CN116785414A - 一种防治蒽环类化疗药诱导的心脏毒性损伤的chk1药物及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种靶向心肌细胞线粒体预防/治疗蒽环类化疗药所致心脏毒性损伤的细胞周期检查点激酶1蛋白(CHK1)药物及其应用，属于基因工程药物技术领域。本发明首次揭示了CHK1蛋白具有预防和治疗蒽环类药物心脏毒性损伤的作用，并利用AAV病毒系统将CHK1序列靶向递送到心肌细胞线粒体中，增加CHK1蛋白激酶在心肌细胞线粒体中的表达，从而达到防治蒽环类化疗药心脏毒性损伤的效果，为蒽环类化疗药诱导的心脏毒性损伤治疗提供了新的策略。

Description

一种防治蒽环类化疗药诱导的心脏毒性损伤的CHK1药物及其 应用

技术领域

本发明属于基因工程药物技术领域，具体而言，涉及提供了一种靶向心肌细胞线粒体预防/治疗蒽环类化疗药所致心脏毒性损伤的细胞周期检查点激酶1蛋白(CHK1)药物及其应用。

背景技术

蒽环类化疗药物广泛用于治疗血液系统恶性肿瘤和实体肿瘤，如急性白血病、淋巴瘤、乳腺癌、胃癌、软组织肉瘤和卵巢癌等。蒽环类药物的抗瘤谱广，抗瘤作用强，疗效确切，不可或缺，但是该类药物会引起脱发、骨髓抑制和心脏毒性等毒副反应。针对骨髓抑制可采用造血刺激因子进行防治，而心脏毒性是蒽环类药物最严重的毒副作用，对患者预后产生深远影响，最终可能导致心肌不可逆损伤和心力衰竭。以蒽环类最具代表的化疗药物阿霉素为例，其药理作用在于与人体DNA发生嵌入作用，从而阻断肿瘤细胞增殖和诱导细胞凋亡，是临床上治疗多种癌症最常用的广谱抗肿瘤化疗药物之一；然而阿霉素的心脏毒性在很大程度上限制了其在临床上的大面积应用。

目前的研究表明，蒽环类药物心脏毒性的机制主要是氧化应激损伤、诱导细胞凋亡和线粒体损伤。针对蒽环类药物心脏毒性损伤，目前的心脏保护策略主要是减少药物积累造成的心脏毒性或使用心脏保护剂。右丙亚胺(Dexrazoxane,DEX)是迄今为止唯一由美国FDA批准用于预防阿霉素心脏毒性的药物，但是其可能会加重化疗药物造成的骨髓抑制，在临床应用上仍然存在巨大的争议。因此，有必要寻找一种安全有效且功能强大的抗阿霉素心肌毒性药物，从而实现蒽环类抗肿瘤药物的心脏毒性预防和治疗。

CHK1(checkpoint 1protein kinase 1)属于磷酸化蛋白激酶，分子量为54kDa，由476个氨基酸构成，并在人和小鼠中具有高度的序列保守性。CHK1最初被发现作为细胞周期中的关卡蛋白：细胞发生DNA损伤时，通过激活ATR-CHK1和ATM-CHK2两条通路启动DNA损伤反应，相较于突变频率较高的CHK2，CHK1的突变较为少见，因而更引起研究人员的关注。CHK1蛋白激酶在发生磷酸化激活后，通过与其他蛋白相互作用，对细胞周期调控、DNA损伤修复、组织器官发育等有着重要的作用。

通过检索国内外文献，尚未有CHK1蛋白激酶在预防或缓解肿瘤患者蒽环类药物化疗所致心脏毒性方面的作用和保护机理的相关报道。

发明内容

鉴于现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种靶向心肌细胞线粒体的细胞周期检查点激酶1蛋白(CHK1)药物组合物及其应用，从而用于预防和治疗蒽环类化疗药物造成的心脏毒性损伤。

具体地，本发明的上述目的可以通过如下技术方案来实现：CHK1基因在制备预防/治疗蒽环类化疗药诱导的心脏毒性损伤的药物中的应用。进一步优选地，将所述CHK1基因在机体的心肌细胞线粒体中过量表达。

