CN116615202A

CN116615202A - 用于治疗癌症的5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]-胆甾烷-3β-醇类似物及包含其的药物组合物

Info

Publication number: CN116615202A
Application number: CN202180074458.XA
Authority: CN
Inventors: S·西尔文特; Q·马利尔; A·里夫斯; N·卡伦; D·莫斯卡; H·米修
Original assignee: Dendro Rogernicks Co
Current assignee: Dendro Rogernicks Co
Priority date: 2020-10-29
Filing date: 2021-10-28
Publication date: 2023-08-18
Also published as: EP4255441A1; BE1028852B1; CN116546988A; BE1028852A1; AU2021391628A1; JP2024503572A; WO2022117824A1; KR20230114274A; CA3200327A1; US20240002429A1

Abstract

本发明涉及一种用作缩小哺乳动物中的癌性肿瘤的药物的用途的通式(I)的新型化合物：和/或此类化合物的药学上可接受的盐，包含至少所述化合物的药物组合物。

Description

用于治疗癌症的5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]- 胆甾烷-3β-醇类似物及包含其的药物组合物

技术领域

本发明涉及甾醇化合物领域，并且更特别地涉及用于治疗癌症的化合物5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷-3β-醇的类似物以及包含该类似物的药物组合物。

背景技术

术语“癌症”或“癌性肿瘤”包括特征在于异常细胞不受控制地增殖和扩散的一组疾病。如果癌细胞没有被清除，疾病会或多或少地迅速发展，从而导致患者死亡。

癌症的治疗包括手术、放射治疗和化疗，所述手术、放射治疗和化疗可以单独使用，或同时使用或依次组合使用。化疗使用抗肿瘤剂，所述抗肿瘤剂是预防或抑制肿瘤成熟和增殖的药物。抗肿瘤剂通过有效靶向快速分裂的细胞而发挥作用。由于抗肿瘤剂会影响细胞分裂，具有高生长速率的肿瘤(例如急性髓细胞性白血病和侵袭性淋巴瘤，包括霍奇金病)对化疗更敏感，因为在任何给定的时间都有更大比例的被靶向细胞进行细胞分裂。具有较慢生长速率的恶性肿瘤，例如惰性淋巴瘤，对化疗的反应往往要温和得多。然而，在化疗治疗期间，化学抗性的发展是一个持续存在的问题。例如，急性髓细胞性白血病(AML)的常规治疗包括阿糖胞苷与蒽环类药物(例如道诺霉素)的联合施用。年轻患者的5年总存活率为40％，老年患者约为10％。随着年龄的增长，响应率差异相当大，超过60岁的患者的响应率为40％至55％，超过70岁的患者为24％至33％。对于具有不良细胞生成性特征的老年人来说，情况更糟，并且随着年龄的增长和恶化，治疗30天内的死亡率范围为10％到50％。此外，这些分子的使用限制也是由于副作用，特别是出现慢性心脏毒性(与蒽环类药物有关)。在超过60岁的患者中，与加强化疗相关的毒性死亡率为10％至20％。

在常规方案的这种获益-风险特征情况下，只有30％的新诊断为AML的老年人接受了抗肿瘤化疗。

在过去的几十年里，患有AML的年轻患者的治疗结果只有适度的改善，但超过60岁的成年人(患有AML的大多数患者)的治疗结果没有改善。

因此，确实需要开发可用于治疗这些癌性肿瘤的分子，这些肿瘤存在化学抗性和抗肿瘤药物的内在毒性问题。上述数据强调需要找到新的方法，该新的方法将在用于治疗化学敏感性肿瘤的抗肿瘤剂剂量方案方面的减少与在对抗肿瘤剂具有化学抗性的肿瘤的抗性方面的降低结合起来。

EP3272350B1公开了化合物5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷-3β-醇(称为树状配基(dendrogenin)A，下文称为DX101)，其可用于治疗化学抗性肿瘤。树状配基A能够恢复化学抗性肿瘤对抗肿瘤剂的敏感性，或增强抗肿瘤剂对肿瘤的作用，这进而降低了抗肿瘤剂对化学敏感性肿瘤的有效细胞毒性剂量。

De Medina等人的文献(Biochimie,2021,95(3),482-488,XP028982107,Technical note:Hapten synthesis,antibody production and development of anenzyme-linked immunosorbent assay for detection of the natural steroidalalkaloid dendrogenin A)描述了树状配基A衍生物(其中3β位的醇被官能化)，用于它们作为用于抗体生产的半抗原的用途。

De Medina等人的文献(J.Med.Chem.,2009,52(23),7765-77,XP9131948,Synthesis of new alkylaminooxysterols with potent cell differentiatingactivities:identification of leads for the treatment of cancer andneurodegenerative diseases)描述了树状配基A衍生物(其中3β位的醇被选择性地用甲氧化物或丙氧化物基团官能化)，用于治疗癌症。

本发明的目的是提供化合物树状配基A的新型化合物和类似物，其可用于治疗癌性肿瘤，特别地化学敏感性和/或化学抗性肿瘤。

令人惊讶的是，本发明人发现化合物树状配基A(也称为DX101)的特定类似物显示出与树状配基A的药理活性相当的药理活性。

发明内容

本发明的第一个主题是用作药物、更特别地用作缩小哺乳动物中癌性肿瘤的药物用途的式(I)的化合物：

或此类化合物的药学上可接受的盐，

其中：

R₁选自F、N₃、OC_nH_2n+1、NR₂R₃、SR₂、SO₂R₂，其中n≤8，

R₂和R₃独立地选自：H、饱和或不饱和的C1-C8烷基，任选地含有一个或多个选自烯丙基、羰基、芳烃和杂环基团的取代基。

本发明的第二个主题是一种用作缩小哺乳动物中癌性肿瘤用途的药物组合物，所述药物组合物在药学上可接受的媒介物中包含至少一种式(I)的化合物。

定义

在本说明书中，除非另有规定，否则应理解，当给出范围时，该范围包括所述范围的上限和下限。

在本发明中，贯穿本说明书和所附权利要求，除非另有说明，否则以下术语应理解为具有以下含义：

术语“溶剂化物”在本文中用于描述包含本发明的化合物并含有化学计量或亚化学计量的量的一种或多种药学上可接受的溶剂(例如乙醇)的分子的分子复合物。术语“水合物”是指所述溶剂为水的情况。

术语“人类”是指任一性别且处于任何发育阶段的受试者(即，新生儿、婴儿、少年、青少年、成年人)。

术语“患者”是指正在等待或接受医疗护理和/或将作为接受医疗程序的受试者的温血动物，更优选地人类。

术语“药学上可接受的”意指药学上可接受的产品的成分是相互兼容的，并且对接受所述产品的患者是无害的。

如本文使用的术语“药学媒介物”意指用作溶剂或稀释剂的惰性载体或介质，在其中配制和/或施用药学活性剂。药学媒介物的非限制性示例包括乳膏、凝胶、乳液、溶液和脂质体。

术语“施用”意指将药学上可接受的组合物中的活性剂或活性成分(例如式(I)化合物)递送给待治疗病况、症状和/或疾病的患者。

本文中使用的术语“治疗(treat)”和“治疗(treatment)”包括对病况、症状和/或疾病的减轻、缓解、停止或护理。

如本文中使用的术语“类似物”意指具有与另一参考化合物相似的化学结构，但在某一组分上与之不同的化合物。它可以在一个或多个原子、官能团或亚结构上不同，这些原子、官能团和亚结构被其他原子、官能团或者亚结构替代。类似物可以具有不同的物理、化学、生物化学或药理特性。在本发明中，类似化合物是指化合物树状配基A。这些类似物相对于参考化合物具有相同或类似的药理特性。

术语“化学抗性癌症”意指患者的癌症，其中癌症细胞的增殖不能用抗肿瘤剂或通常用于治疗所述癌症的抗肿瘤剂的组合以患者可接受的剂量进行预防或抑制。肿瘤在化疗前可能具有固有的抗性，或者抗性可能是在治疗期间由最初对化疗敏感的肿瘤获得的。

术语“化学敏感性癌症”意指对抗肿瘤剂的作用产生反应的患者的癌症，即，可以通过所述抗肿瘤剂以患者可接受的剂量阻止癌症细胞的增殖。

式(I)化合物属于类固醇基团。因此，式(I)化合物的碳原子的编号因此遵循IUPAC在Pure & Appl.Chem.,Vol.61,No.10,第1783-1822页,1989中定义的命名法。根据IUPAC，属于类固醇基团的化合物的碳原子的编号如下所例示：

在本发明中，以下缩写具有以下给出的含义：

AML：急性髓细胞性白血病；

树状配基A：5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷-3β-醇；

MCF-7：密歇根癌症基金会-7；

DMEM：Dulbecco改良Eagle培养基；

FCS：胎牛血清；

ChEH：胆固醇环氧化物水解酶；

Neuro2a：鼠神经母细胞瘤；

CTL：对照；

MTT：3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑鎓溴化物；

PBS：磷酸盐缓冲盐水；

DMSO：二甲基亚砜；

OD：光密度或吸光度；

CT：胆甾烷-3β,5α,6β-三醇；

OCDO：6-氧代胆甾烷-3β,5α-二醇；

5,6α-EC：5,6α-环氧胆固醇；

Tam：三苯氧胺；

TLC：薄层色谱法；

P.O.：经口；

LC/MS：液相色谱/质谱法

具体实施方式

本发明的第一个主题是用作药物用途的式(I)的化合物：

或此类化合物的药学上可接受的盐，其中：

R₂和R₃独立地选自：H，饱和或不饱和的C1-C8烷基，任选地含有一个或多个选自烯丙基、羰基、芳烃和杂环基团的取代基。

根据一个实施方式，本发明涉及用作缩小哺乳动物癌性肿瘤的药物的用途的式(I)化合物：

或此类化合物的药学上可接受的盐，其中：

在本发明中：

-术语“羰基”是指含有氧代基(与碳原子成双键的氧原子(＝O))的所有官能团，并且可以选自醛、酮、羧酸、酯、酰胺和/或酸酐；

-术语“烯丙基”是指半展开式H₂C＝CH-CH₂-的烯烃官能团；

-术语“磺酰基”是指其中硫原子与两个双键氧原子(＝O)及其基团结合的化合物；

-术语“芳烃”是指所有单环和多环芳烃；

-术语“杂环”是指包含一个或多个选自O、S和/或N之中的杂原子作为环成员的单环和多环芳族化合物。

在根据本发明的式(I)化合物的定义中，作为优选实施方式，碳3基团可以在α或位置β位置。

根据一个实施方式，式(I)化合物是O-氨基类似物，其中基团R₁＝NR₂R₃，其中R₂是H或COC_nH_2n+1并且R₃＝H。

在该实施方式中，式(I)化合物更特别地是5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]-3β-乙酰胺(命名为DX127)。

在该实施方式中，式(I)化合物更特别地是5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]-3β-胺(命名为DX125)。

在该实施方式中，式(I)化合物更特别地是5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]-3β-叠氮化物(命名为DX123)。

根据又一个实施方式，式(I)化合物是3β-氟-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷(命名为DX111)。

根据又一个实施方式，式(I)化合物是O-烷基类似物，并且具有基团R₁＝OC_nH_2n+1(其中n≤8)，并且选自：

-3β-甲氧基-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷(命名为DX103)

-3β-乙氧基-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷(命名为DX105)

-3β-辛氧基-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷(命名为DX115)

甚至更优选地，式(I)化合物是O-烷基类似物，例如3β-甲氧基-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷(DX103)和3β-乙氧基-5α-羟基-6α-[2-(1H-咪唑-4基)乙基氨基]胆甾烷(DX105)。

根据另一个实施方式，式(I)化合物是硫类似物，并且具有基团R₁＝SO₂R₂，其中R₂是H或OC_nH_2n+1，其中n≤8。

在该实施方式中，式(I)化合物优选地是3β-甲基磺酰基-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷(命名为DX129)。

