CN116650540A - 使用乳酸菌菌株来治疗异位性皮肤炎 - Google Patents

使用乳酸菌菌株来治疗异位性皮肤炎 Download PDF

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Abstract

本发明涉及使用乳酸菌菌株来治疗异位性皮肤炎。本发明揭示一种乳酸菌菌株可被用来治疗异位性皮肤炎，其中该乳酸菌菌株选自由下列所构成的群组：唾液乳酸杆菌AP‑32(CCTCC M 2011127)、动物双歧杆菌乳亚种CP‑9(CCTCC M 2014588)，以及它们的组合。

Description

使用乳酸菌菌株来治疗异位性皮肤炎
技术领域
本发明是有关于使用乳酸菌菌株(lactic acid bacteria strains) 来治疗异位性皮肤炎(atopic dermatitis)，其中该乳酸菌菌株选自 由下列所构成的群组：唾液乳酸杆菌(Lactobacillus salivarius subsp.salicinius)AP-32(CCTCC M 2011127)、动物双歧杆菌乳亚 种(Bifidobacterium animalis subsp.lactis)CP-9(CCTCC M 2014588)，以及它们的组合。
背景技术
异位性皮肤炎(atopic dermatitis,AD)[也被称为异位性湿疹 (atopiceczema)]是一种常见且具复发性的过敏性皮肤疾病 (allergic skin disease)，被认为主要是由于Th1/Th2失衡(Th1/Th2 dysbalance)所引起，可观察到Th1细胞激素(Th1cytokines)[包括 干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)]表达量的大量减少，以及Th2 细胞激素(Th2 cytokines)[包括介白素-13(interleukin-13,IL-13)] 的大量增加。
常见的症状包括皮肤搔痒(pruritus)、红肿(redness and swelling)、脱屑(desquamation)、龟裂(crack)以及结痂(crust formation)。对于婴幼儿而言，好发部位主要为脸部，而对于孩童与 成人，好发部位则为膝盖与手肘的关节屈侧。此外，许多患者也会发 展出过敏性鼻炎(allergic rhinitis)、气喘(asthma)以及过敏性结 膜炎(allergicconjunctivitis)。
目前临床上用来治疗异位性皮肤炎的药物主要包括：口服的抗组 织胺药物(antihistamine)与抗生素(antibiotics)，以及局部的皮质 类固醇(corticosteroid)与免疫抑制剂(immunosuppressive agent)。 然而，这些药物可能会导致患者产生副作用(side effects)以及抗药 性(drug resistance)，以至于患者经过长时间的治疗后，症状仍没 有太大的改善且也会有复发的情形。因此，本领域的相关研究人员皆 致力于发展出可以有效地治疗异位性皮肤炎并且不会产生非所欲的 副作用的药物。
乳酸菌(lactic acid bacteria,LAB)属于一般被公认为安全的 (generallyrecognized as safe,GRAS)并且为人所熟悉与广泛使用 的益生菌(probiotics)。常见的乳酸菌包括：乳酸杆菌属 (Lactobacillus)、乳球菌属(Lactococcus)、片球菌属(Pediococcus)、 肠球菌属(Enterococcus)、链球菌属(Streptococcus)、双歧杆菌属(Bifidobacterium)、芽孢杆菌属(Bacillus)以及明串珠菌属 (Leuconostoc)等。
