CN116710779A - SARS-CoV-2抗原侧流分析检测装置及其使用方法 - Google Patents

SARS-CoV-2抗原侧流分析检测装置及其使用方法 Download PDF

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Abstract

提供了用于检测样品中是否存在SARS‑CoV‑2核衣壳蛋白的侧流分析(LFA)装置。LFA装置的方面包括：样品接收区；样品接收区下游的缀合区，缀合区包括测试颗粒标记物，测试颗粒标记物由与特异性结合SARS‑CoV‑2核衣壳蛋白的第一和第二特异性结合成员缀合的标记物颗粒制成；以及缀合区下游的检测区，检测区包括固定化捕获特异性结合成员，固定化捕获特异性结合成员特异性结合SARS‑CoV‑2核衣壳蛋白。还提供了使用LFA装置的方法，以及在其中使用的读取器、系统和试剂盒。

Description

SARS-CoV-2抗原侧流分析检测装置及其使用方法
交叉引用
本申请要求2020年10月19日提交的美国临时专利申请序列号63/093,569的提交日期的优先权；该申请的公开内容通过引用全部并入本文。
背景技术
冠状病毒是有包膜的正义单链RNA病毒。在已知的RNA病毒中，它们拥有最大的基因组(26-32kb)，在种系发生学上分为四个属(α、β、γ、δ)，其中β冠状病毒进一步细分为四个谱系(A、B、C、D)。冠状病毒感染多种鸟类和哺乳动物物种，包括人类。在六种已知的人冠状病毒中，其中有四种(HCoV-OC43、HCoV-229E、HCoV-HKU1和HCoV-NL63)每年都在人类中传播，通常会引起轻微的呼吸道疾病，然而在婴儿、老年人和免疫力低下者中的严重程度可能更高。相比之下，分别属于β冠状病毒谱系C和B的中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)和严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARS-CoV)是高度致病性的。
2019年，新型冠状病毒(2019-nCoV/SARS-CoV-2)引发了呼吸道疾病大暴发。在分类学上，SARS-CoV-2是β冠状病毒，其被认为是A或C谱系的(Jaimes et al.,"PhylogeneticAnalysis and Structural Modeling of SARS-CoV-2Spike Protein Reveals anEvolutionary Distinct and Proteolytically Sensitive Activation Loop,"J.Mol.Biol.(May 1,2020)432(10):3309–3325)。由SARS-CoV-2引起的疾病COVID-19可以表现出许多临床症状，包括肺炎、发热、干咳、头痛和呼吸困难。在一些情况下，该疾病可以进展为呼吸衰竭和死亡。Id.
用于确定患者是否患有COVID-19的诊断测试是一种实时逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)测试，用于定性检测呼吸道样品中来自SARS-CoV-2的核酸。该测试用于鉴定患者样品中的SARS-CoV-2RNA，阳性测试结果表明患者患有活跃的冠状病毒感染。在典型的方案中，患者或健康护理提供者使用拭子从患者的鼻子或咽喉收集呼吸道样品。将拭子置于密封的无菌容器中并在72小时内运送至实验室。在实验室，从拭子中提取病毒RNA并进行RT-PCR，其中将病毒RNA逆转录成DNA，然后使用对病毒基因组的区域有特异性的引物进行扩增。然后可以用与该DNA结合时提供荧光信号的探针指示该DNA的存在。RT-PCR测试可以施用于个体样品包括自收集的鼻拭子标本或合并的样品。
发明内容
目前用于SARS-CoV-2测试的策略包括逆转录聚合酶链式反应(RT－PCR)，其耗时且不提供即时结果。感兴趣的是快速、可靠的SARS-CoV-2测试装置和方法，其在医疗护理点中提供精确、快速的结果。
提供了用于检测样品中是否存在SARS-CoV-2核衣壳蛋白的侧流分析(LFA)装置。LFA装置的方面包括：样品接收区；缀合区，位于所述样品接收区下游，其包含测试颗粒标记物，所述测试颗粒标记物由与特异性结合所述SARS-CoV-2核衣壳蛋白的第一特异性结合成员和第二特异性结合成员缀合的标记物颗粒制成；和检测区，位于所述缀合区下游，其包含固定化捕获特异性结合成员，所述固定化捕获特异性结合成员特异性结合所述SARS-CoV-2核衣壳蛋白。还提供了使用LFA装置的方法，以及在其中使用的读取器、系统和试剂盒。
附图说明
图1至图3提供了根据本发明实施方案的LFA装置的各种视图。
图4提供了在用VeritorTM读取器读取的图1至图3所示的LFA装置的视图。
详细说明
提供了用于检测样品中是否存在SARS-CoV-2核衣壳蛋白的侧流分析(LFA)装置。LFA装置的方面包括：样品接收区；缀合区，位于所述样品接收区下游，其包含测试颗粒标记物，所述测试颗粒标记物由与特异性结合所述SARS-CoV-2核衣壳蛋白的第一特异性结合成员和第二特异性结合成员缀合的标记物颗粒制成；和检测区，位于所述缀合区下游，其包含固定化捕获特异性结合成员，所述固定化捕获特异性结合成员特异性结合所述SARS-CoV-2核衣壳蛋白。还提供了使用LFA装置的方法，以及在其中使用的读取器、系统和试剂盒。
在更详细地描述本发明之前，应当理解，本发明不限于所描述的特定实施方案，当然，这些实施方案可以变化。还应理解，本文使用的术语仅用于描述特定实施方案的目的，而不旨在限制，因为本发明的范围将仅由所附权利要求限定。
在提供值的范围的情况下，应当理解，除非上下文明确另有规定，否则在该范围的上限与下限之间的每个中间值，到下限单位的十分之一，以及在所述范围内的任何其他陈述值或中间值均涵盖在本发明内。这些较小范围的上限和下限可以独立地包括在该较小范围中，并且也被包含在本发明中，但遵循所述范围内的任何被明确排除的限值。在所述范围包括该限值中的一个或两个的情况下，排除那些所包括的限值中的任一个或两个的范围也被包括在本发明中。
本文给出的某些范围的数值前面有术语“约”。术语“约”在本文中用于为其后面的确切数量以及接近或近似该术语后面的数量提供文字支持。在确定数量是否接近或近似具体列举的数量时，未列举的接近或近似的数量可以是在呈现其的上下文中提供了具体列举的数量的实质等同物的数量。
除非另有定义，本文所用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同的含义。尽管与本文所述的方法和材料类似或等同的任何方法和材料也可以用于本发明的实践或测试，但现在描述了代表性的说明性方法和材料。
本说明书中引用的所有发布物和专利通过引用并入本文，如同每个单独的发布物或专利被具体和单独地指明通过引用并入，并且通过引用并入本文以公开和描述与所引用的发布物有关的方法和/或材料。引用任何发布物是因为其在申请日之前公开，不应解释为承认本发明无权凭借在先发明而早于此类发布物。此外，所提供的发布日期可能不同于实际发布日期，其可能需要单独证实。
应当注意，如本文和所附权利要求中所使用的，单数形式“一”、“一个”和“该”包括复数引用对象，除非上下文另外明确指出。还应当注意，权利要求书可以被起草为排除任何可选要素。因此，本声明旨在作为在陈述权利要求要素时使用“单独”、“仅”等排他性术语或使用“否定”限制的先行依据。
本领域技术人员在阅读本公开内容后将明白，本文描述和示出的各个实施方案中的每一个都具有离散的组成部分和特征，在不脱离本发明的范围或精神的情况下，这些组成部分和特征可以容易地与其他若干实施方案中的任一个的特征分离或组合。任何陈述的方法可以以陈述的事件的顺序或以逻辑上可能的任何其他顺序来执行。
尽管出于语法流畅性和功能解释的目的已经或将要描述装置和方法，但应当清楚地理解，除非明确地根据《美国法典》第35篇第112节制定，权利要求不应被解释为必然以任何方式受到“手段”或“步骤”限定结构的限制，而是应被赋予等同司法原则下权利要求所提供的限定的全部含义和等同物，如果权利要求是根据《美国法典》第35篇第112节明确制定的，则应根据《美国法典》第35节第112节被给予完全的法定等同权利。
侧流分析装置
