严重，而关于高效耐盐的溶磷真菌研究较少。若能从磷矿及其附近植被根际土壤中筛选到具有高效溶磷活性且能耐盐的真菌将对农业可持续发展具有重要意义。
发明内容
为了能从磷矿及其附近植被根际土壤中筛选到具有高效溶磷活性且能耐盐的真菌，进而为溶磷真菌在农业上的应用提供备选菌株，本发明提供了一株具有溶磷活性的篮状菌属(Talaromyces sp.)真菌W10，具体技术方案如下：
本发明的第一个目的是提供一株篮状菌属(Talaromyces sp.)真菌W10，该菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.40621，保藏日期为2023年5月10日，保藏单位地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。
本发明的第二个目的是提供上述篮状菌属真菌W10在提高土壤中难溶性磷利用率中的应用。
在本发明的一种实施方式中，所述土壤为含盐量在4％以下的土壤。
在本发明的一种实施方式中，所述难溶性磷为Ca3(PO4)2、AlPO4和FePO4中的一种或任意两种以上的组合。
本发明的第三个目的是提供上述篮状菌属真菌W10在促进作物生长中的应用。
本发明的第四个目的是提供一种含有上述篮状菌属真菌W10的溶磷菌剂。
本发明的第五个目的是提供上述溶磷菌剂在溶解土壤中难溶性磷中的应用。
在本发明的一种实施方式中，所述土壤为含盐量在4％以下的土壤；所述难溶性磷为Ca3(PO4)2、AlPO4和FePO4中的一种或任意两种以上的组合。
本发明的第六个目的是提供一种含有上述篮状菌属真菌W10的生物菌肥。
本发明的第七个目的是提供上述生物菌肥在溶解土壤中的难溶性磷及促进作物生长中的应用。
本发明的有益效果：
本发明利用以Ca3(PO4)2为唯一磷源的无机磷固体培养基从磷矿植物根际土壤中分离得到一株具有高效溶磷活性的真菌W10，经形态学鉴定及分子生物学鉴定，将菌株W10鉴定为篮状菌属(Talaromyces sp.)真菌。该菌株对Ca3(PO4)2有很强的溶解能力，将菌株W10接种于以Ca3(PO4)2为唯一磷源的液体培养基进行培养，12天后培养基中有效磷含量可达843.05mg/L，该菌株对AlPO4和FePO4同样具有溶解能力，但溶磷效果低于Ca3(PO4)2。W10最高可耐受4％的盐浓度，属中度耐盐菌，且在4％的盐浓度条件下仍具有较好的溶磷活性，具有开发为盐碱地微生物肥料的潜力。玉米盆栽实验表明，菌株W10能够促进玉米幼苗的生长(与CK2相比，植株鲜重、干重、株高、叶面积以及植物全磷分别提高了23.21％、27.08％、9.62％、21.59％、20.07％)，亦能显著促进植物对水分的吸收，提高玉米幼苗根际土壤中有效磷含量(与CK2相比，W10土壤有效磷含量提高了44.74％-56.62％不等)及脲酶与蔗糖酶活性(与CK2相比，土壤脲酶与蔗糖酶活性分别增强了28.43％和38.20％)，具有开发为溶磷微生物肥料的潜力，在农业生产中具有广阔的应用前景。
附图说明
图1为菌株W10在PDA平板上的菌落图；
图2为菌株W10在光学显微镜下的分生孢子梗与子囊果结构图；其中，图2中的A为菌株W10的分生孢子梗结构图，图2中的B为菌株W10子囊果结构图；
图3为基于菌株W10的ITS序列建立的系统发育树；
图4为将菌株W10接入以Ca3(PO4)2作为唯一磷源的无机磷液体培养基后经过不同时间培养基中有效磷含量与pH变化图；
图5为将菌株W10分别接入以Ca3(PO4)2、AlPO4、FePO4作为唯一磷源的无机磷液体培养基中培养8天后培养基中有效磷含量图；
图6为菌株W10在不同盐浓度的无机磷液体培养基中有效磷含量与生物量随盐浓度变化结果图；
图7为菌株W10对玉米幼苗根际土壤酶活的影响结果图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，下面结合具体的实施方式及说明书附图对本发明进行进一步详细说明。下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明均为常规方法，所用材料、试剂、方法和仪器，未经特殊说明，均为本领域常规材料、试剂、方法和仪器，本领域技术人员均可通过商业渠道获得。
本发明选用的土样样品于2021年7月采集于辽宁省朝阳市建平县磷矿山区的植物根际土壤(东经119.37.50，北纬41.29.59)，采用5点采样法进行取样，用铁铲深入植入根际10cm处取样，装入自封袋拿回实验室放置于4℃冰箱备用。
本发明涉及的培养基如下：
PDA培养基：土豆200g/L，葡糖糖20g/L，K2HPO42 g/L，MgSO41 g/L，琼脂20g/L，余量为水，pH自然，115℃灭菌30min，其中土豆加水煮烂，过滤获得土豆汁，再次煮沸加入葡萄糖和琼脂溶解，然后加水定容。