目前已有研究是有关于乳酸菌菌株在改善异位性皮肤炎上的应 用。例如，在Isolauri E.et al.(2000),Clin.Exp.Allergy, 30:1604-1610中，Isolauri E.等人将乳酸杆菌菌株GG (Lactobacillus strain GG)(ATCC 53103)[也就是鼠李糖乳酸杆菌(Lactobacillus rhamnosus)GG(LGG)]与乳双歧杆菌 (Bifidobacterium lactis)BB-12[也就是动物双歧杆菌乳亚种 (Bifidobacterium animalis subsp.lactis)BB-12]分别添加至高 度水解的乳清蛋白配方(extensively hydrolysed whey formula)并 将其拿来喂给在哺乳(breast-feeding)期间表现出异位性皮肤炎的 婴儿，而结果发现到：鼠李糖乳酸杆菌GG与动物双歧杆菌乳亚种 BB-12皆能够有效地改善异位性皮肤炎。
虽然已存在有上述文献报道，本领域中仍然存在有需要去筛选出 可以有效治疗异位性皮肤炎的乳酸菌以供产业界之用。
发明内容
于本发明中，申请人经实验而发现到，唾液乳酸杆菌 (Lactobacillussalivarius subsp.salicinius)AP-32(CCTCC M 2011127)与动物双歧杆菌乳亚种(Bifidobacterium animalis subsp. lactis)CP-9(CCTCC M 2014588)皆能够有效改善异位性皮肤炎 (atopic dermatitis,AD)的病患的Th1/Th2失衡(Th1/Th2 dysbalance)，并在以1：0.11至1：9的菌数比来组合使用时产生 协同效应(synergistic effect)。
于是，在第一个方面，本发明提供一种乳酸菌菌株供应用于制 备用来治疗异位性皮肤炎的组合物的用途，其中该乳酸菌菌株选自 由下列所构成的群组：唾液乳酸杆菌AP-32、动物双歧杆菌乳亚种 CP-9，以及它们的组合。
较佳地，该乳酸菌菌株是含有唾液乳酸杆菌AP-32以及动物双 歧杆菌乳亚种CP-9的组合。
较佳地，唾液乳酸杆菌AP-32以及动物双歧杆菌乳亚种CP-9 的菌数比落在1：0.11至1：9的范围内。
更佳地，该菌数比是1：9。
较佳地，该组合物是食品组合物。
较佳地，该组合物是药学组合物。
更佳地，该药学组合物进一步包含有药学上可接受的载剂。
更佳地，该药学组合物呈供口服投药或局部投药的剂型。
在第二个方面，本发明提供一种用于治疗异位性皮肤炎的方法， 其包括对有此需要的个体投予如上所述的乳酸菌菌株。
附图说明
图1显示各组PBMCs细胞在被处理以不同的乳酸菌菌株后所测得 的IFN-γ浓度(pg/mL)，其中“***”表示当与单菌比较组1作比较， p＜0.001；以及“##”表示当与单菌比较组2作比较，p＜0.01；
图2显示各组PBMCs细胞在被处理以不同的乳酸菌菌株后所测得 的IL-10浓度(pg/mL)，其中“***”表示当与单菌比较组1作比较， p＜0.001；以及“###”表示当与单菌比较组2作比较，p＜0.001；
图3显示各组PBMCs细胞在被处理以不同的乳酸菌菌株后所测得 的IL-13浓度(pg/mL)，其中“***”表示当与单菌比较组1作比较， p＜0.001；以及“###”表示当与单菌比较组2作比较，p＜0.001；
图4显示各组PBMCs细胞在被处理以不同的乳酸菌菌株后所测得 的IFN-γ浓度(pg/mL)，其中“***”表示当与单菌组1作比较，p＜ 0.001；“###”表示当与单菌组2作比较，p＜0.001；以及“”与 “/>”分别表示当与复合菌组4作比较，p＜0.01与p＜0.001；
图5显示各组PBMCs细胞在被处理以不同的乳酸菌菌株后所测得 的IL-10浓度(pg/mL)，其中“***”表示当与单菌组1作比较，p＜ 0.001；以及“###”表示当与单菌组2作比较，p＜0.001；以及
图6显示各组PBMCs细胞在被处理以不同的乳酸菌菌株后所测得 的IL-13浓度(pg/mL)，其中“*”表示当与单菌组1作比较，p＜0.05； 以及“#”表示当与单菌组2作比较，p＜0.05。
具体实施方式
为了这本说明书的目的，将被清楚地了解的是：文字“包含有 (comprising)”意指“包含但不限于”，以及文字“包括(comprises)” 具有对应的意义。