如上所述，提供了配置用于检测样品中是否存在SARS-CoV-2核衣壳蛋白的侧流分析装置。如本文所用，术语“侧流”是指沿载体平面的液体流动。由于该分析装置是“侧流”分析装置，它们被配置成在样品接收区接收感兴趣的样品，并使样品通过毛细作用侧向移动通过缀合区到达检测区，使得样品通过毛细作用被侧向芯吸沿该装置从样品接收区通过缀合区到达检测区。样品接收区、缀合区和检测区可以是毛细流动构件(capillary flowmember)的一部分，该毛细流动构件由支持从样品区通过缀合区到达检测区的毛细流动的材料制成。毛细流动构件可以由任何便利的材料制成。合适材料的示例包括高吸收性或吸湿性材料，其中感兴趣的吸湿性材料包括但不限于：有机或无机聚合物，以及天然和合成聚合物。合适的高吸收性或吸湿性材料的更具体实例包括但不限于玻璃、玻璃纤维、纤维素、尼龙、交联葡聚糖、未处理的纸、多孔纸、各种色谱纸、硝化纤维素、硝化纤维素与聚酯或纤维素的共混物、人造丝、丙烯腈共聚物和塑料。虽然毛细流动构件和侧流分析装置的总体配置可以变化，但在某些实施方案中，毛细流动构件具有条带构造。当高吸收性或高吸水性材料被构造成条带时，毛细流动构件的长度比其宽度长。虽然可以采用任何实用的构造，但是在一些情况下，长度比宽度长1.5倍或更多，例如2倍或更多，例如10倍或更多，包括20倍或更多。在一些情况下，吸水构件的长度范围为0.5至20cm，例如1.0至15cm，例如2.0至10cm，而宽度范围为0.1至5.0cm，例如0.5至2.5cm，例如1至2cm。毛细流动构件的厚度也可以变化，在一些情况下范围为0.01至.05cm，例如0.1至0.4cm，例如0.1-0.25cm。
如上所述，毛细流动构件包括样品接收区、缀合区和检测区，其中这些区被布置成使得添加到样品接收区的液体样品流动或芯吸通过缀合区到达检测区，并且在一些情况下，例如，如下文进一步描述的，到达更远的下游区，例如，对照区、芯吸区/吸收垫等。样品接收区可以简单地是毛细流动构件的第一区，例如，较靠近一端定位的区，其可以被视为毛细流动构件的近端。可替代地，样品接收区可以区别于毛细流动构件而配置成在样品施加到样品接收区时提供样品进入毛细流动构件的流体连通。样品接收区可以被配置为用于接收不同体积的样品，其中在一些情况下，样品接收区被配置成用于接收体积的范围为从0.1至1000μl、例如5至20μl并且包括50至200μl的样品。
除了样品接收区之外，本发明的侧流分析装置进一步包括缀合区。缀合区是包括测试颗粒标记物的区，所述测试颗粒标记物由与特异性结合SARS-CoV-2核衣壳蛋白的第一特异性结合成员和第二特异性结合成员缀合的标记物颗粒制成。测试颗粒标记物与缀合区中的吸收性材料非稳定地缔合。“非稳定缔合”是指，尽管测试颗粒标记物可以在样品施加之前相对于吸收材料是固定的，然而在施加样品和样品芯吸通过缀合区时，测试颗粒标记物自由地与样品中存在的分析物例如SARS-CoV-2核衣壳蛋白反应，并通过毛细作用与样品一起移动通过毛细流动构件的吸收性材料。这样，测试颗粒标记物在主体流体液动力(bulkfluid flow forces)之下侧向地移动通过吸收性材料。
存在于缀合区中的测试颗粒标记物包括与彼此不同(即具有不同序列)并特异性结合SARS-CoV-2核衣壳蛋白的第一特异性结合成员和第二特异性结合成员稳定缔合的标记物颗粒。由于第一特异性结合成员和第二特异性结合成员与测试颗粒标记物中的标记物颗粒稳定缔合，它们在本发明的LFA装置的分析条件下不与标记物颗粒解离。根据需要，可以通过共价或非共价结合实现特异性结合成员与标记物颗粒的稳定缔合。
测试颗粒标记物的标记物颗粒可以根据需要而变化。标记物颗粒是可光学检测的颗粒，其可以由多种材料制成，诸如金属，例如金，或有色玻璃或塑料(例如聚苯乙烯、聚丙烯、乳胶珠)。标记物颗粒的直径可以变化，其中标记物颗粒的直径在一些情况下可以范围为1至5000nm，例如1至2500nm。在一些情况下，标记物颗粒是反射性纳米颗粒，例如金属反射性纳米颗粒，如金反射性纳米颗粒。本文所用的术语“纳米颗粒”是指具有1至1000纳米(“nm”)范围内的一个尺寸的颗粒。本发明的纳米颗粒可以是任何形状。在某些实施方案中，纳米颗粒是球形的。
如上所述，测试颗粒标记物具有与其稳定缔合的特异性结合SARS-CoV-2核衣壳(即，N)蛋白的第一结合成员和第二结合成员。术语“特异性结合”、“特异性地结合”等是指结合成员相对于可能存在于LFA中的溶液或反应混合物中的其他分子或部分(moiety)优先直接结合SARS-CoV-2核衣壳蛋白的能力。在某些实施方案中，在结合复合物中，第一结合成员和第二结合成员与当它们彼此特异性结合时它们特异性结合的SARS-CoV-2核衣壳蛋白之间的亲和力的特征在于KD(解离常数)为10-6M或更小，诸如10-7M或更小，包括10-8M或更小，例如10-9M或更小，包括10-10M或更小，诸如10-11M或更小，例如10-12M或更小，其中在一些情况下，KD为10-13M或更小，诸如10-14M或更小，例如10-15M或更小。多种不同类型的特异性结合剂可以用作第一特异性结合成员和第二特异性结合成员。在一些情况下，第一结合成员和第二结合成员是抗体结合剂。本文所用的术语“抗体结合剂”包括足以与SARS-CoV-2核衣壳(即N)蛋白特异性结合的多克隆或单克隆抗体或其片段。抗体片段可以是例如单体Fab片段、单体Fab’片段或二聚体F(ab)’2片段。同样，在术语“抗体结合剂”的范围内的是通过抗体工程产生的分子，诸如单链抗体分子(scFv)或人源化或嵌合抗体，其由单克隆抗体制得，通过重链和轻链的恒定区的置换以产生嵌合抗体，或通过恒定区和可变区的框架部分这两者的置换以产生人源化抗体。在一些情况下，第一特异性结合成员和第二特异性结合成员是特异性结合SARS-CoV-2核衣壳蛋白的单克隆抗体。在一些情况下，颗粒可以具有3种或更多种特异性结合SARS-CoV-2核衣壳蛋白的特异性结合成员，其中在这些情况下，特异性结合SARS-CoV-2核衣壳蛋白的特异性结合成员的数目可以变化，以及在一些情况下可以范围为三至十，例如三至五。在一些情况下，选择特异性结合成员以与靶分析物的不同表位结合。各种抗体的量可以根据需要变化。在一些情况下，给定的抗体的量的范围为2.5-97.5％。在一些情况下，不同抗体的量是相同的。在其他实施方案中，各种抗体的量是不同的。
SARS-CoV-2核衣壳蛋白描述于Dutta et la.(2020)Journal of Virology 94(13):e00647-20；Zeng et al.(2020)Biochem Biophys Res Commun.527(3):618-623；和Kang etal.(2020)Acta Pharmaceutica Sinica B 10(7):1228-1238，其公开内容通过引用整体并入本文。在一些情况下，第一结合成员和第二结合成员可以与SARS-CoV核衣壳蛋白交叉反应。SARS-CoV核衣壳蛋白和/或SARS-CoV核衣壳蛋白上感兴趣的示例性抗原决定簇描述于美国专利号：7,696,330；7,897,744；7,696,330；8,343,718；美国公开号：20080269115；20100172917；20090280507；20080254440；20070128217，其公开内容通过引用整体并入本文。在此类实例中，第一结合成员和第二结合成员可以不与其他冠状病毒核衣壳蛋白交叉反应，例如MERS-CoV核蛋白；HCoV-229E核蛋白；HCoV-NL63核蛋白；HCoV-HKU1(分离株N5)核蛋白；和HCoV-OC43核蛋白。