另外，在本发明的具体实施例中，发明人设计以腺相关病毒为载体，搭载心肌特异性启动子cTNT、靶向线粒体序列MTS和CHK1，用于阿霉素心脏毒性损伤的治疗，以提高基因治疗的安全性，避免药物脱靶带来的潜在危害。因此，本发明还提供如下技术方案：表达CHK1蛋白的重组腺相关病毒在制备预防/治疗蒽环类化疗药诱导的心脏毒性损伤的药物中的应用。

需要说明的是，本发明所述的蒽环类化疗药包括柔红霉素、阿霉素、表阿霉素、阿克拉霉素、去甲氧柔红霉素、吡柔比星、伊达比星、戊柔比星、米托蒽醌及上述药物的衍生物；所述CHK1蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示；所述CHK1蛋白的编码基因的编码链的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。

进一步优选地，所述表达CHK1蛋白的重组腺相关病毒含有心肌特异性启动子cTNT和靶向线粒体序列MTS，从而实现以心肌特异性cTNT启动子驱动，进行心肌细胞线粒体特异性表达人CHK1的目的；同时，本发明通过AAV9为载体将CHK1靶向递送至心肌细胞线粒体中，增加CHK1蛋白的表达，从而达到缓解蒽环类药物心脏毒性损伤的效果。因此，所述的腺相关病毒优选为腺相关病毒血清型9(AAV9)；所述的重组腺相关病毒含有心肌特异性启动子cTNT和靶向线粒体元件MTS。

本发明利用AAV病毒系统，将CHK1序列靶向递送到心肌细胞线粒体中，增加CHK1蛋白激酶在心肌细胞线粒体中的表达，从而抑制心肌细胞凋亡，改善心脏功能，发挥抵抗阿霉素等蒽环类化疗药物造成的心脏毒性的作用。因此，本发明还提供了一种预防/治疗蒽环类化疗药诱导的心脏毒性损伤的药物组合物，该药物组合物的活性成分包括表达CHK1蛋白的重组腺相关病毒。除此之外，该药物组合物还包括药学上可接受的辅料或添加剂。

与现有技术相比，本发明具有如下优点和进步性：

(1)本发明首次揭示CHK1蛋白具有预防和治疗蒽环类药物心脏毒性损伤的作用：本发明实例结果显示，通过尾静脉注射了AAV9病毒包装CHK1的小鼠，相比于单纯阿霉素诱导的心脏毒性损伤小鼠，其心肌细胞凋亡水平显著下降，心功能恢复。CHK1发挥了促进阿霉素心脏毒性损伤后心肌修复、心功能恢复的作用。因此，本发明为蒽环类化疗药物心脏毒性损伤的预防和治疗提供了新的药物作用靶点，具有十分重要的临床转化价值。

(2)搭载心肌细胞特异性cTNT启动子与靶向线粒体MTS序列提升治疗精准性和效率：本发明采用的是搭载心肌细胞特异性启动子cTNT与靶向线粒体MTS序列的腺相关病毒载体，当其成功转染心肌组织时，只有心肌细胞线粒体才能启动载体表达外源性CHK1基因，从而实现细胞特异性治疗，同时可有效避免组织或细胞脱靶带来的副作用。因此，本发明以腺相关病毒为载体，搭载cTNT和MTS驱动的具有治疗作用的基因片段是心脏毒性损伤的理想治疗方式。

(3)本发明实施过程简单和安全，心脏保护效果显著：本发明提供的基因表达载体可通过静脉方式给药，方便易行，可有效减少慢性瘢痕形成，降低心肌细胞凋亡水平和显著改善心肌功能，为蒽环类药物诱导的心脏毒性损伤治疗提供了新的策略。

附图说明

图1：pAAV-cTNTp-MTS-chek1-3Flag-T2A-EGFP-SV40 Poly质粒图谱；

图2：免疫荧光染色(CHK1)和MitoTracker染色在hiPSC-CMs中对CHK1进行定位分析结果图；

图3：WB检测各组小鼠心脏组织中CHK1和FLAG的表达结果图；

图4：WB检测各组小鼠脏器(心、肝、肾、肺和脑)中FLAG的表达结果图；

图5：各组小鼠的超声心动图(从上至下的组别依次是AAV9-CON+saline、AAV9-CHK1+saline、AAV9-CON+DOX、AAV9-CHK1+DOX)；

图6：各组小鼠左室射血分数射血分数、左心室短轴缩短率比较；图中EjectionFraction为射血分数，Fractional Shortening为短轴缩短率；

图7：Tunel染色检测提示CHK1治疗改善了阿霉素诱导的心肌细胞凋亡：腹腔注射阿霉素的小鼠心肌细胞中凋亡细胞，即Tunel阳性的细胞，明显增加，尾静脉注射AAV9包装的心肌线粒体靶向CHK1能够显著降低凋亡心肌细胞的数量；

图8：心肌组织Masson染色检测提示CHK1治疗改善了阿霉素造成的心肌纤维化疤痕。

具体实施方式

本发明提供了过表达心肌细胞线粒体中CHK1的制剂在预防和治疗阿霉素诱导的心脏毒性损伤中的应用。下面结合实施例对本发明进行具体的说明，以方便本领域技术人员对本发明进一步理解。但下面所描述的实施例仅是本发明实施例中的一部分，不应视为对本发明任何形式的限制。应当指出的是，本领域的普通技术人员基于本发明构思做出的调整和改进都应被视为本发明的保护范围。实施例中未注明具体技术操作步骤和操作者，均按照本领域文献所描述的一般技术条件或相关产品说明书进行。

实施例1：心肌特异性cTNT启动子驱动的靶向线粒体人CHK1蛋白腺相关病毒制剂的制备

第一部分：心肌特异性启动子cTNT驱动的靶向线粒体过表达CHK1蛋白腺相关病毒载体构建

1、目的基因：CHK1

2、种属：人

3、工具载体信息：载体名称：pAAV-cTNT-3Flag-T2A-EGFP-SV40 PolyA；元件顺序：cTNTp-MCS-3Flag-T2A-EGFP；克隆位点：Nhel/Nhel；插入线粒体靶向序列MTS和目的基因CHK1后质粒图谱见图1。

4、配制酶切体系进行载体酶切

体系如下：包括ddH₂O 42μl，10×CutSmart Buffer 5μl，上述工具载体DNA(1μg/μl)2μl，限制性内切酶AgeI(10U/μl)1μl。依次加入后用移液器吹打混匀，动作轻柔。短暂离心后，37℃反应过夜。对酶切产物进行琼脂糖凝胶电泳，回收目的条带。

5、目的基因片段的获取

(1)构建并合成CHK1基因引物：

F：TACCGTCACGGGAAACACCT；

R：AAACCGAAGGACGGTGTACT

PCR扩增：配制如下体系，轻轻混匀，置于PCR仪中进行反应。片段PCR扩增体系：2×PCR Buffer 25μl，dNTPs mix(10mM each)1μl，F R引物(10μM)各2μl，模板DNA(200ng/μl)1μl和ddH₂O 18μl。

PCR程序：预变性95℃5min循环数1；变性95℃30s退火55℃～72℃30sec，延伸72℃30～60sec/kb循环数27-35；彻底延伸72℃10min循环数1；12℃保存。

获得PCR产物大小：1431bp。

6、PCR产物与载体进行交换与转化

冰水浴中配制20μl反应体系：目的基因片段A(≥100ng)；线性化载体B(≥50ng)；2×HB infusionTM Master mix 10μl；ddH₂O C(＝10-A-B)。

移液器轻轻吹打，混匀后短暂离心，操作过程中需轻柔，避免气泡的产生。于37℃反应30min后，迅速冷却降温5min。在100μl感受态细胞中，加入10μl交换反应产物。轻弹EP管壁，使其混匀后冰上放置。30min后42℃热激90s，冰水浴孵育2min。加入1mlLB培养基，置于37℃摇床振荡培养1h。取菌液均匀涂布在含有对应抗生素的平板上，在恒温培养箱中倒置16h。

7、PCR菌落鉴定

引物：

R：CCATCAAGTGGGCAAGCTAC；

F：CGTCGCCGTCCAGCTCGACCAG

配制10μl菌液PCR鉴定体系：2xHieffPCR Master MIX(dye)5μl；引物1 0.5μl；引物20.5μl；菌液2μl；ddH₂O 2μl。

体系配置完成后，充分振荡混匀后离心。在超净台中，使用无菌枪头挑取单个菌落至20μl反应体系中，移液器反复吹打混匀，以上操作需在超净台中进行。混匀后置于PCR仪中进行后续PCR实验。

菌液PCR鉴定程序：预变性94℃5min循环数1；变性94℃30s退火56℃30sec，延伸72℃30～60sec/kb循环数25；彻底延伸72℃10min循环数1；12℃保存。

鉴定结果：PCR产物电泳结果与预期结果相一致。

8、测序

将阳性克隆产物接种于含对应抗生素的LB液体培养基中，培养12h(220rpm，37℃)，培养结束后吸取部分菌液，进行测序。测序结果与目的基因序列进行比对分析。结果显示：测序结果与目标序列完全一致。

第二部分：上述载体的出毒包装

1、转染质粒和收获腺相关病毒

按照40％左右的细胞密度，接种293T细胞于细胞培养瓶，培养基为含10％FBS的DMEM，培养环境为37℃、5％CO₂培养箱。观察细胞密度，60％左右时达到转染条件准备转染。转染前更换为无血清培养基。接着，于1.5ml离心管中加入50μl opti-MEM无血清培养基，并添加ExFect(诺唯赞，1μl/μg DNA)，用移液器反复轻柔吹打混匀。

于1.5ml离心管中加入50μl opti-MEM，并添加DNA(1μg DNA/孔)，用移液器反复轻柔吹打混匀。将ExFect-opti-MEM滴加至DNA-opti-MEM中，用移液器反复轻柔吹打混匀，室温静置20min后滴加在细胞培养皿中，并轻轻混匀继续培养。12h后，更换为含10％FBS的细胞培养基。48h后收集细胞和培养物中的病毒。病毒上清于-80℃冰箱保存。

2、腺相关病毒扩增与纯化

按照60％左右的细胞密度，接种293T细胞于细胞培养瓶，培养条件同上。加入病毒粗提液1ml，90min后补加完全培养液2ml，继续培养后，低速离心收集细胞并重悬于1mlDMEM中，反复冻融(-80℃/37℃)和振荡，病毒上清于-80℃保存，重复2-3次。将收集的病毒上清，使用Adeno-X^TMVirus Purification Kit。取出Adeno-X纯化装置，按照说明书步骤进行纯化。纯化后的腺相关病毒分装，-80℃保存。

实施例2：cTNT启动子驱动靶向线粒体的CHK1蛋白激酶改善阿霉素等蒽环类药物造成的心脏毒性损伤

第一部分：在hiPSC-CMs中分析CHK1和线粒体定位情况

1、hiPSC-CMs的复苏和培养

预热心肌细胞铺板液、复苏液和培养液，在正式复苏培养细胞之前，将铺板液加入细胞培养板，37℃细胞培养箱中孵育30min后去除细胞铺板液。将hiPSC-CMs冻存管在37℃水浴锅中10s迅速溶解，成为冰水混合物后使用心肌细胞复苏液梯度溶解含有hiPSC-CMs的细胞冻存液，后室温离心(1100rpm，5min)。仅保留细胞沉淀，并用培养基重悬后进行细胞计数。按照合适细胞密度进行细胞铺板(5×10⁴个细胞每24孔板孔)，铺板结束后放置于37℃细胞培养箱中进行培养。24h换液一次。

2、CHK1免疫荧光染色和线粒体探针染色

200μM线粒体红色探针染料(C1032,Beyotime,China)原液在DMEM中稀释至300nM，制备染色液并预热。将预热好的染色液加入hiPSC-CMs中，37℃孵育15-30min，完成线粒体探针染色。将细胞固定、通透和封闭，用CHK1一抗稀释液在4℃孵育过夜。去除一抗稀释液，PBS洗涤三次，每次10分钟后，在室温下用荧光二抗和Hoechst染色2小时。染色完成后，将细胞用新鲜的、预热的PBS洗涤，并在旋转盘共聚焦显微镜(Zeiss，LSM800)进行观察和拍摄，通过ZEN软件采集图像。结果如图2所示，心肌细胞中CHK1蛋白(绿色)与线粒体(红色)存在广泛的共定位情况。

第二部分：构建阿霉素诱导的心脏毒性损伤模型及分组

取8-10周龄的SPF级C57BL/6野生型雄性小鼠，购买和饲养于南京医科大学动物中心。适应性喂养及观察1周后，构建阿霉素诱导的心脏损伤模型：给于小鼠腹腔注射阿霉素剂量为5mg/kg，进行小鼠心脏毒性损伤的诱导，每周一次，共注射4次持续4周。对照组小鼠，采用腹腔注射等体积的生理盐水替代，每周一次，持续4周。另外，设置心脏毒性损伤模型CHK1治疗组，在腹腔注射阿霉素前1周尾静脉注射CHK1腺相关病毒(实施例1制备)，剂量为10¹¹vg/只，同时设置腹腔注射生理盐水CHK1治疗组。综上所述，共设置“阿霉素”组、“阿霉素+AAV9-CHK1”组、“生理盐水”组和“生理盐水+AAV9-CHK1”组。最后一次给药1周后处死小鼠。完成第4次阿霉素腹腔注射1周后，对所有小鼠进行心脏彩色多普勒超声检测，检测完毕后安乐死，解剖得到小鼠心脏。

第三部分：检测CHK1改善阿霉素等蒽环类药物造成的心脏毒性损伤的治疗效果

1、Western Blot检测CHK1表达变化

(1)蛋白提取：取材各组心脏组织和小鼠各脏器置于1.5mlEP管中，并加入提前配置好蛋白裂解液(RIPA裂解液和蛋白酶抑制剂)，使用匀浆机破碎心脏组织。静置涡旋结束后，将EP管放于高速离心机中离心(10000rpm，4℃，60min)。离心结束后，取上层蛋白液，Bradford法测蛋白浓度并按比例与LoadingBuffer混合充分，95℃金属浴中加热10min，在冰上冷却后进行WesternBlot实验，实验结束后于-20℃冰箱保存。

(2)电泳：按照说明书配制SDS-PAGE胶，在浓缩胶中加入蛋白marker和制备好的蛋白样品。浓缩胶采用90V 20-25min，分离胶采用120V 60-90min左右.

(3)转膜：电泳期间准备PVDF膜并用甲醇醒膜。90V恒压120min转膜。

(4)封闭：使用新鲜配置的5％脱脂奶粉室温摇床60rpm封闭2h。

(5)一抗孵育：将配置好的一抗稀释液加入到装有目的条带的一抗孵育盒中，4℃冰箱摇床60rpm孵育过夜。

(6)二抗孵育：回收一抗后，用TBST清洗PVDF膜后加入二抗稀释液。室温摇床60rpm孵育2h。

(7)发光显影：用TBST洗膜后，配制ECL显影液后进行显影，采用化学发光成像仪进行条带曝光和图像采集，并使用Image J进行定量分析。

(8)备注：本次实验所用到的抗体为CHK1，FLAG和GAPDH。

(9)如图3所示，注射AAV9-CHK1的小鼠心脏中CHK1蛋白表达明显升高，FLAG的表达具有同样的趋势，提示AAV9-CHK1对心肌细胞中CHK1过表达成功。如图4所示，AAV9-CHK1中所含有的标签蛋白仅在心脏中表达，不在其他脏器如肝肾肺脑中表达，说明AAV9-CHK1具有很高的心肌靶向性，避免了脱靶可能的生物安全性问题。

2、小鼠心脏超声检测心功能指标

心脏超声检测由专业技术人员在南京医科大学动物实验中心进行。对上述四组小鼠连续给药4周后，进行胸部脱毛并擦拭干净完全暴露心脏部位，异氟烷麻醉小鼠5min(浓度为1.0％)后，固定小鼠四肢并在胸部均匀涂抹耦合剂，使用加拿大VisualSonics公司心超检测仪Vevo 2100，采集小鼠左心室B-mode长轴图像并在左心室直径最大处采集M-mode图像。使用Vevo软件计算得出各组小鼠左室射血分数射血分数(Left VentricμlarEjection Fraction，LVEF)、左心室短轴缩短率(Left Ventricμlar FractionalShortening，LVFS)等心功能参数，重复多次测量，保证其准确性。结果如图5、图6显示，单纯阿霉素处理组的小鼠，心功能指标显著下降(p<0.05)，说明阿霉素心脏毒性损伤模型构建成功；而经过CHK1治疗的小鼠与单纯阿霉素处理组相比，LVFS和LVEF等心功能指标均明显升高(p<0.01)，说明CHK1组处理能够改善DOX诱导的小鼠心脏功能受损。超声心动图检测提示CHK1治疗改善了阿霉素诱导的心脏收缩功能不全：尾静脉注射AAV9包装的心肌线粒体靶向CHK1能够显著改善阿霉素诱导的心脏射血分数的下降。

3、TUNEL染色检测小鼠心肌细胞凋亡水平

(1)制备心脏组织石蜡切片：将新鲜取材好的小鼠心脏组织充分浸没于4％多聚甲醛中静置24h进行固定；接着，依次经过梯度酒精和二甲苯，具体地，70％乙醇24h、80％乙醇2h、90％乙醇1h、100％乙醇30min2次、100％乙醇：二甲苯(1:1)25min、二甲苯25min，最后放入65℃液体石蜡中浸蜡3-5h；使用石蜡包埋机进行包埋后，采用石蜡切片机进行切片、展片和摊片，厚度为5μm。静置于65℃烘箱过夜脱蜡。

(2)免疫荧光染色：取出之前待染色的石蜡切片进行脱蜡与复水；提前配置好酸性修复液，对待染切片进行抗原修复(高火3min，低火7min)，加热结束自然冷却至室温并使用PBS溶液置于摇床上室温清洗；加入封闭液(5％BSA+1‰Triton)，室温摇床60rpm封闭2h；封闭结束后使用PBS清洗方法同上，后滴加一抗稀释液(cTNT：封闭液＝1：300)置于4℃冰箱静置过夜；第二天使用PBST清洗结束后滴加二抗稀释液(鼠抗488：封闭液＝1：300)室温摇床(60rpm，2h)。

(3)TUNEL染色：使用PBS配置proteinaseK溶液(2mg/ml)，并滴加覆盖切片上组织，静置孵育20min。PBS清洗5min后，加入平衡液(蒸馏水稀释5×Equilibration为1×使用浓度)，室温避光静置孵育20min。PBS清洗5min后，加入TdT溶液，配方为蒸馏水34μl+10μl5×Equilibration buffer+5μlBright red+1μlRecombination TdT enzyme＝50μlTdT溶液，37℃烘箱孵育60min。以上操作过程均需要避光。取出后在室温摇床上用PBST洗后，核染料常温孵育30min，结束后甘油封片。

(4)观察和统计：封片结束后使用激光共聚焦显微镜(Zeiss，LSM800)进行观察和拍摄，通过ZEN软件采集图像并用Image J统计阳性心肌细胞个数。

(5)如图7所示，DOX处理后，心脏组织切片中凋亡心肌细胞比例明显升高，在进行AAV9-CHK1治疗后，Tunel阳性心肌细胞比例明显下降，提示CHK1对DOX诱导的心肌损伤具有保护和治疗作用。

4、MASSON染色检测小鼠心肌损伤水平

取待染石蜡切片进行脱蜡和水化，方法同上。使用Masson染色试剂盒进行染色，具体步骤时间和使用的试剂如下：

染色结束后，树脂封片。并使用Nikon正置显微镜进行扫描拍摄，使用Image J软件进行统计和分析。胶原纤维呈蓝色，心肌细胞呈红色，从图8可知，相较于正常组，阿霉素组(DOX组)心肌纤维化面积明显增多；AAV9-CHK1治疗的心肌间质纤维化较DOX组明显减轻。

以上所述，仅是本发明的优选实施例，并未对本发明作任何限制。对于本技术领域的技术人员，根据本发明技术实质对以上实施例所作的修改和变更，均应属于本发明技术方案的保护范围内。

Claims (10)

1.CHK1基因在制备预防/治疗蒽环类化疗药诱导的心脏毒性损伤的药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，将所述CHK1基因在机体的心肌细胞线粒体中过量表达。

3.表达CHK1蛋白的重组腺相关病毒在制备预防/治疗蒽环类化疗药诱导的心脏毒性损伤的药物中的应用。

4.根据权利要求1或3所述的应用，其特征在于，所述的蒽环类化疗药包括柔红霉素、阿霉素、表阿霉素、阿克拉霉素、去甲氧柔红霉素、吡柔比星、伊达比星、戊柔比星、米托蒽醌及上述药物的衍生物。

5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述CHK1蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。

6.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述重组腺相关病毒含有所述CHK1蛋白的编码基因，所述CHK1蛋白的编码基因的编码链的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。

7.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的腺相关病毒为AAV9。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述的重组腺相关病毒含有心肌特异性启动子cTNT和靶向线粒体元件MTS。

9.一种预防/治疗蒽环类化疗药诱导的心脏毒性损伤的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物的活性成分包括表达CHK1蛋白的重组腺相关病毒。

10.根据权利要求9所述预防/治疗蒽环类化疗药诱导的心脏毒性损伤的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物还包括药学上可接受的辅料或添加剂。