CN116814514B - 提高大肠杆菌l-赖氨酸发酵产量的方法 - Google Patents

提高大肠杆菌l-赖氨酸发酵产量的方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种提高大肠杆菌L‑赖氨酸发酵产量的方法，所述方法包括增强大肠杆菌中的dctA基因，获得的基因增强菌株用于L‑赖氨酸发酵生产。本发明首次发现通过增强大肠杆菌中的dctA基因，获得的基因增强菌株可用于提高L‑赖氨酸发酵产量。增强方式可以采用代谢工程领域的常规技术手段，如启动子调控区的改变，增加基因拷贝数，或氨基酸序列的改变。本发明将C4‑二羧酸转运蛋白突变体应用于大肠杆菌发酵生产赖氨酸，其赖氨酸产量明显提升。

Description

提高大肠杆菌L-赖氨酸发酵产量的方法
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体地说，涉及一种提高大肠杆菌L-赖氨酸发酵产量的方法。
背景技术
L-赖氨酸是碱性必需氨基酸，分子式为C6H14N2O2，外观为白色或近乎于白色结晶粉末。L-赖氨酸在210℃变暗，在224.5℃下分解，易溶于水，微溶于醇，不溶于醚。L-赖氨酸广泛应用于动物饲料、医药和食品工业，其中L-赖氨酸约90％用于饲料工业，10％用于食品和医药行业。用于动物饲料添加剂，L-赖氨酸可帮助机体吸收其他氨基酸，从而提高饲料质量。因此，赖氨酸具有广阔的应用前景。
目前，L-赖氨酸最常用的生产方法为微生物发酵法，微生物发酵法具有原料成本低、反应条件温和、容易实现大规模生产等优点。大肠杆菌(Escherichia coli)由于其生长速度快，遗传背景清晰，培养条件简单，代谢工程手段成熟等优点，广泛应用于工业发酵领域，可用于生产L-氨基酸、核苷酸及其他有机酸等。
大肠杆菌在有氧和无氧条件下，均可利用C4-二羧酸(如琥珀酸、延胡索酸和苹果酸)作为碳源和能量来源。在无氧条件下，对C4-二羧酸摄取、交换和外排由三个独立的二羧酸摄取(dcu)系统介导。但在有氧条件下，大肠杆菌摄取C4-二羧酸仅由dctA基因编码的C4-二羧酸转运蛋白介导。目前，尚未发现dctA基因编码的C4-二羧酸转运蛋白表达增强对大肠杆菌生产L-赖氨酸有影响。
发明内容
本发明的目的是提供一种提高大肠杆菌L-赖氨酸发酵产量的方法。
发明人在多年研究中发现，对C4-二羧酸转运蛋白特定位置的氨基酸置换可以增强dctA的表达，进而提高赖氨酸产量。发明人进一步拓展，发现其他方式的强化也能起到类似的效果，从而完成本发明。
为了实现本发明目的，第一方面，本发明提供一种提高大肠杆菌L-赖氨酸发酵产量的方法，所述方法包括：增强大肠杆菌中的dctA基因，获得的基因增强菌株用于L-赖氨酸发酵生产。
本发明中，dctA基因编码的C4-二羧酸转运蛋白在NCBI上的参考序列编号为WP_000858214.1。
所述增强的途径可选自以下1)～6)，或任选的组合：
1)通过导入具有所述基因的质粒而增强；
2)通过增加染色体上所述基因的拷贝数而增强；
3)通过改变染色体上所述基因的启动子序列而增强；
4)通过将强启动子(如Ptac)与所述基因可操作地连接而增强；
5)通过导入增强子而增强；
6)通过在dctA基因上引入突变而增强；其中，引入的突变导致dctA基因编码蛋白的第311位氨基酸由M突变为其他氨基酸(如H、I、E、W或K)。
第二方面，本发明提供一种产L-赖氨酸的大肠杆菌工程菌，所述工程菌是将大肠杆菌dctA基因的启动子替换成强启动子Ptac得到的。
第三方面，本发明提供C4-二羧酸转运蛋白突变体，所述突变体包含如下突变位点①～⑤中的任一种：
①C4-二羧酸转运蛋白第311位氨基酸由M突变为H；
②C4-二羧酸转运蛋白第311位氨基酸由M突变为I；
③C4-二羧酸转运蛋白第311位氨基酸由M突变为E；
④C4-二羧酸转运蛋白第311位氨基酸由M突变为W；
⑤C4-二羧酸转运蛋白第311位氨基酸由M突变为K；
第四方面，本发明提供编码所述突变体的核酸分子或含有所述核酸分子的生物材料，所述生物材料包括但不限于重组DNA、表达盒、转座子、质粒载体、病毒载体或工程菌。
第五方面，本发明提供编码所述突变体的核酸分子或含有所述核酸分子的生物材料的以下任一应用：
(1)用于L-赖氨酸的发酵生产；
(2)用于提高L-赖氨酸的发酵产量；
(3)用于构建产L-赖氨酸的基因工程菌。
用于构建基因工程菌的出发菌株为埃希氏菌属(Escherichia)中的细菌，优选大肠杆菌(Escherichia coli)，更优选保藏编号为CGMCC No.22648的大肠埃希氏菌MHZ-0914。
大肠埃希氏菌(Escherichia coli)MHZ-0914现已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101，保藏编号CGMCC No.22648，保藏日期2021年6月1日。
第六方面，本发明提供一种产L-赖氨酸的大肠杆菌工程菌，所述工程菌是利用基因工程手段，在大肠杆菌dctA基因中引入如下①～⑤中的任一突变得到的：