当测试颗粒标记物的第一特异性结合成员和第二特异性结合成员是抗体结合剂时，可以使用的抗体结合剂的示例包括但不限于美国专利号7,696,330中描述的那些，以及公开的美国专利申请公开号US20160238601；US20090280507；和US20060003340中描述的那些；其公开内容通过引用并入本文。在某些实施方案中，抗体是“哺乳动物的”，使得它们从哺乳动物纲的生物体中获得，包括食肉目(例如，狗和猫)、啮齿目(例如小鼠、豚鼠和大鼠)和灵长目(例如，人类、黑猩猩和猴)。在一些情况下，抗体是人、小鼠(鼠类(murine))或兔(兔类(leporine))抗体。可以用作测试颗粒标记物的第一结合成员和第二结合成员的感兴趣的特异性抗体包括但不限于：SARS核衣壳蛋白抗体(Novus)；抗SARS-CoV-2核衣壳抗体，克隆503(Sigma Aldrich)；SARS-CoV-2(COVID-19)核衣壳抗体[HL5511](Genetex)(兔单克隆)；SARS-CoV-2(COVID-19)核衣壳抗体[HL455-MS](Genetex)(小鼠单克隆)；SARS-CoV-2(COVID-19)核衣壳抗体[HL344](Genetex)(兔单克隆)；SARS-CoV-2(COVID-19)核衣壳抗体[HL5410](Genetex)(兔单克隆)；SARS-CoV/SARS-CoV-2核衣壳单克隆抗体(6H3)(Invitrogen)(小鼠单克隆)；SARS/SARS-CoV-2冠状病毒核衣壳单克隆抗体(E16C)(Invitrogen)(小鼠单克隆)；SARS/SARS-CoV-2冠状病毒核衣壳单克隆抗体(5)(Invitrogen)(小鼠单克隆)；SARS/SARS-CoV-2冠状病毒核衣壳重组兔单克隆抗体(1)(Invitrogen)；SARS-CoV-2核衣壳嵌合重组人单克隆抗体(1A6)(Invitrogen)；SARS冠状病毒核衣壳单克隆抗体(18F629.1)(Invitrogen)(小鼠单克隆)；SARS-CoV-2核衣壳嵌合重组人单克隆抗体(1A6)(Invitrogen)；SARS-CoV-2核衣壳单克隆抗体(bcn11)(Invitrogen)(人单克隆)；SARS-CoV-2核衣壳单克隆抗体(bcn05)(Invitrogen)(人单克隆)；SARS-CoV-2核衣壳单克隆抗体(bcn14)(Invitrogen)(人单克隆)；SARS-CoV-2核衣壳单克隆抗体(bcn12)(Invitrogen)(人单克隆)；SARS-CoV-2核衣壳单克隆抗体(bcn13)(Invitrogen)(人单克隆)；SARS-CoV-2核衣壳单克隆抗体(ARC2372)(Invitrogen)(兔单克隆)；2019-nCoV核衣壳抗体(HC2003)，SARS-CoV-2NP抗体；SARS-CoV/SARS-CoV-2核衣壳抗体，兔MAbR004(Sino Biological)；SARS-CoV/SARS-CoV-2核衣壳抗体，小鼠MAb MM05(SinoBiological)；SARS-CoV/SARS-CoV-2核衣壳抗体，小鼠MAb MM08(Sino Biological)；等等。
在一些情况下，与SARS-CoV-2核衣壳蛋白特异性结合的测试颗粒标记物的第一特异性结合成员和第二特异性结合成员分别是兔类(兔)和鼠类(小鼠)抗体。兔类和鼠类抗体的量可以根据需要变化。在一些情况下，兔类抗体的量的范围为2.5-97.5％，鼠类抗体的量的范围为2.5-97.5％。在一些情况下，兔类和鼠类抗体的量是相同的。在其他实施方案中，兔类和鼠类抗体的量是不同的。上面提供了特异性结合SARS-CoV-2核衣壳蛋白的兔类和鼠类单克隆抗体的具体示例。在一些这样的实施方案中，兔类抗体是R004，鼠类抗体是MM05(Sino Biological)。在一些这样的实施方案中，兔类抗体的量超过鼠类抗体的量，其中在一些情况下，第一兔类抗体的百分比的范围为超过50％至97.5％，诸如60至97％，例如75至95％，诸如80至90％，例如85％。
如上所总结的，缀合区的下游是检测区。检测区是在装置的使用期间可以从其中读取结果的毛细流动构件的区域。检测区位于装置的样品接收区下游一定距离处。“下游”是指样品通过毛细作用流动的侧向方向，即来自样品接收区的流体流动的方向。样品接收区和检测区之间的距离可以变化，在一些情况下，范围为0.3至15cm，诸如1至15cm，包括5至10cm，例如1至5cm。
检测区是包括特异性结合SARS-CoV-2核衣壳蛋白的固定化捕获特异性结合成员的区域。检测区包括一定量的捕获特异性结合成员，该捕获特异性结合成员与检测区中的毛细流动构件的吸收性材料稳定地缔合。检测区的尺寸可以变化，并且在一些情况下，检测区的面积的范围为0.01至0.5cm2，例如0.05至0.1cm2，包括0.1至0.2cm2。检测区可以具有各种不同的构造，其中根据需要，该构造可以是线、圆、方形或更复杂的形状，例如“+”。在一些情况下，检测区被配置为固定化捕获特异性结合成员的线，其中该线的尺寸可以变化，其中在一些情况下，该线的长度范围为2至10mm，诸如3至7mm，例如4至6mm。如上所述，检测区包括与毛细流动构件的吸收材料稳定缔合的捕获特异性结合成员。“稳定缔合”是指在使用条件下，例如在分析条件下，捕获特异性结合成员和吸收性材料在空间中保持它们相对于彼此的位置。这样，捕获特异性结合成员和毛细流动构件的吸收性材料可以彼此非共价或共价地稳定缔合。非共价缔合的示例包括非特异性吸附，基于静电(例如离子-离子对相互作用)、疏水相互作用、氢键相互作用等的结合。共价结合的示例包括形成在捕获特异性结合成员与吸收性材料上存在的官能团之间的共价键。与SARS-CoV-2核衣壳蛋白特异性结合的检测区的固定化捕获特异性结合成员是与上述测试颗粒标记物的第一特异性结合成员和第二特异性结合成员不同的不同特异性结合成员。与SARS-CoV-2核衣壳蛋白特异性结合的检测区的固定化捕获特异性结合成员可以变化，其中这种特异性结合成员的示例如上所述。在实施方案中，捕获特异性结合成员是可以是与测试颗粒标记物的第一/第二特异性结合成员同时地与SARS-CoV-2核衣壳蛋白结合的特异性结合成员，使得当被分析的样品中存在SARS-CoV-2核衣壳蛋白时，可以产生捕获特异性结合成员、SARS-CoV-2核衣壳蛋白和测试颗粒标记物的夹心(sandwich)。在一些情况下，与SARS-CoV-2核衣壳蛋白特异性结合的检测区的固定化捕获特异性结合成员是SARS-CoV/SARS-CoV-2核衣壳抗体、小鼠MAb MM08(Sino Biological)。
在一些情况下，侧流分析装置可以进一步包括对照区。对照区位于检测区的下游。对照区含有固定化的对照剂。固定化的对照剂与可移动的对照结合剂特异性结合以形成对照结合对。感兴趣的对照结合对用作内部对照，即，可以在单个测试条上与分析物测量结果进行比较的对照。在一些情况下，对照区可以被描述为包括对照抗原，并且LFA装置可以包括例如在样品接收区和/或缀合区中的可移动的对照颗粒标记物，其包括与特异性结合对照抗原的对照特异性结合成员缀合的标记物颗粒，所述标记物颗粒可以与测试颗粒标记物的标记物颗粒相同。尽管通常可以使用任何方便的对照抗原/对照特异性结合成员对，但在一些情况下，使用不存在于样品中或不与样品中存在的化合物发生免疫交叉反应的对照抗原。合适的感兴趣的对照结合对的示例包括但不限于：生物素/抗生物素IgG；鸡IgY/抗-鸡IgY等。在其他实施方案中，对照区可以包括对照结合成员，其与测试标记物颗粒的第一特异性结合成员和第二特异性结合成员结合，例如结合到第一特异性结合成员和第二特异性结合成员的Fc区。
任选地，侧流分析装置可以包括：在检测区下游的例如呈吸收垫形式的芯吸区；以及例如在远离样品接收区的末端处的任何对照区，其中吸收垫被配置为吸收其中存在的已流过毛细流动构件的流体和试剂。如果需要，侧流分析装置的组成部件可以存在于合适的壳体中。该壳体可以被配置成封闭毛细流动构件和其他分析部件。壳体可以由任何合适的材料制成，其中所述材料可以是足够刚性的以保持容纳在其中的吸水构件和其他部件的完整性的材料，并且还对于在使用期间接触壳体的各种流体和试剂是惰性的。感兴趣的壳体材料包括塑料。壳体可以包括被配置成允许将样品施加到样品施加区上的端口或类似结构，以及被配置成允许观察所述检测区的窗口。壳体可以进一步包括标记，例如检测区和对照区标记(例如“T”和“C”)等。壳体可以在外部包含条形码，该条形码在被条形码读取器扫描时可以将信息传送给测试者。例如，条形码可以识别正在运行的测试的类型和/或单独的侧流分析装置。
图1提供了根据本发明任何实施方案的装置的俯视图。在图1中，装置100包括用于接收样品的端口110和用于观察检测区的窗口120。还示出了通过窗口120可见的分别用于检测区的测试线和对照线的标记122和124。另外，该装置包括用于在第一端操纵装置的手柄130和在相对处指示以提供用于分析仪器的引导的箭头140。图2提供了图1所示装置的基部200的视图。在图2中，基部200包括用于容持侧流分析测试条220的中心区210。侧流分析测试条220包括样品接收区230、缀合区240、检测区250和吸收垫260。图3提供了图1和图2所示装置的立体图。
