CN116622846A - 用于弥漫大B细胞淋巴瘤诊断的外周血circRNA生物标志物及其应用 - Google Patents

用于弥漫大B细胞淋巴瘤诊断的外周血circRNA生物标志物及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明属于分子诊断和分子生物学技术领域，具体涉及用于弥漫大B细胞淋巴瘤诊断的外周血circRNA生物标志物及其应用。本发明通过研究发现，血浆中的hsa_circ_0080018其对于弥漫大B细胞淋巴瘤具有很高的灵敏度和特异性，同时研究发现其在不同来源的弥漫大B细胞淋巴瘤中的表达量不同，同时临床检测仅需采集微量外周血，创伤性小，更易被受检者接受，从而可为弥漫大B细胞淋巴瘤患者的早诊、疾病起源进行分类，其特异性强，敏感性高，结果稳定，因此具有广泛的临床应用前景。

Description

用于弥漫大B细胞淋巴瘤诊断的外周血circRNA生物标志物及 其应用
技术领域
本发明属于分子诊断和分子生物学技术领域，具体涉及用于弥漫大B细胞淋巴瘤诊断的外周血circRNA生物标志物及其应用。
背景技术
公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)是具有高度侵袭性和异质性的恶性肿瘤，为最常见的非霍奇金淋巴瘤亚型，在非霍奇金淋巴瘤中占有1/3的比率。按照细胞起源分为两个主要的亚型，生发中心亚型(GCB)和活化B细胞型(ABC)/非生发中心(non-GCB)亚型，其中还有10-20％的为未分类。有文献报道ABC亚型相较于GCB亚型预后相对较差，治愈后仍有接近40％的患者复发。目前DLBCL的诊断主要依赖于病理检查，常规病理检测的免疫组化标记物包括：CD19、CD20、CD79α或PAX5、CD3ε、Ki-67，通常为CD20(+)、CD79α(+)或PAX5(+)、CD3ε(-)。同时对确诊后的淋巴瘤，对其起源进行进一步的确认，用以评估其治疗疗效。
目前DLBCL的分类主要是根据病理学结果进行判定，但在分子生物学遗传标记物的诊断上，存在着一定的缺失以及不足。随着科技的进步以及现代分子生物学技术的发展，大量的分子标志物在许多疾病中成为了一种新的诊断方式。在DLBCL中发现新的分子生物学标志物，逐渐成为新的研究热点，并以此成为未来个体化诊断和治疗新的靶点。是未来DLBCL治疗探索的重要方向，有望为当前以及今后治疗提供新的临床策略和新的治疗方案。
环状RNA(circular RNAs，circRNAs)是一类广泛存在的非编码RNA。在早期研究中，circRNAs被认为是形成于外显子转录本的错误剪接，作为随机产物并不具备生物学功能。CircRNAs是缺少5'端帽和3'端poly(A)尾的特殊闭环结构，具有核酸酶抗性；与哺乳动物细胞中线性mRNA、微小RNA和长链非编码RNA相比，具有更高的稳定性和序列保守性。随着生物信息学及高通量测序技术的迅速发展，大量circRNAs被发现并引起研究者的关注，成为近年来的研究热点。越来越多的证据表明，circRNAs并非偶然产生，其丰度、结构稳定性和时空表达特异性，在多种疾病的发生发展中发挥重要作用。
近些年研究发现，circRNAs在胃癌、肝细胞癌、胰腺导管腺癌、乳腺癌等肿瘤的发生过程中起着非常关键的作用，Yin等人发现hsa-circ-0001785可以作为乳腺癌诊断的分子靶标，Ma D等发现hsa_circ_0004277可以作为急性髓细胞白血病的诊断标志物，并且发现化疗可以显著恢复该circRNA的表达量，提示其与预后存在相关性，同时Wu等在慢性细胞淋巴瘤(CLL)血浆中发现hsa_circRPL15_001可以作为慢性细胞淋巴瘤血浆中诊断的标志物，同时该环状RNA与CLL的预后相关。从而表明circRNAs可作为一类新颖的、极具潜力的肿瘤诊断、治疗以及与预后相关的新型靶标。然而目前在弥漫大B细胞淋巴瘤血浆中尚未发现与circRNA相关的分子标志物或治疗靶点。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明提供用于弥漫大B细胞淋巴瘤诊断的外周血circRNA生物标志物及其应用。本发明经研究发现，血浆中的hsa_circ_0080018其对于弥漫大B细胞淋巴瘤具有很高的灵敏度和特异性，同时发现其在不同来源的DLBCL中的表达量不同。因此其可作为辅助DLBCL患者诊断以及其来源进行分类的一种分子生物学标志。基于上述研究成果，从而完成本发明。
