CN116790422A - 一株暹罗芽孢杆菌及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于植物病害防治技术领域，具体涉及一株暹罗芽孢杆菌及其应用。本发明公开了一株暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis)KD50，保藏号为CCTCC NO:M2023289，保藏日期：2023年3月10日；保藏单位：中国典型培养物保藏中心，保藏地址:中国.武汉.武汉大学，试验发现其对苹果盘二孢菌(Marssonina mali)、核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)和腐霉菌(Pythium aphanidermatum)的防治效果能达到80％以上，为80.39％、100％、80.59％，可用于微生物防治技术领域。
Description
技术领域
本发明属于植物病害防治技术领域，具体涉及一株暹罗芽孢杆菌及其应用。
背景技术
微生物防治指的是在微生物的作用下通过寄生、溶菌、激活抗性等多种方式达到抑制病原物活性的病害防治方法。以往大规模滥用化学农药，不但未从源头上很好地解决植物病害问题，反而带来了诸多不良问题，譬如环境污染加重、病菌抗药性增强等，严重影响了人们的生活。微生物防治具有资源充足、投入低、无污染等多重优势。所以，微生物农药发展越来越受到人们的关注，具有广阔的前景。
暹罗芽孢杆菌Bacillus siamensis又译为西姆芽孢杆菌，于2010年被刊物International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology收录为有效种名，属芽孢杆菌科芽孢杆菌属。研究表明，芽胞杆菌属能在极端条件下生存，可用于防治植物病害，分解原油，降解土壤中化合物等，有着广泛的应用前景。暹罗芽孢杆菌对常见病害真菌具有强大的拮抗能力，尤其对细极链格孢菌Alternaria tenuissima的相对拮抗效率高达85.3％；对镰刀菌属的禾谷镰刀菌Fusarium graminearum、茄病镰刀菌F.solani、尖孢镰刀菌F.oxysporum具有80％左右的拮抗作用；对青枯假单胞杆菌Pseudomonassolanacearum、葡萄座腔菌Botryosphaeria dothidea、灰葡萄孢Botrytis cinerea等都有高拮抗作用；对火龙果炭疽病菌Colletotrichum gloeosporioides、棉花立枯病菌Rhizoctonia solani、白绢病菌Sclerotium rolfsii、梨黑斑病菌Alternariakikuchiana、辣椒疫霉Phytophthora capsici、立枯丝核菌Rhizoctonia solani、水稻稻瘟病菌Magnaporthe grisea、荔枝霜疫霉菌Peronophythora litchii也表现出较好的拮抗活性。寻找暹罗芽孢杆菌在微生物防治新方向对减少化学农药的使用显得尤为重要。
发明内容
为了减少化学农药的使用和寻找暹罗芽孢杆菌在微生物防治新方向，本发明公开了以下技术方案：
一株暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis)KD50，所述暹罗芽孢杆菌(Bacillussiamensis)KD50的保藏号为CCTCC NO:M 2023289，保藏日期：2023年3月10日；保藏单位：中国典型培养物保藏中心，保藏地址:中国.武汉.武汉大学。
一种含有暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis)KD50的悬浮液，所述暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis)KD50的悬浮液中暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis)KD50的含量为35亿/ml。
优选地，所述悬浮液的制备方法为：
(1)菌株活化：将暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis)KD50接种于LB固体培养基上，于28℃下培养1-2天；
(2)发酵种子培养：将上述活化菌株接种于液体培养基中，在33-39℃条件下在摇床中170-200r/min振荡培养24h，制得暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis)KD50种子液；
(3)发酵：将暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis)KD50种子液接入发酵培养基中，在33-39℃条件下在摇床中170-200r/min振荡培养24-48h，制得暹罗芽孢杆菌(Bacillussiamensis)KD50的悬浮液。
优选地，所述步骤(2)中液体培养基为：2％豆粕、1％酵母粉和1％七水硫酸镁。
优选地，所述步骤(3)中发酵培养基为：2％豆粕、1％酵母粉和1％七水硫酸镁。
一种暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis)KD50或含有暹罗芽孢杆菌(Bacillussiamensis)KD50的悬浮液在抑制病原菌生长中的应用。
