CN116726185A - 一种药物组合物及其制备方法和应用 - Google Patents

一种药物组合物及其制备方法和应用 Download PDF

Info

Publication number
CN116726185A
CN116726185A CN202310838772.1A CN202310838772A CN116726185A CN 116726185 A CN116726185 A CN 116726185A CN 202310838772 A CN202310838772 A CN 202310838772A CN 116726185 A CN116726185 A CN 116726185A
Authority
CN
China
Prior art keywords
pharmaceutical composition
solvent
drug
lipid
carrier
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202310838772.1A
Other languages
English (en)
Inventor
刘晶
周会鸽
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
National Center for Nanosccience and Technology China
Original Assignee
National Center for Nanosccience and Technology China
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by National Center for Nanosccience and Technology China filed Critical National Center for Nanosccience and Technology China
Priority to CN202310838772.1A priority Critical patent/CN116726185A/zh
Publication of CN116726185A publication Critical patent/CN116726185A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
    • A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
    • A61K47/183—Amino acids, e.g. glycine, EDTA or aspartame
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/706—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
    • A61K31/7064—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines
    • A61K31/7068—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines having oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. cytidine, cytidylic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/24—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing atoms other than carbon, hydrogen, oxygen, halogen, nitrogen or sulfur, e.g. cyclomethicone or phospholipids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0053—Mouth and digestive tract, i.e. intraoral and peroral administration