①引入的突变导致dctA基因编码蛋白的第311位氨基酸由M突变为H；
②引入的突变导致dctA基因编码蛋白的第311位氨基酸由M突变为I；
③引入的突变导致dctA基因编码蛋白的第311位氨基酸由M突变为E；
④引入的突变导致dctA基因编码蛋白的第311位氨基酸由M突变为W；
⑤引入的突变导致dctA基因编码蛋白的第311位氨基酸由M突变为K。
引入突变的方法可以选自诱变、定点突变、同源重组等中的至少一种。
第七方面，本发明提供所述工程菌在发酵生产L-赖氨酸或提高L-赖氨酸发酵产量中的应用。
借由上述技术方案，本发明至少具有下列优点及有益效果：
本发明首次发现通过增强大肠杆菌中的dctA基因，获得的基因增强菌株可用于提高L-赖氨酸发酵产量。增强方式可以采用代谢工程领域的常规技术手段，如启动子调控区的改变，增加基因拷贝数，或氨基酸序列的改变。本发明将C4-二羧酸转运蛋白突变体应用于大肠杆菌发酵生产赖氨酸，其赖氨酸产量明显提升。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。若未特别指明，实施例均按照常规实验条件，如Sambrook等分子克隆实验手册(Sambrook J&Russell DW,Molecular Cloning:a Laboratory Manual,2001)，或按照制造厂商说明书建议的条件。
以下实施例中涉及的引物名称及序列如表1所示。
表1引物序列
实施例1突变基因dctAM311H的重组菌株构建
(1)pTargetF-N20(dctAM311H)质粒及Donor DNA的构建
步骤1：使用pTF-dctA-sgRNA-F/pTF-dctA-sgRNA-R为引物，以质粒pTargetF为模板(参见Multigene Editing in the Escherichiacoli Genome via the CRISPR-Cas9System，Jiang Y,Chen B,et al.Appl.EnvironMicrobiol，2015)，扩增出带有N20的pTF线性质粒，使用无缝组装ClonExpress试剂盒将此线性质粒37℃进行组装，随后转化Trans1-T1感受态细胞，获得质粒pTargetF-N20(dctA M311H)，PCR鉴定及测序验证；步骤2：以重组大肠杆菌MG1655(重组大肠杆菌MG1655由中国科学院上海生命科学研究院杨晟研究员惠赠，重组大肠杆菌MG1655可参见Hayashi K,Morooka N,Yamamoto Y,Fujita K,Isono K,ChoiS,Ohtsubo E,Baba T,Wanner BL,Mori H,Horiuchi T.Highly accurate genomesequences of Escherichia coli K-12strains MG1655 and W3110.Mol SystBiol.2006；2:2006.0007.doi:10.1038/msb4100049.Epub 2006Feb 21.PMID:16738553；PMCID:PMC1681481.)基因组为模板，选用dctAM311-UF/dctAM311H-UR引物对，扩增出上游同源臂①，选用dctAM311H-DF/dctAM311-DR引物对，扩增出下游同源臂②，以①、②为模板，选用dctAM311-UF/dctAM311-DR引物对，扩增出Donor DNA。
(2)感受态细胞制备及电转化
步骤1：将pCas质粒(参见Multigene Editing in the Escherichia coliGenomevia the CRISPR-Cas9 System,Jiang Y,Chen B,et al.Appl.EnvironMicrobiol，2015)电转入CGMCC No.22648感受态细胞中(转化方法及感受态制备方法均参照《分子克隆III》)；步骤2：挑取单菌落于5mL含卡那霉素和和终浓度为10mM阿拉伯糖的LB试管中，30℃，200r/min培养至OD650为0.4后制备电转感受态细胞(感受态制备方法参照《分子克隆III》)。步骤3：将(1)中构建得到的pTargetF-N20 dctA(M311H)质粒和Donor DNA同时电转入带有pCas感受态细胞中(电转条件：2.5kV，200Ω，25μF)，涂布于含壮观霉素和卡那霉素的LB平板上，30℃静置培养至单菌落可见。
(3)重组菌株验证
步骤1：使用引物对dctAM311H-F1/dctAM311-R对上述单菌落进行菌落PCR验证；步骤2：将PCR鉴定正确的菌株用引物对dctAM311-F/dctAM311-R扩增，扩增产物送测序。
(4)构建相关质粒丢失
