JP2023550688A - ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原側方流動アッセイ検出デバイス及びそれを使用するための方法 - Google Patents

Abstract

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質が試料中に存在するか否かを検出するための側方流動アッセイ（ＬＦＡ）デバイスが、提供される。ＬＦＡデバイスの態様は、試料受入領域と、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質に特異的に結合する第１の特異的結合メンバー及び第２の特異的結合メンバーにコンジュゲートされた標識粒子で作製された検査粒子標識を含む、試料受入領域から下流にあるコンジュゲート領域と、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質に特異的に結合する固定化捕捉特異的結合メンバーを含む、コンジュゲート領域から下流にある検出領域とを含む。また、ＬＦＡデバイスを使用する方法、並びにそれにおける使用のためのリーダー、システム、及びキットも、提供される。

Description

コロナウイルスは、エンベロープを持つ一本鎖プラス鎖ＲＮＡウイルスである。それらは、既知のＲＮＡウイルスの中で最大のゲノム（２６～３２ｋｂ）を有し、系統学的に４つの属（アルファ、ベータ、ガンマ、デルタ）に分割され、ベータコロナウイルスは、更に４つの系統（Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ）に細分化される。コロナウイルスは、ヒトを含む、鳥類及び哺乳類の広範囲に感染する。

６つの既知のヒトコロナウイルスのうち、４つ（ＨＣｏＶ－ＯＣ４３、ＨＣｏＶ－２２９Ｅ、ＨＣｏＶ－ＨＫＵ１、及びＨＣｏＶ－ＮＬ６３）は、ヒトで毎年循環し、概して軽度の呼吸器疾患を引き起こすが、重症度は、乳児、高齢者、及び免疫不全者においてより高くなる可能性がある。対照的に、中東呼吸器症候群コロナウイルス（ＭＥＲＳ－ＣｏＶ）及び重症急性呼吸器症候群コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ）は、それぞれ、ベータコロナウイルス系統Ｃ及びＢに属し、高病原性である。

２０１９年に、新型コロナウイルス（２０１９－ｎＣｏＶ／ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）は、呼吸器疾患の大流行を引き起こした。分類学的に、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、系統Ａ又はＣであると考えられている、ベータコロナウイルスである（Ｊａｉｍｅｓ ｅｔ ａｌ．，”Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ Ａｎａｌｙｓｉｓ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ Ｍｏｄｅｌｉｎｇ ｏｆ ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓｐｉｋｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｒｅｖｅａｌｓ ａｎ Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ Ｄｉｓｔｉｎｃｔ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｏｌｙｔｉｃａｌｌｙ Ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ Ｌｏｏｐ，”Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．（Ｍａｙ １，２０２０）４３２（１０）：３３０９－３３２５）。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２によって引き起こされる疾患であるＣＯＶＩＤ－１９は、肺炎、発熱、乾いた咳、頭痛、及び呼吸困難を含む、多くの臨床症状を発症し得る。場合によっては、疾患は、呼吸不全及び死亡に進行し得る（同上記文献）。

患者がＣＯＶＩＤ－１９に罹患しているか否かを判定するための診断検査は、呼吸器試料中のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２からの核酸の定性的検出のためのリアルタイムの逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ－ＰＣＲ）検査である。この検査は、患者試料中のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＲＮＡを同定するために使用され、陽性の検査結果は、患者が活性コロナウイルス感染を有することを示す。典型的なプロトコルでは、患者又は医療提供者は、綿棒を使用して患者の鼻又は咽喉から呼吸器試料を採取する。綿棒は、封止された無菌容器に入れられ、７２時間以内に検査室に移送される。検査室で、ウイルスＲＮＡは、綿棒から抽出され、そして、ウイルスＲＮＡがＤＮＡに逆転写され、次いで、ウイルスゲノムの領域に特異的なプライマーを使用して増幅される、ＲＴ－ＰＣＲが実行される。次いで、ＤＮＡの存在は、ＤＮＡに結合されたときに蛍光信号を提供するプローブで示され得る。ＲＴ－ＰＣＲ検査は、自己採取された鼻腔用綿棒検体を含む個々の試料に、又はプールされた試料とともに実施され得る。

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２検査についての現在の戦略は、時間がかかり、迅速な結果を提供しない、逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ－ＰＣＲ）を含む。関心があることは、ポイントオブケア環境において正確で迅速な結果を提供する、速くて信頼性が高いＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２検査デバイス及び方法である。

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質が試料中に存在するか否かを検出するための側方流動アッセイ（ＬＦＡ）デバイスが、提供される。ＬＦＡデバイスの態様は、試料受入領域と、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質に特異的に結合する第１の特異的結合メンバー及び第２の特異的結合メンバーにコンジュゲートされた標識粒子で作製される検査粒子標識を含む、試料受入領域から下流にあるコンジュゲート領域と、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質に特異的に結合する固定化捕捉特異的結合メンバーを含む、コンジュゲート領域から下流にある検出領域とを含む。また、ＬＦＡデバイスを使用する方法、並びにそれにおける使用のためのリーダー、システム、及びキットも、提供される。

本発明の実施形態によるＬＦＡデバイスの図を示す。 本発明の実施形態によるＬＦＡデバイスの図を示す。 本発明の実施形態によるＬＦＡデバイスの図を示す。 図１～図３に例示されるＬＦＡデバイスが、Ｖｅｒｉｔｏｒ（商標）リーダーで読み取られる様子を示す。

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質が試料中に存在するか否かを検出するための側方流動アッセイ（ＬＦＡ）デバイスが、提供される。ＬＦＡデバイスの態様は、試料受入領域と、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質に特異的に結合する第１の特異的結合メンバー及び第２の特異的結合メンバーにコンジュゲートされた標識粒子で作製される検査粒子標識を含む、試料受入領域から下流にあるコンジュゲート領域と、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質に特異的に結合する固定化捕捉特異的結合メンバーを含む、コンジュゲート領域から下流にある検出領域とを含む。また、ＬＦＡデバイスを使用する方法、並びにそれにおける使用のためのリーダー、システム、及びキットも、提供される。

本発明が詳細に記載される前に、本発明は、記載された特定の実施形態に限定されるのではなく、そのため、当然ながら変更可能であることが理解されるべきである。また、本発明の範囲は、添付の特許請求の範囲によってのみ限定されることになるため、本明細書で使用される用語は、特定の実施形態のみを説明する対象となるためのものであり、限定することが意図されるものではないことも理解されるべきである。

値の範囲が提供される場合、別段文脈が明らかに示さない限り、その範囲の上限と下限との間の下限の単位の１０分の１までの介在する各値、及び記述の範囲内の任意の他の記述の値又は介在する値が、本発明内に包含されることが理解される。これらのより小さな範囲の上限及び下限は、独立して、より小さな範囲に含まれ得、また、記述の範囲内の任意の特定の除外された制限に従うことを条件として、本発明内に包含される。記述の範囲が、制限の一方又は両方を含む場合、それらの含まれる制限の一方又は両方を除外する範囲もまた、本発明に含まれる。

数値に「約」という用語が先行するある特定の範囲が本明細書で提示される。「約」という用語は、本明細書では、それが先行する正確な数、並びにその用語が先行する数に近いか又はほぼそれである数に文字通りの支持を提供するために使用される。ある数が、具体的に列挙された数に近いか又はほぼその数であるかを決定する際に、列挙されていない数に近いか又はほぼその数は、提示される文脈において、具体的に列挙された数の実質的な同等性を提供する数であり得る。

別段定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本発明が属する分野の当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有する。また、本明細書に記載のものと同様の又は同等な任意の方法及び材料が、本発明の実施又は試験に使用され得るが、代表的な例示的な方法及び材料が以下に記載される。

本明細書で引用される全ての刊行物及び特許は、各個々の刊行物又は特許が、参照により組み込まれることが具体的かつ個々に示されたかのように、参照により本明細書に組み込まれ、引用される刊行物に関連する方法及び／又は材料を開示し説明するために参照により本明細書に組み込まれる。任意の刊行物の引用は、出願日以前のその開示についてのものであり、本発明が、先行発明の特徴によってそのような刊行物に先行する権利がないことを認めるものとして解釈されるべきではない。更に、提供される刊行物の日付は、実際の公開日とは異なり得、これらは独立して確認する必要があり得る。

本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形の「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈が明らかに示さない限り、複数の指示物を含むことに留意されたい。特許請求の範囲は、あらゆる任意選択的な要素を排除するように設計され得ることに更に留意されたい。したがって、この記述は、特許請求の範囲の要素の列挙に関連する「単独で」、「のみ」などのそのような排他的な用語の使用、又は「否定的」限定の使用の先行詞として機能することが意図される。

本開示を閲読すると当業者に明らかであるように、本明細書に記載及び例示される個々の実施形態の各々は、別個の構成要素及び特徴を有し、本発明の範囲又は趣旨から逸脱することなく、他のいくつかの実施形態のうちのいずれかの特徴から容易に分離され得るか、又は組み合わせられ得る。任意の列挙された方法は、列挙された事象の順序、又は論理的に可能な任意の他の順序で実行され得る。

装置及び方法は、機能的な説明を伴う文法的流動性のために記載されている、又は記載されるが、特許請求の範囲は、米国特許法第１１２条下で明示的に策定されない限り、「手段」又は「ステップ」制限の構築によって必ずしも制限されるものと解釈されるべきではなく、同等物の法制定基礎原則の下で特許請求の範囲によって提供される定義の意味及び同等物の完全な範囲を付与されるべきであり、特許請求の範囲が米国特許法第１１２条下で明示的に策定される場合、米国特許法第１１２条下で完全な法定同等物が付与されるべきであることを明示的に理解されたい。