除非另外有所定义，在本文中所使用的所有技术性与科学术语具 有本领域技术人员所共同了解的意义。本领域技术人员会认知到许多 与那些被描述于本文中者相似或等效的方法和材料，它们可被用于实 施本发明。当然，本发明决不受到所描述的方法和材料的限制。
本发明提供一种乳酸菌菌株供应用于制备用来治疗异位性皮肤 炎(atopicdermatitis)的组合物的用途，其中该乳酸菌菌株选自由 下列所构成的群组：唾液乳酸杆菌(Lactobacillus salivarius subsp. salicinius)AP-32(CCTCC M 2011127)、动物双歧杆菌乳亚种 (Bifidobacterium animalis subsp.lactis)CP-9(CCTCC M 2014588)， 以及它们的组合。
如本文中所用的，“治疗(treating)”或“治疗(treatment)” 意指预防(preventing)、减少(reducing)、减轻(alleviating)、改 善(ameliorating)、缓解(relieving)、或控制(controlling)疾病 (disease)或障碍(disorder)的一个或多个临床征兆(clinical sign)， 以及降低(lowering)、停止(stopping)或逆转(reversing)正在被治 疗中的病况(condition)或症状(symptom)的严重性(severity)的进 展(progression)。
在本发明的一个较佳具体例中，该乳酸菌菌株是含有唾液乳酸杆 菌AP-32以及动物双歧杆菌乳亚种CP-9的组合。
较佳地，唾液乳酸杆菌AP-32以及动物双歧杆菌乳亚种CP-9的 菌数比可落在1：0.11至1：9的范围内。更佳地，该菌数比是1：9。
依据本发明，该乳酸菌菌株组合可具有范围落在107至1012CFU/mL 内的细菌浓度，较佳地，108至1010CFU/mL。在本发明的一个较佳具 体例中，该乳酸菌菌株组合的细菌浓度为109CFU/mL。
依据本发明，唾液乳酸杆菌AP-32以及动物双歧杆菌乳亚种CP-9 可以是活菌或死菌、经浓缩的(concentrated)或未经浓缩的 (non-concentrated)、液态(liquid)、糊状(paste)、半固态 (semi-solid)，或固态(solid)[例如，丸(pellet)、细颗粒(granule) 或粉末(powder)]，并且可以是经热去活的(heat-inactivated)、经 冷冻的(frozen)、经干燥的(dried)，或经冷冻-干燥的 (freeze-dried)[例如，可呈冷冻干燥形式或喷雾/流化床干燥 (spray/fluid bed dried)形式]。
依据本发明，该组合物可以是食品组合物(food composition)。 例如，呈食品添加物(food additive)的形式，其可以被添加至可食 性材料(edible material)中以制备供人类或动物食用的食品产品。 依据本发明，该食品产品的种类可包括，但不限于：奶粉(milk powder)、 发酵乳(fermented milk)、优格(yogurt)、奶酪(butter)、饮料(beverages)(例如，茶、咖啡)、功能性饮料(functional beverages)、 面制品(flourproduct)、烘焙食品(baked foods)、甜点 (confectionery)、糖果(candies)、发酵食品(fermented foods)、 动物饲料(animal feeds)、保健食品(health foods)、婴儿食品(infant food)，以及膳食补充品(dietary supplements)。
依据本发明，该组合物可以是药学组合物(pharmaceutical composition)。
依据本发明，该药学组合物可呈适合于口服投药(oral administration)或局部投药(topical administration)的剂型 (dosage form)。
