CN116891822B - 一种高效发酵大蒜秸秆的复合菌剂及其筛选方法、应用 - Google Patents
一种高效发酵大蒜秸秆的复合菌剂及其筛选方法、应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN116891822B CN116891822B CN202311162602.2A CN202311162602A CN116891822B CN 116891822 B CN116891822 B CN 116891822B CN 202311162602 A CN202311162602 A CN 202311162602A CN 116891822 B CN116891822 B CN 116891822B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- gpa2
- glp1
- garlic
- composite microbial
- straw
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 235000004611 garlic Nutrition 0.000 title claims abstract description 54
- 239000010902 straw Substances 0.000 title claims abstract description 44
- 239000002131 composite material Substances 0.000 title claims abstract description 20
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 title claims abstract description 13
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 title claims abstract description 11
- 238000012216 screening Methods 0.000 title abstract description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 title abstract description 8
- 244000245420 ail Species 0.000 title 1
- 240000002234 Allium sativum Species 0.000 claims abstract description 53
- 102100025101 GATA-type zinc finger protein 1 Human genes 0.000 claims abstract description 36
- 108091016366 Histone-lysine N-methyltransferase EHMT1 Proteins 0.000 claims abstract description 36
- 102100033808 Glycoprotein hormone alpha-2 Human genes 0.000 claims abstract description 35
- 101001069261 Homo sapiens Glycoprotein hormone alpha-2 Proteins 0.000 claims abstract description 35
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims abstract description 14
- 241000186605 Lactobacillus paracasei Species 0.000 claims abstract description 12
- 241000191998 Pediococcus acidilactici Species 0.000 claims abstract description 12
- 239000002068 microbial inoculum Substances 0.000 claims abstract description 9
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims abstract description 9
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 claims description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 abstract description 8
- 235000021050 feed intake Nutrition 0.000 abstract description 6
- 230000008901 benefit Effects 0.000 abstract description 5
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 abstract description 4
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 abstract description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 4
- 239000004460 silage Substances 0.000 abstract description 4
- 230000037356 lipid metabolism Effects 0.000 abstract description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract description 3
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 17
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 17