側方流動アッセイデバイス
上記で要約されたように、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質が試料中に存在するか否かを検出するために構成された側方流動アッセイデバイスが、提供される。本明細書で使用される場合、「側方流動」という用語は、キャリアの平面に沿った液体の流れを指す。アッセイデバイスは、「側方流動」アッセイデバイスであるため、それらは、試料受入領域で関心がある試料を受け入れるように、そして試料が毛細管作用によって試料受入領域からコンジュゲート領域を通って検出領域へデバイスに沿って横方向にウィック（ｗｉｃｋ）されるように、試料がコンジュゲート領域を通って検出領域に毛細管作用によって横方向に移動するように提供されている。試料受入領域、コンジュゲート領域、及び検出領域は、試料領域からコンジュゲート領域を通って検出領域への毛細管流動を支持する材料で作製される毛細管流動メンバーの一部であり得る。毛細管流動メンバーは、任意の好都合な材料から製造され得る。好適な材料の実施例は、高吸収性又は吸水性材料を含み、ここで、関心がある吸水性材料は、これらに限定されないが、有機又は無機ポリマー、並びに天然及び合成ポリマーを含む。好適な高吸収性又は吸水性材料のより具体的な実施例は、無制限に、ガラス、ガラス繊維、セルロース、ナイロン、架橋デキストラン、未処理紙、多孔質紙、様々なクロマトグラフィー用紙、ニトロセルロース、ポリエステル又はセルロースとのニトロセルロースブレンド、レーヨン、アクリロニトリルコポリマー、及びプラスチックを含む。毛細管流動メンバー及び側方流動アッセイデバイスの全体的な構成は、変わり得るが、特定の実施形態では、毛細管流動メンバーは、ストリップ構成を有する。高吸収性又は吸水性材料がストリップとして構成されている場合、毛細管流動メンバーは、その幅よりも長い長さを有する。任意の実用的な構成が用いられ得るが、場合によっては、長さは、幅よりも、２倍以上などの、例えば１０倍以上の、２０倍以上を含む、１．５倍以上長くなっている。場合によっては、吸水性メンバーの長さは、１．０～１５ｃｍなどの、例えば２．０～１０ｃｍの、０．５～２０ｃｍの範囲であり、一方、幅は、０．５～２．５ｃｍなどの、例えば１～２ｃｍの、０．１～５．０ｃｍの範囲である。毛細管流動メンバーの厚さは、また、場合によっては、０．１～０．４ｃｍなどの、例えば０．１～０．２５ｃｍの、０．０１～０．０５ｃｍの範囲で変化し得る。

上記に示されるように、毛細管流動メンバーは、試料受入領域、コンジュゲート領域、及び検出領域を含み、これらの領域は、試料受入領域に添加された液体試料が、コンジュゲート領域を通って検出領域に、及び場合によっては、例えば、以下に更に記載されるように、更に下流領域、例えば、対照領域、ウィッキング（ｗｉｃｋｉｎｇ）領域／吸収性パッドなどに流れるか、又はウィックするように配列される。試料受入領域は、単に、毛細管流動メンバーの第１の領域、例えば、毛細管流動メンバーの近位端として見られ得る、一端部により近い位置に配置された領域であり得る。代替的に、試料受入領域は、毛細管流動メンバーとは異なるが、試料受入領域への試料の適用時に、毛細管流動メンバー内への試料の流体連通を提供するように構成され得る。試料受入領域は、様々な体積の試料を受け入れるように構成され得、場合によっては、試料受入領域は、５～２０μｌなどの、５０～２００μｌを含む、０．１～１０００μｌの範囲の体積を有する試料を受け入れるように構成され得る。

試料受入領域に加えて、本発明の側方流動アッセイデバイスは、コンジュゲート領域を更に含む。コンジュゲート領域は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質に特異的に結合する第１の特異的結合メンバー及び第２の特異的結合メンバーにコンジュゲートされた標識粒子で作製される検査粒子標識を含む領域である。検査粒子標識は、コンジュゲート領域における吸収性材料と非安定的に関連付けられている。「非安定的に関連付けられる」とは、検査粒子標識が、試料適用の前には、吸収性材料に対して静止し得るが、試料適用及び試料がコンジュゲート領域を通ってウィックする際には、検査粒子標識が、試料中に存在する分析物、例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質と反応して、毛細管作用によって毛細管流動メンバーの吸収性材料を通って試料とともに移動するために、自由であることを意味する。したがって、検査粒子標識は、バルク流体流れ力の下で吸収性材料を通って横方向に移動する。

コンジュゲート領域に存在する検査粒子標識は、互いに異なり（すなわち、異なる配列を有する）、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質に特異的に結合する、第１の特異的結合メンバー及び第２の特異的結合メンバーの両方と安定的に関連付けられた標識粒子を含む。第１の特異的結合メンバー及び第２の特異的結合メンバーは、検査粒子標識における標識粒子と安定的に関連付けられているため、それらは、本発明のＬＦＡデバイスのアッセイ条件下で、標識粒子から分離しない。標識粒子との特異的結合メンバーの安定した関連付けは、所望に応じて、共有結合又は非共有結合を介して達成され得る。

検査粒子標識の標識粒子は、所望に応じて変わり得る。標識粒子は、金属、例えば、金、又は着色されたガラス若しくはプラスチック（例えば、ポリスチレン、ポリプロピレン、ラテックスビーズ）などの様々な材料から製造され得る光学的に検出可能な粒子である。標識粒子は、直径が変わり得、標識粒子直径は、場合によっては、１～２５００ｎｍなどの１～５０００ｎｍの範囲であり得る。場合によっては、標識粒子は、反射性ナノ粒子、例えば、金反射性ナノ粒子などの金属反射性ナノ粒子である。「ナノ粒子」という用語は、本明細書で使用される場合、１～１０００ナノメートル（「ｎｍ」）の範囲における一次元を有する粒子を指す。本発明のナノ粒子は、任意の形状であり得る。特定の実施形態では、ナノ粒子は、球状である。

上記のように、検査粒子標識は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシド（すなわち、Ｎ）タンパク質に特異的に結合する第１の結合メンバー及び第２の結合メンバーと安定的に関連付けられている。「特異的結合」、「特異的に結合する」などの用語は、ＬＦＡにおいて存在し得る溶液又は反応混合物における他の分子又は部分と比較して、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質に優先的に直接結合する結合メンバーの能力を指す。特定の実施形態では、第１の結合メンバー及び第２の結合メンバーと、それらが結合複合体において互いに特異的に結合しているときにそれらが特異的に結合するＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質との間の親和性は、１０^－７Ｍ以下などの、１０^－８Ｍ以下を含む、例えば１０^－９Ｍ以下の、１０^－１０Ｍ以下を含む、１０^－１１Ｍ以下などの、例えば１０^－１２Ｍ以下の、１０^－６Ｍ以下のＫＤ（解離定数）によって特徴付けられ、場合によっては、ＫＤは、１０^－１４Ｍ以下などの、例えば１０^－１５Ｍ以下の１０^－１３Ｍ以下である。様々な異なる種類の特異的結合剤は、第１の特異的結合メンバー及び第２の特異的結合メンバーとして用いられ得る。場合によっては、第１の結合メンバー及び第２の結合メンバーは、抗体結合剤である。本明細書で使用されるような「抗体結合剤」という用語は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシド（すなわち、Ｎ）タンパク質に特異的に結合するために十分なポリクローナル抗体若しくはモノクローナル抗体又はその断片を含む。抗体断片は、例えば、単量体Ｆａｂ断片、単量体Ｆａｂ’断片、又は二量体Ｆ（ａｂ）’２断片であることができる。また、「抗体結合剤」という用語の範囲内では、キメラ抗体を産生するための重鎖及び軽鎖の定常領域を置換することによって、又は、ヒト化抗体を産生する定常領域及び可変領域のフレームワーク部分の両方の置換によって、一本鎖抗体分子（ｓｃＦｖ）又はモノクローナル抗体から産生されるヒト化抗体又はキメラ抗体のような、抗体工学によって産生される分子がある。場合によっては、第１の特異的結合メンバー及び第２の特異的結合メンバーは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質に特異的に結合するモノクローナル抗体である。場合によっては、粒子は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質に特異的に結合する３つ以上の特異的結合を有し得、そのような事例では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質に特異的に結合する特異的結合メンバーの数は、変わり得、場合によっては、３～５など、３～１０の範囲であり得る。場合によっては、特異的結合メンバーは、標的分析物の異なる抗原決定基に結合するように選択される。様々な抗体の量は、所望に応じて変わり得る。場合によっては、所与の抗体の量は、２．５～９７．５％の範囲である。場合によっては、異なる抗体の量は、同じである。更に他の実施形態では、様々な抗体の量は、異なる。

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質は、Ｄｕｔｔａ ｅｔ ａｌ．（２０２０）Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ９４（１３）：ｅ００６４７－２０；Ｚｅｎｇ ｅｔ ａｌ．（２０２０）Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ．５２７（３）：６１８－６２３、及びＫａｎｇ ｅｔ ａｌ．（２０２０）Ａｃｔａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａ Ｓｉｎｉｃａ Ｂ１０（７）：１２２８－１２３８に記載され、これらの開示は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。場合によっては、第１の結合メンバー及び第２の結合メンバーは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶヌクレオカプシドタンパク質と交差反応性であり得る。ＳＡＲＳ－ＣｏＶヌクレオカプシドタンパク質及び／又はＳＡＲＳ－ＣｏＶヌクレオカプシドタンパク質上の関心がある例示的な抗原決定基は、米国特許第７，６９６，３３０号、第７，８９７，７４４号、第７，６９６，３３０号、第８，３４３，７１８号、米国公開第２００８／０２６９１１５号、第２０１０／０１７２９１７号、第２００９／０２８０５０７号、第２００８／０２５４４４０号、第２００７／０１２８２１７号に記載され、その開示は、それらの全体が本明細書に参照により組み込まれる。そのような事例では、第１の結合メンバー及び第２の結合メンバーは、他のコロナウイルスヌクレオカプシドタンパク質、例えば、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ核タンパク質、ＨＣｏＶ－２２９Ｅ核タンパク質、ＨＣｏＶ－ＮＬ６３核タンパク質、ＨＣｏＶ－ＨＫＵ１（単離Ｎ５）核タンパク質、及びＨＣｏＶ－ＯＣ４３核タンパク質と交差反応しないことがある。