除了SARS-CoV-2核衣壳蛋白之外，本发明的装置可以被配置为分析一种或更多种另外的分析物。该装置可以被配置用于分析的另外的分析物包括但不限于：感兴趣的生物或环境物质，例如病毒抗原，诸如流感病毒抗原，例如甲型流感病毒、乙型流感病毒或丙型流感病毒，及其组合。在公布的PCT申请WO2019245744中提供了关于在侧流装置中检测此类分析物的进一步细节；其公开内容通过引用并入本文。
方法
如上所述，本发明的方面还包括使用本发明的侧流分析装置的方法，例如如上所述，用于检测样品中是否存在SARS-CoV-2核衣壳蛋白的方法。因此，提供了确定给定样品是否包括SARS-CoV-2核衣壳蛋白的方法。换言之，提供了确定样品包括或不包括SARS-CoV-2核衣壳蛋白的方法。“确定”是指分析样品中与样品中的组分(例如核衣壳蛋白)相关的信号，其中信号的存在表明该组分存在于样品中。该确定可以包括通过视觉或仪器装置获得信号。在一些情况下，所述确定包括检测来自样品的信号，例如来自样品中的组分的信号，其中信号指示该组分存在于样品中。
在实施本发明的方法时，将感兴趣的样品施加到侧流分析装置的样品接收区，如上所述。在一些情况下，使样品与一定量的测试颗粒标记物和/或对照颗粒标记物组合，例如，其中这些组分中的一种或两种尚未存在于装置中，如上文所述。当使样品与这些分析组分中的一种或两种组合时，可以使用任何方便的方案实现该组合。当与样品组合时，这些试剂的量可以变化，其期望的量容易确定，例如通过本领域已知的标准方法。在这种情况下，给定的LFA装置可以不包括例如如上所述的缀合区。
施加到样品接收区的样品量可以变化，只要其足以提供期望的侧向流动和分析的可操作性。可以使用任何方便的方案将样品施加到样品接收区，例如通过滴管、移液管、注射器等。在一些情况下，例如如下所述，样品直接从用于获取样品的样品获取装置(诸如液体容器)施加。这样，本发明的方法中的初始步骤是将样品施加到被配置为检测样品中的SARS-CoV-2核衣壳蛋白的侧流分析装置的样品接收区。除了施加样品之外，该方法可以进一步包括施加一定量的合适的液体，例如缓冲液，以提供通过毛细流动构件的足够的流体流。可以使用任何合适的液体，包括但不限于缓冲液、细胞培养基(例如DNEM)等。感兴趣的缓冲液包括但不限于：tris、tricine、MOPS、HEPES、PIPES、MES、PBS、TBS等。当需要时，洗涤剂可以存在于液体中，例如NP-40或TWEENTM洗涤剂。在一些实施方案中，将生物样品加入到样品缓冲液或提取缓冲液中并混合，并将所得混合物施加到侧流分析装置的样品接收区。
在施加样品后，使样品可以侧向流动通过毛细流动构件及其各个区，例如缀合区和检测区，然后读取检测区以确定未确诊样品中是否存在SARS-CoV-2核衣壳蛋白。可以在样品施加后的预定时间段之后读取检测区，其中该时间段可以范围为10秒至1小时，例如1min至45min，例如5min至30min，包括10min至20min，例如15min。
使用被配置为对测试颗粒标记物的标记物颗粒进行检测的方案来读取检测区。在一些实施方案中，可以使用反射率读取器来测量颜色变化。在一些实施方案中，反射率读取器是指适于使用反射的光包括荧光或任意波长的电磁辐射来读取测试条的仪器。可以使用光电检测器或其他检测器，例如电荷耦合二极管(CCD)来检测反射率。在一些实施方案中，读取器包括VeritorTM系统(Becton，Dickinson and Company)的读取器。图4示出了在利用VeritorTM系统400读取的如图1至图3所示出的装置100的视图。在一些实施方案中，读取器包括Sofia或Sofia2荧光免疫分析仪(Quidel)，用于从LumiraDx测试条(LumiraDx)读取荧光的LumiraDx仪器，和用于读取BinaxNow抗原卡(Abbott)的Alere读取器。如上所述，本发明的LFA装置可以包括对照区。在这种情况下，本发明的方法进一步包括例如利用用于读取检测区的反射率读取器来读取对照区以从其获得信号。
如果需要，方法可以进一步包括将对照样品例如阳性或阴性对照施加到对照侧流分析装置的样品接收区，并读取对照侧流分析装置的检测区以获得结果。在这些实施方案中，对照侧流分析装置与测试侧流分析装置完全相同(例如，来自与测试侧流装置相同的生产批次的第二侧流装置)。阳性对照样品是已知含有可检测量的SARS-CoV-2核衣壳蛋白的流体样品。阴性对照样品是已知不含有可检测量的SARS-CoV-2核衣壳蛋白的流体样品。因此，这些实施方案使用与测试侧流分析装置相同的侧流分析装置进行完整的阳性和/或阴性对照分析。
本发明的方法可以提供定性或定量的结果。定性结果包括提供对于分析物是否存在于被分析样品中的简单的“是”或“否”判定的结果。定性结果还包括如果样品中分析物的量超过预定阈值则为阳性的结果。相比之下，定量结果提供了被分析样品中存在多少SARS-CoV-2核衣壳蛋白的一些测量值。因此，定量结果至少提供了被分析样品中存在的SARS-CoV-2核衣壳蛋白的量的近似值。为了提供定量结果，检测区可以包括两个或多个不同的捕获探针区，其包括相同或不同量的相同捕获探针。这样，如果样品中分析物的量超过在第一捕获区中能够捕获的分析物的量，则剩余的游离分析物将移动到第二捕获区。从两个区得到的阳性结果提供了样品中分析物的量的定量测量值。通过具有一系列区，其可以是具有不同(例如递减)量的捕获探针的两个或更多个捕获区的梯度，可以获得样品中分析物的定量测量值。或者，可以通过密度测定法(densitometry)获得定量测量值。在这种情况下，仅需要一个捕获区。
根据本发明的实施方案来分析的样品可以变化。样品的示例可以包括各种流体或固体样品。在一些情况下，样品可以是来自受试者的体液样品。样品可以是水样或气态样品。在一些情况下，可以提供固体或半固体样品。样品可以包括从受试者收集的组织和/或细胞。样品可以是生物样品。生物样品的示例可以包括但不限于血液、血清、血浆、鼻拭子或鼻咽洗液、唾液、尿液、胃液、脊髓液、泪液、粪便、粘液、汗液、耳垢、油、腺分泌物、脑脊髓液、组织、精液、阴道液、来自肿瘤组织的间质液、眼液、脊髓液、咽拭子、呼吸、毛发、指甲、皮肤、活组织检查、胎盘液、羊水、脐带血、强调液(emphatic fluids)、腔液、痰、脓、微生物群、胎粪、母乳和/或其他排泄物。样品可以包括鼻咽洗液。受试者的组织样品的示例可以包括但不限于结缔组织、肌肉组织、神经组织、上皮组织、软骨、癌样品或骨。样品可以由人或动物提供。样品可以由哺乳动物、脊椎动物提供，诸如鼠、猿、人、农场动物、运动动物或宠物。可以从活的或死的受试者收集样品。样品可以从受试者新鲜收集或可以已经经历一些形式的预处理、储存或运输。在某些实施方案中，样品的来源是“哺乳动物”或“哺乳动物类”，其中这些术语被广泛用于描述哺乳动物纲内的生物，包括食肉目(例如狗和猫)、啮齿目(例如小鼠、豚鼠和大鼠)和灵长目(例如人类、黑猩猩和猴子)。在一些情况下，受试者是人。方法可以应用于从两种性别和任何发育阶段(即新生儿、婴儿、少年、青少年、成人)的人类受试者获得的样品，其中在某些实施方案中，人类受试者是少年、青少年或成人。
本发明的方法可以包括从受试者获取样品。例如，当待测试的样品是鼻咽样品或样本例如鼻拭子时，方法可以包括使用拭子、鼻咽洗液等从受试者获得样品。在一些情况下，从受试者获取样品包括使用双鼻孔收集方法从受试者获得鼻拭子样本。在该方法的实施方案中，首先将鼻拭子插入受试者的一个鼻孔中。将拭子尖端从鼻孔边缘插入至2.5cm(1英寸)。拭子沿着鼻孔内的粘膜滚动5次以确保收集粘液和细胞。然后使用相同的拭子对另一个鼻孔重复该过程，以确保从两个鼻腔收集到足够的样品。然后从鼻腔移除拭子。
在从受试者获得样品(例如鼻拭子)之后，可以根据需要在将样品施加到LFA装置的样品接收区之前处理样品。例如，可以将样品与洗涤剂、防腐剂等在含水载体中组合以制备用于测试的样品。在一些情况下，使用VeritorTM(Becton，Dickinson and Company)样品收集系统收集样品。在这种情况下，首先从VeritorTM提取试剂管/尖端移除帽，然后将具有收集的鼻咽样本的拭子插入管中，接着将拭子在管中提供的流体中上下插入持续最少15秒，注意不要使内容物从管中溅出。然后将拭子从管中取出，同时挤压管的侧面以从拭子中提取液体。然后将附接的尖端牢固地压在含有处理过的样品的提取试剂管上(不需要螺纹或扭转)。然后通过旋转或轻弹管的底部将内容物充分混合。