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 11
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 11
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 11
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 10
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 9
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 9
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 9
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 8
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 8
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 7
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 7
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 7
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 6
- ULGZDMOVFRHVEP-RWJQBGPGSA-N Erythromycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](C)C(=O)O[C@@H]([C@@]([C@H](O)[C@@H](C)C(=O)[C@H](C)C[C@@](C)(O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@H](C[C@@H](C)O2)N(C)C)O)[C@H]1C)(C)O)CC)[C@H]1C[C@@](C)(OC)[C@@H](O)[C@H](C)O1 ULGZDMOVFRHVEP-RWJQBGPGSA-N 0.000 description 6
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 6
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 6
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 6
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 6
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 6
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 6
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 description 5
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 5
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 5
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 5
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 5
- 238000011161 development Methods 0.000 description 5
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 5
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 5
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 description 5
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 description 4
- MYSWGUAQZAJSOK-UHFFFAOYSA-N ciprofloxacin Chemical compound C12=CC(N3CCNCC3)=C(F)C=C2C(=O)C(C(=O)O)=CN1C1CC1 MYSWGUAQZAJSOK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 3
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 3
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 3
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 3
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 3
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 3
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 229960002227 clindamycin Drugs 0.000 description 3
- KDLRVYVGXIQJDK-AWPVFWJPSA-N clindamycin Chemical compound CN1C[C@H](CCC)C[C@H]1C(=O)N[C@H]([C@H](C)Cl)[C@@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](SC)O1 KDLRVYVGXIQJDK-AWPVFWJPSA-N 0.000 description 3
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 3