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/06017—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/0606—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing heteroatoms not provided for by C07K5/06086 - C07K5/06139, e.g. Ser, Met, Cys, Thr

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Physiology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

本发明提供一种药物组合物及其制备方法和应用，所述药物组合物包括载体和负载在所述载体上的药物，所述载体包括二烷基半胱氨酸二肽和脂质的组合，所述脂质包括硅复合脂质衍生物，所述二烷基半胱氨酸二肽具有如式1所示结构；本发明制备的药物组合物可以整合硅酸盐网络对严苛环境的抵抗特性和二硫键网络对谷胱甘肽的响应灵敏度，载体具有较强穿透能力、较长血液半衰期、明显改善小分子化药毒性的优势，同时载体制备方法简单，条件温和，成本较低，易于推广和应用。

Description

一种药物组合物及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于化学及载药技术领域，具体涉及一种药物组合物及其制备方法和应用。
背景技术
口服给药具有时间方便灵活，患者依从性好等特点。然而口服药物需要克服胃肠道较宽的pH范围，才能被吸收，从而到达作用靶点。小分子药物(如吉西他滨等)缺乏靶向性，口服给药时难以识别作用靶点，降低了药物利用率，同时增加了毒副作用的风险，使其在临床上的应用陷入困境。脂质体由于安全性高，药物保护作用好，多种产品已经进入临床。然而将药物包载进入脂质体虽然可以起到一定增效减毒的作用，但脂质体在胃肠道的稳定性较差，容易使药物泄露。在此基础上，科学家近些年在脂质体的基础上发展了硅质体，可以更好抵抗严苛的外界环境，如强酸、强碱、多酶等，从而实现对所载带活性成份的保护。
CN1416334A涉及控释生物活性物质的脂质载体组合物，该组合物包含至少一种甘油三酯油，和至少一种选自磷脂酰乙醇胺和一己糖基神经酰胺的极性脂质，以及乙醇；其特征在于所述载体组合物具有形成粘附性结构的能力，该结构可保持于含水环境中，还涉及一种药物组合物，该组合物由所述脂质载体和溶解或分散于该载体中的生物活性物质组成；CN1947702A提供一种脂质载体及其制造方法。脂质载体包括：一脂质微粒，由一正电荷脂质、一胆固醇、一中性磷脂质与一中性脂质所组成，其中该正电荷脂质大体为100重量份、该胆固醇大体为25-100重量份、该中性磷脂质大体为25-100重量份以及该中性脂质大体为25-150重量份，脂质载体具有均一粒径、高包覆率与高血清稳定性，也具备酸碱敏感性；然而致密的结构也对药物释放造成困扰，难以实现按需释药。
因此，在本领域，期望开发一种既能保证药物在胃肠道保持稳定不泄露，又能在作用靶点达到快速释放的药物组合物。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种药物组合物，硅复合脂质衍生物可以水解缩合形成无机硅酸盐网状结构分布于纳米药物的表面，二烷基半胱氨酸二肽可在纳米药物表面形成二硫键网络结构，能够在强酸条件下保持稳定，实现口服药物的定向输送，使药物在细胞内快速释放，提高药效。
为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：
第一方面，本发明提供一种药物组合物，所述药物组合物包括载体和负载在所述载体上的药物，所述载体包括二烷基半胱氨酸二肽和脂质的组合，所述脂质包括硅复合脂质衍生物，所述二烷基半胱氨酸二肽具有如式1所示结构：
其中，R1为C2-C5直链或支链亚烷基，例如可以为C2直链亚烷基、C3直链亚烷基、C4直链亚烷基、C5直链亚烷基、C2支链亚烷基、C3支链亚烷基、C4支链亚烷基、C5支链亚烷基；
R2、R3各自独立地为C12-C24直链或支链烷基，例如可以为C12直链亚烷基、C14直链亚烷基、C16直链亚烷基、C18直链亚烷基、C20直链亚烷基、C22直链亚烷基、C24直链亚烷基、C12支链亚烷基、C13支链亚烷基、C15支链亚烷基、C16支链亚烷基、C18支链亚烷基、C20支链亚烷基、C22支链亚烷基、C24支链亚烷基。