本发明的实施方案提供了对于给定样品是否含有SARS-CoV-2核衣壳蛋白的快速、可靠的测定。在本发明的实施方案中，可以在将样品施加到LFA装置的样品接收区的30分钟内、例如20分钟内、包括15分钟内获得结果。所述方法的实施方案提供：PPA(阳性百分比一致性＝真阳性/真阳性+假阴性)为70％或更大，例如75％或更大，包括80％或更大，例如84％或更大；NPA(阴性百分比一致性＝真阴性/真阴性+假阳性)为90％或更大，例如95％或更大，包括100％；和OPA(总百分比一致性＝真阳性+真阴性/总样品)为90％或更大，例如95％或更大，包括98％或更大。所述方法的实施方案提供1.4×102TCID50/mL或更低的检测限(LOD)。所述方法的实施方案显示与多种潜在交叉污染实体没有交叉反应性，潜在交叉污染实体包括但不限于：人冠状病毒229E(热灭活)；人冠状病毒OC43；人冠状病毒NL63；腺病毒；人偏肺病毒；副流感病毒1；副流感病毒2；副流感病毒3副流感病毒4；甲型流感病毒；乙型流感病毒；肠道病毒；呼吸道合胞病毒；鼻病毒；SARS-冠状病毒；MERS-冠状病毒；流感嗜血杆菌；肺炎链球菌；酿脓链球菌；白色念珠菌；合并的人鼻腔洗液；百日咳鲍特菌；肺炎支原体；肺炎衣原体；和嗜肺军团菌。
除了SARS-CoV-2核衣壳蛋白之外，本发明的实施方案的方法还可以包括分析一种或更多种另外的分析物。可以根据本发明的实施方案来分析的另外的分析物包括但不限于：感兴趣的生物或环境物质，例如病毒抗原，如流感病毒抗原，例如甲型流感病毒、乙型流感病毒或丙型流感病毒以及它们的组合。在PCT公布的申请WO2019245744中提供了关于在侧流装置中检测此类分析物的进一步细节；其公开内容通过引用并入本文。
实用性
本主题的装置和方法可以用于其中需要检测样品中SARS-CoV-2核衣壳蛋白的临床和研究应用。本发明的实施方案提供了快速可靠的SARS-CoV-2测试。本发明的实施方案以操作简单的手持仪器在护理点提供实验室质量的结果。
试剂盒
本公开的方面还包括试剂盒。试剂盒可以适合于实施任何主题方法。试剂盒可以包括一个或更多个(包括多个，例如2至50个，如5至30个)侧流分析装置，例如如上所述。试剂盒可以进一步包括一种或更多种另外的分析组件，诸如但不限于样品获取装置，例如：鼻拭子/液体容器(例如以提取管的形式(其中管可以包括试剂液体，例如包含去污剂、防腐剂等的含水液体))；阳性对照，例如以包括SARS-CoV-2核衣壳蛋白的阳性对照拭子的形式；阴性对照，例如以不包括SARS-CoV-2核衣壳蛋白的阴性对照拭子的形式，等。在一些情况下，本发明的试剂盒包括：2至50个(例如5至30个)侧流分析装置、2至50个(例如5至30个)样品获取组件(例如以鼻拭子/提取管的形式)、阳性对照拭子和阴性对照拭子。试剂盒的各种组分可以存在于单独的容器中，或者它们中的一些或全部可以被预先组合到相同的容器中。容器可以被配置成保持组件(例如箔袋等)的无菌性。因此，试剂盒组件可以是无菌的并且存在于一个或更多个无菌容器(例如箔袋)中。试剂盒组件可以根据需要以任何方便的包装形式组合，例如在盒子、小袋或其他类型的包装中。
除上述组件外，本发明试剂盒可以进一步包括(在某些实施方案中)用于实施本发明方法的说明书。这些说明书可以多种形式存在于主题试剂盒中，一个或更多个说明书可以存在于试剂盒中。这些说明书可以存在的一种形式是在合适的介质或基底上印刷的信息，例如，在试剂盒的包装中、在包装插页中的其上印刷了信息的一张或多张纸，等。这些说明书的另一种形式是计算机可读介质，例如，在其上已记录信息的磁盘、光盘(CD)等、便携式闪存驱动器等。这些说明书可以存在的另一种形式是网站地址，其可以经由因特网使用以访问在远程站点处的信息。
以下实施例仅以说明而非限制的方式提供。
实施例
I.胶体金缀合物的比较
用85％抗SARS-CoV-2抗体R004(Sino Biological)和15％抗SARS-CoV-2抗体MM05(Sino Biological)制备测试胶体金缀合物，用100％抗SARS-CoV-2抗体R004制备对照胶体金缀合物。两种侧流分析(LFA)，即测试LFA和对照LFA，分别使用相同的条带硝化纤维素膜以及测试和对照胶体金缀合物进行。以提取试剂提取SARS-CoV-2阴性鼻液和鼻拭子临床样品，并将提取的样品施加于测试和对照LFA。结果显示，与利用仅含有一种抗体(即R004)的对照胶体金缀合物的对照LFA分析相比，利用含有两种不同抗体(即R004和MM05)的测试胶体金缀合物的测试LFA分析具有更好的特异性，更少的假阳性结果。
II.用于快速检测SARS-CoV-2的VeritorTM系统
A.概述
用于快速检测SARS-CoV-2的BD VeritorTM系统是一种快速(大约15分钟)色谱数字免疫分析，用于直接检测取自具有疑似COVD-19的体征和症状的患者的呼吸样本中是否存在SARS-CoV-2抗原。
B.程序原则
BD VeritorTM系统采用专用的光电判读仪和免疫色谱分析来定性检测来自呼吸样本的经处理的样品中致病生物的抗原。用于快速检测SARS-CoV-2的BD VeritorTM系统被设计用于检测来自疑似具有COVID-19的感染体征和症状的患者的呼吸样品中是否存在SARS-CoV-2核衣壳蛋白。当样本被处理并加入到测试装置中时，样本中存在的SARS-CoV-2抗原与测试条中的检测颗粒所缀合的抗体相结合。抗原-缀合物复合物穿过测试条迁移到反应区，并被膜上所结合的抗体线捕获。当抗原-缀合物沉积在分析装置上的测试“T”位置和对照“C”位置时，通过BD VeritorTM Plus分析仪确定阳性结果。该仪器对非特异性结合进行分析和校正并检测未被肉眼识别的阳性以提供客观结果。
C.材料
1.试剂盒组件
以下组件被包括在用于快速检测SARS-CoV-2试剂盒的BD Veritor系统中。
2.分析仪器
BD VeritorTM Plus分析仪(分类No.256066)。
C.临床性能
BD VeritorTM系统用于快速检测SARS-CoV-2的性能通过前瞻性地从疑似患有COVID-19的个体症状性患者(发病5天内)采集和登记的226个直接鼻拭子来确定。样品由美国21个地理上不同的地区的具备资格的人员收集。
按照双鼻孔法采集鼻拭子并如采集装置的包装插页中所述进行处理。样本在采集的30分钟内冷冻并储存直至测试。选择在预定日期范围内的所有样本，然后以盲法方式顺序测试。将BD VeritorTM系统分析的表现与利用用于检测SARS-CoV-2的紧急使用授权分子(RT-PCR)测试检测的储存在3mL病毒转运培养基中的鼻咽或口咽拭子的结果进行比较。结果提供在下表1中。
表1
·PPA:84％(C.I.67％–93％)
·NPA:100％(C.I.98％-100％)
·OPA:98％(C.I.95％-99％)
·术语解释：
●PPA：阳性百分比一致性＝真阳性/真阳性+假阴性
·NPA：阴性百分比一致性＝真阴性/真阴性+假阳性。
·OPA：总百分比一致性＝真阳性+真阴性/总样品
·C.I.：置信区间
D.检测限(LOD)(分析灵敏度)
用于SARS-CoV-2的快速检测的BD VeritorTM系统的LOD使用通过γ辐射灭活的病毒样品的有限稀释来建立。以2.8×105TCID50/mL的浓度提供材料。在本研究中，设计为估算当使用直接鼻拭子时的分析的LOD，将起始材料掺加到一定体积的从健康供体获得并确认SARS-CoV-2阴性的合并的人鼻基质(nasal matrix)中。初始的范围发现研究使用10倍稀释系列以测试装置一式三份进行。在每次稀释时，将50μL样品加入拭子中，然后使用适于患者鼻拭子样本的程序以BD VeritorTM分析进行测试。浓度在产生3个阳性结果的最后一次稀释和产生3个阴性结果的第一次稀释之间选择。利用该浓度，用2倍稀释系列进一步细化LOD。然后在以相同方式测试的另外20个重复中测试显示100％阳性的最终稀释液。结果提供在下表2中。
表2
起始材料浓度 估算LOD 数量：阳性/总数 阳性％
2.8×105TCID50/mL 1.4×102TCID50/mL 19/20 95％
E.交叉反应性(分析特异性)
