CN116678969A - 一种左旋苯甘氨酸甲酯盐酸盐的分析方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种左旋苯甘氨酸甲酯盐酸盐的分析方法，采用高效液相色谱法测定左旋苯甘氨酸甲酯盐酸盐被测样品中左旋苯甘氨酸、左旋苯甘氨酸甲酯盐酸盐的含量，采用C18色谱柱，以纯化水‑甲醇‑冰醋酸溶液‑乙酸钠溶液混合溶液为流动相，通过制备对照品溶液、被测样品溶液，采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，在合适的色谱条件下，分别精密量取被测样品溶液和对照品溶液注入液相色谱仪；记录被测样品和对照品的色谱图，按外标法以峰面积计算，即得被测样品中左旋苯甘氨酸和左旋苯甘氨酸甲酯盐酸盐的含量。本发明操作过程简单方便，精确度高，稳定性好，可有效避免杂质对测定结果的影响。
Description
技术领域
本发明涉及一种左旋苯甘氨酸甲酯盐酸盐的分析方法，属于化学分析领域。
背景技术
左旋苯甘氨酸甲酯盐酸盐用于氨苄青霉素、氧哌嗪青霉素、头孢氨苄、头孢克洛等半合成抗生素酶法工艺的中间体，分子式：C9H11NO2HCL，分子量：201.6501，CAS号：19883-41-1
其结构式如下：
目前，国内企业左旋苯甘氨酸甲酯盐酸盐含量检测方法为酸碱滴定法，但这一方法操作复杂，精确度较差。为精确计算左旋苯甘氨酸甲酯盐酸盐的含量及产品中左旋苯甘氨酸的残留，急需开发高压液相检测方法。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了一种左旋苯甘氨酸甲酯盐酸盐的分析方法，以解决产品含量以及原料残留的精确检测问题。
本发明解决上述技术问题的技术方案如下：
左旋苯甘氨酸甲酯盐酸盐的分析方法，包括如下步骤：
(a)对照品溶液的制备：精密称定左旋苯甘氨酸标准品、左旋苯甘氨酸甲酯盐酸盐标准品，分别加流动相溶解，并定量稀释制成浓度为0.036～0.09mg/mL的左旋苯甘氨酸对照品溶液、浓度为0.36～0.9mg/mL左旋苯甘氨酸甲酯盐酸盐对照品溶液，摇匀、定容；
(b)被测样品溶液的制备：精密称定左旋苯甘氨酸甲酯盐酸盐样品，分别加流动相溶解，并定量稀释制成浓度为0.36～0.9mg/mL的左旋苯甘氨酸甲酯盐酸盐被测样品溶液，摇匀、定容；
(c)色谱条件：采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相流速为0.9～1.1mL/min；检测波长为210～230nm；柱温为20℃～30℃；
(d)测定法：分别精密量取被测样品溶液和对照品溶液，注入液相色谱仪；记录被测样品和对照品的色谱图，按外标法以峰面积计算，即得被测样品中的左旋苯甘氨酸和左旋苯甘氨酸甲酯盐酸盐的含量。
在上述技术方案的基础上，本发明还可以做如下改进。
进一步，所述流动相为纯化水、甲醇、乙酸钠溶液、冰醋酸溶液的混合溶液；
所述乙酸钠溶液为3.86g无水乙酸钠溶于100mL水后得到；
所述冰醋酸溶液为10mL冰醋酸溶于240mL水后得到。
进一步，所述流动相为体积比为742：240：15：3的纯化水、甲醇、乙酸钠溶液、冰醋酸溶液。
进一步，所述流动相的流速为1.0mL/min。
进一步，对照品溶液和/或被测样品溶液的浓度为0.6mg/mL。
进一步，所述检测波长为220nm。
本发明的有益效果是：
本发明所提供的左旋苯甘氨酸甲酯盐酸盐的高效液相色谱分析方法操作过程简单方便，精密度好，准确度高，稳定性好，耐用性优异，可有效避免杂质对测定结果的影响；对设备要求低，流动相介质简单易得，可行性与适用性强。
附图说明
图1为本发明实施例2左旋苯甘氨酸标准品的色谱图；
图2为本发明实施例2的左旋苯甘氨酸甲酯盐酸盐标准品的色谱图；
图3为本发明实施例2的左旋苯甘氨酸甲酯盐酸盐样品的色谱图；