优选地，所述病原菌为以下所列至少一种：指状青霉(Penicillium digitatum)、白地霉(Geotrichum candidum)、意大利青霉(Penicillium italicum)、立枯丝核菌(Rhizoctonia solani Kola)、茄匐柄霉(Stemphylium solani Weber)、轮枝镰刀菌(Fusarium verticillioide)、层出镰刀菌(Fusarium proliferatum(matsush.)Nirenberg)、藤仓镰刀菌(Fusarium fujikuroi)、多主棒孢霉菌(Corynesporacassiicola)、苹果盘二孢菌(Marssonina mali)、核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)、葡萄座腔菌(Botryosphaeria dothidea)、蔷薇双壳菌(Gaeumannomyces graminsis)、致病疫霉菌(Phytophthora infestans)、人参锈腐病菌(Cylindrocarpon)、拟盘多毛孢(Neopestalotiopsis formicarum)、胶孢炭病菌(Colletotrichum gloeosporioides)、腐霉菌(Pythium aphanidermatum)。
一种暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis)KD50或含有暹罗芽孢杆菌(Bacillussiamensis)KD50的悬浮液在制备病原菌生长抑制剂中的应用。
优选地，所述病原菌为以下所列至少一种：指状青霉(Penicillium digitatum)、白地霉(Geotrichum candidum)、意大利青霉(Penicillium italicum)、立枯丝核菌(Rhizoctonia solani Kola)、茄匐柄霉(Stemphylium solani Weber)、轮枝镰刀菌(Fusarium verticillioide)、层出镰刀菌(Fusarium proliferatum(matsush.)Nirenberg)、藤仓镰刀菌(Fusarium fujikuroi)、多主棒孢霉菌(Corynesporacassiicola)、苹果盘二孢菌(Marssonina mali)、核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)、葡萄座腔菌(Botryosphaeria dothidea)、蔷薇双壳菌(Gaeumannomyces graminsis)、致病疫霉菌(Phytophthora infestans)、人参锈腐病菌(Cylindrocarpon)、拟盘多毛孢(Neopestalotiopsis formicarum)、胶孢炭病菌(Colletotrichum gloeosporioides)、腐霉菌(Pythium aphanidermatum)。
暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis)KD50或暹罗芽孢杆菌(Bacillussiamensis)KD5悬浮液制备防治柑橘指状青霉、柑橘白地霉、柑橘意大利青霉、烟草靶斑病、番茄叶斑病、茄子轮枝镰刀LA-1、茄子层出镰刀LQ-1、茄子藤仓镰刀菌、黄瓜靶斑病、苹果褐斑病、油菜菌核病、山核桃干腐病、小麦全蚀病、马铃薯晚疫病、人参锈腐病、椰子灰斑病、铁皮石斛炭疽病、玉米茎腐病的药剂中的应用。
一种生防种衣剂，所述生防种衣剂中包含暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis)KD50或暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis)KD50的悬浮液。
优选地，所述生防种衣剂还包含2.0％增稠剂、4.0％防冻剂、0.16％防腐剂、0.2％消泡剂、0.5％的紫外保护剂、1.0％警戒色、3.0-5.0％的成膜剂。
优选地，所述增稠剂为黄原胶；所述防冻剂为乙二醇、所述防腐剂为卡松、所述消泡剂为二甲基硅油、所述紫外保护剂为脱脂乳粉、所述警戒色为甜菜红、所述成膜剂为聚乙烯吡咯烷酮一种暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis)KD50或暹罗芽孢杆菌(Bacillussiamensis)KD50的悬浮液制备生防种衣剂中的应用。
一种暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis)KD50或暹罗芽孢杆菌(Bacillussiamensis)KD50的悬浮液在制备生保鲜剂中的应用。
一种暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis)KD50或暹罗芽孢杆菌(Bacillussiamensis)KD50的悬浮液在制备悬浮生物农药中的应用
一种暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis)KD50或暹罗芽孢杆菌(Bacillussiamensis)KD50的悬浮液在制备水溶性生物有机肥中的应用。
本发明的有益效果：
