CN116790389A - 一株具有生防作用的发酵毕赤酵母lz-11及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及植物病害防治技术领域，特别是涉及一株具有生防作用的发酵毕赤酵母LZ‑11及其应用。本发明所述的发酵毕赤酵母LZ‑11菌株，分离自湖北省武汉市华中农业大学果园的李子果实，其产生的挥发性气体(VOCs)对酸腐病菌的菌丝生长和孢子萌发均有明显抑制作用，实验结果表明，温州蜜柑经发酵毕赤酵母LZ‑11菌株挥发性气体处理后可以完全抑制酸腐病的发生，防治效果显著；另外，发酵毕赤酵母LZ‑11菌株对于柑橘绿霉病也有良好的防治效果，对绿霉病防治效果达到76％，为安全有效的防治植物病害提供了一种新手段。
Description
技术领域
本发明涉及植物病害防治技术领域，特别是涉及一株具有生防作用的发酵毕赤酵母LZ-11及其应用。
背景技术
我国是柑橘产量销量大国。为满足消费者常年供应的需求，旺季时大量柑橘用于贮藏。但柑橘在采后贮藏运输过程中由于真菌侵染而造成的病害，严重影响采后保存，造成大量的经济损失。
酸腐病是柑橘贮运中最常见、最难防治的病害之一，偶尔也危害树上的果实。近些年各地对青霉病或绿霉病加强防治后酸腐病发生日益增多，已成为当前柑橘贮运中的重要病害。柑橘酸腐病由病原菌白地霉(Geotrichum citri-aurantii)引起，发病于成熟期或者生理衰弱期。病菌于伤口处侵入，在果实上出现圆形、水渍状的病斑，病部变软多汁，且有酸臭气味，容易吸引果蝇，病斑扩展迅速最后果实溃不成形。
基于我国柑橘产业现状以及柑橘采后病害发生情况，联系目前化学防治的局限性及抗药性，寻求更安全有效的杀菌剂或新技术已经迫在眉睫。酵母菌是人类应用范围最广，直接食用量最多的微生物。采用酵母菌来防治植物病害，尤其是针对果蔬的储藏期病害的防治已成为研究的热点。目前对于柑橘酸腐病的生物防治的研究较少，能有效防治柑橘酸腐菌的拮抗酵母更是鲜有报道。
发明内容
为了解决上述问题，本发明提供了一株具有生防作用的发酵毕赤酵母LZ-11及其应用。本发明提供的发酵毕赤酵母(Pichia fermentans)LZ-11不仅可以有效防治柑橘酸腐菌，而且对柑橘绿霉病也有良好的防治效果。
为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
本发明提供了一株具有生防作用的发酵毕赤酵母(Pichia fermentans)LZ-11，所述发酵毕赤酵母LZ-11保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M20221739。
本发明还提供了一种生防制剂，所述生防制剂的有效成分包括上述技术方案所述发酵毕赤酵母LZ-11和/或所述发酵毕赤酵母LZ-11的代谢产物。
优选的，所述生防制剂中发酵毕赤酵母LZ-11的孢子浓度为(1～9)×108CFU/mL。
优选的，所述发酵毕赤酵母LZ-11的代谢产物包括挥发性气体。
本发明还提供了上述技术方案所述的发酵毕赤酵母LZ-11或上述技术方案所述的生防制剂在防治植物病害中的应用。
优选的，所述植物包括柑橘属植物。
优选的，所述柑橘属植物包括蜜柑和纽荷尔脐橙。
优选的，所述植物病害包括柑橘酸腐病和/或柑橘绿霉病。
优选的，所述植物病害的病原菌包括柑橘酸腐菌(Geotrichum citri-aurantii)和/或柑橘绿霉菌[Penicillium digitatum(Pers.ex Fr.)Sacc.]。
有益效果：
本发明提供了一株具有生防作用的发酵毕赤酵母(Pichia fermentans)LZ-11，所述发酵毕赤酵母LZ-11保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M20221739。本发明所述的发酵毕赤酵母LZ-11菌株，分离自湖北省武汉市华中农业大学果园的李子果实，其产生的挥发性气体(VOCs)对酸腐病菌的菌丝生长和孢子萌发均有明显抑制作用，实验结果表明，温州蜜柑经发酵毕赤酵母LZ-11菌株挥发性气体处理后可以完全抑制酸腐病的发生，防治效果显著；另外，发酵毕赤酵母LZ-11菌株对于柑橘绿霉病也有良好的防治效果，对绿霉病防治效果达到76％，为安全有效的防治植物病害提供了一种新手段。