图4为本发明左旋苯甘氨酸甲酯盐酸盐含量测定线性试验标准曲线图；
图5为本发明左旋苯甘氨酸含量测定线性试验标准曲线图。
具体实施方式
以下结合附图对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。
在以下实施例中，本发明所采用的仪器与试剂如下：
岛津高效液相色谱(岛津2010)；
样品与试剂：甲醇(色谱纯)、纯化水、左旋苯甘氨酸标准品(河北华旭化工，含量99.7％)、左旋苯甘氨酸甲酯盐酸盐标准品(阿拉丁试剂，含量96.9％)、左旋苯甘氨酸盐酸盐样品(浙江云涛生物技术股份有限公司，批号：910372207015)。
实施例1
采用高效液相色谱法测定左旋苯甘氨酸甲酯盐酸盐被测样品中的左旋苯甘氨酸、左旋苯甘氨酸甲酯盐酸盐的含量，包括如下步骤：
(a)对照品溶液的制备：精密称定左旋苯甘氨酸标准品、左旋苯甘氨酸甲酯盐酸盐标准品，分别加流动相溶解，并定量稀释制成浓度为Ca1(0.036～0.084mg/mL)的左旋苯甘氨酸标准对照品溶液、Ca2(0.36～0.84mg/mL)左旋苯甘氨酸甲酯盐酸盐标准对照品溶液，摇匀、定容；
(b)被测样品溶液的制备：精密称定左旋苯甘氨酸甲酯盐酸盐样品，加流动相溶解，并稀释定容制成浓度为Ca(0.6mg/mL)的左旋苯甘氨酸甲酯盐酸盐被测样品溶液，摇匀、定容；
(c)色谱条件：采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比为650∶340：20：6～850∶200：10：1的纯化水：甲醇：乙酸钠溶液(3.86g无水乙酸钠溶于100mL水)：冰醋酸溶液(10mL冰醋酸溶于240mL水)混合溶液为流动相，流速为0.8～1.2mL/min；检测波长为210～230nm；柱温为20℃～30℃；理论塔板数按主峰计算应不低于2000；
(d)测定法：
根据中国药典2020年版，称取左旋苯甘氨酸标准品适量，精密称定，以体积比纯化水：甲醇：乙酸钠溶液(3.86g无水乙酸钠溶于100mL水)：冰醋酸溶液(10mL冰醋酸溶于240mL水)＝742mL：240mL：15mL：3mL的混合溶液溶解，并稀释制成一定浓度Ca1的溶液，摇匀，精密量取10μL注入液相色谱仪，记录色谱图；
取左旋苯甘氨酸甲酯盐酸盐标准品适量，精密称定，加体积比为742mL：240mL：15mL：3mL的纯化水：甲醇：乙酸钠溶液(3.86g无水乙酸钠溶于100mL水)：冰醋酸溶液(10mL冰醋酸溶于240mL水)混合溶液溶解，并稀释制成一定浓度Ca2的溶液，摇匀，精密量取10μL注入液相色谱仪，记录色谱图；
另取测试样品适量，精密称定，同法测定，记录色谱图；
按外标法以峰面积计算，即得被测样品中的左旋苯甘氨酸的含量C1％和左旋苯甘氨酸甲酯盐酸盐的含量C2％：
C1％＝Aa1/As1×Cs1/Ca1×100％；
Aa1为测试样品中左旋苯甘氨酸的液相主峰面积；As1为左旋苯甘氨酸标准品的液相主峰面积；Ca1为被测样品的浓度；Cs1为左旋苯甘氨酸的标准品浓度；
C％＝Aa/As×Cs/Ca×100％；
Aa为被测样品中左旋苯甘氨酸甲酯盐酸盐的液相主峰面积；As为左旋苯甘氨酸甲酯盐酸盐标准品的液相主峰面积；Ca为被测样品的浓度；Cs为左旋苯甘氨酸甲酯盐酸盐的标准品浓度。
实施例2
色谱条件：采用艾杰尔C18 5μm 4.6*250mm色谱柱；流动相为体积比为742mL：240mL：15mL：3mL的纯化水：甲醇：乙酸钠溶液(3.86g无水乙酸钠溶于100mL水)：冰醋酸溶液(10mL冰醋酸溶于240mL水)混合溶液；流速为1.0mL/min；紫外检测器，检测波长为220nm；柱温为25℃(室温)；理论塔板数按主峰计算应不低于2000。