検査粒子標識の第１の特異的結合メンバー及び第２の特異的結合メンバーが抗体結合剤である場合、用いられ得る抗体結合剤の実施例は、これらに限定されないが、米国特許第７，６９６，３３０号に記載されるもの、並びに公開された米国特許出願公開第２０１６／０２３８６０１号、第２００９／０２８０５０７号、及び第２００６／０００３３４０号に記載されるものを含み、これらの開示は、参照により本明細書に組み込まれる。特定の実施形態では、抗体は、「哺乳類」であり、それらは、肉食動物（例えば、イヌ及びネコ）、げっ歯類（例えば、ネズミ、モルモット、及びラット）、並びに霊長類（例えば、ヒト、チンパンジー、及びサル）を含む、哺乳綱に属する生物から取得される。場合によっては、抗体は、ヒト、ネズミ（マウス）、又はラビット（ウサギ）抗体である。検査粒子標識の第１の結合メンバー及び第２の結合メンバーとして用いられ得る関心がある特異的抗体は、これらに限定されないが、ＳＡＲＳヌクレオカプシドタンパク質抗体（Ｎｏｖｕｓ）、抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシド抗体、クローン５０３（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（ＣＯＶＩＤ－１９）ヌクレオカプシド抗体［ＨＬ５５１１］（ジェネテックス）（ウサギモノクローナル）、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（ＣＯＶＩＤ－１９）ヌクレオカプシド抗体［ＨＬ４５５－ＭＳ］（ジェネテックス）（マウスモノクローナル）、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（ＣＯＶＩＤ－１９）ヌクレオカプシド抗体［ＨＬ３４４］（ジェネテックス）（ウサギモノクローナル）、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（ＣＯＶＩＤ－１９）ヌクレオカプシド抗体［ＨＬ５４１０］（ジェネテックス）（ウサギモノクローナル）、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ／ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドモノクローナル抗体（６Ｈ３）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）（マウスモノクローナル）、ＳＡＲＳ／ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２コロナウイルスヌクレオカプシドモノクローナル抗体（Ｅ１６Ｃ）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）（マウスモノクローナル）、ＳＡＲＳ／ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２コロナウイルスヌクレオカプシドモノクローナル抗体（５）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）（マウスモノクローナル）、ＳＡＲＳ／ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２コロナウイルスヌクレオカプシド組換えウサギモノクローナル抗体（１）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドキメラ組換えヒトモノクローナル抗体（１Ａ６）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、ＳＡＲＳコロナウイルスヌクレオカプシドモノクローナル抗体（１８Ｆ６２９．１）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）（マウスモノクローナル）、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドキメラ組換えヒトモノクローナル抗体（１Ａ６）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドモノクローナル抗体（ｂｃｎ１１）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）（ヒトモノクローナル）、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドモノクローナル抗体（ｂｃｎ０５）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）（ヒトモノクローナル）、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドモノクローナル抗体（ｂｃｎ１４）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）（ヒトモノクローナル）、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドモノクローナル抗体（ｂｃｎ１２）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）（ヒトモノクローナル）、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドモノクローナル抗体（ｂｃｎ１３）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）（ヒトモノクローナル）、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドモノクローナル抗体（ＡＲＣ２３７２）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）（ウサギモノクローナル）、２０１９－ｎＣｏＶヌクレオカプシド抗体（ＨＣ２００３）、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＮＰ抗体、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ／ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシド抗体、ウサギＭＡｂ Ｒ００４（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ）、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ／ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシド抗体、マウスＭＡｂ ＭＭ０５（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ）、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ／ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシド抗体、マウスＭＡｂ ＭＭ０８（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ）などを含む。

場合によっては、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質に特異的に結合する検査粒子標識の第１の特異的結合メンバー及び第２の特異的結合メンバーは、それぞれ、ラビット（ウサギ）及びマウス（ネズミ）抗体である。ウサギ抗体及びマウス抗体の量は、所望に応じて変わり得る。場合によっては、ウサギ抗体の量は、２．５～９７．５％の範囲であり、マウス抗体の量は、２．５～９７．５％の範囲である。場合によっては、ウサギ抗体及びマウス抗体の量は、同じである。更に他の実施形態では、ウサギ抗体及びマウス抗体の量は、異なる。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質に特異的に結合するウサギ及びマウスモノクローナル抗体の両方の具体例は、上記に提供される。いくつかのそのような実施形態では、ウサギ抗体は、Ｒ００４であり、マウス抗体は、ＭＭ０５（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ）である。いくつかのそのような実施形態では、ウサギ抗体の量は、マウス抗体の量を超え、場合によっては、第１のウサギ抗体の割合は、６０～９７％などの、例えば７５～９５％、８０～９０％などの、例えば８５％の、５０％超～９７．５％の範囲である。

上記で要約されたように、コンジュゲート領域からの下流は、検出領域である。検出領域は、デバイスの使用中に結果を読み取り得る毛細管流動メンバーの領域である。検出領域は、デバイスの試料受入領域から下流にあるいくらかの距離で配置される。「下流」とは、試料が毛細血管作用によって流れる横方向、すなわち、試料受入領域からの流体流の方向を意味する。試料受入領域と検出領域との間の距離は、場合によっては、例えば１～１５ｃｍなどの、及び５～１０ｃｍを含む、例えば１～５ｃｍの、０．３～１５ｃｍの範囲で変わり得る。

検出領域は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質に特異的に結合する固定化捕捉特異的結合メンバーを含む領域である。検出領域は、検出領域における毛細管流動メンバーの吸収性材料と安定的に関連付けられた捕捉特異的結合メンバーの量を含む。検出領域のサイズは、変わり得、場合によっては、検出領域は、０．０５～０．１ｃｍ^２などの、及び０．１～０．２ｃｍ^２を含む、０．０１～０．５ｃｍ^２の範囲の面積を有する。検出領域は、様々な異なる構成を有し得、構成は、所望に応じて、線、円、正方形、又は「＋」などのより複雑な形状であり得る。場合によっては、検出領域は、固定化捕捉特異的結合メンバーのラインとして構成され、ラインの寸法は、変わり得、場合によっては、ラインは、３～７ｍｍなどの、例えば４～６ｍｍの、２～１０ｍｍ長さの範囲である。上記に示されるように、検出領域は、毛細管流動メンバーの吸収性材料に安定的に関連付けられた捕捉特異的結合メンバーを含む。「安定的に関連付けられる」とは、捕捉特異的結合メンバー及び吸収性材料が、使用条件下、例えば、アッセイ条件下で、空間において互いに相対的な位置を維持することを意味する。したがって、捕捉特異的結合メンバー及び毛細管流動メンバーの吸収性材料は、互いに非共有結合的又は共有結合的に安定的に関連付けられることができる。非共有結合性関連付けの実施例は、非特異的吸着、静電（例えば、イオン－イオン対相互作用）、疎水性相互作用、水素結合相互作用に基づく結合などを含む。共有結合の実施例は、捕捉特異的結合メンバーと吸収性材料上に存在する官能基との間に形成される共有結合を含む。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質に特異的に結合する検出領域の固定化捕捉特異的結合メンバーは、上記の検査粒子標識の第１の特異的結合メンバー及び第２の特異的結合メンバーとは異なる、明確な特異的結合メンバーである。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質に特異的に結合する検出領域の固定化捕捉特異的結合メンバーは、そのような特異的結合メンバーの実施例が上記に記載されている場合、変わり得る。実施形態では、捕捉特異的結合メンバーは、捕捉特異的結合メンバー、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質、及び検査粒子標識のサンドイッチが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質がアッセイされる試料中に存在するときに産生され得るように、検査粒子標識の第１／第２の特異的結合メンバーと同時にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質に結合することができる、特異的結合メンバーである。場合によっては、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質に特異的に結合する検出領域の固定化捕捉特異的結合メンバーは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ／ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシド抗体、Ｍｏｕｓｅ ＭＡｂ ＭＭ０８（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ）である。

場合によっては、側方流動アッセイデバイスは、対照領域を更に含み得る。対照領域は、検出領域から下流に位置する。対照領域は、固定化された対照剤を含有する。固定化された対照剤は、対照結合対を形成するために、移動対照結合剤に特異的に結合する。関心がある対照結合対は、内部対照、すなわち、分析物測定結果が個々の検査ストリップ上で比較され得る対照として機能する。場合によっては、対照領域は、対照抗原を含むものとして記載され得、ＬＦＡデバイスは、例えば、試料受入領域及び／又はコンジュゲート領域に、対照抗原に特異的に結合する対照特異的結合メンバーにコンジュゲートされた、検査粒子標識の標識粒子と同一であり得る標識粒子を含む移動対照粒子標識を含み得る。一般に、任意の好都合な対照抗原／対照特異的結合メンバー対は、使用されることができるが、場合によっては、試料中に存在しない、又は試料中に存在する化合物と免疫学的に交差反応しない対照抗原が用いられる。関心がある好適な対照結合対の実施例は、これらに限定されないが、ビオチン／抗ビオチンＩｇＧ、チキンＩｇＹ／抗チキンＩｇＹなどを含む。更に他の実施形態では、対照領域は、検査標識粒子の第１の特異的結合メンバー及び第２の特異的結合メンバーに、例えば、第１の特異的結合メンバー及び第２の特異的結合メンバーのＦｃ領域に結合する対照結合メンバーを含み得る。

任意選択的に、側方流動アッセイデバイスは、例えば、検出領域及び任意の対照領域から下流の吸収性パッドの形態で、例えば、試料受入領域から遠位の端部で、吸収性パッドが毛細管流動メンバーを通って流れた流体及びその中に存在する試薬を吸収するように構成されている、ウィッキング領域を含み得る。望まれる場合、側方流動アッセイデバイスの構成部分は、好適なハウジングにおいて存在し得る。ハウジングは、毛細管流動メンバー及び他のアッセイ構成要素を囲むように構成され得る。ハウジングは、任意の好適な材料から製造され得、材料は、吸水性メンバー及びその中に収容された他の構成要素の整合性を維持するために十分に剛性がある材料であり得、また、使用中にハウジングに接触する様々な流体及び試薬に対してが活性であり得る。関心があるハウジング材料は、プラスチックを含む。ハウジングは、試料アプリケーション領域への試料アプリケーションを可能にするように構成されたポート又は類似の構造、及び検出領域を見ることを可能にするように構成されたウィンドウを含み得る。ハウジングは、マーキング、例えば、検出領域及び対照領域マーキング（例えば、「Ｔ」及び「Ｃ」）などを更に含み得る。ハウジングは、バーコードリーダーによってスキャンされたときに、テスターに情報を伝達し得る外側のバーコードを含み得る。例えば、バーコードは、実行されている検査の種類及び／又は個々の側方流動アッセイデバイスを識別し得る。

図１は、本発明の任意の実施形態によるデバイスの俯瞰図を提供する。図１では、デバイス１００は、試料を受け入れるためのポート１１０と、検出領域の試料を見るためのウィンドウ１２０とを含む。また、示されているものは、ウィンドウ１２０を介してそれぞれ見ることが可能な検出領域の検査ライン１２２及び対照ライン１２４のマーカーである。加えて、デバイスは、第１の端部でデバイスを操作する際に使用するためのハンドル１３０と、反対指示部で分析器具との使用のためのガイダンスを提供するための矢印１４０とを含む。図２は、図１に示されるデバイスの基部２００の図を提供する。図２では、基部２００は、側方流動アッセイ検査ストリップ２２０を保持するための中央領域２１０を含む。側方流動アッセイ検査ストリップ２２０は、試料受入領域２３０と、コンジュゲート領域２４０と、検出領域２５０と、吸収性パッド２６０とを含む。図３は、図１及び２に示されるデバイスの斜視図を提供する。