步骤1：挑取测序验证正确的单菌落接种于5mL含卡那霉素及终浓度为0.5mM IPTG的LB试管中，30℃过夜培养后划线于含卡那霉素的LB平板上；步骤2：挑取单菌落对点于含卡那霉素、壮观霉素LB平板和只含卡那霉素的LB平板上，30℃过夜培养，若在含卡那霉素、壮观霉素的LB平板上不能生长，在卡那霉素的LB平板上生长，表明pTargetF-N20质粒已丢失；步骤3：挑取pTargetF-N20质粒丢失的阳性菌落，接种于无抗LB试管中，42℃培养8h后划线于LB平板上，37℃过夜培养；步骤4：挑取单菌落对点于含卡那霉素LB平板和无抗LB平板上，若在含卡那霉素的LB平板上不能生长，在无抗LB平板上生长，表明pCas质粒丢失，得到MHZ-0918-1(dctAM311H)菌株(所含突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示)。
实施例2突变基因dctAM311I的重组菌株构建
参照实施例1的方法，获得C4-二羧酸转运蛋白基因311位氨基酸突变为异亮氨酸的重组菌株，菌株命名为MHZ-0918-2(所含突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示)。
实施例3突变基因dctAM311E的重组菌株构建
参照实施例1的方法，获得C4-二羧酸转运蛋白基因311位氨基酸突变为谷氨酸的重组菌株，菌株命名为MHZ-0918-3(所含突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示)。
实施例4突变基因dctAM311W的重组菌株构建
参照实施例1的方法，获得C4-二羧酸转运蛋白基因311位氨基酸突变为色氨酸的重组菌株，菌株命名为MHZ-0918-4(所含突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示)。
实施例5突变基因dctAM311K的重组菌株构建
参照实施例1的方法，获得C4-二羧酸转运蛋白基因311位氨基酸突变为赖氨酸的重组菌株，菌株命名为MHZ-0918-5(所含突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示)。
实施例6赖氨酸发酵实验
种子活化培养基：蛋白胨10g/L，NaCl 10g/L，酵母粉5g/L，琼脂粉18g/L，调节pH至7.0。
种子培养基：葡萄糖20g/L，硫酸铵4g/L，玉米浆2.0g/L，磷酸二氢钾3g/L，七水硫酸镁0.4g/L，硫酸铁0.01g/L，硫酸锰0.01g/L，调节pH至7.0。
发酵培养基：葡萄糖60g/L，糖蜜10g/L，硫酸铵40g/L，玉米浆10g/L，磷酸二氢钾1.6g/L，七水硫酸镁1.0g/L，硫酸铁0.03g/L，硫酸锰0.03g/L，碳酸钙25g/L，调节pH至7.0。
(1)种子活化：从冻存管中取待验证菌株，在种子活化培养基上划线活化，37℃培养12h；
(2)种子培养：挑取平板活化种子1环接至装有20mL种子培养基的500mL三角瓶中，33℃，220r/min振荡培养7h；
(3)发酵培养：将2mL种子液接种至装有30mL发酵培养基的500mL三角瓶中，37℃、220r/min振荡培养12h，每株菌做三个平行。
(4)取2mL发酵液离心(12000rpm，2min)，收集上清液，用HPLC检测重组菌与对照菌发酵液中的L-赖氨酸产量，每株菌做三个平行，计算平均值，其浓度如下表2所示。取100μl发酵液稀释适当倍数，使用分光光度计在波长600处检测OD，每株菌做三个平行，计算平均值，检测到的OD600如表2所示。
表2重组菌株的赖氨酸产量和生长检测
菌株 L-赖氨酸(g/L) 糖酸转化率％ OD600
CGMCC No.22648 18.7 28.3 15.2
MHZ-0918-1(dctAM311H) 22.1 33.4 15.1
MHZ-0918-2(dctAM311I) 19.9 32.1 15.0
MHZ-0918-3(dctAM311E) 21.1 32.2 15.3
MHZ-0918-4(dctAM311W) 23.2 33.7 15.2
MHZ-0918-5(dctAM311K) 19.4 29.4 15.1
发酵结果表明，dctA基因第311位氨基酸由甲硫氨酸(M)分别突变为组氨酸(H)、异亮氨酸(I)、谷氨酸(E)、色氨酸(W)、赖氨酸(K)后，最终OD与出发菌株相当，但是赖氨酸产量均有提升，且突变为色氨酸(W)后效果更好，MHZ-0918-4(dctAM311W)重组菌株L-赖氨酸产量较出发菌株提高4.5g/L，糖酸转化率较出发菌株提高5.4％。
基于上述突变体的检测结果，推测dctA基因的其他增强方式也可能具有提高赖氨酸产量和转化率的作用，因此进一步进行了dctA基因的其他强化改造方式。
实施例7启动子增强的重组菌株构建
参照实施例1的方法，获得C4-二羧酸转运蛋白基因dctA的启动子由强启动子Ptac替换的重组菌株，菌株命名为MHZ-0918-6。
性能测试：参照实施例6的方法对所构建的重组菌株的性能进行测试，检测得到的赖氨酸产量和生长如表3所示。
表3重组菌株的赖氨酸产量和生长检测
菌株 L-赖氨酸(g/L) 糖酸转化率％ OD600
CGMCC No.22648 18.7 28.3 15.2
MHZ-0918-6 23.7 34.0 15.1