被测样品溶液：精密称定左旋苯甘氨酸甲酯盐酸盐样品，加纯化水：甲醇：乙酸钠溶液(3.86g无水乙酸钠溶于100mL水)：冰醋酸酸溶液(10mL冰醋酸溶于240mL水)混合液溶解并定量稀释制成每1mL中含0.6mg左旋苯甘氨酸盐酸盐样品的溶液，摇匀、定容；
对照品溶液：精密称定左旋苯甘氨酸标准品、左旋苯甘氨酸甲酯盐酸盐标准品，分别加乙腈-异丙醇溶解，并定量稀释制成每1mL中0.06mg左旋苯甘氨酸标准品和每1mL中0.6mg左旋苯甘氨酸甲酯盐酸盐标准品的溶液，摇匀、定容；
测定法：分别精密量取被测样品溶液、左旋苯甘氨酸标准品溶液、左旋苯甘氨酸甲酯盐酸盐标准品溶液20μL，注入液相色谱仪；记录对照品和被测样品的色谱图，按外标法以峰面积计算，即得样品中的左旋苯甘氨酸和左旋苯甘氨酸甲酯盐酸盐含量测定结果。
采用下述步骤计算得到左旋苯甘氨酸以及左旋苯甘氨酸甲酯盐酸盐的含量：
校正因子
其中，W1为对照品称样量(mg)；D1为对照品稀释体积(mL)；A1为对照品溶液色谱图中主峰的峰面积。
供试品的含量
其中，W2为供试品的称样量(mg)；D2为供试品的稀释体积(mL)；A2为供试品的主峰的峰面积。
采用上述方法计算得到样品中左旋苯甘氨酸的含量分别为0.4％、0.4％和0.5％，左旋苯甘氨酸甲酯盐酸盐的含量为98.2％、98.2％和98.3％。
实施例3
对实施例2的方法进行下述方法学验证：
1、系统适用性试验
取左旋苯甘氨酸甲酯对照品溶液20μL注入液相色谱仪，记录色谱图，左旋苯甘氨酸与左旋苯甘氨酸甲酯峰和相邻峰的分离度应符合要求，即大于1.5；取左旋苯甘氨酸甲酯盐酸盐对照品溶液1、2和左旋苯甘氨酸对照品溶液1.2各20μL注入液相色谱仪，记录色谱图，分别计算f值，要求两针f值RD≤1.0％实验结果如表1所示。
表1左旋苯甘氨酸甲酯盐酸盐含量测定系统适用性试验结果
从表1中可以看出，左旋苯甘氨酸与相邻峰的分离度为2.1；左旋苯甘氨酸甲酯与相邻峰的分离度为11.9，符合分离度大于1.5的要求；左旋苯甘氨酸甲酯对照品f1、f2的RD为0.3％；左旋苯甘氨酸对照品f1、f2的RD为0.5％，符合RD≤1.0％的要求。试验结果表明，本法系统精密度良好。
2、方法精密度试验
按照实施例1的方法配制6份供试品溶液，并按照与前法相同的色谱条件，按照实施例1的测定方法进样测定，记录图谱，按照外标法计算各供试品溶液中的左旋苯甘氨酸甲酯盐酸盐含量，结果见表2。
表2左旋苯甘氨酸甲酯盐酸盐含量测定方法精密度试验结果
左旋苯甘氨酸残留测定方法精密度试验结果
计算6个左旋苯甘氨酸甲酯盐酸盐含量的RSD为0.14％，小于限度1.0％；6个左旋苯甘氨酸残留的RSD为2.0％，小于限度5.0％；试验结果表明，本法方法精密度度良好。
3、中间精密度试验
按照实施例1的方法配制6份供试品溶液，并由不同分析人员在不同日期采用不同的仪器条件下按照实施例1的测定方法进行检测，记录色谱图，并汇总3组数据进行分析，计算结果的相对标准偏差，测定结果见表3，并将中间精密度测试中的数据与方法精密度试验中的六个数据进行比较。
表3左旋苯甘氨酸甲酯盐酸盐含量测定中间精密度试验结果
左旋苯甘氨酸残留测定方法中间精密度试验结果
计算6个数据的RSD为0.59％，小于限度1.0％。将中间精密度中6个数据与方法精密度中6个数据比较，并计算12个数据的RSD为0.15％，小于限度1.0％。试验结果表明，本法中间精密度度良好。
4、线性关系考察
按照实施例1的方法制备对照品溶液和供试品溶液，并按照与实施例1相同的色谱条件进行测定：分别取左旋苯甘氨酸标准品溶液、左旋苯甘氨酸甲酯盐酸盐标准品溶液20μL，注入液相色谱仪；同法测定5次，记录对照品色谱图，作为系统适用性实验。