本発明のデバイスは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質に加えて、１つ以上の追加の分析物をアッセイするように構成され得る。デバイスがアッセイするように構成され得る追加の分析物は、これらに限定されないが、関心がある生物学的又は環境物質、インフルエンザウイルス抗原などの、例えば、インフルエンザＡウイルス、インフルエンザＢウイルス、又はインフルエンザＣウイルスの、ウイルス抗原、並びにこれらの組み合わせを含む。側方流動デバイスにおけるそのような分析物の検出に関する更なる詳細は、ＰＣＴ出願公開第ＷＯ２０１９／２４５７４４号において提供され、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。

方法
上記で要約されたように、本発明の態様は、また、例えば上述のように、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質が試料中に存在するか否かを検出するために、本発明の側方流動アッセイデバイスを使用する方法を含む。したがって、所与の試料がＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質を含むか否かを判定する方法が、提供される。言い換えれば、試料がＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質を含むか、又は含まないかを判定する方法が、提供される。「判定すること」とは、試料における構成要素、例えば、ヌクレオカプシドタンパク質に関連付けられる信号について試料をアッセイすることを意味し、信号の存在は、その構成要素が試料において存在することを示す。判定することは、視覚的又は器具的手段によって信号を取得することを含み得る。いくつかの場合には、判定することは、試料から、例えば、試料における構成要素から信号を検出することを含み、ここで、信号は、構成要素が試料において存在することを示す。

本発明の方法を実施することにおいて、関心がある試料は、上述のような側方流動アッセイデバイスの試料受入領域に適用される。場合によっては、試料は、例えば、これらの構成要素のいずれか又は両方が上述のようなデバイスに既に存在しない場合、ある量の検査粒子標識及び／又は対照粒子標識と組み合わされる。試料をこれらのアッセイ構成要素のいずれか又は両方と組み合わせるときに、組み合わせは、任意の好都合なプロトコルを使用して達成され得る。これらの薬剤の量は、試料と組み合わされるときに、例えば、当技術分野で既知の標準的な方法を介して、所望の量が容易に判定されて、変わり得る。そのような事例では、所与のＬＦＡデバイスは、例えば、上述のように、コンジュゲート領域を含まなくてもよい。

試料受入領域に適用される試料の量は、アッセイの所望の側方流動及び操作性を提供するために十分である限り、変わり得る。試料は、例えば、ドロッパー、ピペット、シリンジなどを介して、任意の好都合なプロトコルを使用して試料受入領域に適用され得る。場合によっては、試料は、例えば、以下に記載されるように、試料の取得に使用される液体容器などの試料取得デバイスから直接適用される。したがって、本発明の方法の最初のステップは、試料におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質を検出するように構成された側方流動アッセイデバイスの試料受入領域に試料を適用することである。試料を適用することに加えて、方法は、毛細管流動メンバーを通る十分な流体流を提供するために、一定量の好適な液体、例えば、緩衝液を適用することを更に含み得る。任意の好適な液体は、これらに限定されないが、緩衝液、細胞培養培地（例えば、ＤＮＥＭ）などを含んで、用いられ得る。関心がある緩衝剤は、これらに限定されないが、トリス、トリシン、ＭＯＰＳ、ＨＥＰＥＳ、ＰＩＰＥＳ、ＭＥＳ、ＰＢＳ、ＴＢＳなどを含む。所望に応じて、洗剤は、液体において存在し得、例えば、ＮＰ－４０又はＴＷＥＥＮ（商標）洗剤であり得る。いくつかの実施形態では、生体試料は、試料緩衝液又は抽出緩衝液に添加され、混合され、得られた混合物は、側方流動アッセイデバイスの試料受入領域に適用される。

試料の適用に続いて、試料は、毛細管流動メンバー及びその様々な領域、例えば、コンジュゲート領域及び検出領域を通って横方向に流れることが可能にされ、検出領域は、次いで、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質が非診断試料中に存在するか否かを判定するために読み取られる。検出領域は、試料適用に続いて所定の期間後に読み取られ得、この期間は、１分～４５分などの、例えば５分～３０分の、１０分～２０分を含む、例えば１５分の、１０秒～１時間の範囲であり得る。

検出領域は、検査粒子標識の標識粒子を検出するように構成されたプロトコルを使用して読み取られる。いくつかの実施形態では、色の変化は、反射率リーダーを使用して測定されることができる。いくつかの実施形態では、反射率リーダーは、蛍光、又は任意の波長の電磁放射を含む反射光を使用して検査ストリップを読み取るように適合された器具を指す。反射率は、光検出器又は電荷結合ダイオード（ＣＣＤ）などの他の検出器を使用して検出されることができる。いくつかの実施形態では、リーダーは、Ｖｅｒｉｔｏｒ（商標）システム（Ｂｅｃｔｏｎ、Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ）のリーダーを含む。Ｖｅｒｉｔｏｒ（商標）システム４００で読み取られている図１～図３に例示されるデバイス１００の例示が、図４に示される。いくつかの実施形態では、リーダーは、Ｓｏｆｉａ又はＳｏｆｉａ２ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ Ａｎａｌｙｚｅｒ（Ｑｕｉｄｅｌ）と、ＬｕｍｉｒａＤｘ Ｔｅｓｔ Ｓｔｒｉｐｓから蛍光を読み取るためのＬｕｍｉｒａＤｘ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ（ＬｕｍｉｒａＤｘ）と、ＢｉｎａｘＮｏｗ抗原カードを読み取るためのＡｌｅｒｅ Ｒｅａｄｅｒ（Ａｂｂｏｔｔ）とを含む。上述のように、本発明のＬＦＡデバイスは、対照領域を含み得る。そのような事例では、本発明の方法は、例えば、検出領域を読み取るために用いられる反射率リーダーで、そこから信号を取得するために対照領域を読み取ることを更に含む。

所望の場合、方法は、対照試料、例えば、陽性又は陰性対照を、対照側方流動アッセイデバイスの試料受入領域に適用し、結果を取得するために対照側方流動アッセイデバイスの検出領域を読み取ることを更に含み得る。これらの実施形態では、対照側方流動アッセイデバイスは、検査側方流動アッセイデバイスと同一（例えば、検査側方流動デバイスと同じ製造ロットからの第２の側方流動デバイス）である。陽性対照試料は、検出可能な量のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質を含有することが知られている流体試料である。陰性対照試料は、検出可能な量のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質を含有しないことが知られた流体試料である。したがって、これらの実施形態は、検査側方流動アッセイデバイスと同一の側方流動アッセイデバイスを使用して、完全な陽性及び／又は陰性対照アッセイを実行することを用いる。

本発明の方法は、定性的又は定量的結果を提供し得る。定性的結果は、分析物がアッセイされる試料において存在するか否かの単純な「はい」又は「いいえ」の判定を提供する結果を含む。定性的結果は、また、試料における分析物の量が所定の閾値を超えた場合に陽性である結果を含む。対照的に、定量的結果は、アッセイされる試料において存在するＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質の量のある程度の測定を提供する。したがって、定量的結果は、アッセイされる試料において存在するＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質の量の少なくとも近似値を提供する。定量的結果について提供するために、検出領域は、同じ捕捉プローブの同じ量又は異なる量を含む２つ以上の異なる捕捉プローブ領域を含み得る。したがって、試料における分析物の量が、第１の捕捉領域で捕捉されることができる分析物の量を超える場合、残りの遊離分析物は、第２の捕捉領域に移動する。両方の領域からの得られた陽性結果は、試料における分析物の量の定量的測定を提供する。各々が異なる（減少するなどの）量の捕捉プローブを有する２つ以上の捕捉領域の勾配であり得る、一連の領域を有することによって、試料における分析物の定量的測定値は、取得され得る。代替的に、定量的測定は、密度測定によって取得されることができる。この場合、１つの捕捉領域のみが、必要である。

本発明の実施形態によるアッセイされる試料は、変わり得る。試料の実施例は、様々な流体又は固体試料を含み得る。場合によっては、試料は、対象からの体液試料であることができる。試料は、水性試料又は気体試料であることができる。場合によっては、固体又は半固体試料が、提供されることができる。試料は、対象から採取された組織及び／又は細胞を含むことができる。試料は、生体試料であることができる。生体試料の例は、これらに限定されないが、血液、血清、血漿、鼻腔用綿棒又は鼻咽頭洗浄液、唾液、尿、胃液、脊髄液、涙、便、粘液、汗、耳垢、油、腺分泌物、脳脊髄液、組織、精液、膣液、腫瘍組織由来の間質液、眼液、脊髄液、咽喉綿棒、呼吸、髪、指の爪、皮膚、生検、胎盤液、羊水、血液、脳髄液、空洞液、痰、膿、微生物叢、胎便、乳房乳及び／又は他の排泄物を含むことができる。試料は、鼻咽頭洗浄液を含み得る。対象の組織試料の実施例は、これらに限定されないが、結合組織、筋肉組織、神経組織、上皮組織、軟骨、癌性試料、又は骨を含み得る。試料は、ヒト又は動物から提供され得る。試料は、マウス、サル、ヒト、家畜、スポーツ動物、又はペットなどの哺乳動物、脊椎動物から提供され得る。試料は、生きている又は死んだ対象から採取され得る。試料は、対象から新鮮に採取され得るか、又は何らかの形態の前処理、保管、又は輸送を受けていることがあり得る。特定の実施形態では、試料源は、「哺乳動物」又は「哺乳類」であり、これらの用語は、肉食類（例えば、イヌ及びネコ）、げっ歯類（例えば、マウス、モルモット、及びラット）、及び霊長類（例えば、ヒト、チンパンジー、及びサル）を含む、哺乳網に属する生物を記載するために広く使用される。場合によっては、被験者はヒトである。方法は、両方の性別のヒト対象から、発達の任意の段階（すなわち、新生児、乳幼児、年少者、青年、成人）で取得された試料に適用され得、特定の実施形態では、ヒト対象は、年少者、青年、又は成人である。

本発明の方法は、対象から試料を取得することを含み得る。例えば、検査される試料が、鼻咽頭試料又は検体、例えば、鼻腔用綿棒である場合、方法は、綿棒、鼻咽頭洗浄液などを使用して、対象から試料を取得することを含み得る。場合によっては、対象から試料を取得することは、二重鼻孔採取方法を使用して、対象から鼻腔用綿棒検体を取得することを含む。この方法の実施形態では、鼻腔用綿棒は、まず、対象の１つの鼻孔に挿入される。綿棒の先端は、鼻孔の端から２．５ｃｍ（１インチ）まで挿入される。綿棒は、粘液及び細胞の両方が採取されることを確実にするために、鼻孔の内側の粘膜に沿って５回回転される。次いで、同じ綿棒は、適切な試料が両方の鼻孔から採取されることを確実にするために、他の鼻孔についてこのプロセスを繰り返して使用される。次いで、綿棒は、鼻腔から取り出される。