本发明提供的药物组合物中，所述载体包括二烷基半胱氨酸二肽和脂质的组合，所述脂质包括硅复合脂质衍生物，一方面，二烷基半胱氨酸二肽可在纳米药物表面形成二硫键网络结构；另一方面，硅复合脂质衍生物可以水解缩合形成无机硅酸盐网状结构分布于纳米药物的表面；使得药物组合物能够在强酸条件下保持稳定，实现口服药物的定向输送，使药物在细胞内快速释放，提高药效。
所述二烷基半胱氨酸二肽的制备方法包括：
(1)在有机溶剂中，使胺类化合物与卤代烷烃/>混合，用碳酸钠调节反应液pH，分离纯化后，得到式2所示的二烷基亚胺；
(2)在有机溶剂中，使酸酐类化合物与式2所示的二烷基亚胺，分离纯化后，得到式3所示的二烷基酰酸；
(3)在有机溶剂中，使用碳二亚胺缩合剂和活酰化活化剂活化上步所得的二烷基酰酸的羧基，除杂后得到活化产物；随后将活化产物与半胱氨酸二肽混合，分离纯化后，得到二烷基半胱氨酸二肽。
优选地，所述二烷基半胱氨酸二肽具有如式1-1所示结构(二棕榈酰基半胱氨酸二肽、DPCD)：
合成式1-1所示的二棕榈酰基半胱氨酸二肽(DPCD)制备方法如下：
(1)在有机溶剂中，使棕榈胺与1-溴棕榈烷混合，用碳酸钠调节反应液pH，分离纯化后，得到式2-1所示的二棕榈亚胺；
(2)在有机溶剂中，使丁二酸酐，与式2-1所示的二棕榈亚胺混合，分离纯化后，得到式2-2所示的二棕榈酰丁酸；
(3)在有机溶剂中，使用碳二亚胺缩合剂和活酰化活化剂活化上步所得的二棕榈酰丁酸的羧基，除杂后得到活化产物；随后将活化产物与半胱氨酸二肽混合，分离纯化后，得到二棕榈酰基半胱氨酸二肽(DPCD)。
优选地，所述脂质还包括磷脂聚乙二醇。
优选地，所述含硅复合脂质衍包括N-[N–(3-三乙氧基硅烷)-丙基丁二酸]双十六胺按照文献报道的方法制备(＂Stabilized Magnetic Cerasomes for Drug Delivery.＂Cao,Z.；Yue,X.；Li,X.；Dai,Z.,Langmuir2013,29,14976-14983.)。
优选地，所述磷脂聚乙二醇和二烷基半胱氨酸二肽的摩尔比为1：(5-14)，例如可以为1:5、1：6、1：7、1：8、1：9、1：10、1：11、1：12、1：13、1：14，以及上述点值之间的具体点值，限于篇幅及出于简明的考虑，本发明不再穷尽列举所述范围包括的具体点值。
优选地，所述磷脂聚乙二醇和硅复合脂质衍生物的摩尔比为1：(5-14)，例如可以为1：5、1：6、1：7、1：8、1：9、1：10、1：11、1：12、1：13、1：14，以及上述点值之间的具体点值，限于篇幅及出于简明的考虑，本发明不再穷尽列举所述范围包括的具体点值。
本发明的药物组合物，所述载体成分摩尔比为：磷脂聚乙二醇(DSPE-PEG2000)：DPCD：硅复合脂质衍生物＝1：(5-14)：(14-5)。
优选地，所述药物包括吉西他滨、IR-780碘化物或异硫氰酸荧光素中的任意一种或至少两种的组合。
优选地，所述药物与载体的质量比为1：(0.05-0.35)，例如可以为1：0.05、1：0.1、1：0.15、1：0.2、1：0.25、1：0.3、1：0.35，以及上述点值之间的具体点值，限于篇幅及出于简明的考虑，本发明不再穷尽列举所述范围包括的具体点值。
第二方面，本发明提供一种如第一方面所述的药物组合物的制备方法，所述制备方法包括：
将药物、脂质与二烷基半胱氨酸二肽混合，得到所述药物组合物。
优选地，所述制备方法具体包括：将第一溶剂、药物、含硅复合脂质衍生物、磷脂-甲氧基聚乙二醇与二烷基半胱氨酸二肽混合，除去第一溶剂，加入第二溶剂复溶，离心，加入第三溶剂复溶得到所述药物组合物。
优选地，所述混合的温度为10-30℃，例如可以为10℃、15℃、20℃、25℃、30℃，以及上述点值之间的具体点值，限于篇幅及出于简明的考虑，本发明不再穷尽列举所述范围包括的具体点值。
优选地，所述混合的时间为5-30min，例如可以为5min、10min、15min、20min、25min、30min，以及上述点值之间的具体点值，限于篇幅及出于简明的考虑，本发明不再穷尽列举所述范围包括的具体点值。
优选地，所述第一溶剂包括甲醇、乙醇、氯仿或乙酸乙酯中的任意一种或至少两种的组合。
优选地，所述药物在第一溶剂中的浓度为1-2mg/mL，例如可以为1mg/mL、1.1mg/mL、1.5mg/mL、1.8mg/mL、2mg/mL，以及上述点值之间的具体点值，限于篇幅及出于简明的考虑，本发明不再穷尽列举所述范围包括的具体点值。
优选地，所述第二溶剂包括水、磷酸盐缓冲液或生理盐水中的任意一种或至少两种的组合。
优选地，所述药物在第二溶剂中的浓度为0.01-1mg/mL，例如可以为0.01mg/mL、0.05mg/mL、0.1mg/mL、0.5mg/mL、0.8mg/mL、1mg/mL，以及上述点值之间的具体点值，限于篇幅及出于简明的考虑，本发明不再穷尽列举所述范围包括的具体点值。