取左旋苯甘氨酸甲酯盐酸盐对照品约60mg，精密称定，置50mL量瓶，加流动相溶液稀释成浓度为1.2mg/mL的左旋苯甘氨酸盐酸盐对照品贮备液，精密量取对照贮备液3mL、4mL、5mL、6mL、7mL置10mL量瓶中，用流动相稀释到刻度，摇匀，分别制成每1mL含左旋苯甘氨酸盐酸盐0.36mg、0.48mg、0.60mg、0.72mg、0.84mg的溶液(相当于测试溶液的60％、80％、100％、120％、140％)，作为线性溶液，各取10μL注入液相色谱仪，分别记录色谱图，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，如图4所示，其对应的数据见表4，所计算出的回归方程为线性回归方程y＝1E+07X+1688.4；相关系数r为1，符合线性范围测试中待测组分的相关系数R≥0.999的要求。
试验结果表明：左旋苯甘氨酸盐酸盐在0.36～0.84mg/mL浓度范围内，峰面积与浓度呈现良好的线性关系。
表4左旋苯甘氨酸盐酸盐含量测定线性试验结果
取左旋苯甘氨酸对照品约60mg，精密称定，置50mL量瓶，加流动相溶解稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置50ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，稀释成浓度为0.12mg/mL的左旋苯甘氨酸对照品贮备液，精密量取对照品贮备液3mL、4mL、5mL、6mL、7mL置10mL量瓶中，用流动相稀释到刻度，摇匀，分别制成每1mL含左旋苯甘氨酸0.036mg、0.048mg、0.06mg、0.072mg、0.084mg的溶液(相当于测试溶液的60％、80％、100％、120％、140％)，作为线性溶液，各取10μL注入液相色谱仪，分别记录色谱图，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，如图4所示，其对应的数据见表4，所计算出的回归方程为线性回归方程y＝1E+06X-653.4；相关系数r为0.9996，符合线性范围测试中待测组分的相关系数R≥0.999的要求。
试验结果表明：左旋苯甘氨酸在0.036～0.09mg/mL浓度范围内，峰面积与浓度呈现良好的线性关系。
表4左旋苯甘氨酸含量测定线性试验结果
5、准确度试验
按照实施例1的方法制备对照品溶液和供试品溶液，并按照与实施例1相同的色谱条件进行测定：取左旋苯甘氨酸甲酯对照品溶液20μL注入液相色谱仪，记录色谱图，左旋苯甘氨酸与左旋苯甘氨酸甲酯峰和相邻峰的分离度应符合要求，即大于1.5；取左旋苯甘氨酸甲酯盐酸盐对照品溶液1、2和左旋苯甘氨酸对照品溶液1.2各20μL注入液相色谱仪，记录色谱图，分别计算f值，要求两针f值RD≤1.0％，作为系统实用性实验。
对照品贮备液的制备：取左旋苯甘氨酸甲酯盐酸盐对照品约60mg，精密称定，置50mL量瓶，加流动相溶解稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。
选取一批已知左旋苯甘氨酸盐酸盐含量供试品(97.7％)。
加标供试品溶液的制备：取已知含量的左旋苯甘氨酸甲酯盐酸盐供试品9份(每份约30mg)，置50mL量瓶，加流动相溶解稀释至刻度，摇匀，每组分别加入分别上述对照品贮备液4ml，5ml，6ml，加流动相溶解稀释至刻度，摇匀，制成3组80％、100％、120％的添加供试品溶液。分别取20μL注入液相色谱仪，分别记录色谱图，按外标法以峰面积计算，以该含量与理论值的比值作为回收率，结果见表5。
表5左旋苯甘氨酸盐酸盐含量测定准确度试验结果
试验结果表明：左旋苯甘氨酸盐酸盐在浓度80％～120％范围内，9次回收率均在98％～102％范围内，RSD值为0.20％，小于限度2.0％，符合标准规定。
6、溶液的稳定性
1.室温稳定性
取左旋苯甘氨酸盐酸盐供试品约30mg，精密称定，置50mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀。在室温条件下放置0、2、4、6、8、10、12小时，按实施例1的测定法进行检测，考察溶液的稳定性。