生物保藏信息
发酵毕赤酵母LZ-11：拉丁名为Pichia fermentans，于2022年11月08日保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏地址为湖北省武汉市武昌区八一路299号，武汉大学中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 20221739。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍。
图1为发酵毕赤酵母LZ-11与柑橘酸腐病菌对峙培养、二分格培养和平皿对扣法的培养结果；
图2为菌株LZ-11的形态特征；A和B为菌落形态；C为出芽生殖；D为假菌丝；
图3为菌株LZ-11的分子生物学鉴定结果；A为菌株ITS片段扩增产物的电泳结果，B为系统发育树；
图4为菌株LZ-11产生的VOCs对酸腐病菌菌丝的影响结果；
图5为菌株LZ-11产生的VOCs对酸腐病菌孢子萌发的影响结果；
图6为菌株LZ-11产生的VOCs对酸腐病的防治结果；
图7为菌株LZ-11产生的VOCs对绿霉病的防治结果。
具体实施方式
本发明提供了一株具有生防作用的发酵毕赤酵母(Pichia fermentans)菌株LZ-11，所述发酵毕赤酵母LZ-11保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M20221739。
本发明所述的发酵毕赤酵母LZ-11菌株，分离自湖北省武汉市华中农业大学果园的李子果实，菌落呈圆形，乳白色，表面磨砂状质感，质地粘稠且具有芳香气味，菌落边缘较整齐；单细胞为卵圆形，长宽为(3～5)μm×(2～4)μm(长×宽)，出芽生殖；能够产生假菌丝，未见掷孢子。
本发明还提供了一种生防制剂，所述生防制剂的有效成分包括上述技术方案所述发酵毕赤酵母LZ-11菌株和/或所述发酵毕赤酵母LZ-11的代谢产物。
在本发明中，所述生防制剂中发酵毕赤酵母LZ-11菌株的孢子浓度优选为(1～9)×108CFU/mL，进一步优选为(1～5)×108CFU/mL，更优选为1×108CFU/mL。
在本发明中，所述发酵毕赤酵母LZ-11菌株的代谢产物优选包括挥发性气体。本发明通过实验证明了发酵毕赤酵母LZ-11菌株产生的挥发性气体对于柑橘酸腐病菌和柑橘绿霉病菌均有良好的防治效果，且更加安全；其中，人工接种病原菌的条件下，20℃保湿6d，发酵毕赤酵母LZ-11产生的挥发性气体可以完全抑制柑橘酸腐病的发生；20℃保湿10d，发酵毕赤酵母LZ-11产生的挥发性气体对柑橘绿霉病的防治效果达到76％。
本发明还提供了上述技术方案所述的发酵毕赤酵母LZ-11或上述技术方案所述的生防制剂在防治植物病害中的应用。
在本发明中，所述植物优选包括柑橘属植物；所述柑橘属植物优选包括蜜柑和纽荷尔脐橙；所述植物病害优选包括柑橘酸腐病和/或柑橘绿霉病；所述植物病害的病原菌优选包括柑橘酸腐菌(Geotrichum citri-aurantii)和/或柑橘绿霉菌[Penicilliumdigitatum(Pers.ex Fr.)Sacc.]；所述柑橘酸腐菌优选包括柑橘酸腐菌HYS1-1；所述柑橘绿霉菌优选包括柑橘绿霉菌Pd-1。本发明所述柑橘酸腐菌HYS1-1公开于文献【SirichaiChaimunko,应用拮抗细菌防治柑橘青绿霉病.华中农业大学，学位论文，2020】；所述柑橘绿霉菌Pd-1公开于文献【Sirichai Chaimunko,应用拮抗细菌防治柑橘青绿霉病.华中农业大学，学位论文，2020】。
利用本发明提供的发酵毕赤酵母LZ-11不仅可以有效防治柑橘酸腐菌，而且对柑橘绿霉病也有良好的防治效果。
为了进一步说明本发明，下面结合附图和实施例对本发明提供的一株具有生防作用的发酵毕赤酵母LZ-11及其应用进行详细地描述，但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