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 3
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 229960003276 erythromycin Drugs 0.000 description 3
- 125000001475 halogen functional group Chemical group 0.000 description 3
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 3
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 3
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 3
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 3
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 3
- 102100036475 Alanine aminotransferase 1 Human genes 0.000 description 2
- 108010082126 Alanine transaminase Proteins 0.000 description 2
- 241000304531 Allium macrostemon Species 0.000 description 2
- 108010003415 Aspartate Aminotransferases Proteins 0.000 description 2
- 102000004625 Aspartate Aminotransferases Human genes 0.000 description 2
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 description 2
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 2
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000003794 Gram staining Methods 0.000 description 2
- 108010059993 Vancomycin Proteins 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 2
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 2
- 229960000484 ceftazidime Drugs 0.000 description 2
- NMVPEQXCMGEDNH-TZVUEUGBSA-N ceftazidime pentahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.S([C@@H]1[C@@H](C(N1C=1C([O-])=O)=O)NC(=O)\C(=N/OC(C)(C)C(O)=O)C=2N=C(N)SC=2)CC=1C[N+]1=CC=CC=C1 NMVPEQXCMGEDNH-TZVUEUGBSA-N 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 229960003405 ciprofloxacin Drugs 0.000 description 2
- 235000013325 dietary fiber Nutrition 0.000 description 2
- 238000003912 environmental pollution Methods 0.000 description 2
- 239000004459 forage Substances 0.000 description 2
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 2
- 230000006799 invasive growth in response to glucose limitation Effects 0.000 description 2
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 2
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 2
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 2
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 2
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 2
- 229960003165 vancomycin Drugs 0.000 description 2
- MYPYJXKWCTUITO-UHFFFAOYSA-N vancomycin Natural products O1C(C(=C2)Cl)=CC=C2C(O)C(C(NC(C2=CC(O)=CC(O)=C2C=2C(O)=CC=C3C=2)C(O)=O)=O)NC(=O)C3NC(=O)C2NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(CC(C)C)NC)C(O)C(C=C3Cl)=CC=C3OC3=CC2=CC1=C3OC1OC(CO)C(O)C(O)C1OC1CC(C)(N)C(O)C(C)O1 MYPYJXKWCTUITO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MYPYJXKWCTUITO-LYRMYLQWSA-N vancomycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=C2C=C3C=C1OC1=CC=C(C=C1Cl)[C@@H](O)[C@H](C(N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H]3C(=O)N[C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](C3=CC(O)=CC(O)=C3C=3C(O)=CC=C1C=3)C(O)=O)=O)[C@H](O)C1=CC=C(C(=C1)Cl)O2)=O)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC)[C@H]1C[C@](C)(N)[C@H](O)[C@H](C)O1 MYPYJXKWCTUITO-LYRMYLQWSA-N 0.000 description 2