无机磷培养基：葡糖糖10g/L，FeSO4·7H2O 0.03g/L，MgSO4·7H2O 0.3g/L，NaCl0.3g/L，KCl 0.3g/L，(NH4)2SO40.5 g/L，MnSO4·7H2O 0.03g/L，Ca3(PO4)25g/L，琼脂20g/L，余量为水，pH 7.2-7.4，115℃灭菌30min。
实施例1：篮状菌W10的分离与鉴定
(一)篮状菌W10的分离
取10g土样置于含90mL无菌水的250mL锥形瓶中，锥形瓶中放置少量玻璃珠用于充分搅拌，170rpm摇瓶30min制备土壤菌悬液，用无菌水将土壤菌悬液梯度稀释至10-2、10-3、10-4倍，分别取不同浓度的土壤菌悬液100μL均匀涂布于含链霉素(100mg/mL，千分之一比例加入)的无机磷培养基上，每个梯度设置三个平板，28℃恒温培养3-4天，挑选有明显溶磷圈的菌株转接到PDA培养基上进行纯化，获得纯化的单一菌株后接种到PDA试管，于4℃冰箱保藏备用。
通过梯度稀释法从磷矿植物根际土壤中筛选得到具有溶解Ca3(PO4)2能力的溶磷真菌W10。
(二)篮状菌W10的分类学研究
(1)篮状菌W10的形态学分析
将菌株W10接种于PDA培养基，于28℃培养箱中培养7天后，菌落直径为6.6cm，生长速度较快，菌落表面平坦，边缘整齐，形成同心环绒状菌落，菌丝体在边缘为白色，中心呈黄绿色，同心圆中间部分呈玉米黄色，菌落背面呈浅黄色(见图1)。在光学显微镜下观察菌株W10分生孢子梗与子囊果的结构，结果见图2，W10有性繁殖期内产生类似“篮网”的子囊果结构，子囊果由一层紧密交织的菌丝组成，上面挂满了成熟的“果实”，为子囊孢子。菌丝表面产生扫帚状分生孢子梗，产椭球状分生孢子，符合篮状菌属真菌的形态学特征。
(2)篮状菌W10的分子生物学鉴定
将菌株W10接种到PDA液体培养基中，于28℃、170rpm摇床中培养2d，收集菌丝，利用真菌提取试剂盒提取菌株总DNA，通过ITS1(SEQ ID NO.2)与ITS4(SEQ ID NO.3)引物扩增ITS片段，随后送上海生物工程股份有限公司测序，测序结果提交到NCBI进行BLAST比对，选取同源性98％以上的序列，运用MAGA 11.0软件构建系统发育树。
利用ITS rDNA特殊引物对菌株W10的总DNA进行扩增，得到555bp的目的片段(见SEQ ID NO.1)，通过NCBI中的BLAST进行序列比对，结果显示，菌株W10与篮状菌属(Talaromyces sp.)真菌的序列同源性高达99.94％。利用MEGA 11.0中的Neighbor-Joining方法对菌株W10及具有与其同源性在98％以上序列的菌株构建系统发育树，结果表明，菌株W10与篮状菌属的真菌同属一个分支，可信度均达到100(图3)。结合形态学与ITS序列鉴定结果，将菌株W10鉴定为篮状菌属真菌。将菌株W10保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.40621，保藏日期为2023年5月10日，保藏单位地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。
SEQ ID NO.1
AAACGGAAATGCGGGGACTCGCGGCCCACCTCCCACCCTTGTCTCTATACACCTGTTGCTTTGGCGGGCCCACCGGGGCCACCTGGTCGCCGGGGGACGCACGTCCCCGGGCCCGCGCCCGCCGAAGCGCTCTGTGAACCCTGATGAAGATGGGCTGTCTGAGTACTATGAAAATTGTCAAAACTTTCAACAATGGATCTCTTGGTTCCGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCCGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCCCTGGCATTCCGGGGGGCATGCCTGTCCGAGCGTCATTTCTGCCCTCAAGCACGGCTTGTGTGTTGGGTGTGGTCCCCCCGGGGACCTGCCCGAAAGGCAGCGGCGACGTCCGTCTGGTCCTCGAGCGTATGGGGCTCTGTCACTCGCTCGGGAAGGACCTGCGGGGGTTGGTCACCACCATGTTTTTACCACGGTTGACCTCGGATCAGGTAGGAGTTACCCGCTGAACTTAAGCATATCAATAAGCGGAGGAAA
ITS1：TCCGTAGGTGAACCTGCGG