本发明公开了一株暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis)KD50，保藏号为CCTCCNO:M 2023289，保藏日期：2023年3月10日；保藏单位：中国典型培养物保藏中心，保藏地址:中国.武汉.武汉大学，试验发现其对苹果盘二孢菌(Marssonina mali)、核盘菌(Sclerotiniasclerotiorum)和腐霉菌(Pythium aphanidermatum)的防治效果能达到80％以上，为80.39％、100％、80.59％，可用于微生物防治技术领域。
附图说明
图1为暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis)KD50的进化树分析图；
图2为暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis)KD50的菌落图；
图3为暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis)KD50对植物病原菌的拮抗结果；
图4为暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis)KD50对植物病原菌的拮抗结果；
图5为暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis)KD50对植物病原菌的拮抗结果；
图6为暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis)KD50对植物病原菌的拮抗结果。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明涉及的暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis)KD50于2023年3月10日在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏地址:中国.武汉.武汉大学，保藏编号为CCTCCNO:M2023289。
以下实施例中所用的菌种培养基如下：
暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis)KD50种子和发酵培养基：2％豆粕、1％酵母粉和1％七水硫酸镁，最后定容至1000mL，pH 7.3±0.2，高压灭菌(121℃、30min)
LB固体培养基(g/L)：胰蛋白胨10g/L，酵母提取物5g/L，氯化钠10g/L，琼脂粉15g/L，加水溶解，最后定容至1000mL，pH7.0±0.2，高压灭菌(121℃、30min)。
PDA固体培养基(g/L)：马铃薯浸粉6g，葡萄糖20g，琼脂20g，加水溶解，最后定容至1000mL，pH 5.6±0.2，高压灭菌(121℃、30min)。
实施例1暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis)KD50菌株的鉴定和悬浮液的制备
(1)鉴定
本发明的暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis)KD50进行16SrRNA基因扩增，PCR产物送测序后获得的基因序列(16SrRNA基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，cctcaccgacttcgggtgttacaaactctcgtggtgtgacgggcggtgtgtacaaggcccgggaacgtattcaccgcggcatgctgatccgcgattactagcgattccagcttcacgcagtcgagttgcagactgcgatccgaactgagaacagatttgtgggattggcttaacctcgcggtttcgctgccctttgttctgtccattgtagcacgtgtgtagcccaggtcataaggggcatgatgatttgacgtcatccccaccttcctccggtttgtcaccggcagtcaccttagagtgcccaactgaatgctggcaactaagatcaagggttgcgctcgttgcgggacttaacccaacatctcacgacacgagctgacgacaaccatgcaccacctgtcactctgcccccgaaggggacgtcctatctctaggattgtcagaggatgtcaagacctggtaaggttcttcgcgttgcttcgaattaaaccacatgctccaccgcttgtgcgggcccccgtcaattcctttgagtttcagtcttgcgaccgtactccccaggcggagtgcttaatgcgttagctgcagcactaaggggcggaaaccccctaacacttagcactcatcgtttacggcgtggactaccagggtatctaatcctgttcgctccccacgctttcgctcctcagcgtcagttacagaccagagagtcgccttcgccactggtgttcctccacatctctacgcatttcaccgctacacgtggaattccactctcctcttctgcactcaagttccccagtttccaatgaccctccccggttgagccgggggctttcacatcagacttaagaaaccgcctgcgagccctttacgcccaataattccggacaacgcttgccacctacgtattaccgcggctgctggcacgtagttagccgtggctttctggttaggtaccgtcaaggtgccgccctatttgaacggcacttgttcttccctaacaacagagctttacgatccgaaaaccttcatcactcacgcggcgttgctccgtcagactttcgtccattgcggaagattccctactgctgcctcccgtaggagtctgggccgtgtctcagtcccagtgtggccgatcaccctctcaggtcggctacgcatcgtcgccttggtgagccgttacctcaccaactagctaatgcgccgcgggtccatctgtaagtggtagccgaagccaccttttatgtctgaaccatgcggttcagacaaccatccggtattagccccggtttcccggagttatcccagtcttacaggcaggttacccacgtgttactcacccgtccgccgctaacatcagggagcaagctcccat)在NCBI中进行比对分析，明确该菌株的分类地位。测序结果在NCBI网站上进行BLAST比对，使用MEGA6.0构建暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis)KD50的系统发育树，系统发育树结果见图1，暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis)KD50的菌落图如图2所示；
(2)悬浮液的制备
暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis)KD50悬浮液的制备方法为：
(1)菌株活化：将暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis)KD50接种于LB固体培养基上，于28℃下培养1-2天；
(2)发酵种子培养：将上述活化菌株接种于液体培养基中，在33-39℃条件下在摇床中170-200r/min振荡培养24h，制得暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis)KD50种子液；
(3)发酵：将暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis)KD50种子液按接种量为0.5-1％接入发酵培养基中，在33-39℃条件下在摇床中170-200r/min振荡培养24-48h，制得暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis)KD50的悬浮液，悬浮液含有暹罗芽孢杆菌(Bacillussiamensis)KD50的菌体数为35亿/ml。
实施例2暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis)KD50对18种植物病原菌的拮抗实验
采用平板对峙法：将指状青霉(Penicillium digitatum)、白地霉(Geotrichumcandidum)、意大利青霉(Penicillium italicum)、立枯丝核菌(Rhizoctoniasolani Kola)、茄匐柄霉(Stemphylium solani Weber)、轮枝镰刀菌(Fusariumverticillioide)、层出镰刀菌(Fusarium proliferatum(matsush.)Nirenberg)、藤仓镰刀菌(Fusarium fujikuroi)、多主棒孢霉菌(Corynespora cassiicola)、苹果盘二孢菌(Marssonina mali)、核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)、葡萄座腔菌(Botryosphaeriadothidea)、蔷薇双壳菌(Gaeumannomyces graminsis)、致病疫霉菌(Phytophthorainfestans)、人参锈腐病菌(Cylindrocarpon)、拟盘多毛孢(Neopestalotiopsisformicarum)、胶孢炭病菌(Colletotrichum gloeosporioides)、腐霉菌(Pythiumaphanidermatum)接种于PDA平板中央，再将菌株暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis)KD50以十字交叉法点接于距离培养基中心位置2cm处；对照组接种病原菌后不接种菌株暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis)KD50，在28℃条件下恒温培养，待对照组病原菌长满平板后，测量抑菌带宽度，每组处理6次重复。抑菌率(％)＝(对照菌落直径-处理菌落直径)/对照菌落直径*100％；结果图3-6和表1所示。
表1为暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis)KD50对18种植物病原菌的抑制效果