优选地，所述复溶包括搅拌、涡旋或超声中的任意一种或至少两种的组合。
优选地，所述第三溶剂包括去离子水、磷酸盐缓冲液或生理盐水中的任意一种或至少两种的组合。
优选地，所述药物在第三溶剂中的浓度为0.01-10mg/mL，例如可以为0.01mg/mL、0.05mg/mL、0.1mg/mL、0.5mg/mL、1mg/mL、5mg/mL、8mg/mL、10mg/mL，以及上述点值之间的具体点值，限于篇幅及出于简明的考虑，本发明不再穷尽列举所述范围包括的具体点值。
制备过程还包括离心、使用紫外光谱及差减法，或高效液相色谱，对所载带活性成分进行定量分析。
第三方面，本发明提供一种如第一方面所述药物组合物在制备口服药物制剂中的应用。
相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：
本发明制备的药物组合物可以整合硅酸盐网络对严苛环境的抵抗特性和二硫键网络对谷胱甘肽的响应灵敏度，载体具有较强穿透能力、较长血液半衰期、明显改善小分子化药毒性的优势，同时载体制备方法简单，条件温和，成本较低，易于推广和应用。
附图说明
图1为制备例1得到的二棕榈酰基半胱氨酸二肽的高分辨电喷雾质谱图；
图2为实施例1中药物组合物在不同pH环境中的稳定性图；
图3为实施例1-3中载体对药物的包封效率图；
图4为应用例1中药物组合物不同条件下的药物释放行为图；
图5为应用例2中药物组合物的细胞存活率实验结果图；
图6为应用例3中药物组合物的肿瘤球穿透实验结果图；
图7为应用例4中药物组合物的肿瘤球治疗实验结果图；
图8为应用例5中药物组合物的血液半衰期实验结果图；
图9为应用例6中药物组合物的动物水平抗肿瘤实验结果图；
图10为应用例6中药物组合物的血尿素氮水平图；
图11为应用例6中药物组合物的血肌酐水平图。
具体实施方式
下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。
制备例1
本制备例提供一种二棕榈酰基半胱氨酸二肽(DPCD)，其具有如式1-1所示结构；
具体制备方法如下：
(1)合成二棕榈亚胺，具体制备方法如下：
将棕榈胺(24.6g，102mmol)与1-溴棕榈烷(34.2g，112mmol)，碳酸钠(16.6g，158mmol)加入到100mL圆底烧瓶中并加入乙醇30mL，升温至80℃使乙醇回流，反应持续一周后，采用乙醇重结晶法对样品进行纯化，并采用沙星漏斗过滤去除杂质，从而得到纯净的二棕榈亚胺。
(2)合成二棕榈酰丁酸，具体制备方法如下：
将二棕榈亚胺(3g，6.44mmol)与丁二酸酐(1.29g，12.9mmol)加入50mL超干四氢呋喃中，加热溶解，室温搅拌一天，旋干溶剂，并再次使用二氯甲烷溶解，随后用10％柠檬酸水溶液、饱和氯化钠水溶液萃取，将有机相收集，使用无水硫酸镁干燥后将其旋蒸去除溶剂，随后将粗产物用乙腈重结晶，得到白色固体，为二棕榈酰丁酸。
(3)合成二棕榈酰基半胱氨酸二肽，具体制备方法如下：
将二棕榈酰丁酸(1.5g,2.7mmol)与1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDC)(0.77g，4.05mmol)及N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)(0.47g，4.05mmol)共同溶解于20mL二氯甲烷中，室温搅拌2h后，用去离子水萃取去除副产物。随后加入半胱氨酸二肽(0.91g，4.05mmol)，反应12h后，旋蒸去除二氯甲烷，将残留物用乙酸乙酯溶解，静置一段时间后，过滤去除沉淀，旋除乙酸乙酯，得到淡黄色油状的二棕榈酰基半胱氨酸二肽(DPCD)。
对制备例1中的二棕榈酰基半胱氨酸二肽进行高分辨电喷雾质谱(HR-ESI/MS，布鲁克，Solarix 9.4T)检测，如图1所示，图1的高分辨质谱结果显示，所制备二棕榈酰基半胱氨酸二肽的分子量为771.57，与理论预测值771.56完全一致，证明该分子的成功制备。
实施例1
本实施例提供一种药物组合物，具体制备方法如下：
(1)将总质量为1mg的磷脂聚乙二醇(DSPE-PEG2000)，硅复合脂质衍生物(制备方法同＂Stabilized Magnetic Cerasomes for Drug Delivery.＂Cao,Z.；Yue,X.；Li,X.；Dai,Z.,Langmuir2013,29,14976-14983.)，DPCD(摩尔比1：9.5：9.5)和0.05mg吉西他滨共溶于0.5mL甲醇和1.5mL氯仿，并置于圆底烧瓶中。