用于快速检测SARS-CoV-2的BD VeritorTM系统的交叉反应性通过测试一组可能潜在地与用于快速检测SARS-CoV-2的BD VeritorTM系统交叉反应的高发呼吸道病原体来评价。每一生物体/病毒对一式三份进行测试。每种生物体的最终浓度记录在下表3中。
表3
为了估计不能用于湿式测试的生物体与SARS-CoV-2交叉反应的可能性，使用由国家生物技术信息中心(NCBI)管理的基本局部比对搜索工具(BLAST)的In silico(计算机)分析来评估蛋白质序列同源性的程度。
·对于耶氏肺孢子菌(P.jirovecii)序列相似性的一个区域显示在9％的序列中45.4％的同源性，使得在BD VeritorTM夹心免疫分析中的交叉反应性非常不可能。
·在SARS-CoV-2和结核分枝杆菌(M.tuberculosis)之间没有发现蛋白质序列同源性，因此可以排除基于同源性的交叉反应性。
·SARS-CoV-2核衣壳蛋白和人冠状病毒HKU1之间的比较揭示了对于同源性唯一的可能性是与HKU1核衣壳磷蛋白。同源性相对较低，在82％的序列中为36.7％，但不能排除交叉反应性。
F.高剂量钩状效应
利用BD VeritorTM系统用于快速检测SARS-CoV-2测试，直到2.8×105TCID50/mL的γ-灭活的SARS-CoV-2，都没有观察到高剂量钩状效应。
尽管随附权利要求书，但本发明也由以下条款限定：
1.一种用于检测样品中是否存在SARS-CoV-2核衣壳蛋白的侧流分析(LFA)装置，所述LFA装置包括：
(a)样品接收区；
(b)缀合区，位于所述样品接收区下游并包含测试颗粒标记物，所述测试颗粒标记物包含与特异性结合所述SARS-CoV-2核衣壳蛋白的第一特异性结合成员和第二特异性结合成员缀合的标记物颗粒；以及
(c)检测区，位于所述缀合区下游并包含固定化捕获特异性结合成员，所述固定化捕获特异性结合成员特异性结合所述SARS-CoV-2核衣壳蛋白。
2.根据条款1所述的LFA装置，进一步包括位于所述检测区下游的对照区。
3.根据条款2所述的LFA装置，其中，所述对照区包含对照抗原，并且所述装置还包含对照颗粒标记物，所述对照颗粒标记物包含与特异性结合所述对照抗原的对照特异性结合成员缀合的标记物颗粒。
4.根据条款2所述的LFA装置，其中，所述对照区包含与所述第一特异性结合成员和第二特异性结合成员结合的对照结合成员。
5.根据前述条款中任一项所述的LFA装置，进一步包括位于所述对照区下游的芯吸区。
6.根据前述条款中任一项所述的LFA装置，其中，所述标记物颗粒是反射性纳米颗粒。
7.根据条款6所述的LFA装置，其中，所述反射性纳米颗粒包括金属。
8.根据条款7所述的LFA装置，其中，所述金属包括金。
9.根据前述条款中任一项所述的LFA装置，其中，所述第一特异性结合成员、第二特异性结合成员和捕获特异性结合成员是抗体或其结合片段。
10.根据条款9所述的LFA装置，其中，特异性结合所述SARS-CoV-2核衣壳蛋白的所述第一特异性结合成员和第二特异性结合成员分别是兔类抗体和鼠类抗体。
11.根据条款10所述的LFA装置，其中，所述兔类抗体是R004并且所述鼠类抗体是MM05。
12.根据条款11所述的LFA装置，其中，所述兔类抗体存在的量超过所述鼠类抗体的量。
13.根据条款12所述的LFA装置，其中，所述兔类抗体的量在从60至97.5％的范围内。
14.根据前述条款任一项所述的LFA装置，其中，特异性结合所述SARS-CoV-2核衣壳蛋白的捕获特异性结合成员是鼠类抗体。
15.根据条款13所述的LFA装置，其中，所述鼠类抗体是MM08。
16.一种用于检测样品中是否存在SARS-CoV-2核衣壳蛋白的侧流分析(LFA)装置，所述LFA装置包括：
(a)样品接收区；
(b)缀合区，位于所述样品接收区下游并包含测试颗粒标记物，所述测试颗粒标记物包含与特异性结合所述SARS-CoV-2核衣壳蛋白的第一兔类抗体和特异性结合所述SARS-CoV-2核衣壳蛋白的第二鼠类抗体缀合的金标记物颗粒，其中，第一兔类抗体的量超过第二鼠类抗体的量；以及
(c)检测区，位于所述缀合区下游并包含特异性结合所述SARS-CoV-2核衣壳蛋白的固定化捕获鼠类抗体。
17.根据条款16所述的LFA装置，进一步包括位于所述检测区下游的对照区。
18.根据条款17所述的LFA装置，其中，所述对照区包含对照抗原，并且所述装置还包含对照颗粒标记物，所述对照颗粒标记物包含与特异性结合所述对照抗原的对照特异性结合成员缀合的标记物颗粒。
19.根据条款17所述的LFA装置，其中，所述对照区包含与所述第一特异性结合成员和第二特异性结合成员结合的对照结合成员。
20.根据条款16至19中任一项所述的LFA装置，进一步包括位于所述对照区下游的芯吸区。
21.根据条款16至20中任一项所述的LFA装置，其中，所述兔类抗体是R004并且所述鼠类抗体是MM05。
22.根据条款16至21中任一项所述的LFA装置，其中，所述兔类抗体的量在从60至97.5％的范围内。
23.根据条款16至22中任一项所述的LFA装置，其中，所述捕获鼠类抗体是MM08。
24.一种检测样品中是否存在SARS-CoV-2核衣壳蛋白的方法，所述方法包括：
(a)将所述样品放置在侧流分析(LFA)装置的样品接收区上，所述侧流分析装置包括：(i)所述样品接收区；
(ii)缀合区，位于所述样品接收区下游并包含颗粒标记物，所述颗粒标记物包含与特异性结合所述SARS-CoV-2核衣壳蛋白的第一特异性结合成员和第二特异性结合成员缀合的标记物颗粒；以及
(iii)检测区，位于所述缀合区下游并包含固定化捕获特异性结合成员，所述固定化捕获特异性结合成员特异性结合所述SARS-CoV-2核衣壳蛋白；以及
(b)查询所述检测区是否存在标记物颗粒，以检测在所述样品中是否存在所述SARS-CoV-2核衣壳蛋白。
25.根据条款24所述的方法，其中，所述LFA装置进一步包括位于所述检测区下游的对照区，并且所述方法进一步包括查询所述对照区。
26.根据条款25所述的方法，其中，所述对照区包含对照抗原，并且所述LSA装置还包含对照颗粒标记物，所述对照颗粒标记物包括与特异性结合所述对照抗原的对照特异性结合成员缀合的标记物颗粒。
27.根据条款25所述的方法，其中，所述对照区包含与所述第一特异性结合成员和第二特异性结合成员结合的对照结合成员。
28.根据条款24至27中任一项所述的方法，其中，所述LFA装置进一步包括位于所述对照区下游的芯吸区。
29.根据条款24至28中任一项所述的方法，其中，所述标记物颗粒是反射性纳米颗粒。
30.根据条款29所述的方法，其中，所述反射性纳米颗粒包括金属。
31.根据条款30所述的方法，其中，所述金属包括金。
32.根据条款24至31中任一项所述的方法，其中，所述第一特异性结合成员、第二特异性结合成员和捕获特异性结合成员是抗体或其结合片段。
33.根据条款32所述的方法，其中，特异性结合所述SARS-CoV-2核衣壳蛋白的所述第一特异性结合成员和第二特异性结合成员分别是兔类抗体和鼠类抗体。
34.根据条款33所述的方法，其中，所述兔类抗体是R004并且所述鼠类抗体是MM05。
35.根据条款34所述的方法，其中，所述兔类抗体存在的量超过所述鼠类抗体的量。
36.根据条款24至35中任一项所述的方法，其中，特异性结合所述SARS-CoV-2核衣壳蛋白的所述捕获特异性结合成员是鼠类抗体。
37.根据条款36所述的方法，其中，所述鼠类抗体是MM08。
38.根据条款24至37中任一项所述的方法，其中，所述查询包括采用反射率读取器。
39.根据条款24至38中任一项所述的方法，其中，所述样品包括鼻咽样本。
40.根据条款24至39中任一项所述的方法，其中，所述方法进一步包括从受试者获取所述样品。
41.根据条款40所述的方法，其中，从受试者获取样品包括采用鼻拭子。
42.一种用于检测样品中是否存在SARS-CoV-2核衣壳蛋白的系统，所述系统包括：
(a)侧流分析(LFA)装置，其包括：
(i)样品接收区；
(ii)缀合区，位于所述样品接收区下游并包含颗粒标记物，所述颗粒标记物包含与特异性结合所述SARS-CoV-2核衣壳蛋白的第一特异性结合成员和第二特异性结合成员缀合的标记物颗粒；以及
(iii)检测区，位于所述缀合区下游并包含固定化捕获特异性结合成员，所述固定化捕获特异性结合成员特异性结合所述SARS-CoV-2核衣壳蛋白；以及
(b)读取器，其被配置为查询所述检测区是否存在标记物颗粒，以检测在所述样品中是否存在所述SARS-CoV-2核衣壳蛋白。