图3-6和表1的实验结果表明暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis)KD50可有效抑制指状青霉(Penicillium digitatum)、白地霉(Geotrichum candidum)、意大利青霉(Penicillium italicum)、立枯丝核菌(Rhizoctonia solani Kola)、茄匐柄霉(Stemphylium solani Weber)、轮枝镰刀菌(Fusarium verticillioide)、层出镰刀菌(Fusarium proliferatum(matsush.)Nirenberg)、藤仓镰刀菌(Fusarium fujikuroi)、多主棒孢霉菌(Corynespora cassiicola)、苹果盘二孢菌(Marssonina mali)、核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)、葡萄座腔菌(Botryosphaeria dothidea)、蔷薇双壳菌(Gaeumannomyces graminsis)、致病疫霉菌(Phytophthora infestans)、人参锈腐病菌(Cylindrocarpon)、拟盘多毛孢(Neopestalotiopsis formicarum)、胶孢炭病菌(Colletotrichum gloeosporioides)、腐霉菌(Pythium aphanidermatum)的生长，尤其是对苹果盘二孢菌(Marssonina mali)、核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)和腐霉菌(Pythium aphanidermatum)的防治效果能达到80％以上，为80.39％、100％、80.59％，可用于微生物防治技术领域。
实施例2生防种衣剂的制备
在实施例1中制备的暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis)KD50悬浮液中加入与其质量的2％增稠剂：黄原胶、与其质量的4％的防冻剂：乙二醇、与其质量的0.16％防腐剂：卡松、与其质量的0.5％的紫外保护剂：脱脂乳粉和与其质量的1.0％警戒色：甜菜红，充分搅拌混合，最后加入与其质量的3-5％的成膜剂：聚乙烯吡咯烷酮，再次搅拌混合，得到生防种衣剂。
实施例3生防种衣剂对油菜菌核病的防治效果
试验共设3个处理，1个对照：
CK为不包衣的油菜裸种、
处理1为市场上生防种衣剂1进行包衣的油菜种子、
处理2为本发明的生防种衣剂(生防种衣剂中不含有暹罗芽孢杆菌(Bacillussiamensis)KD50)进行包衣的油菜种子、
处理3为本发明的生防种衣剂进行包衣的油菜种子；各生防种衣剂与种子的质量比为1∶45。
处理组和CK分别设3个平行，将土壤加入油菜菌核病的致病菌(核盘菌)充分混合后分为12个小区，每个小区面积20m2，共240m2，随机区组排列。9月16日播种，12月10日，调查每个小区所有植株，记录被害株数，计算被害株率和防效。
发病率(％)＝(发病的油菜植株数/总植株数)×100。
防治效果(％)＝(对照发病率-处理发病率)/对照发病率×100。
表2生防种衣剂对油菜菌核病的防治效果
| 处理 | 发病率(％) | 防治效果(％) |
| CK | 83.33 | - |
| 处理1 | 32.60 | 60.88 |
| 处理2 | 70.88 | 14.95 |
| 处理3 | 7.22 | 91.33 |
根据表2的实施数据结果表明，本发明的生防种衣剂对油菜菌核病的防效达91.33％，可以明显抑制油菜菌核病的发生，降低其发病率。
实施例4生防种衣剂对玉米茎腐病的防治效果
试验共设3个处理，1个对照：
CK为不包衣的玉米裸种；
处理1为市场上生防种衣剂(农药登记证号:PD20190152)进行包衣的玉米种子；
处理2为本发明的生防种衣剂(生防种衣剂中不含有暹罗芽孢杆菌(Bacillussiamensis)KD50)进行包衣的玉米种子；
处理3为本发明的生防种衣剂进行包衣的玉米种子；各生防种衣剂与种子的质量比为1∶45。
处理组和CK分别设3个平行，将土壤加入玉米茎腐病的致病菌(腐霉菌)充分混合后分为12个小区，每个小区面积20m2，共240m2，随机区组排列。7月5日播种，9月20日，调查每个小区所有植株，记录被害株数，计算被害株率和防治效果。
发病率(％)＝(发病的玉米植株数/总植株数)×100。
防治效果(％)＝(对照发病率-处理发病率)/对照发病率×100。
表3生防种衣剂对玉米茎腐病的防治效果
| 处理 | 发病率(％) | 防治效果(％) |
| CK | 91.00 | - |
| 处理1 | 43.00 | 52.75 |
| 处理2 | 69.50 | 23.63 |
| 处理3 | 18.00 | 80.22 |
根据表3的实施数据结果表明，本发明的生防种衣剂对玉米茎腐病的防效达80.22％，可以明显抑制玉米茎腐病的发生，降低其发病率。
实施例4暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis)KD50在制备保鲜剂中的应用
保鲜剂的制备：将实施例1中制备的暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis)KD50悬浮液稀释300倍制成液体保鲜剂。实验分为T1、T2、T3 3个处理组和对照组CK，处理组和对照组重复3次；T1处理：在辣椒开花坐果期和结果期喷施保鲜剂；T2处理：辣椒开花坐果期喷施；T3处理：辣椒结果期喷施保鲜剂；对照组CK：不喷施保鲜剂。所有试验小区随机分布，耕作、施肥、病虫害防治处理均相同。挑选成熟度一致，大小均一，健康、无机械损伤的辣椒分装在透明塑料盒中，轻放，每盒20个辣椒，每组3个重复。置于室内常温(25-32℃)保存，10d后观察记录辣椒的腐烂情况、测量辣椒的质量损失率和腐败率，结果如表4所示。