依据本发明，该药学组合物可进一步包含有被广泛地使用于药物 制造技术的药学上可接受的载剂(pharmaceutically acceptable carrier)。例如，该药学上可接受的载剂可包含一种或多种选自于下 列的试剂：溶剂(solvent)、缓冲液(buffer)、乳化剂(emulsifier)、 悬浮剂(suspending agent)、分解剂(decomposer)、崩解剂(disintegrating agent)、分散剂(dispersing agent)、粘结剂 (binding agent)、赋形剂(excipient)、稳定剂(stabilizing agent)、 螯合剂(chelating agent)、稀释剂(diluent)、胶凝剂(gelling agent)、防腐剂(preservative)、润湿剂(wetting agent)、润滑剂(lubricant)、吸收延迟剂(absorption delaying agent)、脂质体 (liposome)以及类似物。有关这些试剂的选用与数量是落在本领域技 术人员的专业素养与例行技术范畴内的。
依据本发明，该药学组合物可利用本领域技术人员所详知的技术 而被制造成适合于口服投药的剂型，这包括，但不限于：无菌的粉末、 锭剂(tablet)、片剂(troche)、口含锭(lozenge)、丸剂(pellet)、 胶囊(capsule)、分散性粉末(dispersible powder)或细颗粒 (granule)、溶液、悬浮液(suspension)、乳剂(emulsion)、糖浆 (syrup)、酏剂(elixir)、浓浆(slurry)以及类似物。
依据本发明，该药学组合物也可利用本领域技术人员所详知的技 术而被制造成适合于局部地施用于皮肤上的外部制剂(external preparation)，这包括，但不限于：乳剂(emulsion)、凝胶(gel)、 软膏(ointment)、乳霜(cream)、贴片(patch)、擦剂(liniment)、粉 末(powder)、气溶胶(aerosol)、喷雾(spray)、乳液(lotion)、乳浆 (serum)、糊剂(paste)、泡沫(foam)、滴剂(drop)、悬浮液 (suspension)、油膏(salve)以及绷带(bandage)。
依据本发明，该外部制剂是通过将本发明的药学组合物与为本领 域技术人员所详知的基底(base)相混合而被制备的。
依据本发明，该基底可包含有一种或多种选自于下列的添加剂 (additives)：水、醇(alcohols)、甘醇(glycol)、碳氢化合物 (hydrocarbons)[诸如石油胶(petroleumjelly)以及白凡士林(white petrolatum)]、蜡(wax)[诸如石蜡(paraffin)以及黄蜡(yellow wax)]、 保存剂(preserving agents)、抗氧化剂(antioxidants)、界面活性 剂(surfactants)、吸收增强剂(absorption enhancers)、稳定剂 (stabilizing agents)、胶凝剂(gelling agents)[诸如941 (/>941)、微结晶纤维素(microcrystalline cellulose)以及 羧基甲基纤维素(carboxymethylcellulose)]、活性剂(active agents)、保湿剂(humectants)、气味吸收剂(odor absorbers)、香 料(fragrances)、pH调整剂(pH adjusting agents)、螯合剂 (chelating agents)、乳化剂(emulsifiers)、闭塞剂(occlusive agents)、软化剂(emollients)、增稠剂(thickeners)、助溶剂(solubilizing agents)、渗透增强剂(penetration enhancers)、抗 刺激剂(anti-irritants)、着色剂(colorants)以及推进剂 (propellants)等。有关这些添加剂的选用与数量是落在本领域技术 人员的专业素养与例行技术范畴内的。