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 241000123646 Allioideae Species 0.000 description 1
- 241000234282 Allium Species 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000025254 Cannabis sativa Species 0.000 description 1
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 1
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 description 1
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 description 1
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 description 1
- 238000013494 PH determination Methods 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 241000192001 Pediococcus Species 0.000 description 1
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 1
- LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N Uric Acid Chemical compound N1C(=O)NC(=O)C2=C1NC(=O)N2 LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N Uric acid Natural products N1C(=O)NC(=O)C2NC(=O)NC21 TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PNNCWTXUWKENPE-UHFFFAOYSA-N [N].NC(N)=O Chemical compound [N].NC(N)=O PNNCWTXUWKENPE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002053 acidogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 238000012271 agricultural production Methods 0.000 description 1
- 239000002154 agricultural waste Substances 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 230000003064 anti-oxidating effect Effects 0.000 description 1
- 230000003385 bacteriostatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000002457 bidirectional effect Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 239000006161 blood agar Substances 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 244000000037 crop pathogen Species 0.000 description 1
- 235000021051 daily weight gain Nutrition 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 238000013100 final test Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000002949 hemolytic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 238000013101 initial test Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 1
- OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N n-methyl-1-(2-naphthalen-1-ylsulfanylphenyl)methanamine Chemical compound CNCC1=CC=CC=C1SC1=CC=CC2=CC=CC=C12 OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011392 neighbor-joining method Methods 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 230000000630 rising effect Effects 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 238000003239 susceptibility assay Methods 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 229940116269 uric acid Drugs 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K30/00—Processes specially adapted for preservation of materials in order to produce animal feeding-stuffs