2.4℃稳定性
取左旋苯甘氨酸盐酸盐供试品约30mg，精密称定，置50mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀。在4℃条件下放置0、2、4、6、8、10、12小时，按实施例1的测定法进行检测，考察溶液的稳定性。
供试品溶液于室温、4℃下的稳定性试验结果见表6。
表6左旋苯甘氨酸盐酸盐含量溶液稳定性考察
从表6中可以看出，供试品溶液分别在室温和4℃条件下7个数据的RSD值均小于限度2.0％。试验结果表明，在室温和4℃的条件下，本溶液在12小时内左旋苯甘氨酸盐酸盐含量稳定。
7、耐用性考察
通过改变流速、柱温、检测波长、流动相纯化水与甲醇的体积比以及不同型号的色谱柱来考察本分析方法的耐用性。
7-1.调节流动相中纯化水与甲醇的体积比
通过调节流动相中纯化水与甲醇的体积比，分别以纯化水∶甲醇＝732mL：250mL；742mL：240mL；752mL：230mL为流动相检测左旋苯甘氨酸盐酸盐供试品，试验结果见表7-1。
表7-1左旋苯甘氨酸盐酸盐含量测定HPLC方法耐用性(流动相中甲醇与纯化水的体积比)
上述试验结果表明，左旋苯甘氨酸盐酸盐与相邻峰的分离度均大于1.5，系统适用性符合规定，6个数据的RSD值小于2.0％。由此可知，流动相中甲醇与纯化水体积比的微小变动不影响左旋苯甘氨酸盐酸盐含量的测定。
7-2.更换色谱柱
通过更换色谱柱，分别采用大连伊利特、安捷伦不同厂家的C18色谱柱检测左旋苯甘氨酸盐酸盐供试品，实验结果见表7-2。
表7-2左旋苯甘氨酸盐酸盐含量测定HPLC方法耐用性(不同型号色谱柱)
试验结果表明，左旋苯甘氨酸盐酸盐与相邻峰的分离度均大于1.5，系统适用性符合规定，6个数据的RSD值小于2.0％。由此可知，不同厂家的色谱柱不影响左旋苯甘氨酸盐酸盐含量的测定。
7-3.改变检测波长
通过调节检测波长，范围在(292±5nm)之间，分别采用检测波长287nm、292nm和297nm检测左旋苯甘氨酸盐酸盐供试品，实验结果见表7-3。
表7-3左旋苯甘氨酸盐酸盐含量测定HPLC方法耐用性(不同检测波长)
试验结果表明，左旋苯甘氨酸盐酸盐与相邻峰的分离度均大于1.5，系统适用性符合规定，且6个数据的RSD值小于2.0％。由此可知，不同检测波长不影响左旋苯甘氨酸盐酸盐含量的测定。
7-4.改变柱温
通过在(25±5℃)之间改变柱温，分别采用柱温20℃、25℃、30℃检测左旋苯甘氨酸盐酸盐供试品，实验结果见表7-4。
表7-4左旋苯甘氨酸盐酸盐含量测定HPLC方法耐用性(不同柱温)
试验结果表明，左旋苯甘氨酸盐酸盐与相邻峰的分离度均大于1.5，系统适用性符合规定，6个数据的RSD值小于2.0％。由此可知，柱温的微小变化不影响左旋苯甘氨酸盐酸盐含量的测定。
7-5.改变流速
通过在(1.2±0.2mL/min)之间改变流速，分别采用流速1.0mL/min、1.2mL/min、1.4mL/min检测左旋苯甘氨酸盐酸盐供试品，实验结果见表7-5。
表7-5左旋苯甘氨酸盐酸盐含量测定HPLC方法耐用性(不同流速)
试验结果表明，左旋苯甘氨酸盐酸盐与相邻峰的分离度均大于1.5，系统适用性符合规定，6个数据的RSD值小于2.0％。由此可知，流速微小的变化不影响左旋苯甘氨酸盐酸盐含量的测定。
8、专属性试验
分别在高温、光照、酸、碱和氧化的条件下对左旋苯甘氨酸盐酸盐样品进行破坏性试验，考察经破坏的左旋苯甘氨酸盐酸盐样品的主峰纯度及主峰与相邻峰的分离度；取空白溶剂或经以上破坏的空白溶剂进样，考察其对左旋苯甘氨酸盐酸盐含量测定是否有干扰。
8-1.破坏实验
未破坏：取本品30.12mg，置50mL量瓶，加流动相溶解至刻度，摇匀，进样检测，记录色谱图。
a.碱破坏试验