対象から鼻腔用綿棒などの試料の取得に続いて、試料は、ＬＦＡデバイスの試料受入領域への適用の前に、所望に応じて処理され得る。例えば、試料は、検査のために試料を調製するために、水性媒体において洗剤、防腐剤などと組み合わせられ得る。場合によっては、試料は、Ｖｅｒｉｔｏｒ（商標）（Ｂｅｃｔｏｎ、Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ）試料採取システムを使用して採取される。そのような事例では、キャップは、まず、Ｖｅｒｉｔｏｒ（商標）抽出試薬チューブ／先端から取り外され、次いで、採取された鼻咽頭検体を伴う綿棒は、チューブに挿入され、続いて、綿棒をチューブに提供された流体において上下に１５秒間投下し、チューブから内容物が飛び散らないように注意する。次いで、綿棒は、綿棒から液体を抽出するために、チューブの側面を絞りながらチューブから取り出される。次いで、取り付けられた先端は、処理された試料を含有する抽出試薬チューブにしっかりと押し付けられる（捩じり又は捻りは必要とされない）。次いで、内容物は、チューブの底部を旋回又は軽くはじくことによって、徹底的に混合される。

本発明の実施形態は、所与の試料がＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質を含有するか否かの迅速で信頼性が高い判定を提供する。結果は、本発明の実施形態では、ＬＦＡデバイスの試料受入領域に試料を適用してから、２０分以内などの、１５分以内を含む、３０分以内に取得されることができる。方法の実施形態は、７５％以上などの、８０％以上を含む、例えば８４％以上の、７０％以上のＰＰＡ（陽性一致率＝真陽性／真陽性＋偽陰性）、９５％以上などの、１００％を含む、９０％以上のＮＰＡ（陰性一致率＝真陰性／真陰性＋偽陽性）及び９５％以上などの、９８％以上を含む、９０％以上のＯＰＡ（全体一致率＝真陽性＋真陰性／全試料）を提供する。本方法の実施形態は、１．４×１０^２ＴＣＩＤ_５０／ｍＬ以下の検出限界（ＬＯＤ）を提供する。本方法の実施形態は、ヒトコロナウイルス２２９Ｅ（熱不活性化）、ヒトコロナウイルスＯＣ４３、ヒトコロナウイルスＮＬ６３、アデノウイルス、ヒトメタニューモウイルス、パラインフルエンザウイルス１、パラインフルエンザウイルス２、パラインフルエンザウイルス３、パラインフルエンザウイルス４、インフルエンザＡ、インフルエンザＢ、エンテロウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、ライノウイルス、ＳＡＲＳコロナウイルス、ＭＥＲＳコロナウイルス、インフルエンザ菌、肺炎連鎖球菌、化膿性連鎖球菌、カンジダアルビカンス、プールされたヒト鼻腔洗浄液、百日咳菌、マイコプラズマ肺炎菌、クラミジア肺炎菌、及び在郷軍人病菌を含むが、これらに限定されない、様々な潜在的な交差汚染エンティティとの交差反応性を示さない。

本発明の実施形態の方法は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質に加えて、１つ以上の追加の分析物についてアッセイすることを含み得る。本発明の実施形態によりアッセイされ得る追加の分析物は、これらに限定されないが、関心がある生物学的又は環境物質、インフルエンザウイルス抗原などの、例えば、インフルエンザＡウイルス、インフルエンザＢウイルス、又はインフルエンザＣウイルスの、ウイルス抗原、並びにこれらの組み合わせを含む。側方流動デバイスにおけるそのような分析物の検出に関する更なる詳細は、ＰＣＴ出願公開第ＷＯ２０１９／２４５７４４号において提供され、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。

有用性
主題のデバイス及び方法は、試料におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質の検出が望まれる臨床及び研究用途での使用を見出す。本発明の実施形態は、迅速で信頼性の高いＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２検査を提供する。本発明の実施形態は、簡単に操作可能なハンドヘルド器具において、ケアの時点でのラボ品質の結果を提供する。

キット
本開示の態様は、また、キットを含む。キットは、主題の方法のいずれかを実施するために好適であり得る。キットは、例えば上述のように、例えば２～５０の、５～３０などの、複数の側方流動アッセイデバイスを含む１つ以上を含み得る。キットは、試料取得デバイス、例えば、鼻腔用綿棒／液体容器（例えば、抽出チューブの形態における（チューブは、洗剤、防腐剤などを含む水性液体などの試薬液体を含み得る））、例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質を含む陽性対照綿棒の形態における陽性対照、例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質を含まない陰性対照綿棒の形態における陰性対照、など、１つ以上の追加のアッセイ構成要素を更に含み得るが、これらに限定されない。場合によっては、本発明のキットは、５～３０個などの、２～５０個の側方流動アッセイデバイスと、５～３０個などの、２～５０個の試料取得構成要素（例えば、鼻腔用綿棒／抽出チューブの形態における）と、陽性対照綿棒と、陰性対照綿棒とを含む。キットの様々な構成要素は、別個の容器において存在し得、又はそれらの一部若しくは全部は、同じ容器に事前に組み合わせられ得る。容器は、構成要素、例えば、ホイルパウチなどの無菌性を維持するように構成され得る。したがって、キット構成要素は、無菌であり得、ホイルポーチなどの１つ以上の無菌容器において存在し得る。キット構成要素は、任意の好都合な形態のパッケージ、例えば、所望に応じて、箱、ポーチ、又は他の種類のパッケージにおいて組み合わされ得る。

上記の構成要素に加えて、主題のキットは、（特定の実施形態では）主題の方法を実施するための説明書を更に含み得る。これらの説明書は、様々な形態で主題のキット内に存在し得、そのうちの１つ以上が、キット内に存在し得る。これらの説明書が存在し得る１つの形態は、好適な媒体又は基板、例えば、情報が印刷される１枚以上の紙、キットのパッケージ、添付文書などに印刷される情報としてである。これらの説明書の更に別の形態は、情報が記録されたコンピュータ可読媒体、例えば、ディスケット、コンパクトディスク（ＣＤ）など、ポータブルフラッシュドライブなどである。存在し得る、これらの説明書の更に別の形態は、離れたサイトで情報にアクセスするために、インターネットを介して使用され得るウェブサイトアドレスである。

以下の実施例は、例示として提供され、限定として提供されるものではない。

Ｉ．コロイド金コンジュゲート体の比較
検査コロイド金コンジュゲート体は、８５％抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体Ｒ００４（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ）及び１５％抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体ＭＭ０５（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ）で作製され、対照コロイド金コンジュゲート体は、１００％抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体Ｒ００４を使用して作製された。２つの側方流動アッセイ（ＬＦＡ）、すなわち、検査ＬＦＡ及び対照ＬＦＡは、それぞれ、同じ細片化ニトロセルロースメンブレン並びに検査及び対照コロイド金コンジュゲート体を使用して作製された。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２陰性鼻汁及び鼻腔用綿棒臨床試料は、抽出試薬において抽出され、抽出された試料は、検査及び対照ＬＦＡに適用された。結果は、２つの異なる抗体、すなわち、Ｒ００４及びＭＭ０５を含有する検査コロイド金コンジュゲート体を用いた検査ＬＦＡアッセイが、１つのみの抗体、すなわち、Ｒ００４を含有する対照コロイド金コンジュゲート体を用いた対照ＬＦＡアッセイと比較して、より良好な特異性、より少ない偽陽性結果を有したことが示された。

ＩＩ．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の迅速検出のためのＶｅｒｉｔｏｒ（商標）システム
Ａ．概要
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の迅速検出のためのＢＤ Ｖｅｒｉｔｏｒ（商標）システムは、ＣＯＶＤ－１９が疑われる徴候及び症状を有する患者から採取された呼吸器検体におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原の有無を直接検出するための迅速（およそ１５分）クロマトグラフィーデジタル免疫測定法である。

Ｂ．手順の原則
ＢＤ Ｖｅｒｉｔｏｒ（商標）システムは、呼吸器検体から処理された試料における病原性微生物からの抗原の定性的検出のために、専用の光電子解釈器具及び免疫クロマトグラフィーアッセイを用いる。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の迅速検出のためのＢＤ Ｖｅｒｉｔｏｒ（商標）システムは、ＣＯＶＩＤ－１９が疑われる感染徴候及び症状を有する患者からの呼吸器試料におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質の有無を検出するように設計されている。検体が処理され、検査デバイスに追加されるときに、検体において存在するＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原は、検査ストリップにおける検出器粒子にコンジュゲートされた抗体に結合する。抗原コンジュゲート複合体は、検査ストリップを横断して反応エリアに移動し、膜に結合された一連の抗体によって捕捉される。陽性結果は、
抗原コンジュゲート体がアッセイデバイス上の検査「Ｔ」位置及び対照「Ｃ」位置に堆積されたときに、ＢＤ Ｖｅｒｉｔｏｒ（商標）Ｐｌｕｓ Ａｎａｌｙｚｅｒによって判定される。本器具は、客観的な結果を提供するために、非特異的結合を分析して修正し、肉眼によって認識されない陽性を検出する。

Ｃ．材料
１．キット構成要素
以下の構成要素は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２キットの迅速検出のためのＢＤ Ｖｅｒｉｔｏｒシステムに含まれる。

２．分析器
ＢＤ Ｖｅｒｉｔｏｒ（商標）Ｐｌｕｓ Ａｎａｌｙｚｅｒ（カタログ番号２５６０６６）
Ｃ．臨床性能
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の迅速検出のためのＢＤ Ｖｅｒｉｔｏｒ（商標）システムの性能は、ＣＯＶＩＤ－１９が疑われる個々の症状がある患者（発症後５日以内）から前向きに採取及び登録された２２６本の直接鼻腔用綿棒で確立された。試料は、米国全土の２１の地理的に多様な地域において資格がある人員によって採取された。

鼻腔用綿棒は、二重鼻孔法に従って採取され、採取デバイスの添付文書に記載されているように取り扱われた。検体は、採取の３０分以内に凍結され、検査されるまで保管された。所定の日付範囲内の全ての検体は、選択され、次いで盲検化方式で順次検査された。ＢＤ Ｖｅｒｉｔｏｒ（商標）Ｓｙｓｔｅｍ Ａｓｓａｙの性能は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の検出のための緊急使用承認分子（ＲＴ－ＰＣＲ）検査で検査された３ｍＬのウイルス輸送培地に貯蔵された鼻咽頭又は中咽頭綿棒の結果と比較された。結果は、以下の表１に提供される。