根据一个实施方式，式(I)化合物旨在用于治疗乳腺癌、前列腺癌、结肠直肠癌、肺癌、膀胱癌、皮肤癌、子宫癌、宫颈癌、口腔癌、脑癌、胃癌、肝癌、咽喉癌、喉癌、食管癌、骨癌、卵巢癌、胰腺癌、肾癌、视网膜癌、静脉窦癌、鼻腔癌、睾丸癌、甲状腺癌、外阴癌，旨在用于治疗淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、白血病、急性髓细胞性白血病或急性淋巴细胞性白血病、多发性骨髓瘤、Merkel细胞癌或间皮瘤。

根据一个实施方式，所述癌症是腺泡腺癌、腺泡癌、肢端雀斑样痣黑色素瘤(acro-lentiginous melanoma)、光化性角化病、腺癌、腺样囊性癌、腺鳞癌、附件癌、肾上腺皮质静止肿瘤、肾上腺皮质癌、醛固酮分泌癌、肺泡软组织肉瘤、甲状腺成釉细胞癌、血管肉瘤、大汗腺癌(apocrine carcinoma)、阿斯金瘤、星形细胞瘤、基底细胞癌、基底细胞样癌、基底鳞状细胞癌、胆道癌、骨髓癌、葡萄状肉瘤、细支气管肺泡癌、支气管原腺癌、支气管原癌、外多形性腺瘤、绿色瘤、胆管细胞癌、软骨肉瘤、绒毛膜癌、脉络丛癌、透明细胞腺癌、结肠癌症、粉刺性癌、皮质醇生成癌、柱状细胞癌、分化脂肪肉瘤、前列腺导管腺癌、导管癌、原位导管癌、十二指肠癌、分泌腺癌、胚胎癌、子宫内膜癌、子宫内膜间质癌、上皮样肉瘤、尤因氏肉瘤、外生型癌、成纤维细胞肉瘤、纤维癌、纤维板层癌、纤维肉瘤、滤泡状甲状腺癌、胆囊癌、胃腺癌、巨细胞癌、巨细胞肉瘤、巨细胞骨肿瘤、胶质瘤、多形性胶质母细胞瘤、粒层细胞癌、头颈部癌、血管瘤、血管内皮瘤、肝母细胞癌、肝细胞癌、许特尔氏细胞癌(Hürthle cellcarcinoma)、回肠癌、浸润性小叶癌、炎性乳腺癌、导管内癌、表皮内癌、空肠癌、卡波济氏肉瘤、库肯勃瘤、Kulchitsky细胞癌、库普弗细胞肉瘤、大细胞癌、喉癌、恶性雀斑样痣黑素瘤、脂肪肉瘤、小叶癌、原位小叶癌、淋巴上皮癌、淋巴肉瘤、恶性黑色素瘤、髓样癌、甲状腺髓样癌、成神经管细胞瘤、脑膜癌、微乳头状癌、混合细胞肉瘤、粘液癌、粘液表皮样癌、粘膜黑素瘤、粘液样脂肪肉瘤、黏液肉瘤、鼻咽癌、肾胚细胞瘤、成神经细胞瘤、结节性黑色素瘤、非透明细胞肾癌、非小细胞性肺癌、燕麦细胞癌、眼睛黑色素瘤、口腔癌、骨样癌、骨肉瘤、卵巢癌、佩吉特氏癌、胰母细胞瘤、乳头状腺癌、乳头状癌、乳头状甲状腺癌、盆腔癌、壶腹周围癌、叶状瘤、垂体癌、多形性脂肪肉瘤、胸膜肺母细胞瘤、原发性骨内癌、直肠癌、肾细胞癌、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、圆形细胞脂肪肉瘤、瘢痕癌、血吸虫膀胱癌、施奈德氏癌(schneiderial carcinoma)、皮脂腺癌、环状细胞癌、皮肤癌、小细胞肺癌、小细胞骨肉瘤、软组织肉瘤、梭形细胞肉瘤、鳞状细胞癌、胃癌、浅表扩散性黑色素瘤、滑膜肉瘤、毛细血管扩张性肉瘤、终末导管癌、睾丸癌、甲状腺癌、移行细胞癌、小管癌、致肿瘤性黑色素瘤、未分化癌、尿道腺癌、膀胱癌、子宫癌、子宫的癌症、子宫黑色素瘤、阴道癌、疣状癌、绒毛状癌、高分化型脂肪肉瘤、维尔姆斯氏瘤(Wilms’tumor)或生殖细胞瘤。

在一个优选的实施方式中，式(I)化合物旨在用于治疗哺乳动物乳腺癌。

根据一个实施方式，所述化合物旨在用于治疗化学敏感性癌症。

根据一个特别优选的实施方式，式(I)化合物旨在用于治疗化学抗性癌症。

根据一个实施方式，所述化学抗性癌症是血液学癌症或血癌，例如白血病，特别地急性髓细胞性白血病或急性淋巴细胞性白血病，淋巴瘤，特别地非霍奇金淋巴瘤和多发性骨髓瘤。

根据一个实施方式，所述癌症对道诺霉素、阿糖胞苷、氟尿嘧啶、顺铂、全反式维甲酸、三氧化二砷、硼替佐米或其任何组合具有化学抗性。

所有对式(I)化合物的引用包括对其盐、多组分复合物和液态晶体的引用。所有对式(I)化合物的引用还包括对其多晶型物和通常晶体的引用。

根据本发明的化合物可以呈药学上可接受的盐的形式。式(I)化合物的药学上可接受的盐包括其酸加成盐。

合适的酸盐是由形成无毒盐的酸形成的，例如选自：乙酸盐、己二酸盐、苯甲酸盐、碳酸氢盐、碳酸盐、硫酸氢盐、硫酸盐、硼酸盐、右旋樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环磺酸盐、乙二磺酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐(furamate)、葡糖庚酸盐、葡糖酸盐、葡糖醛酸盐、六氟磷酸盐、海苯酸盐、氯化物盐酸盐、氢溴酸盐、溴化物、氢碘化物、碘化物、羟乙基磺酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐甲磺酸盐、甲基硫酸盐、萘酸盐(naphthylate)、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、乳清酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、磷酸盐、磷酸氢盐、磷酸二氢盐、焦谷氨酸盐、蔗糖盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、单宁酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐、三氟乙酸盐和昔萘酸盐(xinofoate)。优选地，式(I)化合物的药学上可接受的盐由乳酸盐形成。

式(I)化合物的药学上可接受的盐可以通过以下三种方法中的一种或多种制备：

(i)使式(I)化合物与所需的酸反应；

(ii)使用所需的酸或碱，从式(I)化合物的合适的前体或合适的环状前体(例如内酯或内酰胺)的开环除去酸不稳定性或碱不稳定性保护基；或

(iii)通过与合适的酸或碱反应或通过合适的离子交换柱将式(I)化合物的一种盐转化为另一种盐。

这三种反应通常在溶液中进行。所得到的盐可以沉淀并通过过滤收集，或者可以通过蒸发掉溶剂来回收。所得到的盐的电离程度可以从完全电离到几乎非电离不等。

本发明的第二个主题是一种用于缩小哺乳动物癌性肿瘤的药物组合物，所述药物组合物在药学上可接受的媒介物中包含如上所述的至少一种根据本发明的化合物。

根据一个实施方式，所述药物组合物还包含至少一种另外的治疗剂。

根据一个优选实施方式，所述另外的治疗剂是抗肿瘤剂。

根据一个实施方式，所述抗肿瘤剂是DNA损伤剂，例如喜树碱、伊立替康、拓扑替康、安吖啶、依托泊苷、磷酸依托泊甙、替尼泊苷、顺铂、卡铂、奥沙利铂、环磷酰胺、苯丁酸氮芥、氮芥、白消安、苏消安或噻替派；抗肿瘤抗生素，例如道诺霉素、阿霉素、表柔比星、依达比星米托蒽醌、戊柔比星、放线菌素D、丝裂霉素、博来霉素或普卡霉素；抗代谢剂，例如如5-氟尿嘧啶、阿糖胞苷、氟达拉滨或甲氨蝶呤；抗有丝分裂剂，例如紫杉醇多西他赛、长春花碱、长春新碱、长春地辛或长春瑞滨，或各种抗肿瘤剂，例如硼替佐米、全反式视黄酸、三氧化二砷；或其组合。

根据一个实施方式，所述药物组合物用于治疗患有肿瘤的患者的癌症，所述肿瘤对未与根据本发明的化合物联合施用时的所述抗肿瘤剂具有化学抗性。

根据一个实施方式，所述药物组合物用于治疗患有对所述抗肿瘤剂化学敏感的肿瘤的患者的癌症，并且与根据本发明的化合物或其药学上可接受的盐联合施用给所述患者的抗肿瘤剂的剂量小于未与根据本发明的化合物联合施用时的抗肿瘤剂的剂量。特别地，与根据本发明的化合物或其药学上可接受的盐联合施用于所述患者的抗肿瘤剂的剂量低于在没有任何其他活性成分的情况下单独施用的抗肿瘤剂的剂量。

根据本发明的药物组合物还可以进一步包含通常用于治疗上述病理的另外的治疗活性化合物。

根据一个实施方式，本发明的药物组合物可以通过任何途径施用，特别地包括：使用片剂、胶囊剂、溶液剂、散剂、凝胶剂或颗粒剂制剂经皮内、肌肉内、腹膜内、静脉内或皮下、肺、跨粘膜(口服、鼻内、阴道内、直肠)、鼻喷雾吸入；被包含在注射器、植入装置、渗透泵、药筒或微型泵中；或本领域公知的本领域技术人员所理解的任何其他方式。可以进行部位特异性施用，例如，以包含通常无毒且药学上可接受的媒介物的合适剂量在肿瘤内、关节内、支气管内、腹内、囊内、软骨内、腔内、小脑内、脑室内、结肠内、颈管内、胃内、肝内、心内、骨内、骨盆内、心包内、腹膜内、胸膜内、前列腺内、肺内、直肠内、肾内、视网膜内、滑膜内、胸内、子宫内、血管内、膀胱内、病灶内、阴道、直肠、口腔、舌下、鼻内或经皮施用。优选地，所述药物组合物呈适于静脉内、皮下、腹膜内或口服施用的形式，口服途径是特别优选的。

除了温血动物例如小鼠、大鼠、狗、猫、羊、马、牛和猴外，本发明的化合物对人类也有效。

根据一个实施方式，用于施用本发明的化合物的药物组合物可以以单位剂量形式存在，并且可以通过现有技术中熟知的任何方法制备。所有方法都包括将活性成分与构成一种或多种辅助成分的载体组合放置的步骤。通常，药物组合物是通过如下制备的：将活性成分与液体载体或细碎固体载体或两者组合放置，然后，如果需要，将产品成形为所需的制剂。在药物组合物中，活性目标化合物的含量足以对疾病进展或病况产生所需效果。含有活性成分的药物组合物可以呈适于口服的形式，例如呈片剂、锭剂、水性或油性混悬剂、分散性散剂或颗粒剂、乳剂、胶囊剂、糖浆剂、酏剂、溶液剂、口服贴剂、口服凝胶剂、咀嚼口香糖剂、咀嚼片剂、泡腾散剂和泡腾片剂的形式。含有活性成分的药物组合物可以呈水性或油性混悬剂的形式。