称取供试品31.25mg，置50mL量瓶，加入流动相20mL，再加1mol/mL氢氧化钠1mL，放置1min，加1mol/mL盐酸溶液1mL中和，加入流动相溶解稀释至刻度，摇匀，进样检测，记录色谱图。
b.酸破坏试验
称取供试品31.01mg，置50mL量瓶，加入流动相20mL，再加1mol/mL盐酸溶液0.5mL，放置1min，加1mol/mL氢氧化钠0.5mL中和，加入流动相溶解稀释至刻度，摇匀，进样检测，记录色谱图。
c.高温破坏试验
称取供试品32.55mg，置100mL量瓶，加入流动相溶解稀释至约量瓶容积的3/4,在80℃水浴30min，冷却到室温，在加入流动相溶解稀释至刻度，摇匀，进样检测，记录色谱图。
d.氧化破坏试验
称取供试品29.76mg，置50mL量瓶，加入流动相20mL，再加30％过氧化氢1mL，放置1min，加入流动相溶解稀释至刻度，摇匀，进样检测，记录色谱图。
e.光照破坏试验
取在4500lx光照试验箱中24小时的样品31.76mg，精密称定，置50mL量瓶，加流动相溶解至刻度，摇匀，进样检测，记录色谱图。
上述未经破坏、碱破坏、酸破坏、高温破坏、氧化破坏及光照破坏试验的左旋苯甘氨酸盐酸盐含量测定结果见表8。
表8左旋苯甘氨酸盐酸盐含量测定专属性破坏结果
注：主峰面积由未破坏峰面积样品测定的峰面积按称样量折算，为理论值；破坏程度为破坏后的主峰面积与破坏前的主峰面积的百分比；R为主峰面积与前相邻峰杂质峰分离度。
试验结果表明，各个破坏程度均达到80％～90％，且主峰面积与前相邻峰杂质峰分离度均大于1.5，符合规定。由此可知，主峰为单一峰，各破坏条件产生的降解杂质并未影响到左旋苯甘氨酸盐酸盐含量的测定。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (6)
1.一种左旋苯甘氨酸甲酯盐酸盐的分析方法，其特征在于，包括如下步骤：
(a)对照品溶液的制备：精密称定左旋苯甘氨酸标准品、左旋苯甘氨酸甲酯盐酸盐标准品，分别加流动相溶解，并定量稀释制成浓度为0.036～0.09mg/mL的左旋苯甘氨酸对照品溶液、浓度为0.36～0.9mg/mL左旋苯甘氨酸甲酯盐酸盐对照品溶液，摇匀、定容；
(b)被测样品溶液的制备：精密称定左旋苯甘氨酸甲酯盐酸盐样品，分别加流动相溶解，并定量稀释制成浓度为0.36～0.9mg/mL的左旋苯甘氨酸甲酯盐酸盐被测样品溶液，摇匀、定容；
(c)色谱条件：采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相流速为0.9～1.1mL/min；检测波长为210～230nm；柱温为20℃～30℃；
(d)测定法：分别精密量取被测样品溶液和对照品溶液，注入液相色谱仪；记录被测样品和对照品的色谱图，按外标法以峰面积计算，即得被测样品中的左旋苯甘氨酸和左旋苯甘氨酸甲酯盐酸盐的含量。
2.根据权利要求1所述左旋苯甘氨酸甲酯盐酸盐的分析方法，其特征在于，所述流动相为纯化水、甲醇、乙酸钠溶液、冰醋酸溶液的混合溶液；
所述乙酸钠溶液为3.86g无水乙酸钠溶于100mL水后得到；
所述冰醋酸溶液为10mL冰醋酸溶于240mL水后得到。
3.根据权利要求2所述左旋苯甘氨酸甲酯盐酸盐的分析方法，其特征在于，所述流动相为体积比为742：240：15：3的纯化水、甲醇、乙酸钠溶液、冰醋酸溶液。
4.根据权利要求1所述左旋苯甘氨酸甲酯盐酸盐的分析方法，其特征在于，所述流动相的流速为1.0mL/min。
5.根据权利要求1所述左旋苯甘氨酸甲酯盐酸盐的分析方法，其特征在于，对照品溶液和/或被测样品溶液的浓度为0.6mg/mL。
6.根据权利要求1所述左旋苯甘氨酸甲酯盐酸盐的分析方法，其特征在于，所述检测波长为220nm。
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