发酵结果表明，dctA的启动子由强启动子Ptac替换后，赖氨酸产量得到提升，重组菌株L-赖氨酸产量比出发菌株高5.0g/L，糖酸转化率提高5.7％。该实施例进一步说明通过增强dctA的表达可以促进大肠杆菌生产赖氨酸。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之做一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
序列表
<110> 胡丹
<120> 提高大肠杆菌L-赖氨酸发酵产量的方法
<130> KHP211120025.4
<160> 5
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 428
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
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1 5 10 15
Ile Ala Ile Gly Ile Leu Leu Gly His Phe Tyr Pro Glu Ile Gly Glu
20 25 30
Gln Met Lys Pro Leu Gly Asp Gly Phe Val Lys Leu Ile Lys Met Ile
35 40 45
Ile Ala Pro Val Ile Phe Cys Thr Val Val Thr Gly Ile Ala Gly Met
50 55 60
Glu Ser Met Lys Ala Val Gly Arg Thr Gly Ala Val Ala Leu Leu Tyr
65 70 75 80
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85 90 95
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100 105 110
Asp Ala Lys Ala Val Ala Val Tyr Ala Asp Gln Ala Lys Asp Gln Gly
115 120 125
Ile Val Ala Phe Ile Met Asp Val Ile Pro Ala Ser Val Ile Gly Ala
130 135 140
Phe Ala Ser Gly Asn Ile Leu Gln Val Leu Leu Phe Ala Val Leu Phe
145 150 155 160
Gly Phe Ala Leu His Arg Leu Gly Ser Lys Gly Gln Leu Ile Phe Asn
165 170 175
Val Ile Glu Ser Phe Ser Gln Val Ile Phe Gly Ile Ile Asn Met Ile
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Met Arg Leu Ala Pro Ile Gly Ala Phe Gly Ala Met Ala Phe Thr Ile
195 200 205
Gly Lys Tyr Gly Val Gly Thr Leu Val Gln Leu Gly Gln Leu Ile Ile
210 215 220
Cys Phe Tyr Ile Thr Cys Ile Leu Phe Val Val Leu Val Leu Gly Ser
225 230 235 240
Ile Ala Lys Ala Thr Gly Phe Ser Ile Phe Lys Phe Ile Arg Tyr Ile
245 250 255
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260 265 270
Leu Pro Arg Met Leu Asp Lys Met Glu Lys Leu Gly Cys Arg Lys Ser
275 280 285
Val Val Gly Leu Val Ile Pro Thr Gly Tyr Ser Phe Asn Leu Asp Gly
290 295 300
Thr Ser Ile Tyr Leu Thr His Ala Ala Val Phe Ile Ala Gln Ala Thr
305 310 315 320
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325 330 335
Leu Leu Ser Ser Lys Gly Ala Ala Gly Val Thr Gly Ser Gly Phe Ile
340 345 350
Val Leu Ala Ala Thr Leu Ser Ala Val Gly His Leu Pro Val Ala Gly
355 360 365
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370 375 380
Leu Thr Asn Leu Val Gly Asn Gly Val Ala Thr Ile Val Val Ala Lys