为了实现上述目的，本发明涉及以下技术方案：
本发明的第一个方面，提供一种用于弥漫大B细胞淋巴瘤诊断的circRNA生物标志物，所述circRNA生物标志物为hsa_circ_0080018，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
本发明的第二个方面，提供检测上述生物标志物表达水平的物质在制备弥漫大B细胞淋巴瘤诊断产品中的应用。
本发明的第三个方面，提供一种检测试剂，所述检测试剂可以包括针对上述circRNA生物标志物的特异性引物，具体可以为SEQ ID NO.2所示的上游引物和SEQ IDNO.3所示的下游引物。
本发明的第四个方面，提供一种用于诊断弥漫大B细胞淋巴瘤的试剂盒，所述试剂盒包含上述检测试剂。
本发明的第五个方面，提供一种用于诊断弥漫大B细胞淋巴瘤的系统，其包含：
i)分析单元，所述分析单元包含：用于确定对象的样品中选自上述circRNA生物标志物表达水平的检测剂，以及；
ii)包含有数据处理器的评估单元，所述数据处理器有形地嵌入有用于将通过所述分析单元确定的量与参考进行比较的算法，并且能够生成包含基于所述比较建立的诊断结果的输出文件。
本发明的第六个方面，提供一种用于弥漫大B细胞淋巴瘤诊断的方法，所述方法包括：确定来自受试者的生物样品中上述circRNA生物标志物的存在或表达水平，以及将所述生物标志物的表达水平与参照进行比较。
本发明的第七个方面，提供上述circRNA生物标志物作为靶点在制备弥漫大B细胞淋巴瘤和/或筛选弥漫大B细胞淋巴瘤药物中的应用。
以上一个或多个技术方案的有益技术效果：
上述技术方案首次报道一种用于弥漫大B细胞淋巴瘤诊断的circRNA标志物，所述circRNA标志物为hsa_circ_0080018，通过对所述circRNA标志物进行检测，发现其可实现对弥漫大B细胞淋巴瘤早期诊断，以及能够对DLBCL的不同起源进行分类。前期芯片筛选结合临床大样本验证发现，该circRNA标志物在DLBCL患者中的表达水平显著高于正常人，同时在生发中心来源和非生发中心来源的DLBCL中的表达量不同。临床检测仅需采集微量外周血，创伤性小，更易被受检者接受，更可成为DLBCL患者的早诊、疾病起源进行分类，其特异性强，敏感性高，结果稳定，具有广泛的临床应用前景。
附图说明
构成本发明的一部分的说明书附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。
图1为本发明实施例中hsa_circ0080018对DLBCL患者的血浆与健康人群的血浆的ROC曲线。
图2为本发明实施例中hsa_circ0080018的表达量与DLBCL患者表达量。
图3为本发明实施例中hsa_circ0080018对DLBCL患者起源分类后，在GCB以及non-GCB的表达量。
图4为本发明实施例中hsa_circ0080018分别对DLBCL患者的中GCB血浆和non-GCB血浆的ROC曲线。
具体实施方式
应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本发明提供进一步的说明。除非另有指明，本发明使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本发明的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。应理解，本发明的保护范围不局限于下述特定的具体实施方案；还应当理解，本发明实施例中使用的术语是为了描述特定的具体实施方案，而不是为了限制本发明的保护范围。
术语“表达水平”是指在特定的时间点体内或样品中存在的基因产物的量。表达水平可以例如通过由基因表达的蛋白质或circRNA来测量/量化/检测。可以例如如下量化表达水平：用相同样品或参考样品中相同类型基因产物的总量归一化样品中存在的目的基因产物的量，或者确定目的基因产物的量/限定的样品尺寸。可以通过本领域已知的任何方法来测量或检测表达水平，所述方法例如用于目的基因产物的直接检测和量化的方法，或者通常通过目的基因产物与对目的基因产物具有特异性的一种或更多种不同分子或检测装置结合而工作的用于间接检测和测量目的基因产物的方法。技术人员还已知的是确定基因拷贝的水平，其还包括确定一个或更多个片段的不存在或存在(例如，通过核酸探针或引物，例如定量PCR等)。
术语“指标”和“标志”在本发明中可互换使用，并且是指病症的体征或信号或者用于监测病症。这样的“病症”是指细胞、组织或器官的生物状态，或者是指个体的健康和/或疾病状态。指标可以是包括但不限于肽、蛋白质和核酸的分子的存在或不存在，或者可以是细胞、或组织、器官或个体中这样的分子的表达水平或模式变化。指标可以是个体中疾病的发生、发展或存在或者这样的疾病的进一步进展的体征。指标也可以是在个体中发生疾病的风险的体征。
术语指标的水平“下调”、“降低”或“下降”是指与参考或参考样品相比，样品中这样的指标的水平降低。术语指标的水平“上调”、“升高”或“提高”是指与参考或参考样品相比，样品中这样的指标的水平更高。
在原理上，可以通过应用标准统计学方法基于给定circRNA的平均值或中值来对本发明所指定的对象组或群组计算参考量。特别地，例如旨在或不旨在判断事件的方法的测试的精确度最好由其接受者操作特征(receiver-operating characteristic，ROC)来描述(尤其参见Zweig 1993，Clin.Chem.39：561-577)。ROC图是由在所观察到的整个数据范围上不断改变判定阈值获得的所有灵敏度相对于特异性对的图。诊断方法的临床表现取决于其精确度，即其将对象正确地分配到某种预后或诊断的能力。
如果不知道供体是否患有弥漫大B细胞淋巴瘤，优选地，如本发明所使用的参考量由在治疗前获得的对象样品获得。该参考量水平可以是离散数字，或者可以是数字的范围。显然，参考水平或量可以在circRNA的个体物种之间变化。因此，优选地，用包含已知量的每种特定circRNA的样品或一系列样品校准测量系统。技术人员理解，在这种情况下，circRNA的量可优选表示为任意单位。因此，优选地，通过将从样品获得的信号与包括在校准曲线中的信号进行比较来确定circRNA的量。适用于个体对象的参考量可以根据多种生理参数(例如年龄或亚群)而变化。因此，合适的参考量可以通过本发明的方法有待分析的参考样品与测试样品一起(即同时或先后)确定。此外，可以优选地使用阈值量作为参考量。参考量可以优选地由已知患有弥漫大B细胞淋巴瘤的对象或对象组的样品获得。参考量还可以优选地由已知未患有弥漫大B细胞淋巴瘤的对象或对象组的样品获得。应理解，上述量可能由于统计学和测量误差而变化。偏差，即本发明提及的circRNA量的降低或升高优选地是统计学上显著的偏差，即统计学上显著的降低或统计学上显著的升高。
如本发明所使用的术语“试剂盒”是指优选地单独提供或提供在单个容器内的上述组分的集合。容器还优选地包含有用于实施本发明方法的说明。试剂盒包含在即用型制剂中的上述组分。优选地，试剂盒可另外地包括说明书，例如用于调节组分(例如，检测剂的浓度)以及用于解释关于通过本发明方法所提供诊断的任何测定的结果的用户手册。特别地，这样的手册可以包括用于将确定基因产物的量分配至诊断类型的信息。此外，这样的用户手册可以提供关于正确地使用试剂盒组分用于确定相应生物标志物的量的说明。本发明还涉及所述试剂盒在根据本发明的任何方法中的用途。
如前所述，目前在弥漫大B细胞淋巴瘤血浆中尚未发现与circRNA相关的分子标志物或治疗靶点。
有鉴于此，通过前期芯片筛选以及结合临床大样本验证发现了一种血浆中的hsa_circ_0080018可作为DLBCL患者诊断及分类的分子标志物。本申请前期收集了3例DLBCL患者和3例正常人血浆进行circRNAs芯片分析。芯片筛选结合临床样本，发现其中hsa_circ_0080018上调趋势最显著，并通过Sanger测序对其产物进行确认。然后再通过大样本(52个正常人vs 96个DLBCL患者，51例GCB患者，45例non-GCB患者)验证发现，hsa_circ_0080018在DLBCL患者中的表达水平显著高于正常人，GCB的表达量远远低于non-GCB(P＝0.0003)。在检测的55例正常人中，25例无法检测到其表达。
该circRNA标志物在DLBCL患者中的表达水平显著高于正常人，许多正常人外周血未检测到其表达。同时，GCB的表达量远远低于non-GCB(P＝0.0003)。此临床检测仅需采集微量外周血(小于1ml)，创伤性小，更易被受检者接受。因此更容易成为DLBCL患者的早期诊断及愈后的评估指标。通过ROC曲线分析，AUC值为0.85，P<0.0001，反映了该指标用于DLBCL诊断的特异性强，敏感性高。结果稳定，具有广泛的临床应用前景。
因此，在本发明的一个典型具体实施方式中，提供一种用于弥漫大B细胞淋巴瘤诊断的circRNA生物标志物，所述circRNA生物标志物为hsa_circ_0080018，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
在本发明的一些具体实施方案中，上述circRNA为受试者外周血血浆circRNA。
在本发明的一些具体实施方案中，hsa_circ_0080018的表达水平的升高指示发生变性组织状态或疾病(特别是弥漫大B细胞淋巴瘤)的风险；还指示个体遭受经改变的组织状态或疾病(特别是弥漫大B细胞淋巴瘤)。
在本发明的一些具体实施方案中，上述用于弥漫大B细胞淋巴瘤检测的生物标志物具体为用于弥漫大B细胞淋巴瘤(辅助)诊断和/或分类的生物标志物。
所述分类具体为可以区分生发中心来源的弥漫大B细胞淋巴瘤(GCB)和非生发中心来源的弥漫大B细胞淋巴瘤(non-GCB)。
在本发明的一些具体实施方案中，提供检测检测上述生物标志物表达水平的物质在制备弥漫大B细胞淋巴瘤诊断产品中的应用。
在本发明的一些具体实施方案中，所述产品包括但不限于引物、探针、核酸膜条、circRNAs芯片、制剂、试剂盒、器械、检测装置和设备。本领域技术人员可通过实际情况在不付出创造性劳动的前提下实现上述产品，因此上述产品均属于本申请的保护范围之内。
在本发明的一些具体实施方案中，所述产品包括针对上述circRNA生物标志物的特异性引物，具体可以为SEQ ID NO.2所示的上游引物和SEQ ID NO.3所示的下游引物。
显然，上述产品可用于弥漫大B细胞淋巴瘤早期诊断(或早期辅助诊断)和/或分类的生物标志物。所述分类具体为可以区分生发中心来源的弥漫大B细胞淋巴瘤(GCB)和非生发中心来源的弥漫大B细胞淋巴瘤(non-GCB)。
在本发明的一些具体实施方案中，提供一种检测试剂，所述检测试剂可以包括针对上述circRNA生物标志物的特异性引物，具体可以为SEQ ID NO.2所示的上游引物和SEQID NO.3所示的下游引物。
在本发明的一些具体实施方案中，提供一种用于诊断弥漫大B细胞淋巴瘤的试剂盒，所述试剂盒包含上述检测试剂。
在本发明的一些具体实施方案中，提供一种用于诊断弥漫大B细胞淋巴瘤的系统，其包含：
i)分析单元，所述分析单元包含：用于确定对象的样品中选自上述circRNA生物标志物表达水平的检测剂，以及；
ii)包含有数据处理器的评估单元，所述数据处理器有形地嵌入有用于将通过所述分析单元确定的量与参考进行比较的算法，并且能够生成包含基于所述比较建立的诊断结果的输出文件。
在本发明的一些具体实施方案中，提供一种用于弥漫大B细胞淋巴瘤诊断的方法，所述方法包括：确定来自受试者的生物样品中上述circRNA生物标志物的存在或表达水平，以及将所述生物标志物的表达水平与参照进行比较。
在本发明的一些具体实施方案中，所述生物样品为外周血血浆。
在本发明的一些具体实施方案中，将受试者中上述circRNA生物标志物的存在(特别是量)与参照中上述circRNA生物标志物的存在(特别是量)进行比较。特别地，所述参照为阈值、参考值或参考样品。
在其中参考为阈值的实施方案中，选自hsa_circ0080018的量等于或大于阈值指示对象患有弥漫大B细胞淋巴瘤、发生弥漫大B细胞淋巴瘤的风险升高；然而，低于阈值的量指示对象未患弥漫大B细胞淋巴瘤、发生弥漫大B细胞淋巴瘤的风险降低。应理解，上述表达水平可以由于统计学和测量误差而不同。
在其中参照为参考值的一些实施方案中，所述参考值为弥漫大B细胞淋巴瘤不存在、弥漫大B细胞淋巴瘤存在或者发生弥漫大B细胞淋巴瘤的风险升高或降低的代表值。
在本发明的另一些实施方案中，参考样品选自从健康个体获得的参考样品、从患病个体获得的参考样品、在较早或较晚时间点取得的与目的样品从同一个体获得的参考样品、以及代表健康个体或者代表弥漫大B细胞淋巴瘤存在或不存在或者代表发生弥漫大B细胞淋巴瘤的风险升高或降低的参考样品。
在本发明的一些具体实施方案中，对象为哺乳动物，人是特别优选的。
在本发明的一些具体实施方案中，提供上述circRNA生物标志物作为靶点在制备弥漫大B细胞淋巴瘤和/或筛选弥漫大B细胞淋巴瘤药物中的应用。
所述药物还可包括药学上可接受的载体。所述药学上可接受的载体可为缓冲剂、乳化剂、悬浮剂、稳定剂、防腐剂、赋形剂、填充剂、凝结剂与调和剂、界面活性剂、扩散剂或消泡剂。
以下通过实施例对本发明做进一步解释说明，但不构成对本发明的限制。应理解这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件如Sambrook等人《分子克隆：实验手册》或《分子克隆实验指南》中所述的技术和条件，或按照制造厂商所建议的条件。
实施例
1、RNA提取：
从山东大学齐鲁医院血液科收集96例DLBCL患者和52例健康人群血浆样本，其中GCB为51例，non-GCB为45例。分别使用TIANamp Virus RNAKit(TIANGEN,Cat.#DP315-R)按照说明书提取血浆总RNA，通过NanoDrop2000超微量分光光度计(Thermo FisherScientific，USA)检测所得RNA的浓度及纯度，然后将总RNA用SuperScriptIIITranscription(RT)System试剂盒(购于美国Invitrogen公司)按照说明书反转录成cDNA。
2、PCR反应：
取1μl cDNA样本溶液加入到10μl Roche light Cycler 480 SYBR GREEN Master混合液(购于美国Roche公司)中，再加入2μl特异性引物的上、下游引物(上、下游引物浓度都为10μM，上游引物的序列如SEQ ID NO.2所示，下游引物的序列如SEQ ID NO.3所示，上游引物和下游引物均由上海生功生物工程股份有限公司合成)，7μl无RNA酶水，组成20μl反应体系在ABI Step one Plus仪器上进行real time-PCR扩增反应；反应程序：94℃，5分钟；94℃ 15s，60℃ 30s，72℃ 30s，共进行40次循环的退火反应；得到PCR扩增产物；反应完成后是95℃ 15s，60℃ 60min，95℃ 15s进入熔解曲线分析，发现相同样品各管的溶解曲线都只有一个尖锐的峰，通过Sanger测序分析，得出为对应的产物，不是引物二聚体Dimer，说明扩增产物是稳定正确的，数据可以采用。
3、对PCR扩增产物进行测序，结果比对后为目的片段，该目的片段包含0080018基因环化位点，为hsa_circ_0080018特异性片段。DLBCL患者与健康人群的血浆中hsa_circ_0080018表达比较见表1，GCB和non-GCB患者血浆中hsa_circ_0080018表达见表2。
表1：DLBCL患者与已检测到的健康人群血浆中hsa_circ_0080018表达比较
组别 hsa_circ_0080018表达(-△CT)
DLBCL患者 -2.0575885±1.43798622
检测出的健康人群 -4.4521404±0.73902619
表2：DLBCL中GCB和non-GCB患者血浆中hsa_circ_0080018表达比较
组别 hsa_circ_0080018表达(-△CT)
GCB患者 -3.165575±1.20807738
non-GCB患者 -0.8018705±1.43080734
表1中健康人检测了52例，仅30例能检测到其表达，22例中未发现其表达。由表1的结果可以看出：与健康人群相比，能够被检测的环状RNA分子标记物在DLBCL患者中表达水平明显上调，具有显著差异。表2中将96例DLBCL患者按起源分为GCB和non-GCB，其中51例GCB和45例non-GCB。表2可以看出GCB血浆中hsa_circ_0080018的表达远远低于non-GCB的表达。
图1为hsa_circ_0080018对DLBCL患者与能检测到的健康人群的ROC曲线，可以看出，AUC为0.85(95％ CI＝0.75–0.95，P<0.0001)，这说明hsa_circ_0080018可以作为DLBCL患者诊断的标志物，其对DLBCL患者具有较高的诊断价值。图4的hsa_circ0080018分别对DLBCL患者的中GCB血浆和non-GCB血浆的ROC曲线中可以看到AUC为0.72(95％ CI＝0.61–0.83，P＝0.0003)，这说明hsa_circ_0080018可作为DLBCL患者起源分类的一种辅助方式，其对DLBCL患者具有较高的诊断价值。
本发明实施例涉及的核苷酸序列信息：
hsa_circ_0080018：
GCAGTGGAGTGGGAGTGAAGAAGCTGTGTGAACTGCAGCCTGAGGAGA
AGTGCTGTGTGGTGGGCACTCTGTTCAAGGCCATGCCGCTGCAGCCCTCC
ATCCTGCGGGAGGTCAGCGAGGAGCACAACCTGCTCCCCCAGCCTCCTCG
GAGTAAATACATACACCCAGATGACGAGCTGGTCTTGGAAGATGAACTGC
AGCGTATCAAACTAAAAGGCACCATTGACGTGTCAAAGCTGGTTACGG(SEQ ID NO.1)
针对hsa_circ0080018的上游引物：5'-F-ATACACCCAGATGACGAGCT-3'(SEQ IDNO.2)
针对hsa_circ0080018的下游引物：5'-AAATACATACACCCAGATGACGA-3'(SEQ IDNO.3)
应注意的是，以上实例仅用于说明本发明的技术方案而非对其进行限制。尽管参照所给出的实例对本发明进行了详细说明，但是本领域的普通技术人员可根据需要对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围。

Claims (10)

1.一种用于弥漫大B细胞淋巴瘤诊断的circRNA生物标志物，其特征在于，所述circRNA生物标志物为hsa_circ_0080018，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.检测权利要求1所述circRNA生物标志物表达水平的物质在制备弥漫大B细胞淋巴瘤诊断产品中的应用。
3.如权利要求2所述应用，其特征在于，所述物质包括基于高通量测序方法和/或基于定量PCR方法和/或基于探针杂交方法检测所述生物标志物表达水平的物质；
所述产品包括引物、探针、核酸膜条、circRNAs芯片、制剂、试剂盒、器械、检测装置和设备。
4.如权利要求2所述应用，其特征在于，所述circRNA生物标志物来源于受试者的外周血。
5.如权利要求2所述应用，其特征在于，所述弥漫大B细胞淋巴瘤诊断产品具体用于弥漫大B细胞淋巴瘤的(辅助)诊断和/或分类。
6.如权利要求5所述应用，其特征在于，所述分类具体为区分生发中心来源的弥漫大B细胞淋巴瘤和非生发中心来源的弥漫大B细胞淋巴瘤。
7.一种检测试剂，其特征在于，所述检测试剂包括针对权利要求1所述circRNA生物标志物的特异性引物，具体为SEQ ID NO.2所示的上游引物和SEQ ID NO.3所示的下游引物。
8.一种用于诊断弥漫大B细胞淋巴瘤的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含权利要求7所述检测试剂。
9.一种用于诊断弥漫大B细胞淋巴瘤的系统，其包含：
i)分析单元，所述分析单元包含：用于确定对象的样品中选自权利要求1所述circRNA生物标志物表达水平的检测剂，以及；
ii)包含有数据处理器的评估单元，所述数据处理器有形地嵌入有用于将通过所述分析单元确定的量与参考进行比较的算法，并且能够生成包含基于所述比较建立的诊断结果的输出文件。
10.权利要求1所述circRNA生物标志物作为靶点在制备弥漫大B细胞淋巴瘤和/或筛选弥漫大B细胞淋巴瘤药物中的应用。
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