43.根据条款42所述的系统，其中，所述LFA装置进一步包括位于所述检测区下游的对照区。
44.根据条款43所述的系统，其中，所述对照区包含对照抗原，并且所述样品接收区进一步包含对照颗粒标记物，所述对照颗粒标记物包含与特异性结合所述对照抗原的对照特异性结合成员缀合的标记物颗粒。
45.根据条款43所述的系统，其中，所述对照区包含与所述第一特异性结合成员和第二特异性结合成员结合的对照结合成员。
46.根据条款42至45中任一项所述的系统，其中，所述LFA装置进一步包括位于所述对照区下游的芯吸区。
47.根据条款42至46中任一项所述的系统，其中，所述标记物颗粒是反射性纳米颗粒。
48.根据条款47所述的系统，其中，所述反射性纳米颗粒包括金属。
49.根据条款48所述的系统，其中，所述金属包括金。
50.根据条款42至49中任一项所述的系统，其中，所述第一特异性结合成员、第二特异性结合成员和捕获特异性结合成员是抗体或其结合片段。
51.根据条款50所述的系统，其中，特异性结合所述SARS-CoV-2核衣壳蛋白的所述第一特异性结合成员和第二特异性结合成员分别是兔类抗体和鼠类抗体。
52.根据条款51所述的系统，其中，所述兔类抗体是R004。
53.根据条款52所述系统，其中，所述鼠类抗体是MM05。
54.根据条款53所述的系统，其中，所述兔类抗体存在的量超过所述鼠类抗体的量。
55.根据条款42至54中任一项所述的系统，其中，特异性结合所述SARS-CoV-2核衣壳蛋白的所述捕获特异性结合成员是鼠类抗体。
56.根据条款55所述的系统，其中，所述鼠类抗体是MM08。
57.根据条款42至56中任一项所述的系统，其中，所述读取器包括反射计。
58.一种读取器，其被配置为查询侧流分析(LFA)装置的检测区是否存在标记物颗粒以检测样品中是否存在SARS-CoV-2核衣壳蛋白，其中所述LFA装置包括：
(a)样品接收区；
(b)缀合区，位于所述样品接收区下游并包含颗粒标记物，所述颗粒标记物包含与特异性结合所述SARS-CoV-2核衣壳蛋白的第一特异性结合成员和第二特异性结合成员缀合的标记物颗粒；以及
(c)检测区，位于所述缀合区下游并包含固定化捕获特异性结合成员，所述固定化捕获特异性结合成员特异性结合所述SARS-CoV-2核衣壳蛋白。
59.根据条款58所述的读取器，其中，所述LFA装置进一步包括位于所述检测区下游的对照区。
60.根据条款59所述的读取器，其中，所述对照区包含对照抗原，并且所述样品接收区进一步包含对照颗粒标记物，所述对照颗粒标记物包含与特异性结合所述对照抗原的对照特异性结合成员缀合的标记物颗粒。
61.根据条款59所述的读取器，其中，所述对照区包含与所述第一特异性结合成员和第二特异性结合成员结合的对照结合成员。
62.根据条款58至61中任一项所述的读取器，其中，所述LFA装置进一步包括位于所述对照区下游的芯吸区。
63.根据条款58至62中任一项所述的读取器，其中，所述标记物颗粒是反射性纳米颗粒。
64.根据条款63所述的读取器，其中，所述反射性纳米颗粒包括金属。
65.根据条款64所述的读取器，其中，所述金属包括金。
66.根据条款58至65中任一项所述的读取器，其中，所述第一特异性结合成员、第二特异性结合成员和对照特异性结合成员是抗体或其结合片段。
67.根据条款66所述的读取器，其中，特异性结合所述SARS-CoV-2核衣壳蛋白的所述第一特异性结合成员和第二特异性结合成员分别是兔类抗体和鼠类抗体。
68.根据条款67所述的读取器，其中，所述兔类抗体是R004并且所述鼠类抗体是MM05。
69.根据条款68所述的读取器，其中，所述兔类抗体存在的量超过所述鼠类抗体的量。
70.根据条款58至69中任一项所述的读取器，其中，特异性结合所述SARS-CoV-2核衣壳蛋白的所述捕获特异性结合成员是鼠类抗体。
71.根据条款70所述的读取器，其中，所述鼠类抗体是MM08。
72.根据条款58至71中任一项所述的读取器，其中，所述读取器包括反射计。
73.一种用于检测样品中是否存在SARS-CoV-2核衣壳蛋白的试剂盒，所述试剂盒包括：
(a)侧流分析(LFA)装置，其包括：
(i)样品接收区；
(ii)缀合区，位于所述样品接收区下游并包含颗粒标记物，所述颗粒标记物包含与特异性结合所述SARS-CoV-2核衣壳蛋白的第一特异性结合成员和第二特异性结合成员缀合的标记物颗粒；以及
(iii)检测区，位于所述缀合区下游并包含固定化捕获特异性结合成员，所述固定化捕获特异性结合成员特异性结合所述SARS-CoV-2核衣壳蛋白；以及
(b)样品获取部件，用于从受试者获取样品。
74.根据条款73所述的试剂盒，其中，所述LFA装置进一步包括位于所述检测区下游的对照区。
75.根据条款74所述的试剂盒，其中，所述对照区包含对照抗原，并且所述样品接收区进一步包含对照颗粒标记物，所述对照颗粒标记物包含与特异性结合所述对照抗原的对照特异性结合成员缀合的标记物颗粒。
76.根据条款74所述的试剂盒，其中，所述对照区包含与所述第一特异性结合成员和第二特异性结合成员结合的对照结合成员。
77.根据条款73至76中任一项所述的试剂盒，其中，所述LFA装置进一步包括位于所述对照区下游的芯吸区。
78.根据条款73至77中任一项所述的试剂盒，其中，所述标记物颗粒是反射性纳米颗粒。
79.根据条款78所述的试剂盒，其中，所述反射性纳米颗粒包括金属。
80.根据条款79所述的试剂盒，其中，所述金属包括金。
81.根据条款73至80中任一项所述的试剂盒，其中，所述第一特异性结合成员、第二特异性结合成员和对照特异性结合成员是抗体或其结合片段。
82.根据条款81所述的试剂盒，其中，特异性结合所述SARS-CoV-2核衣壳蛋白的所述第一特异性结合成员和第二特异性结合成员分别是兔类抗体和鼠类抗体。
83.根据条款82所述的试剂盒，其中，所述兔类抗体是R004并且所述鼠类抗体是MM05。
84.根据条款83所述的试剂盒，其中，所述兔类抗体存在的量超过所述鼠类抗体的量。
85.根据条款73至84中任一项所述的试剂盒，其中，特异性结合所述SARS-CoV-2核衣壳蛋白的所述捕获特异性结合成员是鼠类抗体。
86.根据条款85所述的试剂盒，其中，所述鼠类抗体是MM08。
87.根据条款73至86中任一项所述的试剂盒，其中，所述试剂盒包括多个所述LFA装置。
88.根据条款73至87中任一项所述的试剂盒，其中，所述样品是鼻咽样品。
89.根据条款88所述的试剂盒，其中，所述样品获取部件包括鼻拭子。
90.根据条款89所述的试剂盒，其中，所述样品获取部件进一步包括包含洗涤剂的液体容器。
91.根据条款73至90中任一项所述的试剂盒，其中，所述试剂盒进一步包含阳性对照。
92.根据条款73至91中任一项所述的试剂盒，其中，所述试剂盒进一步包含阴性对照。
在至少一些先前描述的实施方案中，在一个实施方案中使用的一个或更多个要素可以互换地用于另一实施方案，除非这种替换在技术上不可行。本领域技术人员将理解，在不脱离所要求保护的主题的范围的情况下，可以对上述方法和结构进行各种其他省略、添加和修改。所有这些修改和变化旨在落入由所附权利要求限定的主题的范围内。
所属领域的技术人员将了解，一般来说，本文且尤其在所附权利要求书(例如，所附权利要求书的正文)中所使用的术语通常旨在作为“开放式”术语(例如，术语“包含(including)”应解释为“包含但不限于”，术语“具有”应解释为“至少具有”，术语“包括(includes)”应解释为“包括但不限于”等)。本领域技术人员将进一步理解，如果所引入的权利要求陈述的具体数量是意指的，则这样的意指将在权利要求中明确地陈述，并且在没有这样的陈述的情况下，不存在这样的意指。例如，为了帮助理解，以下所附权利要求可以包含使用引入性短语“至少一个”和“一个或更多个”来引入权利要求陈述。然而，此类短语的使用不应被解释为暗示由不定冠词“一个(a或an)”引入的权利要求陈述将含有此类引入的权利要求陈述的任何特定权利要求限制为仅含有一个此类陈述的实施方案，即使当同一权利要求包括介绍性短语“一个或更多个”或“至少一个”和诸如“一个(a或an)”的不定冠词(例如，“一个(a和/或an)”应被解释为意指“至少一个”或“一个或更多个”)时；这同样适用于用于引入权利要求陈述的明确文字的使用。此外，即使明确地陈述了引入的权利要求陈述的特定数量，本领域技术人员将认识到，这种陈述应被解释为至少意指所陈述的数量(例如，“两个陈述”的简单陈述，没有其他修饰语，意指至少两个陈述，或两个或更多个陈述)。此外，在使用类似于“A、B和C等中的至少一个”的惯用语的情况下，一般而言，这样的结构意指本领域技术人员将对于该惯用语所理解的意义(例如，“具有A、B和C中的至少一个的系统”将包括但不限于具有仅A，仅B，仅C，A和B一起，A和C一起，B和C一起和/或A、B、C一起等的系统)。在其中使用类似于“A、B或C等中的至少一个”的惯用语的情况下，一般而言，这样的结构意指本领域技术人员将对于该惯用语所理解的意义(例如，“具有A、B或C中的至少一个的系统”将包括但不限于具有仅A，仅B，仅C，A和B一起，A和C一起，B和C一起和/或A、B、C一起等的系统)。本领域的技术人员将进一步理解，无论在说明书、权利要求书还是附图中，实际上呈现两个或更多个替代性术语的任何析取性词语和/或短语应被理解为考虑了包括术语中的一个、术语中的任一个或两个术语的可能性。例如，短语“A或B”将被理解为包括“A”或“B”或“A和B”的可能性。