(2)25℃搅拌15min后，缓慢旋蒸除掉溶剂，形成均匀的脂质膜，加入2mL去离子水，采用涡旋和超声将其水化。
(3)12000rpm离心10分钟，将上清收集，测定250nm处吸光度值确定吉西他滨载带量，将沉淀使用1mL生理盐水复溶，得到所述药物组合物。
为验证本实施例所制备药物组合物在不同pH环境下的稳定性，将其以1:1000的比例稀释于具有不同pH值的磷酸盐缓冲液中，通过动态光散射仪(ZetasizerNanoZS)测定其不同时间点的水合粒径分布，结果如图2所示，其可在pH为2的条件下粒径维持24小时不变。
实施例2
本实施例提供一种药物组合物，具体制备方法如下：
(1)将总质量为1mg的DSPE-PEG2000，硅复合脂质衍生物，DPCD(摩尔比1：9.5：9.5)和0.5mg吉西他滨共溶于0.5mL甲醇和1.5mL氯仿，并置于圆底烧瓶中。
(2)25℃搅拌30min后，缓慢旋蒸除掉溶剂，形成均匀的脂质膜，加入2mL去离子水，采用涡旋和超声将其水化。
(3)12000rpm离心10分钟，将上清收集，测定250nm处吸光度值确定吉西他滨载带量，将沉淀使用1mL生理盐水复溶，得到所述药物组合物。
实施例3
本实施例提供一种药物组合物，具体制备方法如下：
(1)将总质量为1mg的DSPE-PEG2000，硅复合脂质衍生物，DPCD(摩尔比1：9.5：9.5)和1mg吉西他滨共溶于0.5mL甲醇和1.5mL氯仿，并置于圆底烧瓶中。
(2)30℃搅拌15min后，缓慢旋蒸除掉溶剂，形成均匀的脂质膜，加入2mL去离子水，采用涡旋和超声将其水化。
(3)12000rpm离心10分钟，将上清收集，测定250nm处吸光度值确定吉西他滨载带量，将沉淀使用1mL生理盐水复溶，得到所述药物组合物。
实施例1-3上清液中的药物含量采用紫外分光光度计(Perkin Elmer Lambda850)测定250nm处吸收值得到，差减法计算包封率，结果如图3所示，在投入与载体等质量的药物时，包封率仍可超过50％，此时计算载药量将近30％，说明本发明药物组合物可实现吉西他滨疏水性小分子药物的高效载带。
实施例4
本实施例提供一种药物组合物，具体制备方法如下：
(1)将总质量为1mg的磷脂聚乙二醇(DSPE-PEG2000)，硅复合脂质衍生物，DPCD(摩尔比1：7：12)和0.05mg吉西他滨共溶于0.5mL甲醇和1.5mL氯仿，并置于圆底烧瓶中。
(2)25℃搅拌15min后，缓慢旋蒸除掉溶剂，形成均匀的脂质膜，加入2mL去离子水，采用涡旋和超声将其水化。
(3)12000rpm离心10分钟，将上清收集，测定250nm处吸光度值确定吉西他滨载带量，将沉淀使用1mL生理盐水复溶，得到所述药物组合物。
实施例5
本实施例提供一种药物组合物，具体制备方法如下：
(1)将总质量为1mg的磷脂聚乙二醇(DSPE-PEG2000)，硅复合脂质衍生物，DPCD(摩尔比1：14：5)和0.05mg吉西他滨共溶于0.5mL甲醇和1.5mL氯仿，并置于圆底烧瓶中。
(2)25℃搅拌15min后，缓慢旋蒸除掉溶剂，形成均匀的脂质膜，加入2mL去离子水，采用涡旋和超声将其水化。
(3)12000rpm离心10分钟，将上清收集，测定250nm处吸光度值确定吉西他滨载带量，将沉淀使用1mL生理盐水复溶，得到所述药物组合物。
实施例6
本实施例提供一种药物组合物，具体制备方法如下：
(1)将总质量为1mg的磷脂聚乙二醇(DSPE-PEG2000)，硅复合脂质衍生物，DPCD(摩尔比1：7：12)和0.05mg吉西他滨共溶于0.5mL甲醇和1.5mL氯仿，并置于圆底烧瓶中。
(2)25℃搅拌30min后，缓慢旋蒸除掉溶剂，形成均匀的脂质膜，加入2mL去离子水，采用涡旋和超声将其水化。
(3)12000rpm离心10分钟，将上清收集，测定250nm处吸光度值确定吉西他滨载带量，将沉淀使用1mL生理盐水复溶，得到所述药物组合物。
对比例1
本对比例提供载带吉西他滨的DPPC脂质体，具体制备方法如下：
(1)将总质量为1mg的DSPE-PEG2000，DPPC(摩尔比1：19)和1mg吉西他滨共溶于0.5mL甲醇和1.5mL氯仿，并置于圆底烧瓶中。
(2)30℃搅拌15min后，缓慢旋蒸除掉溶剂，形成均匀的脂质膜，加入2mL去离子水，采用涡旋和超声将其水化。
(3)12000rpm离心10分钟，将上清收集，测定250nm处吸光度值确定吉西他滨载带量，将沉淀使用1mL生理盐水复溶，得到所述DPPC。
应用例1
在本应用例中，选择实施例3中的药物组合物，检测其谷胱甘肽响应性药物释放能力，具体过程如下：