ITS4：TCCTCCGCTTATTGATATGC
实施例2：篮状菌W10的溶磷活性
(1)菌株W10在固体培养基上的溶磷能力测定
将纯化后的菌株W10接种到无机磷培养基上，28℃恒温培养5天后，检测其溶磷圈直径(D)与菌落直径(d)，计算D/d值。结果发现菌株W10接种到以Ca3(PO4)2为唯一磷源的无机磷固体培养基中，检测其溶磷圈直径(D)与菌落直径(d)比，菌株W10的D/d比为1.65，具有明显的溶磷活性。
(2)菌株W10在液体培养基中的溶磷能力测定
将纯化后的菌株W10接种到PDA培养基上，28℃恒温培养，待孢子长满整个培养皿，加入10mL无菌水，用涂布棒轻轻刮取孢子，再用灭菌的脱脂棉球过滤获得孢子悬液，重复冲洗一次滤渣，通过血球计数板检测孢子数量，用无菌水稀释至1×107cfu/mL备用。向装有100mL无机磷液体培养基的锥形瓶中加入1mL制备好的孢子悬液，置于28℃摇床中培养，分别于第2、4、6、8、10、12、14天吸取上清液，利用钼锑抗比色法检测上清液有效磷含量，并使用pH计检测上清液pH。
菌株W10接种到以Ca3(PO4)2为唯一磷源的无机磷液体培养基中，每隔2天检测一次培养基有效磷含量与pH变化。如图4可知，菌株W10有效磷含量在第6天达到一个峰值823.15mg/L后稍微有所下降，并在第12天达到最高值843.05mg/L，呈现先升高后降低再升高的趋势，而pH变化由第4天达到最低值3.92后持续缓慢升高至5.30。
菌株W10在无机磷液体培养基中pH呈现先降低后升高的趋势，且在降低到最低值两天后有效磷含量到达一个峰值，表明菌株W10的溶解机理为有机酸的酸解作用，而菌株W10有效磷含量在第6天达到峰值后呈现先降低又升高再降低的趋势，推测有可能为菌株W10吸收部分有机酸后再次增殖溶解的效果。
(3)菌株W10对不同磷源的溶解能力
分别以Ca3(PO4)2、AlPO4、FePO4作为无机磷液体培养基中的唯一无机磷源加入相同质量的难溶磷，检测菌株对不同难溶磷的溶解能力。向装有100mL不同难溶磷源的液体培养基中加入1mL制备好的孢子悬液，置于28℃，170rpm摇床中培养，于第8天吸取上清液，利用钼锑抗比色法检测其有效磷含量。
实验结果见图5，菌株W10对Ca3(PO4)2的溶解力最强，菌株W10对Ca3(PO4)2的溶解量为789.22mg/L，对AlPO4和FePO4的溶解量分别为105.25mg/L与78.35mg/L。可见，菌株W10对于多种无机磷均具有溶磷活性。
(4)篮状菌W10的耐盐能力测定
将溶磷菌W10分别接种到含0.5％、1％、2％、4％、6％、8％和10％NaCl的无机磷液体培养基中，28℃，170rpm培养8天后取上清液检测有效磷含量及菌丝干重量。结果如6所示，菌株W10溶磷能力和生物量均随NaCl含量的升高而降低，菌株W10在NaCl含量为2％和4％时仍有较强的溶磷活性，有效磷含量分别为684.22mg/L和645.52mg/L，而生物量快速下降，由NaCl含量为2％时的0.36g下降为NaCl含量为4％时的0.11g，在NaCl含量超过4％时，W10对Ca3(PO4)2仅有轻微的溶解能力，几乎没有菌丝形成。可见，菌株W10在NaCl含量不超过4％时仍具有较好的溶磷活性。
实施例3：篮状菌W10的促生效果
由于土壤环境的复杂性，很多溶磷菌在实验室环境下有较好的溶磷效果，接种到土壤后效果并不理想(Gyaneshwar P,Naresh Kumar G,Parekh L J,et al.Role of soilmicroorganisms in improving Pnutrition ofplants[J].Plant and Soil,2002,245(1):83-93.)。由此本发明设立盆栽实验，验证溶磷真菌W10对玉米幼苗的促生效果以及对土壤有效磷的作用。
供试土壤为普通东北田间黑土，采集土壤后分装至育苗盆中(上口17cm×高14cm)，每盆2kg黑土。供试玉米种子为辽源市泉源种业有限公司购得的黄金糯一号，供试磷源为Ca3(PO4)2，1g/kg土壤。将菌株W10接入PDA液体培养基中(放置少许玻璃珠)，28℃、170rpm振荡培养，3天后开始取样采用血球计数板计数，直到孢子数达1×108cfu/mL。
试验分组：(1)CK1：不接菌，不加Ca3(PO4)2；(2)CK2：不接菌，加Ca3(PO4)2(3)W10：加Ca3(PO4)2，接种溶磷真菌W10。
真菌培养液以1×109cfu/kg接种到土壤中，每盆播种4粒相对饱满的玉米种子，每组4个处理。播种后每隔3天浇一次水，每10天取一次土样检测有效磷含量，40天后检测玉米幼苗的株高、叶面积、植株鲜重、干重、根部总鲜重与干重以及土壤含水量等指标。运用软件Graphpad Prism 5.0进行统计分析与作图。