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
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Trp Val Lys Glu Leu Asp His Lys Lys Leu Asp Asp Val Leu Asn Asn
405 410 415
Arg Ala Pro Asp Gly Lys Thr His Glu Leu Ser Ser
420 425
<210> 4
<211> 428
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
Met Lys Thr Ser Leu Phe Lys Ser Leu Tyr Phe Gln Val Leu Thr Ala
1 5 10 15
Ile Ala Ile Gly Ile Leu Leu Gly His Phe Tyr Pro Glu Ile Gly Glu
20 25 30
Gln Met Lys Pro Leu Gly Asp Gly Phe Val Lys Leu Ile Lys Met Ile
35 40 45
Ile Ala Pro Val Ile Phe Cys Thr Val Val Thr Gly Ile Ala Gly Met
50 55 60
Glu Ser Met Lys Ala Val Gly Arg Thr Gly Ala Val Ala Leu Leu Tyr
65 70 75 80
Phe Glu Ile Val Ser Thr Ile Ala Leu Ile Ile Gly Leu Ile Ile Val
85 90 95
Asn Val Val Gln Pro Gly Ala Gly Met Asn Val Asp Pro Ala Thr Leu
100 105 110
Asp Ala Lys Ala Val Ala Val Tyr Ala Asp Gln Ala Lys Asp Gln Gly
115 120 125
Ile Val Ala Phe Ile Met Asp Val Ile Pro Ala Ser Val Ile Gly Ala
130 135 140
Phe Ala Ser Gly Asn Ile Leu Gln Val Leu Leu Phe Ala Val Leu Phe
145 150 155 160
Gly Phe Ala Leu His Arg Leu Gly Ser Lys Gly Gln Leu Ile Phe Asn
165 170 175
Val Ile Glu Ser Phe Ser Gln Val Ile Phe Gly Ile Ile Asn Met Ile
180 185 190
Met Arg Leu Ala Pro Ile Gly Ala Phe Gly Ala Met Ala Phe Thr Ile
195 200 205
Gly Lys Tyr Gly Val Gly Thr Leu Val Gln Leu Gly Gln Leu Ile Ile
210 215 220
Cys Phe Tyr Ile Thr Cys Ile Leu Phe Val Val Leu Val Leu Gly Ser
225 230 235 240
Ile Ala Lys Ala Thr Gly Phe Ser Ile Phe Lys Phe Ile Arg Tyr Ile
245 250 255
Arg Glu Glu Leu Leu Ile Val Leu Gly Thr Ser Ser Ser Glu Ser Ala
260 265 270
Leu Pro Arg Met Leu Asp Lys Met Glu Lys Leu Gly Cys Arg Lys Ser
275 280 285
Val Val Gly Leu Val Ile Pro Thr Gly Tyr Ser Phe Asn Leu Asp Gly
290 295 300
Thr Ser Ile Tyr Leu Thr Trp Ala Ala Val Phe Ile Ala Gln Ala Thr
305 310 315 320
Asn Ser Gln Met Asp Ile Val His Gln Ile Thr Leu Leu Ile Val Leu
325 330 335
Leu Leu Ser Ser Lys Gly Ala Ala Gly Val Thr Gly Ser Gly Phe Ile
340 345 350
Val Leu Ala Ala Thr Leu Ser Ala Val Gly His Leu Pro Val Ala Gly
355 360 365
Leu Ala Leu Ile Leu Gly Ile Asp Arg Phe Met Ser Glu Ala Arg Ala
370 375 380