Ｄ．検出限界（ＬＯＤ）（分析感度）
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の迅速検出のためのＢＤ Ｖｅｒｉｔｏｒ（商標）システムについてのＬＯＤは、ガンマ線照射によって不活性化されたウイルス試料の制限希釈を使用して確立された。材料は、２．８×１０^５ＴＣＩＤ_５０／ｍＬの濃度で供給された。直接鼻腔用綿棒を使用したときに、アッセイのＬＯＤを推定するように設計された、この研究では、出発物質は、健康なドナーから取得されたプールされたヒト鼻腔マトリックスの体積にスパイクされ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の陰性が確認された。最初の範囲発見試験は、１０倍希釈シリーズを使用して、３通り検査デバイスが実行された。各希釈で、５０μＬの試料は、綿棒に添加され、次いで、患者の鼻腔用綿棒検体に適切な手順を使用してＢＤ Ｖｅｒｉｔｏｒ（商標）アッセイで検査された。濃度は、３つの陽性結果を与えるための最後の希釈と、３つの陰性結果が与えられるための最初の希釈との間で選択された。この濃度を使用して、ＬＯＤは、２倍希釈シリーズで更に精製された。次いで、１００％陽性を示す最後の希釈液は、同じ方法で検査された追加の２０回の繰り返しにおいて検査された。結果は、以下の表２に提供される。

Ｅ．交差反応性（分析特異性）
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の迅速検出のためのＢＤ Ｖｅｒｉｔｏｒ（商標）システムの交差反応性は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の迅速検出のためのＢＤ Ｖｅｒｉｔｏｒ（商標）システムと潜在的に交差反応する可能性がある高蔓延呼吸器病原体のパネルを検査することによって評価された。各微生物／ウイルス対は、３通り検査された。各微生物の最終濃度は、以下の表３に文書化されている。

湿潤検査に利用できなかった生物のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２との交差反応性の可能性を推定するために、国立バイオテクノロジー情報センター（ＮＣＢＩ）によって管理されるＢａｓｉｃ Ｌｏｃａｌ Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ Ｓｅａｒｃｈ Ｔｏｏｌ（ＢＬＡＳＴ）を使用したインシリコ（Ｉｎ ｓｉｌｉｃｏ）分析は、タンパク質配列相同性の程度を評価するために使用された。

・ニューモシスチス肺炎菌について、配列類似性の１つの範囲は、配列の９％にわたって４５．４％の相同性を示し、ＢＤ Ｖｅｒｉｔｏｒ（商標）サンドイッチ免疫測定法における交差反応性を非常に低くする。

・タンパク質配列相同性は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２と結核菌との間に見られず、相同性に基づく交差反応性は、除外されることができる。

・ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質とヒトコロナウイルスＨＫＵ１との比較は、相同性についての唯一の可能性がＨＫＵ１ヌクレオカプシドリンタンパク質であることが明らかになった。相同性は、比較的低く、配列の８２％にわたって３６．７％であるが、交差反応性は、除外されることはできない。

Ｆ．高用量フック効果
高用量フック効果は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２検査の迅速検出についてのＢＤ Ｖｅｒｉｔｏｒ（商標）システムを用いたガンマ不活性化ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の最大２．８×１０^５ＴＣＩＤ_５０／ｍＬまで観察されなかった。

添付の特許請求の範囲にかかわらず、本開示は、また、以下の付記によって画定される。

１．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質が試料中に存在するか否かを検出するための側方流動アッセイ（ＬＦＡ）デバイスであって、
（ａ）試料受入領域と、
（ｂ）試料受入領域から下流にあり、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質に特異的に結合する第１の特異的結合メンバー及び第２の特異的結合メンバーにコンジュゲートされた標識粒子を含む検査粒子標識を含むコンジュゲート領域と、
（ｃ）コンジュゲート領域から下流にあり、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質に特異的に結合する固定化捕捉特異的結合メンバーを含む検出領域と
を含む、ＬＦＡデバイス。
２．検出領域から下流にある対照領域を更に含む、付記１に記載のＬＦＡデバイス。
３．対照領域は、対照抗原を含み、ＬＦＡデバイスは、対照抗原に特異的に結合する対照特異的結合メンバーにコンジュゲートされた標識粒子を含む対照粒子標識を更に含む、付記２に記載のＬＦＡデバイス。
４．対照領域は、第１の特異的結合メンバー及び第２の特異的結合メンバーに結合する対照結合メンバーを含む、付記２に記載のＬＦＡデバイス。
５．対照領域から下流にあるウィッキング領域を更に含む、付記１～４のいずれか一つに記載のＬＦＡデバイス。

６．標識粒子は、反射性ナノ粒子である、付記１～５のいずれか一つに記載のＬＦＡデバイス。
７．反射性ナノ粒子は、金属を含む、付記６に記載のＬＦＡデバイス。
８．金属は、金を含む、付記７に記載のＬＦＡデバイス。
９．第１の特異的結合メンバー、第２の特異的結合メンバー、及び固定化捕捉特異的結合メンバーは、抗体又はその結合断片である、付記１～８のいずれか一つに記載のＬＦＡデバイス。
１０．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質に特異的に結合する第１の特異的結合メンバー及び第２の特異的結合メンバーは、それぞれ、ウサギ抗体及びマウス抗体である、付記９に記載のＬＦＡデバイス。

１１．ウサギ抗体は、Ｒ００４であり、マウス抗体は、ＭＭ０５である、付記１０に記載のＬＦＡデバイス。
１２．ウサギ抗体は、マウス抗体の量を超える量で存在する、付記１１に記載のＬＦＡデバイス。
１３．ウサギ抗体の量は、６０～９７．５％の範囲である、付記１２に記載のＬＦＡデバイス。
１４．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質に特異的に結合する固定化捕捉特異的結合メンバーは、マウス抗体である、付記１～１３のいずれか一つに記載のＬＦＡデバイス。
１５．マウス抗体は、ＭＭ０８である、付記１３に記載のＬＦＡデバイス。

１６．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質が試料中に存在するか否かを検出するための側方流動アッセイ（ＬＦＡ）デバイスであって、
（ａ）試料受入領域と、
（ｂ）試料受入領域から下流にあり、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質に特異的に結合する第１のウサギ抗体及びＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質に特異的に結合する第２のマウス抗体にコンジュゲートされた金標識粒子を含む検査粒子標識を含むコンジュゲート領域であって、第１のウサギ抗体の量が第２のマウス抗体の量を超える、コンジュゲート領域と、
（ｃ）コンジュゲート領域から下流にあり、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質に特異的に結合する固定化捕捉マウス抗体を含む検出領域と
を含む、ＬＦＡデバイス。
１７．検出領域から下流にある対照領域を更に含む、付記１６に記載のＬＦＡデバイス。
１８．対照領域は、対照抗原を含み、ＬＦＡデバイスは、対照抗原に特異的に結合する対照特異的結合メンバーにコンジュゲートされた標識粒子を含む対照粒子標識を更に含む、付記１７に記載のＬＦＡデバイス。
１９．対照領域は、第１の特異的結合メンバー及び第２の特異的結合メンバーに結合する対照結合メンバーを含む、付記１７に記載のＬＦＡデバイス。
２０．対照領域から下流にあるウィッキング領域を更に含む、付記１６～１９のいずれか一つに記載のＬＦＡデバイス。

２１．ウサギ抗体は、Ｒ００４であり、マウス抗体は、ＭＭ０５である、付記１６～２０のいずれか一つに記載のＬＦＡデバイス。
２２．ウサギ抗体の量は、６０～９７．５％の範囲である、付記１６～２１のいずれか一つに記載のＬＦＡデバイス。
２３．捕捉マウス抗体は、ＭＭ０８である、付記１６～２２のいずれか一つに記載のＬＦＡデバイス。

２４．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質が試料中に存在するか否かを検出する方法であって、
（ａ）試料を側方流動アッセイ（ＬＦＡ）デバイスの試料受入領域上に配置することであって、ＬＦＡデバイスは、
（ｉ）試料受入領域と、
（ｉｉ）試料受入領域から下流にあり、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質に特異的に結合する第１の特異的結合メンバー及び第２の特異的結合メンバーにコンジュゲートされた標識粒子を含む粒子標識を含むコンジュゲート領域と、
（ｉｉｉ）コンジュゲート領域から下流にあり、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質に特異的に結合する固定化捕捉特異的結合メンバーを含む検出領域とを含む、配置することと、
（ｂ）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質が試料中に存在するか否かを検出するために、標識粒子の存在について検出領域を調べることと
を含む、方法。
２５．ＬＦＡデバイスは、検出領域から下流にある対照領域を更に含み、方法は、対照領域を調べることを更に含む、付記２４に記載の方法。
２６．対照領域は、対照抗原を含み、ＬＳＡデバイスは、対照抗原に特異的に結合する対照特異的結合メンバーにコンジュゲートされた標識粒子を含む対照粒子標識を更に含む、付記２５に記載の方法。
２７．対照領域は、第１の特異的結合メンバー及び第２の特異的結合メンバーに結合する対照結合メンバーを含む、付記２５に記載の方法。
２８．ＬＦＡデバイスは、対照領域から下流にあるウィッキング領域を更に含む、付記２４～２７のいずれか一つに記載の方法。

２９．標識粒子は、反射性ナノ粒子である、付記２４～２８のいずれか一つに記載の方法。
３０．反射性ナノ粒子は、金属を含む、付記２９に記載の方法。
３１．金属は、金を含む、付記３０に記載の方法。
３２．第１の特異的結合メンバー、第２の特異的結合メンバー、及び固定化捕捉特異的結合メンバーは、抗体又はその結合断片である、付記２４～３１のいずれか一つに記載の方法。
３３．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質に特異的に結合する第１の特異的結合メンバー及び第２の特異的結合メンバーは、それぞれ、ウサギ抗体及びマウス抗体である、付記３２に記載の方法。

３４．ウサギ抗体は、Ｒ００４であり、マウス抗体は、ＭＭ０５である、付記３３に記載の方法。
３５．ウサギ抗体は、マウス抗体量を超える量で存在する、付記３４に記載の方法。
３６．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質に特異的に結合する固定化捕捉特異的結合メンバーは、マウス抗体である、付記２４～３５のいずれか一つに記載の方法。
３７．マウス抗体は、ＭＭ０８である、付記３６に記載の方法。
３８．調べることは、反射率リーダーを用いることを含む、付記２４～３７のいずれか一つに記載の方法。

３９．試料は、鼻咽頭検体を含む、付記２４～３８のいずれか一つに記載の方法。
４０．方法は、対象から試料を取得することを更に含む、付記２４～３９のいずれか一つに記載の方法。
４１．対象から試料を取得することは、鼻腔用綿棒を用いることを含む、付記４０に記載の方法。