酵母菌的分离纯化及保存
取样地点为：湖北省武汉市华中农业大学果园、广西南宁和江西赣州；
采集取样地点的李子果实组织10g，切成小块放入马铃薯葡萄糖培养基(PDB)培养液的三角瓶中，所述PDB培养液由以下方法制备得到：200g马铃薯去皮，加水煮沸过滤，加入20g葡萄糖，去离子水补至1L，121℃灭菌20min；
加入100μL利福平(100mg/mL)和100μL头孢(100mg/mL)，28℃，180r/min的条件下振荡培养30min，滤除植物组织后用无菌移液管吸取富集菌体的滤液以PBS进行梯度稀释，10-1、10-2和10-3倍菌悬液各取200μL，涂布于PDA(PDB中添加2wt.％的琼脂)平板上，置于超净工作台中自然吹干，28℃恒温培养箱培养。每个梯度重复三次，培养48h后挑取酵母菌菌株，平板划线纯化后保存。
其中湖北地区分离获得132株酵母菌，来自广西的有38株，江西14株。
酵母菌的筛选
酸腐病菌HYS1-1菌株【Sirichai Chaimunko,应用拮抗细菌防治柑橘青绿霉病.华中农业大学，学位论文，2020】在PDA培养基上28℃条件下培养3d。将分离获得的酵母菌株划线接种在PDA培养皿两侧，培养皿之间接种酸腐病病菌HYS1-1菌丝块(直径5mm)，28℃条件下进行对峙培养，根据病原菌菌落生长的抑制作用进行拮抗酵母的筛选。获得一株能够通过产生挥发性物质(VOCs)抑制酸腐病菌丝扩展的酵母菌株(该菌株分离自湖北省武汉市华中农业大学果园的李子果实)，记为LZ-11。
利用二分格培养皿和平皿对扣法验证酵母LZ-11产生的挥发性有机化合物(VOCs)对酸腐病菌的抑制作用，具体为：(1)二分格法：在二分格培养皿PDA培养基的一侧接种酸腐菌菌丝块(直径5mm)，另一侧涂布酵母菌液，分别观察测量3d、5d、7d酸腐菌的生长情况，评价酵母的抑菌能力；(2)平皿对扣法：方法参考Huang et al(2011)【Huang R,Li G Q,ZhangJ,Yang L,Che H J,Jiang D H,Huang H C.Control of postharvest Botrytis fruitrot of strawberry by volatile organic compounds of Candidaintermedia.Phytopathology,2011,101:859-869】，两个90mm培养皿，每皿加入15mLPDA培养基，在一个平板中涂布200μL酵母菌液(1×108CFU/mL)，另一个皿中接种酸腐病菌菌丝块(直径5mm)，将两个培养皿底对扣，涂布酵母的平板在下(防止有水汽滴下污染)，病原菌平板在上，用封口膜将双皿密封，记录酸腐病菌的生长状况。LZ-11菌株对峙培养的结果见图1中的A，二分格法培养5d的结果见图1中的B，平皿对扣法的结果见图1中的C，CK组均为不接种酵母LZ-11的对照组。
由图1中的A～C可知，对峙培养的条件下菌株LZ-11虽然不能有效抑制酸腐病菌的菌丝生长，但是采用二分隔法和平皿对扣法，菌株LZ-11产生的VOCs能完全抑制酸腐病菌的菌丝生长。
菌株LZ-11的形态学观察
将酵母菌株LZ-11活化培养(培养基为PDA)2d后，于固体培养基酵母浸出粉胨葡萄糖培养基(YPDA)28℃培养3d，观察菌落边缘形状、菌落表面形状、菌落质地、色泽、透明度等，结果见图2中的A和B；所述YPDA由以下方法制备得到：蛋白胨10g、酵母提取物3g和葡萄糖20g，去离子水定容至1L，121℃灭菌20min。
菌株在PDA平板上培养，在其上加盖灭菌的盖玻片，28℃下培养5d后取盖玻片显微镜观察假菌丝的形态，结果见图2中的C和D。将酵母菌株于PDA平板，于另一个PDA平板对扣(其上放置一个无菌载玻片)，25℃培养三周，取出载玻片观察其上的掷孢子形态，结果见图2中的D。
由图2可知，酵母菌LZ-11菌落呈圆形，乳白色，表面磨砂状质感，质地粘稠且具有芳香气味，菌落边缘较整齐；单细胞为卵圆形，长宽为(3～5)μm×(2～4)μm(长×宽)，出芽生殖；能够产生假菌丝，未见掷孢子。
菌株LZ-11的分子生物学鉴定