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385 390 395 400
Trp Val Lys Glu Leu Asp His Lys Lys Leu Asp Asp Val Leu Asn Asn
405 410 415
Arg Ala Pro Asp Gly Lys Thr His Glu Leu Ser Ser
420 425
<210> 5
<211> 428
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
Met Lys Thr Ser Leu Phe Lys Ser Leu Tyr Phe Gln Val Leu Thr Ala
1 5 10 15
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20 25 30
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35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
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100 105 110
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180 185 190
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195 200 205
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405 410 415
Arg Ala Pro Asp Gly Lys Thr His Glu Leu Ser Ser
420 425

Claims (9)

1.一种提高大肠杆菌L-赖氨酸发酵产量的方法，其特征在于，所述方法包括：增强大肠杆菌中的dctA基因，获得的基因增强菌株用于L-赖氨酸发酵生产；
其中，dctA基因编码的C4-二羧酸转运蛋白在NCBI上的参考序列编号为WP_000858214.1；
所述增强的途径为：通过在dctA基因上引入突变而增强；其中，引入的突变导致dctA基因编码蛋白的第311位氨基酸由M突变为H、I、E或W。
2.C4-二羧酸转运蛋白突变体，其特征在于，所述突变体为如下突变位点①~④中的任一种：
①C4-二羧酸转运蛋白第311位氨基酸由M突变为H；
②C4-二羧酸转运蛋白第311位氨基酸由M突变为I；
③C4-二羧酸转运蛋白第311位氨基酸由M突变为E；
④C4-二羧酸转运蛋白第311位氨基酸由M突变为W；
其中，C4-二羧酸转运蛋白在NCBI上的参考序列编号为WP_000858214.1。
3.编码权利要求2所述突变体的核酸分子或含有所述核酸分子的生物材料，所述生物材料为重组DNA、表达盒、转座子、质粒载体、病毒载体或工程菌。
4.编码权利要求2所述突变体的核酸分子或权利要求3所述生物材料的以下任一应用：
（1）用于L-赖氨酸的发酵生产；
（2）用于提高L-赖氨酸的发酵产量；
（3）用于构建产L-赖氨酸的基因工程菌。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，用于构建基因工程菌的出发菌株为埃希氏菌属（Escherichia）中的细菌。
6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，用于构建基因工程菌的出发菌株为大肠杆菌。
7.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，用于构建基因工程菌的出发菌株为保藏编号为CGMCC No. 22648的大肠埃希氏菌（Escherichia coli）MHZ-0914。
8.产L-赖氨酸的大肠杆菌工程菌，其特征在于，所述工程菌是利用基因工程手段，在大肠杆菌dctA基因中引入如下①~④中的任一突变得到的：
①引入的突变导致dctA基因编码蛋白的第311位氨基酸由M突变为H；
②引入的突变导致dctA基因编码蛋白的第311位氨基酸由M突变为I；
③引入的突变导致dctA基因编码蛋白的第311位氨基酸由M突变为E；
④引入的突变导致dctA基因编码蛋白的第311位氨基酸由M突变为W；
其中，dctA基因编码蛋白在NCBI上的参考序列编号为WP_000858214.1。
9.权利要求8所述的工程菌在发酵生产L-赖氨酸或提高L-赖氨酸发酵产量中的应用。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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CN107893089A (zh) * 2016-10-03 2018-04-10 味之素株式会社 用于生产l‑氨基酸的方法

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