将400μL实施例3中的药物组合物加入1600μL的磷酸盐缓冲液中，其pH值为7.4，加入10mM GSH作为第二控释条件，在37℃水浴中孵育。在每个测量时间点吸取100μL样品，8000rpm离心10分钟，收集上清液，加入酶板，测定250nm处吸光度值进行药物释放的定量和计算。
本药物组合物所载带药物吉西他滨的释放行为如图4所示，在谷胱甘肽存在条件下，药物将发生急剧释放，在2小时的累积释放量可以超过20％，而没有GSH存在条件下，该值仅为6％左右。该结果说明本发明的药物组合物具有谷胱甘肽响应性药物释放的性质，能够增加药物在肿瘤释放的速率，并降低正常组织中药物的释放，从而减小毒副作用。
应用例2
在本应用例中，以BxPC-3细胞为模型，采用CCK-8法检测药物组合物的治疗效果，具体过程如下：
消化后的BxPC-3细胞以每孔1×104个细胞的密度均匀接种在96孔板中，温度37℃，CO2浓度5％。12h后，将培养基替换为含有不同组分的新鲜培养基，游离吉西他滨和药物组合物(来源于实施例3)的吉西他滨最终浓度为2、1.6、1.2、0.8、0.4和0.2mg/mL。24h后，每孔加入浓度为5mg/mL的CCK-820μL，在37℃、5％CO2条件下孵育4h，用酶标仪(多功能酶标仪，珀金埃尔默，美国)在450nm处记录每孔吸光度。每个浓度下5个重复孔，每个实验重复3次。
结果如图5所示，从图中可以看出，药物组合物的治疗效果要好于游离吉西他滨，说明本发明可提高吉西他滨使用效果。
应用例3
在本应用例中，使用BxPC-3和HPasTeC细胞建立三维肿瘤球，并评价药物组合物的渗透效果，具体操作如下：
(1)使用48孔板，每孔滴加2％(w/v)的无菌琼脂糖溶液(200μL)，并接种5000个BxPC-3和5000个HPasTeC细胞，培养条件是37℃，5％CO2，7天后，成功制备三维肿瘤球；
(2)将药物组合物中的药物替换为FITC，从而对其进行荧光标记；
(3)将三维肿瘤球加入到超低贴壁24孔板中，然后将FITC标记的药物组合物加入到DMEM(1mg/mL,pH 7.0)中；
(4)2小时后，取下三维肿瘤球，使用pH值为7.4的磷酸盐缓冲液洗涤3次后，用激光共聚焦显微镜观察。
结果如图6所示，荧光几乎可以穿透整个肿瘤球，从而说明该药物组合物具有较强穿透能力，能够提高所载带药物成分的治疗效果。
应用例4
在本应用例中，使用BxPC-3和HPasTeC细胞建立三维肿瘤球，并评价药物组合物的治疗效果，具体操作如下：
(1)三维肿瘤球培养试验与实施例6一样；
(2)将三维肿瘤球转移到超低附着24孔板上，分别加入吉西他滨等效浓度为1.6mg/mL的游离吉西他滨、DPPC(来源于对比例1)、、药物组合物(来源于实施例3)，对照组仅加入等体积的PBS；
(3)1、3、7天后，使用显微镜观察细胞球的形态和大小；
结果如图7所示，由于增加的渗透性，在三维肿瘤球水平，药物组合物表现出比游离吉西他滨，以及DPPC载带的吉西他滨更强的治疗效果。
应用例5
在本应用例中，采用FITC标记的药物组合物，以Balb/c裸鼠为模型，通过测定血液中FITC含量来评价这些纳米颗粒的药代动力学，从而确定其血液半衰期，具体操作如下：
(1)将FITC标记的药物组合物静脉注射到无肿瘤小鼠中。分别于静脉注射后0.5、1、2、4、8、24、48小时采集尾静脉血样(0.2mL)；
(2)将血液收集到试管中后，立即在4℃下2000rpm离心15分钟，分离其他杂质和血浆；
(3)将10μL血浆与990μL酸化异丙醇混合。得到的混合物在4℃下孵育过夜，并在暗处保存；
(4)将样品在12000rpm下离心10分钟，将上清液转移到96孔板上，使用酶标仪测定荧光(λex＝480nm,λem＝520nm)；
通过比较荧光强度与FITC标准曲线确定浓度，并计算各组的曲线下面积(AUC)，结果如图8所示。该药物组合物的血液半衰期可长达13.68小时，证明其可长效累积于肿瘤，达到良好治疗效果。
应用例6
在本实施例中，采用实施例3的药物组合物，以Balb/c裸鼠为模型，验证药物组合物的体内治疗效果，具体操作如下：
选取5-6周龄雌性Balb/c裸鼠，右后腿皮下注射3×106个BxPC-3细胞和3×106个HPaSTeC细胞的混合物，建立肿瘤模型。待肿瘤体积达到100-200mm3后，将裸鼠随机分为3组，每组5只，分别口服PBS、游离吉西他滨或药物组合物，等效吉西他滨剂量为4mg/kg，两天给药一次，每天用卡尺测量肿瘤的垂直直径，监测肿瘤的生长情况。实验结束后，经静脉采血，放入添加EDTA的抗凝管中进行血尿素氮和血肌酐的测定。