取上述筛选的菌株LZ-11划线接种在铺有玻璃纸的PDA平板上，28℃培养1d后刮取菌苔。采用十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法提取菌株的DNA，参考Sambrook等(1989)【Sambrook J,Frisch EF,Maniatis T.1989.MolecμLar Cloning:A Laboratory Manual,second ed.Cold Spring Harbor Laboratory,Cold Spring Harbor,NY.】。具体步骤如下：称取0.2g菌苔在液氮中研磨成粉末，转入1mL 65℃预热的抽提缓冲液，65℃温育8min，每2min颠倒混匀；所述抽提缓冲液由以下方法制备得到：CTAB 20g，1mol/L的Tris-HCL(pH8.0)100mL，0.5mol/L的EDTA(pH8.0)40mL，NaCl 122.8g，去离子水补至1L，121℃灭菌20min；加入等体积的苯酚/氯仿混合液，所述苯酚/氯仿混合液中苯酚和氯仿的体积比为1：1；振荡器上充分混匀，12000r/min离心10min，取上清，加入等体积的氯仿再抽提一次；12000r/min离心15min，取上清，加入0.1倍体积的3mol/L醋酸钠溶液和0.6倍体积的异丙醇轻轻混匀，-20℃静置沉淀30min，12000r/min离心15min，弃上清，将沉淀用体积浓度为70﹪的乙醇洗两遍，置37℃温箱干燥后，加入20μLTE溶解，-20℃保存。
以ITS1/ITS4为引物，上述DNA为模板，对菌株LZ-11的ITS序列进行PCR扩增(Whiteet al 1990)；所述ITS1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示：5’-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3’；所述ITS4的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示：5’-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3’。
PCR扩增采用25μL的反应体系：ddH2O 19.8μL，10mmol/L的10×buffer(含有MgCl2)2.5μL，2.5mmol/L dNTP 0.5μL，10μmol/L的ITS1引物0.5μL，10μmol/L的ITS4引物0.5μL，浓度为5U/μL的Taq酶1U和DNA模板50ng。
PCR扩增的反应程序：94℃预变性3min；94℃变性40s，55℃退火45s，72℃延伸1min，循环35次；72℃延伸1min延伸，4℃下保存。
应用回收试剂盒将PCR产物(图3中的A)回收并连接到pMD18-T(购自TaKaRa公司，中国大连)上进行序列测定。将测序结果与GenBank(http://blast.ncbi.nlm.nih.gov)中已知的序列进行同源性比对。
测序后的序列如SEQ ID NO：3所示，具体为5’-CTTATACCATGCGTGAGCGCACCAAACACCTAAAATTGTAATACTAATTGTCACTAAGTTTTAACAAAACAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAGCGCAGCGAAATGCGATACCTAGTGTGAATTGCAGCCATCGTGAATCATCGAGTTCTTGAACGCACATTGCGCCCCATGGTATTCCATGGGGCATGCCTGTCTGAGCGTCGTTTCCTTCTTGCGCAAGCAGAGTTGAGAACAGGCTATGCCTTTTTCGAAATGGAACGTCGTGGACGAAGTGAACTAAACATTTAGCACGCTTTGGCCGCCGAACTTTTAACTAAGCTCGACCTCAGATCAGGTAGGAATACCCGCTGAACTTAAGCATATCAATAAGCGGAGGAACAG-3’。将测序结果与GenBank(http://blast.ncbi.nlm.nih.gov)中已知的序列进行同源性比对并进行进化分析，发现LZ-11菌株与发酵毕赤酵母(Pichia fermentans)聚为一支(图3中的B)，结合菌株的菌落及假菌丝形态，将菌株LZ-11菌株鉴定为发酵毕赤酵母。菌株L Z-11于2022年11月08日送至中国典型培养物保藏中心进行保藏，保藏编号为CCTCC NO：M20221739。