４２．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質が試料中に存在するか否かを検出するためのシステムであって、
（ａ）側方流動アッセイ（ＬＦＡ）デバイスであって、
（ｉ）試料受入領域と、
（ｉｉ）試料受入領域から下流にあり、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質に特異的に結合する第１の特異的結合メンバー及び第２の特異的結合メンバーにコンジュゲートされた標識粒子を含む粒子標識を含むコンジュゲート領域と、
（ｉｉｉ）コンジュゲート領域から下流にあり、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質に特異的に結合する固定化捕捉特異的結合メンバーを含む検出領域とを含む、側方流動アッセイ（ＬＦＡ）デバイスと、
（ｂ）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質が試料中に存在するか否かを検出するために、標識粒子の存在について検出領域を調べるように構成されたリーダーと
を備える、システム。
４３．ＬＦＡデバイスは、検出領域から下流にある対照領域を更に含む、付記４２に記載のシステム。
４４．対照領域は、対照抗原を含み、試料受入領域は、対照抗原に特異的に結合する対照特異的結合メンバーにコンジュゲートされた標識粒子を含む対照粒子標識を更に含む、付記４３に記載のシステム。
４５．対照領域は、第１の特異的結合メンバー及び第２の特異的結合メンバーに結合する対照結合メンバーを含む、付記４３に記載のシステム。
４６．ＬＦＡデバイスは、対照領域から下流にあるウィッキング領域を更に含む、付記４２～４５のいずれか一つに記載のシステム。

４７．標識粒子は、反射性ナノ粒子である、付記４２～４６のいずれか一つに記載のシステム。
４８．反射性ナノ粒子は、金属を含む、付記４７に記載のシステム。
４９．金属は、金を含む、付記４８に記載のシステム。
５０．第１の特異的結合メンバー、第２の特異的結合メンバー、及び固定化捕捉特異的結合メンバーは、抗体又はその結合断片である、付記４２～４９のいずれか一つに記載のシステム。
５１．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質に特異的に結合する第１の特異的結合メンバー及び第２の特異的結合メンバーは、それぞれ、ウサギ抗体及びマウス抗体である、付記５０に記載のシステム。

５２．ウサギ抗体は、Ｒ００４である、付記５１に記載のシステム。
５３．マウス抗体は、ＭＭ０５である、付記５２に記載のシステム。
５４．ウサギ抗体は、マウス抗体の量を超える量で存在する、付記５３に記載のシステム。
５５．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質に特異的に結合する固定化捕捉特異的結合メンバーは、マウス抗体である、付記４２～５４のいずれか一つに記載のシステム。
５６．マウス抗体は、ＭＭ０８である、付記５５に記載のシステム。
５７．リーダーは、反射率計を備える、付記４２～５６のいずれか一つに記載のシステム。

５８．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質が試料中に存在するか否かを検出するために、標識粒子の存在について側方流動アッセイ（ＬＦＡ）デバイスの検出領域を調べるように構成されたリーダーであって、
ＬＦＡデバイスは、
（ａ）試料受入領域と、
（ｂ）試料受入領域から下流にあり、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質に特異的に結合する第１の特異的結合メンバー及び第２の特異的結合メンバーにコンジュゲートされた標識粒子を含む粒子標識を含むコンジュゲート領域と、
（ｃ）コンジュゲート領域から下流にあり、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質に特異的に結合する固定化捕捉特異的結合メンバーを含む検出領域と
を含む、リーダー。
５９．ＬＦＡデバイスは、検出領域から下流にある対照領域を更に含む、付記５８に記載のリーダー。
６０．対照領域は、対照抗原を含み、試料受入領域は、対照抗原に特異的に結合する対照特異的結合メンバーにコンジュゲートされた標識粒子を含む対照粒子標識を更に含む、付記５９に記載のリーダー。
６１．対照領域は、第１の特異的結合メンバー及び第２の特異的結合メンバーに結合する対照結合メンバーを含む、付記５９に記載のリーダー。
６２．ＬＦＡデバイスは、対照領域から下流にあるウィッキング領域を更に含む、付記５８～６１のいずれか一つに記載のリーダー。

６３．標識粒子は、反射性ナノ粒子である、付記５８～６２のいずれか一つに記載のリーダー。
６４．反射性ナノ粒子は、金属を含む、付記６３に記載のリーダー。
６５．金属は、金を含む、付記６４に記載のリーダー。
６６．第１の特異的結合メンバー、第２の特異的結合メンバー、及び固定化捕捉特異的結合メンバーは、抗体又はその結合断片である、付記５８～６５のいずれか一つに記載のリーダー。
６７．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質に特異的に結合する第１の特異的結合メンバー及び第２の特異的結合メンバーは、それぞれ、ウサギ抗体及びマウス抗体である、付記６６に記載のリーダー。

６８．ウサギ抗体は、Ｒ００４であり、マウス抗体は、ＭＭ０５である、付記６７に記載のリーダー。
６９．ウサギ抗体は、Ｒ００４であり、マウス抗体の量を超える量で存在する、付記６８に記載のリーダー。
７０．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質に特異的に結合する固定化捕捉特異的結合メンバーは、マウス抗体である、付記５８～６９のいずれか一つに記載のリーダー。
７１．マウス抗体は、ＭＭ０８である、付記７０に記載のリーダー。
７２．リーダーは、反射率計を備える、付記５８～７１のいずれか一つに記載のリーダー。

７３．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質が試料中に存在するか否かを検出するためのキットであって
（ａ）側方流動アッセイ（ＬＦＡ）デバイスであって、
（ｉ）試料受入領域と、
（ｉｉ）試料受入領域から下流にあり、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質に特異的に結合する第１の特異的結合メンバー及び第２の特異的結合メンバーにコンジュゲートされた標識粒子を含む粒子標識を含むコンジュゲート領域と、
（ｉｉｉ）コンジュゲート領域から下流にあり、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質に特異的に結合する固定化捕捉特異的結合メンバーを含む検出領域と
を含む、側方流動アッセイ（ＬＦＡ）デバイスと、
（ｂ）対象から試料を取得するための試料取得構成要素と
を備える、キット。
７４．ＬＦＡデバイスは、検出領域から下流にある対照領域を更に含む、付記７３に記載のキット。
７５．対照領域は、対照抗原を含み、試料受入領域は、対照抗原に特異的に結合する対照特異的結合メンバーにコンジュゲートされた標識粒子を含む対照粒子標識を更に含む、付記７４に記載のキット。
７６．対照領域は、第１の特異的結合メンバー及び第２の特異的結合メンバーに結合する対照結合メンバーを含む、付記７４に記載のキット。
７７．ＬＦＡデバイスは、対照領域から下流にあるウィッキング領域を更に含む、付記７３～７６のいずれか一つに記載のキット。

７８．標識粒子は、反射性ナノ粒子である、付記７３～７７のいずれか一つに記載のキット。
７９．反射性ナノ粒子は、金属を含む、付記７８に記載のキット。
８０．金属は、金を含む、付記７９に記載のキット。
８１．第１の特異的結合メンバー、第２の特異的結合メンバー、及び固定化捕捉特異的結合メンバーは、抗体又はその結合断片である、付記７３～８０のいずれか一つに記載のキット。
８２．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質に特異的に結合する第１の特異的結合メンバー及び第２の特異的結合メンバーは、それぞれ、ウサギ抗体及びマウス抗体である、付記８１に記載のキット。

８３．ウサギ抗体は、Ｒ００４であり、マウス抗体は、ＭＭ０５である、付記８２に記載のキット。
８４．ウサギ抗体は、マウス抗体の量を超える量で存在する、付記８３に記載のキット。
８５．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質に特異的に結合する固定化捕捉特異的結合メンバーは、マウス抗体である、付記７３～８４のいずれか一つに記載のキット。
８６．マウス抗体は、ＭＭ０８である、付記８５に記載のキット。
８７．キットは、複数のＬＦＡデバイスを備える、付記７３～８６のいずれか一つに記載のキット。

８８．試料は、鼻咽頭試料である、付記７３～８７のいずれか一つに記載のキット。
８９．試料取得構成要素は、鼻腔用綿棒を備える、付記８８に記載のキット。
９０．試料取得構成要素は、洗剤を含む液体容器を更に備える、付記８９に記載のキット。
９１．キットは、陽性対照を更に含む、付記７３～９０のいずれか一つに記載のキット。
９２．キットは、陰性対照を更に含む、付記７３～９１のいずれか一つに記載のキット。

前述の実施形態の少なくともいくつかでは、ある実施形態で使用される１つ以上の要素は、かかる置き換えが技術的に実現可能でない限り、別の実施形態で互換的に使用することができる。当業者は、特許請求される主題の範囲から逸脱することなく、上記の方法及び構造に他の様々な省略、追加、及び修正を行うことができることを理解されたい。全てのかかる修正及び変更は、添付の特許請求の範囲によって定義される主題の範囲内に入ることが意図される。

一般に、本明細書で、特に添付の特許請求の範囲（例えば、添付の特許請求の範囲の本体）で使用される用語は、概して、「開放的な」用語として意図される（例えば、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」という用語は、「含むが、これらに限定されない」と解釈されるべきであり、「有する」という用語は、「少なくとも有する」と解釈されるべきであり、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」という用語は、「含むが、これらに限定されない」と解釈されるべきであるなど）ことが当業者によって理解される。特定の数の導入された特許請求の範囲の記載が意図される場合、かかる意図が特許請求の範囲内で明示的に記載され、かかる記載がない場合、かかる意図は存在しないことが当業者によって更に理解される。例えば、理解の補助として、以下の添付の特許請求の範囲は、特許請求の範囲の記載を導入するための「少なくとも１つ」及び「１つ以上」という導入語句の使用を含み得る。ただし、かかる語句の使用は、不定冠詞「ａ」又は「ａｎ」による特許請求の範囲の記載の導入が、かかる導入された特許請求の範囲の記載を含む特定の特許請求の範囲を、かかる記載を１つだけ含む実施形態に限定することを意味すると解釈されるべきではない。同じ主張には、「１つ以上」又は「少なくとも１つ」という導入語句と、「ａ」又は「ａｎ」などの不定冠詞とが含まれる（例えば、「ａ」及び／又は「ａｎ」は「少なくとも１つ」又は「１つ以上」）場合と同じことが、特許請求の範囲の記載を紹介するために使用される定冠詞の使用にも当てはまる。加えて、導入された特許請求の範囲の特定の数の記載が明示的に記載されていても、当業者は、かかる記載は、少なくとも記載された数を意味すると解釈されるべきであることを認識する（例えば、他の修飾語なしの「２つの記載」のありのままの記載は、少なくとも２つの記載、又は２つ以上の記載を意味する）。更に、「Ａ、Ｂ、及びＣなどのうちの少なくとも１つ」に類似する慣習が使用される場合、概して、かかる構成は、当業者が慣習を理解するという意味で意図される（例えば、「Ａ、Ｂ、及びＣのうちの少なくとも１つを有するシステム」には、Ａのみ、Ｂのみ、Ｃのみ、Ａ及びＢともに、Ａ及びＣともに、Ｂ及びＣともに、並びに／又はＡ、Ｂ、及びＣともになどを有するシステムが含まれるが、これらに限定されない）。「Ａ、Ｂ、又はＣなどのうちの少なくとも１つ」に類似する慣習が使用される場合、概して、かかる構成は、当業者が慣習を理解するという意味で意図される（例えば、「Ａ、Ｂ、又はＣのうちの少なくとも１つを有するシステム」には、Ａのみ、Ｂのみ、Ｃのみ、Ａ及びＢともに、Ａ及びＣともに、Ｂ及びＣともに、並びに／又はＡ、Ｂ、及びＣともになどを有するシステムが含まれるが、これらに限定されない）。明細書、特許請求の範囲、又は図面に関わらず、２つ以上の代替用語を提示する実質的に任意の離接語及び／又は語句は、用語の１つ、用語のいずれか、又は両方の用語を含む可能性を企図するように理解されるべきであることが、当業者によって更に理解される。例えば、「Ａ又はＢ」という語句は、「Ａ」又は「Ｂ」又は「Ａ及びＢ」の可能性を含むと理解される。