肿瘤体积情况如图9所示，对照组肿瘤体积增长迅速，而游离吉西他滨组肿瘤体积增长与对照组比略显缓慢，DPPC组肿瘤生长得到有效抑制，药物组合物组不仅肿瘤生长得到抑制，其体积比最初给药时还要小。这些结果充分说明本发明的药物组合物能够极大提高化疗药物吉西他滨的治疗效果，且优于常规DPPC脂质体所载带的吉西他滨。
血尿素氮和血肌酐测量结果如图10和图11所示，表明本发明的药物组合物能够极大降低游离吉西他滨对肾脏功能的损伤，提高用药安全性。
根据实施例1-6，应用例1-6可知，本发明所制备的药物组合物可耐强酸，有较强穿透能力和较长血液半衰期，在GSH触发环境中加速药物释放，提升化疗药物的抗癌效果，并降低毒副作用，是一种有效的口服药物递送方法。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的一种药物组合物及其制备方法和应用，但本发明并不局限于上述实施例，即不意味着本发明必须依赖上述实施例才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。

Claims (10)

1.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括载体和负载在所述载体上的药物，所述载体包括二烷基半胱氨酸二肽和脂质的组合，所述脂质包括硅复合脂质衍生物，所述二烷基半胱氨酸二肽具有如式1所示结构：
其中，R1为C2-C5直链或支链亚烷基；
R2、R3各自独立地为C12-C24直链或支链烷基。
2.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述二烷基半胱氨酸二肽具有如式1-1所示结构：
3.根据权利要求1或2所述的药物组合物，其特征在于，所述脂质还包括磷脂聚乙二醇；
优选地，所述硅复合脂质衍生物包括N-[N–(3-三乙氧基硅烷)-丙基丁二酸]双十六胺；
优选地，所述磷脂聚乙二醇和二烷基半胱氨酸二肽的摩尔比为1：(5-14)；
优选地，所述磷脂聚乙二醇和硅复合脂质衍生物的摩尔比为1：(5-14)。
4.根据权利要求1-3任一项所述的药物组合物，其特征在于，所述药物包括吉西他滨、IR-780碘化物或异硫氰酸荧光素中的任意一种或至少两种的组合；
优选地，所述药物与载体的质量比为1：(0.05-0.35)。
5.一种如权利要求1-4任一项所述的药物组合物的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：
将药物、脂质与二烷基半胱氨酸二肽混合，得到所述药物组合物。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法具体包括：将第一溶剂、药物、含硅复合脂质衍生物、磷脂聚乙二醇与二烷基半胱氨酸二肽混合，除去第一溶剂，加入第二溶剂复溶，离心，加入第三溶剂复溶，得到所述药物组合物。
7.根据权利要求5或6所述的制备方法，其特征在于，所述混合的温度为10-30℃；
优选地，所述混合的时间为5-30min。
8.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述第一溶剂包括甲醇、乙醇、氯仿或乙酸乙酯中的任意一种或至少两种的组合；
优选地，所述药物在第一溶剂中的浓度为1-2mg/mL；
优选地，所述第二溶剂包括水、磷酸盐缓冲液或生理盐水中的任意一种或至少两种的组合；
优选地，所述药物在第二溶剂中的浓度为0.01-1mg/mL。
9.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述复溶包括搅拌、涡旋或超声中的任意一种或至少两种的组合；
优选地，所述第三溶剂包括去离子水、磷酸盐缓冲液或生理盐水中的任意一种或至少两种的组合；
优选地，所述药物在第三溶剂中的浓度为0.01-10mg/mL。
10.一种如权利要求1-4任一项所述的药物组合物在制备口服药物制剂中的应用。
CN202310838772.1A 2023-07-10 2023-07-10 一种药物组合物及其制备方法和应用 Pending CN116726185A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202310838772.1A CN116726185A (zh) 2023-07-10 2023-07-10 一种药物组合物及其制备方法和应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202310838772.1A CN116726185A (zh) 2023-07-10 2023-07-10 一种药物组合物及其制备方法和应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN116726185A true CN116726185A (zh) 2023-09-12