实施例2
菌株LZ-11产生的挥发性气体对酸腐病菌菌丝的抑制作用
两个90mm培养皿，每皿加入15mLPDA培养基，在一个平板中涂布200μL发酵毕赤酵母LZ-11菌液，另一个皿铺上灭菌的玻璃纸，然后接种酸腐病菌HYS1-1菌丝块(直径5mm，培养方法同实施例1)，将两个培养皿底对扣，涂布酵母的平板在下(防止有水汽滴下污染)，病原菌平板在上，用封口膜将双皿密封，同时设置未涂布发酵毕赤酵母LZ-11菌液的对照组；28℃条件下培养5d后，切取酸腐病菌菌丝尖端进行显微观察，结果见图4中的A和B(A为对照组，B为涂布发酵毕赤酵母LZ-11菌液的处理组)；培养有酸腐病菌的培养皿盖上无菌培养皿盖，继续在28℃条件下培养，3d后，切取酸腐病菌菌丝尖端再次进行显微观察，结果见图4中的C；所述发酵毕赤酵母LZ-11菌液由以下方法培养得到：将实施例1筛选得到的发酵毕赤酵母LZ-11接种到PDA培养基中，划线培养，在28℃条件下培养48h。
由图4可知，对照组能够正常生长(图4中的A)，经LZ-11挥发性气体处理5d的菌丝断裂无法正常生长(图4中的B)，在脱离LZ-11产生的VOCs环境后，酸腐病菌菌丝的生长恢复正常(图4中的C)。可见，发酵毕赤酵母LZ-11产生的挥发性气体对酸腐病菌菌丝的生长具有明显的抑制作用。
菌株LZ-11挥发性气体对酸腐菌孢子萌发的影响
酸腐病菌HYS1-1菌株在PDA培养基上28℃条件下培养7d，加入1mL PBS缓冲液，冲洗下酸腐菌孢子配制成浓度为1×106个/mL的孢子液。取酸腐病菌孢子液5μL到灭菌的载玻片上，放置在培养皿盖中，在培养皿底中倒入15mL PDA培养基，涂布200μL活菌数为1×108CFU/mL的发酵毕赤酵母LZ-11菌液，培养皿封口后倒置，以PDA上涂布等量PDB对照，28℃条件下培养2h、4h、6h、8h、10h和12h，显微镜下观察酸腐病菌孢子情况，每个时间处理统计100个孢子，长出芽管记为萌发，否则记为未萌发；孢子萌发率＝萌发的孢子数/100。同时测量萌发的芽管长度。结果见图5和表1。
表1酸腐病菌孢子的孢子萌发率(％)和芽管长度(mm)
由图5和表1可知，LZ-11菌株产生的挥发性气体能够显著抑制酸腐菌孢子的萌发，12h时，对照组酸腐菌孢子萌发率达到70％以上(图5中的A)，萌发的芽管正常生长(图5中的B)，而LZ-11菌株VOCs处理组酸腐病菌孢子完全未萌发。
菌株LZ-11对柑橘酸腐病的防治
酸腐病菌HYS1-1菌株在PDA培养基上28℃条件下培养一周，加入1mL PBS缓冲液，冲洗下酸腐菌孢子配制成浓度为1×106个/mL的孢子液。新鲜、健康、成熟的温州蜜柑果实，体积浓度为75％的乙醇表面消毒5min，无菌水冲洗3次，晾干。灭菌枪头(1mL)在柑橘腰部进行刺伤(5×5mm)，每个伤口接种10μL酸腐病菌孢子液(1×106个/mL)。试验在玻璃干燥器中实施，玻璃容器隔板下方放置含培养了菌株LZ-11的培养皿4皿，皿盖敞开，表面消毒病接种酸腐病菌的温州蜜柑置于隔板上方，以放置4皿铺有PDA的培养皿为对照；所述含培养了菌株LZ-11的培养皿由以下方法制备得到：培养皿中PDA上涂布200μL发酵毕赤酵母LZ-11菌液，菌液浓度为1×108CFU/mL。20℃条件下贮藏6d。统计酸腐病发生率和病斑直径。结果见图6和表2。
表2酸腐病发生率(％)和病斑直径(mm)
由图6和表2可知，温州蜜柑经LZ-11菌株VOCs处理后可以完全抑制酸腐病的发生。表明菌株LZ-11产生的VOCs对酸腐病防治效果显著。
菌株LZ-11对柑橘绿霉病的防治