依据本发明，该药学组合物可与一种或多种选自由下列所构成的 群组中的药物一起合并使用：消炎剂(anti-inflammatory agent)、 免疫抑制剂(immunosuppressiveagent)、抗组织胺药物 (antihistamine)、抗病毒剂(antiviral agent)、伤口治疗剂(wound-healing agent)、止痒剂(antipruritic)、抗干皮肤剂 (anti-dry skin agent)、保湿剂(humectant)，以及皮肤营养剂(skin nutrient)。
本发明也提供一种用于治疗异位性皮肤炎的方法，其包括对有此 需要的个体投予(administering)如上所述的乳酸菌菌株。
如本文中所使用的，术语“投予”以及“投药(administration)” 可被交换地使用，并且意指通过任何合适的途径来对个体导入 (introducing)、提供(providing)或递送(delivering)预定的活性成 分以执行其预期的效用。
如本文中所使用的，术语“个体(subject)”意指任何感兴趣的 哺乳类动物，诸如人(humans)、猴子(monkeys)、牛(cows)、绵羊 (sheep)、马(horses)、猪(pigs)、山羊(goats)、狗(dogs)、猫(cats)、 小鼠(mice)以及大鼠(rats)。
依据本发明，该乳酸菌菌株的投药剂量与投药次数会视下列因素 而变化：要被改善的病况的严重性，投药途径，以及要被改善的个体 的年龄、身体状况与反应。一般而言，该乳酸菌菌株可呈单一剂量或 是分成多个剂量的形式而被口服地或局部地投药。
本发明将就下面的实施例来做进一步说明，但应了解的是，这些 实施例只是供例示说明用，而不应被解释为本发明的实施上的限制。
＜实施例＞
一般实验材料：
1.乳酸菌菌株：
在下面实施例中拿来进行功效评估的乳酸菌菌株已被保藏于中 国台湾的食品工业发展研究所(Food Industry Research and Development Institute,FIRDI)的生物资源保存及研究中心 (Bioresource Collection and Research Center,BCRC)(300新竹市食品路331号，台湾，中国)，并且已公众可获得。另外，这些乳酸 菌菌株也有依据布达佩斯条约(the Budapest Treaty)的规定被保藏 于中国典型培养物保藏中心(China Centerfor Type Culture Collection,CCTCC)。为表清楚，各个乳酸菌菌株的相关信息(包括： 学名、相关出处、保藏编号以及保藏日期等)已被整合于下面表1中。
表1 各个乳酸菌菌株的相关信息
为供比较，也有使用下列现有具有改善异位性皮肤炎(atopic dermatitis,AD)效用的市售乳酸菌菌株：购自于科汉森股份有限公 司(Chr.Hansen A/S,Denmark)的鼠李糖乳酸杆菌(Lactobacillus rhamnosus)GG(LGG)(对应于ATCC 53103)以及动物双歧杆菌乳亚种 BB-12(对应于DSM 15954)。
2.乳酸菌菌株的培养物的制备：
首先，将上面第1项当中所述的4种乳酸菌菌株分别接种至补充 有0.05％半胱氨酸(cysteine)的MRS肉汤培养基(MRS broth)(Difco, Cat.No.288130)中，并在培养箱(37℃、5％CO2)中进行培养历时24 小时，以活化菌株。接着，将经活化的菌株分别以为2％(v/v)的接种 量接种至MRS肉汤培养基中，并在培养箱(37℃、5％CO2)中进行培养 历时24小时。之后，以MRS肉汤培养基将所形成的培养物皆调整为 具有为1×109CFU/mL的细菌浓度(以平板计数培养基来进行菌数计 数)，借此而分别得到各个乳酸菌菌株的培养物。
3.周边血液单核细胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMCs)的制备：
首先，对10位由高雄长庚纪念医院(Kaohsiung Chang Gung Memorial Hospital)所招募的经临床诊断具有异位性皮肤炎的病患 (包括8位男性与2位女性，年龄为13岁以下)进行周边血液 (peripheral blood)的收集，而此是依据由高雄长庚纪念医院的研究伦理审查会(Institutional Review Board,IRB)所认可的操作过程 并依据赫尔辛基宣言(Declaration of Helsinki)的现行修订版的规 范来进行。在向所有参与者进行完整的实验说明后，有取得他们的告 知同意书(informed consent)。
接着，将所得到的周边血液添加至Ficoll-PaqueTMPLUS的离心 管中，并于4℃下以720g来进行密度-梯度离心(density-gradient centrifugation)历时30分钟，然后收取淋巴细胞层(lymphocyte layer)。之后，以红血球溶解缓冲溶液(RBC lysis buffer)来溶解红 血球。而由此所得到的PBMCs细胞以含有10％胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)的RPMI 1640培养基(Gibco)来将浓度调整至4×106细胞 /mL备用。
一般实验方法：
1.统计学分析(statistical analysis)：
在下面的实施例中，各组的实验被重复3次，而实验数据是以“平 均值(mean)±平均值的标准误差(standard error of the mean,SEM)” 来表示。所有的数据是通过史徒登氏t-试验(Student’s t-test)来 作分析，以评估各组间的差异性。若所得到的统计分析结果是p<0.05， 这表示有统计学显著性(statistical significance)。
实施例1.乳酸菌菌株在治疗异位性皮肤炎上的效用评估 A.使用乳酸菌菌株来处理PBMCs细胞：
首先，将依据上面“一般实验材料”的第3项当中所得到的 PBMCs细胞分成5组，其中包括1个病理对照组、2个单菌实验组(也 就是单菌实验组1与2)以及2个单菌比较组(也就是单菌比较组1与 2)。各组细胞分别以为4×105细胞/孔的数量培养于含有0.12mL的RPMI 1640培养基[添加有10％FBS以及1％盘尼西林-链霉素 (penicillin-streptomycin,PS)]的96-孔培养板(96-well plate) 中，并在培养箱(37℃，5％CO2)中进行培养历时24小时。
接着，将各组更换以新鲜的培养基，继而依据下面表2所示将适 量的在上面“一般实验材料”的第2项当中所得到的4种乳酸菌菌株 的培养物分别添加至对应的组别中，而使得各个单菌实验组与单菌比 较组皆含有4×106CFU的乳酸菌菌数。至于病理对照组的细胞培养物 则不作任何处理。
表2 各组所处理的乳酸菌菌株的培养物
组别 乳酸菌菌株的培养物
病理对照组 －
单菌实验组1 唾液乳酸杆菌AP-32
单菌实验组2 动物双歧杆菌乳亚种CP-9
单菌比较组1 鼠李糖乳酸杆菌LGG
单菌比较组2 动物双歧杆菌乳亚种BB-12
各组细胞在培养箱(37℃，5％CO2)中进行培养历时48小时之后， 将所形成的培养物于3,000rpm下进行离心历时10分钟，继而收取 上清液并将其拿来进行下面第B项的分析。
B.干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)、介白素-10 (interleukin-10,IL-10)以及介白素-13(interleukin-13, IL-13)的浓度测定：
使用IFN-γ ELISA试剂盒(厂牌为ThermoFisher，货号为 KHC4021)、IL-10ELISA试剂盒(厂牌为ThermoFisher，货号为 BMS215-2)以及IL-13ELISA试剂盒(厂牌为ThermoFisher，货号为 BMS231-3)并依据制造商的操作指南来测定各组上清液中的IFN-γ、 IL-10以及IL-13的浓度(pg/mL)。
之后，依照上面“一般实验方法”的第1项当中所述的方法来分 析所得到的实验数据。
图1与图2分别显示各组PBMCs细胞在被处理以不同的乳酸菌菌 株后所测得的IFN-γ与IL-10浓度。从图1与图2可见，与病理对 照组相较之下，各个单菌实验组与单菌比较组的IFN-γ与IL-10浓 度皆有明显的升高，其中各个单菌实验组的IFN-γ与IL-10浓度更 是显著高于各个单菌比较组所具者，这表示：唾液乳酸杆菌AP-32以 及动物双歧杆菌乳亚种CP-9能够在人类PBMCs中有效地诱导Th1细 胞分泌IFN-γ与IL-10，并且此诱导效用是优于现有用于改善异位性 皮肤炎的乳酸菌菌株所具者。
图3显示各组PBMCs细胞在被处理以不同的乳酸菌菌株后所测得 的IL-13浓度。从图1可见，与病理对照组相较之下，各个单菌实验 组与单菌比较组的IL-13浓度皆有明显的降低，其中各个单菌实验组 的IL-13浓度更是显著低于各个单菌比较组所具者，这表示：唾液乳 酸杆菌AP-32以及动物双歧杆菌乳亚种CP-9能够在人类PBMCs中有 效地抑制Th2细胞分泌IL-13，并且此抑制效用是优于习知用于改善 异位性皮肤炎的乳酸菌菌株所具者。
这些实验结果显示：唾液乳酸杆菌AP-32与动物双歧杆菌乳亚种 CP-9皆能够通过改善Th1/Th2失衡(Th1/Th2 dysbalance)来达到治疗 异位性皮肤炎的效用。
实施例2.乳酸菌菌株的组合在治疗异位性皮肤炎上的效用评估
A.使用乳酸菌菌株来处理PBMCs细胞：
首先，将依据上面“一般实验材料”的第3项当中所得到的 PBMCs细胞分成8组，其中包括1个病理对照组、2个单菌组(也就是 单菌组1与2)以及5个复合菌组(也就是复合菌组1至5)。各组细胞 分别以一为4×105细胞/孔的数量培养于含有0.12mL的RPMI 1640 培养基(添加有10％FBS以及1％盘尼西林-链霉素)的96-孔培养板，并 在培养箱(37℃，5％CO2)中进行培养历时24小时。
接着，将各组更换以新鲜的培养基，继而将适量的在上面“一般 实验材料”的第2项当中所得到的唾液乳酸杆菌AP-32与动物双歧杆 菌乳亚种CP-9的培养物分别添加至单菌组1与2中，而使得各个单 菌组皆含有4×106CFU的乳酸菌菌数，以及依据下面表3所示将唾液 乳酸杆菌AP-32与动物双歧杆菌乳亚种CP-9的培养物以不同的菌数 比来相互混合并分别添加至复合菌组1至5中，而使得各个复合菌组 皆含有4×106CFU的乳酸菌菌数。至于病理对照组的细胞培养物则不 作任何处理。
表3 各个复合菌组所处理的乳酸菌菌株的菌数比
组别 AP-32：CP-9
复合菌组1 1：0.05
复合菌组2 1：0.11
复合菌组3 1：1
复合菌组4 1：9
复合菌组5 1：19
各组细胞在培养箱(37℃，5％CO2)中进行培养历时48小时后，将 所形成的培养物于3,000rpm下进行离心历时10分钟，继而收取上 清液并将其拿来进行下面第B项的分析。
B.IFN-γ的浓度测定：
使用IFN-γELISA试剂盒(厂牌为ThermoFisher，货号为KHC4021) 并依据制造商的操作指南来测定各组上清液中的IFN-γ浓度(pg/mL)。 之后，依照上面“一般实验方法”的第1项当中所述的方法来分析所 得到的实验数据。所得到的结果被显示于图1中。
图4显示各组PBMCs细胞在被处理以不同的乳酸菌菌株后所测得 的IFN-γ浓度。从图4可见，各个单菌组的IFN-γ浓度皆略高于病 理对照组所具者，而复合菌组1与5的IFN-γ浓度反而略低于单菌组 2所具者，只有复合菌组2至4才能高于各个单菌组所测得者的总和， 其中又以复合菌组4能够意外地获致大幅升高的IFN-γ浓度，并且 明显优于复合菌组2与3所具者，这表示：当唾液乳酸杆菌AP-32以 及动物双歧杆菌乳亚种CP-9以1：0.11至1：9的菌数比来组合使用 时，能够协同性地(synergistically)诱导Th1细胞分泌IFN-γ，特 别是呈1：9的菌数比。
基于上述，申请人进一步将病理对照组、各个单菌组以及复合菌 组4的上清液拿来进行下面第C项的分析。
C.IL-10以及IL-13的浓度测定：
使用IL-10ELISA试剂盒(厂牌为ThermoFisher，货号为BMS215-2) 以及IL-13ELISA试剂盒(厂牌为ThermoFisher，货号为BMS231-3) 并依据制造商的操作指南来测定各组上清液中的IL-10以及IL-13的 浓度(pg/mL)。
之后，依照上面“一般实验方法”的第1项当中所述的方法来分 析所得到的实验数据。所得到的结果被显示于图5与图6中。
图5显示各组PBMCs细胞在被处理以不同的乳酸菌菌株后所测得 的IL-10浓度。从图5可见，与病理对照组相较下，各个单菌组与复 合菌组4的IL-10浓度皆有明显的升高，其中复合菌组4的IL-10浓 度更是显著高于各个单菌组所具者，这表示：当唾液乳酸杆菌AP-32 以及动物双歧杆菌乳亚种CP-9以1：9的菌数比来组合使用时，能够 协同性地诱导Th1细胞分泌IL-10。
图6显示各组PBMCs细胞在被处理以不同的乳酸菌菌株后所测得 的IL-13浓度。从图6可见，与病理对照组相较下，各个单菌组与复 合菌组4的IL-13浓度皆有明显的降低，其中复合菌组4的IL-13浓 度更是显著低于各个单菌组所具者，这表示：当唾液乳酸杆菌AP-32 以及动物双歧杆菌乳亚种CP-9以1：9的菌数比来组合使用时，能够 协同性地抑制Th2细胞分泌IL-13。
综合以上的实验结果可知：以1：9的菌数比来组合使用唾液乳 酸杆菌AP-32以及动物双歧杆菌乳亚种CP-9能够协同地改善Th1/Th2 失衡，进而能显著提升异位性皮肤炎的治疗效用。
于本说明书中被引述的所有专利和文献以其整体被并入本申请 作为参考数据。若有所冲突时，本申请详细说明(包含限定在内)将占 上风。
虽然本发明已参考上述特定的具体例被描述，明显地在不背离本 发明的范围和精神下可作出很多的修改和变化。因此意欲的是，本发 明仅受如随文检附的权利要求书所示者的限制。
生物材料保藏信息说明
保藏编号：CCTCC NO：M 2011127
分类命名：Lactobacillus salivarius subsp.salicinius AP-32
保藏日期：2011年4月10日
保藏单位：中国典型培养物保藏中心
保藏单位地址：中国武汉
保藏编号：CCTCC NO：M 2014588
分类命名：Bifidobacterium animalis subsp.lactis CP-9
保藏日期：2014年11月24日
保藏单位：中国典型培养物保藏中心
保藏单位地址：中国武汉。

Claims (8)

1.一种乳酸菌菌株供应用于制备用来治疗异位性皮肤炎的组合物的用途，其特征在于：该乳酸菌菌株选自由下列所构成的群组：Lactobacillus salivariussubsp.salicinius AP-32(CCTCC M2011127)、Bifidobacterium animalis subsp.lactisCP-9(CCTCC M 2014588)，以及它们的组合。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：该乳酸菌菌株是含有Lactobacillussalivarius subsp.salicinius AP-32以及Bifidobacterium animalis subsp.lactisCP-9的组合。
3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于：Lactobacillus salivariussubsp.salicinius AP-32以及Bifidobacterium animalis subsp.lactis CP-9的菌数比落在1：0.11至1：9的范围内。
4.根据权利要求3所述的用途,其特征在于:该菌数比是1:9。
5.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：该组合物是食品组合物。
6.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：该组合物是药学组合物。
7.根据权利要求6所述的用途，其特征在于：该药学组合物进一步包含有药学上可接受的载剂。
8.根据权利要求6所述的用途，其特征在于：该药学组合物呈供口服投药或局部投药的剂型。
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