- A23K30/10—Processes specially adapted for preservation of materials in order to produce animal feeding-stuffs of green fodder
- A23K30/15—Processes specially adapted for preservation of materials in order to produce animal feeding-stuffs of green fodder using chemicals or microorganisms for ensilaging
- A23K30/18—Processes specially adapted for preservation of materials in order to produce animal feeding-stuffs of green fodder using chemicals or microorganisms for ensilaging using microorganisms or enzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/225—Lactobacillus
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明属于微生物领域，具体涉及一种高效发酵大蒜秸秆的复合菌剂及其筛选方法、应用。所述复合菌剂包括：副干酪乳杆菌GLP1和乳酸片球菌GPA2；所述副干酪乳杆菌GLP1的保藏编号为CGMCC No.27905；所述乳酸片球菌GPA2的保藏编号为CGMCC No.27904。本发明筛选得到的菌株，能够高效发酵大蒜秸秆，解决了大蒜秸秆的资源化利用问题，缓解了农田生态系统的承载压力；通过本发明筛选的菌株，发酵大蒜秸秆后，达到优良青贮饲料pH标准，提高饲养动物的采食量，发酵大蒜秸秆饲喂后，能够提高蛋白质的利用率，促进脂质代谢，提高动物机体的抗氧化能力和免疫水平，有极大的经济效益、社会效益和生态效益。
Description
技术领域
本发明属于微生物领域，具体涉及一种高效发酵大蒜秸秆的复合菌剂及其筛选方法、应用。
背景技术
大蒜是百合科、葱属的重要经济作物，目前大蒜的消费主要以鲜大蒜头为主，但是大蒜生产过程中产生的大蒜秸秆通常被丢弃，不仅造成资源浪费而且极易导致农田生态系统环境污染问题。中国大蒜栽培历史悠久，其种植面积和产量均居世界首位。大蒜不但营养丰富，而且对各种微生物和作物病原体有良好的调节作用。大蒜秸杆（Garlic straw）是大蒜收获过程中的主要副产品，也是良好的生物资源。然而，大蒜秸秆在农业生产中常被当作废弃物丢弃或焚烧，并没有得到很好的开发和利用。如何有效合理的利用这一自然生物资源，减少环境污染和实现农业的可持续发展是十分必要的。
近年来，随着畜牧业快速发展，饲草料资源匮乏，“粮占草”等都成为限制畜牧业进一步发展的主要因素。单纯依靠传统饲草种植和生产加工基本不能维持我国目前的畜牧业发展现状，因此充分合理地利用作物秸秆等非常规饲料资源是解决粗饲料短缺的有效途径。非常规饲料具有独特的营养价值、季节性强和有一定地理范围等特点。随着生物技术的发展，微生物发酵技术成为实现低值农副产品和农业废弃物的高值化利用的有效手段。然而，目前商业菌剂菌种单一，无法满足区域特有地源性饲料资源的发酵要求，因此筛选原料植物附生乳酸菌作为青贮添加剂在菌株存活与定植等方面具有一定优势。
发明内容
针对现有技术中存在的问题，本发明提供了一种高效发酵大蒜秸秆的复合菌剂。
本发明还提供了上述复合菌剂的筛选方法。
本发明的另一目的为提供一种高效发酵大蒜秸秆的复合菌剂的应用。
本发明为了实现上述目的所采用的技术方案为：
本发明提供了一种高效发酵大蒜秸秆的复合菌剂，所述复合菌剂包括：副干酪乳杆菌GLP1和乳酸片球菌GPA2；所述副干酪乳杆菌GLP1的保藏编号为CGMCC No.27905，于2023年07月14日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；所述乳酸片球菌GPA2的保藏编号为CGMCC No.27904，于2023年07月14日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。
本发明还提供了一种上述高效发酵大蒜秸秆的复复合菌剂的筛选方法，包括以下步骤：
（1）取新鲜大蒜茎叶上不同位置的叶片混合均匀，加至无菌生理盐水中，超声震荡处理，将所得原液进行梯度稀释，得梯度稀释液；
（2）吸取梯度稀释液均匀涂布于含CaCO3的MRS固体平板上，厌氧培养，然后挑取产生溶钙圈并具有典型乳酸菌特征的单菌落，连续划线培养，直至菌落纯化，置于-80 ℃保存；
（3）经革兰氏染色、形态学观察、分子鉴定，筛选出的菌株分别鉴定为副干酪乳杆菌和乳酸片球菌，编号分别为副干酪乳杆菌GLP1和乳酸片球菌GPA2。
进一步的，步骤（1）中，所述稀释梯度为10-4、10-5、10-6。
进一步的，所述厌氧培养为37℃下培养24 ~ 48 h。
本发明还提供了一种上述复合菌剂在发酵大蒜秸秆中的应用。
进一步的，当采用复合菌剂发酵大蒜时，其活菌数为109cfu/mL，其中：GLP1与GPA2菌量比为1：1，所述复合菌剂发酵大蒜秸秆时，应用剂量为1mL/kg。
本发明的有益效果为：
（1）本发明筛选得到的菌株，能够高效发酵大蒜秸秆，解决了大蒜秸秆的资源化利用问题，解除了大蒜秸秆对农田环境的污染、缓解了农田生态系统的承载压力；
（2）通过本发明筛选的菌株，发酵大蒜秸秆后，达到优良青贮饲料pH标准，能够替代一定量饲料进行使用，提高饲养动物的采食量，发酵大蒜秸秆饲喂后，能够提高蛋白质的利用率，促进脂质代谢，提高动物机体的抗氧化能力和免疫水平，有极大的经济效益、社会效益和生态效益。
保藏信息1
保藏时间：2023年07月14日；
保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；