绿霉病菌Pd-1菌株【Sirichai Chaimunko,应用拮抗细菌防治柑橘青绿霉病.华中农业大学，学位论文，2020】在PDA培养基上28℃条件下培养一周，加入1mL PBS缓冲液，冲洗下孢子配制成浓度为1×106个/mL的孢子液。100g面粉加入50mL蒸馏水和1mL活菌数为1×108CFU/mL的发酵毕赤酵母LZ-11菌液，28℃培养12h，制备酵母生物量为2.5×107cell/g的培养物。
新鲜、健康、成熟的纽荷尔脐橙果实，体积浓度为75％的乙醇表面消毒5min，无菌水冲洗3次，晾干。灭菌枪头(1mL)在柑橘腰部进行刺伤(5×5mm)，每个伤口接种10μL绿霉病菌孢子液(1×106个/mL)。试验在玻璃干燥器中实施，玻璃容器隔板下方放置菌株LZ-11的培养物150g，表面消毒病接种绿霉病病菌的纽荷尔脐橙置于隔板上方，以高压121℃灭菌处理15min的100g面粉加入50mL蒸馏水混合物为对照，20℃条件下贮藏10d。统计绿霉病的发生率和病情指数。
病情指数采用以下公式计算：
式中，n为严重度(0～5，判定标准见表3)，Sn为严重度n对应的柑橘果实数量，0～5(完全健康到完全腐烂)。结果见图7和表4。
表3病情严重度的判定标准，即病斑面积占柑橘总表面积的比例(％)
| 严重度 | 0 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| 判定标准 | 0 | 0-20％ | 2-40 | 40-60 | 60-80 | 80以上 |
| 对照组Sn值 | 0 | 2 | 2 | 2 | 0 | 0 |
| LZ-11 VOCs组Sn值 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
表4绿霉病发生率(％)和病情指数
由图7和表4可知，对照柑橘发病严重，伤口处产生白色菌丝和绿色的孢子，水渍状病斑面积大，当使用菌株LZ-11 VOCs处理时，柑橘伤患病程度轻，伤口处无菌丝和孢子产生。对绿霉病防治效果达到76％。表明菌株LZ-11对绿霉病也有良好的防治效果。
综上所述，本发明提供的发酵毕赤酵母(Pichia fermentans)LZ-11不仅可以有效防治柑橘酸腐菌，而且对柑橘绿霉病也有良好的防治效果。
尽管上述实施例对本发明做出了详尽的描述，但它仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部实施例，人们还可以根据本实施例在不经创造性前提下获得其他实施例，这些实施例都属于本发明保护范围。
Claims (9)
1.一株具有生防作用的发酵毕赤酵母(Pichiafermentans)LZ-11，其特征在于，所述发酵毕赤酵母LZ-11保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO：M20221739。
2.一种生防制剂，其特征在于，所述生防制剂的有效成分包括权利要求1所述发酵毕赤酵母LZ-11和/或所述发酵毕赤酵母LZ-11的代谢产物。
3.根据权利要求2所述的生防制剂，其特征在于，所述生防制剂中发酵毕赤酵母LZ-11的孢子浓度为(1～9)×108CFU/mL。
4.根据权利要求2所述的生防制剂，其特征在于，所述发酵毕赤酵母LZ-11的代谢产物包括挥发性气体。
5.权利要求1所述的发酵毕赤酵母LZ-11或权利要求2～4任一项所述的生防制剂在防治植物病害中的应用。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述植物包括柑橘属植物。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述柑橘属植物包括蜜柑和纽荷尔脐橙。
8.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述植物病害包括柑橘酸腐病和/或柑橘绿霉病。
9.根据权利要求5或8所述的应用，其特征在于，所述植物病害的病原菌包括柑橘酸腐菌(Geotrichumcitri-aurantii)和/或柑橘绿霉菌[Penicillium digitatum(Pers.exFr.)Sacc.]。
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