溶磷真菌W10对玉米幼苗促生效果的影响：
玉米盆栽实验结果如表1所示，施加溶磷菌株W10的玉米幼苗待生长至40天时，其植株鲜重、干重以及叶面积均显著高于CK1和CK2，土壤含水率显著低于两个对照(p<0.05)，CK2在鲜重、干重以及叶面积上虽高于CK1，可两者间没有显著差异性。W10植株鲜重、干重、叶面积以及植物全磷对比CK1分别增长0.86g、0.21g、11.25cm3、0.93mg，增幅达45.26％、52.5％、28.94％和36.61％，对比CK2分别增长0.52g、0.13g、8.9cm3、0.58mg，增幅达23.21％、27.08％、21.59％和20.07％，W10土壤含水率对比CK1和CK2分别降低2.21％和1.37％，W10株高由于CK2组内差异性较大而对比CK1与CK2没有差异显著性。
表1菌株W10对玉米幼苗生长的影响
溶磷真菌W10对玉米幼苗根际土壤有效磷的影响：
玉米幼苗根际土壤有效磷检测结果如下表2所示，以Ca3(PO4)2为磷源的条件下，所有处理根际土壤有效磷含量均随着时间增长而增长，接种溶磷真菌的处理相比两个对照，土壤有效磷含量均显著增加(p<0.05)。W10处理土壤有效磷含量相比CK1增长了61.66％-97.66％不等，相比CK2增长了44.74％-56.62％不等。
表2菌株W10对玉米幼苗根际土壤有效磷含量的影响
溶磷真菌W10对玉米幼苗根际土壤酶活的影响：
溶磷真菌对玉米幼苗根际土壤脲酶与蔗糖酶活性的影响如图7所示，由图可知，CK1、CK2和W10处理的土壤脲酶活性分别为314.26μg/g、359.65μg/g和461.91μg/g，菌株W10相比CK1与CK2均有差异显著性，分别增长了46.98％和28.43％。CK1、CK2和W10处理的土壤蔗糖酶活性分别为197.53mg/g、220.08mg/g和304.16mg/g，菌株W10相比CK1与CK2均有差异显著性，分别增长了53.98％和38.20％。
土壤酶是反映土壤肥力和微生物活动的重要指标，参与到土壤生态系统中各种物质循环和生化过程。土壤脲酶活性与土壤中微生物数量和氮素供应关系密切，蔗糖酶是有机碳转换过程的一种重要的水解酶，其活性与土壤中有机质含量、微生物数量及土壤呼吸强度密切相关，是评价土壤肥力的重要指标(丁少男,薛萐,刘国彬.施肥处理对黄土丘陵区农田土壤酶活性和水溶性有机碳、氮的影响[J].农业环境科学学报,2015,34(11):2146-2154.)。菌株W10对比CK2能够显著提升土壤脲酶与蔗糖酶活性，说明其能增强土壤肥力，促进作物生长。
虽然本发明已以较佳的实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明精神和范围内，都可以做各种的改动与修饰，因此，本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。
Claims (10)
1.一株篮状菌属(Talaromycessp.)真菌W10，保藏编号为CGMCCNO.40621。
2.权利要求1所述篮状菌属真菌W10在提高土壤中难溶性磷利用率中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述土壤为含盐量在4％以下的土壤。
4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述难溶性磷为Ca3(PO4)2、AlPO4和FePO4中的一种或任意两种以上的组合。
5.权利要求1所述篮状菌属真菌W10在促进作物生长中的应用。
6.一种含有权利要求1所述篮状菌属真菌W10的溶磷菌剂。
7.权利要求6所述溶磷菌剂在溶解土壤中难溶性磷中的应用。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述土壤为含盐量在4％以下的土壤；所述难溶性磷为Ca3(PO4)2、AlPO4和FePO4中的一种或任意两种以上的组合。
9.一种含有权利要求1所述篮状菌属真菌W10的生物菌肥。
10.权利要求9所述生物菌肥在溶解土壤中的难溶性磷及促进作物生长中的应用。
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| CN117904012A (zh) * | 2024-03-20 | 2024-04-19 | 中国农业科学院农业环境与可持续发展研究所 | 一种高效堆肥的微生物菌剂及其应用 |
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