根据一个实施方式，水性混悬剂含有与赋形剂混合的活性材料，所述赋形剂适于制备水性悬浮物。这些赋形剂是悬浮剂，例如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、海藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、山羊刺树胶和阿拉伯树胶；分散剂或润湿剂可以是天然磷脂，例如卵磷脂，或环氧烷与脂肪酸的缩合产物(例如聚氧乙烯硬脂酸酯)，或环氧乙烷与长链脂族醇的缩合产物(例如十七烷亚乙基氧基缩酮醇(heptadecaethyleneoxyketanol))或环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇的部分酯的缩合产物(例如聚氧乙烯山梨醇单油酸酯)，或环氧乙烷与衍生自脂肪酸类和己醇酸酐的部分酯的缩合产物(例如聚乙烯山梨醇单油酸酯)。水性混悬剂还可以含有一种或多种防腐剂，例如对羟基苯甲酸乙酯或正丙基，一种或更多种着色剂，一种或者更多种调味剂，以及一种或更多种甜味剂(例如蔗糖或糖精)。

根据一个实施方式，油性混悬剂可以通过将活性成分悬浮在植物油(例如花生油、橄榄油、芝麻油或椰子油)或矿物油(如液体石蜡)中来配制。油性混悬剂可以含有增稠剂，例如蜂蜡、硬质石蜡或鲸蜡醇。可以添加甜味剂(例如上述甜味剂)和调味剂，以得到口感宜人的口服制剂。这些组合物可以通过添加抗氧化剂例如抗坏血酸来保存。适用于通过加水制备水性混悬剂的分散性散剂和颗粒剂提供了与分散剂或润湿剂、悬浮剂和一种或多种防腐剂混合的活性成分。

糖浆和酏剂可以用甜味剂，例如甘油、丙二醇、山梨醇或蔗糖配制。这些制剂也可以含有润肤剂、防腐剂、调味剂和着色剂。

药物组合物可以呈可以以无菌方式注射的水性或油性混悬剂的形式。该混悬剂可以根据已知技术使用上述合适的分散剂或润湿剂和悬浮剂进行配制。可注射无菌制剂也可以是在肠胃外可接受的无毒稀释剂或溶剂中的可注射无菌溶液或混悬剂，例如在1,3-丁二醇中的溶液。可以使用的可接受的媒介物和溶剂包括：水、林格氏流体和等渗氯化钠溶液。此外，无菌固定油通常用作溶剂或悬浮介质。为此，可以使用任何固定油，包括合成的单甘油酯或二甘油酯。此外，脂肪酸例如油酸用于制备可注射产品。

本发明的药物组合物也可以以栓剂的形式施用，用于药物的直肠施用。这些组合物可以通过将药物与合适的无刺激性赋形剂混合来制备，所述无刺激性赋形剂在常温下为固体，但在直肠温度下为液体，因此将在直肠中融化以释放药物。此类材料包括可可脂和聚乙二醇。

此外，药物组合物可以通过溶液剂或软膏剂的方式进行眼部施用。此外，所考虑的化合物的经皮施用可以通过离子电渗贴剂等实现。对于局部使用，可使用乳膏剂、软膏剂、凝胶剂、溶液剂或混悬剂。

在治疗患有癌症或处于患癌症风险的哺乳动物或患者时，本发明的药物组合物的适当剂量可以通常为每天每千克患者体重约0.1至50 000微克(μg)，其可以以单剂量或多剂量施用。取决于许多因素，例如待治疗癌症的严重程度、受试者的年龄和相对健康状况、施用途径和形式，剂量水平优选地为每天约1000至约40 000μg/kg。对于口服施用，该组合物可以片剂的形式提供，该片剂含有1000至100000微克的每种活性成分，特别地1000、5000、10000、15000、20000、25000、50000、75000或100000微克的每种活性成分。该组合物可以以每天1至4次，例如每天一次或两次的时间表施用。可以调整剂量方案以提供最佳的治疗响应。

本发明还公开了一种用于制备式(I)化合物的方法。

根据一个实施方式，C3氟化方法包括用氟化试剂(例如三氟化二乙基氨基硫(DAST)或四氟硼酸盐)进行的树状配基A的氟化步骤。在以下文献中描述了与DAST的氟化反应：Tetrahedron letters 1979,20,1823-1826,“A new method for fluorination ofsterols”(https://doi.org/10.1016/S0040-4039(01)86228-6)。在以下文献中描述了与四氟硼酸盐的氟化反应：Org.Lett.,Vol.11,No.21,2009,5050-5053,“Aminodifluorosulfinium Tetrafluoroborate Salts as Stable and CrystallineDeoxofluorinating Reagents”。

根据一个实施方式，用于合成3β-氟-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷二乳酸盐的方法包括以下步骤：

-将化合物3β-氟-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]-胆甾烷溶解于无水乙醇中，然后向其中加入乳酸；

-在室温搅拌该混合物3小时；

-蒸发掉有机溶剂。

得到的白色粉末是化合物3β-氟-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷二乳酸盐。

根据该方法的一个实施方式，环境温度为15℃至40℃，例如25℃或37℃，优选地20℃。

附图说明

参考附图，根据以下参考附图对本发明的多个特定实施方式的描述，将更好地理解本发明，并且本发明的其他目的、细节、特征和优点将更加清晰地呈现，所述特定实施方式仅用于说明而非限制。

图1呈现了通过台盼蓝测定的3β-氟-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷(DX111)对Neuro2a细胞的的细胞毒性研究结果。

图2示出了在化合物3β-氟-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷的存在下对MCF-7乳腺肿瘤细胞进行的MTT细胞存活率测定的结果。

图3示出了在化合物3β-氟-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷的存在下在MCF-7细胞中胆固醇环氧化物水解酶(ChEH)活性的结果。

图4示出了与化合物树状配基A(DX101)比较，化合物3β-甲氧基-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷(DX103)的药代动力学特征。

图5示出了与化合物树状配基A(DX101)比较，化合物3β-乙氧基-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷(DX105)的药代动力学特征。

图6示出了与化合物树状配基A(DX101)比较，化合物3β-氟-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷(DX111)的药代动力学特征。

图7A和图7B例示了在小鼠肿瘤生长和存活率的发展方面对用DX111和DX101的治疗的比较。

图8示出了与化合物树状配基A(DX101)比较，化合物3β-叠氮基-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷(DX123)的药代动力学特征。

具体实施方式

进行了各种实验来评价式(I)化合物的特性。

对应于通式I的根据本发明的优选化合物，其合成和活性如下所述：

落入未描述的通式范围内的其它化合物形成根据本发明的化合物的不可或缺的部分。

实施例1：类似化合物3β-氟-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷 (命名为DX111)的合成

第一步是合成化合物3β-氟胆甾烷，其包括以下步骤：

/>

将5.00g二乙基氨基三氟化硫(d＝1.22g/ml，31.0mmol)溶解于200ml无水DCM中。将6.66克(g)胆固醇(17.2mmol)溶解于100毫升(ml)无水二氯甲烷中，并在0℃滴加到氟试剂中。将由此得到的混合物在磁力搅拌下放置5小时，同时使其升温至室温。在该时段之后，通过加入100ml饱和NaHCO₃溶液来中和反应。将混合物转移到分液漏斗中，并将有机相用饱和NaHCO₃洗涤两次，再用饱和NaCl溶液洗涤两次，用水洗涤一次。将有机相经MgSO₄干燥，过滤，然后蒸发以得到白色粉末。得到相应的6.61g3β-氟胆甾烷。最终反应产率为99％。

¹H-NMR(500MHz,CDCl₃):δ(ppm)5.40–5.39(d,1H),4.47–4.30(m,1H),2.45–2.42(t,2H),2.03–1.95(m,3H),1.90–0.95(m,26H),0.92–0.91(d,3H),0.87-0.85(dd,6H),0.68(s,3H).

第二步在于从3β-氟胆甾烷开始，合成化合物3β-氟-5,6α-环氧胆甾烷，如下：

将4.96g纯度为77％的间氯过氧苯甲酸(22.1mmol)溶解于100ml二氯甲烷中，并滴加到6.61g 3β-氟胆甾烷(17.0mmol)溶解于50ml二氯甲烷而成的混合物中。将由此得到的混合物搅拌并在室温保持3小时。将所得到的混合物用含有10重量％Na₂S₂O₃的水溶液洗涤两次，用饱和NaHCO₃溶液洗涤并用饱和NaCl溶液洗涤两次。将有机相经无水MgSO₄干燥。进行有机溶剂的真空蒸发，得到6.90g白色粉末，其包含：3β-氟-5,6α-环氧胆甾烷(白色粉末的85％)和3β-氟-5,6β-环氧胆甾烷(白色粉末的15％)。在未经进一步纯化的情况下使用3β-氟-5,6α-环氧胆甾烷。

¹H-NMR(500MHz,CDCl₃):δ(ppm)4.82–4.64(m,1H),2.91–2.90(d,1H),2.28–2.21(m,1H),2.10–2.06(m,1H),1.97–1.70(m,6H),1.59–0.92(m,23H),0.89–0.88(d,3H),0.87-0.85(dd,6H),0.61(s,3H).

第三步在于合成3β-氟-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷(碱性形式的DX111)，如下：

在130℃在搅拌下将0.80g(7.2mmol)碱性形式的组胺加入10ml包含1.45g化合物3β-氟-5,6α-环氧胆甾烷(3.6mmol)的丁醇溶液中。将混合物保持回流搅拌，在130℃的温度加热48小时。

可以通过薄层色谱法(TLC)监测反应进程，以跟踪3β-氟-5,6α-环氧胆甾烷的转化。

冷却后，将混合物在15ml甲基叔丁基醚中稀释。将有机相用15ml水洗涤3次。

将有机相经无水MgSO₄干燥，过滤，然后蒸发，得到棕色油状物。将混合物在包含20g预填充柱的纯化机上通过硅胶柱色谱法纯化，用100％乙酸乙酯洗脱。得到0.86g 3β-氟-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷。通过NMR(核磁共振)和TLC(薄层色谱法)分析测量，最终反应产率为41％，其中纯度大于97％。

¹H-NMR(500MHz,CDCl₃):δ(ppm)7.54(s,1H),6.80(s,1H),5.05–4.88(m,1H),3.03–2.96(m,1H),2.77–2.73(m,3H),2.46(s,1H),2.27–2.20(q,1H),2.00–1.98(d,2H),1.86–0.94(m,31H),0.91–0.89(d,3H),0.87–0.85(d,6H),0.67(s,3H).

实施例2：化合物3β-氟-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷(以二乳酸盐形式的DX111)的制备：

化合物3β-氟-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷的二乳酸盐通过以下方式制备：

在搅拌下将267.2mg乳酸(2.97mmol)加入0.76g 3β-氟-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷在15ml无水乙醇中的溶液中。在室温继续搅拌3小时。真空蒸发有机溶剂，得到1.03g 3β-氟-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷二乳酸盐。

1H-NMR(500MHz,MeOD-4d):δ(ppm)7.58(s,1H),6.79(s,1H),4.73-4.57(m,1H),3.86-3.82(dd,2H),3.35-3.31(dd,2H),3.18-3.13(m,1H),3.03–2.98(m,1H),2.77-2.75(t,2H),2.70(s,1H),2.12-2.05(dd,1H),1.78-1.76(d,1H),1.70–1.68(d,1H),1.63-0.85(m,30H),0.78-0.73(d,2H),0.68–0.66(d,3H),0.61-0.60(dd,6H),0.49(s,3H).