更に、本開示の特徴又は態様がマークッシュグループの観点から記載される場合、当業者であれば、本開示が、それによって、マークッシュグループの任意の個々のメンバー、又はマークッシュグループのメンバーの任意のサブグループの観点からも記載されることを認識する。

当業者には理解されるように、書面による記載を提供することなど、ありとあらゆる目的のために、本明細書に開示される全ての範囲は、また、ありとあらゆる可能なサブ範囲、並びにそのサブ範囲の組み合わせも包含する。任意のリストされた範囲は、同じ範囲が、少なくとも等しい２分の１、３分の１、４分の１、５分の１、１０分の１などに分解されることを十分に示し、分解されることを可能にするものとして容易に認識され得る。非限定的な例として、本明細書で考察される各範囲は、容易に、下側の３分の１、真ん中の３分の１、及び上側の３分の１などに分解され得る。当業者に同様に理解されるように、「最大」、「少なくとも」、「より大きい」、「より少ない」などの全ての用語は、記載される数を含み、上述のようにサブ範囲に後に分解され得る範囲を指す。最後に、当業者に理解されるように、範囲は各個々のメンバーを含む。したがって、例えば、１～３個の物品を有する群は、１個、２個、又は３個の物品を有する群を指す。同様に、１～５個の物品を有する群は、１個、２個、３個、４個、又は５個の物品を有する群を指す。

前述の発明は、理解の明確化を目的として例示及び実施例としてある程度詳細に記載されているが、添付の特許請求の範囲の趣旨又は範囲から逸脱することなく、ある特定の変更及び修正が、それらに対して行われ得ることは、本発明の教示に照らして当業者には容易に明らかである。

したがって、前述した内容は、本発明の原理を単に例示しているに過ぎない。当業者は、本明細書に明示的に記載又は示されていないが、本発明の原理を具現化し、その趣旨及び範囲内に含まれる様々な構成を考案することが可能であることが理解される。更に、本明細書に列挙される全ての例及び条件付き言語は、主に、本発明の原理及び本発明者によって当該技術分野を促進するために寄与する概念を閲読者が理解することを支援する点を意図しており、そのような具体的に列挙される例及び条件に限定されるものではないと解釈されるものである。更に、本発明の原理、態様、及び実施形態、並びにそれらの特定の実施例を列挙する本明細書の全ての記述は、それらの構造的及び機能的同等物の両方を包含することが意図される。加えて、そのような同等物は、現在知られている同等物及び将来開発される同等物の両方、すなわち、構造に関係なく、同じ機能を実施する開発される任意の要素を含むことが意図される。更に、本明細書に開示のいかなるものも、そのような開示が特許請求の範囲に明示的に列挙されているか否かにかかわらず、公共に供することを意図しない。

したがって、本発明の範囲は、本明細書に図示及び記載の例示的な実施形態に限定されることを意図していない。むしろ、本発明の範囲及び精神は、添付の特許請求の範囲によって具現化される。特許請求の範囲において、米国特許法第１１２条（ｆ）又は米国特許法第１１２条（６）は、特許請求の範囲への限定の始まりの正確な語句「のための手段」又は正確な語句「のためのステップ」が列挙されている場合にのみ、そのような特許請求の範囲に限定するために公使されると明示的に定義され、そのような正確な語句が、特許請求の範囲への限定において使用されない場合、米国特許法第１１２条（ｆ）又は米国特許法第１１２条（６）は行使されない。

相互参照
米国特許法第１１９条（ｅ）に従って、本出願は、２０２０年１０月１９日に出願された米国仮特許出願第６３／０９３，５６９号の出願日に対する優先権を主張し、その出願の開示全体は、参照により本明細書に組み込まれる。

Claims (16)

1. ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質が試料中に存在するか否かを検出するための側方流動アッセイ（ＬＦＡ）デバイスであって、
   （ａ）試料受入領域と、
   （ｂ）前記試料受入領域から下流にあり、前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質に特異的に結合する第１の特異的結合メンバー及び第２の特異的結合メンバーにコンジュゲートされた標識粒子を含む検査粒子標識を含むコンジュゲート領域と、
   （ｃ）前記コンジュゲート領域から下流にあり、前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質に特異的に結合する固定化捕捉特異的結合メンバーを含む検出領域と
   を含む、ＬＦＡデバイス。
2. 前記検出領域から下流にある対照領域を更に含む、請求項１に記載のＬＦＡデバイス。
3. 前記対照領域は、対照抗原を含み、前記ＬＦＡデバイスは、前記対照抗原に特異的に結合する対照特異的結合メンバーにコンジュゲートされた標識粒子を含む対照粒子標識を更に含む、請求項２に記載のＬＦＡデバイス。
4. 前記対照領域は、前記第１の特異的結合メンバー及び前記第２の特異的結合メンバーに結合する対照結合メンバーを含む、請求項２に記載のＬＦＡデバイス。
5. 前記対照領域から下流にあるウィッキング領域を更に含む、請求項１～４のいずれか一項に記載のＬＦＡデバイス。
6. 前記標識粒子は、反射性ナノ粒子である、請求項１～５のいずれか一項に記載のＬＦＡデバイス。
7. 前記反射性ナノ粒子は、金属を含む、請求項６に記載のＬＦＡデバイス。
8. 前記金属は、金を含む、請求項７に記載のＬＦＡデバイス。
9. 前記第１の特異的結合メンバー、前記第２の特異的結合メンバー、及び前記固定化捕捉特異的結合メンバーは、抗体又はその結合断片である、請求項１～８のいずれか一項に記載のＬＦＡデバイス。
10. 前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質に特異的に結合する前記第１の特異的結合メンバー及び前記第２の特異的結合メンバーは、それぞれ、ウサギ抗体及びマウス抗体である、請求項９に記載のＬＦＡデバイス。
11. 前記ウサギ抗体は、前記マウス抗体の量を超える量で存在する、請求項１０に記載のＬＦＡデバイス。
12. 前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質に特異的に結合する前記固定化捕捉特異的結合メンバーは、マウス抗体である、請求項１～１１のいずれか一項に記載のＬＦＡデバイス。
13. ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質が試料中に存在するか否かを検出する方法であって、
    （ａ）前記試料を側方流動アッセイ（ＬＦＡ）デバイスの試料受入領域上に配置することであって、前記ＬＦＡデバイスは、
    （ｉ）前記試料受入領域と、
    （ｉｉ）前記試料受入領域から下流にあり、前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質に特異的に結合する第１の特異的結合メンバー及び第２の特異的結合メンバーにコンジュゲートされた標識粒子を含む粒子標識を含むコンジュゲート領域と、
    （ｉｉｉ）前記コンジュゲート領域から下流にあり、前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質に特異的に結合する固定化捕捉特異的結合メンバーを含む検出領域とを含む、配置することと、
    （ｂ）前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質が前記試料中に存在するか否かを検出するために、標識粒子の存在について前記検出領域を調べることと
    を含む、方法。
14. ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質が試料中に存在するか否かを検出するためのシステムであって、
    （ａ）側方流動アッセイ（ＬＦＡ）デバイスであって、
    （ｉ）試料受入領域と、
    （ｉｉ）前記試料受入領域から下流にあり、前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質に特異的に結合する第１の特異的結合メンバー及び第２の特異的結合メンバーにコンジュゲートされた標識粒子を含む粒子標識を含むコンジュゲート領域と、
    （ｉｉｉ）前記コンジュゲート領域から下流にあり、前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質に特異的に結合する固定化捕捉特異的結合メンバーを含む検出領域とを含む、ＬＦＡデバイスと、
    （ｂ）前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質が前記試料中に存在するか否かを検出するために、標識粒子の存在について前記検出領域を調べるように構成されたリーダーと
    を備える、システム。
15. ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質が試料中に存在するか否かを検出するために、標識粒子の存在について側方流動アッセイ（ＬＦＡ）デバイスの検出領域を調べるように構成されたリーダーであって、
    前記ＬＦＡデバイスは、
    （ａ）試料受入領域と、
    （ｂ）前記試料受入領域から下流にあり、前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質に特異的に結合する第１の特異的結合メンバー及び第２の特異的結合メンバーにコンジュゲートされた標識粒子を含む粒子標識を含むコンジュゲート領域と、
    （ｃ）前記コンジュゲート領域から下流にあり、前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質に特異的に結合する固定化捕捉特異的結合メンバーを含む検出領域と
    を含む、リーダー。
16. ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質が試料中に存在するか否かを検出するためのキットであって、
    （ａ）側方流動アッセイ（ＬＦＡ）デバイスであって、
    （ｉ）試料受入領域と、
    （ｉｉ）前記試料受入領域から下流にあり、前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質に特異的に結合する第１の特異的結合メンバー及び第２の特異的結合メンバーにコンジュゲートされた標識粒子を含む粒子標識を含むコンジュゲート領域と、
    （ｉｉｉ）前記コンジュゲート領域から下流にあり、前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質に特異的に結合する固定化捕捉特異的結合メンバーを含む検出領域とを含む、ＬＦＡデバイスと、
    （ｂ）対象から試料を取得するための試料取得構成要素と
    を備える、キット。

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