CN116622797A - 一种从雨生红球藻提取虾青素的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及虾青素提取方法技术领域，提供一种从雨生红球藻提取虾青素的方法，本发明在自养雨生红球藻的培养过程中先对其进行扩大培养，然后在第二培养基中加入具有诱导作用的γ‑氨基丁酸进行诱导培养，在扩大培养和诱导培养的过程中，每12h就会对培养基的pH值进行调节，从而在一定程度上提高雨生红球藻的虾青素产量。本发明以通过果胶酶和纤维素酶混合制得的复合进行酶解，能够提高虾青素的提取率，在提取虾青素前先通过冷冻干燥的方式将雨生红球藻制成藻粉，能够更好的储存雨生红球藻，并且能够便于雨生红球藻内的虾青素更好的进行堆积，为后续通过酶解法提取虾青素做准备，在一定程度上提高雨生红球藻中虾青素的提取率。
Description
技术领域
本发明涉及虾青素提取方法技术领域，具体涉及一种从雨生红球藻提取虾青素的方法。
背景技术
虾青素是一种红色脂溶性类胡萝卜素，存在于各种微生物和海洋动物中，最早在龙虾中发现，主要作为一种着色剂用于甲壳类和鲑鱼等水产养殖业中。虾青素主要来自水产品加工废弃物虾蟹壳和微生物中的法夫酵母与雨生红球藻，其中雨生红球藻是自然界中天然虾青素含量最高的生物来源，可达细胞干重的1-5%。
雨生红球藻是一种广泛存在于淡水湖泊中的绿藻，属于绿藻门，绿藻纲，团藻目，红球藻科，红球藻属，雨生种。雨生红球藻的生长周期存在四种细胞形态，即小虫体、大虫体、胶鞘体、红孢囊，可以分为两个时期，在营养比较充足，环境适宜时，大虫体占主导地位，即生长期；在环境恶化时，大虫体就会转化为叫胶鞘体，进而转化为具有抵抗力的红孢囊，并开始积累虾青素，即转化期。目前产业利用雨生红球藻生产虾青素的生产模式都是根据其两个不同时期的生长特点进行培养。前期主要注重扩大培养，通过改变培养基的方式实现雨生红球藻细胞两的扩大，后期主要侧重于虾青素的增产和堆积，使雨生红球藻中产生更高含量的虾青素。目前市面上很多对于雨生红球藻的培养技术以及虾青素的提取技术都未达到理想的最佳效果，需要进行改进。
发明内容
解决的技术问题
针对现有技术所存在的上述缺点，本发明提供了一种从雨生红球藻提取虾青素的方法，旨在使其能够提高雨生红球藻中虾青素的含量，并且提高虾青素的提取率。
技术方案
为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：
一种从雨生红球藻提取虾青素的方法，所述提取方法包括以下步骤：
Step1、将自养雨生红球藻置于冷冻离心机中以6000r/min的离心速度离心10-15min，去除上清液后用无菌去离子水反复洗涤3次，然后置于冷冻干燥机中进行干燥，所得记作藻粉；
Step2、称取10重量份Step1中的藻粉倒入装有500重量份氢氧化钾和甲醇混合液的容器内，以300-400r/min的转速搅拌3min后静置5-8min，；
Step3、将Step2中的总体系在7000r/min的离心速度下离心10min，弃上清液后用无菌去离子水洗涤2-3次，洗涤后再次以7000r/min的离心速度离心10min，弃上清液，所得记作沉淀组分；
Step4、将10重量份Step3中的沉淀组分与200重量份复合酶液进行混合，使用乙酸-乙酸钠缓冲液调节pH值为5-6后，在40-42℃的水域条件下提取1-2h，接着在9000r/min的离心速度下离心10min，弃上清液后使用无菌去离子水洗涤2-3次，所得记作酶解组分；
Step5、向Step4的酶解组分中加入200-300重量份甲醇混合，在50℃的水浴条件下静置1-2h，以9000r/min的离心速度离心10min，收集上清液后再向沉淀中再加入200-300重量份甲醇，于50℃的水浴条件下静置1h，然后以9000r/min的离心速度再次离心10min并收集上清液，将两次收集的上清液进行混匀，经浓缩后所得即为从雨生红球藻中提取的虾青素。
更进一步地，所述自养雨生红球藻的培养过程为：
步骤1、将雨生红球藻藻种以0.3g/L的接种量接种于第一培养基中，在温度为25℃且光照强度为2000Lux的条件下培养5-7d，在培养的过程中每12h调节一次pH值，使pH值为7-8；
步骤2、以3000r/min的离心速度对步骤1中得到的从雨生红球藻进行离心，离心5min后使用无菌去离子水进行洗涤，洗涤后以3.5×105 cells/mL的接种量悬浮接种于含有含量为0.3mM γ-氨基丁酸的第二培养基中，在温度为28℃且光照强度为5000Lux的条件下培养10-14d，在培养的过程中每12h调节一次pH值，使pH值为在9，所得即为自养雨生红球藻。
更进一步地，所述步骤1中第一培养基的成分按每升含量计包括：Ca(NO3)2·4H2O150mg、KNO3 100mg、β-甘油磷酸二钠 50mg、MgSO4·7H2O 40mg、维生素B12 0.1μg、生物素0.1μg、维生素B1 10μg 、三羟甲基氨基甲烷500mg、Na2EDTA·2H2O 3mg、FeCl3·6H2O 0.6mg、MnCl2·4H2O 0.1mg、ZnCl2 0.03mg、CoCl2·6H2O 0.01mg和Na2MoO4·2H2O 0.01mg 。
更进一步地，所述步骤1中第二培养基的成分按每升含量计包括：KNO3 200mg、K2HPO4·3H2O 40mg、MgSO4·7H2O 75mg、CaCl2·2H2O 36mg、柠檬酸铁铵 6mg、柠檬酸 6mg、EDTA·Na2 1mg、Na2CO3 20mg、H3BO3 3mg、MnCl2·4H2O 2mg、ZnSO4·7H2O 0.2mg、CμSO4·5H2O0.1mg、NaMoO4·2H2O 0.4mg和Co(NO3)2·6H2O 0.05mg。
更进一步地，所述Step1中的冷冻干燥时间为12-24h。
更进一步地，所述Step2中的氢氧化钾和甲醇混合液中氢氧化钾和甲醇的浓度分别为5%和30%。
更进一步地，所述Step4中的复合酶为果胶酶和纤维素酶按照3：1的重量比混合制得。
更进一步地，所述Step5中浓缩的方法为：将Step5中两次收集的上清液混匀后，倒入旋转蒸发仪中以35℃的温度条件进行蒸发。
有益效果
本发明提供了一种从雨生红球藻提取虾青素的方法，与现有公知技术相比，本发明的具有如下有益效果：
本发明在自养雨生红球藻的培养过程中先对其进行扩大培养，然后在第二培养基中加入具有诱导作用的γ-氨基丁酸进行诱导培养，通过γ-氨基丁酸的诱导能够对雨生红球藻的虾青素产量进行影响，在扩大培养和诱导培养的过程中，每12h就会对培养基的pH值进行调节，防止因雨生红球藻的生长导致培养基的pH值变成不利于雨生红球藻生长的范围，从而在一定程度上提高雨生红球藻的虾青素产量。
本发明在通过酶解法从雨生红球藻中提取虾青素的过程中，以通过果胶酶和纤维素酶混合制得的复合进行酶解，能够提高虾青素的提取率，在提取虾青素前先通过冷冻干燥的方式将雨生红球藻制成藻粉，能够更好的储存雨生红球藻，并且能够便于雨生红球藻内的虾青素更好的进行堆积，为后续通过酶解法提取虾青素做准备，在一定程度上提高雨生红球藻中虾青素的提取率。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
下面结合实施例对本发明作进一步的描述。
实施例1
本实施例的一种从雨生红球藻提取虾青素的方法，提取方法包括以下步骤：
Step1、将自养雨生红球藻置于冷冻离心机中以6000r/min的离心速度离心10min，去除上清液后用无菌去离子水反复洗涤3次，然后置于冷冻干燥机中进行干燥，所得记作藻粉；
Step2、称取10重量份Step1中的藻粉倒入装有500重量份氢氧化钾和甲醇混合液的容器内，以300r/min的转速搅拌3min后静置5min，；
Step3、将Step2中的总体系在7000r/min的离心速度下离心10min，弃上清液后用无菌去离子水洗涤2次，洗涤后再次以7000r/min的离心速度离心10min，弃上清液，所得记作沉淀组分；
Step4、将10重量份Step3中的沉淀组分与200重量份复合酶液进行混合，使用乙酸-乙酸钠缓冲液调节pH值为5后，在40℃的水域条件下提取1h，接着在9000r/min的离心速度下离心10min，弃上清液后使用无菌去离子水洗涤2次，所得记作酶解组分；
Step5、向Step4的酶解组分中加入200重量份甲醇混合，在50℃的水浴条件下静置1h，以9000r/min的离心速度离心10min，收集上清液后再向沉淀中再加入200重量份甲醇，于50℃的水浴条件下静置1h，然后以9000r/min的离心速度再次离心10min并收集上清液，将两次收集的上清液进行混匀，经浓缩后所得即为从雨生红球藻中提取的虾青素。
自养雨生红球藻的培养过程为：
步骤1、将雨生红球藻藻种以0.3g/L的接种量接种于第一培养基中，在温度为25℃且光照强度为2000Lux的条件下培养5d，在培养的过程中每12h调节一次pH值，使pH值为7；
步骤2、以3000r/min的离心速度对步骤1中得到的从雨生红球藻进行离心，离心5min后使用无菌去离子水进行洗涤，洗涤后以3.5×105 cells/mL的接种量悬浮接种于含有含量为0.3mM γ-氨基丁酸的第二培养基中，在温度为28℃且光照强度为5000Lux的条件下培养10d，在培养的过程中每12h调节一次pH值，使pH值为在9，所得即为自养雨生红球藻。
步骤1中第一培养基的成分按每升含量计包括：Ca(NO3)2·4H2O 150mg、KNO3100mg、β-甘油磷酸二钠 50mg、MgSO4·7H2O 40mg、维生素B12 0.1μg、生物素 0.1μg、维生素B1 10μg 、三羟甲基氨基甲烷500mg、Na2EDTA·2H2O 3mg、FeCl3·6H2O 0.6mg、MnCl2·4H2O0.1mg、ZnCl2 0.03mg、CoCl2·6H2O 0.01mg和Na2MoO4·2H2O 0.01mg 。
步骤1中第二培养基的成分按每升含量计包括：KNO3 200mg、K2HPO4·3H2O 40mg、MgSO4·7H2O 75mg、CaCl2·2H2O 36mg、柠檬酸铁铵 6mg、柠檬酸 6mg、EDTA·Na2 1mg、Na2CO320mg、H3BO3 3mg、MnCl2·4H2O 2mg、ZnSO4·7H2O 0.2mg、CμSO4·5H2O 0.1mg、NaMoO4·2H2O0.4mg和Co(NO3)2·6H2O 0.05mg。
Step1中的冷冻干燥时间为12h。
Step2中的氢氧化钾和甲醇混合液中氢氧化钾和甲醇的浓度分别为5%和30%。
Step4中的复合酶为果胶酶和纤维素酶按照3：1的重量比混合制得。
Step5中浓缩的方法为：将Step5中两次收集的上清液混匀后，倒入旋转蒸发仪中以35℃的温度条件进行蒸发。
实施例2
本实施例的一种从雨生红球藻提取虾青素的方法，提取方法包括以下步骤：
Step1、将自养雨生红球藻置于冷冻离心机中以6000r/min的离心速度离心15min，去除上清液后用无菌去离子水反复洗涤3次，然后置于冷冻干燥机中进行干燥，所得记作藻粉；
Step2、称取10重量份Step1中的藻粉倒入装有500重量份氢氧化钾和甲醇混合液的容器内，以400r/min的转速搅拌3min后静置8min，；
Step3、将Step2中的总体系在7000r/min的离心速度下离心10min，弃上清液后用无菌去离子水洗涤3次，洗涤后再次以7000r/min的离心速度离心10min，弃上清液，所得记作沉淀组分；
Step4、将10重量份Step3中的沉淀组分与200重量份复合酶液进行混合，使用乙酸-乙酸钠缓冲液调节pH值为6后，在42℃的水域条件下提取2h，接着在9000r/min的离心速度下离心10min，弃上清液后使用无菌去离子水洗涤3次，所得记作酶解组分；
Step5、向Step4的酶解组分中加入300重量份甲醇混合，在50℃的水浴条件下静置2h，以9000r/min的离心速度离心10min，收集上清液后再向沉淀中再加入300重量份甲醇，于50℃的水浴条件下静置1h，然后以9000r/min的离心速度再次离心10min并收集上清液，将两次收集的上清液进行混匀，经浓缩后所得即为从雨生红球藻中提取的虾青素。
自养雨生红球藻的培养过程为：
步骤1、将雨生红球藻藻种以0.3g/L的接种量接种于第一培养基中，在温度为25℃且光照强度为2000Lux的条件下培养7d，在培养的过程中每12h调节一次pH值，使pH值为8；
步骤2、以3000r/min的离心速度对步骤1中得到的从雨生红球藻进行离心，离心5min后使用无菌去离子水进行洗涤，洗涤后以3.5×105 cells/mL的接种量悬浮接种于含有含量为0.3mM γ-氨基丁酸的第二培养基中，在温度为28℃且光照强度为5000Lux的条件下培养14d，在培养的过程中每12h调节一次pH值，使pH值为在9，所得即为自养雨生红球藻。
步骤1中第一培养基的成分按每升含量计包括：Ca(NO3)2·4H2O 150mg、KNO3100mg、β-甘油磷酸二钠 50mg、MgSO4·7H2O 40mg、维生素B12 0.1μg、生物素 0.1μg、维生素B1 10μg 、三羟甲基氨基甲烷500mg、Na2EDTA·2H2O 3mg、FeCl3·6H2O 0.6mg、MnCl2·4H2O0.1mg、ZnCl2 0.03mg、CoCl2·6H2O 0.01mg和Na2MoO4·2H2O 0.01mg 。
步骤1中第二培养基的成分按每升含量计包括：KNO3 200mg、K2HPO4·3H2O 40mg、MgSO4·7H2O 75mg、CaCl2·2H2O 36mg、柠檬酸铁铵 6mg、柠檬酸 6mg、EDTA·Na2 1mg、Na2CO320mg、H3BO3 3mg、MnCl2·4H2O 2mg、ZnSO4·7H2O 0.2mg、CμSO4·5H2O 0.1mg、NaMoO4·2H2O0.4mg和Co(NO3)2·6H2O 0.05mg。
Step1中的冷冻干燥时间为24h。
Step2中的氢氧化钾和甲醇混合液中氢氧化钾和甲醇的浓度分别为5%和30%。
Step4中的复合酶为果胶酶和纤维素酶按照3：1的重量比混合制得。
Step5中浓缩的方法为：将Step5中两次收集的上清液混匀后，倒入旋转蒸发仪中以35℃的温度条件进行蒸发。
实施例3
本实施例的一种从雨生红球藻提取虾青素的方法，提取方法包括以下步骤：
Step1、将自养雨生红球藻置于冷冻离心机中以6000r/min的离心速度离心13min，去除上清液后用无菌去离子水反复洗涤3次，然后置于冷冻干燥机中进行干燥，所得记作藻粉；
Step2、称取10重量份Step1中的藻粉倒入装有500重量份氢氧化钾和甲醇混合液的容器内，以400r/min的转速搅拌3min后静置7min，；
Step3、将Step2中的总体系在7000r/min的离心速度下离心10min，弃上清液后用无菌去离子水洗涤3次，洗涤后再次以7000r/min的离心速度离心10min，弃上清液，所得记作沉淀组分；
Step4、将10重量份Step3中的沉淀组分与200重量份复合酶液进行混合，使用乙酸-乙酸钠缓冲液调节pH值为5后，在41℃的水域条件下提取2h，接着在9000r/min的离心速度下离心10min，弃上清液后使用无菌去离子水洗涤2次，所得记作酶解组分；
Step5、向Step4的酶解组分中加入300重量份甲醇混合，在50℃的水浴条件下静置2h，以9000r/min的离心速度离心10min，收集上清液后再向沉淀中再加入200重量份甲醇，于50℃的水浴条件下静置1h，然后以9000r/min的离心速度再次离心10min并收集上清液，将两次收集的上清液进行混匀，经浓缩后所得即为从雨生红球藻中提取的虾青素。
自养雨生红球藻的培养过程为：
步骤1、将雨生红球藻藻种以0.3g/L的接种量接种于第一培养基中，在温度为25℃且光照强度为2000Lux的条件下培养6d，在培养的过程中每12h调节一次pH值，使pH值为8；
步骤2、以3000r/min的离心速度对步骤1中得到的从雨生红球藻进行离心，离心5min后使用无菌去离子水进行洗涤，洗涤后以3.5×105 cells/mL的接种量悬浮接种于含有含量为0.3mM γ-氨基丁酸的第二培养基中，在温度为28℃且光照强度为5000Lux的条件下培养12d，在培养的过程中每12h调节一次pH值，使pH值为在9，所得即为自养雨生红球藻。
步骤1中第一培养基的成分按每升含量计包括：Ca(NO3)2·4H2O 150mg、KNO3100mg、β-甘油磷酸二钠 50mg、MgSO4·7H2O 40mg、维生素B12 0.1μg、生物素 0.1μg、维生素B1 10μg 、三羟甲基氨基甲烷500mg、Na2EDTA·2H2O 3mg、FeCl3·6H2O 0.6mg、MnCl2·4H2O0.1mg、ZnCl2 0.03mg、CoCl2·6H2O 0.01mg和Na2MoO4·2H2O 0.01mg 。
步骤1中第二培养基的成分按每升含量计包括：KNO3 200mg、K2HPO4·3H2O 40mg、MgSO4·7H2O 75mg、CaCl2·2H2O 36mg、柠檬酸铁铵 6mg、柠檬酸 6mg、EDTA·Na2 1mg、Na2CO320mg、H3BO3 3mg、MnCl2·4H2O 2mg、ZnSO4·7H2O 0.2mg、CμSO4·5H2O 0.1mg、NaMoO4·2H2O0.4mg和Co(NO3)2·6H2O 0.05mg。
Step1中的冷冻干燥时间为18h。
Step2中的氢氧化钾和甲醇混合液中氢氧化钾和甲醇的浓度分别为5%和30%。
Step4中的复合酶为果胶酶和纤维素酶按照3：1的重量比混合制得。
Step5中浓缩的方法为：将Step5中两次收集的上清液混匀后，倒入旋转蒸发仪中以35℃的温度条件进行蒸发。
对比例1：
本实施例所提供的从雨生红球藻提取虾青素的方法大致与实施例1相同，其主要区别在于：在对比例1中将实施例1中的自养雨生红球藻换成按照普通培养方式培养的雨生红球藻。
对比例2：
本实施例所提供的从雨生红球藻提取虾青素的方法大致与实施例2相同，其主要区别在于：在对比例2中将实施例2的Step4中复合酶替换成单一的果胶酶或纤维素酶，并且在对比例2中Step4中的pH值和水浴温度均不同于实施例2中Step4中的pH值和水浴温度。
性能检测
分别将本发明中实施例1-3的从雨生红球藻提取虾青素的方法记作实施例1-3，将对比例1-2的从雨生红球藻提取虾青素的方法记作对比例1-2，然后对实施例1-3和对比例1-2中的产物进行相关性能检测，所得数据记录于下表：
通过上表的数据显示可知，本发明实施例1-3中自养雨生红球藻中的藻细胞干重更高，且通过自养雨生红球藻制备成的藻粉的虾青素含量更高，其次，通过本发明实施例1-3的从雨生红球藻提取虾青素的方法进行虾青素提取的提取率更高，因此说明，本发明的从雨生红球藻提取虾青素的方法具有极佳的市场价值市场和极好的应用前景。
需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。在没有更多限制的情况下，由语句“包括一个……”限定的要素，并不排除在包括所述要素的过程、方法、物品或者设备中还存在另外的相同要素。
以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不会使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。
Claims (8)
1.一种从雨生红球藻提取虾青素的方法，其特征在于，所述提取方法包括以下步骤：
Step1、将自养雨生红球藻置于冷冻离心机中以6000r/min的离心速度离心10-15min，去除上清液后用无菌去离子水反复洗涤3次，然后置于冷冻干燥机中进行干燥，所得记作藻粉；
Step2、称取10重量份Step1中的藻粉倒入装有500重量份氢氧化钾和甲醇混合液的容器内，以300-400r/min的转速搅拌3min后静置5-8min，；
Step3、将Step2中的总体系在7000r/min的离心速度下离心10min，弃上清液后用无菌去离子水洗涤2-3次，洗涤后再次以7000r/min的离心速度离心10min，弃上清液，所得记作沉淀组分；
Step4、将10重量份Step3中的沉淀组分与200重量份复合酶液进行混合，使用乙酸-乙酸钠缓冲液调节pH值为5-6后，在40-42℃的水域条件下提取1-2h，接着在9000r/min的离心速度下离心10min，弃上清液后使用无菌去离子水洗涤2-3次，所得记作酶解组分；
Step5、向Step4的酶解组分中加入200-300重量份甲醇混合，在50℃的水浴条件下静置1-2h，以9000r/min的离心速度离心10min，收集上清液后再向沉淀中再加入200-300重量份甲醇，于50℃的水浴条件下静置1h，然后以9000r/min的离心速度再次离心10min并收集上清液，将两次收集的上清液进行混匀，经浓缩后所得即为从雨生红球藻中提取的虾青素。
2.根据权利要求1所述的一种从雨生红球藻提取虾青素的方法，其特征在于，所述自养雨生红球藻的培养过程为：
步骤1、将雨生红球藻藻种以0.3g/L的接种量接种于第一培养基中，在温度为25℃且光照强度为2000Lux的条件下培养5-7d，在培养的过程中每12h调节一次pH值，使pH值为7-8；
步骤2、以3000r/min的离心速度对步骤1中得到的从雨生红球藻进行离心，离心5min后使用无菌去离子水进行洗涤，洗涤后以3.5×105 cells/mL的接种量悬浮接种于含有含量为0.3mM γ-氨基丁酸的第二培养基中，在温度为28℃且光照强度为5000Lux的条件下培养10-14d，在培养的过程中每12h调节一次pH值，使pH值为在9，所得即为自养雨生红球藻。
3.根据权利要求2所述的一种从雨生红球藻提取虾青素的方法，其特征在于，所述步骤1中第一培养基的成分按每升含量计包括：Ca(NO3)2·4H2O 150mg、KNO3 100mg、β-甘油磷酸二钠 50mg、MgSO4·7H2O 40mg、维生素B12 0.1μg、生物素 0.1μg、维生素B1 10μg 、三羟甲基氨基甲烷500mg、Na2EDTA·2H2O 3mg、FeCl3·6H2O 0.6mg、MnCl2·4H2O 0.1mg、ZnCl20.03mg、CoCl2·6H2O 0.01mg和Na2MoO4·2H2O 0.01mg 。
4.根据权利要求2所述的一种从雨生红球藻提取虾青素的方法，其特征在于，所述步骤1中第二培养基的成分按每升含量计包括：KNO3 200mg、K2HPO4·3H2O 40mg、MgSO4·7H2O75mg、CaCl2·2H2O 36mg、柠檬酸铁铵 6mg、柠檬酸 6mg、EDTA·Na2 1mg、Na2CO3 20mg、H3BO3 3mg、MnCl2·4H2O 2mg、ZnSO4·7H2O 0.2mg、CμSO4·5H2O 0.1mg、NaMoO4·2H2O 0.4mg和Co(NO3)2·6H2O 0.05mg。
5.根据权利要求1所述的一种从雨生红球藻提取虾青素的方法，其特征在于，所述Step1中的冷冻干燥时间为12-24h。
6.根据权利要求1所述的一种从雨生红球藻提取虾青素的方法，其特征在于，所述Step2中的氢氧化钾和甲醇混合液中氢氧化钾和甲醇的浓度分别为5%和30%。
7.根据权利要求1所述的一种从雨生红球藻提取虾青素的方法，其特征在于，所述Step4中的复合酶为果胶酶和纤维素酶按照3：1的重量比混合制得。
8.根据权利要求1所述的一种从雨生红球藻提取虾青素的方法，其特征在于，所述Step5中浓缩的方法为：将Step5中两次收集的上清液混匀后，倒入旋转蒸发仪中以35℃的温度条件进行蒸发。
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