实施例3：式(I)的3α-氨基和3α-硫化物衍生物或类似物的制备：

步骤如下：

在70℃，在NaH存在下，将胆固醇在四氢呋喃(THF)中搅拌5分钟，加入对甲苯磺酰氯(p-TsCl)，并在70℃搅拌混合物4小时。加入水，过滤反应混合物，并蒸发掉有机溶剂。用二氯甲烷/水(DCM/H₂O)提取反应产物，并经MgSO₄干燥。通过真空蒸发去除有机溶剂。所得到的产品按原样用于下一步。将获得的产物溶解于THF中，在加有1.1当量的NuH(亲核试剂-氢)的情况下搅拌，持续12小时。在70℃，NuH相当于R₂SH或NHR₂R₃。通过加入水来猝灭反应，并且用EtOAc/H₂O体系提取产物。经MgSO₄干燥有机相，并在真空下蒸发掉有机溶剂。通过柱色谱法或重结晶法纯化胆甾烷-3-硫化物和胆甾烷3-氨基衍生物。获得树状配基A类似物的反应途径与合成树状配基A所进行的步骤相同。

将通过用氧化剂例如m-CPBA或H₂O₂氧化R₂S来获得产物R₂O₂S。

实施例4：式(I)的3β氨基和3β硫化物衍生物或类似物的制备

步骤如下所示：

将胆固醇溶解，在DCM中加入Et₃N，并在室温在1小时内在DCM溶液中滴加甲酰氯(MsCl)。搅拌反应混合物12小时，然后蒸发掉有机溶剂，并使产物从MeOH中结晶。所得到的产物是白色固体。所得到的产物用于获得3β-硫化物和3β-叠氮化物衍生物。将所得到的产物溶解于DCM中，然后将用于3β-硫化物衍生物的TMS-SR₂或用于3β-叠氮化物衍生物的TMS-N₃加入溶液中。在室温进行BF₃*Et₂O的添加。然后将混合物搅拌3小时。

在Et₂O中，通过LiAlH₄的作用，3β-叠氮化物被还原为3β-氨基，并通过R₂X(X＝Br、Cl或I)在作为溶剂的Et₂O(或吡啶)中的反应转化为式(I)的产物。获得树状配基A类似物的反应途径与用于合成树状配基A所进行的步骤相同。将通过用常用氧化剂氧化R₂S来获得磺酰基衍生物R₂O₂S。该方法在以下文献中有详细介绍：Organic Letters,2009,11,3,567-570,“Practical Synthesis of 3β-Amino-5-cholestene and Related 3β-HalidesInvolving i-Steroid and Retro-i-Steroid Rearrangements”(https://doi.org/10.1021/ol802343z).

实施例5：3β-氟-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷(命名为 DX111)的细胞毒性研究

对于该实验，制备了细胞培养基。培养基由包含4.5g/L葡萄糖和L-谷氨酰胺的Dulbecco改良Eagle培养基(DMEM，由Westburg基于参考号LO BE12-604F出售)组成，其中添加有10％胎牛血清(FCS)。将Neuro2a(鼠神经母细胞瘤)细胞引入该培养基中。

以10000个Neuro2a细胞/孔接种24孔培养皿。在正常条件(即在37℃在5％CO₂的情况下在培养箱中)下培养72小时(h)后，用100nM、1μM和10μM的3β-氟-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]-胆甾烷和5α-羟基-6β-[2(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷-3β-醇处理Neuro2a细胞48h。在不用3β-氟-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]-胆甾烷和5α-羟基-6β-[2-(1H咪唑-4-基]乙基氨基]胆甾烷-3β-醇处理的情况下，也使用先前描述的方案进行对照(CTL)。使用Biorad TC20机(TC20^TM自动细胞计数器)在自动计数的情况下通过台盼蓝测试对细胞存活进行定量。台盼蓝测试基于细胞膜的完整性，细胞膜在死细胞中被破坏。台盼蓝将死细胞染成蓝色。Biorad TC20细胞计数器计算蓝色和非蓝色细胞的比例，并报告细胞的百分比。结果如图1中所呈现。图1在y轴上示出了相对于对照组的细胞存活百分比。

如图1中所例示，对于100nM的3β-氟-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷处理，与对照组(CTL)相比，活细胞的百分比保持不变。此外，对于1μM和10μM的浓度，细胞存活的百分比分别为75％和30％。在两种测试化合物之间也观察到类似的活性。

总之，对于浓度为1μM和10μM的3α-氟-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷，观察到式(I)的化合物3β-氟-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷对Neuro2a肿瘤细胞的细胞毒性活性。

实施例6：3β-氟-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]-胆甾烷对MCF-7细胞存活率的作用

对过表达HER2(ER(+)细胞)的MCF-7(密歇根癌症基金会-7)乳腺肿瘤细胞进行了细胞存活率测试。

使MCF-7细胞处于与实施例5的细胞培养基相同的细胞培养基中，并以50000个细胞/孔接种在12孔板中。接种后24小时，用包含以下的媒介物溶剂合物处理细胞：水和乙醇(其中乙醇的比例为1‰)、3β-氟-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷和5α-羟基-6-β-[2-(1H咪唑-4-基]乙基氨基]胆甾烷-3β-醇(以1μM、2.5μM or 5μM)。在倒置显微镜下观察细胞，并在24小时和48小时通过显微镜相机拍摄。在1μM时，细胞的形态学变化非常小。仅观察到少量白色囊泡，反映自体吞噬现象的开始，用3β-氟-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]-胆甾烷和5α-羟基-6-β-[2-(1H咪唑-4-基]乙基氨基]胆甾烷-3β-醇处理24h后产生细胞死亡。随着死亡细胞数量的增加，在2.5μM和5μM时的影响更加明显。事实上，在用2.5μM的3β-氟-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷处理24h后观察到大量的白色囊泡和脱落细胞。用5μM的3β-氟-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]-胆甾烷处理24小时后，观察到的细胞的99％为上清液，反映细胞死亡，1％的细胞粘附并显示白色囊泡。用2.5μM的3β-氟-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷处理48小时后，观察到比24小时更强的细胞生长抑制作用，并且更多的细胞圆角化，反映细胞死亡。细胞生长抑制作用通过抑制细胞增殖来说明。用5μM的3β-氟-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷处理48小时后，所有细胞均为上清液。与用5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷-3β-醇处理相比，用3β-氟-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷在观察24小时后显示出更大或相等的作用，并且在观察48小时后显示出类似的作用。

通过在48小时时用MTT标记来测量细胞存活率。该测试基于四唑鎓盐MTT(3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑鎓溴化物)的使用。四唑鎓在活性的活细胞中被线粒体琥珀酸脱氢酶还原为甲赞，甲赞是一种紫色的沉淀物。形成的沉淀物的量与活细胞的量成比例，而且也与每个细胞的代谢活性成比例。因此，通过光谱法简单地确定540nm处的光密度使得可以确定活细胞和代谢活性细胞的相对量。48小时后，吸取培养基，用磷酸盐缓冲盐水(PBS)洗涤细胞，然后用MTT(在PBS中为0.5mg/ml)温育约2小时。吸取MTT溶液，并将紫色晶体溶解于二甲基亚砜(DMSO)中。在540nm处测量OD(光密度)。

该测试的结果如图2中所示。图2在y轴上示出了相对于对照组的细胞存活率百分比。在不添加本文中所研究的分子的情况下，以与所研究的组类似的方式制备对照组。与对照组相比，对于3β-氟-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷和5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷-3β-醇，通过MTT测量到，细胞存活率呈剂量依赖性下降。对于5μM的浓度，存活率接近0％。这反映了式(I)化合物杀死乳腺肿瘤细胞的能力。这些结果与在24小时和48小时的上述观察结果一致。

实施例7：3β-氟-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]-胆甾烷对胆固醇环氧化物水解酶(ChEH)在MCF-7细胞中的活性的作用

化合物5,6α-环氧胆固醇(5,6α-EC)和5,6β-环氧胆固醇(5,6β-EC)是他莫昔芬(一种广泛使用的抗肿瘤药物)的抗癌药理学中涉及的羟固醇。二者通过酶(胆固醇-5,6-环氧化物水解酶(ChEH))被代谢为胆甾烷-3β,5α,6β-三醇(CT)，并且CT通过酶HSD11B2(11β-羟基类固醇脱氢酶2)被代谢为6-氧代胆甾烷-3β,5α-二醇(OCDO)(一种促肿瘤的甾酮(oncosterone))。

以下实验的目的是证明3β-氟-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷用于阻断ChEH的能力，从而限制促肿瘤甾酮(一种代谢产物)的代谢。

使MCF-7细胞处于与实施例5的细胞培养基相同的细胞培养基中，并以150000个细胞/孔接种在6孔板中，其中每个处理条件有3个孔。接种后24小时，用[¹⁴C]5,6α-EC(1000X储备溶液：0.6mM；20μCi/μmol；最终浓度0.6μM)单独或与他莫昔芬(tam)联合处理MCF-7细胞。他莫昔芬被用作3α-氟-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷和5α-羟基-6β-[2-(1H咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷-3β-醇的阳性对照(对于所有分子都为1μM)。

处理24小时后，收集培养基，并通过用100μL氯仿、400μL甲醇和300μL水提取，来从细胞颗粒中制备脂质提取物。使用乙酸乙酯(EtOAc)作为洗脱剂，通过薄层色谱法(TLC)分析脂质提取物。用读板器，然后通过放射自显影术进行分析。在图3中呈现了结果。观察到环氧化物对CT和OCDO的几乎完全代谢(孔2和4)，他莫昔芬对ChEH活性的完全抑制和3α-氟-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷的几乎完全抑制(痕量CT)。在5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷-3β-醇的情况下观察到类似的结果。

总之，3α-氟-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷具有类似于5α-羟基-6β-[2-(1H咪唑-4-基]乙基氨基]胆甾烷-3β-醇的ChEH抑制活性。

实施例8：式(I)化合物3β-甲氧基-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷(命名为DX103)的合成

第一步在于，将4.0克(g)胆固醇(10.3mmol)溶解于20毫升(ml)四氢呋喃(THF)中。加入0.80g NaH(在油中为60％，20.0mmol)，并在60℃使其反应30分钟，然后加入1.8ml碘甲烷(28.9mmol)。将由此得到的混合物在60℃放置过夜，即约10小时。将溶液冷却后，通过加入20ml水来中和反应。将混合物过滤并在真空下蒸发掉THF。将混合物转移到分液漏斗中，并用乙酸乙酯提取水相三次。合并所得有机相并经MgSO₄干燥，然后蒸发得到油状物。将得到的油状物溶解于2ml Et₂O中，并加入MeOH直到形成白色沉淀物。滤出粉末，用冷的MeOH洗涤并干燥。由此得到3.40g(相当于82％的产率)的3β-甲氧基胆甾烷的白色粉末。

¹H-NMR(500MHz,CDCl₃):δ(ppm)5.36(s,1H),3.35(s,3H),3.09–3.02(q,1H),2.40–2.36(d,1H),2.18–2.13(t,1H),2.03–1.81(m,5H),1.60–1.00(m,24H),0.92–0.91(d,3H),0.87-0.85(dd,6H),0.68(s,3H).

第二步在于，从3β-甲氧基胆甾烷开始合成化合物3β-甲氧基-5,6α-环氧胆甾烷，如下：

将1.80g间氯过氧苯甲酸(8.90mmol)溶解于70ml二氯甲烷中，并滴加到2.50g 3β-甲氧基胆甾烷(6.24mmol)溶解于20ml二氯甲烷中而成的混合物中。将由此得到的混合物搅拌并在室温保持三小时。将由此得到的混合物用含有10重量％Na₂S₂O₃的水溶液、饱和NaHCO₃溶液和饱和NaCl溶液洗涤。将有机相经无水MgSO₄干燥。对有机溶剂进行真空蒸发，得到透明的粘性油状物。加入5ml Et₂O以溶解油状物，然后加入25ml EtOH，并将混合物加热至沸点三次，最后在0℃保持过夜以促进沉淀。滤出白色粉末，用冷的MeOH洗涤并干燥；由此得到1.73g的3β-甲氧基-5,6α-环氧胆甾烷，相当于67％的产率(其中对映体过量≥90％)。

¹H-NMR(500MHz,CDCl₃):δ(ppm)3.45–3.39(m,1H),3.33(s,3H),2.90–2.89(d,1H),2.00–0.94(m,31H),0.89–0.88(d,3H),0.86-0.85(dd,6H),0.60(s,3H).

第三步在于，合成3β-甲氧基-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷(DX103碱性形式)如下：

在搅拌下，将0.81g(7.30mmol)碱性形式的组胺加入包含1.50g化合物3β-甲氧基-5,6α-环氧胆甾烷(3.62mmol)的10ml丁醇溶液中。将混合物保持回流搅拌，在130℃的温度加热48小时。

可以通过薄层色谱法(TLC)监测反应进程，以跟踪3β-甲氧基-5,6α-环氧胆甾烷的转化。

冷却后，将混合物在10ml甲基叔丁基醚中稀释。将有机相用10ml水洗涤两次，然后用10ml饱和NaCl溶液洗涤一次。

将有机相经无水MgSO₄干燥。将混合物在纯化机上通过柱色谱法进行纯化。所使用的洗脱液是乙酸乙酯和甲醇的90％/10％混合物。得到1.32g 3β-甲氧基-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷的白色粉末。通过NMR(核磁共振)和TLC(薄层色谱法)分析测量，最终反应产率为69％，其中纯度大于95％。

¹H-NMR(500MHz,MeOD-4d):δ(ppm)7.62(s,1H),6.88(s,1H),3.71–3.65(m,1H),3.34(s,3H),2.98–2.97(d,1H),2.78–2.77(m,3H),2.45(s,1H),2.03–2.00(m,1H),1.94–1.83(m,3H),1.65–1.01(m,27H),0.95–0.94(d,3H),0.91-0.89(d,6H),0.71(s,3H).

实施例9：化合物3β-甲氧基-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷的二乳酸盐的制备(DX103二乳酸盐形式)

如下制备化合物3β-甲氧基-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷的二乳酸盐：

/>

在搅拌下，将21.0mg乳酸(1.89mmol)加入0.50g 3β-甲氧基-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷(0.95mmol)在15ml无水乙醇中的溶液中。在室温继续搅拌3小时。真空蒸发有机溶剂，得到0.52g 3β-甲氧基-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷二乳酸盐的白色粉末。

¹H-NMR(500MHz,MeOD-4d):δ(ppm)7.61(s,1H),6.84(s,1H),3.93–3.89(q,2H),3.62-3.57(m,1H),3.39-3.09(m,8H),3.21-3.16(m,1H),2.84–2.74(m,3H),1.91–1.81(m,2H),1.70-0.79(m,31H),0.73–0.72(d,3H),0.68-0.66(d,6H),0.56(s,3H).

实施例10：式(I)化合物3β-乙氧基-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷的合成(命名为DX105)

第一步是合成化合物3β-乙氧基胆甾烷，包括以下步骤：

将4.00g胆固醇(10.3mmol)溶解于20ml THF中。加入0.82g NaH(在油中为60％，20.0mmol)，并使其在60℃反应30分钟，然后加入1.9ml碘乙烷(28.9mmol)。将由此得到的混合物在60℃放置过夜。在将溶液冷却后，通过加入20ml水来中和反应。将该混合物过滤并在真空下蒸发掉THF。将混合物转移到分液漏斗中，并用乙酸乙酯提取水相三次。将由此得到的有机相合并并经MgSO₄干燥，然后蒸发以得到油状物。将由此得到的油状物溶解于2mlEt₂O中，并加入MeOH直到形成白色沉淀物。滤出粉末，用冷的MeOH洗涤并干燥。由此得到2.12g 3β-乙氧基胆甾烷的白色粉末(相当于49％的产率)。

¹H-NMR(500MHz,CDCl₃):δ(ppm)5.35(s,1H),3.53-3.51(q,2H),3.17–3.14(m,1H),2.38–2.35(d,1H),2.22–2.17(t,3H),2.02–1.79(m,5H),1.60–0.94(m,27H),0.92–0.91(d,3H),0.87-0.85(dd,6H),0.67(s,3H).

第二步在于，从3β-乙氧基胆甾烷开始合成化合物3β-乙氧基-5,6α-环氧胆甾烷，如下：

将1.44g间氯过氧苯甲酸(相当于6.43mmol)溶解于50ml二氯甲烷中，并滴加到2.0g 3β-乙氧基胆甾烷(4.82mmol)溶解于10ml二氯甲烷中而成的混合物中。将由此得到的混合物搅拌并在室温保持3小时。将由此得到的混合物用含有10重量％Na₂S₂O₃的水溶液、饱和NaHCO₃溶液和饱和NaCl溶液洗涤。将有机相经无水MgSO₄干燥。对有机溶剂进行真空蒸发，得到透明的粘性油状物。加入5ml Et₂O以溶解油状物，然后加入25ml EtOH，并将混合物加热至沸点三次，然后在0℃保持过夜以促进沉淀。滤出白色粉末，用冷MeOH洗涤并干燥，因此得到0.72g 3β-乙氧基-5,6α-环氧胆甾烷，相当于35％的产率(对映体过量≥90％)。

¹H-NMR(500MHz,CDCl₃):δ(ppm)3.55–3.46(m,3H),2.89–2.88(d,1H),2.04–0.93(m,34H),0.89–0.88(d,3H),0.86-0.85(dd,6H),0.60(s,3H).

第三步在于，合成3β-乙氧基-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷(碱性形式的DX105)，如下：

在搅拌下将0.31g(相当于2.74mmol)碱性形式的组胺加入5ml包含0.51g化合物3β-乙氧基-5,6α-环氧胆甾烷(1.18mmol)的丁醇溶液中。将混合物保持回流搅拌，在130℃的温度加热48小时。

可以通过薄层色谱法(TLC)监测反应进程，以跟踪3β-乙氧基-5,6α-环氧胆甾烷的转化。

冷却后，将混合物在5ml甲基叔丁基醚中稀释。将有机相用5ml水洗涤两次，然后用5ml饱和NaCl溶液洗涤一次。

将有机相经无水MgSO₄干燥。将混合物在纯化机上通过柱色谱法进行纯化。所使用的洗脱液是90/10乙酸乙酯/甲醇的混合物。得到0.28g 3β-乙氧基-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷的白色粉末。通过NMR(核磁共振)和TLC(薄层色谱法)分析测量，最终反应产率为44％，其中纯度大于97％。

¹H-NMR(500MHz,MeOD-4d):δ(ppm)7.62(s,1H),6.89(s,1H),3.82–3.76(m,1H),3.57–3.52(q,2H),3.05–3.00(m,1H),2.85–2.80(m,3H),2.50(s,1H),2.03–1.83(m,5H),1.65–1.51(m,7H),1.42–1.01(m,22H),0.96–0.94(d,3H),0.91-0.89(d,6H),0.72(s,3H).

实施例11：化合物3β-乙氧基-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷的二乳酸盐(二乳酸盐形式的DX105)的制备

通过以下方式制备化合物3β-乙氧基-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷的二乳酸盐：

在搅拌下将166.2mg乳酸(1.85mmol)加入0.50g 3β-乙氧基-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷(0.92mmol)在5ml无水乙醇的溶液中。在室温继续搅拌3小时。真空蒸发有机溶剂，得到0.20g 3β-乙氧基-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷二乳酸盐的白色粉末。

¹H-NMR(500MHz,MeOD-4d):δ(ppm)7.61(s,1H),6.84(s,1H),3.92–3.89(q,2H),3.60-3.57(m,1H),3.39-3.09(m,7H),2.84–2.74(m,3H),1.91–1.81(m,2H),1.70-0.79(m,34H),0.73–0.72(d,3H),0.67-0.65(d,6H),0.54(s,3H).

实施例12：式(I)化合物3β-辛氧基-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷(命名为DX115)的合成

第一步是合成化合物3β-辛氧基胆甾烷，包括以下步骤：

将4.00g胆固醇溶解于20ml四氢呋喃中。加入0.84g NaH，并使其在60℃反应30分钟，然后加入3.0g异辛烷。将由此得到的混合物在60℃放置过夜。将溶液冷却后，通过加入20ml水来中和反应。将该混合物过滤并在真空下蒸发掉THF。将混合物转移到分液漏斗中，并用乙酸乙酯提取水相三次。将由此得到的有机相合并并经MgSO₄干燥，然后蒸发以得到油状物。

将得到的油状物溶解于2ml Et₂O中，并加入MeOH直到形成白色沉淀物。滤出粉末，用冷的MeOH洗涤并干燥。由此得到2.5g(相当于48％)3β-辛氧基胆甾烷的白色粉末。

¹H-NMR(500MHz,CDCl₃):δ(ppm)5.35(s,1H),3.45-3.43(q,2H),3.15–3.10(q,1H),2.37–2.35(d,1H),2.21–2.16(t,1H),2.02–1.95(m,2H),1.90–1.84(m,3H),1.58–0.97(m,39H),0.92–0.91(d,3H),0.87-0.86(dd,6H),0.67(s,3H).

第二步在于，从3β-辛氧基胆甾烷开始合成化合物3β-辛氧基-5,6α-环氧胆甾烷，如下：

将0.90g间氯过氧苯甲酸(相当于4.0mmol)溶解于40ml二氯甲烷中，并滴加到溶解于10ml二氯甲烷中的1.50g(3.0mmol)3β-辛氧基胆甾烷而成的混合物中。将由此得到的混合物搅拌并在室温保持3小时。将由此得到的混合物用含有10重量％Na₂S₂O₃的水溶液、饱和NaHCO₃溶液和饱和NaCl溶液洗涤。将有机相经无水MgSO₄干燥。对有机溶剂进行真空蒸发，得到透明的粘性油状物。加入5ml Et₂O以溶解油状物，然后加入25ml MeOH，并将混合物加热至沸点三次，最后在0℃保持过夜以促进沉淀。滤出白色粉末，用冷MeOH洗涤并干燥，由此得到1.19g 3β-辛氧基-5,6α-环氧胆甾烷，产率为77％(对映体过量≥90％)。

¹H-NMR(500MHz,CDCl₃):δ(ppm)3.51–3.37(m,3H),2.88–2.87(d,1H),2.02–1.87(m,4H),1.84–1.76(m,1H),1.69–1.67(m,1H),1.58–1.45(m,7H),0.89–0.88(m,42H),0.60(s,3H).

第三步在于，合成3β-辛氧基-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷(碱性形式的DX115)，如下：

在搅拌下，将0.48g(相当于4.31mmol)碱性形式的组胺加入含有1.1g(2.14mmol)化合物3β-辛氧基-5,6α-环氧胆甾烷的10ml丁醇溶液中。将混合物保持回流搅拌，在130℃的温度加热48小时。

可以通过薄层色谱法(TLC)监测反应进程，以跟踪3β-辛氧基-5,6α-环氧胆甾烷的转化。

冷却后，将混合物在10毫升甲基叔丁基醚中稀释。将有机相用10ml水洗涤两次，然后用10ml饱和NaCl溶液洗涤一次。

将有机相经无水MgSO₄干燥。将混合物在纯化机上通过柱色谱法进行纯化。所使用的洗脱液是95/5乙酸乙酯/甲醇混合物。得到0.74g 3β-辛氧基-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷的白色粉末。通过NMR(核磁共振)和TLC(薄层色谱法)分析测量，最终反应产率为55％，其中纯度大于95％。

¹H-NMR(500MHz,MeOD-4d):δ(ppm)7.59(s,1H),6.86(s,1H),3.79–3.74(q,1H),3.49–3.47(q,2H),2.95–2.90(m,1H),2.78–2.70(m,3H),2.40(s,1H),2.01–1.84(m,5H),1.62–1.54(m,9H),1.39–1.02(m,30H),0.95–0.89(d,12H),0.70(s,3H).

实施例13：化合物3β-辛氧基-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷的二乳酸盐(二乳酸盐形式的DX115)的制备

通过以下方式制备化合物3β-辛氧基-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷的二乳酸盐：

在搅拌下将166.2mg乳酸(1.85mmol)加入0.57g 3β-辛氧基-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷(0.92mmol)在5ml无水乙醇中的溶液中。在室温继续搅拌3小时。真空蒸发有机溶剂，得到0.59g 3β-辛氧基-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷二乳酸盐的白色粉末。

¹H-NMR(500MHz,MeOD-4d):δ(ppm)7.71(s,1H),6.94(s,1H),4.02–3.98(q,2H),3.72-3.65(q,1H),3.41-3.31(m,3H),3.21-3.16(m,1H),2.95–2.92(t,2H),2.86-2.85(d,1H),2.04–1.99(t,1H),1.96–1.93(d,1H),1.83–1.59(m,7H),1.49-1.04(m,38H),0.98–0.89(m,2H),0.85-0.84(d,3H),0.81-0.77(m,9H),0.66(s,3H).

实施例14：化合物3β-叠氮基-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷 (命名为DX123)的合成

第一步是合成化合物3-甲磺酰基胆甾烷，包括以下步骤：

在0℃在1L烧瓶中将40g胆固醇(0.1mol)和22ml Et₃N(d＝0.88g/ml，0.19mol)溶解于340ml无水二氯甲烷中。将10ml甲磺酰氯(1.48g/ml，0.13mol)溶解于40ml无水二氯甲烷中，并滴加到含有胆固醇的溶液中。将由此得到的混合物在磁力搅拌下放置过夜，并使其升温至室温。

在此之后，通过TLC监测反应，并在真空下浓缩至初始体积的三分之二。加入500mlMeOH使得产生46.4g白色沉淀物，相当于所需产物(97％产率)。

¹H-NMR(500MHz,CDCl₃):δ(ppm)5.42–5.41(d,1H),4.55–4.49(q,1H),3.00(s,3H),2.56–2.45(m,2H),2.05–1.96(m,3H),1.92–1.75(m,3H),1.60–0.93(m,23H),0.92–0.90(d,3H),0.87-0.85(dd,6H),0.67(s,3H).

第二步在于，从3β-甲磺酰基胆固醇开始合成化合物3β-叠氮基胆甾烷，如下：

在室温将下列物质依次加入500ml烧瓶中：23.27g 3β-甲磺酰基胆固醇(50.1mmol)、100ml无水二氯甲烷、7.5ml三甲基甲硅烷基叠氮化物(d＝0.868g/ml，56.5mmol)，最后加入12.5ml三氟化硼二乙醚(d＝1.15g/ml、101.3mmol)。将由此得到的混合物进行磁力搅拌3小时。

在该时段间之后，通过加入100ml 2M NaOH溶液来中和反应混合物。将有机产物用二氯甲烷提取两次。将有机相合并，并用饱和NaCl溶液漂洗两次。将有机相经MgSO₄干燥，过滤，然后蒸发，得到固体。将粗反应产物通过柱色谱法纯化，用100％己烷洗脱。由此得到13.33g的相当于3β-叠氮基胆甾烷的浅黄白色粉末。最终反应产率为65％。

¹H-NMR(500MHz,CDCl₃):δ(ppm)5.39–5.38(d,1H),3.23–3.17(q,1H),2.30–2.28(d,2H),2.03–1.97(m,2H),1.91–1.81(m,3H),1.60–0.94(m,24H),0.92–0.91(d,3H),0.87-0.86(dd,6H),0.68(s,3H).

第三合成步骤在于，从3β-叠氮基胆甾烷开始合成化合物3β-叠氮基-5,6α-环氧胆甾烷，如下：

将950mg纯度为77％的间氯过氧苯甲酸(4.24mmol)溶解于15ml二氯甲烷中，并滴加到1.3g 3β-叠氮基胆甾烷(3.16mmol)溶解于15ml二氯甲烷中而成的溶液中。将由此得到的混合物搅拌并在室温保持3小时。将由此得到的混合物用10重量％的Na₂S₂O₃水溶液洗涤两次，用饱和NaHCO₃溶液洗涤两次，并用饱和NaCl溶液洗涤一次。将有机相经无水MgSO₄干燥。进行有机溶剂的真空蒸发，得到1.35g白色粉末，相当于：3β-叠氮基-5,6α-环氧胆甾烷(总量的83％)和3β-叠氮基-5,6β-环氧胆甾坦(白色粉末的17％)的混合物。在未经进一步纯化的情况下使用最终产物。

¹H-NMR(500MHz,CDCl₃):δ(ppm)3.63–3.56(q,1H),2.94–2.93(d,1H),2.13–2.08(t,1H),1.97–0.94(m,30H),0.89–0.88(d,3H),0.86-0.85(dd,6H),0.61(s,3H).

第四步是合成3β-叠氮基-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷(中性形式的DX123)，如下：

在130℃在搅拌下将864mg碱性形式的组胺(7.77mmol)加入20ml包含2.02g 83％化合物3β-叠氮基-5,6α-环氧胆甾烷(3.9mmol)的丁醇溶液中。将混合物保持回流搅拌，在130℃的温度加热48小时。

可以通过薄层色谱法(TLC)监测反应进程，以跟踪3β-叠氮基-5,6α-环氧胆甾烷的转化。

冷却后，将混合物在15ml甲基叔丁基醚中稀释。将有机相用15ml水洗涤三次。

将有机相经无水MgSO₄干燥，过滤，然后蒸发以得到棕色油状物。将混合物在包括40g预填充柱的纯化机上通过硅胶柱色谱法进行纯化，用75/25％至0/100％的二氯甲烷/乙酸乙酯进行洗脱。得到890mg 3β-叠氮基-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷的白色粉末。通过NMR(核磁共振)和TLC(薄层色谱法)分析测量，最终反应产率为42％，其中纯度大于97％。

¹H-NMR(500MHz,MeOD-4d):δ(ppm)7.55(s,1H),6.81(s,1H),3.73–3.67(q,1H),2.90–2.85(m,1H),2.72–2.62(m,3H),2.33(s,1H),2.05–2.00(t,1H),1.96–1.94(m,1H),1.84–1.77(m,1H),1.74–1.72(m,1H),1.62–0.97(m,27H),0.89–0.88(d,3H),0.85-0.84(d,6H),0.64(s,3H).

实施例15：化合物3β-叠氮基-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷的二乳酸盐(二乳酸盐形式的DX123)的制备

在搅拌下，将63.5mg乳酸(0.77mmol)加入210mg 3β-叠氮基-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷在4ml无水乙醇中的溶液中。在室温继续搅拌3小时。真空蒸发有机溶剂，得到263.5mg 3β-叠氮基-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷二乳酸盐。

¹H-NMR(500MHz,MeOD-4d):δ(ppm)7.67(s,1H),6.92(s,1H),4.01–3.97(m,2H),3.73-3.67(q,1H),3.34-3.29(m,1H),3.19-3.13(m,1H),2.91-2.88(t,2H),2.81(s,1H),2.20-2.15(t,1H),1.94-1.92(d,1H),1.77-1.75(m,3H),1.66–1.58(m,4H),1.47-0.98(m,26H),0.95-0.87(m,2H),0.83-0.82(d,3H),0.77–0.76(dd,6H),0.65(s,3H).

实施例16：化合物3β-氨基-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷的三氯化物盐(三氯化物形式的DX125)的合成

用于由3β-叠氮基-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷合成3β-氨基-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑啉-4-基)乙基氨基]胆甾烷的三氯化物盐的反应如下：

在70℃在搅拌下，将730mg三苯基膦(2.8mmol)加入300mg 3β-叠氮基-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷(0.56mmol)的8.0ml THF溶液中。将混合物保持回流搅拌，在70℃的温度加热2小时。然后加入0.5ml水(相当于27.8mmol)，并在70℃下继续搅拌两小时。通过薄层色谱法(TLC)监测反应进程，然后蒸发掉溶剂混合物。将得到的白色粉末用20ml二氯甲烷溶解，并转移到含有20ml HCl水溶液(1ml 37％ HCl在19ml水中)的分液漏斗中，并将水相用二氯甲烷洗涤三次。将水相在真空下干燥以得到白色粉末。将粉末放入二氯甲烷中，最后一次过滤以除去最后痕量的三苯基膦。该过程以定量产率和大于95％的纯度得到了350mg 3β-氨基-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷的三氯化物盐。

¹H-NMR(500MHz,MeOD-4d):δ(ppm)8.90(s,1H),7.56(s,1H),3.67–3.60(q,1H),3.56-3.41(m,4H),3.28-3.27(d,1H),2.61-2.56(t,1H),2.08-2.05(d,1H),1.99-1.11(m,28H),1.06–1.00(dd,1H)0.96-0.94(d,3H),0.89–0.88(dd,6H),0.78(s,3H).

实施例17：化合物3β-乙酰胺基-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷(命名为DX127)的合成

第一个合成步骤是在胆甾烷3β-叠氮化物衍生物的3-位将叠氮化物基团还原为胺。

将5.21g胆甾烷3β-叠氮化物(12.7mmol)溶解于60ml四氢呋喃(THF)中，然后每15分钟加入五份约480mg的LiAlH₄，总计2.32g(61.1mmol)。将由此得到的混合物进行磁力搅拌3小时。在该时段之后，通过加入几滴5％Na₂CO₃水溶液(缓缓加入)来中和反应。用EtOAc提取有机相三次，并将有机相合并。将所得溶液经MgSO₄干燥，过滤，然后蒸发，得到固体。由此得到3.78g的相当于3β-氨基胆甾烷的足够清洁的白色粉末。最终反应产率为77％。

¹H-NMR(500MHz,CDCl₃):δ(ppm)5.32–5.31(d,1H),2.63–2.57(q,1H),2.17–2.13(m,1H),2.08–1.93(m,4H),1.85–1.81(m,2H),1.72–1.68(m,1H),1.43–0.84(m,33H),0.68(s,3H).

第二步在于，从3-氨基胆甾烷开始合成化合物胆甾烷3β-乙酰胺，如下：

将3.78g 3β-氨基胆甾烷(9.8mmol)溶解于20ml无水二氯甲烷中，然后向反应混合物中加入16ml无水吡啶(198mmol)和5.0g乙酸酐(49.0mmol)。将由此得到的混合物搅拌并在室温保持过夜。由此得到的混合物用0.1M HCl水溶液洗涤三次，将有机相经无水MgSO₄干燥，过滤并在真空下干燥。将得到的油状物溶解于30ml氯仿中，加入90ml MeOH，将混合物加热至沸点三次，直到溶剂体积减少三分之二，最后保持在0℃以促进沉淀。得到白色粉末，将其滤出，用冷的MeOH洗涤并干燥。由此得到2.41g，相当于胆甾烷3β-乙酰胺的58％产率。

¹H-NMR(500MHz,CDCl₃):δ(ppm)5.36–5.35(d,1H),5.32–5.30(d,1H),3.73–3.65(q,1H),2.32–2.29(d,1H),2.09–1.79(m,9H),1.60–0.95(m,22H),0.92–0.90(d,3H),0.87–0.85(dd,6H),0.67(s,3H).

第三步在于，合成5,6-环氧胆甾烷-3β-乙酰胺，如下：

将1.19g纯度为77％的间氯过氧苯甲酸(5.3mmol)溶解于10ml二氯甲烷中，并滴加到1.61g胆甾烷3β-乙酰胺(3.8mmol)溶解于25ml二氯甲烷中而成的混合物中。将由此得到的混合物搅拌并在室温保持3小时。将得到的混合物用含有10重量％Na₂S₂O₃的水溶液洗涤两次，并用饱和NaHCO₃溶液和饱和NaCl溶液洗涤两次。将有机相经无水MgSO₄干燥。进行有机溶剂的真空蒸发，得到1.65g白色粉末，其包含5,6α-环氧胆甾烷3β-乙酰胺(白色粉末的60％)和5,6β-环氧胆甾烯3β-乙酰胺(白色粉末的40％)。在未经进一步纯化的情况下使用5,6β-5,6α-环氧胆甾烷3β-乙酰胺。

¹H-NMR(500MHz,CDCl₃):δ(ppm)5.29–5.28(d,1H),4.05–3.99(q,1H),2.89–2.88(d,1H),2.08–0.84(m,43H),0.60(s,3H).

第四步在于，合成5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷-3β-乙酰胺(中性形式的DX127)，如下：

在搅拌下，将0.47g(相当于4.26mmol)碱性形式的组胺加入20ml包含1.65g 60％的化合物5,6α-环氧胆甾烷3β-乙酰胺(相当于0.99mmol)的丁醇溶液中。将混合物保持回流搅拌，在130℃的温度加热48小时。可以通过薄层色谱法(TLC)监测反应进程，以跟踪5,6α-环氧胆甾烷-3β-乙酰胺的转化。冷却后，将混合物在20ml甲基叔丁基醚中稀释。将有机相用20ml水洗涤两次，并用20ml饱和NaCl溶液洗涤三次。将有机相经无水MgSO₄干燥。将混合物在纯化机上通过柱色谱法进行纯化。所使用的洗脱液是二氯甲烷/甲醇/氨的75/20/5％混合物。得到0.37g 5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷-3β-乙酰胺的白色粉末。通过NMR(核磁共振)和TLC(薄层色谱法)分析测量，最终反应产率为30％，其中纯度大于97％。

¹H-NMR(500MHz,MeOD-4d):δ(ppm)7.56(s,1H),6.81(s,1H),4.15–4.08(q,1H),2.91–2.88(m,1H),2.74–2.68(m,3H),2.35(s,1H),1.99–1.94(m,2H),1.87–1.77(m,5H),1.66–0.97(m,28H),0.90–0.88(d,3H),0.85-0.84(d,6H),0.65(s,3H).

实施例18：化合物3β-乙酰胺基-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷的二乳酸盐(二乳酸盐形式的DX127)的制备

通过以下方式制备化合物3β-乙酰胺基-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷的二乳酸盐：

在搅拌下，将120.6mg乳酸(1.34mmol)加入370mg 5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷3β-乙酰胺在5ml无水乙醇中的溶液中。在室温继续搅拌3小时。真空蒸发有机溶剂，得到490mg 5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷-3β-乙酰胺二乳酸盐的白色粉末。

¹H-NMR(500MHz,MeOD-4d):δ(ppm)7.69(s,1H),6.91(s,1H),4.08-4.03(m,1H),3.37-3.27(m,1H),3.18-3.12(m,2H),2.91-2.88(t,2H),2.77(s,1H),2.07-2.02(t,1H),1.93-1.90(d,1H),1.79(s,3H),1.76-0.88(m,36H),0.82-0.81(d,3H),0.75-074(dd,6H),0.63(s,3H).

实施例19：化合物3β-甲基磺酰基-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷(命名为DX129)的合成

第一步在于，从3β-甲磺酰基胆固醇开始合成化合物3β-甲硫基胆甾烷，如下：

在室温将下列物质依次加入500ml烧瓶中：10.62g 3-甲磺酰基胆固醇(22.9mmol)、50ml二氯甲烷、5.0g三甲基(甲硫基)硅烷(41.6mmol)和8.0ml三氟化硼二乙醚(d＝1.15g/ml，64.8mmol)。将由此得到的混合物进行磁力搅拌3小时。

在该时段之后，通过加入100ml 2M氢氧化钠溶液来中和反应混合物。将有机相用二氯甲烷提取两次。将有机相合并，并用饱和NaCl溶液漂洗两次。将有机相经MgSO₄干燥，过滤，然后蒸发以得到固体。将粗反应产物通过硅胶柱色谱法纯化，用100％己烷洗脱。由此得到6.04g的相当于3β-甲硫基胆甾烷的白色粉末。最终反应产率为63％。

¹H-NMR(500MHz,CDCl₃):δ(ppm)5.33(s,1H),2.71–2.65(m,1H),2.30–2.26(m,2H),2.11(s,3H),2.02–0.94(m,29H),0.92–0.91(d,3H),0.87-0.85(dd,6H),0.67(s,3H).

第二个合成步骤在于，从3β-甲硫基胆甾烷开始合成化合物3β-甲基磺酰基-5,6-环氧胆甾烷，如下：

将6.30g纯度为77％的间氯过氧苯甲酸(28.1mmol)溶解于40ml二氯甲烷中，并滴加2.9g 3-甲硫基胆甾烷(6.8mmol)在20ml二氯甲烷中的溶液。将由此得到的混合物搅拌并在室温保持3小时。将由此得到的混合物用10重量％的Na₂S₂O₃水溶液洗涤两次，用饱和NaHCO₃溶液洗涤三次，并用饱和NaCl溶液洗涤一次。将有机相经无水MgSO₄干燥。对有机溶剂进行真空蒸发，得到2.10g白色粉末。将粗反应产物通过柱色谱法纯化，首先用100％己烷洗脱，然后用己烷和EtOAc的混合物洗脱。通过硅胶柱色谱法纯化所需产物，用55％/45％己烷/EtOAc洗脱。由此得到相当于3-甲硫基-5,6-环氧胆甾烷的380mg白色粉末。最终反应产率为12％。

¹H-NMR(500MHz,CDCl₃):δ(ppm)3.25–3.20(m,1H),3.02-3.01(d,1H),2.83(s,3H),2.11–2.09(m,1H),1.98–1.93(m,3H),1.87–1.79(m,3H),1.57–0.93(m,24H),0.89–0.88(d,3H),0.86-0.85(dd,6H),0.61(s,3H).

第三步是合成3β-甲基磺酰基-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷(碱性形式的DX129)，如下：

在130℃在搅拌下，将338mg(3.04mmol)碱性形式的组胺加入5ml包含350mg化合物3-甲基磺酰基-5,6-环氧胆甾烷(0.75mmol)的丁醇溶液中。将混合物保持回流搅拌，在130°℃的温度加热48小时。可以通过薄层色谱法(TLC)监测反应进程，以跟踪3-甲基磺酰基-5,6-环氧胆甾烷的转化。

冷却后，将混合物在5ml甲基叔丁基醚中稀释。将有机相用15ml饱和氯化钠洗涤三次。

将有机相经无水MgSO₄干燥，过滤，然后蒸发，得到棕色油状物。将粗反应产物通过柱色谱法纯化，首先用100％ EtOAc洗脱，然后用EtOAc/MeOH混合物洗脱。用75％/25％EtOAc/MeOH混合物纯化所需产物。得到190mg的相当于3-甲基磺酰基-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷的黄色粉末。通过柱色谱法对产物进行第二次纯化，以得到通过NMR(核磁共振)和TLC(薄层色谱法)分析测量的大于97％的纯度。

得到167.4mg白色粉末。最终反应产率为39％。

¹H-NMR(500MHz,MeOD-4d):δ(ppm)7.63(s,1H),6.89(s,1H),3.49–3.40(m,1H),3.04–3.02(m,1H),2.89(s,3H),2.81–2.78(m,3H),2.50(s,1H),2.44–2.40(t,1H),2.02–2.01(m,1H),1.94–1.92(m,1H),1.88–1.83(m,1H),1.76–1.00(m,30H),0.90–0.89(d,3H),0.85-0.84(d,6H),0.66(s,3H).

实施例20：化合物3β-甲基磺酰基-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷的二乳酸盐(二乳酸形式的DX129)的制备

在搅拌下，将51.6mg乳酸(1.34mmol)加入165.0mg 3β-甲基磺酰基-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷在5ml无水乙醇中的溶液中。在室温继续搅拌3小时。真空蒸发有机溶剂，得到216.6mg 3β-甲基磺酰基-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷二乳酸盐的白色粉末。

¹H-NMR(500MHz,MeOD-4d):δ(ppm)7.77(s,1H),6.98(s,1H),3.52–3.47(m,1H),3.45-3.41(m,1H),3.18-3.14(m,1H),2.96–2.94(t,2H),2.89–2.87(m,4H),2.59-2.55(t,1H),2.02–2.00(m,1H),1.97–1.95(m,1H),1.86–1.80(m,2H),1.75–1.65(m,5H)1.57–0.95(m,29H),0.90–0.89(d,3H),0.84-0.82(dd,6H),0.72(s,3H).

实施例21：DX103的药代动力学研究

以下研究是在3天内在血浆中对各种分子进行的LC/MS测定(最终为11个测量点)。这些图表一直与作为参考的DX101进行比较而呈现。

方案

在0分钟(未注射)、5分钟、10分钟、15分钟、30分钟、1小时、4小时、8小时、24小时、48小时、72小时进行血浆取样(11个点)

与DX101相比，DX103的药代动力学特征如图4中所示。结果如下：

	DX101	DX103
			曲线下面积	143297	105351
最大浓度(nM)	140	135
			C_最大时间(分钟)	480	240

结论：DX103的特征显示，在体内的吸收速度更快，生物利用度略低于DX101。

实施例22：DX105的药代动力学研究

方案

与DX101相比，DX105的药代动力学特征在图5中给出。结果如下：

	DX101	DX105
			曲线下面积	143297	145590
最大浓度(nM)	140	197
			C_最大时间(分钟)	480	240

DX105显示出生物利用度与DX101的生物利用度相当(甚至略高于DX101的生物利用度)。另一方面，它显示出更快的吸收和更高的最大浓度，这使得可以设想良好的体内潜力。

实施例23：DX111的药代动力学研究

	第1组	第2组
			化合物的施用	DX101	DX111
剂量	50mg/kg	50mg/kg
			应用途径	口服	口服
动物	大鼠	大鼠
			组大小	3	3
样品	血浆	血浆
			测定	DX101	DX111和DX101

与DX101相比，DX111的药代动力学特征在图6中给出。结果如下：

	DX101	DX111
			曲线下面积	143297	368921
最大浓度(nM)	140	515
			C_最大时间(分钟)	480	240

这项口服药代动力学研究表明，DX111的吸收是DX101的三倍。此外，DX111具有更高的最大浓度和更快的吸收。

实施例24：DX123的药代动力学研究

方案

	第1组	第2组
			化合物的施用	DX101	DX123
剂量	50mg/kg	50mg/kg
			应用途径	口服	口服
动物	大鼠	大鼠
			组大小	3	3
样品	血浆	血浆
			测定	DX101	DX123和DX101

与DX101相比，DX123的药代动力学特征在图8中给出。结果如下：

该首次口服药代动力学分析显示，与DX101相比，DX123具有两倍高的生物利用度。这些结果使得可以设想DX123具有良好的体内潜力。

实施例25：根据本发明的DX101类似物对4T1细胞的细胞毒性研究

对表征为三阴性(HER2-、ER-、PR-)的鼠4T1乳腺肿瘤细胞进行细胞存活率测试。

对于该实验，制备了细胞培养基。培养基由包含4.5g/L葡萄糖和L-谷氨酰胺的Dulbecco改良Eagle培养基(DMEM，由Westburg以LO BE12-604F出售)组成，其中添加有10％胎牛血清(FCS)和50U/ml青霉素/链霉素。将4T1细胞引入该培养基中。

以2000个4T1细胞/孔接种96孔板。在正常条件(即在37℃在5％ O₂的情况下在培养箱中)下培养72小时(h)后，用100nM、1μM、2.5μM和10μM的DX101、DX103、DX111、DX123、DX125、DX127和DX129处理4T1细胞48小时。也使用前述方案在不使用分子DX101、DX103、DX111、DX123、DX125、DX127或DX129进行处理的情况下并行进行对照条件(CTL)。

通过三种不同的方法测量细胞存活率。对于第一种方法，在48小时时进行MTT标记。该测试基于四唑鎓盐MTT(3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑鎓溴化物)的使用。四唑鎓在活性的活细胞中被线粒体琥珀酸脱氢酶还原为甲赞，甲赞是一种紫色的沉淀物。形成的沉淀物的量与活细胞的量成比例，而且也与每个细胞的代谢活性成比例。因此，通过光谱法简单地确定540nm处的光密度使得可以确定活细胞和代谢活性细胞的相对量。48小时后，吸取培养基，将细胞用MTT(在培养基中为0.5mg/ml)温育约3小时。吸取MTT溶液，并将紫色晶体溶解于二甲基亚砜(DMSO)中。在550nm处测量OD(光密度)。然后在每个孔中确定相对于CTL的存活率，并使用非线性回归曲线(log(抑制剂)相对于响应)用Prism软件确定每个分子的IC50(50％细胞保持存活的浓度)。

对于第二种方法，通过使用非放射性细胞毒性测定试剂盒(Promega)测定细胞上清液中的酶LDH(乳酸脱氢酶)的活性来确定存活率百分比。LDH是一种在死细胞的上清液中释放的酶。上清液中LDH活性越高，细胞死亡率越大。在该酶测定中，释放的LDH将紫色四唑鎓盐转化为红色甲赞，在490nm处吸收。红色的强度与死亡细胞的数量成正比。处理48小时后，将上清液转移到新的96孔板中，并在室温在底物混合物的存在下温育30分钟。用停止溶液试剂停止反应，并在490nM处确定吸光度。这里使用100％最大LDH活性对照(由在即将加入底物混合物之前，在37℃在溶胞溶液的存在下温育45分钟的未经处理的细胞制成)来确定细胞死亡的百分比，然后从该百分比推断每个孔中的细胞存活率。然后，如前述段落所说明的，确定IC₅₀。

对于第三种方法，使用CellTox Green细胞毒性测定试剂盒(Promega)确定存活率百分比。该测定通过膜完整性的变化来测量细胞死亡。该测定使用花青探针，当细胞存活时，花青探针不会穿透细胞，但花青探针会与死细胞的DNA结合，死细胞的DNA对探针是可渗透的，使得DNA发荧光。因此，孔中的荧光度越高，细胞死亡率就越大。处理48小时后，将细胞在室温在Celltox Green试剂存在下温育最少15分钟，并在λ_发射485nm/λ_激发590nm处读取荧光度。使用100％细胞死亡对照(由在即将加入Celltox Green试剂之前，在37℃在溶胞溶液的存在下温育30分钟的未经处理的细胞制成)来确定细胞死亡的百分比，然后根据该百分比推断每个孔中的细胞存活率。然后，如上先前所说明的来确定IC₅₀。

这些测试的IC₅₀结果如表1a、1b和1c中所呈现。在这些表中：

-a通过将化合物的LogIC₅₀与DX101的LogIC₅₀进行比较，并通过min n＝3和单向方差分析检验和随后的Dunn后检验来计算显著性水平

-n^b表示对于每个条件在4至10次重复的情况下独立测试的数量。

表1a：

/>

表1b：

/>

表1c：

在表1a、1b和1c中说明了，对于DX111，其IC₅₀显著低于DX101的IC₅₀(高达2.5倍)，表明细胞毒性活性高于DX101的细胞毒性活性。此外，DX123的活性有高于DX101的活性的趋势，并且DX125、DX127和DX129的活性低于DX10的活性1。

实施例26：根据本发明的DX101类似物对BT-474细胞的细胞毒性研究

还对BT-474人乳腺肿瘤细胞(特征为三阳性HER2+、ER+、PR+)进行了细胞存活率测试。使BT-474细胞处于与先前实施例相同的细胞培养基中，并以70000个细胞/孔接种在24孔板中，以使用台盼蓝进行细胞存活率确定，或以13000个细胞/孔接种在96孔板中以使用MTT或LDH进行细胞存活率确定。在正常条件(即在37℃在5％ O₂的情况下在培养箱中)下培养96小时后，将BT-474细胞用100nM、1μM、2.5μM和10μM的DX101、DX103、DX105、DX111、DX123和DX127处理48小时。也使用先前描述的方案在不用DX101、DX103、DX105、DX111、DX123和DX127进行处理的情况下进行对照。

在37℃进行10分钟胰蛋白酶消化后，还通过在使用Biorad TC20机(TC20^TM自动细胞计数器)进行自动计数的情况下通过台盼蓝测试对细胞存活进行定量。台盼蓝测试基于细胞膜的完整性，细胞膜在死细胞中被破坏。台盼蓝将死细胞染成蓝色。Biorad TC20细胞计数器计算蓝色和非蓝色细胞的比例，并报告细胞的百分比。然后确定每个孔中相对于未处理细胞的存活率百分比，并如前述实施例中所说明的确定IC₅₀。结果呈现在表2中。此外，如前述实施例中所述进行的，使用MTT和LDH测定来确定BT-474细胞的存活率百分比。

结果呈现在表2a、2b和2c中。在这些表中：

-a通过将化合物的LogIC₅₀与DX101的LogIC₅₀进行比较，并通过min n＝3和单向方差分析检验和随后的Dunn后检验来计算显著性水平(除了在p值通过t检验计算的情况下的LDH检验之外)

-n^b表示对于每个条件在3至10次重复的情况下独立测试的数量。

表2a：

表2b：

表2c：

表2a、2b和2c中说明，分子DX103、DX105、DX111和DX127的活性与DX101的活性相似，并且在这一行业中，DX123的活性往往优于DX101的活性。因此，所有这些分子都被设想为工业发展的良好候选者，因为它们具有与DX101的生物数据相似或更优异的生物数据。

实施例27：类似物化合物DX111对体内肿瘤生长的作用

经伦理委员会批准后，所有动物程序均按照我们的机构指南进行。如先前所述培养4T1细胞，在胰蛋白酶中解离，用冷PBS洗涤两次，并重悬于150万/ml PBS中。通过将100μL中的15万个细胞皮下移植到雌性Balb/c小鼠(9周龄，1月)的翼侧获得4T1肿瘤。当肿瘤达到50-100mm³的体积时，用40mg/kg DX101或40mg/kg DX111或对照媒介物(水)给小鼠灌胃。每天进行处理，直到实验结束(肿瘤体积>1000mm³)。每天使用卡尺确定肿瘤体积，并使用下式计算：1/2×(长度*宽度2)。使用下式确定肿瘤生长抑制的百分比：100×(1-(第7天的肿瘤体积/第0天的肿瘤体积)_DX111)/(1-(第7天的肿瘤体积/第0天的肿瘤体积)_媒介物)。

Kaplan-Meier方法用于比较动物存活率。

图7A中说明，DX111在肿瘤生长抑制方面表现出优于DX101的作用(**p<0.01，单向方差分析检验和Tukey后检验)。进一步确定了，经DX111处理的动物在7天时对肿瘤生长的抑制为67％，而经DX101处理的动物在7天时对肿瘤生长的抑制为48％。

此外，如图7B中所示，对动物存活率的分析表明，经DX111处理的动物的中位存活率更好(对数秩Mantel-Cox检验，*p<0.05和ns，不显著；对于趋势的对数秩检验，**p<0.01)。此外，观察到，处理15天后，经DX111处理的动物存活率为25％，而经DX101处理的动物的存活率为0％。用DX101(40mg/kg)处理后的中位生存期为9天，而用DX111(40mmg/kg)治疗后的中位生存期为10天。

总之，DX111在体内对肿瘤生长抑制的作用要大得多，并强烈影响动物的存活率。

实施例28：用于确定在大鼠中口服DX111的药代动力学和生物利用度的研究

方案：对下述四组进行研究。

在0分钟(未注射)、15分钟、30分钟、1小时、4小时、8小时、24小时、48小时、72小时进行血浆取样

结果在表3中给出。

表3

化合物	DX101	DX111		DX101	DX111
						剂量po(mg/kg)	50	50	剂量iv(mg/kg)	5	5
C_最大[ng/ml]	77	309	C_最大[ng/ml]	3308	2970
						T_最大[h]	4	4
ASC(t0-t最后)	1546	3228	ASC(t0-t最后)	6205	3516
									Vd[L/kg]	29	43
			Vss[L/kg]	19	12
						T1/2第二阶段[h]	39	24	T1/2第二阶段[h]	28	21
清除率[ml/min/kg]	412	240	清除率[ml/min/kg]	11	25
						F％	3％	10％

令人惊讶的是，结果显示，通过降低消除半衰期，类似化合物DX111的生物利用度是参考化合物DX101的生物利用度的三倍高。在DX111的情况下获得的最大血浆浓度是DX101的最大血浆浓度的四倍，并且清除率减半。

尽管已经结合多个特定实施方式描述了本发明，但很明显，本发明并不以任何方式限制于此，并且本发明涵盖所描述的手段的所有技术等同方案及其组合，如果它们落在本发明的上下文内的话。

动词“含有”、“包括”或“包含”及其缀合形式的使用并不排除权利要求中所述的那些要素或步骤以外的要素或步骤的存在。

Claims

1.一种用作缩小哺乳动物癌性肿瘤的药物的用途的式(I)的化合物：

或此类化合物的药学上可接受的盐，其中：

R₁选自：F、N₃、OC_nH_2n+1、NR₂R₃、SR₂、SO₂R₂，其中n≤8，

2.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述式(I)的化合物是O-氨基类似物，其中基团R₁＝NR₂R₃，其中R₂是H或COC_nH_2n+1且R₃＝H。

3.根据权利要求1或2所述的用于其用途的化合物，其中所述式(I)的化合物是5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]-3β-乙酰胺。

4.根据权利要求1或2所述的用于其用途的化合物，其中所述式(I)的化合物是5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]-3β-胺。

5.根据权利要求1或2所述的用于其用途的化合物，其中所述式(I)的化合物是5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]-3β-叠氮化物。

6.根据权利要求1所述的用于其用途的化合物，其中所述式(I)的化合物是3β-氟-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷。

7.根据权利要求1所述的用于其用途的化合物，其中所述式(I)的化合物是O-烷基类似物并且选自：

-3β-甲氧基-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷

-3β-乙氧基-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷

-3β-辛氧基-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]胆甾烷。

8.根据权利要求1所述的用于其用途的化合物，其中所述式(I)的化合物是3β-甲基磺酰基-5α-羟基-6β-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基氨基]-胆甾烷。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的用于其用途的化合物，其中所述癌性肿瘤是化学敏感性癌症。

10.根据权利要求1至8中任一项所述的供使用的化合物，其中所述癌性肿瘤是化学抗性癌症。

11.根据权利要求10所述的用于其用途的化合物，其中所述化学抗性癌症是血液学癌症或血癌，例如白血病，特别地是急性髓细胞性白血病或急性淋巴细胞性白血病；淋巴瘤，特别地是非霍奇金淋巴瘤和多发性骨髓瘤。

12.根据权利要求10和11中任一项所述的用于其用途的化合物，其中所述癌症对道诺霉素、阿糖胞苷、氟尿嘧啶、顺铂、全反式维甲酸、三氧化二砷、硼替佐米或其组合具有化学抗性。

13.一种用作缩小哺乳动物癌性肿瘤的药物组合物，所述组合物在药学上可接受的媒介物中包含至少一种根据权利要求1-8中任一项所述的化合物。

14.根据权利要求13所述的用于其用途的药物组合物，还包含至少一种另外的治疗剂。

15.根据权利要求14所述的用于其用途的药物组合物，其中所述另外的治疗剂是抗肿瘤剂。

16.根据权利要求13所述的用于其用途的药物组合物，用于其治疗患有肿瘤的患者的癌症的用途，所述肿瘤对未与根据权利要求1至8中任一项所述的化合物联合施用时的所述抗肿瘤剂具有化学抗性。

17.根据权利要求13所述的药物组合物，用于其治疗患有对所述抗肿瘤剂有化学敏感性的肿瘤的患者的癌症的用途，其中与根据权利要求1-8中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐联合施用给所述患者的所述抗肿瘤剂的剂量小于未与根据权利要求1-8中任一项所述的化合物联合施用时的所述抗肿瘤剂的剂量。

18.根据权利要求13-17中任一项所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物呈适合通过任何途径施用，优选地通过静脉内、皮下、腹膜内或口服途径施用的形式。