Family

ID=87906074

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202310838772.1A Pending CN116726185A (zh) 2023-07-10 2023-07-10 一种药物组合物及其制备方法和应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN116726185A (zh)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2019215157A1 (en) Lipid-like nanocomplexes and uses thereof
CA2486007A1 (en) Delivery of nucleic acid-like compounds
JP3631755B2 (ja) ポリオキシエチレン含有脂質二本鎖誘導体
JP2002500165A (ja) 新規の重合性の脂肪酸、リン脂質、及びそれから得られた重合リポソーム
CN102603866B (zh) 基于寡肽的pH敏感型两性离子及其在药剂中的应用
JP2001513760A (ja) ミトコンドリアの保護方法及びそのための組成物
CN106083769A (zh) 一种还原响应的紫杉醇前药及制备纳米胶束载体方法
CN105968373A (zh) 一种含两性离子的多重酸敏感抗肿瘤载药胶束及其制备方法和应用
CN106883404B (zh) 聚乙二醇维生素e琥珀酸酯衍生物及其制备方法和应用
WO2023015904A1 (zh) 一种新型阳离子脂质化合物
BR112020006191A2 (pt) copolímeros em blocos anfifílicos, micelas e métodos para tratamento ou prevenção de insuficiência cardíaca
CN109730966B (zh) 一种壳寡糖修饰的自携式无载体鼻腔纳米制剂脑靶向递送系统及其制备方法
CN100368019C (zh) 壳聚糖－海藻酸钠包裹幽门螺杆菌全菌蛋白微球及制备方法
WO2023024513A1 (zh) 新型阳离子脂质化合物
CN116726185A (zh) 一种药物组合物及其制备方法和应用
CN105348506B (zh) 谷氨酸‑tpgs嵌段共聚物的制备及其在靶向药物传递中的应用
WO2023029593A1 (zh) 新型阳离子脂质化合物
CN113769112A (zh) 一种基于GOQDs的pH响应型仿生纳米制剂及其制备方法、应用
JP7046321B2 (ja) 修飾されたスチレン－無水マレイン酸共重合体及びその使用
AU2020384481A1 (en) Formulated and/or co-formulated liposome compositions containing IDO antagonist prodrugs useful in the treatment of cancer and methods thereof
CN103040764B (zh) 一种盐酸平阳霉素脂质体注射剂
JP2023514324A (ja) がんの処置において有用なＴＦＧβアンタゴニストプロドラッグを含有する製剤化および／または共製剤化リポソーム組成物ならびにその方法
JPH07291853A (ja) リポソームおよび薬物運搬体
AU2007262493A1 (en) Pharmaceutical composition for oral administration
US11833209B2 (en) Formulated and/or co-formulated liposome compositions containing PD-1 antagonist prodrugs useful in the treatment of cancer and methods thereof

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination