CN116715634A - 一种化合物、药物组合物及在制备血管舒张药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于血管舒张活性化合物技术领域，涉及一种化合物、药物组合物及在制备血管舒张药物中的应用。所述化合物选自WRZ‑1、WRZ‑2、WRZ‑3、WRZ‑4、WRZ‑5、WRZ‑6、WRZ‑7、WRZ‑8、WRZ‑9、WRZ‑13、WRZ‑14、WRZ‑15、WRZ‑21、WRZ‑22、WRZ‑24、WRZ‑28、WRZ‑29。本发明提供的化合物具有良好的ROCK2抑制活性和良好血管舒张作用。
Description
技术领域
本发明属于血管舒张活性化合物技术领域，涉及一种化合物、药物组合物及在制备血管舒张药物中的应用。
背景技术
公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
高血压已成为世界上最常见的心脑血管疾病，是造成人类非正常死亡最危险的因素之一。医学上将静息状态下血管动脉收缩压/舒张压≥140/90mmHg作为评判高血压的标准，大多人在清晨两次以上非同天测得的血压≥140/90mmHg可初步诊断为高血压。高血压并不是单独存在的，患者在患有高血压的同时也常常会伴随血糖、血脂的代谢紊乱甚至心脏、肾脏、大脑等器官的病变，因而高血压是一种极其复杂的全身性疾病。引起高血压的原因十分复杂，有基因遗传、生存环境、不良的生活习惯以及长期用药等因素。全球有大约1/3的人存在血压偏高的问题，我国高血压病人超过3.3亿人，研发新型抗高血压药物迫在眉睫。
研究证实，Rho相关激酶(Rho-associated kinase，ROCK)高表达可以通过多种方式来收缩血管，抑制其活性可以显著舒张血管，达到降低血压的目的。ROCK属于丝氨酸/苏氨酸激酶家族成员，是能够与GTP结合的RhoA蛋白的直接和主要下游效应因子，分为ROCK1和ROCK2两种亚型。ROCK1主要在肝、脾、肾、肺和睾丸中高表达，而ROCK2则在大脑、心脏和血管中高表达。相对于ROCK1，ROCK2的激活与心血管系统稳态和血管收缩相关疾病的关系更为密切，被认为是舒张血管和治疗高血压的有效靶标，抑制其高表达可以有效舒张血管，从而达到治疗高血压的目的。ROCK2抑制剂不仅可以促进内源性血管舒张因子的分泌，还可以直接作用于肌球蛋白轻链，抑制细胞收缩，产生降压作用。目前已经报道了多个具有血管舒张作用的ROCK抑制剂，如法舒地尔、利帕舒地尔和奈塔舒地尔。为了设计合成血管舒张作用更好、ROCK2抑制效果更强的小分子化合物，最终发现高效低毒的高血压治疗药物，提出本发明。
发明内容
本发明的目的是提供一种化合物、药物组合物及在制备血管舒张药物中的应用，本发明提供的化合物具有良好的ROCK2抑制活性和良好血管舒张作用。
为了实现上述目的，本发明的技术方案为：
一方面，一种化合物，选自如下：
N-(1H-吲唑-5-基)-2-(3-甲氧基苯基)乙酰胺(化合物代号WRZ-1)；
2-(3-氟苯基)-N-(1H-吲唑-5-基)乙酰胺(化合物代号WRZ-2)；
N-(1H-吲唑-5-基)-2-(间甲苯基)乙酰胺(化合物代号WRZ-3)；
N-(1H-吲唑-5-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)乙酰胺(化合物代号WRZ-4)；
2-(3,4-二甲氧基苯基)-N-(1H-吲唑-5-基)乙酰胺(化合物代号WRZ-5)；
2-溴-N-(1H-吲唑-5-基)-2-(3-甲氧基苯基)乙酰胺(化合物代号WRZ-6)；
2-溴-2-(3-氟苯基)-N-(1H-吲唑-5-基)乙酰胺(化合物代号WRZ-7)；
2-溴-N-(1H-吲唑-5-基)-2-(间甲苯基)乙酰胺(化合物代号WRZ-8)；
2-溴-2-(3,4-二氯苯基)-N-(1H-吲唑-5-基)乙酰胺(化合物代号WRZ-9)；
2-(3-氟苯基)-N-(喹啉-6-基)乙酰胺(化合物代号WRZ-14)；
N-(喹啉-6-基)-2-(间甲苯基)乙酰胺(化合物代号WRZ-15)；
2-溴-2(3-甲氧基苯基)-N-(喹啉-6-基)乙酰胺(化合物代号WRZ-21)；
2-溴-2-(3-氟苯基)-N-(喹啉-6-基)乙酰胺(化合物代号WRZ-22)；
2-溴-2-(3,4-二氯苯基)-N-(喹啉-6-基)乙酰胺(化合物代号WRZ-24)；
N-羟基-4-(3-(异喹啉-5-基)脲基)苯甲酰胺(化合物代号WRZ-28)；
4-(3-(异喹啉-5-基)脲)苯甲酰胺(化合物代号WRZ-29)。
为了获得对ROCK2具有良好酶抑制活性的化合物，本发明设计了三种主环结构，分别为如下所示：
其中，R1为氢原子或者溴原子，R2为3-OCH3、3-CH3、3-F、3-CI、3-CF3、3,4-2OCH3、3,4-2Cl、3,4-2F，R3为4-CONH2、3-CH3。
经过研究表明，基于上述三种主环结构的化合物中，取代基对化合物影响ROCK2酶抑制率有较大影响，其中，本发明提供的上述16种化合物对ROCK2酶的抑制率均超过了50％，均具有良好的ROCK2酶抑制活性，而其他合成出的化合物的ROCK2酶抑制活性较差，例如2-(3-氯苯基)-N-(喹啉-6-基)乙酰胺(化合物代号WRZ-18)对ROCK2酶的抑制率仅为0.3％。
在一些实施方式中，选自如下：
N-(1H-吲唑-5-基)-2-(3-甲氧基苯基)乙酰胺(化合物代号WRZ-1)；
2-(3-氟苯基)-N-(1H-吲唑-5-基)乙酰胺(化合物代号WRZ-2)；
N-(1H-吲唑-5-基)-2-(间甲苯基)乙酰胺(化合物代号WRZ-3)；
N-(1H-吲唑-5-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)乙酰胺(化合物代号WRZ-4)；
2-溴-N-(1H-吲唑-5-基)-2-(3-甲氧基苯基)乙酰胺(化合物代号WRZ-6)；
2-溴-2-(3-氟苯基)-N-(1H-吲唑-5-基)乙酰胺(化合物代号WRZ-7)；
2-溴-N-(1H-吲唑-5-基)-2-(间甲苯基)乙酰胺(化合物代号WRZ-8)；
2-溴-2-(3,4-二氯苯基)-N-(1H-吲唑-5-基)乙酰胺(化合物代号WRZ-9)；
N-(喹啉-6-基)-2-(间甲苯基)乙酰胺(化合物代号WRZ-15)；
2-溴-2(3-甲氧基苯基)-N-(喹啉-6-基)乙酰胺(化合物代号WRZ-21)；
2-溴-2-(3-氟苯基)-N-(喹啉-6-基)乙酰胺(化合物代号WRZ-22)；
2-溴-2-(3,4-二氯苯基)-N-(喹啉-6-基)乙酰胺(化合物代号WRZ-24)；
N-羟基-4-(3-(异喹啉-5-基)脲基)苯甲酰胺(化合物代号WRZ-28)。
经过进一步研究表明，本发明提供的上述化合物对ROCK2酶的抑制率均超过了80％，均具有更好的ROCK2酶抑制活性。
在一些实施方式中，选自如下：
N-(1H-吲唑-5-基)-2-(3-甲氧基苯基)乙酰胺(化合物代号WRZ-1)；
2-(3-氟苯基)-N-(1H-吲唑-5-基)乙酰胺(化合物代号WRZ-2)；
N-(1H-吲唑-5-基)-2-(间甲苯基)乙酰胺(化合物代号WRZ-3)；
N-(1H-吲唑-5-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)乙酰胺(化合物代号WRZ-4)；
2-溴-N-(1H-吲唑-5-基)-2-(3-甲氧基苯基)乙酰胺(化合物代号WRZ-6)；
2-溴-2-(3-氟苯基)-N-(1H-吲唑-5-基)乙酰胺(化合物代号WRZ-7)；
2-溴-N-(1H-吲唑-5-基)-2-(间甲苯基)乙酰胺(化合物代号WRZ-8)；
2-溴-2-(3,4-二氯苯基)-N-(1H-吲唑-5-基)乙酰胺(化合物代号WRZ-9)；
N-(喹啉-6-基)-2-(间甲苯基)乙酰胺(化合物代号WRZ-15)；
2-溴-2(3-甲氧基苯基)-N-(喹啉-6-基)乙酰胺(化合物代号WRZ-21)；
2-溴-2-(3-氟苯基)-N-(喹啉-6-基)乙酰胺(化合物代号WRZ-22)。
经过更进一步研究表明，本发明提供的上述化合物对ROCK2酶的抑制率均超过了90％，均具有优异的ROCK2酶抑制活性，与阳性药物Fasudil相当。
在一些实施方式中，选自如下：
N-(1H-吲唑-5-基)-2-(3-甲氧基苯基)乙酰胺(化合物代号WRZ-1)；
N-(1H-吲唑-5-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)乙酰胺(化合物代号WRZ-4)；
2-溴-N-(1H-吲唑-5-基)-2-(3-甲氧基苯基)乙酰胺(化合物代号WRZ-6)；
2-溴-2-(3-氟苯基)-N-(1H-吲唑-5-基)乙酰胺(化合物代号WRZ-7)。
与阳性对照药物Fasudil相比，本发明提供的上述化合物对ROCK2酶的抑制率高于阳性药物Fasudil对ROCK2酶的抑制率，显示出了更强的ROCK2酶抑制活性，其中，2-溴-N-(1H-吲唑-5-基)-2-(3-甲氧基苯基)乙酰胺(化合物代号WRZ-6)的ROCK2的酶抑制活性最佳。
另一方面，一种化合物，为2-(3-甲氧基苯基)-N-(喹啉-6-基)乙酰胺(化合物代号WRZ-13)。经过研究表明，虽然WRZ-13对ROCK2酶的抑制率较差，但是具有良好的舒张血管收缩的作用。
式I所示化合物的合成路线如下：
具体合成步骤如下：
将含有取代基R2的苯乙酸(1a-1h)通过酰化反应做成中间体酰氯(4a-4h)，然后将其与5-氨基吲唑在四氢呋喃溶液中反应，生成目标化合物WRZ-1～WRZ-5。含有取代基R2的苯乙酸(1a-1h)在NBS作用下发生自由基取代反应，将苄基上的一个氢原子取代为溴原子得到中间体(2a-2h)，再将苯乙酸通过草酰氯或者氯化亚砜反应生成酰氯(3a-3h),然后将其与5-氨基吲唑在四氢呋喃溶液中反应，生成目标化合物WRZ-6～WRZ-12。
式II所示化合物的合成路线如下：
具体合成步骤如下：
将含有取代基R2的苯乙酸(1a-1h)通过酰化反应做成中间体酰氯(4a-4h)，然后将其与6-氨基喹啉在二氯甲烷溶液中反应，生成目标化合物WRZ-13～WRZ-20。含有取代基R2的苯乙酸(1a-1h)在NBS作用下发生自由基取代反应，将苄基上的一个氢原子取代为溴原子得到中间体(2a-2h)，再将苯乙酸通过草酰氯或者氯化亚砜生成酰氯(3a-3h),然后将其与6-氨基喹啉在二氯甲烷溶液中反应，生成目标化合物。
式III所示化合物的合成路线如下：
具体合成步骤如下：
将含有取代基R1的苯胺(5a-5h)在三光气的作用下生成异氰酸酯(6a-6b)，然后与5-氨基异喹啉反应生成脲基中间体(7a-7b)。中间体7a在在盐酸羟胺和氢氧化钾的作用下生成异羟肟酸，得到目标化合物WRZ-28；中间体7b在30％双氧水作用下生成甲酰胺得到目标化合物WRZ-29。
由于在本发明提供的化合物中WRZ-6的效果最好，因此第三方面提供WRZ-6的制备方法，即一种化合物的制备方法，包含按照如下反应路线的步骤；
具体地，2-甲氧基苯乙酸在NBS作用下发生自由基取代反应，将苄基上的一个氢原子取代为溴原子得到2-溴-2-(3-甲氧基苯基)乙酸，将2-溴-2-(3-甲氧基苯基)乙酸与草酰氯或者氯化亚砜进行酰氯化反应获得2-溴-2-(3-甲氧基苯基)乙酰氯，将2-溴-2-(3-甲氧基苯基)乙酰氯与5-氨基吲唑进行酰胺化反应，即得。
第四方面，一种药物组合物，包括上述化合物、所述化合物的药学上可接受的盐、所述化合物的溶剂化物、所述化合物的水合物或所述化合物的立体异构体。
本发明所述的药学上可接受的盐，旨在改善化合物理化性质所进行基团修饰后的衍生物，通常为所述化合物与无机盐如盐酸、硫酸、硝酸或氢溴酸等所形成的盐，以及与有机酸，例如甲磺酸、甲苯磺酸、柠檬酸或三氟乙酸等所形成的盐。
本发明所述的溶剂化物，是指与有机溶剂(乙醇、甲醇等)形成晶体物质。
第五方面，一种药物制剂，包括活性成分和药用载体，所述活性成分为上述化合物或上述药物组合物。
本发明所述的药用载体包括但不限于离子交换剂，氧化铝，硬脂酸铝，卵磷脂，血清蛋白，缓冲物质(如磷酸盐)，甘油，山梨酯，山梨酸钾，饱和植物脂肪酸的部分甘油酯混合物，水，盐或电解质(如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐)，胶态氧化硅，三硅酸镁，聚乙烯吡咯烷酮，纤维素物质，聚乙二醇，羧甲基纤维素钠，聚丙烯酸酯，蜂蜡，羊毛酯等；所述药物载体在药物组合物中的含量可以是1重量％-98重量％，通常大约占到80重量％。
优选地，所述药物制剂可以通过以下方式施与：口服、喷雾吸入、直肠给药、鼻腔给药、阴道给药、局部给药、非肠道给药如皮下、静脉、肌内、腹膜内、鞘内、心室内、胸骨内或颅内注射或输入，或借助一种外植的储器用药，其中更为优选口服、肌注、腹膜内或静脉内用药方式。
优选地，所述药物制剂的剂型可以是液体剂型、固体剂型；其中，液体剂型可以是真溶液类、胶体类、微粒剂型、乳剂剂型、混悬剂型；所述固体剂型包括片剂、胶囊、滴丸、气雾剂、丸剂、粉剂、乳剂、颗粒剂、栓剂、冻干粉针剂、包合物、填埋剂、贴剂、擦剂等。
第六方面，一种上述化合物、药物组合物或药物制剂在制备ROCK抑制剂的应用。
具体地，所述ROCK抑制剂可以用于制备ROCK抑制模型的模型药剂，可以用于预防、改善或治疗与ROCK高表达相关的疾病，还可以用于制备疾病模型，可以为细胞、组织或动物模型。
其中，所述模型药剂用于制备疾病模型，可以为细胞、组织或动物模型。所述ROCK高表达相关疾病表示以ROCK作为治疗靶点的疾病，或在疾病表征中出现了ROCK的异常高表达。
具体地，所述ROCK抑制剂为ROCK2抑制剂。
第七方面，一种上述化合物、药物组合物或药物制剂在制备血管舒张药物或降血压药物中的应用。
第八方面，一种舒张血管的方法，包括向有需要的个体施用第一方面所述化合物和/或第二方面所述药物组合物。
本发明的有益效果为：
经过实验表明，在10μM浓度下，本发明提供的WRZ-1、WRZ-2、WRZ-3、WRZ-4、WRZ-5、WRZ-6、WRZ-7、WRZ-8、WRZ-9、WRZ-14、WRZ-15、WRZ-21、WRZ-22、WRZ-24、WRZ-28、WRZ-29对ROCK2酶的抑制率均超过了50％，表明上述化合物具有良好的ROCK2抑制活性；其中，WRZ-1、WRZ-2、WRZ-3、WRZ-4、WRZ-6、WRZ-7、WRZ-8、WRZ-9、WRZ-15、WRZ-21、WRZ-22对ROCK2的抑制率超过了90％，与阳性药物Fasudil相当；WRZ-1、WRZ-4、WRZ-6、WRZ-7对ROCK2的抑制率超过了阳性药物Fasudil对ROCK2的抑制率，表现出更强的ROCK2抑制活性。
通过体内血管舒张活性实验表明，本发明提供的WRZ-1、WRZ-13、WRZ-6能够舒张由Phe诱导或Phe诱导的血管收缩。
通过内小鼠高血压模型活性检测表明，本发明提供的WRZ-6具有良好的治疗高血压的作用。
附图说明
构成本发明的一部分的说明书附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。
图1为本发明实施例中化合物WRZ-1在小鼠主动脉段暴露于1×10-6mol/L的α-肾上腺素能受体激动剂苯肾上腺素(Phe)或60mM KCl以诱导收缩的血管舒张活性结果图，A为PE诱导血管舒张率-化合物浓度曲线，B为PE诱导血管舒张率-化合物浓度对数曲线，C为KCl诱导血管舒张率-化合物浓度曲线，D为KCl诱导血管舒张率-化合物浓度对数曲线；
图2为本发明实施例中化合物WRZ-13在小鼠主动脉段暴露于1×10-6mol/L的α-肾上腺素能受体激动剂苯肾上腺素(Phe)或60mM KCl以诱导收缩的血管舒张活性结果图，A为PE诱导血管舒张率-化合物浓度曲线，B为PE诱导血管舒张率-化合物浓度对数曲线，C为KCl诱导血管舒张率-化合物浓度曲线，D为KCl诱导血管舒张率-化合物浓度对数曲线；
图3为本发明实施例中化合物WRZ-6在小鼠主动脉段暴露于1×10-6mol/L的α-肾上腺素能受体激动剂苯肾上腺素(Phe)或60mM KCl以诱导收缩的血管舒张活性结果图，A为PE诱导血管舒张率-化合物浓度曲线，B为PE诱导血管舒张率-化合物浓度对数曲线，C为KCl诱导血管舒张率-化合物浓度曲线，D为KCl诱导血管舒张率-化合物浓度对数曲线；
图4为本发明实施例中化合物WRZ-6在体内小鼠高血压模型活性检测结果图，A为收缩压(SBP)，B为舒张压(DBP)；
图5为本发明实施例中化合物WRZ-6与ROCK2的作用模式图，A为WRZ-6与靶标ROCK2关键氨基酸的作用模式图，B为WRZ-6伸入靶标ROCK2活性结合腔的模式图。
具体实施方式
为了使得本领域技术人员能够更加清楚地了解本发明的技术方案，以下将结合具体的实施例详细说明本发明的技术方案。
实施例1化合物的制备
式I化合物可通过如下反应路线制备得到：
其中，所用的试剂分别为：(a)AIBN,NBS,CCl4,78℃,8h,reflux；(b)SOCl2,80℃,2h,reflux；(c)THF/DCM,Et3N,0℃→rt；4～6h；
中间体2a-2h的合成通用方法
将原料1a-1h溶于四氯化碳中，若部分原料不能完全溶解在四氯化碳中时，超声后完全溶解。然后加入1.2eq的N-溴代琥珀酰亚胺(NBS)和0.05eq的偶氮二异丁腈(AIBN)，78℃下回流8h，TLC跑板(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)监测反应，待反应完全后，先过滤，除去固体不溶物，保留滤液，浓缩，最后硅胶柱层析，根据跑板情况确定洗脱剂极性，通常是石油醚:乙酸乙酯20:1到10:1左右，经柱层析得到中间体2a-2h。
(1)中间体:2-溴-2-(3-甲氧基苯基)乙酰氯(代号2a)的合成
将0.83g(5mmol)的1a和1.1g(6mmol)NBS溶解在20mL的四氯化碳中，如果原料溶解性差，升高反应温度，待原料完全溶解后加入41mg(0.25mmol)AIBN，78℃回流8小时以上，TLC监测反应，待反应完全后，过滤出不溶物，收集滤液，浓缩后硅胶柱层析，洗脱剂极性石油醚:乙酸乙酯从20:1到10:1，产物点在原料点下方，但是产物先出，得到630mg浅红色油状物，收率51.6％。
(2)中间体:2-溴-2-(3-氟苯基)乙酰氯(代号2b)的合成
将1.54g(10mmol)的1b和2.14g(12mmol)NBS溶解在25mL的四氯化碳中，如果原料溶解性差，升高反应温度，待原料完全溶解后加入160mg(1mmol)AIBN，78℃回流8小时以上，TLC监测反应，待反应完全后，过滤出不溶物，保留滤液，浓缩滤液后硅胶柱层析，洗脱剂极性石油醚:乙酸乙酯10:1，得到2.06g黄色油状物，收率88％。
(3)中间体:2-溴-2-(间甲苯基)乙酰氯(代号2c)的合成
将600mg(4mmol)的1c和854mg(4.8mmol)NBS溶解在20mL的四氯化碳中，如果原料溶解性差，先超声，若还不能完全溶解，升高反应温度，待原料完全溶解后加入66mg(0.4mmol)AIBN，78℃回流8小时以上，TLC跑板监测反应，原料反应不完全，直接后处理，过滤出不溶物，保留滤液，硅胶柱层析，洗脱剂极性石油醚:乙酸乙酯从20:1到10:1，产物点在原料点下方，但是产物先出，得到410mg浅红色油状物，收率45％。
(4)中间体:2-溴-2-(3,4-二氯苯基)乙酰氯(代号2d)的合成
将1g(4.88mmol)的1d和1.04g(5.85mmol)NBS溶解在30mL的四氯化碳中，原料完全溶解后加入81mg(0.49mmol)AIBN，78℃回流8小时以上，TLC监测反应，待反应完全后，过滤出不溶物，得到滤液，硅胶柱层析，洗脱剂极性石油醚:乙酸乙酯10:1，产物点在原料点下方，得到1.5g黄色油状物，收率65％。直接投下一步。
(5)中间体:2-溴-2-(3-(三氟甲基)苯基)乙酰氯(代号2e)的合成
将1g(4.9mmol)的1e和1.05g(5.88mmol)NBS溶解在25mL的四氯化碳中，如果原料溶解性差，先超声，若还不能完全溶解，升高反应温度，待原料完全溶解后加入81mg(0.49mmol)AIBN，78摄氏度下回流8小时以上，TLC监测反应，原料反应完全，过滤出固体不溶物，保留滤液，真空浓缩后硅胶柱层析，洗脱剂极性石油醚:乙酸乙酯10:1，产物点在原料点下方，得到1.1g黄色油状物，收率79％。
(6)中间体15f:2-溴-2-(3-氯苯基)乙酰氯(代号2f)的合成
将1g(5.86mmol)的1f和1.25g(7.03mmol)NBS溶解在25mL的四氯化碳中，原料完全溶解后加入97mg(0.59mmol)AIBN，78摄氏度下回流8小时以上，TLC跑板监测反应，此反应在较短时间内反应完全，产物点在原料点下方。过滤出固体不溶物，保留滤液，经硅胶柱层析，洗脱剂极性石油醚:乙酸乙酯10:1，得到1.6g黄色油状物，直接投下一步。
(7)中间体:2-溴-2-(3,4-二氟苯基)乙酰氯(代号2g)的合成
将1g(5.81mmol)的1g和1.24g(6.97mmol)NBS溶解在25mL的四氯化碳中，原料完全溶解后加入96mg(0.58mmol)AIBN，78摄氏度下回流8小时以上，TLC监测反应，原料点在板上有拖尾现象，产物点在原料点下方，反应完全后拖尾消失。过滤出固体不溶物，保留滤液，硅胶柱层析，洗脱剂极性石油醚:乙酸乙酯10:1，得到1.2g黄色油状物，直接投下一步。
(8)中间体:2-溴-2-(3,4-二氟苯基)乙酰氯(代号2h)的合成
将1.5g(7.65mmol)的1h和1.63g(9.2mmol)NBS溶解在25mL的四氯化碳中，如果原料溶解性差，升高反应温度，待原料完全溶解后加入125mg(0.76mmol)AIBN，78摄氏度下回流8小时以上，TLC监测反应，此反应不彻底，影响产率。直接后处理过滤出不溶物，保留滤液，硅胶柱层析，洗脱剂极性石油醚:乙酸乙酯从20:1到10:1，产物点在原料点下方，得到黄色油状物，收率40％
中间体3a-3h的合成通用方法
在0℃下(冰浴)，将10eq的氯化亚砜滴加到原料2a-2h中，滴加完毕后，室温反应5至10分钟，然后回流2小时左右，真空浓缩，旋出氯化亚砜，得到黄色油状物的中间体3a-3h。另一种方法是将14a-14h溶解在二氯甲烷中后，加入7-8倍当量的草酰氯和3-5滴的DMF，38℃下回流两小时，反应完全浓缩溶液，直接投下一步。
(9)中间体:2-溴-2-(3-甲氧基苯基)乙酰氯(代号3a)的合成
冰浴下，将1.9g(15.9mmol)氯化亚砜滴加到390mg(1.59mmol)的中间体2a中，滴加完毕后，室温反应10分钟，然后在恒温油浴锅回流2小时，反应完毕后，旋蒸除去氯化亚砜，得到红色油状物，收率85％，直接投下一步。
(10)中间体:2-溴-2-(3-氟苯基)乙酰氯(代号3b)的合成
冰浴下，将10.5g(88.8mmol)氯化亚砜滴加到2.06mg(8.88mmol)的中间体2b中，滴加完毕后，室温反应10分钟，然后在恒温油浴锅回流2小时，反应完毕后，旋蒸除去氯化亚砜，得到红色油状物，收率90％，直接投下一步。
(11)中间体:2-溴-2-(间甲苯基)乙酰氯(代号3c)的合成
将720mg(3.16mmol)的中间体2c中溶解在20mL二氯甲烷中，然后加入3.2g(25.7mmol)的草酰氯，38℃下回流2小时，反应完毕后，浓缩反应液，直接投下一步。
(12)中间体:2-溴-2-(3,4-二氯苯基)乙酰氯(代号3d)的合成
将1.5g(5.3mmol)的中间体2d中溶解在20mL二氯甲烷中，然后加入5.4g(42.4mmol)的草酰氯，38℃下回流2小时，反应完毕后，浓缩反应液，得到1.17g红色油状物，直接投下一步。
(13)中间体:2-溴-2-(3-(三氟甲基)苯基)乙酰氯(代号3e)的合成
将967mg(3.43mmol)的中间体2e中溶解在20mL二氯甲烷中，然后加入3.48g(27.44mmol)的草酰氯，38℃下回流2小时，反应完毕后，浓缩反应液，直接投下一步。
(14)中间体15f:2-溴-2-(3-氯苯基)乙酰氯(代号3f)的合成
将1.01g(4.6mmol)的中间体2f中溶解在20mL二氯甲烷中，然后加入4.7g(36.8mmol)的草酰氯，38℃下回流2小时，反应完毕后，浓缩反应液，直接投下一步。
(15)中间体:2-溴-2-(3,4-二氟苯基)乙酰氯(代号3g)的合成
将1.45g(5.8mmol)的中间体2g中溶解在25mL二氯甲烷中，然后加入5.9g(46.4mmol)的草酰氯，38℃下回流2小时，反应完毕后，浓缩反应液，得到1.36g红色油状物，直接投下一步。
(16)中间体:2-溴-2-(3,4-二氟苯基)乙酰氯(代号3h)的合成
将1.06g(3.87mmol)的中间体2h溶解在20mL二氯甲烷中，加入4g(30.96mmol)的草酰氯，滴加5滴DMF，38℃下回流2小时，待反应完全，浓缩反应液，得到红色油状物，收率92％，直接投下一步。
中间体4a-4h的合成通用方法
在0℃下(冰浴)，将10eq的氯化亚砜缓慢滴加到原料1a-1h中，滴加完毕后，室温反应10分钟，然后回流2小时左右,真空浓缩，旋出氯化亚砜，得到黄色油状物的中间体4a-4h。另一种方法是将1a-1h溶解在二氯甲烷中后，加入7-8倍当量的草酰氯和3-5滴的DMF，38℃下回流两小时，反应完全浓缩溶液，直接投下一步。
(17)中间体:2-(3-甲氧基苯基)乙酰氯(代号4a)的合成
将1g(6mmol)的原料1a溶解在45mL的二氯甲烷中，加入5.71g(45mmol)的草酰氯以及5滴DMF，38℃下回流2小时以上，TLC监测反应，反应完全后浓缩反应液，得到黄色油状物，收率90％，直接投下一步。
(18)中间体:2-(3-甲氧基苯基)乙酰氯(代号4b)的合成
将770mg(5mmol)的原料1b溶解在25mL的二氯甲烷中，加入4.75g(37.5mmol)的草酰氯以及5滴DMF，38℃下回流2小时以上，TLC监测反应，反应完全后浓缩反应液，得到黄色油状物，收率95％，直接投下一步。
(19)中间体:2-(间甲苯基)乙酰氯(代号4c)的合成
将600mg(4mmol)的原料1c溶解在20mL的二氯甲烷中，加入3.8g(30mmol)的草酰氯以及5滴DMF，38℃下回流2小时以上，TLC监测反应，反应完全后浓缩反应液，得到黄色油状物，收率85％，直接投下一步。
(20)中间体:2-(3,4-二氯苯基)乙酰氯(代号4d)的合成
将1.02g(5mmol)的原料1d溶解在30mL的二氯甲烷中，加入4.75g(37.5mmol)的草酰氯以及5滴DMF，38℃下回流2小时以上，TLC监测反应，反应完全后浓缩反应液，得到黄色油状物，收率88％，直接投下一步。
(21)中间体:2-(3-(三氟甲基)苯基)乙酰氯(代号4e)的合成
将816mg(4mmol)的原料1e溶解在25mL的二氯甲烷中，加入3.81g(30mmol)的草酰氯以及4滴DMF，38℃下回流2小时以上，TLC监测反应，反应完全后浓缩反应液，得到黄色油状物，收率90％，直接投下一步。
(22)中间体:2-(3-(三氟甲基)苯基)乙酰氯(代号4f)的合成
将850mg(5mmol)的原料1e溶解在30mL的二氯甲烷中，加入4.75g(37.5mmol)的草酰氯以及4滴DMF，38℃下回流2小时以上，TLC监测反应，反应完全后浓缩反应液，得到黄色油状物，收率92％，直接投下一步。
(23)中间体:2-(3,4-二氟苯基)乙酰氯(代号4g)的合成
将688mg(4mmol)的原料1g溶解在20mL的二氯甲烷中，加入3.81g(30mmol)的草酰氯以及4滴DMF，38℃下回流2小时以上，TLC监测反应，反应完全后浓缩反应液，得到黄色油状物，收率96％，直接投下一步。
(24)中间体:2-(3,4-二甲氧基苯基)乙酰氯(代号4h)的合成
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将1g(5.09mmol)的原料1h溶解在20mL的二氯甲烷中，加入4.85g(38.22mmol)的草酰氯以及5滴DMF，38℃下回流2小时以上，TLC监测反应，反应完全后浓缩反应液，得到黄色油状物，收率94％，直接投下一步。
WRZ-1～WRZ-12的合成方法：
将5-氨基吲唑溶解在二氯甲烷或者四氢呋喃中并加入2.4eq的三乙胺，然后将1.2eq中间体3a-3h或中间体4a-4h溶解在适量的的二氯甲烷或者四氢呋喃中，将中间体3a-3h或4a-4h的溶液滴加到伯氨溶液中，反应4小时以上，TLC(二氯甲烷：甲醇＝20：1)监测反应，反应完全后二氯甲烷萃取三次(DCM适量)，合并有机相，无水硫酸镁除去有机相内的水，经硅胶柱层析后得到纯品WRZ-1～WRZ-12。
(25)目标化合物:N-(1H-吲唑-5-基)-2-(3-甲氧基苯基)乙酰胺(代号WRZ-1)的合成
280mg(2.1mmol)5-氨基吲唑，463mg(2.52mmol)的中间体4a，510mg(5.04mmol)的三乙胺。按照上述通用的合成方法得到白色固体300mg，收率51％。1H NMR(800MHz,DMSO-d6):δ12.97(s,NH),10.14(s,NH),8.12(s,ArH),8.01(s,ArH),7.48(d,J＝8.9Hz,ArH),7.43(d,J＝6.9Hz,1H),7.24(t,J＝7.9Hz,1H),6.96–6.92(m,2H),6.82(dd,J＝8.2,2.8Hz,1H),3.75(s,CH3),3.62(s,CH2)；13C NMR(201MHz,DMSO-d6):δ169.19,159.68,138.11,137.33,133.84,132.67,129.78,123.16,121.76,120.74,115.34,112.33,110.62,110.10,55.44,43.84；ESI-MS(m/z):calcd.for C16H15N3O2[M+H]+282.12,found 282.23.
(26)目标化合物:2-(3-氟苯基)-N-(1H-吲唑-5-基)乙酰胺(代号WRZ-2)的合成
将380mg(2.91mmol)5-氨基吲唑溶解在20mL的四氢呋喃中，并加入587mg(5.82mmol)的三乙胺，获得吲唑溶液。将560mg(3.5mmol)中间体4b溶解10mL的四氢呋喃中，将中间体4b的THF溶液滴加到吲唑溶液中，室温反应8小时，每两个小时TLC监测一次，反应完全后，先抽滤出不溶物，浓缩滤液，然后加入20mL的二氯甲烷，产物不溶，析出固体，然后经硅胶柱层析得到纯品目标化合物，得到白色固体460mg，收率49.5％白色固体。1H NMR(800MHz,DMSO-d6):δ12.99(s,NH),10.19(s,NH),8.13(s,ArH),8.02(s,arH),7.49(d,J＝8.9Hz,1H),7.43(d,J＝10.8Hz,1H),7.38(q,J＝7.5Hz,1H),7.20(d,J＝7.1Hz,2H),7.09(t,J＝8.0Hz,1H),3.70(s,CH2)；13C NMR(201MHz,DMSO-d6):δ168.78,163.14,161.93,139.35,137.37,133.86,132.56,130.57,125.76,123.16,120.75,116.43,113.84,110.65,110.19,43.26；ESI-MS(m/z):calcd.for C15H12FN3O[M+H]+270.10,found 270.25.
(27)目标化合物:N-(1H-吲唑-5-基)-2-(间甲苯基)乙酰胺(代号WRZ-3)的合成
将310mg(2.33mmol)5-氨基吲唑溶解在30mL的四氢呋喃中，并加入566mg(5.6mmol)的三乙胺，获得吲唑溶液。将470mg(2.8mmol)中间体4c溶解10mL的四氢呋喃中，将中间体4c的THF溶液滴加到吲唑溶液中，室温反应8小时左右，每两个小时TLC监测一次，反应完全后，先抽滤出不溶物，浓缩滤液，然后经硅胶柱层析得到纯品目标化合物，得到白色固体360mg，收率74％。1H NMR(800MHz,DMSO-d6):δ12.97(s,NH),10.14(s,NH),8.13(s,ArH),8.01(s,ArH),7.50–7.42(m,2H),7.24–7.14(m,3H),7.06(d,J＝7.6Hz,1H),3.61(s,CH2),2.30(s,CH3)；13C NMR(201MHz,DMSO-d6):δ169.38,137.79,137.32,136.56,133.84,132.71,130.17,128.67,127.59,126.60,123.17,120.73,110.61,110.07,43.76,21.47；ESI-MS(m/z):calcd.for C16H15N3O[M+H]+266.12,found 266.77.
(28)目标化合物:N-(1H-吲唑-5-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)乙酰胺(代号WRZ-4)的合成
240mg(1.8mmol)5-氨基吲唑，480mg(2.16mmol)的中间体4e，437mg(4.32mmol)的三乙胺。按照通用的合成方法得到白色固体310mg，收率54％。1H NMR(800MHz,DMSO-d6):δ12.99(s,NH),10.25(s,NH),8.13(s,ArH),8.02(s,ArH),7.74(s,ArH),7.68–7.57(m,3H),7.51–7.43(m,2H),3.81(s,CH2)；13C NMR(201MHz,DMSO-d6):δ168.72,138.00,137.39,133.87,132.52,129.77,129.51,129.36,126.24,125.45,124.09,123.76,123.16,120.73,110.68,110.21,43.09；ESI-MS(m/z):calcd.for C16H12F3N3O[M+H]+320.09,found 321.1
(29)目标化合物:2-(3,4-二甲氧基苯基)-N-(1H-吲唑-5-基)乙酰胺(代号WRZ-5)的合成
将450mg(3.82mmol)5-氨基吲唑溶解在35mL的四氢呋喃中，并加入1.08g(10.68mmol)的三乙胺，获得吲唑溶液。将0.98g(4.58mmol)中间体4h溶解10mL的四氢呋喃中，将中间体4h的四氢呋喃溶液滴加到吲唑溶液中，室温反应8小时，每两个小时TLC监测一次，反应完全后，先抽滤出不溶物，浓缩滤液，然后加入20mL乙酸乙酯，产物不溶，析出固体，经液质确认为产物粗品，硅胶柱层析得到750mg白色固体，收率63％。1HNMR(800MHz,DMSO-d6):δ12.97(s,1H),10.09(s,1H),8.12(s,1H),8.01(s,1H),7.48(d,J＝8.9Hz,1H),7.43(d,J＝10.3Hz,1H),6.98(s,1H),6.92–6.85(m,2H),3.74(d,J＝23.4Hz,6H),3.57(s,2H)；13C NMR(201MHz,DMSO-d6):δ169.60,148.99,148.05,137.32,133.82,132.74,129.03,123.16,121.50,120.77,113.47,112.30,110.60,110.09,56.00,55.91,43.37；ESI-MS(m/z):calcd.for C17H17N3O3[M+H]+312.13,found 312.33.
(30)目标化合物:2-溴-N-(1H-吲唑-5-基)-2-(3-甲氧基苯基)乙酰胺(代号WRZ-6)的合成
将150mg(1.12mmol)5-氨基吲唑溶解在20mL的四氢呋喃中，并加入260mg(2.56mmol)的三乙胺，获得吲唑溶液。将335mg(1.28mmol)中间体3a溶解10mL的四氢呋喃中，将中间体3a的THF溶液滴加到吲唑溶液中，室温反应8小时，每两个小时TLC监测一次，反应完全后，先抽滤出不溶物，浓缩滤液，经硅胶柱层析得到目标化合物143mg。1H NMR(800MHz,DMSO-d6):δ12.89(s,1H),10.29(s,1H),8.15(s,1H),7.96(s,1H),7.66(d,J＝9.0Hz,1H),7.25(t,J＝7.8Hz,1H),7.11(dd,J＝8.7,1.8Hz,1H),6.96–6.92(m,2H),6.83(dd,J＝7.8,2.2Hz,1H),3.75(s,3H)；13C NMR(201MHz,DMSO-d6):δ169.67,159.69,140.80,137.89,137.82,133.76,129.81,121.80,121.11,119.59,115.40,114.50,112.38,99.30,55.44,43.95；ESI-MS(m/z):calcd.for C16H14BrN3O2[M+H]+361.02,found 361.39.
(31)目标化合物:2-溴-2-(3-氟苯基)-N-(1H-吲唑-5-基)乙酰胺(代号WRZ-7)的合成
将500mg(4.4mmol)5-氨基吲唑溶解在30mL的四氢呋喃中，并加入1.1g(10.64mmol)的三乙胺，获得吲唑溶液。将1.33g(3.5mmol)中间体3b溶解10mL的四氢呋喃中，将中间体3b的四THF溶液滴加到吲唑溶液中，室温反应8小时，每两个小时TLC监测一次，反应完全后，先抽滤出不溶物，浓缩滤液，然后加入20mL的乙酸乙酯，析出850mg的固体，经液质确认为粗品产物，经乙酸乙酯跟石油醚重结晶得到600mg固体产物，收率40％。1H NMR(800MHz,DMSO-d6):δ12.99(s,NH),10.19(s,NH),8.13(s,ArH),8.02(s,ArH),7.49(d,J＝8.9Hz,ArH),7.44(d,J＝8.9Hz,1H),7.38(q,J＝7.5Hz,1H),7.20(d,J＝7.3Hz,2H),7.09(t,J＝8.6Hz,1H)；13C NMR(201MHz,DMSO-d6):δ168.74,163.19,161.93,139.39,139.35,137.37,133.86,132.56,130.61,130.57,125.76,125.75,123.18,120.75,116.43,116.33,113.84,113.79,110.65,110.19,43.26；ESI-MS(m/z):calcd.for C15H11BrN3O[M+H]+349.01,found 349.21.
(32)目标化合物:2-溴-N-(1H-吲唑-5-基)-2-(间甲苯基)乙酰胺(代号WRZ-8)的合成
将190mg(1.43mmol)5-氨基吲唑溶解在20mL的四氢呋喃中，并加入320mg(3.16mmol)的三乙胺，获得吲唑溶液。将1.33g(3.5mmol)中间体3c溶解10mL的四氢呋喃中，将中间体3c的四氢呋喃溶液滴加到吲唑溶液中，室温反应8小时，每两个小时TLC监测一次，反应完全后，先抽滤出不溶物，浓缩滤液，二氯甲烷萃取三次后合并有机相，无水硫酸镁除去有机相的水，浓缩，加入EA，析出固体，过滤后滤液经硅胶柱层析得到目标化合物200mg，收率41％。1H NMR(800MHz,DMSO-d6):δ9.92(s,NH),8.17(s,NH),8.02(s,1H),7.58(d,J＝9.0Hz,1H),7.52(dd,J＝9.2,3.7Hz,2H),7.47(d,J＝9.0Hz,2H),7.24(t,J＝7.6Hz,2H),7.10(d,J＝7.6Hz,1H),2.31(s,CH3)；13C NMR(201MHz,DMSO-d6):δ169.38,137.79,137.32,136.56,133.84,132.71,130.17,128.67,127.59,126.60,123.17,120.73,110.61,110.07,43.76,21.47；ESI-MS(m/z):calcd.for C16H14BrN3O[M+H]+345.03,found 345.29.
(33)目标化合物:2-溴-2-(3,4-二氯苯基)-N-(1H-吲唑-5-基)乙酰胺(代号WRZ-9)的合成
将250mg(1.88mmol)5-氨基吲唑溶解在30mL的四氢呋喃中，并加入460mg(4.5mmol)的三乙胺，获得吲唑溶液。将676mg(2.26mmol)中间体3d溶解10mL的四氢呋喃中，将中间体3d的THF溶液滴加到吲唑溶液中，磁力搅拌下室温反应8小时，TLC监测反应，待原料反应完全后，先抽滤出固体不溶物，浓缩滤液，经硅胶柱层析(二氯甲烷：甲醇＝200：1)得到目标化合物320mg，收率43％。1H NMR(800MHz,DMSO-d6):δ10.04(s,NH),8.16(s,NH),8.03(s,ArH),7.80(s,ArH),7.65(d,J＝8.4Hz,ArH),7.56(dd,J＝22.0,8.7Hz,ArH),7.49(d,J＝9.0Hz,CH)；13C NMR(201MHz,DMSO-d6):δ168.72,138.00,137.39,133.87,132.52,129.77,129.51,129.36,126.24,125.45,124.09,123.76,123.16,120.73,110.68,110.21,43.09；ESI-MS(m/z):calcd.for C15H10BrCl2N3O[M+H]+398.93,found 399.21.
(34)目标化合物:2-溴-N-(1H-吲唑-5-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)乙酰胺(代号WRZ-10)的合成
将300mg(2.28mmol)5-氨基吲唑溶解在30mL的四氢呋喃中，并加入550mg(5.48mmol)的三乙胺，获得吲唑溶液。将807mg(2.74mmol)中间体3e溶解10mL的四氢呋喃中，将中间体3e的THF溶液滴加到吲唑溶液中，磁力搅拌下室温反应8小时，TLC监测反应，待反应完全后，先抽滤出固体不溶物，保留滤液，浓缩后，经硅胶柱层析(二氯甲烷：甲醇＝200：1)，得到目标化合物290mg，收率40％。1H NMR(800MHz,DMSO-d6):δ10.08(s,NH),8.17(s,NH),8.06(s,ArH),8.03(s,ArH),7.93(s,ArH),7.86(d,J＝7.9Hz,1H),7.68(d,J＝7.4Hz,1H),7.62(t,J＝7.8Hz,1H),7.58(d,J＝7.0Hz,1H),7.49(d,J＝8.9Hz,1H),5.30(s,CH)；13C NMR(201MHz,DMSO-d6):δ169.38,137.79,137.32,136.56,133.84,132.71,130.17,128.67,127.59,126.60,123.17,120.73,110.61,110.07,43.76,21.47；ESI-MS(m/z):calcd.for C16H11BrF3N3O[M+H]+399.01,found 399.73.
(35)目标化合物2-溴-2-(3-氯苯基)-N-(1H-吲唑-5-基)乙酰胺(代号WRZ-11)的合成
将370mg(2.8mmol)5-氨基吲唑溶解在30mL的四氢呋喃中，并加入793mg(7.84mmol)的三乙胺，获得吲唑溶液。将897mg(3.36mmol)中间体3f溶解在10mL的四氢呋喃中，将中间体3f的THF溶液滴加到吲唑溶液中，搅拌下室温反应8小时，TLC监测反应，待反应完全后，先抽滤出固体不溶物，浓缩滤液，硅胶柱层析(二氯甲烷：甲醇＝200：1)，得到目标化合物310mg，收率31％。1H NMR(800MHz,DMSO-d6):δ10.01(s,NH),8.16(d,J＝5.3Hz,NH),8.02(s,ArH),7.61(s,ArH),7.57(d,J＝11.0Hz,1H),7.52(t,J＝9.1Hz,2H),7.48(d,J＝8.9Hz,1H),7.46(d,J＝4.3Hz,1H),7.42–7.39(m,1H),7.36(d,J＝7.5Hz,CH)；13C NMR(201MHz,DMSO-d6):δ168.78,163.14,161.93,139.35,137.37,133.86,132.56,130.57,125.76,123.16,120.75,116.43,113.84,111.75,110.59,44.36；ESI-MS(m/z):calcd.forC15H11BrClN3O[M+H]+364.97,found 365.21.
(36)目标化合物:2-溴-2-(3,4-二氟苯基)-N-(1H-吲唑-5-基)乙酰胺(代号WRZ-12)的合成
将260mg(2.5mmol)5-氨基吲唑溶解在30mL的四氢呋喃中，并加入753mg(7.46mmol)的三乙胺，获得吲唑溶液。将1g(3.73mmol)中间体3g溶于10mL的四氢呋喃中，将中间体3g的THF滴加到吲唑溶液中，搅拌下室温反应8小时，TLC监测反应，待反应完全后，先抽滤出固体不溶物，浓缩滤液，硅胶柱层析(二氯甲烷：甲醇＝200：1)，得到目标化合物240mg，收率27％。1H NMR(800MHz,DMSO-d6):δ10.02(s,NH),8.16(s,NH),8.03(s,ArH),7.60–7.56(m,ArH),7.53(d,J＝8.9Hz,1H),7.49(d,J＝9.0Hz,1H),7.44(dt,J＝17.8,9.1Hz,2H),7.40(d,J＝5.0Hz,CH)；13C NMR(201MHz,DMSO-d6):δ168.78,163.14,161.93,139.35,137.37,133.86,132.56,130.57,125.76,123.16,120.75,116.43,112.78,110.68,109.19,42.36；ESI-MS(m/z):calcd.for C15H10BrF2N3O[M+H]+366.99,found 367.49.
式II化合物可通过如下反应路线制备得到：
其中，所用的试剂分别为：(a)AIBN,NBS,CCl4,78℃,8h,reflux；(b)SOCl2,80℃,2h,reflux；(c)THF/DCM,Et3N,0℃→rt；4～6h；
具体地，本发明在实施例中给出了部分示意化合物的制备过程以及效果验证数据。
(37)目标化合物:2-(3-甲氧基苯基)-N-(喹啉-6-基)乙酰胺(代号WRZ-13)的合成
将200mg(1.38mmol)6-氨基喹啉溶解在20mL的二氯甲烷中，并加入335mg(3.31mmol)的三乙胺，获得喹啉溶液。将304mg(1.65mmol)的中间体4a溶解在10mL的二氯甲烷中，将中间体4a的二氯甲烷溶液滴加到喹啉溶液中，过夜反应，TLC监测，反应完全后，经硅胶柱层析，重结晶得到产物241mg，收率60％。1H NMR(800MHz,DMSO-d6):δ11.26(s,1H),9.13(d,J＝5.2Hz,1H),9.04(d,J＝8.5Hz,1H),8.77(s,1H),8.37(d,J＝9.2Hz,1H),8.23(d,J＝9.2Hz,1H),7.98(dd,J＝8.5,5.0Hz,1H),7.25(t,J＝7.9Hz,1H),7.03–6.96(m,2H),6.83(d,J＝11.0Hz,1H),3.78(s,2H),3.75(s,3H)；13C NMR(201MHz,DMSO-d6):δ170.62,159.69,144.99,143.83,140.07,137.49,135.74,129.91,129.81,128.04,122.80,122.73,121.89,115.51,115.28,112.52,55.48,43.76；ESI-MS(m/z):calcd.for C18H16N2O2[M+H]+293.12,found 293.25.
(38)目标化合物2-(3-氟苯基)-N-(喹啉-6-基)乙酰胺(代号WRZ-14)的合成
将400mg(2.91mmol)6-氨基喹啉溶解在20mL的二氯甲烷中，并加入587mg(5.8mmol)的三乙胺，获得喹啉溶液。将560mg(3.5mmol)的中间体4b溶解在10mL的二氯甲烷中，将中间体4b的二氯甲烷溶液滴加到喹啉溶液中，过夜反应，反应液中析出大量固体，溶解后TLC跑板(二氯甲烷：甲醇＝20：1)发现存在两个点，经液质确认上方为产物点，跟原料点很近，但原料溶于二氯甲烷，经硅胶柱层析得到310mg的白色固体，收率40％。1H NMR(800MHz,DMSO-d6):δ11.35(s,NH),9.12(d,J＝5.2Hz,ArH),9.02(d,J＝8.4Hz,ArH),8.76(s,ArH),8.37(d,J＝9.1Hz,1H),8.23(d,J＝6.6Hz,1H),7.97(dd,J＝8.5,4.9Hz,1H),7.39(q,J＝7.6Hz,1H),7.26(dd,J＝18.2,9.0Hz,2H),7.13–7.08(m,1H),3.87(s,CH2)；13C NMR(201MHz,DMSO-d6):δ170.21,163.11,161.90,144.72,144.05,139.91,138.76,136.06,130.65,129.86,127.89,125.93,122.74,116.62,115.35,113.91,43.18；ESI-MS(m/z):calcd.for C17H13FN2O[M+H]+281.10,found 281.54.
(39)目标化合物N-(喹啉-6-基)-2-(间甲苯基)乙酰胺(代号WRZ-15)的合成
将150mg(1.04mmol)6-氨基喹啉溶解在20mL的二氯甲烷中，并加入253mg(2.5mmol)的三乙胺，获得喹啉溶液。将344mg(1.25mmol)的中间体4c溶解在10mL的二氯甲烷中，将中间体4c的二氯甲烷溶液滴加到喹啉溶液中，磁力搅拌下反应过夜，TLC监测反应，待原料反应完全后，经硅胶柱层析，重结晶得到产物175mg，收率61％。1H NMR(800MHz,DMSOd6):δ10.50(s,1H),8.78(d,J＝4.2Hz,1H),8.39(d,J＝2.6Hz,1H),8.26(d,J＝10.1Hz,1H),7.98(d,J＝9.1Hz,1H),7.82(dd,J＝9.1,2.5Hz,1H),7.47(dd,J＝8.3,4.1Hz,1H),7.23(t,J＝7.6Hz,1H),7.20–7.16(m,2H),7.07(d,J＝7.5Hz,1H),3.68(s,2H),2.30(s,3H)；13C NMR(201MHz,DMSO-d6):δ170.10,149.46,145.13,137.85,137.56,136.17,135.95,130.23,129.97,128.78,128.72,127.71,126.67,123.74,122.24,115.39,43.80,21.47；ESI-MS(m/z):calcd.for C18H16N2O[M+H]+277.13,found 277.50.
(40)目标化合物2-(3,4-二氯苯基)-N-(喹啉-6-基)乙酰胺(代号WRZ-16)的合成
将200mg(1.38mmol)6-氨基喹啉溶解在20mL的二氯甲烷中，并加入335mg(3.31mmol)的三乙胺，获得喹啉溶液。将304mg(1.65mmol)的中间体4d溶解在10mL的二氯甲烷中，将中间体4d的二氯甲烷溶液滴加到喹啉溶液中，过夜反应，TLC监测反应，待原料反应完全后，经硅胶柱层析，重结晶得到产物241mg，收率60％，白色固体，收率65％。1H NMR(800MHz,DMSO-d6):δ10.55(s,NH),8.79(d,J＝4.1Hz,ArH),8.38(d,J＝2.6Hz,ArH),8.28(s,ArH),7.98(d,J＝9.0Hz,ArH),7.81(dd,J＝9.0,2.5Hz,1H),7.66(s,1H),7.61(d,J＝8.2Hz,1H),7.48(dd,J＝8.3,4.1Hz,1H),7.37(d,J＝8.2Hz,1H),3.79(s,CH2)；13C NMR(201MHz,DMSO-d6):δ169.22,149.55,145.18,137.33,135.97,131.86,131.21,130.85,130.25,130.03,129.82,128.77,123.71,122.27,115.54,49.07,42.39；ESI-MS(m/z):calcd.for C17H12Cl2N2O[M+H]+332.02,found 332.77.
(41)目标化合物N-(喹啉-6-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)乙酰胺(代号WRZ-17)的合成
将270mg(1.87mmol)6-氨基喹啉溶解在20mL的二氯甲烷中，并加入455mg(4.5mmol)的三乙胺，获得喹啉溶液。将497mg(2.24mmol)的中间体4e溶解在10mL的二氯甲烷中，将中间体4e的二氯甲烷溶液滴加到喹啉溶液中，过夜反应，TLC监测反应，原料反应完全后，经硅胶柱层析，重结晶得到产物350mg，收率58％。1H NMR(800MHz,DMSO-d6):δ10.59(s,NH),8.79(d,J＝2.5Hz,ArH),8.39(d,J＝2.6Hz,ArH),8.27(d,J＝6.6Hz,ArH),7.99(d,J＝9.1Hz,1H),7.82(dd,J＝9.1,2.5Hz,1H),7.76(s,1H),7.69(d,J＝7.6Hz,1H),7.65(d,J＝8.0Hz,1H),7.60(t,J＝7.7Hz,1H),7.48(dd,J＝8.3,4.1Hz,1H),3.89(s,CH2)；13CNMR(201MHz,DMSO-d6):δ169.47,149.54,145.17,137.61,137.39,135.97,133.99,130.04,129.80,128.78,126.39,125.42,123.88,123.71,122.26,115.51,43.08；ESI-MS(m/z):calcd.for C18H13F3N2O[M+H]+331.10,found 331.25.
(42)目标化合物2-(3-氯苯基)-N-(喹啉-6-基)乙酰胺(代号WRZ-18)的合成
将300mg(2.08mmol)6-氨基喹啉溶解在30mL的DCM中，并加入505mg(5mmol)的三乙胺，获得喹啉溶液。将470mg(2.5mmol)的中间体4f溶解在10mL的二氯甲烷中，将中间体4f的二氯甲烷溶液滴加到喹啉溶液中，搅拌下反应过夜，TLC监测反应，待原料反应完全，经硅胶柱层析，重结晶得到产物430mg，收率63％。1H NMR(800MHz,DMSO-d6):δ10.55(s,NH),8.79(d,J＝4.3Hz,ArH),8.39(d,J＝2.7Hz,ArH),8.28(d,J＝8.4Hz,ArH),7.98(d,J＝9.0Hz,1H),7.82(dd,J＝9.0,2.5Hz,1H),7.49–7.46(m,2H),7.38(d,J＝7.8Hz,1H),7.34(d,J＝9.4Hz,2H),3.77(s,CH2)；13C NMR(201MHz,DMSO-d6):δ169.48,149.51,145.14,138.67,137.42,136.00,133.31,130.61,130.00,129.61,128.78,128.47,127.09,123.74,122.26,115.50,43.14；ESI-MS(m/z):calcd.for C17H13ClN2O[M+H]+298.06,found 298.12.
(43)目标化合物2-(3,4-二氟苯基)-N-(喹啉-6-基)乙酰胺(代号WRZ-19)的合成
将180mg(1.25mmol)6-氨基喹啉溶解在20mL的DCM中，并加入304mg(3mmol)的三乙胺，获得喹啉溶液。将285mg(1.5mmol)的中间体4g溶解在10mL的二氯甲烷中，将中间体4g的二氯甲烷溶液滴加到喹啉溶液中，过夜反应，TLC监测反应，原料反应完全后，经硅胶柱层析，重结晶得到产物208mg，收率56％。1H NMR(800MHz,DMSO-d6):δ10.53(s,NH),8.79(d,J＝2.5Hz,ArH),8.38(d,J＝2.6Hz,ArH),8.27(d,J＝8.2Hz,ArH),7.98(d,J＝9.1Hz,1H),7.81(dd,J＝9.1,2.5Hz,1H),7.49–7.38(m,3H),7.21(s,1H),3.76(s,CH2)；13C NMR(201MHz,DMSO-d6):δ169.44,150.14,149.54,148.25,145.17,137.40,135.96,133.88,130.02,128.77,126.62,123.72,12；ESI-MS(m/z):calcd.for C17H12FN2O[M+H]+298.09,found 298.56.
(44)目标化合物2-(3,4-二甲氧基苯基)-N-(喹啉-6-基)乙酰胺(代号WRZ-20)的合成
将184mg(1.28mmol)6-氨基喹啉溶解在20mL的二氯甲烷中，并加入310mg(3.06mmol)的三乙胺，获得喹啉溶液。将328mg(1.53mmol)的中间体4h溶解在10mL的二氯甲烷中，将中间体4h的二氯甲烷溶液滴加到喹啉溶液中，磁力搅拌下反应过夜，TLC监测反应，待原料反应完全后，经硅胶柱层析，重结晶得到产物206mg，收率64％。1H NMR(800MHz,DMSO-d6):δ10.45(s,NH),8.78(d,J＝2.5Hz,ArH),8.38(d,J＝2.4Hz,ArH),8.27(d,J＝10.3Hz,ArH),7.97(d,J＝9.0Hz,1H),7.82(dd,J＝9.0,2.4Hz,1H),7.47(dd,J＝8.2,4.1Hz,1H),6.99(s,1H),6.90(q,J＝9.2Hz,2H),3.76(s,CH3),3.73(s,CH3),3.64(s,CH2)；13CNMR(201MHz,DMSO-d6):δ170.33,149.44,149.02,148.13,145.10,137.60,135.96,129.95,128.78,128.63,123.77,122.24,121.58,115.37,113.54,112.31,56.01,55.93,43.42；ESI-MS(m/z):calcd.for C19H18N2O3[M+H]+323.13,found 323.41.
(45)目标化合物2-溴-2(3-甲氧基苯基)-N-(喹啉-6-基)乙酰胺(代号WRZ-21)的合成
将560mg(4.5mmol)6-氨基喹啉溶解在30mL的二氯甲烷中，并加入1.11g(11.02mmol)的三乙胺，获得喹啉溶液。将1.4g(5.51mmol)中间体3a溶解15mL的二氯甲烷中，将中间体3a的二氯甲烷溶液滴加到喹啉溶液中，过夜反应，TLC监测，待反应完全后，二氯甲烷萃取，合并有机相无水硫酸镁除水，经硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝5：1)得到700mg目标化合物，收率42％。1H NMR(800MHz,DMSO-d6):δ10.55(s,1H),8.78(d,J＝4.2Hz,1H),8.38(s,1H),8.26(d,J＝8.4Hz,1H),7.98(d,J＝9.0Hz,1H),7.82(d,J＝9.0Hz,ArH),7.53–7.46(m,ArH),7.08(d,J＝3.4Hz,ArH),6.84(dd,J＝8.7,3.4Hz,1H),3.90(s,2H),3.77(s,3H)；13C NMR(201MHz,DMSO-d6):δ170.62,159.69,144.99,143.83,140.07,137.49,135.74,129.91,129.82,128.04,122.81,122.73,121.89,115.51,115.28,115.20,112.52,55.48,43.76,43.72；ESI-MS(m/z):calcd.for C18H15BrN2O2[M+H]+372.02,found 372.51.
(46)目标化合物2-溴-2-(3-氟苯基)-N-(喹啉-6-基)乙酰胺(代号WRZ-22)的合成
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将280mg(2.25mmol)6-氨基喹啉溶解在20mL的二氯甲烷中，并加入550mg(5.5mmol)的三乙胺，获得喹啉溶液。将1.02g(2.7mmol)中间体3b溶解10mL的二氯甲烷中，将3b的二氯甲烷溶液滴加到喹啉溶液中，不断搅拌下室温反应8小时，TLC监测反应进程，待反应完全后，先抽滤出不溶物，浓缩滤液，二氯甲烷萃取，合并有机相无水硫酸镁除水，浓缩后经硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝5：1)得到370mg目标化合物，收率38.2％。1HNMR(800MHz,DMSO-d6):δ10.67(s,NH),9.13(d,J＝5.0Hz,ArH),8.95(d,J＝8.5Hz,ArH),8.75(s,ArH),8.31(d,J＝9.2Hz,ArH),8.19(d,J＝9.2Hz,1H),7.93(dd,J＝8.5,4.9Hz,1H),7.43(d,J＝4.2Hz,2H),7.16(d,J＝11.8Hz,1H),5.31(s,CH)；13C NMR(201MHz,DMSO-d6):δ169.68,149.57,145.14,138.87,137.47,136.00,133.31,130.61,130.00,129.61,128.78,128.41,127.69,123.44,121.26,115.56,42.15；ESI-MS(m/z):calcd.for C17H12BrFN2O[M+H]+360.01,found 360.88。
(47)目标化合物2-溴-N-(喹啉-6-基)-2-(间甲苯基)乙酰胺(代号WRZ-23)的合成
将260mg(1.86mmol)6-氨基喹啉溶解在20mL的二氯甲烷中，并加入453mg(4.48mmol)的三乙胺，获得喹啉溶液。将553mg(2.24mmol)中间体3c溶解10mL的二氯甲烷中，将中间体3c的二氯甲烷液滴加到喹啉溶液中，过夜反应8小时，TLC监测(二氯甲烷：甲醇＝20：1)，待反应完全后，先抽滤出固体不溶物，浓缩滤液，适量的二氯甲烷萃取3次，合并有机相无水硫酸镁除去有机相内的水，经硅胶柱层析得到200mg目标化合物，收率30％。1HNMR(800MHz,DMSO-d6):δ10.59(s,NH),9.12(d,J＝5.0Hz,ArH),8.92(dd,J＝17.5,8.5Hz,ArH),8.76(s,ArH),8.31(d,J＝9.2Hz,ArH),8.19(d,J＝9.4Hz,1H),8.13–8.07(m,1H),7.94–7.89(m,1H),7.53–7.47(m,1H),7.40–7.35(m,1H),7.26(t,J＝7.6Hz,1H),7.12(d,J＝7.5Hz,1H),2.33(d,J＝16.1Hz,3H)；13C NMR(201MHz,DMSO-d6):δ169.48,149.51,145.14,138.67,137.42,136.00,133.31,130.61,130.00,129.61,128.78,128.47,127.09,123.74,122.26,115.50,43.14；ESI-MS(m/z):calcd.for C18H15BrN2O[M+H]+356.03found356.21.
(48)目标化合物2-溴-2-(3,4-二氯苯基)-N-(喹啉-6-基)乙酰胺(代号WRZ-24)的合成
将330mg(2.29mmol)6-氨基喹啉溶解在25mL的二氯甲烷中，并加入767mg(7.6mmol)的三乙胺，将827mg(2.75mmol)中间体3d溶解10mL的二氯甲烷中，将中间体3d的二氯甲烷液滴加到喹啉溶液中，过夜反应8小时，TLC监测(二氯甲烷：甲醇＝20：1)，反应完全后，先抽滤出不溶物，浓缩滤液，二氯甲烷萃取3次，合并有机相无水硫酸镁除水，经硅胶柱层析(二氯甲烷：甲醇＝300：1)得到330mg目标化合物，收率35％。1H NMR(800MHz,DMSO-d6):δ10.70(s,NH),9.15(d,J＝5.0Hz,ArH),8.98(d,J＝8.6Hz,ArH),8.76(s,ArH),8.31(d,J＝11.6Hz,ArH),8.21(t,J＝9.1Hz,1H),8.11–8.05(m,1H),7.95(dd,J＝8.5,4.9Hz,1H),7.83(s,1H),7.67(d,J＝8.5Hz,1H),7.56(d,J＝8.5Hz,1H)；13C NMR(201MHz,DMSO-d6):δ169.21,149.55,145.18,137.35,135.97,131.86,131.22,130.85,130.25,130.18,129.82,123.62,122.27,114.44,48.27,41.59；ESI-MS(m/z):calcd.for C17H11BrCl2N2O[M+H]+409.94found 410.20.
(49)目标化合物2-溴-N-(喹啉-6-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)乙酰胺(代号WRZ-25)的合成
将320mg(2.22mmol)6-氨基喹啉溶解在20mL的二氯甲烷中，并加入540mg(5.38mmol)的三乙胺，获得喹啉溶液。将800mg(2.66mmol)中间体3e溶解10mL的二氯甲烷中，将中间体3e的二氯甲烷液滴加到喹啉溶液中，过夜反应8小时，TLC监测(二氯甲烷：甲醇＝20：1)，待原料反应完全后，先抽滤出固体不溶物，浓缩滤液，适量的二氯甲烷萃取三次，合并有机相无水硫酸镁除去有机相的水，经硅胶柱层析得到360mg目标化合物，收率40％。1H NMR(800MHz,DMSO-d6):δ10.75(s,NH),9.15(d,J＝4.9Hz,ArH),8.97(d,J＝8.4Hz,ArH),8.77(s,ArH),8.32(d,J＝9.4Hz,ArH),8.21(t,J＝8.9Hz,1H),7.96–7.93(m,2H),7.90(d,J＝7.8Hz,1H),7.70(d,J＝7.3Hz,1H),7.65(t,J＝7.8Hz,1H),5.43(s,1H)；13C NMR(201MHz,DMSO-d6):δ169.47,149.54,145.17,137.61,137.39,135.97,133.99,130.04,129.80,128.78,126.39,125.42,123.88,123.71,122.26,115.51,43.08；ESI-MS(m/z):calcd.forC18H12BrF3N2O[M+H]+410.01found 410.25.
(50)目标化合物2-溴-2-(3-氯苯基)-N-(喹啉-6-基)乙酰胺(代号WRZ-26)的合成
将380mg(2.68mmol)6-氨基喹啉溶解在20mL的二氯甲烷中，并加入650mg(6.44mmol)的三乙胺，获得喹啉溶液。将760mg(3.22mmol)中间体3f溶解10mL的二氯甲烷中，将中间体3f的二氯甲烷液滴加到喹啉溶液中，室温反应8小时，TLC监测(二氯甲烷：甲醇＝30：1)，反应完全后，先抽滤出不溶物，浓缩滤液，二氯甲烷萃取，合并有机相无水硫酸镁除水，经硅胶柱层析(二氯甲烷：甲醇＝300：1)得到340mg目标化合物，收率35％。1H NMR(800MHz,DMSO-d6):δ10.69(s,1H),9.14(d,J＝6.3Hz,1H),8.95(d,J＝8.7Hz,1H),8.76(s,1H),8.31(d,J＝9.2Hz,1H),8.20(d,J＝9.2Hz,1H),8.10(dd,J＝15.2,8.4Hz,1H),7.95–7.89(m,1H),7.65(s,1H),7.55(d,J＝7.5Hz,1H),7.44–7.37(m,2H)；13CNMR(201MHz,DMSO-d6):δ169.48,149.51,145.14,138.67,137.42,136.00,133.31,130.61,130.00,129.61,128.78,128.47,127.09,123.74,122.26,115.50,43.14；ESI-MS(m/z):calcd.forC17H12BrClN2O[M+H]+375.98,found 376.21.
(51)目标化合物2-溴-2-(3,4-二氟苯基)-N-(喹啉-6-基)乙酰胺(代号WRZ-27)的合成
将330mg(2.2 9mmol)6-氨基喹啉溶解在25mL的二氯甲烷中，并加入767mg(7.6mmol)的三乙胺，获得喹啉溶液。将687mg(2.75mmol)中间体3g溶解10mL的二氯甲烷中，将中间体3g的二氯甲烷液滴加到喹啉溶液中，过夜反应8小时，TLC监测(二氯甲烷：甲醇＝20：1)，反应完全后，先抽滤出不溶物，浓缩滤液，二氯甲烷萃取，合并有机相无水硫酸镁除水，经硅胶柱层析(二氯甲烷：甲醇＝300：1)得到430mg目标化合物。1H NMR(800MHz,DMSO-d6):δ10.67(s,NH),9.13(d,J＝5.0Hz,ArH),8.95(d,J＝8.6Hz,ArH),8.75(s,ArH),8.30(d,J＝9.2Hz,ArH),8.19(d,J＝9.1Hz,1H),8.10(t,J＝10.8Hz,1H),7.96–7.92(m,1H),7.62(t,J＝9.7Hz,1H),7.49–7.38(m,2H)；13C NMR(201MHz,DMSO-d6):δ169.35,150.20,149.54,148.92,148.25,145.17,137.29,135.96,133.86,130.02,128.61,126.59,123.72,122.26,118.81,117.70,115.51,42.45；ESI-MS(m/z):calcd.for C17H11BrF2N2O[M+H]+378.00,found 378.36.
式III化合物可通过如下反应路线制备得到：
其中，所用的试剂分别为：(d)Triphosgene,Et3N,DCM,0℃；(e)Et3N,primaryamines,DCM,rt,8h；(f)30％H2O2,K2CO3,DMSO,0℃→rt；2h；(g)NH2OH.HCl,KOH,MeOH/DCM,rt,3～6h.
(52)中间体4-异氰酸基苯甲酸甲酯的合成(6a代号4)的合成
将453mg(3mmol)4-氨基苯甲酸甲酯溶解在20mL的二氯甲烷，并加入910mg(9mmol)的三乙胺，获得4-氨基苯甲酸甲酯溶液。将445mg(1.5mmol)的三光气溶于10mL二氯甲烷中，在0℃(冰浴下)将三光气溶液缓慢滴加4-氨基苯甲酸甲酯溶液中。冰浴反应1h。TLC监测反应完全，真空浓缩反应液，EA洗涤，析出大量盐，过滤除盐，保留滤液后真空浓缩，得到橙色油状物，直接投下一步。
(53)中间体:对氰基苯异氰酸酯(代号6b)的合成
中间体6b的合成方法与中间体6a合成方法相同，将435mg(3.68mmol)4-氨基苯甲腈溶解在20mL的二氯甲烷中，并加入1.1g(11.04mmol)的三乙胺，获得4-氨基苯甲腈溶液。将545mg(1.84mmol)的三光气溶解在15mL二氯甲烷中(超声溶解)，在0℃(冰浴下)将三光气溶液缓慢滴加4-氨基苯甲腈溶液中。冰浴反应1h。TLC监测反应完全，真空浓缩反应液，EA洗涤，抽滤除盐，滤液真空浓缩，得到橙色油状物，直接投下一步。(54)中间体:4-(3-(异喹啉-5-基)脲基)苯甲酸甲酯(代号7a)的合成
370mg(2.1mmol)中间体6a，260mg(1.8mmol)的5-氨基异喹啉，354mg(3.5mmol)的三乙胺。过夜反应，硅胶柱层析纯化时用流动相极性为二氯甲烷：甲醇＝100:1，得到白色固体400mg，收率70％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.48(s,NH),9.33(s,NH),9.01(s,ArH),8.61(d,J＝6.0Hz,1H),8.29(d,J＝7.6Hz,1H),7.96(dd,J＝14.1,7.3Hz,3H),7.86(d,J＝8.1Hz,1H),7.67(t,J＝8.6Hz,3H),3.84(s,3H)；13C NMR(201MHz,DMSO-d6):δ166.41,153.18,152.95,144.64,143.10,133.82,130.98,129.16,128.78,128.01,123.16,121.60,117.87,114.97,52.29.ESI-MS(m/z):calcd.for C18H15N3O3[M+H]+322.14,found 322.27.
(55)中间体:1-(4-氰基苯基)-3-(异喹啉-5-基)脲(代号7b)的合成
中间体7b的合成方法与中间体7a的合成方法相同，将696mg(4.84mmol)5-氨基异喹啉溶解在30mL的二氯甲烷中，在搅拌下向溶液中加入980mg(9.68mmol)的三乙胺，获得5-氨基异喹啉溶液溶液。将832mg(5.8mmol)对氰基苯异氰酸酯溶于30mL的二氯甲烷中，然后将异氰酸酯溶液缓慢加入到5-氨基异喹啉溶液中，室温反应8小时。TLC监测，待原料反应完毕后，产物不溶于二氯甲烷，抽滤得到固体产物粗品，无需进一步纯化，直接投下一步，副产物不影响下一步合成。
(56)目标化合物:N-羟基-4-(3-(异喹啉-5-基)脲基)苯甲酰胺(代号WRZ-28)的合成
430mg(1.34mmol)的中间体7a，2.37g(42.8mmol)的氢氧化钾，2.88g(30.9mmol)的盐酸羟胺，溶剂为二氯甲烷30mL甲醇15mL的混合溶剂(MeOH/DCM＝2：1)，室温搅拌6h。得到白色固体190mg，收率44％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ11.13(s,NH),9.34(d,J＝10.9Hz,NH),8.99(d,J＝18.7Hz,ArH),8.60(d,J＝5.4Hz,1H),8.29(d,J＝7.4Hz,1H),7.98(d,J＝5.0Hz,1H),7.85(d,J＝7.9Hz,1H),7.75(d,J＝8.1Hz,2H),7.67(t,J＝7.8Hz,1H),7.59(d,J＝8.1Hz,2H)；13C NMR(101MHz,DMSO-d6):δ164.55,153.23,153.05,143.18,142.72,134.00,129.18,128.62,128.41,127.99,126.49,122.88,121.23,117.84,114.90；ESI-MS(m/z):calcd.for C17H14N4O3[M+H]+323.11,found 323.57.
(57)目标化合物:4-(3-(异喹啉-5-基)脲)苯甲酰胺(代号WRZ-29)的合成
将560mg(1.94mmol)中间体7b溶解在的25mL的二甲基亚砜中，搅拌下加入1.37g(9.9mmol)碳酸钾，然后缓慢滴加7.7mL的30％双氧水。得到白色固体362mg,收率61％。1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.28(s,NH),8.50(d,J＝5.6Hz,NH),8.25(d,J＝7.6Hz,NH),8.05(d,J＝5.8Hz,NH),7.81(dd,J＝19.6,9.5Hz,ArH),7.67–7.55(m,4H),7.22(s,1H)；13C NMR(101MHz,DMSO-d6):δ168.00,153.41,153.09,143.22,142.98,134.40,129.19,129.01,128.85,127.92,127.75,122.67,121.41,117.60,115.23；ESI-MS(m/z):calcd.forC17H14N4O2[M+H]+307.11,found 307.84.
实施例2化合物对ROCK2的抑制活性检测
采用ADP-Glo发光分析法来对目标化合物进行了ROCK2的抑制活性测试。ADP-Glo是一种通过检测荧光强度来反映激酶活性的检测方式，通过检测激酶反应中直接生成的ADP含量来反应激酶活性。该检测方法可分为三步，第一步ATP在激酶作用下变成ADP，多肽同时被磷酸化；第二步ADP-Glo试剂会把体系中多余的ATP降解掉；第三步，在激酶检测试剂的作用下，ADP被还原成ATP，同时ATP在Ultra-GloTM萤光素酶的作用下会传递给荧光素，通过产生的荧光信号检测激酶活性。荧光信号越强，激酶活性越强，呈正向相关。ADP-Glo发光分析法优势显著，它在不需要抗体跟放射性标记，就可以检测生成ADP的酶的活性。
(1)激酶反应缓冲液制备：1×kinase buffer 40mM Tris,pH 7.5 20mM MgCl2；1mM DTT0.10％BSA
(2)制备用于检测激酶的化合物：
1)用100％ DMSO将化合物稀释至反应最终浓度的100倍。例如，如果期望的最高抑制剂浓度为10μM，则在此步骤中制备1000μM的复合DMSO溶液。
2)将40μL的化合物稀释转移到384孔板中。
3)在同384孔板中，在2个空孔中分别加入40μL 100％ DMSO，无化合物对照和无酶对照。将该板标记为源板。
4)每孔50nL从384孔回声板通过回声法转移到384孔检测板。
(3)激酶反应:
1)384孔检测板除低对照孔外，每孔均加2.5μL 2倍酶液(除低对照孔外，每孔均加2.5μL 1倍激酶碱缓冲液)。
2)在1倍激酶碱基缓冲液中加入fam标记肽和ATP。
3)在384孔检测板的每孔中加入2.5μL的2倍肽溶液。
4)384孔检测板28℃孵育60分钟。
5)加入5μL ADP-Glo reagent1,28℃孵育180分钟。
6)加入10μL ADP-Glo试剂2，室温30分钟。
(4)实验结果处理：1)从Envision程序中复制RLU的值。
2)将RLU值转换为百分比抑制值，抑制率＝(max-sample RLU)/(max-min)*100.
其中“min”为无酶对照的RLU，“max”为DMSO对照的RLU。
实施例1中制备的化合物对ROCK2酶的抑制率结果如下表1所示：
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根据表1的结果显示，10μM浓度下，上述化合物中，WRZ-1、WRZ-2、WRZ-3、WRZ-4、WRZ-5、WRZ-6、WRZ-7、WRZ-8、WRZ-9、WRZ-14、WRZ-15、WRZ-21、WRZ-22、WRZ-24、WRZ-28、WRZ-29对ROCK2酶的抑制率均超过了50％，表明上述化合物具有良好的酶抑制活性；进一步的，化合物WRZ-1、WRZ-2、WRZ-3、WRZ-4、WRZ-6、WRZ-7、WRZ-8、WRZ-9、WRZ-15、WRZ-21、WRZ-22的抑制率超过了90％，与阳性药物Fasudil相当。
实施例3化合物的体内血管舒张活性实验
动物：5-6周雄性C57BL/6小鼠，20-25g。动物饲养条件为室温20～25℃，湿度45％～60％，自由摄食及饮水。
试剂及仪器：苯肾上腺素(phenylephrine,PE)、氯化钠(NaCl)、氯化钾(KCl)、磷酸二氢钾(KH2PO4)、硫酸镁(MgSO4)、碳酸氢钠(NaHCO3)、D-Glucose(C6H12O6)、氯化钙(CaCl2)、二甲基亚砜(DMSO)、显微手术解剖工具、DMT血管张力测量系统、移液枪、电子天平、恒温水浴锅、光学显微镜。(PE用纯水溶解，化合物用DMSO溶解)。
离体血管的张力测定(血管环的制备)：
Krebs试液组成:NaCl 118mM，KCl 4.7mM，MgSO4 1.2mM，KH2PO4 1.2mM，NaHCO325mM，CaCl2 1.3mM，D-Glucose 10mM。
60mmol/L K+-Kerbs缓冲液组成:NaCl 22.7mM，KCl 100mM，MgSO4 1.2mM，KH2PO41.2mM，NaHCO3 25mM，EGTA 1mM，D-Glucose 10mM。
将雄性C57BL/6小鼠脱颈处死后，迅速取出胸主动脉，置于预冷充有纯氧的4℃Krebs中，去除其周围结缔组织及脂肪组织，制成长2-3mm的内皮完整血管环标本。将血管环标本通过两根细钢丝与DMT血管张力测量系统相连，水平悬挂于5mL恒温浴槽内，使用PowerLab数据采集分析系统记录血管张力的变化。恒温浴槽内持续通入纯氧，加入5mLKrebs液,并保持温度在37℃。调零至血管张力不再有较大变化，给予3mN预张力,调节预张力至稳定。让血管环标本在37℃、100％O2饱和的Kerbs液中平衡60min(期间每隔20min换1次Kerbs液)。用60mmol/L K+-Kerbs缓冲液重复刺激两次血管环标本，两次刺激收缩幅度差值<10％说明血管活性良好，可进行下一步实验操作。
舒张活性检测：
血管环充分平衡后，内皮完整C57BL/6小鼠胸主动脉血管环用PE(1×10-6mol/L)或60mmol/L K+-Kerbs缓冲液预收缩，达到稳定平台后加入累积剂量的化合物，计算血管舒张率。血管舒张率(％)＝(PE或60mmol/L K+-Kerbs缓冲液诱发的血管环最大收缩张力-给予化合物后血管环张力)/(PE或60mmol/L K+-Kerbs缓冲液诱发的血管环最大收缩张力-血管环基础张力)×100％。统计数据，以血管舒张率(％)对化合物浓度的对数(logc)作图。
实验结果与分析：图1～3给出的是部分化合物在小鼠主动脉段暴露于1×10-6mol/L的α-肾上腺素能受体激动剂苯肾上腺素(Phe)或60mM KCl以诱导收缩的血管舒张活性结果。其中，WRZ-1,WRZ-13,WRZ-6在3μM～300μM浓度范围内能够有效舒张由Phe或KCl诱导的血管收缩。WRZ-1能在给药的浓度范围内(3～100μM)舒张由Phe诱导的血管收缩，其最大舒张率为74.47％。WRZ-1能在给药的浓度范围内(3～100μM)舒张由KCl诱导的血管收缩，(n＝3)，其最大舒张率为73.26％。WRZ-13能在给药的浓度范围内(3～300μM)舒张由Phe诱导的血管收缩，(n＝3)其最大舒张率为77.55％。WRZ-13能在给药的浓度范围内(3～300μM)舒张由KCl诱导的血管收缩。(n＝3)，其最大舒张率为95.29％。WRZ-6能在给药的浓度范围内(3～300μM)舒张由Phe诱导的血管收缩，(n＝3)其最大舒张率为82.99％。WRZ-6能在给药的浓度范围内(3～300μM)舒张由KCl诱导的血管收缩。(n＝3)，其最大舒张率为82.72％。
实施例4化合物WRZ-6的体内小鼠高血压模型活性检测结果
实验过程：6～8周C57BL/6只小鼠，在光/暗循环12小时，室温20～25℃，湿度40～60％的条件下，经过5天的适应性饲养，选取其中20只体重在20～25克左右的健康雄性小鼠进行实验。采用随机数字表法取5只为正常组，不进行造模，其余15只小鼠按15mg/kg，2次/d，连续21天进行腹腔注射N'-硝基-L-精氨酸(N'-nitro-L-arginine，L-NNA)溶液(1mg/mL)建立高血压小鼠模型，每周测定1次小鼠造模期间的尾动脉血压。以收缩压≥160mmHg(1mmHg＝0.133kPa)被视为造模成功的标准。在造模成功后，15只成模鼠被随机分为模型组(5只)、WRZ-6组(5只)和卡托普利组(5只)。卡托普利组给予卡托普利溶液(7.615mg/kg，成人临床等效剂量)灌胃，WRZ-6组给予WRZ-6混悬液(7.615mg/kg)灌胃，对于正常组和模型组，分别采用等量的生理盐水进行灌胃。给药体积为10mL/kg，给药持续4周。每周测定1次小鼠造模期间的尾动脉血压。具体给药剂量见下表：
高血压模型给药剂量表
小鼠尾动脉血压测定：分别于给药前及给药后的每周测量每组小鼠的收缩压(systolic blood pressure，SBP)和舒张压(diastolic blood pressure，DBP)。在基础血压测量之前，对每只小鼠进行至少连续5天的习惯化训练。血压测量时应在指定的安静区域中进行。打开无创血压检测仪的加热装置，温度设置为37℃。将测量小鼠放在固定器内固定，预热5min，使小鼠尾部动脉扩张，将脉冲套套在小鼠尾部靠近心脏的1/3位置，启动检测仪系统，感应器将自动施加压力进行血压测量。对每只小鼠进行三次重复测量，然后取平均值。
实验结果及分析：腹腔注射N'-硝基-L-精氨酸(L-NNA)建立高血压小鼠模型。在造模21天以后，收缩压(SBP)≥160mm Hg(1mm Hg＝0.133kPa)，证明造模成功。使用WRZ-6和阳性药Captopril灌胃治疗。给药后，WRZ-6组和阳性药Captopril(卡托普利)组的收缩压(SBP)和舒张压(DBP)持续下降，证明WRZ-6具有良好的治疗高血压的作用(n＝5)(图4)。
实施例5化合物与ROCK2的对接研究
实验原理：Discovery Studio是美国Tripos公司开发的计算机分子模拟软件，其中·DS LibDock分子对接模块是快速的分子对接工具，适用于对大规模数据库进行快速精确的虚拟筛选。LibDock根据小分子构象与受体相互作用热区(Hotspot)匹配的原理将这些构象刚性对接到受体的结合口袋当中，其最大的优势在于速度快，可以并行运算，适合于进行大规模虚拟筛选可为发现新型ROCK2靶点先导化合物及其结构改造和修饰提供理论支撑和技术指导。
实验步骤：
1.定义蛋白受体
(1)在DS中打开蛋白：File→open，加氢：Chemistry→hydrogens→add；
(2)定义蛋白受体：Tools→Receptor-Ligand Interactions→Define and EditBinding Site→Define Receptor 2H9V。Ctrl+h调出树状显示区，其中出现SBD_receptor。
(3)定义结合位点：Define site→from receptor cavities；调节结合位点大小：change site size→expand or contract。
2.定义配体
(1)在DS中打开配体：File→open，加氢：Chemistry→hydrogens→add；
(2)准备配体：Tools→Small Molecules→Prepare or Filter Ligands(PrepareLigands)；
(3)Search small molecule conformations，产生9个conformations WRZ-7(1)；
(4)Minimization→Full Minimization，其中Input ligands选择WRZ-7-(1):All；
→Run，结束显示poses optimized。
3.分子对接
Tools→Receptor-Ligand Interactions→Dock Ligands→Dock Ligands(LibDock)，其中Input Receptor选择2H9V:2H9V，Input Ligands选择WRZ-7-(1):All,Input site sphere为之前定义的球区域；点击Run运行分子对接。
结果分析：如图5所示，对接结果表明所设计的化合物WRZ-7同样可以非常契合的对接在活性口袋内，且在于铰链区的关键氨基酸MET-172和GLU-170均形成氢键作用的同时，其溴原子与氨基酸残基LYS-121形成了卤键作用，这可能是卤素取代的这类衍生物具有良好药物活性的关键。其在对接口袋顶端的D区与氨基酸残基PHE-103形成了相互作用。大大增加了化合物跟靶标的亲和力。这些结果表明了本发明所设计的化合物的科学合理性。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种化合物，其特征是，选自如下：
N-(1H-吲唑-5-基)-2-(3-甲氧基苯基)乙酰胺；
2-(3-氟苯基)-N-(1H-吲唑-5-基)乙酰胺；
N-(1H-吲唑-5-基)-2-(间甲苯基)乙酰胺；
N-(1H-吲唑-5-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)乙酰胺；
2-(3,4-二甲氧基苯基)-N-(1H-吲唑-5-基)乙酰胺；
2-溴-N-(1H-吲唑-5-基)-2-(3-甲氧基苯基)乙酰胺；
2-溴-2-(3-氟苯基)-N-(1H-吲唑-5-基)乙酰胺；
2-溴-N-(1H-吲唑-5-基)-2-(间甲苯基)乙酰胺；
2-溴-2-(3,4-二氯苯基)-N-(1H-吲唑-5-基)乙酰胺；
2-(3-氟苯基)-N-(喹啉-6-基)乙酰胺；
N-(喹啉-6-基)-2-(间甲苯基)乙酰胺；
2-溴-2(3-甲氧基苯基)-N-(喹啉-6-基)乙酰胺；
2-溴-2-(3-氟苯基)-N-(喹啉-6-基)乙酰胺；
2-溴-2-(3,4-二氯苯基)-N-(喹啉-6-基)乙酰胺；
N-羟基-4-(3-(异喹啉-5-基)脲基)苯甲酰胺；
4-(3-(异喹啉-5-基)脲)苯甲酰胺。
2.一种化合物，其特征是，其为2-(3-甲氧基苯基)-N-(喹啉-6-基)乙酰胺。
3.一种化合物的制备方法，其特征是，包含按照如下反应路线的步骤；
4.如权利要求3所述的化合物的制备方法，其特征是，2-甲氧基苯乙酸在NBS作用下发生自由基取代发应反应，将苄基上的一个氢原子取代为溴原子得到2-溴-2-(3-甲氧基苯基)乙酸，将2-溴-2-(3-甲氧基苯基)乙酸与草酰氯或者氯化亚砜进行酰氯化反应获得2-溴-2-(3-甲氧基苯基)乙酰氯，将2-溴-2-(3-甲氧基苯基)乙酰氯与5-氨基吲唑进行酰胺化反应，即得。
5.一种药物组合物，其特征是，包括权利要求1或2所述的化合物、所述化合物的药学上可接受的盐、所述化合物的溶剂化物、所述化合物的水合物或所述化合物的立体异构体。
6.一种药物制剂，其特征是，包括活性成分和药用载体，所述活性成分为权利要求1或2所述的化合物或权利要求5所述的药物组合物。
7.一种权利要求1或2所述的化合物、权利要求5所述的药物组合物或权利要求6所述的药物制剂在制备ROCK抑制剂的应用。
8.如权利要求7所述的应用，其特征是，所述ROCK抑制剂用于制备ROCK抑制模型的模型药剂；
或者，用于预防、改善或治疗与ROCK高表达相关的疾病；
或者，用于制备疾病模型；优选地，所述疾病模型为细胞模型、组织模型或动物模型。
9.如权利要求7所述的应用，其特征是，所述ROCK抑制剂为ROCK2抑制剂。
10.一种权利要求1或2所述的化合物、权利要求5所述的药物组合物或权利要求6所述的药物制剂在制备血管舒张药物或降血压药物中的应用。
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