测定方法：(1)失重率(质量损失率)的测定：分别测定待测桃果实贮藏起始质量(M1)与贮藏中第n次取样测定的质量(M2)。失重率(％)＝[(M1-M2)/M1]×100％；(2)腐烂率：腐烂率(％)＝腐败果实数/被检查总果数×100；
表4不同处理下辣椒的质量损失率和腐败率的结果表
| 处理 | 质量损失率(％) | 腐败率(％) |
| T1 | 5.48 | 5.00 |
| T2 | 8.67 | 10.00 |
| T3 | 7.95 | 10.00 |
| CK | 15.96 | 30.00 |
从表4可以看出，在辣椒开花坐果期和结果期喷施保鲜剂能显著降低辣椒的质量损失率和腐败率。
实施例5暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis)KD50在制备水溶性生物有机肥中的应用
水溶性生物有机肥的制备：将实施例1中制备的暹罗芽孢杆菌(Bacillussiamensis)KD50悬浮液稀释200倍与氮肥、钾肥和磷肥混合，其中暹罗芽孢杆菌(Bacillussiamensis)KD50悬浮液、氮肥、钾肥和磷肥的按质量份计为暹罗芽孢杆菌(Bacillussiamensis)KD50悬浮液20-35份、氮肥4-11份、钾肥2-9份和磷肥5-9份。钾肥为硝酸钾，碳酸钾，碳酸氢钾，硫酸钾中的一种或多种混合；氮肥为碳酸铵，碳酸氢铵，硝酸铵，尿素中的一种或多种混合；磷肥为过磷酸钙、重过磷酸钙、钙镁磷肥的一种或多种混合。
实验分为T1处理组和对照组CK，处理组和对照组重复3次，试验对象为:莴笋，设计6个实验小区，每个小区面积6m2，种植30颗莴笋，在莴笋出苗后将水溶性生物有机肥稀释300倍后灌根施用30ml/每株，然后每隔20天再次灌根施用相同体积至采摘。对照组采用灌根等体积的清水处理。85天后统计莴笋的株高平均值、单株重和对菌核病的发病率，结果如表5所示。
表5不同处理下莴笋的株高平均值、单株重和对菌核病发病率的结果表
| 处理 | 株高平均值(cm) | 单株重(Kg) | 菌核病发病率(％) |
| T1 | 46.5 | 0.82 | 6.67 |
| CK | 42.3 | 0.61 | 26.67 |
表5的结果表明，含有暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis)KD50的水溶性生物有机肥能显著提高莴笋的株高平均值和单株重，并显著降低菌核病发病率。
Claims (17)
1.一株暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis)KD50，其特征在于，所述暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis)KD50的保藏号为CCTCC NO:M 2023289，保藏日期：2023年3月10日；保藏单位：中国典型培养物保藏中心，保藏地址:中国.武汉.武汉大学。
2.一种含有权利要求1所述的暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis)KD50的悬浮液。
3.根据权利要求2所述的悬浮液，其特征在于，所述悬浮液的制备方法为：
(1)菌株活化：将暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis)KD50接种于LB固体培养基上，于28℃下培养1-2天；
(2)发酵种子培养：将上述活化菌株接种于液体培养基中，在33-39℃条件下在摇床中170-200r/min振荡培养24h，制得暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis)KD50种子液；
(3)发酵：将暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis)KD50种子液接入发酵培养基中，在33-39℃条件下在摇床中170-200r/min振荡培养24-48h，制得暹罗芽孢杆菌(Bacillussiamensis)KD50的悬浮液。
4.根据权利要求3所述的悬浮液，其特征在于，所述步骤(2)中液体培养基为：2％豆粕、1％酵母粉和1％七水硫酸镁。
5.根据权利要求3所述的悬浮液，其特征在于，所述步骤(3)中发酵培养基为：2％豆粕、1％酵母粉和1％七水硫酸镁。
6.权利要求1所述的暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis)KD50或权利要求2-5任一所述的悬浮液在抑制病原菌生长中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述病原菌为以下所列至少一种：指状青霉(Penicillium digitatum)、白地霉(Geotrichum candidum)、意大利青霉(Penicilliumitalicum)、立枯丝核菌(Rhizoctonia solaniKola)、茄匐柄霉(Stemphylium solaniWeber)、轮枝镰刀菌(Fusarium verticillioide)、层出镰刀菌(Fusarium proliferatum(matsush.)Nirenberg)、藤仓镰刀菌(Fusarium fujikuroi)、多主棒孢霉菌(Corynesporacassiicola)、苹果盘二孢菌(Marssonina mali)、核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)、葡萄座腔菌(Botryosphaeria dothidea)、蔷薇双壳菌(Gaeumannomyces graminsis)、致病疫霉菌(Phytophthora infestans)、人参锈腐病菌(Cylindrocarpon)、拟盘多毛孢(Neopestalotiopsis formicarum)、胶孢炭病菌(Colletotrichum gloeosporioides)、腐霉菌(Pythium aphanidermatum)。
8.权利要求1所述的暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis)KD50或权利要求2-5任一所述的悬浮液在制备病原菌生长抑制剂中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述病原菌为以下所列至少一种：指状青霉(Penicillium digitatum)、白地霉(Geotrichum candidum)、意大利青霉(Penicilliumitalicum)、立枯丝核菌(Rhizoctonia solani Kola)、茄匐柄霉(Stemphylium solaniWeber)、轮枝镰刀菌(Fusarium verticillioide)、层出镰刀菌(Fusarium proliferatum(matsush.)Nirenberg)、藤仓镰刀菌(Fusarium fujikuroi)、多主棒孢霉菌(Corynesporacassiicola)、苹果盘二孢菌(Marssonina mali)、核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)、葡萄座腔菌(Botryosphaeria dothidea)、蔷薇双壳菌(Gaeumannomyces graminsis)、致病疫霉菌(Phytophthora infestans)、人参锈腐病菌(Cylindrocarpon)、拟盘多毛孢(Neopestalotiopsis formicarum)、胶孢炭病菌(Colletotrichum gloeosporioides)、腐霉菌(Pythium aphanidermatum)。
10.权利要求1所述的暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis)KD50或权利要求2-5任一所述的悬浮液在制备防治柑橘指状青霉、柑橘白地霉、柑橘意大利青霉、烟草靶斑病、番茄叶斑病、茄子轮枝镰刀LA-1、茄子层出镰刀LQ-1、茄子藤仓镰刀菌、黄瓜靶斑病、苹果褐斑病、油菜菌核病、山核桃干腐病、小麦全蚀病、马铃薯晚疫病、人参锈腐病、椰子灰斑病、铁皮石斛炭疽病、玉米茎腐病的药剂中的应用。
11.一种生防种衣剂，其特征在于，所述生防种衣剂中包含权利要求1所述的暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis)KD50或权利要求2-5任一所述的悬浮液。
12.根据权利要求11所述的生防种衣剂，其特征在于，所述生防种衣剂还包含2.0％增稠剂、4.0％防冻剂、0.16％防腐剂、0.2％消泡剂、0.5％的紫外保护剂、1.0％警戒色、3.0-5.0％的成膜剂。
13.根据权利要求12所述的生防种衣剂，其特征在于，所述增稠剂为黄原胶；所述防冻剂为乙二醇、所述防腐剂为卡松、所述消泡剂为二甲基硅油、所述紫外保护剂为脱脂乳粉、所述警戒色为甜菜红、所述成膜剂为聚乙烯吡咯烷酮。
14.权利要求1所述的暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis)KD50或权利要求2-5任一所述的悬浮液在制备生防种衣剂中的应用。
15.权利要求1所述的暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis)KD50或权利要求2-5任一所述的悬浮液在制备保鲜剂中的应用。
16.权利要求1所述的暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis)KD50或权利要求2-5任一所述的悬浮液在制备悬浮生物农药中的应用。
17.权利要求1所述的暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis)KD50或权利要求2-5任一所述的悬浮液在制备水溶性生物有机肥中的应用。
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| CN117016569A (zh) * | 2023-10-08 | 2023-11-10 | 云南省农业科学院农业环境资源研究所 | 一种防治植物叶部真菌病害的微生物组合物及其应用 |
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