此外，当本公开的特征或方面以马库什组的形式描述时，本领域技术人员将认识到，本公开也由此以马库什组的任何单独的成员或成员的亚组的形式描述。
如本领域技术人员将理解的，出于任何和所有目的，例如就提供书面描述而言，本文公开的所有范围还包括任何和所有可能的子范围及其子范围的组合。任何列出的范围都可以容易地被认为是充分描述并且能够将相同的范围分解为至少相等的一半、三分之一、四分之一、五分之一、十分之一等。作为非限制性示例，本文讨论的每个范围可以容易地分解为下三分之一、中三分之一和上三分之一等。如本领域技术人员还将理解的，所有语言，诸如“最多”、“至少”、“大于”、“小于”等，都包括所陈述的数字，并指代随后可分解为如上所述的子范围的范围。最后，如本领域技术人员将理解的，范围包括每个单独的成员。因此，例如，具有1-3个物品的组指代具有1、2或3个物品的组。类似地，具有1-5个物品的组指代具有1、2、3、4或5个物品等的组。
尽管出于清楚理解的目的，已经通过说明和实施例的方式详细地描述了前述发明，但是根据本发明的教导，对于本领域普通技术人员显而易见的是，在不脱离所附权利要求的精神或范围的情况下，可以对其进行某些改变和修改。
因此，前面仅仅说明了本发明的原理。应当理解，本领域的技术人员将能够设计出各种布置，尽管本文没有明确描述或示出，但是这些布置体现了本发明的原理并且包括在本发明的精神和范围内。此外，本文陈述的所有示例和条件性语言主要旨在帮助读者理解本发明的原理和发明人为促进本领域所贡献的构思，并且应被解释为不限于这些具体陈述的示例和条件。此外，本文中记述本发明的原理、方面和实施方案以及其特定实施例的所有陈述旨在涵盖其结构等同物和功能等同物两者。另外，这些等同物旨在包括当前已知的等同物和将来开发的等同物，即，所开发的执行相同功能的任何要素，而与结构无关。此外，本文所公开的任何内容都不旨在捐献给公众，而不管该公开内容是否在权利要求中明确陈述。
因此，本发明的范围不旨在限于本文所示和所述的示例性实施方案。相反，本发明的范围和精神由所附权利要求来体现。在权利要求书中，《美国法典》第35篇第112(f)节或《美国法典》第35篇第112(6)节被明确定义为，仅当在权利要求中的这种限制开始处陈述了确切短语“用于...的装置”或确切短语“用于...的步骤”时，才被援引用于该权利要求的限制；如果在权利要求中未使用这种确切短语作为限制，则不援引《美国法典》第35篇第112(f)节或《美国法典》第35篇第112(6)节。

Claims (16)

1.一种用于检测样品中是否存在SARS-CoV-2核衣壳蛋白的侧流分析(LFA)装置，所述LFA装置包括：
(a)样品接收区；
(b)缀合区，位于所述样品接收区下游并包含测试颗粒标记物，所述测试颗粒标记物包含与特异性结合所述SARS-CoV-2核衣壳蛋白的第一特异性结合成员和第二特异性结合成员缀合的标记物颗粒；和
(c)检测区，位于所述缀合区下游并包含固定化的捕获特异性结合成员，所述固定化的捕获特异性结合成员特异性结合所述SARS-CoV-2核衣壳蛋白。
2.根据权利要求1所述的LFA装置，进一步包括位于所述检测区下游的对照区。
3.根据权利要求2所述的LFA装置，其中，所述对照区包含对照抗原，并且所述装置进一步包含对照颗粒标记物，所述对照颗粒标记物包含与特异性结合所述对照抗原的对照特异性结合成员缀合的标记物颗粒。
4.根据权利要求2所述的LFA装置，其中，所述对照区包含与所述第一特异性结合成员和第二特异性结合成员结合的对照结合成员。
5.根据前述权利要求中任一项所述的LFA装置，进一步包括位于所述对照区下游的芯吸区。
6.根据前述权利要求中任一项所述的LFA装置，其中，所述标记物颗粒是反射性纳米颗粒。
7.根据权利要求6所述的LFA装置，其中，所述反射性纳米颗粒包括金属。
8.根据权利要求7所述的LFA装置，其中，所述金属包括金。
9.根据前述权利要求中任一项所述的LFA装置，其中，所述第一特异性结合成员、第二特异性结合成员和捕获特异性结合成员是抗体或其结合片段。
10.根据权利要求9所述的LFA装置，其中，特异性结合所述SARS-CoV-2核衣壳蛋白的所述第一特异性结合成员和第二特异性结合成员分别是兔类抗体和鼠类抗体。
11.根据权利要求10所述的LFA装置，其中，所述兔类抗体存在的量超过所述鼠类抗体的量。
12.根据前述权利要求中任一项所述的LFA装置，其中，特异性结合所述SARS-CoV-2核衣壳蛋白的所述捕获特异性结合成员是鼠类抗体。
13.一种检测样品中是否存在SARS-CoV-2核衣壳蛋白的方法，所述方法包括：
(a)将所述样品放置在侧流分析(LFA)装置的样品接收区上，所述侧流分析装置包括：
(i)所述样品接收区；
(ii)缀合区，位于所述样品接收区下游并包含颗粒标记物，所述颗粒标记物包含与特异性结合所述SARS-CoV-2核衣壳蛋白的第一特异性结合成员和第二特异性结合成员缀合的标记物颗粒；和
(iii)检测区，位于所述缀合区下游并包含固定化的捕获特异性结合成员，所述固定化的捕获特异性结合成员特异性结合所述SARS-CoV-2核衣壳蛋白；以及
(b)查询所述检测区是否存在标记物颗粒，以检测在所述样品中是否存在所述SARS-CoV-2核衣壳蛋白。
14.一种用于检测样品中是否存在SARS-CoV-2核衣壳蛋白的系统，所述系统包括：
(a)侧流分析(LFA)装置，其包括：
(i)样品接收区；
(ii)缀合区，位于所述样品接收区下游并包含颗粒标记物，所述颗粒标记物包含与特异性结合所述SARS-CoV-2核衣壳蛋白的第一特异性结合成员和第二特异性结合成员缀合的标记物颗粒；和
(iii)检测区，位于所述缀合区下游并包含固定化的捕获特异性结合成员，所述固定化的捕获特异性结合成员特异性结合所述SARS-CoV-2核衣壳蛋白；以及
(b)读取器，被配置为查询所述检测区是否存在标记物颗粒，以检测在所述样品中是否存在所述SARS-CoV-2核衣壳蛋白。
15.一种读取器，其被配置为查询侧流分析(LFA)装置的检测区是否存在标记物颗粒以检测样品中是否存在SARS-CoV-2核衣壳蛋白，其中所述LFA装置包括：
(a)样品接收区；
(b)缀合区，位于所述样品接收区下游并包含颗粒标记物，所述颗粒标记物包含与特异性结合所述SARS-CoV-2核衣壳蛋白的第一特异性结合成员和第二特异性结合成员缀合的标记物颗粒；和
(c)检测区，位于所述缀合区下游并包含固定化的捕获特异性结合成员，所述固定化的捕获特异性结合成员特异性结合所述SARS-CoV-2核衣壳蛋白。
16.一种用于检测样品中是否存在SARS-CoV-2核衣壳蛋白的试剂盒，所述试剂盒包括：
(a)侧流分析(LFA)装置，其包括：
(i)样品接收区；
(ii)缀合区，位于所述样品接收区下游并包含颗粒标记物，所述颗粒标记物包含与特异性结合所述SARS-CoV-2核衣壳蛋白的第一特异性结合成员和第二特异性结合成员缀合的标记物颗粒；和
(iii)检测区，位于所述缀合区下游并包含固定化的捕获特异性结合成员，所述固定化的捕获特异性结合成员特异性结合所述SARS-CoV-2核衣壳蛋白；以及
(b)样品获取部件，用于从受试者获取样品。
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