CN1167489A - 具有诱导下丘脑作用的新的雌甾烯 - Google Patents

具有诱导下丘脑作用的新的雌甾烯 Download PDF

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Abstract

本发明涉及与人类犁鼻骨器官中神经上皮细胞结合的雌甾烯甾体化合物。优选地使用该化合物的含一种或多种可药用载体的药物组合物的形式。图(1)表示1，3，5(10)，16-雌四烯-3-醇的合成。

Description

具有诱导下丘脑作用的新的雌甾烯
                        发明背景相关申请案的介绍
本申请是1993年9月28日提出的申请号为08/127,980的申请的部分继续，而后者为1991年6月24日提出的申请号为07/903,525的U.S.专利申请的继续，后者依次为1991年5月31日提出的申请号为07/707,862的U.S.专利申请的继续，后者依次为1991年1月7日提出现已放弃的申请号为07/638,743的U.S.专利申请的继续。
本申请也涉及申请号为07/903,525的U.S.专利申请的另一继续，1993年6月15日提出的申请号为08/077,140的U.S.专利申请，涉及1991年6月24日提出，标题为“作为人类下丘脑功能中变化的神经化学抑制剂的雄甾烯甾族化合物以及有关的药物组合物和方法”的，申请号为07/903,604的共同转让，同时待审的U.S.专利申请(1991年5月31日提出的申请号为07/708,936的U.S.专利申请的继续，后者依次为1991年1月7日提出现已放弃的申请号为07/638,185的U.S.专利申请的继续，也涉及与1992年6月24日提交的07/903,604继续共同转让，同时待审的申请号为08/077,359的U.S.专利申请。上述U.S.专利申请均作为参考收编于此。
最后，本申请也可涉及1992年3月24日提出的，标题为“含人类信息素的香味剂组合物”的共同待审的U.S.专利申请U.S.S.N.07/856,435。
技术领域
总的说来，本发明涉及通过变化人类下丘脑功能，由此改变某些由人体下丘脑介导的行为和生理功能的新的化合物和方法。更特别地，本发明涉及某些雌甾烯甾族化合物作为生理功能和行为的神经化学有效剂的用途。
相关技术的描述
本发明涉及被称为雌甾烯甾族的化合物的一类化合物和本文将描述的相关化合物，以及使用这些化合物作为人类半化学物质(semiochemicals)以改变下丘脑功能，由此影响某些继发行为和生理现象，例如焦虑的减轻的用途。雌甾烯甾族化合物的典型化合物为17β-雌二醇(1，3，5(10)-雌三烯-3，17β-二醇)，这类化合物的特征是具有1，3，5(10)A-酚环以及在3-位具有羟基或羟基衍生物，如醚或酯。对某些哺乳动物有信息素性质的某些雌甾烯甾族化合物已被描述。米氏等，在自然(1968)218：746〔Michael R.P.et al.，Nature(1968)218：746〕中认为雌激素(特殊的雌二醇)为雄性恒河猴的信息素引诱剂。帕氏在激素与行为(1976)7：207-215〔Parrot，R.F.，Hormones and Behavior(1976)7：207-215〕中报导给切除卵巢的大鼠注射雌二醇苯甲酸酯诱发交配行为；恒河猴血液中雌二醇的浓度对雄性的反应(菲氏，生理及行为(1976)16：305-310)〔Phoenix，C.H.，Physiol and Behavior(1976)16：305-310〕和雌性的反应(菲氏，激素及行为(1977)8：356-362)〔Phoenix，C.H.，Hormones and Behavior(1977)8：356-362〕已被描述。另一方面，文献中对信息素是否在哺乳动物生殖行为和相互关系的联络中所起的作用观点不尽一致(贝氏等，〔Beauchamp，G.K.，et al.〕“哺乳动物化学物质联系中的信息概念：评论”，哺乳动物嗅觉，生殖过程，和行为，多氏〔Doty，R.L.，〕Ed，科学院出版社〔Academic press〕，1976)。
本发明的一个实施方案涉及非系统地，鼻腔给予某些雌甾烯甾类化合物，从而影响人类特殊的行为和生理反应，例如减轻消极的情感，情绪，和性格特征。特别地，用一种或多种甾类化合物或含甾类化合物的组合物鼻腔给药可提供对到目前为止知之甚少的神经内分泌结构，一般称为犁鼻骨器官(“VNO”；也称为“Jacobson’s organ”)的神经受体的接触。通过大多数高等动物-从蛇到人的鼻孔可进入该器官，而且特别地，该器官与某些种的信息素的感受有关(见穆氏和西氏〔Muller-Schwarze & Silverstein〕，化学信号，plenum出版社，纽约(1980))。位于腭上的犁鼻骨器官神经上皮轴突形成了犁鼻骨神经并且与附属嗅觉球具有直接的突触连接，从那里到大脑皮质内侧扁桃样前脑和下丘脑核具有间接的输入端。末端的远侧轴突为神经元。也可在VNO中作为神经化学受体。斯氏等，甾体生化与分子生物学杂志，(1991)39：553〔Stensaas，L.J.，et al.，J.Steraid Biochem and Molec.Biol.(1991)39：553〕。该神经与下丘脑具有直接的突触连接。
约氏等〔Johnson，A.et al〕(J.Otolaryngology(1985)14：71-79)报导了大多数成人存在犁鼻骨器官的证据，但推断该器官可能无功能。斯氏等〔Stensaas，L.，et al.，〕同上；以及摩氏等〔Moran，D.T.，et al.，〕，盖氏〔GarciaVelasco，J.〕和满氏〔M.Mondragon〕；蒙氏〔Monti-Bloch，L.，〕和格氏〔B.Grosser〕-都在甾体生化和分子生物学上〔J.Steroid Biochem.and Molec.Biol.(1991)39〕报导了VNO为功能性化学敏感受体的相反论点。
显然，应当鉴定并合成人类半化学物质(semiochemcals)和信息素，开发用于影响下丘脑功能的药物组合物和方法。本发明涉及如下意想不到的发现，即，当对人类受试者鼻腔给药时，某些神经化学配体，特别是某些雌甾烯甾体化合物和相关的化合物，或含某些雌甾烯或相关化合物的药物组合物，特异地与鼻神经上皮细胞的化学感受器结合，这种结合引起一系列神经生理反应，导致个体下丘脑功能的改变。给药适当时，某些这类化合物对下丘脑的作用影响自主神经系统的功能和各种行为和生理的表现，包括但不限于：焦虑，经前紧张，恐惧，攻击行为，饥饿，血压，以及其他通常认为由下丘脑调节的行为和生理的功能。OttoAppenzeller，科氏〔Korner，P.I.〕的自律心血管功能的中枢神经控制和雷氏〔Levy，N.M.，〕和马氏〔Martin，P.J.〕的心脏的神经控制，生理学手册；第2部分：心血管系统-心脏，Vol.I，Washington DC，1979，美国生理学协会；费氏等〔Fishman，A.P.，et al〕editors，生理学手册。第3部分：呼吸系统。Vol.II，呼吸的控制，Bethesda MD.1986，美国生理协会。
某些情况下可使用单一的雌甾烯甾族的化合物或相关的化合物，某些情况下使用雌甾烯甾族的化合物和/或相关化合物的结合物。
               本发明概述
相应地，本发明的目的是提供本身为人类半化学物质(Semiochemicals)或信息素并适于对个体经鼻给药的新的甾体化合物。
本发明另外的目的，优点和新的特征将在下面的描述中部分地阐明，本领域技术人员通过查看下面的描述将理解本发明的其他部分，或者通过实施本发明可学会本发明的其他部分。
本发明的目的通过下式的甾体化合物而实现：其中R1基本上选自一个或两个氢原子，甲基，亚甲基，和一个或两个卤原子；R2不存在或基本上选自氢和甲基；R3基本上选自氧代基，羟基，低级烷氧基，低级酰氧基，苯甲酰基，环戊丙酰基(cypionyl)，葡糖甙酸和磺酰基；R4基本上选自氢，羟基，低级烷氧基，低级酰氧基，氧代基和卤素；R5不存在或基本上选自氢，羟基，低级烷氧基和低级酰氧基；R6为氢或卤素；以及“a”表示该甾体化合物的A环任选地是芳香不饱和环，或者“b”，“c”和“d”均任选地是双键；以及“e”，“f”，“g”，“h”，“i”和“j”均任选地是双键。在该实施方案中，甾体化合物优选地以含一种或多种药学上可接受的载体的药物组合物的形式给药；条件是：
(I)当“a”存在，R3为羟基，“j”，“i”，“g”和“h”都不存在时，(a)R4不能为氢；或者(b)如果“e”和“f”不存在R4不能为氧代基；
(II)当“a”存在，R3为羟基，“j”，“i”和“g”都不存在，“h”存在时，R1不能为亚甲基；
(III)当“a”，“h”和“i”存在时，(a)“e”或“f”中至少有一个存在，(b)R1为亚甲基；或(c)R1不是氢；
(IV)当“b”存在，R3为氧代基，“g”，“h”，“i”，“j”都不存在，R5为氢时，(a)如果“f”不存在R1不能为一个或两个氢，或(b)如果“f”存在，R1不能为甲基；
(V)当“b”和“j”存在而R3为氧代基时，“e”或“f”中至少有一个必须存在或者R1必须是亚甲基；
(VI)当“c”存在，“d”不存在而R3为羟基时，(a)至少“e”或“f”必须存在，或(b)R1必须为亚甲基；
(VII)当“c”和“d”存在而R3为甲氧基时，(a)至少“e”或“f”必须存在，或(b)R1必须为亚甲基；
(VIII)当“b”存在，R3为羟基而R5为氢时，(a)至少“e”或“f”必须存在或者(b)R1必须是亚甲基。
优选的化合物为其中“a”存在而“g”，“h”或“i”可为也可不为双键的一类化合物。另一类优选的化合物中“b”、“c”或“j”为双键。再另一类中“c”和“d”为双键。再另一类中R2为甲基而“e”为双键。
术语低级烷基，低级烷氧基，等，包括1到6个碳原子，优选1到4个碳原子的碳链。卤素包括I、Br、F和Cl。
本发明的甾体化合物改变个体下丘脑功能和自律功能。在鼻神经上皮细胞表面的化学感受器的配体被提供，其中细胞是非嗅觉上皮组织中的一部分，并且将该配体用于个体的鼻通道，以使配体特定地与上述化学感受器结合，从而导致个体下丘脑功能的改变。
本发明所有的方案都涉及和包括这些方案中公开的甾体化合物结构的功能等同物，以及表示上述功能等同物的修饰的甾体化合物，无论该修饰的甾体化合物是否被详细地公开。
                 附图的简要描述
图1表示1，3，5(10)，16-雌四烯-3-醇的合成。
图2A，2B和2C为局部使用特定的甾体化合物对雄性受试者犁鼻骨器官(图2A)和对嗅觉上皮(图2C)受体电位电生理学作用的示意图。图2B为雌甾烯对雄性和雌性受试者VNO受体电位作用的比较图。
图3为局部使用特定的甾体化合物对雄性(3A)和雌性(3B)受试者犁鼻骨器官电生理学作用的示意图。
图4描述雄性受试者对1，3，5(10)，16-雌四烯-3-基乙酸酯的各种自律性反应。A＝犁鼻骨神经上皮受体电位；B＝流电的皮肤反应的变化(K-ohms)；C＝皮肤温度变化(摄氏度)。
图5表示暴露于1，3，5(10)，16-雌四烯-3-醇甲基醚和乙酸酯后VNO电位改变的比较。
图6表示由犁骨信息素(vomeropherins)刺激VNO而产生的局部的和自发的反应中的雌雄异型。将各种犁骨信息素(vomeropherins)(200fmoles)和稀释的对照物按描述方法对30个雄性受试者和30个雌性受试者(年龄20到45)给药。条形图表示群体的平均反应。
图6A和B：按描述方法测得的雄性(A)和雌性(B)受试者的EVG反应。
图6C和D：按描述方法测得的皮肤电活性。显示了由于犁骨信息素(vomeropherins)对雄性(C)和雌性(D)受试者VNO的传送而产生的反应的变化(以XΩ测量)。
图6E和F：按描述方法测得的α-皮层活性。显示了由于犁骨信息素(vomeropherins)对雄性(E)和雌性(F)受试者VNO的传送而产生的反应的变化。
图6G和H：按描述方法测得的皮肤温度(ST)。显示了由于犁骨信息素(vomeropherins)对雄性(G)和雌性(H)受试者VNO的传送而产生的反应的变化。A＝1，3，5(10)，16-雌四烯-3-基乙酸酯B＝雄甾-4，16-二烯-3-酮C＝1，3，5(10)，16-雌四烯-3-醇D＝3-甲氧基-雌甾-1，3，5(10)，16-四烯E＝雄甾-4，16-二烯-3α-醇F＝雄甾-4，16-二烯-3β-醇
图7表示用嗅觉剂和犁骨信息素刺激OE而诱导的雄性和雌性受试者的电-嗅觉图A：400fmoles嗅觉剂1-页蒿萜酮和桉油醇以及200fmoles犁骨信息素A，B，C，D和F；以及立体异构体E分别以一秒泊脉冲使用于20个受试者(雄性和雌性)的OE，并按描述方法记录各EOG反应。嗅觉剂以及E和B产生明显的(P＜0.01)局部反应。B：当400fmoles嗅觉剂1-页蒿萜酮和桉油醇被传送到雄性和雌性受试者VNO时，未引起明显的EVG反应。
图8表示下列犁骨信息素对20个雌性受试者犁鼻骨器官的电生理作用：G＝雄甾-4-烯-3-酮H＝雄甾-4，16-二烯-3，6-二酮J＝10，17-二甲基甾-4，13(17)-二烯-3-酮K＝1，3，5(10)，16-雌甾四烯-3-醇-甲基醚L＝1，3，5(10)，16-雌四烯-3-基丙酸酯EVG＝犁鼻骨电位图GSR＝皮肤流电反应＝皮肤电活性(EDA)ST＝皮肤温度
图9表示犁骨信息素对20个雄性受试者的犁鼻骨器官的电生理作用。M＝1，3，5(10)-雌三烯-3-醇
图10表示雌甾-1，3，5(10)，6-四烯-3-醇和雌甾-4，16-二烯-3-醇的合成。
图11表示实施例16到19描述的化合物的合成。
图12表示实施例20到24描述的化合物的合成步骤。
图13表示实施例25到28描述的化合物的合成步骤。
图14表示实施例29到30描述的合成步骤。
图15表示实施例31～36描述的合成步骤。
图16表示实施例37～39描述的合成步骤。
图17表示实施例40到46描述的合成步骤。
图18表示实施例47到49描述的合成步骤。
图19表示实施例50到51描述的合成步骤。
图20A，20B和20C分别表示表1中13个雌甾烷对女性作用的EVG，GSR和ST数据。
图21A，21B和21C分别表示表1中13个雌甾烷对男性作用的EVG，GST和ST数据。
图22A和B到34A和B分别表示与图20中一致的13个雌甾烷对男性(A)和女性(B)作用的EEG数据。
                   发明的详细描述定义
“情感”指短暂的感情状态。典型的消极情感指神经质的紧张、羞耻、忧虑、易怒、激怒等感情。“情绪”指持久性感情状态如内疚、悲哀、绝望、卑微、懊悔、痛苦、愁苦等。“性格”特性为个体个性的更持久性的方面。典型的消极性格特性为敏感、懊悔、该受责备、顽固、怨恨、悲痛、胆怯、懒惰等。
“雄甾烷甾体化合物”为10-和13-位甲基化的具有四环甾族结构的脂族多环烃。雄甾烯甾体化合物为雄甾烷的衍生物，通常指具有至少一个双键的化合物。通常，除非一个化合物被描述为一个甾烷，该化合物一般具有18-碳基团。但是，显然18-去甲-雄甾烷在此也被看作是雄甾烷甾体化合物。进一步，所有具有上述结构特征的衍生物一般也被看作是雄甾烷甾体化合物。
下列结构式显示雄甾烯和雌甾烯共有的四环甾体结构。在描述基团和取代基的位置时，将使用下列编码系统。
Figure A9519651800121
“雌雄异型”指同种动物的雄性和雌性之间对药剂的作用或反应的差异。
药品“有效量”为当对需要该药物的个体使用药物时，达到所期望的生理和/或心理作用的药物的量和/或浓度范围。在本申请中，需要药物治疗的个体为需要调节或调整下丘脑功能的个体，或需改变通常由下丘脑影响的生理的或行为的特征的个体。给药有效量可根据给药途径变化。例如，当甾体化合物以溶液形式使用于个体面部皮肤时，有效浓度为从约1到约100μg/ml，优选约10到约50μg/ml，最优选约20到约30μg/ml。当甾体化合物被直接导入VNO时，有效量为约1pg到约1ng，更优选约10pg到约50pg。当甾体化合物以软膏、乳膏、气雾剂等用于鼻通道时，有效量为约100pg到约100微克，优选约1ng到约10微克。另外，当从某些途径使用某些药物时，它们可以是有效的，但以其他途径使用时，它们是无效的。
“下丘脑”为包括下丘脑沟下的第三室的腹壁并包括形成室底部结构(包括视交叉，结节灰质，漏斗和乳头体)的间脑部分。下丘脑调节自主神经系统并控制数种生理的和行为的功能如所谓应急反应。性动机、水平衡。糖和脂肪代谢、饥饿、体温的调节、内分泌，等。下丘及也是调节血压的加压素和诱导分娩和乳汁释放的催产素的来源。所有下丘脑的功能都可通过本文描述的半化学物质(semiochemical)治疗而调节。
本文所使用的“配体”为通过与处于受体细胞表面的受体分子特异性地结合，由此将信号传导通过细胞表面而作为化学信号的分子。配体与化学感觉受体的结合可被测量。化学感受组织，如犁鼻骨神经上皮或嗅觉神经上皮，含大量神经受体细胞，各具有至少一个细胞表面受体。很多受体分子具有相同的配体特异性。因此，组织暴露于对其具有特异性的配体(例如VNO暴露于半化学物质(semiochemical)时细胞表面受体电位的总变化可被测量
这里使用的“低级烷基”指具有1到4个碳的直链或支链饱和烃链，例如，甲基、乙基、正丙基、异丁基等。这里使用的常规概念上的“烷氧基”指其中R为这里定义的烷基的-OR基团。
“信息素”为通过分泌和鼻感受而在同种成员之间提供化学方法的交流的物质。在哺乳动物中信息素通常由鼻部犁鼻骨器官中的受体来探测。一般信息素影响生长，生殖及有关的行为。“半化学物质(semiochemical)”是个更普遍的术语，它包括信息素描述具有化学感受信使功能，与特定的神经上皮受体结合，诱导生理的或行为的作用的任何来源的物质，“犁骨信息素(vomeropherin)“为通过犁鼻骨器官介导生理作用的半化学物质。
一微微克(pg)等于0.001毫微克(ng)。一ng等于0.001微克(μg)。一μg等于0.001mg。II.发明进行的方式
A.发明使用的雌烯
本发明在某种程度上针对结构与雌二醇(也称为1，3，5(10)-雌三烯-3，17β-二醇)有关的雌甾烯甾体化合物，该甾体化合物的特征是具有芳香的1，3，5(10)A-环并在3-位具有羟基或羟基衍生物。
特别适用于本发明的雌甾烯包括其中，分别地R1＝氧代基，β-羟基，氢；R2＝甲基，氢；(如式I中所述)的雌甾烯。
大部分上述甾体化合物及其葡糖甘酸，硫酸酯，环戊丙酸酯，和苯甲酸酯衍生物为本领域已知化合物并可从市场上购得。例如，从SigmaChemical Co.，Aldrich Chemical Co.，等购得。烷氧基衍生物及其合成也是本领域已知的，并可参见收编于此作为参考的U.S.专利No.2,984,677。
表1包括本发明涉及的雌甾烯，但并不限制其范围。合成部分图解说明用于制备这些雌甾烯的中间体和亚结构的合成。
                                     表1
                                   雌甾烷
Figure A9519651800151
             新的雌甾烷雌甾-1，3，5(10)，6，16-五烯-3-基乙酸酯(E4/N1乙酸酯)雌甾-1，3，5(10)，7-四烯-3-醇(E9/N2)3-羟基雌甾-1，3，5(10)，16-四烯-6-酮(E6/N1)6-氧代雌甾-1，3，5(10)，16-四烯-3-基乙酸酯(E6/N1乙酸酯)17-亚甲基雌甾-1，3，5，7，9-五烯-3-醇(E10/N3)雌甾-1，3，5(10)，16-四烯-3，6β-二醇(E12/N1)6β-羟基雌甾-1，3，5(10)，16-四烯-3-基乙酸酯(E12/N1乙酸酯)雌甾-4，16-二烯-3β-醇(E3/N1)17-亚甲基-6-氧代雌甾-1，3，5(10)-三烯-3-基乙酸酯(E6/N3乙酸酯)雌甾-4，9，16-三烯-3-酮(E5/N1)雌甾-1，3，5，7，9，16-六烯-3-醇(E10/N1)雌甾-1，3，5(10)，6-四烯-3-醇(E4/N2)3-甲氧基雌甾-2，5(10)，16-三烯(E8/N1)10-羟基雌甾-4，16-二烯-3-酮(E7/N1)17-亚甲基雌甾-1，3，5(10)，7-四烯-3-醇(E9/N3)雌甾-5(10)，16-二烯-3α-醇(E11/N1的3α差向异构体)雌甾-5(10)，16-二烯-3α-醇(E11/N1)17-亚甲基雌甾-4-烯-3-酮(E1/N3)雌甾-1，3，5，7，9，16-六烯-3-基乙酸酯(E10/N1乙酸酯)17-甲基甾-4，13(17)-二烯-3β-醇(E3/N4)雌甾-1，3，5(10)，7，16-五烯-3-醇(E9/N1)3-甲氧基-17-亚甲基雌甾-2，5(10)-二烯(E8/N3)17-亚甲基雌甾-4-烯-3β-醇(E3/N3)17-亚甲基雌甾-1，3，5(10)-三烯-3，6β-二醇(E12/N3)雌甾-1，3，5(10)，7，16-五烯-3-基乙酸酯(E9/N1乙酸酯)雌甾-1，3，5(10)，6，16-五烯-3-醇(E4/N1)17-亚甲基雌甾-1，3，5(10)，7-四烯-3-基乙酸酯(E9/N3乙酸酯)
亚结构合成
参照前表，下面在给定的行(E1到E12)或列(N1到N4)中例举中间体的合成。
E类
E1：
Figure A9519651800171
(E2的甲基醚)
E2：
Figure A9519651800173
市场上可得到的亚结构，例如，雌甾酮。
E3：简氏等，化学会志1977(7)，724〔James R.Bull and Jan Floor，J.Chem.Soc.Perkin I，1997(7)，724〕。
E4：
Figure A9519651800182
市场上可得到的亚结构，例如，6-脱氢雌甾酮。
E5：麦氏等，有机化学杂志，1974，Vol.10.No.5，pp.1014-1019)〔V.I.Mel’nikova and K.K.Pivnitskii，Zhurnal Organickeskoi Khisnii.1974，Vol.10，No.5，pp.1014-1019)〕。
E6：
Figure A9519651800191
(E2的乙酸酯)                                          (E6的乙酸酯)甾体化合物，1991，Vol.56，p.173〔Hidetoshi Takagi，Ken-ichiKomatsu，and Itsuo Yoshisawa，Steroids，1991，Vol.56，p.173〕。
E7：
Figure A9519651800193
米氏等〔Michel Mauney and Jean Rigaudy〕，Bull.Soo.Chien，1976，No.11-12，2021。
E8：
Figure A9519651800194
(E2的甲基醚)                                              (E8)
Figure A9519651800201
山氏等，有机化学杂志，1964，29，2351〔K.J.San，R.H.Blank，R.H.Evans，Jr.，L.I.Feldman，and C.E.Holmbund，J.Org.Chem.，1964，29，2351〕。
E9：
Figure A9519651800202
市场上可得到的亚结构，如马烯雌甾酮。
E10：
Figure A9519651800203
市场上可得到的亚结构，如马萘雌甾酮。
E11： 查氏等，有机化学杂志，1971，Vol，7，No.5，pp.940-947〔A.N.Cherkasov，A.M.Ponomarev and K.K.Pivnitskii，ZhurnalOrganiskeskoi Khimii，1971，Vol.7，No.5，pp.940-947〕。
E12：
Figure A9519651800212
(E6的甲基醚)                                                (E2的甲基醚)
Figure A9519651800213
甾体化合物，1991，Vol.56，p.173〔Hidetoshi Takagi，Ken-ichiKomatsu，and Itsuo Yoshisawa，Steroids，1991，Vol.56，p.173〕。
N类
N1：
N2：1.罗氏等，美国化学会志，1964，86，2825〔Robert H.Shapiroand Carl Djerassi，J.Am.Chem.Soc.，1964，86，2825〕。2.皮氏等，有机化学杂志，1988，53，2193-2198〔Pilar Lupon，Frances C.Canals，Arsenio Iglesias，Joan C.Ferrer，Albert Palomarand Juan-Julio Bonet，J.Org Chem.1988，2193-2198〕。
N3：
Figure A9519651800222
1.居氏等，〔Gunther Drefahl，Kurr Ponold and Hans Schick，〕Berichte，1965，98，6042.里氏等，医学化学杂志，1989，32，1642〔Richard H.Peters，David F.Crows，Mitchell A.Avery.Wesley K.M.Chong，andMasako Tanabe，J.Med.Chem.，1989，32，1642
N4：1.弗氏等，美国化学会志77：4145〔Franz Sonheimer，O.Moncera，M.Viguiza & G.Rosenkranz(1955)J.Am.Chem.Soc.，77：41452.威氏，有机化学杂志，1961，26，4583〔William F.Johns，J.Org.Chem.，1961，26，4583〕。
甲基雌甾烯
Figure A9519651800232
哈氏，有机化学杂志，J.Org.Chem.，1958，23，1747〔Harold J.Nicholas，J.Org.Chem.，1958，23，1747〕。
Figure A9519651800233
里氏等，医学化学杂志，1989，32，1642〔Richard H.Peters，DavidF.Crows，Mitohell A.Avery，Wesley K.M.Chong，and MasakoTanabe，J.Med.Chem.，1989，32，1642〕。
Figure A9519651800241
格氏等，四面体通报，1982，Vol.23，No.35，pp.3611-3614〔M.B.Green and F.J.Zeelen，Tetrahedron Letters，1982，Vol.23，No.35，pp.3611-3614。因此可合成的化合物包括上述化合物和由它们衍生的化合物，即与E1、E2、E3、E5、E6、E7、E8、E11或E12结合的17-甲基-N1，17β-甲基-N2，或14α-甲基-N4。
卤代雌甾烯
Figure A9519651800242
乔氏，C.A.专利70：58140g〔George A.Boswell in patent C.A.70：58140g，following〕。米氏等，标记化合物和放射性药物杂志，1986，Vol.XXIII，No.2，p.197〔G.Michael Blackburn，Brian F.Taylor and Andrew F.Worrall，Journal of Labelled Compounds and Radiopharmaceuticals，1986，Vol.XXIII.No.2，p.197〕。
所以可合成的化合物包括这些化合物以及由它们衍生的化合物；即，与E1、E2、E3、E5、E6、E7、E11或E12结合的17-氟-N1。另外，还包括与E2、E6或E12结合的17-碘代-N1。
B.合成方法
甾体化合物的合成反应的总的步骤为本领域技术人员所已知(例如，费氏等，甾体化合物〔Fieser，L.F.and M.Fieser，Steroids，Reinhold，N.Y.1959〕)。当必须确定反应的时间和温度时，可通过常规方法进行。加入所需的反应剂后，将反应混合物在惰性气氛下搅拌并以小时计的间隔取出等分试样。通过薄层层析的方法分析等分试样以检查原料的消失，消失时开始加工步骤。如果原料在二十四小时内未被耗光，则将反应混合物加热回流并如前所述，以小时为间隔分析等分试样，直到无原料存在。在这种情况下，开始加工步骤前应将反应混合物冷却。
通过在惰性含氯烃溶剂如二氯甲烷中使用烷基化试剂如氟硼酸三甲基氧鎓盐、氟硼酸三乙基氧鎓盐或甲基氟磺酸酯反应可从相应的羟基甾体化合物制备雌甾烯的烷氧基衍生物。选择性地，烷基化试剂如烷基卤化物，烷基甲苯磺酸酯，烷基甲磺酸酯和二烷基硫酸酯可在极性，非质子传递溶剂例如，DMF、DMSO和六甲基磷酰胺中与碱如氧化银或氧化钡一起使用。选择性地，碱如K2CO3可在溶剂如乙醇或丙酮中使用。
正如本领域技术人员所知，产物的纯化可通过层析和/或结晶的方法来完成。
C.使用的药物组合物和方法
本发明的一个方案为改变个体下丘脑功能的方法。另一个方案为改变个体的自律性功能。自律性功能包括但不限于，心率、呼吸速率、大脑波型(α皮层活性百分率)，体温。其他方案包括但不限于，减轻个体负性情感，负性情绪或负性性格特征的方法。另一个方案是治疗女性经前期紧张的方法。所有这些方案都可通过非系统地，经鼻使用某种雌甾烯甾体化合物和雌甾烯化合物的组合物而实现。
这种特殊的给药方式与其它方式如摄入或注射在几个重要方面的区别在于甾体化合物配体经鼻给药具有与VNO直接接触的优点。在本发明的这种方法中，未经丸或针刺-即，非侵害地，将合适的配体直接地使用于鼻通道和犁鼻骨器官中的化学感受器上。通过这里所述的配体的结合，药物的作用被介导到鼻腔中，特别是VNO中的神经上皮细胞上的特定的受体。这种药物作用的模式通过的是神经系统而不是循环系统-因此影响大脑功能时无需考虑血-脑屏障。由于在信息素受体和下丘脑之间仅有一个突触连接，因此上述治疗方法提供了通过神经系统影响下丘脑的直接方式。由于感受神经位于大脑中的特定部位，该方法具有高度专一的药物作用，因此大大地降低了不需要的副作用的可能性。
VNO接触是重要的，因为VNO与化学感受和信息素功能有关。VNO由一对位于鼻中隔下缘的盲小管憩室组成。VNO含有神经上皮，轴突，该轴突到扁桃体具有直接的突触，从那里到下丘脑。在大多数陆地脊椎动物包括人胎儿中都已发现了VNO的存在；但是，通常认为它在成人时将退化(见Johnsoh，et al.，同上)。
这里描述的活性化合物，或其硫酸酯、环戊丙酸酯、苯甲酸酯、丙酸酯、卤化物或葡糖醛酸衍生物，可直接被使用，但优选地以组合物的形式使用。它们被配制成液体药剂形式如，液体、悬浮液等，优选适于精确剂量的单次给药的单剂量形式。液体药剂可作为滴鼻剂或气雾剂被使用。
另外，可将活性化合物制成乳膏或软膏组合物，局部用于鼻腔的内表面。作为另一种选择，可通过将这些活性剂以大体积包裹于物质中或使其以显微水平存在于合成聚合物，如聚硅氧烷，和天然聚合物如明胶和纤维素，而实现活性剂的控制释放。通过选择适当的用于控制扩散速度的聚合物体系可控制释放率(蓝氏等，生物材料2，201，1981〔Langer，R.S.and Peppas，N.A.，Biomaterials 2，201，1981〕。天然聚合物，如明胶和纤维素在数分钟到数小时内缓慢地溶解，而聚硅氧烷可在数月内保持完整。药物组合物将包括常规药物载体或赋形剂，一种或多种式I活性雌甾烯化合物。另外组合物也可包括其他适用溶剂、药用试剂、载体、辅助剂，等。
最可能的传递假定的人类信息素的方法是吸入存在于其他人皮肤上的天然存在的信息素。几种16-雄甾烯甾体化合物，包括5α-雄甾-16-烯-3α-醇和5α-雄甾-16烯-3-酮，4，16-雄甾二烯-3-酮，5α-雄甾二烯-3β-醇，以及也许还有5α-雄甾二烯-3α-醇，天然地存在于人体并可能存在于皮肤上。估计天然存在于人体皮肤上的16-雄甾烯甾体化合物的最大浓度为从2到7ng/cm2。估计密切接触时人体将接触到不超过700ng的天然存在的甾体化合物。由于相对而言这些化合物不易挥发，因此估计即使在紧密接触期间，吸入人体的其他人皮肤上的天然存在的甾体化合物不超过0.7pg。仅有大约吸入量的1％将到达犁鼻骨器官的受体。因此，估计自然情况下接触到的天然产生的信息素的最大值为0.007pg。
当然，所使用的活性化合物的量取决于被治疗的对象，疾病的严重程度，给药方式，给药频率，以及主治医师的判断。但是，当药物被直接送入犁鼻骨器官腔时，至少约10微微克的单剂量将有效地引起瞬时自律性反应；当在鼻腔给药时，剂量为约100微微克到约100微克，优选约1毫微克到约10微克，更优选的10毫微克到约1微克。合适的给药频率为每小时一次到每月一次，优选从8次/天到隔天一次，更优选每天1到3次。载体中含有一种或多种活性化合物以及非强制性地存在的药物辅助剂的乳膏可使用一种基剂，例如，凡士林、豚脂或羊毛脂类制备，所述载体例如是水、盐水、含水右旋糖、甘油、乙醇等。
通过将定义如前的活性化合物和非强制性地存在的药物辅助剂溶解、分散，等在例如，水、盐水、含水右旋糖、甘油、乙醇等载体中，以形成溶液或悬浮液，可制备液态的药物组合物。如果需要，所使用的药物组合物也可含有少量无毒的辅助性物质如润湿剂或乳化剂，pH缓中剂等，例如，乙酸钠、单月桂酸脱水山梨醇酯、三乙醇胺乙酸钠、油酸三乙醇胺，等。制备这些药剂的实际的方法为已知的，或对本领域技术人员来说是显而易见的；例如，见雷氏药剂学〔Reirington’sPharmaceutical Soiences〕，Mack Publishing Co.，Easton，PA.，15thEd.，1975。在任何情况下，所使用的组合物或药剂将含有减轻被治疗的患者的症状的有效量的一种或多种活性化合物。
对于气雾剂给药，优选地使用活性组分与表面活性剂和喷射剂完全分配的形式。活性组分的百分率典型地为0.001到2％重量化，优选0.004到0.10％。
当然，表面活性剂必须无毒，并优选溶于喷射剂。典型的这类试剂为含有6到22个碳原子的脂肪酸酯或偏酯，如己酸、辛酸、月桂酸、棕榈酸、硬脂酸、亚油酸、olestearic酸和油酸与脂族多元醇或其环酐，例如，1，2-乙二醇、甘油、赤藓醇、阿糖醇、甘露醇、山梨醇，和由山梨醇衍生的己糖醇(市售的脱水山梨醇的商标为“spans”)形成的酯以及这些酯的聚氧乙烯和聚氧丙烯衍生物。也可使用混合酯，如混合的或天然的甘油酯。优选的表面活性剂为油酸酯或脱水山梨醇，例如，商标为“Arlacel C”(脱水山梨醇倍半油酸酯)，“Span 80”(脱水山梨醇单油酸酯)和“Span 85”(脱水山梨醇三油酸酯)的市售的表面活性剂。表面活性剂可占组合物的重量的0.1-20％，优选0.25-5％。
组合物的剩余部分通常为喷射剂。液化的喷射剂在环境条件下典型地为气体，而在压力下凝结。合适的液化喷射剂有含最多五个碳原子的低级烷烃，如丁烷和丙烷；氟化或氟氯化烷烃，如市售的“Freon”(商标)。也可使用上述物质的混合物。
在气雾剂的制备中，将具有适当的阀门的容器充满含完全分配的活性组分和表面活性剂的合适的喷射剂。因而组分保持升高的压力，直到阀门打开释放组分。
还有一种给药方式，即将挥发性液体组合物局部地用于个体的皮肤，优选面部皮肤。该组合物一般将含有醇类如乙醇或异丙醇。该组合物中也可包括一种香味剂。
D.情威、情绪和性格特征的衡量
与情感、情绪和性格特征有关的感情状态通常通过使用调查表的方式来衡量。例如，可将包含一些涉及感情状态的形容词的调查表提供给个体。个体评价他的或她的由形容词描述的感情状态并以数字为尺度对感情的强度进行评价。相关形容词的集合以及个体对各形容词的评价的统计分析提供了测量各种感情状态的基础。
另外，感情状态可通过自律性变化测量，如多种波动描记器评价中所使用的(流电皮肤反应、脉博速率等)。生理年鉴〔Cabanac，M.AnnualReview of Physiology(1975)37：415〕；“体温调节”〔“BodyTemperature Regulation”，Chapter 59，pp.1417，In：MedicalPhysiology.Vol.II Ed.，VB Mountcastle(1980)〕；电皮肤活性〔Wolfram Borscein.Electrodermal Activity(Plenum Press1992)〕。
另外，也可评价不能用语言表达的信号，如，面部表情及体态。
III.实施例
下列实施例是为了说明而不是为了限制本发明的。
实施例中使用的缩写如下：aq＝含水的；RT＝室温；PE＝石油醚(b.p.50-70℃)；DMF＝N，N-二甲基甲酰胺；DMSO＝二甲亚砜；THF＝四氢呋喃。实施例1-雌甾-1，3，5(10)，16-四烯-3-醇(28)的合成
下面的合成方法在图1中描述：雌酮对-甲苯磺酰基腙(27)
将无水甲醇(2.5升)中的雌酮(26)(270g，1.00mole)和对甲苯磺酰基肼(232.8g，1.25mole)加热回流20小时。将该混合物移至锥形瓶中并使其冷却。将结晶产物抽滤并用甲醇(300ml)洗涤。将滤液依次蒸发至2000ml，800ml和400ml，并在各段时间使其结晶，从而进一步得到产物。总产物为433.5g(99％)。1，3，5(10)，16-雌甾四烯-3-醇(28)：
将无水四氢呋喃(8.0升)中的雌酮对-甲苯磺酰基腙(27)(219.0g，500mmole)在氯化钠/冰浴中冷却。在机械搅拌的同时经双头针在混合物中加入正丁基锂(800ml，己烷中的2.5M溶液，2.00mole)。将该混合物在室温下搅拌3天，加入冰(250g)，再加入饱和氯化铵溶液(500ml)。搅拌使各相混合，然后使其沉积。用特氟隆试管抽吸除去水相并用乙醚(500ml)萃取。将两个有机相依次用同一批饱和碳酸氢钠溶液(500ml)和饱和氯化钠溶液(500ml)洗涤。将有机层干燥(MgSO4)并真空蒸发，得到粗品。将其在500g，230-400目硅胶60上快速过滤，用乙酸乙酯/己烷(25∶75，2.5升)洗脱。真空蒸发滤液，得到结晶物质。将产物用甲醇(300ml)/水(75ml)重结晶，用甲醇(80ml)/水(20ml)洗涤。进一步用乙酸乙酯/己烷(12.5∶87.5)重结晶，得到纯品(88.9g，70％)。实施例2-1，3，5(10)，16-雌甾四烯-3-醇酰基衍生物的合成
先将乙酸酐(0.25ml)(或者对于丙酸酯来说为丙酸酐)后将吡啶(0.25ml)加入乙醚(10ml)中的1，3，5(10)，16-雌四烯-3-醇(254mg，1.00mmole)中，并将该混合物在室温下搅拌16小时。将混合物倒入冰/水中，并用乙醚(2×20ml)萃取。将有机萃取液用水，饱和硫酸铜溶液，水，和饱和氯化钠溶液洗涤，干燥(MgSO4)并真空蒸发，得到粗产物，通过在17.5g硅胶60(230-400目)上快速层析，用10％-12％乙酸乙酯/己烷洗脱进行纯化，得纯产物(192mg，65％)。实施例3-雌甾-4，16-二烯-3-酮(1)的合成
将切成小块的锂线(0.24g，35mg-atom)加到在8.6ml无水THF，大约30ml无水氨，和6.76g叔丁醇中的雌甾-1，3，5(10)，16-四烯-3-甲基醚(551.5mg，2.055mmol)中。将反应混合物在氩气环境下回流4h，然后加入甲醇(2.3ml)并将氨在一夜间蒸出。将残留物溶于25mL甲醇并用5N HCl酸化至pH大约为1。在55到70℃的油浴中加热15分钟后，将冷却的水解混合物分配于25ml水和50ml乙酸乙酯之间，并将水相用25ml乙酸乙酯萃取。将合并的有机萃取液用25ml饱和碳酸氢钠和25ml盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤。减压除去溶剂，得到0.57g油状残留物，将其通过硅胶快速层析纯化(洗脱剂：15％乙酸乙酯/己烷)，接着用戊烷重结晶，得到TLC单点的结晶(206.1mg，39％)，m.p.67-71℃。实施例4-雌甾-2，5(10)，16-三烯-3-甲基醚(2)的合成
在含雌甾-1，3，5(10)，16-四烯-3-甲基醚(1.22g，4.54mmol)的19ml无水THF，14.99g叔丁醇，和大约70ml无水氨中加入切成小块的锂线(0.53g，76mg-atom)。氩气环境下回流6小时后，用5ml甲醇猝灭反应，将氨在一夜间蒸出。将残留物在100ml水中的悬浮液用每份100ml的乙酸乙酯萃取两次，将合并的有机萃取液用盐水洗涤并用硫酸镁干燥。减压除去溶剂后，使用1％乙酸乙酯/己烷作为洗脱剂，将残留物进行硅胶快速层析，然后用无水乙醇重结晶，得到松散的白色结晶(884.1mg，3.269mmol，72％)，m.p.72-73℃，TLC显示单点。实施例5-雌甾-5(10)，16-二烯-3-酮(3)的合成
室温下，使用草酸二水合物(0.84g，6.7mmol)将溶于50ml丙酮的雌甾-2，5(10)，16-三烯-3-甲基醚(2)(646.3mg，2.390mmol)水解6小时。用25ml饱和碳酸氢钠猝灭反应混合物并用每份25ml的乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机萃取液用25ml盐水洗涤两次，用硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩。用己烷将残留物重结晶，得到产物(462.5mg，1.804mmol，75％)，m.p.112-116℃。实施例6-雌甾-5(10)，16-二烯-3-醇(4)的合成
使用氢化锂铝(50.0mg，1.32mmol)在室温下将6mL无水乙醚的雌甾-5(10)，16-二烯-3-酮(3)(301.1mg，1.174mmol)还原1小时。用硫酸钠十水合物(2.00g)猝灭10分钟后，用硅藻土过滤该悬浮液并用每分25mL的乙醚将残留物洗涤四次。将合并的滤液减压浓缩并通过快速层析纯化(硅胶，5％乙酸乙酯/己烷洗脱)，随后将混合的馏分通过制备TLC纯化。将高极性的产物用含水乙醇重结晶，大量损失，得到4.8mg固体。将低极性产物用含水甲醇重结晶得到白色结晶(59.5mg)，m.p.98-100℃。总产率为64.3mg(0.249mmol，21％)。实施例7-雌甾-4，9，16-三烯-3-酮(5)的合成
将含雌甾-5(10)，16-二烯-3-酮(3)(0.38g，1.5mmol)的吡啶(5.0mL，62mmol)溶液在冰盐浴中冷却至-13℃并以使T＜-4℃的量分批加入溴化吡啶鎓过溴化物(Pyvidinium bromideperbromide)(1.58g，4.94mmol)。回荡1分钟后加入苯酚(0.25g，2.7mmol)并在室温下继续反应24小时。加入乙酸乙酯(50ml)并将反应混合物用25ml 1N HCl，两份25ml的饱和硫酸铜，25ml 5％氢氧化钠，和25ml盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤减压浓缩后，将残留物溶解在10mL无水乙醇中，加入锌粒(0.33g，5.0mg-atom)，并将混合物回流1/2h小时。除去上清液，用10mL无水乙醇洗涤残留物，并将合并的上清液减压浓缩。使用15％乙酸乙酯/己烷作为洗脱剂将所得树脂状物进行硅胶快速层析纯化。将适当的馏分集中，浓缩，然后用己烷重结晶，得到固体产物(117.5mg，0.4619mmol，31％)，m.p.87-92℃。实施例8-雌甾-1，3，5(10)，16-四烯-6-酮-3-乙酸酯(6)的合成
将三氧化铬(13.40g，0.1340mol)悬浮于200mL二氯甲烷中，然后在冰-盐浴中冷却至-10℃。加入3，5-二甲基吡唑(12.90g，0.1342mol)，并将混合物搅拌20分钟。加入雌甾-1，3，5(10)，16-四烯-3-基乙酸酯(4.00g，13.5mmol)在冷却的20mL二氯甲烷中的溶液并将反应物搅拌2小时，在此期间T＜-8℃。然后用200g硅胶过滤混合物，进一步用二氯甲烷洗脱产物。将适当的馏分合并，浓缩后，使用15％乙酸乙酯/己烷作为洗脱剂将粗产物进行硅胶快速层析。将适当的馏分集中，减压浓缩，得到白色固体(0.92g，3.0mmol，22％)，m.p.87-103℃。实施例9-雌甾-1，3，5(10)，16-四烯-3-醇-6-酮(7)的合成
将30甲醇中的雌甾-1，3，5(10)，16-四烯-6-酮-3-乙酸酯(203.1mg，0.6543mmol)用1.5mL 5％(w/w)氢氧化钠皂化40分钟。将反应混合物减压浓缩，溶解在50mL水中，用1N HCl中和，并用每份25mL的二氯甲烷萃取三次。将合并的有机萃取液用50mL盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，并浓缩，得到白色固体。将得到的白色固体通过用苯/己烷重结晶和制备TLC纯化，得到白色结晶状固体(52.8mg，0.197mmol，30％)，m.p.188-191℃。实施例10-雌甾-1，3，5(10)，16-四烯-6α-醇-3-基乙酸酯(8)的合成
在室温下将悬浮在35mL 95％乙醇中的雌甾-1，3，5(10)，16-四烯-6-酮-3-基-乙酸酯(6)(421.4mg，1.358mmol)用硼氢化钠(98.8mg，2.61mmol)还原100分钟。减压浓缩后，将残留物悬浮在25mL水中，用1N HCl中和，并用每份25mL的二氯甲烷萃取三次。将合并的有机萃取液用25mL盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，并浓缩。使用25％乙酸乙酯/己烷作为洗脱剂将所得白色泡沫状物进行硅胶快速层析。将馏分合并，浓缩，得到白色固体(0.12g，0.38mmol，28％)m.p.209-212℃。实施例11-雌甾-1，3，5(10)，16-四烯-3，6-二醇(9)的合成
搅拌下，向氢化锂铝(LAH，95％，46.9mg，1.17mmol)在5mL无水THF中的悬浮液中滴加含雌甾-1，3，5(10)，16-四烯-6-酮-3-基乙酸酯(6)(422.9mg，1.360mmol)的5mL无水THF。搅拌50分钟后再加入一部分LAH(46.5mg，1.16mmol)。并将反应物搅拌22小时。回流4小时后，TLC仍能检测到原料。将反应物用0.5mL水+0.5mL 20％(w/w)硫酸猝灭，并减压浓缩。将残留物用每份10mL的热乙酸乙酯萃取四次并用硅藻土过滤。将合并的滤液浓缩并通过快速层析纯化两次，得到固体产品(0.05g，0.2mmol，10％)，m.p.150-157℃。实施例12-雌甾-1，3，5(10)，7-四烯-3-醇(10)的合成
向马烯雌酮(100.2mg，0.3733mmol)在2mL二甘醇的悬浮液中加入肼(59μl，1.9mmol)和氢氧化钾(0.04g，0.7mmol)。将混合物在200-214℃的油浴中搅拌2小时，然后将冷却的反应物用10mL水稀释，用1N HCl中和，用25mL的乙醚萃取三次。将合并的有机萃取液用10mL盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，浓缩，并通过制备TLC(硅胶，15％乙酸乙酯/己烷展开)纯化，得到黄色的树脂状物。将其通过用活性炭脱色并用含水乙醇重结晶来进一步纯化，得到棕黄色结晶(13.2mg，51.9μM，14％)，m.p.130-134℃。实施例13-20-高雌甾-1，3，5(10)，6，8，17-六烯-3-醇(11)的合成
氩气环境下，将溴化三苯基甲基鏻(671.0mg，1.878mg)和叔丁醇钾(212.1mg，1.890mmol)在2.1mL无水DMSO中的悬浮液在76-86℃的热浴中加热1小时，然后加入2.1mL无水DMSO中的马萘雌烯(100.1mg，0.3579mmol)，再将绿色溶液搅拌1小时。冷却后，加入10mL冰-1N HCl，并将此混合物用每份10mL的乙醚萃取三次。将合并的有机萃取液用10mL饱和碳酸氢钠+10mL盐水洗涤，用硫酸镁干燥，用硅藻土过滤，并减压浓缩。将残留的橙色油状物通过制备TLC(硅胶，25％乙酸乙酯/己烷)纯化得到产品(75.5mg，0.286mmol，76％)，TLC检测为单点，m.p.113-121℃。实施例14-雌甾-1，3，5(10)，6-四烯-3-醇(17)的合成
氩气环境下将1.8mL二甘醇中的雌甾-1，3，5(10)，6-四烯-3-醇-17-酮(91.1mg，0.339mmol)，肼(54μl，1.7mmol)，和氢氧化钾(0.06g)在200℃的热浴中加热2小时。冷却至室温后加入10mL水并将该溶液用1N HCl酸化至pH≈2。将所得悬浮液用10mL的乙醚萃取三次并将合并的有机萃取液用10mL盐水洗涤，用硫酸镁干燥，用硅藻土过滤，并减压浓缩。将粗品固体通过TLC(25％乙酸乙酯/己烷，硅胶)纯化，得到TLC检测为单点的产物(5.9mg，24μmol，7％)。实施例15-雌甾-4，16-二烯-3-醇(18)的合成
在含雌甾-4，16-二烯-3-酮，(1)(87.2mg，0.340mmol)的1.7mL无水乙醚中加入氢化铝锂(15.0mg，0.395mmol)并将该悬浮液搅拌17分钟。然后将反应物与0.50g硫酸钠十水合物搅拌10分钟并用硅藻土过滤。将残留物用每份10mL的乙醚洗涤三次，并将合并的滤液减压浓缩。通过制备TLC(5％乙酸乙酯/二氯甲烷，硅胶)得到黄色树脂状粗产物(50.0mg)。将其再层析，直到有足够的纯度。实施例16-雌甾-4，16-二烯-3-酮(9)
该合成如图11所示。19-去甲睾酮(XIX)可从市场上得到，例如从Chemical Dynamics Corp.购得。它提供了制备19-去甲-16-雄甾烯衍生物的原料。用乙酸酐和吡啶将19-去甲-睾酮(XIX)转化为乙酸酯(哈氏等，美国化学会志-Hartman J.A.et al.，J.Am.Chem.Soc.(1956)78：5662)。(a)将该乙酸酯(4.8g，15.17mmol)的甲苯(10ml)溶液在540°(200Torr，slow N2-Stream)装自石英的玻璃试管中热解(b)。将热解粗产物(3.1g)进行硅胶(150g)层析用CH2Cl2洗脱，得到1.1g(28％)的均相的油状酮9；+57.9°(C1)((27)：m.p.71-73°).-IR.(CHCl3)：1600s、1615m、1585w、-1H-NMR.(90MHz)：0.84(s，3H)；5.82(m，2H)；5.87(br，s，1H)。实施例17-雌甾-16-烯-3-酮(10)。
该合成如图11所示。按维氏等的方法(Villotti，R.，et al.，J.Am.Chem.Soc.(1960)82：5693)用锂和氨将19-去甲睾酮还原成19-去甲-5α-雄甾-17-醇-3-酮(XX)(C)。用乙酸酐和吡啶将雄甾-5α，17-二醇-3-酮(XX)转化成乙酸酯(a)(哈氏等，美国化学会志-Hartman J.A.et al.，J.Am.Chem.Soc.(1956)78：5662)。将17β-乙酰氧-5α-雌-3-酮(8.0g，25.1mmol)于辛烷/丙酮10∶1(22ml)中的溶液在550°(200Torr，slow N2-Stream)热解(b)。将粗产物(5.4g)进行硅胶(600g)层析，用CH2Cl2洗脱并用PE将均相的馏分重结晶，得到3.13g(48.3％)纯酮10。m.p.51-54°[a]-+72.8°(C1.0).-IR.(CHCl3)：1705s、1585w、-1H-NMR.(90MHz)：0.79(s，3H)；5.71(m，1H)；5.87(m，1H)。实施例18-雌甾-16-烯-3α-醇(11)
该合成如图11所示。在0°下将L-Selectride(d，三(仲丁基)氢化硼酸锂，4ml 1M THF溶液，(4mmol)滴入酮10(800mg，3.10mmol)的无水乙醚5ml溶液中。在0°搅拌1小时后，加入水(10ml)。通过加入10％aq、NaOH-溶液(5ml)，接着加入30％aq.H2O2-溶液(3ml)并在室温搅拌3小时而氧化硼烷。处理(乙醚)后，将粗产物(790mg，大约9∶1的11和12混合物)进行硅酸层析，用CH2Cl2洗脱，得到700mg(87％)的纯醇11。m.p.119-120°→123-124°(from PE)[a]D+40.6°(C＝1.0)-IR.(CHCl3)：3640m、3500br.，1585w、-1H-NMR.(90MHz)：0.78(s，3H)；4.09(m，W1/2≈8，1H)；5.71(m，1H)；5.87(m，1H)。实施例19-雌甾-16-烯-3B-醇(12)
该合成如图11所示。室温下将酮10(800mg，3.10mmol)的无水乙醚(5ml)溶液滴入LiAlH4(38mg，1mmol)在乙醚(3ml)的浆状物中(e)。1小时后，将该混合物用10％aq.H2SO4水解。处理(乙醚)后，将粗产物(802mg，12和11约9∶1的混合物)进行硅胶层析，用CH2Cl2洗脱。小量11(70mg)的馏分先被洗出，接着是12的主要馏分(705mg，87％)。m.p.113-115°，[a]-+36.3°(C＝1.0).-IR.(CHCl3)：3640m、3500br.，1585w、-1H-NMR.(90MHz)：0.78(s，3H)；3.60(m，W1/2≈(m，20，1H)；5.71(m，1H)；5.87(m，1H)。实施例20-雌甾-4，16-二烯-3-酮1的选择性合成雌甾-4，16-二烯-3-酮，1：在含雌甾-1，3，5(10)，16-四烯-3-甲基醚(551.5mg，2.055mmol)的8.6mL无水THF，约30mL无水氨，和6.76g叔丁醇中加入切成小块的锂线(0.24g，35mg-atom)。氩气环境下回流4小时后，在反应混合物中加入甲醇(2.3mL)，煮沸过夜以蒸出其中的氨。将残留物溶于25mL甲醇中，并用5N HCl酸化至约pH1。在55到70℃的油浴中加热15分钟后，将冷却的水解混合物分配于25mL水和50mL乙酸乙酯中并将水相用25mL乙酸乙酯萃取。将合并的有机萃取液用25mL饱和碳酸氢钠和25mL盐水洗涤，用硫酸镁干燥，并过滤。减压除去溶剂，得到0.57g油状残留物，将其通过硅胶快速层析(洗脱剂：15％乙酸乙酯/己烷)纯化，随后用戊烷重结晶，得到结晶状物(206.1mg，TLC检测39％为同一点，m.p.67-71℃。(NA-1993A-38，42D)。实施例21-雌甾-2，5(10)，16-三烯-3-甲基醚，2
在含雌甾-1，3，5(10)，16-四烯-3-甲基醚(1.22g，4.54mmol)的19mL无水THF，14.99g叔丁醇，和大约70ml无水氨中加入切成小片的锂线(0.53g，76mg-atom)。参见图12。氩气环境下回流6小时后用5mL甲醇猝灭反应，煮沸过夜以蒸除氨。将残留物在100mL水中的悬浮液用每份100mL的乙酸乙酯萃取两次，并将合并的有机萃取液用盐水洗涤，并用硫酸镁干燥。减压除去溶剂后，使用1％乙酸乙酯/己烷作为洗脱剂将残留物进行硅胶快速层析，然后用无水乙醇重结晶，得到蓬松的白色结晶(884.1mg，3.269mmol，72％)，m.p.72-73℃，TLC检测为单点。(NA-1993A-14，77A)实施例22-雌甾5(10)，16-二烯-3-酮，3
室温下使用草酸二水合物(0.84g，6.7mmol)水解溶于50mL丙酮的雌甾-2，5(10)，16-三烯-3-甲基醚，2(646.3mg，2.390mmol)。参见图12。用25mL饱和碳酸氢钠猝灭反应混合物，然后用每份25mL的乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机萃取液用25mL的盐水洗涤两次。用硫酸镁干燥，过滤，并减压浓缩。将残留物用己烷重结晶，得到产物(462.5mg，1.804mmol，75％)，m.p.112-116℃。(NA-1993A-78A)实施例23-雌甾-5(10)，16-二烯-3-醇，4
室温下，使用氢化铝锂(50.0mg，1.32mmol)将6mL无水乙醚中的雌甾-5(10)，16-二烯-3-酮，3(301.1mg，1.174mmol)还原1小时。参见图12。用十水硫酸钠(2.00g)猝灭10分钟后，用硅藻土过滤该悬浮液，并将残留物用每份25mL的乙醚洗涤四次。将合并的滤液减压浓缩并通过快速层析(硅胶，5％乙酸乙酯/己烷洗脱)纯化，随后再将混合的馏分经制备TLC纯化。将高极性产物用含水乙醇重结晶得到4.8mg固体，大量损失。将低极性产物用含水甲醇重结晶得到白色结晶(59.5mg)，m.p.98-100℃。总产率64.3mg(0.249mmol，21％)。(NA-1993A-80，83A，85A)。实施例24-雌甾-4，9，16-三烯-3-酮，5
将吡啶(5.0mL，62mmol)中的雌甾-5(10)，16-二烯-3-酮，3(0.38g，1.5mmol)在冰-盐浴中冷却至-13℃并在保证T＜-4℃的条件下，小量分批地加入溴化吡啶鎓过溴化物(1.58g，4.94mmol)。回荡1分钟后，加入苯酚(0.25g，2.7mmol)并将反应在室温下继续24小时。参见图12。加入乙酸乙酯(50mL)并将反应混合物用25mL 1N HCl，两份25mL的饱和硫酸铜，25mL 5％氢氧化钠，和25mL盐水洗涤。用硫酸镁干燥，过滤，并减压浓缩后，将残留物溶解在10mL无水乙醇中，加入锌粒(0.33g，5.0mg-atom)，并将该混合物回流1/2小时。除去上清液，用10mL无水乙醇洗涤残留物，并将合并的上清液减压浓缩。使用15％乙酸乙酯/己烷作为洗脱剂，将所得树脂状物进行硅胶快速层析。将适当的馏分集中，浓缩，然后用己烷重结晶，得到固体产物(117.5mg，0.4619mmol，31％)，m.p.87-92℃。(NA-1993A-62，65B)实施例25-雌甾-1，3，5(10)，16-四烯-6-酮-3-乙酸酯，6
将三氧化铬(13.40g，0.1340mol)悬浮于200mL二氯甲烷中并在冰-盐浴中冷却至-10℃。加入3，5-二甲基吡唑(12.90g，0.1342mol)并将该混合物搅拌20分钟。参见图13。将冷却的雌甾-1，3，5(10)，16-四烯-3-基乙酸酯(4.00g，13.5mmol)在20mL二氯甲烷中的溶液加入并将反应物搅拌2小时，这期间T＜-8℃。然后用200g硅胶过滤混合物并用二氯甲烷进一步洗脱产物。将合适的馏分合并，浓缩后，使用15％乙酸乙酯/己烷作为洗脱剂，将粗产物进行硅胶快速层析。集中合适的馏分，减压浓缩，得到白色固体(0.92g，3.0mmol，22％)，m.p.87-103℃。(NA-1993B-39B)。实施例26-雌甾-1，3，5(10)，16-四烯-3-醇-6-酮，7
将30甲醇中的雌甾-1，3，5(10)，16-四烯-6-酮-3-乙酸酯(203.1mg，0.6543mmol)用1.5mL 5％(w/w)氢氧化钠皂化40分钟。参见图13。将反应混合物减压浓缩，溶解在50mL水中，用1N HCl中和，并用每份25ml的二氯甲烷萃取三次。将合并的有机萃取液用50mL盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，浓缩，得到白色固体。将其通过苯/己烷重结晶及制备TLC纯化得到白色结晶固体(52.8mg，0.197mmol，30％)，m.p.188-191℃。(NA-1993B-24，27B)。实施例27-雌甾-1，3，5(10)，16-四烯-6α-醇-3-基乙酸酯，8
室温下，将悬浮在35mL 95％乙醇中的雌甾-1，3，5(10)，16-四烯-6-酮-3-基乙酸酯，6(421.4mg，1.358mmol)用硼氢化钠(98.8mg，2.62mmol)还原100分钟。参见图13。减压浓缩后，将残留物悬浮在25mL水中，用1N HCl中和，并用每份25ml二氯甲烷萃取三次。将合并的有机萃取液用25mL盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，并浓缩。使用25％乙酸乙酯/己烷作为洗脱剂，将所得白色泡沫状物进行硅胶快速层析。合并并浓缩馏分，得到白色固体(0.12g，0.38mmol，28％)，m.p.209-212℃。(NA-1993B-42D)。实施例28-雌甾-1，3，5(10)，16-四烯-3，6-二醇，9
搅拌下，在悬浮于5mL无水THF中的氢化铝锂(LAH，95％，46.9mg，1.17mmol)中滴加含雌甾-1，3，5(10)，16-四烯-6-酮-3-基乙酸酯，6(422.9mg，1.360mmol)的5mL无水THF。参见图13。将反应物搅拌50分钟后，再加入一部分LAH(46.5mg，1.16mmol)并将反应混合物搅拌22小时。回流4小时后，TLC仍然显示存在原料。用0.5mL水+0.5mL 20％(w/w)硫酸猝灭反应并减压浓缩，将残留物用每份10mL的热乙酸乙酯萃取四次并通过硅藻土过滤。将合并的滤液浓度并通过快速层析纯化两次，得到固体产物(0.05g，0.2mmol，10％)m.p.150-157℃。(NA-1993B-29，32B)实施例29-雌甾-1，3，5(10)，7-四烯-3-醇，10
在含马烯雌酮(100.2mg，0.3733mmol)的2mL二甘醇悬浮液中加入肼(59μl，1.9mmol)和氢氧化钾(0.04g，0.7mmol)。参见图14。将该混合物在200-214℃的油浴中搅拌2小时，然后将冷却的反应物用10mL水稀释，用1N HCl中和，并用25mL乙醚萃取三次。将合并的有机萃取液用10mL盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，浓缩，并通过制备TLC(硅胶，15％乙酸乙酯/己烷洗脱)纯化，得到黄色树脂状物。通过用活性炭脱色和含水乙醇重结晶进一步纯化产物，得到棕黄色结果(13.2mg，51.9μM，14％)m.p.130-134℃。(NA-1993B-25C)实施例30-20-高雌甾-1，3，5(10)6，8，17-六烯-3-醇，11
氩气环境下，将悬浮于2.1mL无水DMSO中的溴化三苯基甲基鏻(671.0mg，1.878mg)和叔丁醇钾(212.1mg，1.890mmol)在76-86℃的温浴中加热1小时。然后加入2.1mL无水DMSO中的马萘雌酮(100.1mg，0.3579mmol)。参见图14，将此绿色溶液搅拌1小时。冷却后加入10mL冰-1N HCl，将混合物用每份10mL的乙醚萃取三次。将合并的有机萃取液用10mL饱和碳酸氢钠+10mL盐水洗涤，用硫酸镁干燥，用硅藻土过滤，浓缩并纯化。实施例31-雌甾-1，3，5(10)，16-四烯-3-醇-17-(对甲苯磺酰基)腙，1
在无水状态下，将悬浮于无水甲醇(5.4mL)中的6-脱氢雌酮(538.0mg，2.004mmol)和对甲苯磺酰肼(p-TsNHNH2，466.6mg，2.506mmol)回流25小时。参见图15。减压浓缩后，将残留物进行快速层析(50％乙酸乙酯/己烷，硅胶)得到灰白鬼泡沫状物(942.5mg)，表示的产率＞100％。(NA-1994A-295A)。实施例32-雌甾-1，3，5(10)，6，16-五烯-3-醇，2
氩气环境下，搅拌的同时，在7分钟的时间内在冷却的(冰水浴)溶于四氢呋喃(THF)的粗品雌甾-1，3，5(10)，6-四烯-3-醇-17-(对甲苯磺酰基)腙(1，942.5mg，≤2.004mmol)中滴加正丁基锂(2.5M己烷中，3.2mL，8.0mmol)。参见图15。继续搅拌48小时，在此期间，使反应物逐渐温热至室温。加入50mL 1N的盐酸，将反应混合物用每份25mL的乙醚萃取三次。将合并的有机萃取液用50mL盐水洗涤，用硫酸镁干燥，并用硅藻土过滤。用10mL乙醚洗涤残留物并将合并的滤液减压浓缩。将粗产物经快速层析(20％乙酸乙酯/己烷，硅胶)和制备TLC(20％乙酸乙酯/己烷，硅胶GF，1000μ厚)纯化得到白色结晶膜(134.5mg，0.5331mmol，27％)，TLC检测为单点(20％乙酸乙酯/己烷，硅胶，Rf0.39)。(NA-1994A-307A)实施例33-雌甾-1，3，5(10)，6，16-五烯-3-基乙酸酯，3
将溶于无水吡啶(1.3mL，16mmol)和乙酸酐(0.18mL，1.9mmol)中的雌甾-1，3，5(10)，16-戊烯-3-醇(2，97.9mg，0.388mmol)搅拌24h，然后加入乙酸乙酯(15mL)，将此混合物用三份5mL 1N盐酸+5mL饱和碳酸钠+5mL盐水洗涤，用硫酸镁干燥，并用硅藻土过滤。参见图15。用5mL乙酸乙酯洗涤残留物，减压浓缩合并的滤液。将残留物进行制备TLC(10％乙酸乙酯/己烷，硅胶GF，1000μ厚)，得到淡黄色结晶状固体(74.9mg，0.254mmol，66％)，TLC检测为单点(10％乙酸乙酯/己烷，硅胶，Rf0.40)(NA-1994B-21B)实施例34-雌甾-1，3，5(10)，7-四烯-3-醇-17-(对甲苯磺酰基)腙，4
在无水的条件下，将悬浮在无水甲醇(5.0mL)中的马烯雌酮(500.1mg，1.863mmol)和p-TsNHNH2(433.7mg，2.329mmol)回流24小时。参见图15。减压浓缩后，将残留物进行快速层析(35％乙酸乙酯/己烷，硅胶)得到白色泡沫状物(899.9mg)表示的产率＞100％。(NA-1994-246B)实施例35-雌甾-1，3，5(10)，7，16-五烯-3-醇，5
氩气环境及搅拌下，在3分钟内，在冷却(冰水浴)粗品雌甾-1，3，5(10)，7-四烯-3-醇-17-(甲基磺酰基)腙(4，899.9mg，≤1.863mmol)的无水THF(20mL)溶液中滴加正丁基锂(2.5M，己烷中，3.0mL，7.5mmol)。参见图15。继续搅拌48小时，在此期间使反应物逐渐温热至室温。将反应物倒入50mL 1N盐酸中，将该混合物用每份25mL的乙醚萃取三次。将合并的有机萃取液用50mL盐水洗涤，用硫酸镁干燥，并用硅藻土过滤。用10mL乙醚洗涤残留物，减压浓缩合并的滤液。将产物进行快速层析(20％乙酸乙酯/己烷，硅胶)并用碳脱色，得到黄色晶状固体(274.8mg，1.089mmol，58％)。(NA-1994A-278A)实施例36-雌甾-1，3，5(10)，7，16-五烯-3-基乙酸酯，6
将溶于无水吡啶(2.6mL，32mmol)和乙酸酐(0.36mL，3.8mmol)中的雌甾-1，3，5(10)，7，16-五烯-3-醇，(5，192.1mg，0.7612mmol)搅拌6小时。然后加入30mL乙酸乙酯。将此混合物用三份10mL的1N盐酸+10mL饱和碳酸氢钠+10mL盐水洗涤，用硫酸镁干燥，并用硅藻土过滤，见图15。用10mL乙酸乙酯洗涤残留物，减压浓缩合并的滤液。制备TLC(5％乙酸乙酯/己烷，硅胶GF，1000μ厚)并用含水乙醇重结晶，得到很好的白色针晶(78.6mg，0.267mmol，35％)，m.p.77-80℃。TLC(4％乙酸乙酯/己烷，硅胶)显示在Rf0.21和0.24处有两上点。(NA-1994A-286A)实施例37-雌甾-1，3，5(10)，6，8-五烯-3-醇-17-(对甲苯磺酰基)腙，7
在无水条件下，将悬浮于无水甲醇(8.2mL)中的马萘雌酮(0.6559mg，2.463mmol)和p-TsNHNH2(573.6mg，3.08mmol)回流24小时。参见图16。冷却并减压浓缩后，将反应混合物快速层析(35-40％乙酸乙酯/己烷，57％)，m.p.95-96℃。TLC(2％乙酸乙酯/己烷，硅胶)显示产物中(Rf0.1)含少量在原点的杂质。(NA-1994A-273B)实施例38-雌甾-1，3，5(10)，6，8，16-六烯-3-醇，8
氩气环境及搅拌下，在2分钟内，向冷却(冰水浴)的粗品雌甾-1，3，5(10)，6，8-五烯-3-醇-17-(对甲苯磺酰基)腙(7，1.0887g，≤2463mmol)的无水THF(25mL)溶液中滴加正丁基锂(2.5M，己烷中，3.9mL，9.8mmol)。参见图16。继续搅拌3天，这期间可使反应逐渐温热至室温。加入50mL 1N盐酸-冰，并将此混合物用每份25mL的乙醚萃取三次。将合并的有机萃取液用50mL盐水洗涤，用硫酸镁干燥，并用硅藻土过滤。用10mL乙醚洗涤残留物，减压浓缩合并的滤液。快速层析(20％乙酸乙酯/己烷，硅胶)及用含水乙醇重结晶，用活性炭脱色，得到棕黄色片状物(245.8mg，0.9819mmol，40％)，m.p.162-163℃。(NA-1994A-269A)实施例39-雌甾-1，3，5(10)，6，8，16-六烯-3-基乙酸酯，9
将溶于无水吡啶(2.0mL，25mmol)和乙酸酐(0.28mL，3.0mmol)中的雌甾-1，3，5(10)，6，8，16-六烯-3-醇(8，148.8mg，0.5944mmol)搅拌6小时，然后加入乙酸乙酯(20mL)。参见图16。将此混合物用三份10mL的1N盐酸+10mL饱和碳酸氢钠+10mL盐水洗涤，用硫酸钠干燥，并过滤。用5mL乙酸乙酯洗涤残留物，减压浓缩合并的滤液。用95％乙醇重结晶，得到有光泽的白色片状物(99.4mg，0.340mmol，55％)，m.p.95-96℃，TLC(2％乙酸乙酯/己烷，硅胶)显示产物(Rf0.1)含有少量在原点的杂质。实施例40-17-亚甲基-1，3，5(10)-三烯-3-醇，10
氩气环境下，将溴化甲基三苯基鏻(100.03g，0.28001mol)和叔丁醇钾(31.42g，0.2800mol)在无水二甲亚砜(DMSO，320mL)中的悬浮液在油浴中(68-81℃)搅拌1小时，然后注射器加入无水DMSO(320mL)中的雌酮(15.14g，55.99mmol)。参见图17。继续搅拌1小时并使反应物冷却。将反应物倒入800mL冰-1N盐酸中，然后用每份400mL的乙醚萃取三次。将合并的有机萃取液用350mL饱和碳酸氢钠+400mL盐水洗涤。用硫酸钠干燥，用58mm高×84mm直径的硅胶(200-400目)柱快速过滤。用另外的乙醚继续洗脱。将适当的馏分减压浓缩用含水乙醇重结晶三次，得到很细的白色针晶(11.47g，42.73mmol，76％)，m.p.134-136℃，TLC(20％乙酸乙酯/己烷，硅胶，Rf0.45)显示单点。(NA-1994A-242B)实施例41-17-亚甲基雌-1，3，5(10)-三烯-3-基乙酸酯，11
将溶于无水吡啶(32mL，0.40mmol)和乙酸酐(9.7mL，0.10mol)中的17-亚甲基雌甾-1，3，5(10)-三烯-3-醇(10，5.84g，21.8mmol)搅拌24小时。然后加入乙酸乙酯(250mL)，见图17。将此混合物用三份100mL的1N盐酸+100mL饱和碳酸氢钠+100mL饱和硫酸铜+100mL盐水洗涤，用硫酸镁干燥，并用硅藻土过滤。用25mL乙酸乙酯洗涤残留物，减压浓缩合并的滤液。用含水乙醇重结晶，得到光亮的白色片状物(5.84g，18.8mmol)，m.p.77-79℃。(NA-1994A-248B)实施例42-17-亚甲基雌甾-1，3，5(10)-三烯-6-酮-3-基乙酸酯，12
在冷却到-8℃(冰-盐浴)的悬浮于二氯甲烷(100mL)中的三氧化铬(6.19g，61.9mmol)中加入2，4-二甲基吡唑(5.95g，61.9mmol)参见图17，搅拌20分钟后，在2分钟内加入溶于10mL冷却的二氯甲烷的17-亚甲基雌甾-1，3，5(10)-三烯-3-基乙酸酯(11，2.0001g，6.4428mmol)以使温度低于-6℃。继续搅拌2小时，然后使混合物通过100g硅胶(200-400目)柱，用二氯甲烷进一步洗脱产物。将适当的馏分集中并减压浓缩，得到粗产物，将其用含水乙醇重结晶两次纯化，得到光亮的，灰白色结晶(334.0mg，1.030mmol，16％)，m.p.91-94℃。TLC(25％乙酸乙酯/己烷，硅胶)显示产物(Rf0.47)在Rf0.30和0.39有两个小污点。(NA-1994A-272A)实施例43-17-亚甲基雌甾-1，3，5(10)-三烯-3，6B-二醇，13
氩气环境，于冰/丙酮浴冷却及搅拌下，在8分钟内，在悬浮于无水THF(3.0mL)中的氢化铝锂(53.6mg，1.41mmol)中加入含17-亚甲基雌甾-1，3，5(10)-三烯-6-酮-3-基乙酸酯(12，251.7mg，0.7758mmol)的无水THF(3.0mL)。参见图17。搅拌2小时后，撤去冷却浴，继续搅拌一小时。通过与Glauber’s盐(1.78g)一起搅拌1/2小时猝灭反应。将所得混合物加到硅藻土快速滤板，用每份10mL的乙酸乙酯提取四次。用每份10mL的热乙酸乙酯提取五次，减压浓缩所有提取液，得到无色膜状物。制备TLC(40％乙酸乙酯/己烷，硅胶GF，1000IL厚)得到白色泡沫状物(15.3mg，53.8ILmol，7％)。TLC(40％乙酸乙酯/己烷，硅胶)显示主要的(Rf0.29)和次要的(Rf0.37)组份。(NA-1994A-283B)实施例44-17-亚甲基雌甾-1，3，5(10)-三烯-3-基甲基醚，14
在搅拌及回流下，在悬浮于90％乙醇(500mL)中的17-亚甲基雌甾-1，3，5(10)-三烯-3-醇(5.37g，20.0mmol)和碳酸钾(50.82g，0.3678mol)中加入硫酸二甲酯(5.0ml，53mmol)。回流1/2小时后，在1小时的时间内，再加入一部分硫酸二甲酯(36mL，0.38mol，以每份12mL的三个等份)。参见图17。将反应再回流1小时，接着加入360mL水并将该混合物在冰箱中放置过夜。将所得悬浮液过滤并用80mL 60％甲醇加三份80mL的5％(w/w)氢氧化钠加三份80mL的水洗涤。将残留物用含水甲醇重结晶，得到白色结晶(3.88g，13.7mmol，69％)，m.p.59-62℃。TLC(20％乙酸乙酯/己烷，硅胶)显示产物(Rf0.63)和在Rf0.37和原点的微量杂质。(NA-1994A-247)实施例45-17-亚甲基雌甾-2，5(10)-二烯-3-基甲基醚，15
将大约70mL无水氨通过KOH塔蒸馏到装有进料口，磁搅拌棒，干冰/丙酮冷凝器，和磨口玻璃塞子的经火焰干燥的三颈烧瓶中。参见图17。加入17-亚甲基雌甾-1，3，5(10)-三烯-3-基甲基醚(14，1.1297g，4.0001mmol)和叔丁醇(13.21g，0.1782mol)的无水THF(17mL)溶液，接着加入切成小块的锂线(0.47g，68mg-atom)。氩气下回流6小时后，加入无水甲醇(6.6mL)并将该悬浮液搅拌过夜，以使氨蒸出。加入水(100mL)，将悬浮液用每份50mL的二氯甲烷萃取三次。将合并的有机萃取液用100mL盐水洗涤，用硫酸钠干燥，并过滤。用25mL二氯甲烷洗涤残留物，减压浓缩合并的滤液。将所得的淡黄色油状物用含水乙醇结晶，得光亮的白色结晶(815.0mg，2.865mmol，72％)，m.p.71-78℃，TLC显示单点(Rf0.60，10％乙酸乙酯/己烷，硅胶)(NA-1994A-257)实施例46-17-亚甲基雌甾-4-烯-3-酮，16
将浓盐酸(6.0mL)和水(6.0mL)加入溶于甲醇(6mL)和丙酮(20mL)的17-亚甲基雌甾-2，5(10)-二烯-3-基甲基醚(15，702.8mg，2.471mmol)中。参见图17。搅拌1小时后，仔细地加入碳酸氢钠。当停止泡腾时，减压浓缩混合物并加入水(50mL)。将混合物用每份25mL的二氯甲烷萃取三次。将合并的有机萃取液用50mL盐水洗涤，用硫酸镁干燥，并用硅藻土过滤。用10mL二氯甲烷洗涤残留物，减压浓缩合并的滤液。将产物通过活性炭脱色，快速层析(20％乙酸乙酯/己烷，硅胶)以及用含水乙醇重结晶纯化，得到白色粉末(302.8mg，1.120mmol，45％)，m.p.83-89℃。(NA-1994A-271)实施例47-17-亚甲基雌甾-4-烯-3β-醇，17
将氢化三叔丁氧基铝锂(766.6mg，3.015mmol)加入溶于10mL无水乙醚的17-亚甲基雌甾-4-烯-3-酮(16，203.7mg，0.7533mmol)并将反应物搅拌4小时。参见图18。加入Glauber’s盐(3.80g)并将悬浮液再搅拌1/2小时。用硅藻土过滤混合物，并将残留物用每份10mL的乙醚洗涤五次。减压浓缩合并的滤液，然后进行制备TLC(5％乙酸乙酯/二氯甲烷，硅胶GF，1000μ厚)，得到白色针晶(60.2mg，0.221mmol，29％)，TLC显示单点(Rf0.37，5％乙酸乙酯/二氯甲烷，硅胶)。(NA-1994A-282)实施例48-17-亚甲基雌甾-1，3，5(10)，7-四烯-3-醇，18
氩气环境下，将悬浮于6.1mL无水DMSO中的溴化甲基三苯基鏻(1.9967g，5.5892mmol)和叔丁醇钾(627.2mg，5.589mmol)在油浴中(71-83℃)搅拌1小时，然后经注射器加入含马烯雌酮(300.0mg，1.118mmol)的6.1mL无水DMSO。参见图18，继续搅拌70分钟后，将反应混合物倒入40mL冰水中，用每份25mL的乙醚萃取三次。将合并的有机萃取物用25mL盐水洗涤，用硫酸镁干燥，并用硅藻土过滤。用10mL乙醚洗涤残留物，减压浓缩合并的滤液。快速层析(15乙酸乙酯/己烷，硅胶)后进行制备TLC(20％乙酸乙酯/己烷，硅胶GF，1000μ厚)，得到不透明的白色膜状物(162.3mg，0.6093mmol，54％)。(NA-1994A-258)实施例49-17-亚甲基雌甾-1，3，5(10)，7-四烯-3-基乙酸酯，19
氩气环境下将悬浮于10mL无水DMSO中的溴化甲基三苯基鏻(3.33g，9.32mmol)和叔丁醇钾(1.05g，9.36mmol)在油浴(77-79℃)中搅拌1小时，然后经注射器加入含马烯雌酮(500.0mg，1.863mmol)的10mL无水DMSO。参见图18。继续搅拌一小时，将冷却的反应混合物倒入50mL冰-1N盐酸中，用每份25mL的乙醚萃取三次。将合并的有机萃取液用25mL盐水洗涤。用硫酸镁干燥，并用硅藻土过滤。用10mL乙醚洗涤残留物，减压浓缩合并的滤液。将所得的黄色糖浆状物溶解在无水吡啶(6.3mL，78mmol)中，加入乙酸酐(0.88mL，9.3mmol)，并将反应混合物搅拌16小时。然后将混合物倒入100mL 1N盐酸中，用每份50mL的乙醚萃取三次。将合并的有机萃取液用100mL饱和碳酸氢钠+100mL盐水洗涤，用硫酸镁干燥，并用硅藻土过滤，用25mL乙醚洗涤残留物，减压浓缩合并的滤液。将粗品乙酸酯进行快速层析(5％乙酸乙酯/己烷，硅胶)得到黄色树脂状物(494.7mg，1.604mmol，86％)。(NA-1994A-305)实施例50-雌甾-4，16-二烯-10β-醇-3-酮，2
在冰冻的(干冰/丙酮)雌甾-5(10)，16-二烯-3-酮(1，115.7mg，0.4513mmol)在氯仿(3mL)中的悬浮液中加入悬浮于乙醚(4.3mL)中的间氯过苯甲酸(MCPBA，77.4％，420.8mg，1.89mEquiv过酸)，并将混合物搅拌2小时。见图19。将反应物在冰箱中保存18小时后，加入五水硫代硫酸钠(5％(w/w)，25g)。搅拌5分钟后，将混合物用每份10mL的乙醚萃取三次。将合并的有机萃取液用25mL饱和碳酸氢钠+25mL盐水洗涤，用硫酸镁干燥，并用硅藻土过滤。用10mL乙醚洗涤残留物，减压浓缩合并的滤液。TLC检测发现部分中间体5B，10β-环氧化物已被消除。通过将白色结晶状残留物置于20g含5％(w/w)氢氧化钾的无水甲醇中回流1小时完成消除反应。将反应混合物倒入50mL冰水中，用50mL乙醚萃取。将有机萃取液用每份50mL的水萃取两次，用硫酸钠干燥，并用硅藻土过滤。用20mL乙醚洗涤残留物，减压浓缩合并的滤液。将残留物进行制备TLC(50％乙酸乙酯/己烷，硅胶GF，1000μ厚)得到无色树脂状物(19.7mg，72.3μmol，16％)。(NA-1993B-80)实施例51-18-去甲-17-甲基雌甾-4，13(17)-二烯-3-醇，4
在冷却的(冰水浴)18-去甲-17-甲基雌甾-4，13(17)-二烯-3-酮(3，0.23g，0.90mmol)的无水甲醇(2.3mL)溶液中加入硼氢化钠(0.23g，6.1mmol)并将反应物搅拌2小时。见图19。减压除去溶剂并在残留物中加入10mL水。然后将该混合物用每份10mL的二氯甲烷萃取三次。将合并的有机萃取液用10mL盐水洗涤，用硫酸镁干燥，并用硅藻土过滤。将残留物用5mL的二氯甲烷洗涤两次，减压浓缩合并的滤液。将所得淡黄色固化通过制备TLC(5％乙酸乙酯/二氯甲烷，硅胶GF，1000μ厚)纯化，得到黄色固体(53.6mg，0.207mmol，23％)。TLC(5％乙酸乙酯/二氯甲烷，硅胶，Rf0.32)显示单点。(NA-1993B-120)实施例52-雌甾烯刺激人类VNO和嗅觉上皮的电位理学
一种非侵害的方法已被用于从人类犁鼻骨器官(VNO)和嗅觉上皮(OE)记录局部电位。在不同的情况下，使用特别设计的与多路药物传递系统连接的导管/电极对两个鼻结构进行局部气体刺激。结果显示，VNO和OE的局部反应与配位刺激物的浓度有关。
该项研究是对十名临床上正常的(被筛选的)志愿者进行的-2男8女，年龄范围为从18到85岁。该项研究是未进行全身或局部麻醉的情况下进行的。
设计好的导管/电极可传送局部刺激并同时记录反应。作VNO记录时，使用鼻窥器(鼻腔扩张器)暴露右鼻前庭并将打开的犁鼻骨固定在犁骨和鼻腔底部前沿的交切点上。将导管/电极轻轻地推入打开的VNO并将电极末端放在距开口处1到3mm的器官腔中。然后除去鼻窥器。IE记录时，步骤一样，只是导管/电极的位置在内鼻管的外侧部分的深处，到达嗅觉粘膜。
局部气体刺激由导管/电极完成。室温下干净，无味，润温的空气的恒定气流持续地通过刺激系统的通道。刺激性配体物质被1，3-丙二醇稀释，与润湿空气混合，通过导管/电极吹气1到2秒。估计鼻腔内提供了约25pg甾体化合物配体。
这项研究的结果列于图2。以毫伏秒(mV×s)测量反应。对雄性受试者来说，1，3，5(10)，16-雌四烯-3-醇比其他受试化合物具有更强的VNO反应(图2A)。1，3，5(10)-雌三烯-3，16α，17β-三醇也具有很强的VNO反应。另外，这两种雌甾烯的VNO反应为雌雄异型-对雄性受试者的强度为雌性受试者的几乎四倍(图2B)。相对而言，雄性和雌性受试者对强气味剂如丁香的OE反应都比较低(图2C)。实施例53-由各种甾体化合物产生的VNO神经上皮受体电位变化的测量
测量了40名雌性(图3A)和40名雄性(图3B)受试者由七种不同的配体产生的受体电位的变化。对每个受试者使用了60pg如图所示的七种物质。按实施例20所述的步骤，各物质分别使用1秒种。按时间记录VNO神经上皮电位的变化，将四十名受试者电位变化的积分分别进行平均。其结果如图所示。比较图3A和3B可发现各甾体化合物活性的雌雄异型，某些配体物质对雄性受试者作用强，而另一些对雌性作用强。实施例54-雌甾烯刺激VNO时自律性反应的测量
按实施例20所述的步骤对40名雄性受试者使用1，3，5(10)，16-雌四烯-3-基乙酸酯时，测定各种自律性参数。1，3-丙二醇也被使用作为对照。以1秒的脉冲使用配体。在2秒钟内首次注意到自律性功能变化，其持续至多达45秒钟。如图4所示，与1，3-丙二醇对照物相比，雌甾烷明显地改变了VNO的受体积分电压(4A)，流电皮肤反应(4B)，皮肤温度(4C)。实施例55-由两种雌甾烯甾体化合物诱导的受体电位变化的比较
按实施例21所述方法对一名雄性受试者使用60微微克各种配体甾体化合物和1，3-丙二醇。如图5所示，1，3，5(10)，16-雌四烯-3-醇甲基醚诱导了比1，3，5(10)，16-雌四烯-3-基乙酸酯更大的受体电位的变化。实施例56-雌甾烯刺激VNO的精神生理学作用
通过协调使用信息素和在用药前后受试者调查表判断而测量雌甾烯刺激VNO产生的精神生理学作用。调查表包括用于标准的DerogatisSexul Inventory评价的代表性的形容词。
40名健康状况良好的受试者被随机地安排-20名安排于安慰剂中，20名安排于约20微微克1，3，5(10)，16-雌四烯-3-醇中，给药方法如实施例3(同上)所述。在安慰剂或实验物质给药前及给药后30分钟给受试者一个有70个条目的评估感情状态的调查表。调查表中的70个形容词被随机使用，随后根据它们对各种情绪，情感，或性格特征的关联进行评估。实施例57-电生理学研究
下列电生理学研究是在60名年龄范围为20到45岁的两性(30名雄性和30名雌性)的临床上正常的人类志愿者中进行的。未使用麻醉剂，并排除怀孕的雌性受试者。
刺激和记录系统包括别处称为“多功能微型探针”的装置(蒙氏等“设定的信息素对人类犁鼻骨器官和嗅觉上皮细胞的电活性的作用”，Monti-Bloch，L and Grosser，B.L.(1991)“Effect of putativepheromones on the electrical activity of the humanvomeronasal organ and olfactory epithelium”，J.Steroid Biochem.Molec.Biol.39：573-582)。记录电极为与用Teflon绝缘的细(0.1mm)银线连接的0.3mm的银球。电极表面首先被处理成氯化银界面，然后用明胶覆盖，它被置于小口径Teflon导管中(直径＝5mm)，以使电极顶端突出大约2mm。Teflon导管长10cm，构成了多通道传送系统的延伸的末端，该系统传送载有化学敏感刺激素的精心设计脉冲的持续的空气流。空气流首先经过一个小室，被鼓泡通过含犁骨信息素或嗅味剂的稀释剂溶液或者稀释剂本身。螺线管被用来将空气流从小室迅速地改道至小室的旁路。这将产生空气流中的刺激剂的精心设计脉冲。第二点，2mm直径的Teflon外管包围着导管-电极的集合体，它的中央端与提供3ml/s持续的抽吸的抽吸器连接。抽吸器外的同心排列使化学敏感刺激物放射到我们称为“小田地”的局部区域(直径大约为1mm)，它避免了物质向预定刺激部位以外区域的扩散，或者向呼吸系统内的扩散。全部刺激和记录的集合物可被置于VNO中的神经上皮上，或嗅觉或呼吸上皮的表面。犁鼻骨电图(EVG)：在安静的房间内对仰卧的受试者进行记录；使用安装在前庭的鼻牵开器将多功能微型探针开始固定在鼻腔内部。将由银盘(8mm)组成的参考和基础电极置于眉间。
首先通过扩大鼻孔和前庭识别到VNO的入口，或犁鼻骨窝。然后使用带卤灯的6×放大的双目放大镜将Teflon导管末端和记录电极的集合导入VNO孔，将其固定在犁鼻骨通道内大约1mm深处。记录电极的最佳位置，在试验与试验化合物有关的合适的去极化作用后得到确定。
记录电极的电信号送入DC放大器后被数字化，计算机监控，以储存。信号的峰到峰的振幅被测量，去极化波下的区域被积分，同时从计算机屏幕和数字式示波器连续地监视信号。通过训练受试者关闭腭咽用嘴呼吸而清除呼吸运动产生的赝象。化学敏感刺激剂：嗅觉试验物质为桉油醇，和1-页蒿萜酮；犁骨信息素为A、B、C、D、E和F(犁骨信息素由Pherin Corporation，MenloPark，California提供)。浓度为25-800fmoles的犁骨信息素样品在300微秒到1秒的时间内在持续的空气流中传送。通常，各组短试验脉冲间有3到5分钟的间隔。所有传送试验刺激剂的管线的组件都由Teflon制造，玻璃或不锈钢元件在各次使用前都被仔细地清洁并消毒。嗅觉电图(EOG)：嗅觉记录使用与VNO相同的刺激和记录多功能微型探针。合适的安装可由与嗅觉试验物质的脉冲有关的去极化作用来确定。
通过300ms空气脉冲中传送的信息素对VNO的刺激和嗅觉剂对嗅觉的刺激诱导皮层唤起活性。使用置于国际10120系统Cz-Al和Tz-Al上的标准脑电图(EEG)电极来记录；地电极被放在乳突部位。使用通过传导胶界面分别与同侧掌皮肤和无名指连接的标准8mm银电极记录皮电活性(EDA)。通过置于右耳叶的小型(1.0mm)热敏探针记录皮肤温度(ST)。用连在食指末端的体积描记器监视外周动脉脉博(PAP)。用置于胸下周的可调张力计测量呼吸频率(RF)，所有电信号都送入PC放大器，数字化(MP-100，Biopac Systems)并利用计算机持续地监视。统计学分析：EVG或EDG，其他参考的峰-峰变化和频率变化都被测量并作统计学分析。通过使用成对的十一试验或方差分析(ANOVA)测定所得结果的显著性。犁骨信息素对EVG的作用：我们发现各种犁骨信息素都产生雌雄异型受体电位(图6A-B)。对30名男子和30名女子(年龄20到45)进行EVG的记录。将犁骨信息素稀释并以1秒钟的脉冲提供给VNO，分析研究时两次脉中之间的间隔为6分钟，受试者不能“嗅”，否则将觉察到任何犁骨信息素。这项研究与以前报导的(蒙氏等“假定的犁骨信息素对人类犁鼻骨器官和嗅觉上皮电活性的作用”Monti-Bloch，L andGrosser，B.L.(1991)“Effect of putative pheromones on theelectrical activity of the human vomeronasal organ andolfactory epithelium”，J.Steroid Biochem.Molec.Biol.39：573-582)。结果一致。该文献指出无论嗅觉刺激物还是传送到VNO的犁骨信息素试验刺激物都不能在传送浓度下引起可察觉的感觉。
图6A显示雄性受试者(年龄20到38)对稀释剂和对等摩尔量(100fmoles)的五种犁骨信息素(A、B、C、D和F)，以及对E(即F的立体异构体)的平均反应。不考虑年龄的所有受试者对各种物质反应的纵切面图是相似的，t-试验或方差分析均未发现明显的差异。例如，A、C和D产生明显的作用(M15＝11.4mV，SD＝3.6mV；M76＝6.4mV，SD＝2.5mV，以及M84＝15.1mV，SD＝4.9mV；P＜0.01)，该结果对所有个体都是一致的。其他犁骨信息素在更小的程度下使VNO受体去极化，但个体与个体之间的平均反应强度具有一致性。对于雄性受试者来说，犁骨信息素比稀释剂产生更强的反应(P＜0.001)。对于雄性受试者VNO，B、F和相同浓度的嗅味剂诱导了明显降低的反应(图6A和图7)。
对30名雌性受试者(年龄20-45)进行相似的实验操作。犁骨信息素中，F(100fmloes)产生最明显的差异(图6B)。其中，A诱导了与F明显不同的弱的作用(P＜0.01)，在两组受试者中，活性犁骨信息素诱导了标准差很大的受体反应(图6)。当分别在雄性和雌性受试者中研究A和F作用的频率分配时，我们发现了一个双峰分配曲线。这项观察的意义目前正在被研究。
E(F的立体异构体)不刺激雌性受试者VNO，但F刺激(图6B)。这证明犁骨信息素具有VNO识别的特异性。在这点上令人感兴趣的是，F为较强的犁骨信息素，E产生比F更强的嗅觉反应(图6B和图7)。犁骨信息素对EOG的作用：对20名受试者：10名雄性，10名雌性，进行嗅觉上皮(OE)总的受体电位记录。与VNO对犁骨信息素的敏感性不同，OE对这些物质不太敏感。对雄性和雌性受试者都是这样(图7A)。平均受体电位的大小值范围为2.3mV到0.78mV。该项研究中，仅有犁骨信息素B对OE具有明显的作用(P＜0.02)。在经受各种刺激剂后检查嗅味剂敏感的受试者中，16名无嗅觉感觉，而三名雄性和一名雌性受试者描述B有一种难闻的味道。这一发现说明在我们的研究中所使用的浓度下，大部分犁骨信息素对嗅觉受体无有效的刺激，但对犁鼻骨器官有明显的作用。嗅味剂对EVG和EOG的作用：与犁骨信息素不同，嗅味剂1-
Figure A9519651800511
蒿萜酮和桉油醇仅在VNO中产生很少的局部反应(图7B)。男子和女子都是如此。正如所期望的，当对OE局部使用时，这些嗅味剂对男子和女子都产生了强烈的反应(P＜0.01)(图7A)。稀释者在比桉油醇或1-页蒿萜酮更小的程度下使嗅觉受体去极化(P＜0.01)，而且它不产生嗅觉。犁骨信息素的反射作用：研究由测定犁骨信息素刺激VNO所产生的中枢神经系统(CNS)反射反应而开始进行。犁骨信息素诱导的雄雌异型局部反应(图6A和B)被反射在雄性和雌性受试者自律性反应中。对于雄性受试者(图6C)，A和C降低皮肤阻力(皮电活性＝EDA)(P＜0.01，n＝30)。对于雌性受试者(图6B)，F和B比A或D对EDA的降低作用更强(P＜O.01，n＝30)。
在30名雄性受试者中犁骨信息素A和C可明显地提高皮肤温度(ST)(图6G)(P＜0.01)；而D却使温度明显地降低(P＜0.01)。在30名雌性受试者中(图6H)B和F比A和C能更明显地降低皮肤温度(ST)(P＜0.01)。犁骨信息素对雌性受试者产生的EDA和ST变化的标准差大于对雄性的。
在使用含200fmoles犁骨信息素的空气脉冲(300ms到1秒)刺激VNO期间，从Cz和Tz记录雄性和雌性受试者皮层活性(图6G和H)。对于雄性受试者(图6E)，A、C和D以270-380ms的潜伏期明显地提高了α皮层活性。D和A的作用最强(P＜0.01)。在提供完一个单个的活性物质的脉冲后使EEG的同步化持续1.5到2.7分钟。对于雌性受试者(图6F)，提供了VNO的B或F的单个脉冲(200fmoles)提高α皮层活性，这个过程与嗅觉受体的反应无关。我们发现了人类VNO和嗅觉上皮中的特有的特异性，即它们与分别连接CNS的功能系统无关(布氏(1914)成人神经末端Brookover，C(1914)The nervusterminalis in adult man.J.Comp.Neurol.24：131-135)。还有一个初步的证据，即，EVG与三叉神经伤害感受器末梢无联系，这是因为对鼻中隔呼吸上皮进行局麻(2％利多卡因)时，即不阻滞也不降低EVG(蒙氏等，“假定的信息素对人类犁鼻骨器官和嗅觉上皮电活性的作用”-Monti-Bloch，L and Grosser，B.L.(1991)“Effect of putativepheromones on the electrical activity of the humanvomeronasal organ and olfactory epithelium”，J.Steroid Biochem.Molec.Biol.39：573-582)。而且，受试者不能反应任何刺激步骤的结果-疼痛的感觉。
如表1和图20所示，使用13种雌甾烷对男性及女性进行另外的EVG、GSR、ST和EEG试验。甾体化合物E12/N1对男性具有最强的EEG-alpha活性。甾体化合物E8/N1对男性具有最强的EEG-beta活性。甾体化合物E7/N1对女性具有最强的EEG-alpha活性。另外，值得注意的是，如EVG数据所示，E7/N1对男性(图21A)和女性(图20A)都具有出色的器官反应，但在CNS中却存在性别差异(对女性EEG-alpha高，对男性EEG-beta高，图31A和B)。
显然，VNO受体对犁骨信息素比对任何试验的嗅觉剂具有更高的敏感性；反过来对嗅觉受体也是一样。尽管OE可具有某些犁骨信息素受体的位置，但显然VNO反应的特异性是不一样的。
值得注意的是在两组犁骨信息素，A、C和D；与B和F的特异性和作用中存在性别差异。这说明可能存在与雌雄异型有关的受体。这个发现暗示了由于犁骨信息素对VNO的刺激而产生的成人自律神经系统组元的活化。
进一步，这一结果暗示用犁骨信息素刺激VNO产生EEG的同步化(图6G和H)。因此，这里的证据显示犁鼻骨系统对各种化学敏感刺激剂反应，并且其中的一些可诱导反射的自律性活性。

Claims (12)

1.下式甾体化合物
其中R1基本上选自一个或两个氢原子，甲基，亚甲基，和一个或两个卤原子；R2不存在或基本上选自氢和甲基；R3基本上选自氧代基，羟基，低级烷氧基，低级酰氧基，苯甲酰基，环戊丙酰基(cypionyl)，葡糖甙酸和磺酰基；R4基本上选自氢，羟基，低级烷氧基，低级酰氧基，氧代基和卤素；R5不存在或基本上选自氢，羟基，低级烷氧基和低级酰氧基；R6为氢或卤素；以及“a”表示该甾体化合物的A环任选地是芳香不饱和环，或者“b”，“c”和“d”均任选地是双键；以及“e”，“f”，“g”，“h”，“i”和“j”均任选地是双键。条件是：
(I)当“a”存在，R3为羟基，“j”，“i”，“g”和“h”都不存在时，(a)R4不能为氢；或者(b)如果“e”和“f”不存在R4不能为氧代基；
(II)当“a”存在，R3为羟基，“j”，“i”和“g”都不存在，“h”存在时，R1不能为亚甲基；
(III)当“a”，“h”和“i”存在时，(a)“e”或“f”中至少有一个存在，(b)R1为亚甲基；或(c)R1不是氢；
(IV)当“b”存在，R3为氧代基，“g”，“h”，“i”，“j”都不存在，R5为氢时，(a)如果“f”不存在R1不能为一个或两个氢，或(b)如果“f”存在，R1不能为甲基；
(V)当“b”和“j”存在而R3为氧代基时，“e”或“f”中至少有一个必须存在或者R1必须是亚甲基；
(VI)当“c”存在，“d”不存在而R3为羟基时，(a)“e”或“f”中至少有一个必须存在，或(b)R1必须为亚甲基；
(VII)当“c”和“d”存在而R3为甲氧基时，(a)至少“e”或“f”必须存在或(b)R1必须为亚甲基；
(VIII)当“b”存在，R3为羟基而R5为氢时，(a)至少“e”或“f”必须存在或者(b)R1必须是亚甲基。
2.按照权利要求1的化合物，其中“a”存在而“g”，“h”或“j”可为也可不为双键。
3.按照权利要求1的化合物，其中“b”为双键。
4.按照权利要求1的化合物，其中“c”和“d”为双键。
5.按照权利要求1的化合物，其中R2为甲基，“e”为双键。
6.按照权利要求2的化合物，其中所述的甾体化合物选自雌甾-1，3，5(10)，6，16-五烯-3-基乙酸酯；雌甾-1，3，5(10)，7-四烯-3-醇；17-亚甲基雌甾-1，3，5，7，9-五烯-3-醇；17-亚甲基-6-氧代雌甾-1，3，5(10)-三烯-3-基乙酸酯；雌甾-1，3，5，7，9，16-六烯-3-醇；雌甾-1，3，5(10)，6-四烯-3-醇；17-亚甲基雌甾-1，3，5(10)，7-四烯-3-醇；雌甾-1，3，5，7，9，16-六烯-3-基乙酸酯；雌甾-1，3，5(10)，7，16-五烯-3-醇；17-亚甲基雌甾-1，3，5(10)-三烯-3，6β-二醇；雌甾-1，3，5(10)，7，16-五烯-3-基乙酸酯；雌甾-1，3，5(10)，6，16-五烯-3-醇；和17-亚甲基雌甾-1，3，5(10)，7-四烯-3-基乙酸酯。
7.按照权利要求3的化合物，其中所述的甾体化合物选自雌甾-4，16-二烯-3β-醇；17-甲基甾-4，13(17)-二烯-3β-醇；和17-亚甲基雌甾-4-烯-3β-醇。
8.按照权利要求4的化合物，其中所述的甾体化合物选自3-甲氧基雌甾-2，5(10)，16-三烯和3-甲氧基-17-亚甲基雌甾-2，5(10)-二烯。
9.按照权利要求5的化合物，其中所述的甾体化合物选自3-羟基雌甾-1，3，5(10)，16-四烯-6-酮；6-氧代雌甾-1，3，5(10)，16-四烯-3-基乙酸酯；雌甾-1，3，5(10)，16-四烯-3，6β-二醇；6β-羟基雌甾-1，3，5(10)，16-四烯-3-基乙酸酯；雌甾-4，9，16-三烯-3-酮；10-羟基雌甾-4，16-二烯-3-酮；雌甾-5(10)，16-二烯-3α-醇；和雌甾-5(10)，16-二烯-3β-醇。
10.按照权利要求9的化合物10-羟基雌甾-4，16-二烯-3-酮。
11.按照权利要求8的化合物3-甲氧基雌甾-2，5(10)，16-三烯。
12.按照权利要求9的化合物雌甾-1，3，5(10)，16-四烯-3，6β-二醇。
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