保藏编号：CGMCC No. 27905；
保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所；
邮政编码：100101；
分类命名：副干酪乳杆菌Lactobacillusparacasei。
保藏信息2
保藏时间：2023年07月14日；
保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；
保藏编号：CGMCC No. 27904；
保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所；
邮政编码：100101；
分类命名：乳酸片球菌Pediococcusacidilactici。
附图说明
图1为实施例1筛选的菌株形貌图；其中：A为GLP1菌落形态图；B为GLP1菌体形态图；C为GPA2菌落形态图；D为GPA2菌体形态图；
图2为实施例1筛选的菌株GLP1的16SrDNA构建的系统发育树；
图3为实施例1筛选的菌株GPA2的16SrDNA构建的系统发育树；
图4为实施例1筛选的菌株抑菌效果图；其中：A为GLP1培养基上清液对大肠杆菌的抑菌效果；B为GLP1培养基上清液对金黄色葡萄球菌的抑菌效果；C为GPA2培养基上清液对金黄色葡萄球菌的抑菌效果；D为GPA2培养基上清液对大肠杆菌的抑菌效果；
图5为实施例1筛选的菌株的耐药图；其中：A为GLP1对部分抗生素的耐药性；B为GPA2对部分抗生素的耐药性；
图6为实施例1筛选的菌株溶血性结果图；
图7为实施例1筛选的菌株的耐酸性对比图；
图8为实施例1筛选的菌株的生长曲线图；
图9为实施例1筛选的菌株的产酸曲线图；
图10为实施例1发酵大蒜秸秆pH变化图。
具体实施方式
下面通过具体的实施例对本发明的技术方案作进一步的解释和说明。
实施例1
取新鲜大蒜茎叶上不同位置的叶片混合均匀，称取10 g加至90 mL 0.85%无菌生理盐水中，超声震荡处理15 min，将所得原液进行梯度稀释，吸取100 μL10-4、10-5、10-6梯度稀释液均匀涂布于含0.3% CaCO3的MRS固体平板上，于37 ℃厌氧培养24 ~ 48 h，挑取产生溶钙圈并具有典型乳酸菌特征的单菌落，连续划线培养3次，直至菌落纯化，并将分离到的单菌落转接至甘油管，置于-80 ℃保存。经革兰氏染色、形态学观察、分子鉴定，选择产溶钙圈最大的一株菌和最占优势的一株菌，分别鉴定为副干酪乳杆菌和乳酸片球菌，编号分别为GLP1和GPA2。
如图1中：A、B所示，GLP1菌体细胞呈杆状、单个或成对排列、无芽孢不运动，革兰氏阳性菌，菌落凸起，圆形，乳白色，边缘整齐。如图1中：C、D所示：GPA2菌体细胞为圆球状、不成链状排列，革兰氏阳性菌，菌落圆形、光滑、呈白色。
实施例2 16S rDNA分子鉴定
细菌基因组DNA提取参照基因组提取试剂盒方法提取待测菌株基因组DNA。以通用引物扩增其16S rDNA片段：
上游引物27F，如SEQ ID NO.1所示：5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’，下游引物1492R, 如SEQ ID NO.2所示：5’-GGCTACCTTGTTACGACTT-3’；
PCR 扩增结束后，将电泳结果正确的PCR产物，送至北京擎科生物有限公司（青岛）进行双向测序分析。利用NCBIGenBank数据库对乳酸菌16S rDNA序列进行BLAST分析，检索与其同源的己知菌种。
PCR扩增体系如表1、表2所示：
表116S rDNA扩增反应体系
表2 16S rDNA基因序列的PCR扩增反应条件
将GLP1和GPA2测序所得16S rDNA序列与GenBank数据库序列进行BLAST比对分析，GLP1与LacticaseibacillusparacaseiOQ449697.1序列相似度为100%，GPA2与Pediococcu sacidilacticiMT463430.1序列相似度为100%，见表3。采用Neighbor-Joining法与相似度较高序列构建系统发育树，结果见图2和图3。
表3 分离菌SQ6 16S rDNA序列鉴定结果
效果实施例
（一）抑菌性能
将筛选的副干酪乳杆菌和乳酸片球菌菌株菌悬液按1%接种于MRS液体培养基中，37℃恒温培养箱孵育24 h后，12,000 r/min离心5 min，取上清液，置于-20℃备用。采用牛津杯法测定，用无菌棉签将活化好的指示菌大肠杆菌（ATCC 25922）和金黄色葡萄球菌（ATCC 25923）菌悬液稀释至1x106cfu/mL，然后分别用无菌棉签浸湿后，沿同一方向涂布LB平板，随后旋转平板60°继续涂布，重复三次，直至涂布均匀。用无菌镊子将灭菌牛津杯平稳置于上述LB固体培养基上，取200 μL制备好的乳酸菌上清液分别加入牛津杯中，置于37℃培养14 h，观察有无抑菌圈产生，并用游标卡尺测量抑菌圈直径大小。
试验结果显示，GLP1和GPA2菌株对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌都有很好的抑制效果（如表4所示），图4中，A为GLP1培养基上清液对大肠杆菌的抑菌效果；B为GLP1培养基上清液对金黄色葡萄球菌的抑菌效果：GLP1抑菌圈直径分别可达23.04 mm和24.19 mm；图4中，B为GLP1培养基上清液对金黄色葡萄球菌的抑菌效果；C为GPA2培养基上清液对金黄色葡萄球菌的抑菌效果；D为GPA2培养基上清液对大肠杆菌的抑菌效果：GPA2抑菌圈直径分别可达21.85 mm和24.72 mm。如图4所示。
表4 GLP1和GPA2的对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌试验结果
（二）抗生素敏感性
将细菌活化后进行梯度稀释，将菌悬液浓度稀释至1x106cfu/ml，用无菌棉签浸入菌悬液后，沿同一方向涂布整个平板，然后旋转平板60°继续涂布，重复三个角度涂布。采用K-B纸片扩散法进行操作，用无菌镊子取药敏纸片，贴于平板表面，用镊尖轻轻按压纸片，使其贴平。将贴好药敏纸片的平板置于37℃恒温培养箱孵育24～48 h，每个试验重复三次。用游标卡尺量取抑菌圈直径，取平均值。根据抑菌圈的大小（不同抗生素的抑菌圈大小标准不同），分为敏感（S）、耐药（R）和中介（I）三个标准。
药敏试验按抑菌圈直径大小作为判定敏感度高低的标准。由表5可见，GLP1菌株对本试验所用10种抗生素中氨苄西林、青霉素、四环素、环丙沙星、克林霉素和红霉素都表现为敏感，对头孢他啶、庆大霉素、卡那霉素和万古霉素表现为耐药。GPA2菌株则对氨苄西林、青霉素、四环素、克林霉素和红霉素表现为敏感，对其余抗生素表现为耐药；具体如图5所示，图5中，A为GLP1对部分抗生素的耐药性；B为GPA2对部分抗生素的耐药性。
表5 GLP1和GPA2菌株抗生素敏感性测定结果
注：“S”代表敏感，“R”代表耐药，“I”代表介于敏感，氨苄西林：R ≤16<I<17 ≤S，庆大霉素：R ≤12<I<15 ≤S，青霉素：R ≤ 20<I<27 ≤S，万古霉素：R ≤9<I<12 ≤S，四环素：R ≤18<I<22≤S，环丙沙星：R ≤15<I<21≤S，克林霉素：R ≤14<I<21≤S，卡那霉素：R≤13<I<18≤S，红霉素：R ≤13<I<23≤S，头孢他啶：R ≤22<I<26≤S。
（三）溶血性
挑取适量待测菌株在含5%绵羊血琼脂板上划线培养，37 ℃孵育48 h，观察菌落周边溶血情况。溶血反应检测了β-溶血(菌落周围有清晰的晕)、α-溶血(菌落周围有绿色晕)或γ-溶血(菌落周围无晕，就是不溶血)。从图6中可知，GLP1和GPA2菌株为γ-溶血，即无溶血性。
（四）耐酸性
菌株对不同pH耐受性有很大差异。由图7可知，菌株存活率随着pH的降低而降低，在pH5.0时，GLP1和GPA2的存活率分别为85.22%和86.71%，当pH降为4.0时，GLP1和GPA2菌株存活率为82.13%和83.61%，当pH降为3.0时两菌株存活率分别降至24.74%和19.29%。
（五）生长曲线与产酸曲线测定
将分离菌株按1%的接种量接入MRS液体培养基中，每隔2 h取样测定其OD值和pH值，分别绘制生长曲线和产酸曲线。结果如图8所示，GLP1菌株生长速率在0~4 h生长缓慢，随后进入对数生长期，并于14 h时OD600达到7.0时进入稳定期，GPA2菌株在在0~4h生长缓慢，在OD600达到1.5时进入对数生长期，并于16 h时OD600达到3.5进入稳定期。
随着GLP1和GPA2菌株的生长，pH值持续下降。如图9所示菌株在生长迟缓期时pH下降缓慢，进入对数生长期，pH值快速下降；进入平台稳定期后，产酸速率降低，pH值下降缓慢后期趋于稳定。GLP1培养液pH 最终降至3.80左右，GPA2培养液pH降至4.21左右。
（六）复合菌大蒜秸秆发酵结果
将本发明筛选得到的菌株进行发酵试验，具体发酵处理组别如表6所示，
表6 发酵试验处理组别
（1）pH测定
分别测定不同处理组发酵初始、5d、10d、16d、26d、60d 时pH值，结果如图10所示。对照组发酵5d内pH迅速下降，5d后呈现下降缓慢并于发酵26 d后逐渐趋于稳定，发酵60 d时pH为4.25，而复合菌发酵组发酵5d内pH较对照组下降速度更快，5 d-10 d下降速率变缓，但仍保持相对较快的下降趋势，并于发酵10 d后pH逐渐趋于稳定，发酵60 d时，复合菌发酵组发酵大蒜秧pH达到了3.99。
（2）发酵指标变化
测定不同处理组的发酵指标，结果如表7所示，与对照组相比，复合菌发酵组乳酸含量极显著升高（p<0.01），至每克发酵大蒜秧乳酸含量达144.1mg/g，pH值、NH3-N含量和乙酸含量都呈现极显著降低（p<0.01），其中复合菌发酵组发酵产物pH为3.99，达到优良青贮饲料pH标准。此外，两组产生的其它有机酸含量并无显著差异。
表7不同处理组饲料的发酵指标（干物质基础）
（3）饲养试验
①不同处理对肉牛采食量与日增重的影响
三组日粮分别为：对照组饲喂牛场原有日粮（CON）、发酵大蒜秸秆替代7.5%粗饲料组（GsA）、发酵大蒜秸秆替代15%粗饲料组（GsB）。由表8可知，各试验组在试验初始和结束时体重均无显著性差异（P>0.05），试验组和对照组的干物质采食量（DMI）及日增重（ADG）无显著性差异（P>0.05）。但随着发酵大蒜秸秆替代量的增加，试验牛的采食量及日增重有增加的趋势。
表8不同处理组试验牛平均日增重和干物质采食量的变化
②血清生化指标
血液生化指标的变化反映了饲喂大蒜秸秆对饲料营养物质吸收和利用以及对动物健康的影响。由表9可知，饲喂发酵大蒜秸秆对肉牛多项血液生化指标有影响。与CON组及7.5%替代组（GsA组）相比，15%替代组（GsB组）血液中白蛋白、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）和总胆固醇（TCHO）含量均呈现极显著降低（P<0.01），而血清总蛋白含量呈现极显著提高（P<0.01）。与对照组和GSB组相比，GSA组尿素氮（BUN）含量极显著升高（P<0.01），但对照组和GSB组无显著差异。血清中葡萄糖（GLU）和尿酸（UA）含量无显著差异（P>0.05），但随着发酵大蒜秸秆添加量的增加分别呈现上升和降低的趋势。血清生化指标结果显示，发酵大蒜秸秆饲喂肉牛提高了蛋白质的利用率，促进脂质代谢。
表9不同处理对试验牛血液生化指标的影响
③血清免疫指标和抗氧化指标的影响
由表10可以看出，饲喂发酵大蒜秸秆对血清免疫指标有一定影响。各组补体C3含量差异显著（P<0.05），随着发酵大蒜秸秆添加量的增加呈先下降后上升。血液中IgA含量差异显著（P<0.05），与对照组相比，GSA组和GSB组IgA含量都显著上升。与对照组相比，GSA组和GSB组TNF-α含量都极显著降低（P<0.01）。各组间IFN-α 含量呈极显著差异（P<0.01），随着发酵大蒜秸秆添加量的增加呈先升高后下降的趋势，GsB组最低。各组IL-6和IL-8含量无显著性差异（P>0.05）。
抗氧化结果指标显示，GSA组与对照组和GSB组相比，GSH和CAT含量都存在显著性差异（P<0.05），随着发酵大蒜秸秆添加量的增加呈现先显著降低后显著升高的趋势。与对照组相比，GSA组和GSB组GSH-Px含量呈显著增加（P<0.05），并随着发酵大蒜秸秆添加量的增加呈上升趋势。
结果表明，饲喂发酵大蒜秸秆提高了肉牛机体的抗氧化能力和免疫水平。
表10 不同处理对试验牛血液免疫指标和抗氧化指标的影响
。
Claims (4)
1.一种高效发酵大蒜秸秆的复合菌剂，其特征在于，所述复合菌剂是由副干酪乳杆菌GLP1和乳酸片球菌GPA2组成；所述副干酪乳杆菌GLP1的保藏编号为CGMCC No.27905，于2023年07月14日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；所述乳酸片球菌GPA2的保藏编号为CGMCC No.27904，于2023年07月14日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。
2.一种如权利要求1所述的复合菌剂在发酵大蒜秸秆中的应用。
3.根据权利要求2所述的复合菌剂在发酵大蒜秸秆中的应用，其特征在于，所述复合菌剂的活菌数为109cfu/mL；复合菌剂中，GLP1与GPA2菌量比为1：1。
4.根据权利要求3所述的复合菌剂在发酵大蒜秸秆中的应用，其特征在于，所述复合菌剂发酵大蒜秸秆时的应用剂量为1mL/kg。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202311162602.2A CN116891822B (zh) | 2023-09-11 | 2023-09-11 | 一种高效发酵大蒜秸秆的复合菌剂及其筛选方法、应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202311162602.2A CN116891822B (zh) | 2023-09-11 | 2023-09-11 | 一种高效发酵大蒜秸秆的复合菌剂及其筛选方法、应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN116891822A CN116891822A (zh) | 2023-10-17 |
| CN116891822B true CN116891822B (zh) | 2023-11-21 |
Family
ID=88312467
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202311162602.2A Active CN116891822B (zh) | 2023-09-11 | 2023-09-11 | 一种高效发酵大蒜秸秆的复合菌剂及其筛选方法、应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN116891822B (zh) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103844002A (zh) * | 2014-03-26 | 2014-06-11 | 金乡县大蒜研究所 | 一种整株大蒜秸秆青贮饲料的制作方法 |
| CN106561973A (zh) * | 2016-10-26 | 2017-04-19 | 广西壮族自治区兽医研究所 | 农作物秸秆青贮饲料发酵剂及其应用 |
| CN107801836A (zh) * | 2017-11-24 | 2018-03-16 | 杭州更蓝生物科技有限公司 | 一种反刍动物用饲料的制作方法及用途 |
-
2023
- 2023-09-11 CN CN202311162602.2A patent/CN116891822B/zh active Active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103844002A (zh) * | 2014-03-26 | 2014-06-11 | 金乡县大蒜研究所 | 一种整株大蒜秸秆青贮饲料的制作方法 |
| CN106561973A (zh) * | 2016-10-26 | 2017-04-19 | 广西壮族自治区兽医研究所 | 农作物秸秆青贮饲料发酵剂及其应用 |
| CN107801836A (zh) * | 2017-11-24 | 2018-03-16 | 杭州更蓝生物科技有限公司 | 一种反刍动物用饲料的制作方法及用途 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN116891822A (zh) | 2023-10-17 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN111534446B (zh) | 罗伊氏乳杆菌及其应用 | |
| CN112779179A (zh) | 一株类肠膜魏斯氏菌及其应用 | |
| CN112391325B (zh) | 一种副干酪乳杆菌及其应用 | |
| CN111690574B (zh) | 一株类肠膜魏斯氏菌及其应用 | |
| CN107058170B (zh) | 一株高效利用低聚木糖的乳酸片球菌bcc-1及其应用 | |
| CN107981034B (zh) | 一株布氏乳杆菌hew-a666及其应用 | |
| CN117683669A (zh) | 一株罗伊氏乳杆菌及其应用 | |
| CN111269849B (zh) | 一种植物乳酸杆菌及其应用 | |
| CN113621536A (zh) | 一种多粘类芽孢杆菌sp1及其应用 | |
| CN112760246A (zh) | 一株类肠膜魏斯氏菌及其应用 | |
| CN108546663B (zh) | 一种猪源卷曲乳杆菌及其应用 | |
| CN109423466B (zh) | 一种复合发酵菌剂及其应用 | |
| CN111676153B (zh) | 一株植物乳杆菌及其在水产发酵饲料中的应用 | |
| CN116622580A (zh) | 一株戊糖片球菌pkc10及其应用 | |
| CN110452849B (zh) | 一种益生植物乳杆菌 | |
| CN116891822B (zh) | 一种高效发酵大蒜秸秆的复合菌剂及其筛选方法、应用 | |
| CN116064324B (zh) | 一株鼠李糖乳杆菌及其培养方法和在防治腹泻和肠炎方面的应用 | |
| CN115651860B (zh) | 凝结芽孢杆菌bc-hyc株及其应用 | |
| CN114891705B (zh) | 一种产酸的民猪源罗伊氏乳杆菌及其培养方法与应用 | |
| CN114908009B (zh) | 一株口粘液乳杆菌pr63及其应用 | |
| CN115386514A (zh) | 枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）SCS-06及其应用 | |
| CN116970513B (zh) | 一株植物乳植杆菌sq6及其应用 | |
| CN110938570B (zh) | 一种多粘类芽孢杆菌Lla-02及其应用 | |
| CN113897312A (zh) | 一种动物饲喂菌剂制备及其应用 | |
| CN111944717B (zh) | 解淀粉芽孢杆菌tl106及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |