CN118119611A - 用于降解dot1l的小分子及其用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及用于治疗由异常类端粒沉默干扰体1(DOT1L)活性介导的疾病或病症的双功能化合物、组合物和方法。

Description

用于降解DOT1L的小分子及其用途

相关申请

本申请根据35 U.S.C.§119(e)要求2021年10月18日提交的美国临时申请序号63/256,899的优先权，其被通过引用整体并入本文。

政府许可权

本发明是在美国国立卫生研究院授予的项目号为R01 CA176745的政府资助下完成的。政府对本发明享有一定的权利。

发明背景

E3泛素连接酶是与E2泛素结合酶组合起来促进泛素与靶蛋白上的赖氨酸通过异肽键(例如，蛋白质主链上不存在的酰胺键)结合的蛋白质。靶蛋白的泛素化导致靶蛋白被蛋白酶体降解。

仍然需要鉴定有效促进被发现降解与某些病理状态(包括增殖性疾病和癌症)相关的靶蛋白(例如，类端粒沉默干扰体1(DOT1L))的化合物。已发现DOT1L与某些病理状态(包括增殖性疾病和癌症)有关。特别地，能够利用参与蛋白质稳态的细胞机制(例如，泛素化和蛋白酶体降解)来靶向降解某些蛋白质的化合物可用作治疗剂。还需要靶向两种靶蛋白，DOT1L和E3泛素连接酶的化合物，从而诱导蛋白酶体降解DOT1L。

发明概述

本发明的第一方面涉及双功能化合物或其药学上可接受的盐或立体异构体，其包含结合类端粒沉默干扰体1(DOT1L)的部分和降解子，二者通过包含无中断的C₄至C₂₀亚烷基二价链或包含2至8个PEG单元的聚乙二醇(PEG)链的接头彼此共价连接，其中该化合物具有由式(I)表示的结构：

式中：

R₁表示H、卤素、CH₃、CH₂F、CF₂H、CF₃、CN或NH₂；

R₂表示且降解子表示结合cereblon(CRBN)的配体。

本发明的另一方面涉及药物组合物，其包括治疗有效量的式(I)双功能化合物或其药学上可接受的盐或立体异构体，以及药学上可接受的载体

在本发明的另一方面，提供了制备双功能化合物的方法。

本发明的又一方面涉及治疗由异常DOT1L活性表征或介导的疾病或病症的方法，其包括向需要其的受试者施用治疗有效量的式(I)双功能化合物或其药学上可接受的盐或立体异构体。

在一些实施方案中，疾病或病症是癌症。在一些实施方案中，癌症是血液系统癌症。

在一些实施方案中，血液系统癌症为多发性骨髓瘤、淋巴瘤或白血病。

在一些实施方案中，白血病是急性髓细胞白血病、混合谱系白血病(MLL)重排的急性髓细胞白血病、具有核仁磷酸蛋白1(NPM1)突变的急性髓细胞白血病、具有DNA甲基转移酶3A(DNMT3A)突变的急性髓细胞白血病或急性髓系嗜酸性粒细胞白血病。

本发明的双功能化合物可作为敲除PRMT5的一套新的化学工具，并可为PRMT5介导的疾病和病症诸如癌症(例如，多发性骨髓瘤、淋巴瘤和白血病)提供有效的治疗。

附图简要说明

图1是用本发明的双功能化合物2、3和6以及EPZ5676和泊马度胺(Pom)进行的细胞干扰因子(cellular disruptor)，类端粒沉默干扰体1(DOT1L)荧光偏振(FP)置换测定的曲线图。

图2是用本发明的双功能化合物2、3和6以及EPZ5676和泊马度胺(Pom)进行的细胞CRBN二聚化测定的曲线图。

图3A-图3E是用本发明的双功能化合物2(图3A)、3(图3B)、4(图3C)、5(图3D)和6(图3E)在EOL1细胞中进行细胞增殖测定的一组曲线图。

图4A-图4B是显示用本发明的双功能化合物2在EOL1细胞中进行DOT1L降解的蛋白质印迹(图4A)和细胞增殖测定的曲线图(图4B)。

图5A-图5B是显示用本发明的双功能化合物2在MV411细胞中进行DOT1L降解的蛋白质印迹(图5A)和细胞增殖测定的曲线图(图5B)。

图6A-图6B是显示用本发明的双功能化合物3在EOL1细胞中进行DOT1L降解的蛋白质印迹(图6A)和细胞增殖测定的曲线图(图6B)。

图7是用双功能化合物4在EOL1细胞中进行细胞增殖测定的曲线图。

图8A-图8B是显示用本发明的双功能化合物5在EOL1细胞中进行DOT1L降解的蛋白质印迹(图8A)和进行细胞增殖测定的曲线图(图8B)。

图9A-图9B是显示用本发明的双功能化合物6在EOL1细胞中进行DOT1L降解的蛋白质印迹(图9A)和细胞增殖测定的曲线图(图9B)。

图10A-图10B是显示用本发明的双功能化合物6在MV411细胞中进行DOT1L降解的蛋白质印迹(图10A)和细胞增殖测定的曲线图(图10B)。

图11是用本发明的双功能化合物6在SEMK2细胞中进行细胞增殖测定的曲线图。

图12是用本发明的双功能化合物6在THP1细胞中进行细胞增殖测定的曲线图。

详述

除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本主题所属领域的技术人员通常理解的含义相同的含义。除非有相反的说明，否则如说明书和所附权利要求书中所使用的以下术语具有所示的含义，以便于理解本发明。

如本说明书和所附权利要求中使用的，单数形式“一个/种(a，an)”和所述“(the)”包括复数指代，除非上下文另有明确规定。因此，例如，提及“一种组合物”包括两种或更多种此类组合物的混合物，提及“一种抑制剂”包括两种或更多种此类抑制剂的混合物，等等。

除非另有说明，术语“约”是指由术语“约”修饰的特定值的10％以内(例如，5％、2％或1％以内)。

过渡术语“comprising(包含)”，与“including(包括)”、“containing(含有)”或“由……表征”同义，是包含性的或开放式的，并且不排除其他未引用的要素或方法步骤。相比之下，过渡短语“由……组成”排除权利要求中未指定的任何要素、步骤或成分。过渡短语“主要由……组成”将权利要求的范围限制为本发明的指定材料或步骤“以及实质上不影响基本和新特征的材料或步骤”。

关于本发明的化合物，在本文使用下列术语来进一步描述它们的程度上，以下定义适用。

如本文所用，术语“烷基”是指饱和的直链或支链单价烃基。在一个实施方案中，烷基基团是C₁-C₁₈基团。在其他实施方案中，烷基基团是C₀-C₆、C₀-C₅、C₀-C₃、C₁-C₁₂、C₁-C₈、C₁-C₆、C₁-C₅、C₁-C₄或C₁-C₃基团(其中C₀烷基是指键)。烷基的实例包括甲基、乙基、1-丙基、2-丙基、异丙基、1-丁基、2-甲基-1-丙基、2-丁基、2-甲基-2-丙基、1-戊基、正戊基、2-戊基、3-戊基、2-甲基-2-丁基、3-甲基-2-丁基、3-甲基-1-丁基、2-甲基-1-丁基、1-己基、2-己基、3-己基、2-甲基-2-戊基、3-甲基-2-戊基、4-甲基-2-戊基、3-甲基-3-戊基、2-甲基-3-戊基、2,3-二甲基-2-丁基、3,3-二甲基-2-丁基、庚基、辛基、壬基、癸基、十一烷基和十二烷基。在一些实施方案中，烷基是C₁-C₃烷基。

如本文所用，术语“亚烷基”是指将分子的其余部分连接到一个基团的直链或支链二价烃链，其仅由碳和氢组成，不含不饱和键并且具有1个至12个碳原子，例如亚甲基、亚乙基、亚丙基、亚丁基等。亚烷基链可以通过单个键连接到分子的其余部分，并通过单个键连接到自由基。在一些实施方案中，亚烷基含有1个至8个碳原子(C₁-C₈亚烷基)。在其他实施方案中，亚烷基含有1个至5个碳原子(C₁-C₅亚烷基)。在其他实施方案中，亚烷基含有1个至4个碳原子(C₁-C₄亚烷基)。在其他实施方案中，亚烷基含有1个至3个碳原子(C₁-C₃亚烷基)。在其他实施方案中，亚烷基含有1个至2个碳原子(C₁-C₂亚烷基)。在其他实施方案中，亚烷基含有1个碳原子(C₁亚烷基)。

如本文所用，术语“烯基”是指具有至少一个碳-碳双键的直链或支链一价烃基。烯基包括具有“顺式”和“反式”方向，或者可替换地“E”和“Z”方向的基团。在一个实例中，烯基基团是C₂-C₁₈基团。在其他实施方案中，烯基基团是C₂-C₁₂、C₂-C₁₀、C₂-C₈、C₂-C₆或C₂-C₃基团。实例包括乙烯基(ethenyl)或乙烯基(vinyl)、丙-1-烯基、丙-2-烯基、2-甲基丙-1-烯基、丁-1-烯基、丁-2-烯基、丁-3-烯基、丁-1,3-二烯基、2-甲基丁-1,3-二烯基、己-1-烯基、己-2-烯基、己-3-烯基、己-4-烯基和己-1,3-二烯基。

如本文所使用的术语“烷氧基(alkoxyl)”或“烷氧基(alkoxy)”是指如上所述的烷基，其上连接有氧基团。代表性的烷氧基包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、叔丁氧基等。“醚”是由氧共价连接的两个烃基。因此，使烷基成为醚的烷基的取代基是或类似于烷氧基，例如可以用-O-烷基、-O-烯基和-O-炔基中的一种表示。

如本文所用，术语“亚烷氧基”是指通式(-O-C_nH_2n-)的饱和单价脂肪族基团，其中n表示整数(例如，1、2、3、4、5、6或7)，并且包括直链和支链基团。亚烷氧基链可以通过单个键连接到分子的其余部分，并通过单个键连接到基团。在一些实施方案中，亚烷氧基含有1个至3个碳原子(-O-C₁-C₃亚烷氧基)。在其他实施方案中，亚烷氧基含有1个至5个碳原子(-O-C₁-C₅亚烷氧基)。

如本文所用，术语“环基团”广义上是指单独使用或作为较大部分的一部分，含有饱和、部分饱和或芳环体系(例如，碳环基(环烷基、环烯基)、杂环基(杂环烷基、杂环烯基)、芳基和杂芳基)的任何基团。环基团可以具有一个或更多个(例如，稠合的)环系统。因此，例如，环基团可以含有一个或更多个碳环基、杂环基、芳基或杂芳基。

如本文所用，术语“碳环”(也称为“碳环基”)是指单独使用或作为较大部分的一部分，含有单独或作为较大部分的一部分的饱和的、部分不饱和的或芳族体系的具有3个至20个碳原子的基团(例如，烷碳环(alkcarbocyclic))。术语碳环基包括单环、双环、三环、稠合环、桥接环和螺环体系及其组合。在一个实施方案中，碳环基包括3个至15个碳原子(C₃-C₁₅)。在一个实施方案中，碳环基包括3个至12个碳原子(C₃-C₁₂)。在另一个实施方案中，碳环基包括C₃-C₈、C₃-C₁₀或C₅-C₁₀。在另一个实施方案中，作为单环的碳环基包括C₃-C₈、C₃-C₆或C₅-C₆。在一些实施方案中，作为二环的碳环基包括C₇-C₁₂。在另一个实施方案中，作为螺环体系的碳环基包括C₅-C₁₂。单环碳环基的代表性实例包括环丙基、环丁基、环戊基、1-环戊-1-烯基、1-环戊-2-烯基、1-环戊-3-烯基、环己基、全氘环己基、1-环己-1-烯基、1-环己-2-烯基、1-环己-3-烯基、环己二烯基、环庚基、环辛基、环壬基、环癸基、环十一烷基、苯基和环十二烷基；具有7个至12个环原子的双环碳环基包括[4,3]、[4,4]、[4,5]、[5,5]、[5,6]或[6,6]环体系，例如双环[2.2.1]庚烷、双环[2.2.2]辛烷、萘和双环[3.2.2]壬烷。螺碳环基的代表性实例包括螺[2.2]戊烷、螺[2.3]己烷、螺[2.4]庚烷、螺[2.5]辛烷和螺[4.5]癸烷。术语碳环基包括如本文所定义的芳基环体系。术语碳环基还包括环烷基环(例如，饱和或部分不饱和的单碳环、双碳环或螺碳环)。术语碳环基团还包括与一个或更多个(例如1、2或3个)不同的环基团(例如芳环或杂环)稠合的碳环，其中自由基或连接点在碳环上。

因此，术语碳环也包括碳环烷基，如本文所用，其是指式-R^c-碳环基的基团，其中R^c是亚烷基链。术语碳环也包括碳环烷氧基，如本文所用，其指通过式--O--R^c-碳环基的氧原子键合的基团，其中R^c是亚烷基链。

如本文所用，单独使用或作为较大部分的一部分使用的术语“芳基”(例如，“芳烷基”，其中烷基上的末端碳原子是连接点，例如苄基，“芳烷氧基”，其中氧原子是连接点，或“芳氧基烷基”，其中连接点在芳基上)是指包括单环、双环或三环碳环体系的基团，其包括稠合环，其中体系中至少一个环是芳香族的。在一些实施方案中，芳烷氧基是苯甲酰氧基。术语“芳基”可以与术语“芳环”互换使用。在一个实施方案中，芳基包括具有6个至18个碳原子的基团。在另一个实施方案中，芳基包括具有6个至10个碳原子的基团。芳基的实例包括苯基、萘基、蒽基、联苯基、菲基、naphthacenyl、1,2,3,4-四氢萘基、1H-茚基、2,3-二氢-1H-茚基、萘啶基(naphthyridinyl)等，它们可被本文所述的一个或更多个取代基取代或独立取代。一种特殊的芳基是苯基。在一些实施方案中，芳基包括稠合到一个或更多个(例如，1、2或3个)不同环状基团(例如，碳环或杂环)的芳环，其中自由基或连接点在芳环上。任何能够具有不同位置双键的芳基的结构都被考虑以覆盖任一个和所有这样的共振结构。

因此，术语芳基包括芳烷基(例如，苄基)，如上所述，芳烷基是指式-R^c-芳基的基团，其中R^c是亚烷基链，例如亚甲基或亚乙基。在一些实施方案中，芳烷基是任选地取代的苄基。术语芳基还包括芳烷氧基，如本文所用，其是指通过式-O-R^c-芳基的氧原子键合的基团，其中R^c是亚烷基链，例如亚甲基或亚乙基。

如本文所用，术语“杂环基”是指单独使用或作为较大部分的一部分的“碳环基”，含有饱和、部分不饱和或芳环体系，其中一个或更多个(例如1、2、3或4个)碳原子被杂原子(例如O、N、N(O)、S、S(O)或S(O)₂)取代。术语杂环基包括单环、双环、三环、稠合环、桥接环和螺环体系及其组合。在一些实施方案中，杂环基是指3元至15元杂环体系。在一些实施方案中，杂环基是指3元至12元杂环体系。在一些实施方案中，杂环基是指饱和环体系，例如3元至12元饱和杂环体系。在一些实施方案中，杂环基是指杂芳环体系，例如5元至14元杂芳环体系。术语杂环基还包括C₃-C₈杂环烷基，其是含有3个至8个碳和一个或更多个(1、2、3或4)杂原子的饱和或部分不饱和的单环、双环或螺环体系。

在一些实施方案中，杂环基包括3个至12个环原子，并且包括单环、双环、三环和螺环体系，其中环原子是碳，并且1个至5个环原子是杂原子，例如氮、硫和氧。在一些实施方案中，杂环基包括具有一个或更多个选自氮、硫或氧的杂原子的3元至7元单环。在一些实施方案中，杂环基包括具有一个或更多个选自氮、硫和氧的杂原子的4元至6元单环。在一些实施方案中，杂环基包括3元单环。在一些实施方案中，杂环基包括4元单环。在一些实施方案中，杂环基包括5元至6元单环。在一些实施方案中，杂环基包括0个至3个双键。在任一前述实施方案中，杂环基包括1个、2个、3个或4个杂原子。任何氮或硫杂原子可任选地被氧化(例如，NO、SO、SO₂)，且任何氮杂原子可任选地被季铵化(例如，[NR₄]⁺Cl^-、[NR₄]⁺OH^-)。杂环基的代表性实例包括环氧乙烷基、吖丙啶基、thiiranyl、氮杂环丁烷基、氧杂环丁基、硫杂环丁基、1,2-二硫杂环丁烷基、1,3-二硫杂环丁基、吡咯烷基、二氢-1H-吡咯基、二氢呋喃基、四氢吡喃基、二氢噻吩基、四氢噻吩基、咪唑烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、1,1-二氧代硫代吗啉基、二氢吡喃基、四氢吡喃基、六氢硫代吡喃基、六氢嘧啶基、噁嗪烷基、噻嗪基、噻噁烷基、高哌嗪基、高哌啶基、氮杂环庚基、氧杂环庚基、硫杂环庚基、氧氮杂卓基(oxazepinyl)、氧杂氮杂环庚基(oxazepanyl)、二氮杂环庚基、1,4-二氮杂环庚烷基、二氮杂卓基、硫氮杂卓基、硫氮杂环庚基、四氢硫吡喃基、噁唑烷基、噻唑烷基、异噻唑烷基、1,1-二氧代异噻唑烷二壬基、噁唑烷二壬基、咪唑烷二壬基、4,5,6,7-四氢[2H]吲唑基、四氢苯并咪唑基、4,5,6,7-四氢苯并[d]咪唑基、1,6-二氢咪唑并[4,5-D]吡咯并[2,3-b]吡啶基、噻嗪基、苯硫基、噁嗪基、噻二嗪基、噁二嗪基、二噻嗪基、二恶嗪基、氧杂噻嗪基、硫杂三嗪基(thiatriazinyl)、氧杂三嗪基、二噻二嗪基、咪唑啉基、二氢嘧啶基、四氢嘧啶基、1-吡咯啉基、2-吡咯啉基、3-吡咯啉基、二氢吲哚基、硫杂吡喃基、2H-吡喃基、4H-吡喃基、二恶烷基、1,3-二氧戊环基、吡唑啉基、吡唑烷基、二噻烷基、二硫代戊基、嘧啶壬基、嘧啶二酮基、嘧啶-2,4-二酮基、哌嗪壬基、哌嗪二壬基、吡唑烷基咪唑啉基、3-氮杂双环[3.1.0]己烷基、3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷基、6-氮杂双环[3.1.1]庚烷基、3-氮杂双环[3.1.1]庚烷基、3-氮杂双环[4.1.0]庚烷基、氮杂双环[2.2.2]己基、2-氮杂双环[3.2.1]辛烷基、8-氮杂双环[3.2.1]辛烷基、2-氮杂双环[2.2.2]辛烷基、8-氮杂双环[2.2.2]辛烷基、7-氧杂双环[2.2.1]庚烷、氮杂螺[3.5]壬基、氮杂螺[2.5]辛烷基、氮杂螺[4.5]癸烷基、1-氮杂螺[4.5]癸-2-酮基、氮杂螺[5.5]十一烷基、四氢吲哚基、八氢吲哚基、四氢异吲哚基、四氢吲唑基、1,1-二氧代六氢硫代吡喃基。含有硫或氧原子及1个至3个氮原子的5元杂环基的实例为噻唑基(包括噻唑-2-基和噻唑-2-基N-氧化物)、噻二唑基(包括1,3,4-噻二唑-5-基和1,2,4-噻二唑-5-基)、恶唑基(例如恶唑-2-基)和恶二唑基(例如1,3,4-恶二唑-5-基和1,2,4-恶二唑-5-基)。含有2个至4个氮原子的实例5元环杂环基包括咪唑基，例如咪唑-2-基；三唑基，例如1,3,4-三唑-5-基；1,2,3-三唑-5-基、1,2,4-三唑-5基和四唑基，例如1H-四唑-5-基。苯并稠合5元杂环基的代表性实例是苯并恶唑-2-基、苯并噻唑-2-基和苯并咪唑-2-基。实例6元杂环基含有1个至3个氮原子和任选的硫或氧原子，例如吡啶基，如吡啶-2-基、吡啶-3-基和吡啶-4-基；嘧啶基，例如嘧啶-2-基和嘧啶-4-基；三嗪基，如1,3,4-三嗪-2-基和1,3,5-三嗪-4-基；哒嗪基，特别是哒嗪-3-基和吡嗪基。吡啶N-氧化物和哒嗪N-氧化物以及吡啶基、嘧啶-2-基、嘧啶-4-基、哒嗪基和1,3,4-三嗪-2-基是杂环基的其他实例。在一些实施方案中，杂环基包括稠合到一个或更多个(例如，1、2或3个)不同环状基团(例如，碳环或杂环)的杂环，其中连接基团或连接点位于杂环上，并且在一些实施方案中，其中连接点是杂环中包含的杂原子。

因此，术语杂环包括N-杂环基，如本文所用，N-杂环基指含有至少一个氮的杂环基，并且其中杂环基与分子的其余部分的连接点是通过杂环基中的氮原子。N-杂环基的代表性实例包括1-吗啉基、1-哌啶基、1-哌嗪基、1-吡咯烷基、吡唑烷基、咪唑啉基和咪唑烷基。术语杂环还包括C-杂环基，如本文所用，C-杂环基指含有至少一种杂原子的杂环基，并且其中杂环基与分子的其余部分的连接点是通过杂环基中的碳原子。C-杂环基的代表性实例包括2-吗啉基、2-或3-或4-哌啶基、2-哌嗪基和2-或3-吡咯烷基。术语杂环还包括杂环烷基，如上所公开的，杂环烷基是指式-R^c-杂环基的基团，其中R^c是亚烷基链。术语杂环还包括杂环烷氧基，如本文所用，其指通过式-O-R^c-杂环基的氧原子键合的自由基，其中R^c是亚烷基链。

如本文所用，单独使用或作为较大部分的一部分使用的术语“杂芳基”，例如，“杂芳基烷基(heteroarylalkyl)”(也称为“杂芳烷基(heteroaralkyl)”)或“杂芳基烷氧基(heteroarylalkoxy)”(也称“杂芳烷氧基(heteroaralkoxy)”)是指具有5个至14个环原子的单环、双环或三环环体系，其中至少一个环是芳香族的并且含有至少一个杂原子。在一个实施方案中，杂芳基包括5元至6元单环芳族基团，其中一个或更多个环原子为氮、硫或氧。杂芳基的代表性实例包括噻吩基、呋喃基、咪唑基、吡唑基、噻唑基、异噻唑基、噁唑基、异恶唑基、三唑基、噻二唑基、恶二唑基、四唑基、噻三唑基、恶三唑基、吡啶基、嘧啶基、咪唑吡啶基、吡嗪基、哒嗪基、三嗪基、四嗪基、四唑并[1,5-b]哒嗪基、嘌呤基、脱氮嘌呤基、苯并恶唑基、苯并呋喃基、苯并噻唑基、苯并噻二唑基、苯并三唑基、苯并咪唑基、吲哚基、1,3-噻唑-2-基、1,3,4-三唑-5-基、1,3,4-恶唑-5-基、1,2,4-恶二唑-5-基、1,3,4-噻二唑-5-基、1H-四唑-5-基、1,2,3-三唑-5-基和吡啶-2-基N-氧化物。术语“杂芳基”还包括其中杂芳基稠合到一个或更多个环状(例如，碳环基或杂环基)环的基团，其中自由基或连接点在杂芳基环上。非限制性实例包括吲哚基、吲哚嗪基、异吲哚基、苯并噻吩基、苯并苯硫基、亚甲二氧苯基、苯并呋喃基、二苯并呋喃基、吲唑基、苯并咪唑基、苯并二恶唑基、苯并噻唑基、喹啉基、异喹啉基、噌嗪基、酞嗪基、喹唑啉基、喹喔啉基、4H-喹啉基、咔唑基、吖啶基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩恶嗪基、四氢异喹啉基和吡啶并[2,3-b]-1,4-恶嗪-3(4H)-酮。杂芳基可以是单环的、双环的或三环的。在一些实施方案中，杂芳基包括稠合到一个或更多个(例如，1、2或3个)不同环状基团(例如，碳环或杂环)的杂芳基环，其中自由基或连接点位于杂芳环上，并且在一些实施方案中，其中连接点是包含在杂环中的杂原子。任何能够具有不同位置双键的杂芳基的结构都被考虑以覆盖包含任一个和所有这样的共振结构。

因此，术语杂芳基还包括N-杂芳基，其如本文所用是指如上所述的杂芳基，并且包含至少一个氮和其中N-杂芳基与分子的其余部分的连接点是通过杂芳基中的氮原子。术语杂芳基还包括C-杂芳基，其如本文所用是指如上所述的杂芳基，并且其中杂芳基与分子的其余部分的连接点是通过杂芳基中的碳原子。术语杂芳基还包括杂芳基烷基，其如上所述是指式--R^c-杂芳基的基团，其中R^c是如上所述的亚烷基链。术语杂芳基还包括杂芳烷氧基(heteroaralkoxy)(或杂芳烷氧基(heteroarylalkoxy))基团，其如本文所用是指通过式--O--R^c-杂芳基的氧原子键合的基团，其中R^c是如上所述的亚烷基。

除非另有说明，并且在未对任何特定基团进一步定义的范围内，本文所述的任何基团均可以是取代的或未取代的。如本文所用，术语“取代的”广义地指所有允许的取代基，其隐含的条件是，这种取代基符合被取代原子和取代基允许的化合价，并且取代产生稳定的化合物，即不会自发发生重排、环化、消除等变换的化合物。代表性取代基包括卤素、羟基和含有任意数目碳原子(例如1个至14个碳原子)的任何其他有机基团，并且其可包括一个或更多个(例如，1、2、3或4)杂原子，例如以线性、支链或环状结构形式聚集的氧、硫和氮。

在未以其他方式公开的任何特定基团的范围内，取代基的代表性实例因此可包括烷基、取代的烷基(例如，C₁-C₆、C₁-C₅、C₁-C₄、C₁-C₃、C₁-C₂、C₁)、烷氧基(例如，C₁-C₆、C₁-C₅、C₁-C₄、C₁-C₃、C₁-C₂、C₁)、取代的烷氧基(例如，C₁-C₆、C₁-C₅、C₁-C₄、C₁-C₃、C₁-C₂、C₁)、卤代烷基(例如CF₃)、烯基(例如C₂-C₆、C₂-C₅、C₂-C₄、C₂-C₃、C₂)、取代的烯基(例如，C₂-C₆、C₂-C₅、C₂-C₄、C₂-C₃、C₂)、炔基(例如，C₂-C₆、C₂-C₅、C₂-C₄、C₂-C₃、C₂)、取代的炔基(例如，C₂-C₆、C₂-C₅、C₂-C₄、C₂-C₃、C₂)、环状基团(例如，C₃-C₁₂、C₅-C₆)、取代的环基团(例如，C₃-C₁₂、C₅-C₆)、碳环(例如，C₃-C₁₂、C₅-C₆)、取代的碳环(例如，取代的C₃-C₁₂、C₅-C₆)、杂环(例如，3元至12元、5元至6元)、取代的杂环(例如，C₃-C₁₂、C₅-C₆)、芳基(例如苄基和苯基)、取代芳基(例如取代的苄基或苯基)、杂芳基(例如吡啶基或嘧啶基)、取代的杂芳基(例如取代的吡啶基或嘧啶基)、芳烷基(例如苄基)、取代的芳烷基(例如取代的苄基)、卤代、羟基、芳氧基(例如C₆-C₁₂、C₆)、取代的芳氧基(例如C₆-C₁₂、C₆)、硫代烷基(例如C₁-C₆)、取代的硫代烷基(例如C₁-C₆)、芳硫基(例如C₆-C₁₂、C₆)、取代的芳硫基(例如C₆-C₁₂、C₆)、氰基、羰基、取代的羰基、羧基、取代的羧基、氨基、取代的氨基、酰胺基、取代的酰胺基、硫代、取代的硫代、亚磺酰基、取代的亚磺酰基、磺酰基、取代的磺酰基、亚磺酰胺、取代的亚磺酰胺、磺酰胺、取代的磺酰胺、尿素、取代的尿素、氨基甲酸酯、取代的氨基甲酸酯、氨基酸和肽基。

术语“结合”当涉及靶向配体与靶向蛋白(在本发明中为类端粒沉默干扰体1(DOT1L))之间的相互作用时，通常是指优先(在本文中也称为“选择性”)的分子间相互作用，因为靶向配体与存在于细胞中的其他蛋白的结合明显更少并且功能上不重要。术语“选择性的”和“选择性”是指双功能化合物区分多个分子靶标的能力。

术语“结合”当涉及降解子与E3泛素连接酶之间的相互作用时，通常是指这样的分子间相互作用，其可能或可能不表现出等于或超过靶向配体和靶蛋白之间亲和力的亲和力水平，但是仍然足以实现将连接酶募集到用于被选择性降解的靶蛋白(在本公开中为DOT1L)上。

从广义上讲，双功能化合物或其药学上可接受的盐或立体异构体包含结合DOT1L的部分和降解子，其通过包含无中断的C₄至C₂₀亚烷基二价链或包含2个至8个PEG单元的聚乙二醇(PEG)链的接头彼此共价连接，其中该化合物具有由式(I)表示的结构：

其中：

R₁表示H、卤素、CH₃、CH₂F、CF₂H、CF₃、CN或NH₂；

R₂表示且降解子表示结合羟脑苷酯(CRBN)的配体。

在一些实施方案中，R₁是H或CN。

在一些实施方案中，本发明的双功能化合物可由以下任何一种结构来表示：

或其药学上可接受的盐或立体异构体。

接头

接头(“L”)提供DOT1L结合部分和降解子之间的共价连接。接头的结构可能不是关键的，只要它基本上不干扰DOT1L结合部分或降解子的活性。在一些实施方案中，接头包括亚烷基链(例如，具有2个至20个亚烷基单元)。在其他实施方案中，接头包括亚烷基链，其可以被–O–、–S–、–N(R')–、–C≡C–、–C(O)–、–C(O)O–、–OC(O)–、–OC(O)O–、–C(NOR')–、–C(O)N(R')–、–C(O)N(R')C(O)–、–C(O)N(R')C(O)N(R')–、–N(R')C(O)–、–N(R')C(O)N(R')–、–N(R')C(O)O–、–OC(O)N(R')–、–C(NR')–、–N(R')C(NR')–、–C(NR')N(R')–、–N(R')C(NR')N(R')–、–OB(Me)O–、–S(O)₂–、–OS(O)–、–S(O)O–、–S(O)–、–OS(O)₂–、–S(O)₂O–、–N(R')S(O)₂–、–S(O)₂N(R')–、–N(R')S(O)–、–S(O)N(R')–、–N(R')S(O)₂N(R')–、–N(R')S(O)N(R')–、C₃-C₁₂碳环烯、3元至12元杂环烯、5元至12元杂芳烯中的至少一种或其任意组合中断和/或终止(在一个或两个末端)，其中R'是H或C₁-C₆烷基，其中中断基团和一端或两端的终止基团可以相同或不同。

在一些实施方案中，接头可以包括C₄-C₂₀亚烷基链。

在一些实施方案中，接头可以包括终止于NH基团的C₁-C₁₂亚烷基链，其中氮也与降解子结合。

在一些实施方案中，接头包括具有1个至10个亚烷基单元的亚烷基链，其被中断和/或终止。

在一些实施方案中，亚烷基接头包括11个至15个无中断的亚烷基单元。

“碳环烯”是指二价碳环基基团，其任选被取代。

“杂环烯”是指二价杂环基基团，其可任选被取代。

“杂芳基”是指二价杂芳基基团，其可任选被取代。

可适用于本发明的亚烷基接头的代表性实例包括以下：式中n是1-12的整数(“的”表示含端点)，例如，1-12、1-11、1-10、1-9、1-8、1-7、1-6、1-5、1-4、1-3、1-2、2-10、2-9、2-8、2-7、2-6、2-5、2-4、2-3、3-10、3-9、3-8、3-7、3-6、3-5、3-4、4-10、4-9、4-8、4-7、4-6、4-5、5-10、5-9、5-8、5-7、5-6、6-10、6-9、6-7、7-10、7-9、7-8、8-10、8-9、9-10以及1、2、3、4、5、6、7、8、9和10，其实例包括：

终止于各种官能团的亚烷基链(如上所述)，其实例如下：

被各种官能团中断的亚烷基链(如上所述)，其实例如下：

被杂环基中断或终止的亚烷基链，例如，

其中m和n独立地是0-10的整数，其实例包括：

被酰胺、杂环烯和/或芳基中断的亚烷基链，其实例包括：

被杂环烯、芳基和杂原子中断的亚烷基链，其实例包括：

和

被杂原子如N、O或B中断的亚烷基链，例如，

式中每个n独立地是1-10的整数，例如，1-9、1-8、1-7、1-6、1-5、1-4、1-3、1-2、2-10、2-9、2-8、2-7、2-6、2-5、2-4、2-3、3-10、3-9、3-8、3-7、3-6、3-5、3-4、4-10、4-9、4-8、4-7、4-6、4-5、5-10、5-9、5-8、5-7、5-6、6-10、6-9、6-8、6-7、7-10、7-9、7-8、8-10、8-9、9-10以及1、2、3、4、5、6、7、8、9和10，并且R是H或C₁至C₄烷基，其实例为

在一些实施方案中，接头可以包括聚乙二醇链，其可以用–S–、–N(R')–、–C≡C–、–C(O)–、–C(O)O–、–OC(O)–、–OC(O)O–、–C(NOR')–、–C(O)N(R')–、–C(O)N(R')C(O)–、–C(O)N(R')C(O)N(R')–、–N(R')C(O)–、–N(R')C(O)N(R')–、–N(R')C(O)O–、–OC(O)N(R')–、–C(NR')–、–N(R')C(NR')–、–C(NR')N(R')–、–N(R')C(NR')N(R')–、–OB(Me)O–、–S(O)₂–、–OS(O)–、–S(O)O–、–S(O)–、–OS(O)₂–、–S(O)₂O–、–N(R')S(O)₂–、–S(O)₂N(R')–、–N(R')S(O)–、–S(O)N(R')–、–N(R')S(O)₂N(R')–、–N(R')S(O)N(R')–、C_3-12碳环烯、3元至12元杂环烯、5元至12元杂芳烯中的至少一种或其任意组合终止(在一个或两个末端)，其中R'是H或C₁-C₆烷基，其中一端或两端的终止基团可以相同或不同。

在一些实施方案中，接头包括具有2个至8个PEG单元的聚乙二醇链，并在一个或两个末端终止于

在一些实施方案中，接头包含3个无中断的PEG单元。

包括聚乙二醇链的接头的代表性实例包括：

其中n是2-10的整数，其实例包括：

在一些实施方案中，聚乙二醇接头可以终止于一个官能团，其实例如下：

在一些实施方案中，接头还包含 基团。在一些实施方案中，接头包含基团。

在一些实施方案中，接头由以下任何一种结构来表示：

因此，在一些实施方案中，本发明的双功能化合物由以下结构(I-5)至(I-28)的任何一种来表示：

或其药学上可接受的盐或立体异构体。

降解子

例如，泛素-蛋白酶体途径(UPP)是一种主要的细胞途径，其调节关键的调节蛋白并降解错误折叠或异常的蛋白质。UPP是多种细胞过程的核心。泛素与特定蛋白质底物的共价连接是通过E3泛素连接酶的作用实现的。这些连接酶包括500多种不同的蛋白质，并根据其E3功能活性的结构要素分为多个类别。

降解子与E3连接酶cereblon(CRBN)结合。

这种降解子的代表性实例由结构(D1a)至(D1d)的任何一种来表示：

式中X₁是CH₂或C(O)且X₂是键、CH₂、NH或O。

美国专利9,770,512和美国专利公开号2018/0015087、2018/0009779、2016/0243247、2016/0235731、2016/0237730和2016/0176916以及国际专利公开号WO 2017/197055、WO 2017/197051、WO 2017/197036、WO 2017/197056和WO 2017/197046中还公开了结合cereblon并可适用于本发明的其他降解子。

因此，在一些实施方案中，本发明的双功能化合物由以下结构(I-29)至(I-44)中的任何一种来表示：

或其药学上可接受的盐或立体异构体。

在一些实施方案中，本发明的双功能化合物可由以下结构中的任何一种来表示：

或其药学上可接受的盐或立体异构体。

式(I)的双功能化合物可以是可以是游离酸或游离碱或药学上可接受的盐的形式。如本文所用，在盐的上下文中，术语“药学上可接受的”是指不消除化合物的生物活性或性质并且相对无毒的化合物的盐，即，盐形式的化合物可以施用于受试者，而不会引起不良的生物学效应(如头晕或胃部不适)或以有害的方式与含有其的组合物的任何其他组分相互作用。术语“药学上可接受的盐”是指通过本发明化合物与合适的酸或碱反应而获得的产物。本发明化合物的药学上可接受的盐的实例包括那些来源于合适的无机碱的盐如Li盐、Na盐、K盐、Ca盐、Mg盐、Fe盐、Cu盐、Al盐、Zn盐和Mn盐。药学上可接受的无毒酸加成盐的实例是氨基与无机酸形成的盐，如盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硝酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、异烟酸盐、乙酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、泛酸盐、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、龙胆酸盐、富马酸盐、葡糖酸盐、葡糖醛酸盐、糖酸盐、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、4-甲基苯磺酸盐或对甲苯磺酸盐等。本发明的某些化合物可以与各种有机碱如赖氨酸、精氨酸、胍、二乙醇胺或二甲双胍形成药学上可接受的盐。

式(I)的双功能化合物可以具有至少一个手性中心，且因此可以是立体异构体的形式，其如本文所用，包括各个化合物的所有异构体，不同之处仅在于它们的原子在空间的取向。术语立体异构体包括镜像异构体(对映异构体，包括化合物的(R-)或(S-)构型)、化合物的镜像异构体混合物(对映异构体的物理混合物和外消旋物或外消旋混合物)、化合物的几何(顺式/反式或E/Z，R/S)异构体和具有一个以上手性中心且互不为镜像的化合物异构体(非对映异构体)。化合物的手性中心可能在体内发生差向异构化；因此，对于这些化合物来说，以施用(R-)形式的化合物被认为等同于施用(S-)形式的化合物。因此，本发明的化合物可以以单独的异构体形式且基本上不含其它异构体的形式制造和使用，或者以各种异构体的混合物形式制造和使用，例如，立体异构体的外消旋混合物。

在一些实施方案中，式(I)的双功能化合物是同位素衍生物，因为它具有至少一个所期望的原子同位素取代，取代的量高于同位素的天然丰度，即被富集。在一个实施方案中，化合物包括氘或多个氘原子。用较重的同位素如氘(即²H)取代，由于代谢稳定性较高，例如体内半衰期增加或剂量要求减少，可能具有某些治疗优势，且因此在某些情况下可能是有利的。

此外，式(I)的双功能化合物包括N-氧化物、结晶形式(也称为多晶型物)、具有相同类型活性的化合物的活性代谢物、互变异构体和化合物的非溶剂化形式以及药学上可接受溶剂(如水、乙醇等)的溶剂化形式。该术语包括双功能化合物的溶剂化形式。

合成方法

在一些实施方案中，本发明涉及制造式(I)的双功能化合物或其药学上可接受的盐或立体异构体的方法。从广义上讲，本发明的化合物或其药学上可接受的盐或立体异构体，可以通过已知适用于制备化学相关化合物的任何工艺来制备。结合各种工作实例中描述的合成方案，可以更好地理解本发明的化合物，这些实例说明了可以制备本发明化合物的非限制性方法。

药物组合物

本发明的另一方面涉及药物组合物，其包括治疗有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐或立体异构体，以及药学上可接受的载体。术语“药学上可接受的载体”，如本领域所知，是指适用于向哺乳动物施用式(I)的化合物的药学上可接受的材料、组合物或载体。合适的载体可包括，例如，液体(水性和非水性均可，及其组合)、固体、包封材料、气体及其组合(例如，半固体)和气体，其功能是将化合物从一个器官或身体的一部分携带或运输到另一个器官或身体的另一部分。载体是“可接受的”，即在生理上是惰性的且与制剂的其他成分相容，并且对受试者或患者无害。根据制剂的类型，组合物可以包括一种或更多种药学上可接受的赋形剂。

从广义上讲，式(I)的双功能化合物及其药学上可接受的盐和立体异构体可根据常规制药实践，例如常规混合、溶解、制粒、糖衣丸制造、粉碎、乳化、封装、包封和压片工艺，配制成给定类型的组合物(参见，例如，Remington:The Science and Practice ofPharmacy(20th ed.),ed.A.R.Gennaro,Lippincott Williams&Wilkins,2000和Encyclopedia of Pharmaceutical Technology,eds.J.Swarbrick and J.C.Boylan,1988-1999,Marcel Dekker,New York)。制剂的类型取决于施用方式，其可以包括肠内(例如，口服、含服、舌下和直肠)、肠胃外(例如，皮下(s.c.)、静脉内(i.v.)、肌内(i.m.)和胸骨内注射，或输注技术、眼内、动脉内、髓内、鞘内、心室内、经皮、皮内、阴道内、腹膜内、粘膜、鼻、气管内滴注、支气管滴注和吸入)和外用(例如，经皮的)。一般来说，最合适的施用途径将取决于多种因素，包括，例如，剂的性质(例如，其在胃肠道环境中的稳定性)和/或受试者的状况(例如，受试者是否能够耐受口服施用)。例如，胃肠外(例如，静脉内)施用也可能是有利的，因为例如在单剂量治疗和/或急性不适的情况下，化合物可以相对快速地施用。

在一些实施方案中，双功能化合物被配制成用于口服或静脉内施用(例如，全身静脉内注射)。

因此，本发明的双功能化合物可以配制成固体组合物(例如，粉剂、片剂、分散颗粒、胶囊、扁囊剂和栓剂)、液体组合物(例如，溶解该化合物的溶液、分散该化合物固体颗粒的悬浮液、乳剂和含有脂质体的溶液、胶束或纳米颗粒、糖浆和酏剂)、半固体组合物(例如，凝胶、混悬剂和乳膏)和气体(例如，气溶胶组合物的推进剂)。还可将化合物配制用于速释、中速释放或缓释。

口服的固体剂型包括胶囊、片剂、丸剂、散剂和颗粒。在这类固体剂型中，活性化合物与载体如柠檬酸钠或磷酸二钙以及其他的载体或赋形剂例如a)填充剂或增量剂(extender)如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸，b)粘合剂如甲基纤维素、微晶纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、海藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶，c)保湿剂如甘油，d)崩解剂如交联聚合物(如交联聚乙烯吡咯烷酮(交聚维酮)、交联羧甲基纤维素钠(交联羧甲基纤维素钠)、羟基乙酸淀粉钠、琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠，e)溶液阻滞剂如石蜡，f)吸收促进剂如季铵化合物，g)润湿剂例如，如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯，h)吸收剂如高岭土和膨润土，和i)润滑剂如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠及其混合物)混合。在胶囊剂、片剂和丸剂的情况下，剂型还可以包括缓冲剂。类似类型的固体组合物也可以用作使用如乳糖(lactose或milk sugar)以及高分子量聚乙二醇等赋形剂的软填充和硬填充明胶胶囊的填充物。片剂、糖衣丸、胶囊、丸剂和颗粒的固体剂型可以用肠溶衣和其他包衣等包衣和壳来制备。它们还可含有遮光剂。

在一些实施方案中，本发明的双功能化合物可以被配制成硬明胶或软明胶胶囊。可以使用的代表性赋形剂包括预胶化淀粉、硬脂酸镁、甘露醇、硬脂酰富马酸钠、无水乳糖、微晶纤维素和交联羧甲基纤维素钠。明胶壳可包括明胶、二氧化钛、氧化铁和着色剂。

用于口服施用的液体剂型包括溶液、混悬剂、乳剂、微乳剂、糖浆和酏剂。除化合物外，液体剂型可含有本领域常用的水性或非水性载体(取决于化合物的溶解度)，例如，例如水或其他溶剂、增溶剂和乳化剂如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油(特别是棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢糠醇、聚乙二醇和山梨醇酐脂肪酸酯及其混合物。口服组合物还可以包括赋形剂，例如润湿剂、助悬剂、着色剂、甜味剂、调味剂和芳香剂。

可注射制剂可包括无菌水溶液或含油混悬剂。它们可以根据标准技术使用合适的分散剂或湿润剂和助悬剂来配制。无菌可注射制剂也是在无毒的肠外可接受稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液、混悬剂或乳剂，如溶于1,3-丁二醇的溶液。可以使用的可接受的载体和溶剂是水、林格氏溶液、U.S.P.和等渗氯化钠溶液。此外，通常使用无菌的固定油作为溶剂或悬浮介质。为此，可以使用任何温和的固定油，其包括合成的单甘油酯或二甘油酯。此外，脂肪酸(如油酸)用于制备注射剂。将注射制剂灭菌，例如，通过细菌截留过滤器过滤，或通过将灭菌剂以掺入无菌固体组合物形式中，可在使用前将该无菌固体组合物溶解或分散于无菌水或其他无菌注射介质中。可通过减慢化合物的吸收来延长其作用，其可通过使用具有较差水溶性的液体悬浮液或结晶或无定形材料来实现。延长从肠胃外施用的制剂中吸收化合物也可以通过将化合物悬浮在油性溶媒中来实现。

在某些实施方案中，式(I)的双功能化合物可以以局部而非全身的方式施用，例如，通过将偶联物通常以贮库制剂或缓释制剂形式直接注射到器官中。在具体实施方案中，长效制剂通过植入(例如皮下或肌内)或肌内注射施用。可注射的长效剂型通过使化合物在可生物降解聚合物(例如，聚乳酸–聚乙醇酸、聚原酸酯和聚酸酐)中形成微囊基质来制造。化合物的释放速率可以通过改变化合物与聚合物的比例和所采用的特定聚合物的性质来控制。可注射的长效制剂还通过将化合物包封在与身体组织相容的脂质体或微乳剂中制备。此外，在其他实施方案中，化合物在靶向药物递送系统中递送，例如，在用器官特异性抗体包被的脂质体中递送。在这样的实施方案中，脂质体靶向器官并被器官选择性地摄取。

双功能化合物可以被配制成用于含服或舌下施用，其实例包括片剂、含片和凝胶。

双功能化合物可以被配制成吸入施用。适合吸入施用的各种形式包括气雾剂、喷雾或散剂。药物组合物可以使用合适的推进剂(例如，二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其他合适的气体)以气雾剂喷雾的形式从加压包装或雾化器中递送。在一些实施方案中，加压气雾剂的剂量单位可以通过提供阀门以输送计量的量来确定。在一些实施方案中，包括明胶的胶囊和药筒(例如，用于吸入器或吹药器)可以被配制含有该化合物和合适的粉基如乳糖或淀粉的粉末混合物。

式(I)的双功能化合物可以被配制用于表面施用，如本文所用，是指将其皮内施用至表皮。这些类型的组合物通常以软膏剂、糊剂、霜剂、洗剂、凝胶、溶液和喷雾剂的形式存在。

用于配制表面施用组合物的载体的代表性实例包括溶剂(例如，醇、多元醇、水)、霜剂、洗剂、软膏剂、油、膏药、脂质体、粉剂、乳剂、微乳剂和缓冲液(例如，低渗或缓冲盐水)。例如，可以使用饱和或不饱和脂肪酸如硬脂酸、棕榈酸、油酸、棕榈油酸、鲸蜡醇或油醇来配制霜剂。霜剂还可含有非离子表面活性剂，如硬脂酸聚烃氧(40)酯。

在一些实施方案中，表面制剂还可以包括赋形剂，其实例是渗透促进剂。这些制剂能够将具有药理活性的化合物通过角质层运输和到表皮或真皮中，优选全身吸收很少或没有。已经对多种化合物在提高药物的皮肤渗透速率方面的有效性进行了评估。参见，例如，Percutaneous Penetration Enhancers,Maibach H.I.和Smith H.E.(eds.),CRC Press,Inc.,Boca Raton,Fla.(1995)(其调查了各种皮肤渗透增强剂的使用和测试)和Buyuktimkin et al.,Chemical Means of Transdermal Drug Permeation Enhancementin Transdermal和Topical Drug Delivery Systems,Gosh T.K.,Pfister W.R.,Yum S.I.(Eds.),Interpharm Press Inc.,Buffalo Grove,Ill.(1997)。渗透增强剂的代表性实例包括甘油三酯(例如，大豆油)、芦荟组合物(例如，芦荟凝胶(aloe-vera gel))、乙醇、异丙醇、辛基苯基聚乙二醇(octylphenylpolyethylene glycol)、油酸、聚乙二醇400、丙二醇、N-癸基甲基亚砜、脂肪酸酯(例如，肉豆蔻酸异丙酯、月桂酸甲酯、甘油单油酸酯和丙二醇单油酸酯)和N-甲基吡咯烷酮。

可包括在表面制剂以及其他类型的制剂中的其他赋形剂的代表性实例(在它们相容的程度上)包括防腐剂、抗氧化剂、保湿剂、润肤剂、缓冲剂、增溶剂、皮肤保护剂和表面活性剂。合适的防腐剂包括醇类、季胺类、有机酸类、苯甲酸酯类和酚类。合适的抗氧化剂包括抗坏血酸及其酯、亚硫酸氢钠、丁基羟基甲苯、丁基羟基茴香醚、生育酚以及螯合剂如EDTA和柠檬酸。合适的保湿剂包括甘油、山梨醇、聚乙二醇、尿素和丙二醇。合适的缓冲剂包括柠檬酸、盐酸和乳酸缓冲液。合适的增溶剂包括季铵盐酸盐、环糊精类、苯甲酸苄酯、卵磷脂和聚山梨醇酯。合适的皮肤保护剂包括维生素E油、尿囊素(allantoin)、二甲基硅油、甘油、凡士林和氧化锌。

透皮制剂通常采用透皮递送装置和透皮递送贴片，其中化合物被配制成溶于和/或分散于聚合物或粘合剂中的亲脂性乳液或缓冲水溶液。贴剂可以被构建为用于连续、脉冲式(pulsatile)或按需递送药剂。化合物的透皮递送可以通过离子电渗贴剂实现。透皮贴剂可以提供化合物的受控递送，其中通过使用速率控制膜或通过将化合物截留在聚合物基质或凝胶中来减缓吸收率。吸收促进剂可用于增加吸收，其实例包括有助于通过皮肤的可吸收药学上可接受的溶剂。

眼科制剂包括滴眼液。

用于直肠施用的制剂包括灌肠剂、直肠凝胶、直肠泡沫剂、直肠气雾剂和保留灌肠剂，其可含有常规栓剂基质如可可油或其他甘油酯，以及合成聚合物如聚乙烯吡咯烷酮、PEG等。用于直肠或阴道施用的组合物也可以被配制成栓剂，其可以通过将化合物与合适的非刺激性载体和赋形剂如可可油、脂肪酸甘油酯的混合物、聚乙二醇、栓剂蜡及其组合混合来制备，所有这些化合物在环境温度下是固体，但在体温下是液体，且因此在直肠或阴道腔中融化并释放化合物。

剂量

如本文所用，术语“治疗有效量”是指式(I)的双功能化合物或药学上可接受的盐或其立体异构体或包括式(I)的双功能化合物或其药学上可接受的盐或立体异构体的组合物，在患有由异常DOT1L活性表征或介导的疾病或病症的特定患者中有效地产生所需的治疗反应的量。因此，术语“治疗有效量”包括本发明的双功能化合物或其药学上可接受的盐或立体异构体当施用时，诱导待治疗的疾病或病症的积极改变，或足以抑制或甚至防止疾病或病症的发展或进展，或在某种程度上减轻受试者中正在治疗的疾病或病症的一种或更多种症状，或仅杀死或抑制病变(如癌症(如血液学癌症))细胞的生长，或减少病变细胞中DOT1L的量。

双功能化合物的化合物的每日总剂量及其用法可以根据标准医疗实践决定，例如，由主治医师使用合理的医学判断来决定。任何特定受试者的具体治疗有效剂量可能取决于多种因素，其包括正在治疗的疾病或病症及其严重程度(例如，其现状)；受试者的年龄、体重、总体健康状况、性别和饮食；所用特定化合物的施用时间、施用途径和排泄率；治疗的持续时间；与双功能化合物联合或同时使用的药物；以及医学界公知的类似因素(参见，例如，Goodman and Gilman's,The Pharmacological Basis of Therapeutics,10thEdition,A.Gilman,J.Hardman and L.Limbird,eds.,McGraw-Hill Press,155-173,2001)。

式(I)的双功能化合物及其药学上可接受的盐和立体异构体可能在宽剂量范围内有效。在一些实施方案中，每日总剂量(例如，对于成年人)的范围可以是约0.001mg至约1600mg、0.01mg至约1600mg、0.01mg至约500mg、约0.01mg至约100mg、约0.5mg至约100mg、每天约1mg至约100-400mg、每天约1mg至约50mg、每天约5mg至约40mg，以及在其他实施方案中每天约10mg至约30mg。根据化合物每天施用的次数，可以配制含有所需剂量的单个剂量。作为实例，可以用约1mg至约200mg的双功能化合物(例如，1mg、2mg、2.5mg、3mg、4mg、5mg、10mg、15mg、20mg、25mg、50mg、100mg、150mg和200mg)来配制胶囊。在一些实施方案中，可以根据化合物每天施用的次数配制含有所需剂量的单个剂量。

使用方法

在一些方面，本发明涉及治疗涉及异常(例如，功能障碍或失调)DOT1L活性的疾病或病症的方法，其需要向有需要的受试者施用治疗有效量的式(I)的双功能化合物或其药学上可接受的盐或立体异构体。

所述疾病或病症由异常DOT1L活性表征或介导(例如，相对于非病理状态，DOT1L水平升高或DOT1L在其他方面功能异常)。“疾病”通常被认为是受试者的健康状态，其中受试者不能维持体内稳态，并且其中如果疾病没有改善，则受试者的健康继续恶化。相比之下，受试者的“不适”是受试者能够维持体内稳态的健康状况，但是受试者的健康状况不如没有病症时的健康状况好。如果不进行治疗，不适不一定导致动物健康状况的进一步下降。

如本文所用，术语“受试者”(或“患者”)包括易患或患有所述疾病或病症的动物界所有成员。在一些实施方案中，受试者是哺乳动物，例如，人类或非人类哺乳动物。该方法也适用于伴侣动物，如狗和猫，以及家畜，如牛、马、绵羊、山羊、猪和其他家养和野生动物。根据本发明，“需要”治疗的受试者可能“患有或疑似患有”特定的疾病或病症，可能已经被阳性诊断或以其他方式表现出足够数量的危险因素或足够数量的体征或症状或其组合，使得医学专业人员可以诊断或怀疑受试者患有该疾病或病症。因此，患有特定疾病或病症的受试者和疑似患有特定疾病或病症的受试者不一定是两个不同的群体。

在一些实施方案中，式(I)的双功能化合物可用于治疗细胞增殖性疾病和病症(例如，癌症或良性肿瘤)。如本文所用，术语“细胞增殖性疾病或病症”是指以细胞生长下调或异常或两者兼有为特征的疾病，其包括非癌性疾病如肿瘤、癌前疾病、良性肿瘤和癌症。

在其他实施方案中，方法涉及治疗患有癌症的受试者。从广义上讲，本发明的双功能化合物可有效治疗癌症(包括原发性和转移性肿瘤的实体瘤)、肉瘤、黑色素瘤和血液系统癌症(影响血液包括淋巴细胞、骨髓和/或淋巴结的癌症)，如白血病、淋巴瘤和多发性骨髓瘤。包括成人肿瘤/癌症和儿童肿瘤/癌症。癌症可以是血管化的，或尚未明显血管化的或非血管化的肿瘤。

癌症的代表性实例包括肾上腺皮质癌、AIDS相关癌症(例如，卡波西和AIDS相关淋巴瘤)、阑尾癌、儿童癌症(例如，儿童小脑星形细胞瘤、儿童脑星形细胞瘤)、基底细胞癌、皮肤癌(非黑色素瘤)、胆道癌、肝外胆管癌、肝内胆管癌、膀胱癌(bladder cancer)、膀胱癌(urinary bladder cancer)、脑癌(例如，胶质瘤和胶质母细胞瘤如脑干胶质瘤、妊娠滋养细胞肿瘤神经胶质瘤、小脑星形细胞瘤、脑星形细胞瘤/恶性神经胶质瘤、室管膜瘤、髓母细胞瘤、幕上原始神经外胚层肿瘤(supratentorial primitive neuroectodermal tumors)、视通路和下丘脑胶质瘤)、乳腺癌、支气管腺瘤/类癌、类癌瘤、神经系统癌(例如，中枢神经系统癌症、中枢神经系统淋巴瘤)、宫颈癌、慢性骨髓增生性疾病、结直肠癌(例如，结肠癌、直肠癌)、淋巴样肿瘤、蕈样真菌病(mycosis fungoides)、Sezary综合征、子宫内膜癌、食管癌、颅外胚细胞瘤、性腺外胚细胞瘤、肝外胆管癌、眼癌、眼内黑素瘤、视网膜母细胞瘤、胆囊癌、胃肠癌(例如，胃癌、小肠癌、胃肠道类癌瘤、胃肠道间质瘤(GIST))、胆管癌、胚细胞瘤、卵巢胚细胞瘤、头颈癌、神经内分泌瘤、霍奇金淋巴瘤、Ann Arbor III期和IV期儿童非霍奇金淋巴瘤、ROS1阳性难治性非霍奇金淋巴瘤、白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤、下咽癌、眼内黑素瘤、眼癌、胰岛细胞瘤(内分泌胰腺)、肾癌(例如，维耳姆斯氏瘤、肾细胞癌)、肝癌、肺癌(例如，非小细胞肺癌和小细胞肺癌)、ALK阳性间变性大细胞淋巴瘤、ALK阳性晚期恶性实体瘤、Waldenstrom巨球蛋白血症、黑色素瘤、眼内(眼)黑色素瘤、梅克尔细胞癌、间皮瘤、颈部原发灶隐匿转移性鳞癌、多发性内分泌腺瘤(MEN)、骨髓增生异常综合征、骨髓增生异常/骨髓增生性疾病、鼻咽癌、神经母细胞瘤、口腔癌(oral cancer)(例如，口癌、唇癌、口腔癌(oral cavity cancer)、舌癌、口咽癌、咽喉癌、喉癌)、卵巢癌(例如，卵巢上皮癌、卵巢胚细胞瘤、低度恶性潜能卵巢肿瘤)、胰腺癌、胰岛细胞胰腺癌、鼻旁窦和鼻腔癌、甲状旁腺癌、阴茎癌、咽癌、嗜铬细胞瘤、松果体母细胞瘤、转移性未分化甲状腺癌、未分化甲状腺癌、甲状腺乳头状癌、垂体瘤、浆细胞肿瘤/多发性骨髓瘤、胸膜肺母细胞瘤、前列腺癌、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、涎腺癌、子宫癌(例如，子宫内膜癌、子宫肉瘤、子宫体癌)、鳞状细胞癌、睾丸癌、胸腺瘤、胸腺癌、甲状腺癌、青少年黄肉芽肿、肾盂和输尿管及其他泌尿器官的移行细胞癌、尿道癌、妊娠滋养细胞肿瘤、阴道癌、外阴癌、肝母细胞瘤、横纹肌样瘤和肾母细胞瘤。

可以用本发明的双功能化合物治疗的肉瘤包括软组织癌和骨癌，其代表性实例包括骨肉瘤或成骨肉瘤(骨)(例如，尤文氏肉瘤)、软骨肉瘤(软骨)、平滑肌肉瘤(平滑肌)、横纹肌肉瘤(骨骼肌)、间皮性肉瘤或间皮瘤(体腔的膜状内衬)、纤维肉瘤(纤维组织)、血管肉瘤或血管内皮瘤(血管)、脂肪肉瘤(脂肪组织)、神经胶质瘤或星形细胞瘤(在脑中发现的神经源性结缔组织)、粘液肉瘤(原始胚胎结缔组织)、间叶或混合性中胚层肿瘤(混合结缔组织类型)和组织细胞肉瘤(免疫性癌症)。

在一些实施方案中，本发明的方法涉及治疗患有血液系统、肝、脑、肺、结肠、胰腺、前列腺、卵巢、乳腺、皮肤和子宫内膜的细胞增殖性疾病或病症的受试者。

如本文所用，“血液系统的细胞增殖性疾病或病症”包括淋巴瘤、白血病、骨髓肿瘤、肥大细胞肿瘤、骨髓发育不良、良性单克隆丙球蛋白病、淋巴瘤样丘疹病、真性红细胞增多症、特发性骨髓外化生和原发性血小板增多症。因此，血液系统癌症的代表性实例可包括多发性骨髓瘤、淋巴瘤(包括T细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤(弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL))、滤泡性淋巴瘤(FL)、套细胞淋巴瘤(MCL)和ALK+间变性大细胞淋巴瘤(例如，选自弥漫性大B细胞淋巴瘤(例如，生发中心B细胞样弥漫性大B细胞淋巴瘤或活化B细胞样弥漫性大B细胞淋巴瘤)的B细胞非霍奇金淋巴瘤)、伯基特淋巴瘤/白血病、套细胞淋巴瘤、纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、边缘区淋巴瘤、淋巴浆细胞淋巴瘤/华氏巨球蛋白血症、转移性胰腺癌、难治性B细胞非霍奇金淋巴瘤和复发性B细胞非霍奇金淋巴瘤、儿童淋巴瘤，以及淋巴细胞和皮肤来源的淋巴瘤，例如，小淋巴细胞淋巴瘤、白血病，包括儿童白血病、毛细胞白血病、急性淋巴细胞白血病、急性髓细胞白血病、急性骨髓性白血病(例如，急性单核细胞白血病)、慢性淋巴细胞白血病、小淋巴细胞白血病、慢性粒细胞白血病、慢性髓细胞性白血病和肥大细胞白血病、骨髓肿瘤和肥大细胞肿瘤。

在一些实施方案中，血液系统癌症为多发性骨髓瘤、淋巴瘤或白血病。在一些实施方案中，白血病是急性髓系白血病、混合谱系白血病(MLL)重排的急性髓系白血病、具有核仁磷酸蛋白1(NPM1)突变的急性髓系白血病、具有DNA甲基转移酶3A(DNMT3A)突变的急性髓系白血病或急性髓系嗜酸性粒细胞白血病。

如本文所用，“肝脏的细胞增殖性疾病或病症”包括影响肝脏的所有形式的细胞增殖性病症。肝脏的细胞增殖性病症可以包括肝癌(例如，肝细胞癌、肝内胆管癌和肝母细胞瘤)、肝脏的癌前病变或癌前状态、肝脏的良性生长或病变和肝脏的恶性生长或病变，以及肝脏之外的身体组织和器官的转移性病变。肝脏的细胞增殖性病症可以包括肝脏的增生、化生和发育不良。

如本文所用，“脑的细胞增殖性疾病或病症”包括影响脑的所有形式的细胞增殖性病症。脑的细胞增殖性病症可以包括脑癌(例如，胶质瘤、胶质母细胞瘤、脑膜瘤、垂体腺瘤、前庭神经鞘瘤和原始神经外胚层瘤(髓母细胞瘤))、脑的癌前病变或癌前状态、脑的良性生长物或病变、和脑的恶性生长物或病变以及除脑以外的身体组织和器官的转移性病变。脑的细胞增殖性病症可以包括脑增生、化生和发育异常。

如本文所用，“肺的细胞增殖性疾病或病症”包括影响肺细胞的所有形式的细胞增殖性病症。肺的细胞增殖性疾病包括肺癌、肺的癌前病变或癌前状态、肺的良性生长物或病变、肺的增生、化生和发育异常，以及除肺以外的身体组织和器官的转移性病变。肺癌包括所有形式的肺部癌症，例如，恶性肺肿瘤、原位癌、典型类癌瘤和非典型类癌瘤。肺癌包括小细胞肺癌(“SLCL”)、非小细胞肺癌(“NSCLC”)、腺癌、小细胞癌、大细胞癌、鳞状细胞癌和间皮瘤。肺癌可以包括“瘢痕癌”、细支气管肺泡癌、巨细胞癌、梭形细胞癌和大细胞神经内分泌癌。肺癌还包括具有组织学和超微结构异质性(例如，混合细胞类型)的肺肿瘤。在一些实施方案中，本发明的化合物可用于治疗非转移性或转移性肺癌(例如，NSCLC、ALK阳性NSCLC、具有ROS1重排的NSCLC、肺腺癌和肺鳞癌)。

如本文所用，“结肠细胞增殖性疾病或病症”包括影响结肠细胞的所有形式的细胞增殖性病症，包括结肠癌、结肠癌前病变或癌前状态、结肠腺瘤性息肉和结肠异时性病变。结肠癌包括散发性和遗传性结肠癌、恶性结肠肿瘤、原位癌、典型类癌瘤和非典型类癌瘤、腺癌、鳞状细胞癌和鳞状细胞癌。结肠癌可能与遗传性综合征有关，如遗传性非息肉性结肠直肠癌、家族性腺瘤性息肉病、MYH相关息肉病、加德纳综合征、佩–吉综合征、特科特综合征和幼年性息肉病。结肠细胞增殖性病症也可能以结肠增生、化生和发育异常为特征。

如本文所用，“胰腺细胞增殖性疾病或病症”包括影响胰腺细胞的所有形式的细胞增殖性病症。胰腺细胞增殖性病症可包括胰腺癌、胰腺癌前病变或癌前状态、胰腺增生、胰腺发育异常、胰腺良性生长物或病变、和胰腺恶性生长物或病变，以及胰腺之外的身体组织和器官的转移性病变。胰腺癌包括所有形式的胰腺癌症，其包括导管腺癌、腺鳞状癌、多形性巨细胞癌、粘液腺癌、破骨细胞样巨细胞癌、粘液囊腺癌、腺泡癌、未分类的大细胞癌、小细胞癌、胰母细胞瘤、乳头状肿瘤、粘液囊腺瘤、乳头状囊性肿瘤和浆液囊腺瘤，以及具有组织学和超微结构异质性(例如，混合细胞)的胰腺肿瘤。

如本文所用，“前列腺细胞增殖性疾病或病症”包括影响前列腺的所有形式的细胞增殖性病症。前列腺的细胞增殖性病症可包括前列腺癌、前列腺的癌前病变或癌前状态、前列腺良性生长物或病变和前列腺恶性生长物或病变，以及前列腺之外的身体组织和器官的转移性病变。前列腺的细胞增殖性病症可包括前列腺的增生、化生和发育异常。

如本文所用，“卵巢的细胞增殖性疾病或病症”包括影响卵巢的所有形式的细胞增殖性病症。卵巢细胞增殖性病症可包括卵巢的癌前病变或癌前状态、卵巢的良性生长物或病变、卵巢癌，和卵巢之外的身体组织和器官的转移性病变。卵巢细胞增殖性病症可包括卵巢增生、化生和发育异常。

如本文所用，“乳腺的细胞增殖性疾病或病症”包括影响乳腺细胞的所有形式的细胞增殖性病症。乳腺的细胞增殖性病症可包括乳腺癌、乳腺的癌前病变或癌前状态、乳腺良性生长物或病变和乳腺之外的身体组织和器官的转移性病变。乳腺的细胞增殖性病症可包括乳腺增生、化生和发育异常。

如本文所用，“皮肤细胞增殖性疾病或病症”包括影响皮肤细胞的所有形式的细胞增殖性病症。皮肤细胞增殖性病症可包括皮肤的癌前病变或癌前状态、皮肤良性生长物或病变、皮肤恶性黑色素瘤或其他恶性生长物或病变和皮肤之外的身体组织和器官的转移性病变。皮肤细胞增殖性病症可包括皮肤增生、化生和发育异常。

如本文所用，“子宫内膜的细胞增殖性疾病或病症”包括影响子宫内膜细胞的所有形式的细胞增殖性病症。子宫内膜的细胞增殖性病症可包括子宫内膜的癌前病变或癌前状态、子宫内膜良性生长物或病变、子宫内膜癌和子宫内膜之外的身体组织和器官的转移性病变。子宫内膜细胞增殖性病症可包括子宫内膜增生、化生和发育异常。

式(I)的双功能化合物可以作为单一疗法或通过联合疗法的方式施用于患者，例如癌症患者。治疗可以是“一线(front/first-line)的”，即，作为既往未接受过抗癌治疗方案的患者的初始治疗，无论是单独使用还是与其他治疗联合使用；或“二线的”，作为既往接受过抗癌治疗方案的患者的治疗，无论是单独使用还是与其他治疗联合使用；或作为“三线”、“四线”等治疗，无论是单独使用还是与其他治疗联合使用。治疗也可以对既往治疗不成功或部分成功但对特定治疗不耐受的患者进行。治疗也可以作为辅助治疗给予，即，在目前未检出疾病或在手术切除肿瘤后的患者中预防癌症复发。因此，在一些实施方案中，可以将双功能化合物施用于接受过另一种治疗如化疗、放射免疫治疗、手术治疗、免疫治疗、放射治疗、靶向治疗或其任意组合的患者。

本发明的方法可能需要以单剂量或多剂量(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、10、15、20或更多剂量)向患者施用式(I)的双功能化合物或其药物组合物。例如，施用频率的范围可以从每天一次到大约每八周一次。在一些实施方案中，施用频率的范围为约每天一次，持续1、2、3、4、5或6周，而在其他实施方案中，需要28天的周期，其包括每日施用，持续3周(21天)，随后是7天的“停药”期。在其他实施方案中，双功能化合物可以在两天半的疗程内每天给药两次(BID)(总共5剂)或在两天的疗程内每天给药一次(QD)(总共2剂)。在其他实施方案中，双功能化合物可以在五天的疗程内每天给药一次(QD)。

联合疗法

式(I)的双功能化合物和其药学上可接受的盐或立体异构体可与至少一种其他活性剂，例如抗癌剂或抗癌方案结合或同时使用，以治疗疾病和病症。在本上下文中，术语“组合”和“同时”是指剂通过相同或单独的剂型，以及通过相同或不同的施用方式，或依次地，例如作为同一治疗方案的一部分，或通过连续的治疗方案，共同施用，其包括基本上同时施用。因此，如果顺序给药，在某些情况下，在开始施用第二种化合物时，两种化合物中的第一种在治疗部位的有效浓度下仍然是可检测的。可以确定顺序和时间间隔，以便它们可以共同作用(例如，协同作用)以提供比以其他方式施用更大的益处。例如，可以同时或在不同的时间点以任何顺序依次施用这些治疗剂；然而，如果不同时施用，它们可以在足够接近的时间内施用，以提供所需的治疗效果，这可以是协同的方式。因此，这些术语不限于在完全同时地施用活性剂。

在一些实施方案中，治疗方案可以包括施用式(I)的双功能化合物与一种或更多种已知用于治疗疾病或病症(例如，癌症)的其他治疗剂的组合。其他抗癌治疗剂的剂量可以与已知或推荐的剂量相同或甚至更低。参见Hardman et al.,eds.,Goodman&Gilman'sThe Pharmacological Basis Of Basis Of Therapeutics,10th ed.,McGraw-Hill,NewYork,2001；Physician's Desk Reference 60th ed.,2006。例如，可适于与本发明双功能化合物组合使用的抗癌剂是本领域已知的。参见，例如，美国专利9,101,622(其中第5.2节)和美国专利9,345,705B2(其中第12-18列)。其他活性剂和治疗方案的代表性实例包括放射疗法、化学疗法(例如，有丝分裂抑制剂、血管生成抑制剂、抗激素、自噬抑制剂、烷化剂、嵌插抗生素、生长因子抑制剂、抗雄激素、信号转导途径抑制剂、抗微管剂、铂配位复合物、HDAC抑制剂、蛋白酶体抑制剂和拓扑异构酶抑制剂)、免疫调节剂、治疗性抗体(例如，单特异性和双功能抗体)和CAR-T疗法。

在一些实施方案中，式(I)的双功能化合物和其他的(例如，抗癌)治疗剂可以间隔少于5分钟、间隔少于30分钟、间隔少于1小时、间隔约1小时、间隔约1小时至约2小时、间隔约2小时至约3小时、间隔约3小时至约4小时、间隔约4小时至约5小时、间隔约5小时至约6小时、间隔约6小时至约7小时、间隔约7小时至约8小时、间隔约8小时至约9小时、间隔约9小时至约10小时、间隔约10小时至约11小时、间隔约11小时至约12小时、间隔约12小时至18小时、间隔18小时至24小时、间隔24小时至36小时、间隔36小时至48小时、间隔48小时至52小时、间隔52小时至60小时、间隔60小时至72小时、间隔72小时至84小时、间隔84小时至96小时或间隔96小时至120小时施用。两种或更多种(例如，抗癌)治疗剂可以在患者同一就诊中施用。

在一些涉及癌症治疗的实施方案中，循环地施用式(I)的双功能化合物和其他的抗癌剂或治疗剂。循环疗法包括在一段时间内施用一种抗癌治疗剂，然后在一段时间内施用第二种抗癌治疗剂，并重复这种顺序施用，即循环，以减少对一种或两种抗癌治疗剂的耐药性的发生，避免或减少一种或两种抗癌治疗剂的副作用，和/或提高治疗的疗效。在一个实例中，循环疗法包括在一段时间内施用第一种抗癌治疗剂，然后在一段时间内施用第二种抗癌治疗剂，任选地，然后在一段时间内施用第三种抗癌治疗剂和等等，并重复这种顺序施用，即循环，以减少发生对一种抗癌治疗剂的耐药性，避免或减少一种抗癌治疗剂的副作用，和/或提高多种抗癌治疗剂的疗效。

药物试剂盒

本双功能化合物或组合物可以组装成试剂盒或制药系统。根据本发明的这一方面，试剂盒或制药系统包括载体或包装，例如盒子、纸箱、管或类似物，其中紧密封闭有一个或更多个容器，例如小瓶、管、安瓿或瓶子，其含有本发明的双功能化合物或其药物组合物。本发明的试剂盒或制药系统还可能包括使用化合物和组合物的印刷说明书。

本发明的这些和其他方面将在考虑以下实例时得到进一步理解，这些实例旨在说明本发明的某些特定实施方案，但不旨在限制由权利要求书限定的范围。

实施例

本发明的这些和其他方面将在考虑以下实施例时得到进一步理解，这些实施例旨在说明本发明的某些特定实施方案，但不旨在限制如权利要求所述的范围。

实施例1：中间体int-1至int-5的合成。

(2R,3R,4S,5R)-2-(6-((4-氨基丁基)氨基)-9H-嘌呤-9-基)-5-(((3-(2-(5-叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(异丙基)氨基)甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(int-1)

向THF(1mL)中化合物A(20.0mg，25.8μmol，1.00当量)的溶液逐滴加入在二恶烷(1.00mL)中的4.0M HCl。在加入甲醇(300μL)前将混合物在室温搅拌30分钟。将所得反应混合物搅拌3小时，直到起始原料通过MS耗尽。将粗混合物在减压下浓缩，得到int-1(16.4mg，25.8μmol，定量(quant.))。

C₃₄H₅₁N₉O₃的MS(ESI)计算值：633.84，实际值：634.84。

UPLC-MS RT：1.32min(方法A)，质量m/z：389.87[M-tBu+H]+。

5-((4-((9-((2R,3R,4S,5R)-5-(((3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(异丙基)氨基)甲基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)-9H-嘌呤-6-基)氨基)丁基)氨基)-5-氧代戊酸(int-2)

向MeCN中0.3μM int-1(16.4mg，25.8μmol，1.00当量)和戊二酸酐(2.94mg，25.8μmol，1.00当量)的溶液中逐滴加入三乙胺(7.18μL，51.6μmol，2当量)。将反应在室温搅拌30分钟，直到起始原料通过MS耗尽。将所得粗混合物在减压下浓缩，得到int-2(16.4mg，25.8μmol，定量)。

C₃₉H₅₇N₉O₆的MS(ESI)计算值：747.44，实际值：748.47。

1-(3-((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-((4-氨基丁基)氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲基)(异丙基)氨基)丙基)-3-(4-(叔丁基)苯基)脲(int-3)

向THF(1mL)中化合物B(20.0mg，26.6μmol，1.00当量)的溶液逐滴加入在二恶烷(1.00mL)中的4.0M HCl。在加入甲醇(300μL)前将混合物在室温下搅拌30分钟。将所得反应混合物搅拌3小时，直到起始原料通过MS耗尽。将所得粗混合物在减压下浓缩，得到int-3(16.4mg，25.8μmol，定量)。

C₃₄H₅₁N₉O₃的MS(ESI)计算值：611.39，实际值：612.40。

1-(3-((((2R,3R,4S,5R)-5-(4-((4-氨基丁基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲基)(异丙基)氨基)丙基)-3-(4-(叔丁基)苯基)脲(int-4)

Int-4以与上述Int-3类似的方式制备。

4-((4-氨基丁基)氨基)-7-((2R,3S,4R,5R)-5-(((3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(异丙基)氨基)甲基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-甲腈(int-5)

Int-5以与上述Int-1类似的方式制备。

实施例2：N-(4-((9-((2R,3R,4S,5R)-5-(((3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑- 2-基)乙基)环丁基)(异丙基)氨基)甲基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)-9H-嘌呤-6-基)氨 基)丁基)-12-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰氨 基)月桂酰胺的合成(1)。

向无水二甲基甲酰胺(DMF)中0.3M int-1(16.4mg，25.8μmol)和IMiD酸1(13.6mg，25.8μmol)的溶液中加入三乙胺(77.4μmol，3.0当量)。搅拌5分钟后，氮杂苯并三唑四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)(25.8μmol，1.0当量)。将所得反应混合物在23℃搅拌1小时。反应完成后，将所得粗产物通过制备型高效液相色谱法(prep-HPLC)纯化，得到白色粉末状化合物1(5.05mg，收率17％)。

C₆₁H₈₄N₁₂O₁₀的MS(ESI)计算值：1144.64，发现值：1145.66。

实施例3：N-(4-((9-((2R,3R,4S,5R)-5-(((3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑- 2-基)乙基)环丁基)(异丙基)氨基)甲基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)-9H-嘌呤-6-基)氨 基)丁基)-16-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)十六酰胺的 合成(2)。

以类似于实施例2中化合物1的方式，由int-1(32.8mg，51.6μmol)和适当的IMiD酸(27.2mg，51.6μmol)合成化合物2，并分离为亮黄色粉末(25mg，42.3％)。

C₆₃H₉ON₁₂O₈的MS(ESI)计算值：1142.70，实际值：1143.70。

实施例4：N-(4-((9-((2R,3R,4S,5R)-5-(((3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑- 2-基)乙基)环丁基)(异丙基)氨基)甲基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)-9H-嘌呤-6-基)氨 基)丁基)-16-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)十六酰胺的 合成(3)。

以类似于实施例2中化合物1的方式，由int-1(8.15mg，12.9μmol)和适当的IMiD酸(6.45mg，12.9μmol)合成化合物3，并分离为亮黄色粉末(3.80mg，22.2％)。

C₆₁H₈₆N₁₂O₈的MS(ESI)计算值：1114.67，实际值：1115.67。

实施例5：N1-(4-((9-((2R,3R,4S,5R)-5-(((3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪 唑-2-基)乙基)环丁基)(异丙基)氨基)甲基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)-9H-嘌呤-6-基) 氨基)丁基)-N5-(8-(((R)-1-((2R,4S)-4-羟基-2-((4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)氨基甲酰 基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基)-8-氧代辛基)戊二酰胺的合成 (4)。

以类似于实施例2中化合物1的方式，由int-2(9.6mg，12.9μmol)和化合物VHL-C₇-NH₂(6.45mg，12.9μmol)合成化合物4，并分离为白色粉末(2.95mg，17.6％)。

C₆₉H₁₀₀N₁₄O₉S的MS(ESI)计算值：1300.75，实际值：1301.74。

实施例6：N-(4-((7-((2R,3R,4S,5R)-5-(((3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑- 2-基)乙基)环丁基)(异丙基)氨基)甲基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)-7H-吡咯并[2,3-d] 嘧啶-4-基)氨基)丁基)-16-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨 基)十六酰胺的合成(5)。

以类似于实施例2中化合物1的方式，由int-4(5.00mg，8.08μmol)和适当的IMiD酸(4.2mg，8.08μmol)合成化合物5，并分离为亮黄色粉末(1.52mg，16.7％)。

C₆₃H₈₉N₁₁O₈的MS(ESI)计算值：1127.69，实际值：1128.70。

实施例7：N-(4-((9-((2S,3R,4S,5R)-5-(((3-(3-(4-(叔丁基)苯基)脲基)丙基) (异丙基)氨基)甲基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)-9H-嘌呤-6-基)氨基)丁基)-16-((2- (2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)十六酰胺的合成(6)。

以类似于实施例2中化合物1的方式，由int-3(5.00mg，8.08μmol)和适当的IMiD酸(4.2mg，8.08μmol)合成化合物6，并分离为亮黄色粉末(1.52mg，16.7％)。

C₆₀H₈₈N₁₂O₉的MS(ESI)计算值：1120.68，实际值：1121.69。

实施例8：N-(4-((9-((2R,3S,4R,5R)-5-(((3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑- 2-基)乙基)环丁基)(异丙基)氨基)甲基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)-9H-嘌呤-6-基)氨 基)丁基)-16-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)十六酰胺的 合成(7)。

以类似于实施例2中化合物1的方式，由int-1和适当的IMiD酸合成化合物7，并分离为白色粉末。

C₆₃H₈₉N₁₁O₉的MS(ESI)计算值：1144.47，实际值：1145.47。

实施例9：N-(4-((9-((2R,3S,4R,5R)-5-(((3-(3-(4-(叔丁基)苯基)脲基)丙基) (异丙基)氨基)甲基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)-9H-嘌呤-6-基)氨基)丁基)-16-((2- (2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)十六酰胺的合成(8)。

以类似于实施例2中化合物1的方式，由int-3和适当的IMiD酸合成化合物8，并分离为白色粉末。

C₆₀H₈₇N₁₁O₁₀的MS(ESI)计算值：1122.42，实际值：1123.42。

实施例10：N-(4-((7-((2R,3S,4R,5R)-5-(((3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪 唑-2-基)乙基)环丁基)(异丙基)氨基)甲基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)-5-氰基-7H-吡 咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基)丁基)-16-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚 啉-4-基)氨基)十六酰胺的合成(9)。

以类似于实施例2中化合物1的方式，由int-5和适当的IMiD酸合成化合物9，并分离为亮黄色粉末。

C₆₅H₈₉N₁₁O₉的MS(ESI)计算值：1167.51，实际值：1168.52。

实施例11：N-(4-((7-((2R,3S,4R,5R)-5-(((3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪 唑-2-基)乙基)环丁基)(异丙基)氨基)甲基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)-5-氰基-7H-吡 咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基)丁基)-16-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚 啉-4-基)氧基)十六酰胺的合成(10)。

以类似于实施例2中化合物1的方式，由int-5和适当的IMiD酸合成化合物10，并分离为白色粉末。

C₆₅H₈₉N₁₁O₉的MS(ESI)计算值：1168.50，实际值：1169.51。

实施例12：N-(4-((7-((2R,3S,4R,5R)-5-(((3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪 唑-2-基)乙基)环丁基)(异丙基)氨基)甲基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)-5-氰基-7H-吡 咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基)丁基)-16-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚 啉-4-基)氧基)十六酰胺的合成(11)。

以类似于实施例2中化合物1的方式，由int-1和适当的IMiD酸合成化合物11，并分离为亮黄色粉末。

C₆₃H₉₀N₁₄O₈的MS(ESI)计算值：1171.50，实际值：1172.51。

实施例13：细胞干扰剂，类端粒沉默干扰体1(DOT1L)的荧光偏振(FP)置换测定。

DOT1L FP置换测定采用本发明的双功能化合物2、3和6以及泊马度胺和阳性对照EPZ5676在不同浓度[M]下进行，测量单位为[M]/mP。

结果如图1所示。其表明，本发明的双功能化合物2、3和6在FP测定中通过置换异硫氰酸荧光素(FITC)探针与DOT1L结合。

实施例14：DOT1L:Cereblon(CRBN)-DNA损伤结合蛋白1(DDB1)/DOT1L二聚化测定。

将GST-CRBN-DDB1和DOT1L(6×HIS标记的)均在测定缓冲液(50mM 2-[4-(2-羟乙基)哌嗪-1-基]乙烷-1-磺酸(HEPES)pH 7.4、150mM NaCl和0.01％2、0.1％牛血清白蛋白(BSA))中稀释至125nM，并将20μL蛋白质混合物加入384孔AlphaPlate^TM 的每个孔中。然后使用工作站向DMSO储备板的每个孔走加入100nL化合物。在室温孵育1小时后，将在测定缓冲液中稀释至20ng/μl的20μL镍螯合物受体和谷胱甘肽供体珠加入每个孔中。在室温孵育1小时后，在2104酶标仪上测量发光。使用GraphPad PRISM v6分析和绘制数据，并使用‘Gaussian’分析模块确定二聚化幅度、平均值和标准差值。

通过测定评估本发明的双功能化合物2、3和6以及泊马度胺和EPZ5676导致的DOT1L:CRBN二聚化。

结果如图2所示。其表明，本发明的双功能化合物2、3和6在DOT1L和CRBN之间诱导了三元复合物的形成。

实施例15：用本发明的双功能化合物在EOL1(人嗜酸粒细胞性白血病)细胞中进行 细胞增殖测定。

以0.25×10⁶细胞/孔的密度将EOL1细胞接种到6孔板中，且然后以所示的浓度处理化合物并孵育指示的时间。用台盼蓝染色后，使用II FL自动细胞计数仪(ThermoFisher Scientific)进行细胞计数。

结果如图3A-图3E所示。他们表明，本发明的双功能化合物2-6以剂量依赖性方式且在早期时间点降低EOL1细胞活力。

结果如图4A-图4B所示。图4A显示，本发明的双功能化合物2降解EOL1细胞中的DOT1L并且以剂量依赖性(上至2.5μM)的方式。图4B显示，本发明的双功能化合物2以剂量依赖性方式且在早期时间点降低EOL1细胞活力。

结果如图6A-图6B所示。图6A显示，本发明的双功能化合物3降解EOL1细胞中的DOT1L，并且以剂量依赖性(上至5μM)的方式。图6B显示，本发明的双功能化合物3以剂量依赖性方式且在早期时间点降低EOL1细胞活力。

结果如图7所示。其表明，本发明的双功能化合物4没有以剂量依赖性方式降低EOL1细胞活力。

结果如图8A-图8B所示。其表明，本发明的双功能化合物5没有以剂量依赖性方式和在早期时间点降低EOL1细胞活力。

结果如图9A-图9B所示。图9A显示，本发明的双功能化合物6降解EOL1细胞中的DOT1L，并且以剂量依赖性(上至5μM)的方式。图9B显示，本发明的双功能化合物6以剂量依赖性方式且在早期时间点降低EOL1细胞活力。

实施例16：用本发明的双功能化合物在MV411(人髓细胞性白血病)细胞中进行细 胞增殖测定。

以0.25×10⁶细胞/孔的密度将MV411细胞接种到6孔板中，且然后以所示浓度的化合物处理并孵育指示的时间。用台盼蓝染色后，使用II FL自动细胞计数仪(ThermoFisher Scientific)进行细胞计数。

结果如图5A-图5B所示。图5A显示，本发明的双功能化合物2降解MV411细胞中的DOT1L，并且以剂量依赖性(上至10.0μM)的方式。图5B显示，本发明的双功能化合物2以剂量依赖性方式且在早期时间点降低MV411细胞活力。

结果如图10A-图10B所示。图10A显示，本发明的双功能化合物6降解MV411细胞中的DOT1L，并且以剂量依赖性((上至5.0μM)的方式。图10B显示，本发明的双功能化合物6以剂量依赖性方式且在早期时间点降低MV411细胞活力。

实施例17：用本发明的双功能化合物在SEMK2(B急性淋巴细胞白血病)细胞中进行 细胞增殖测定。

以0.25×10⁶细胞/孔的密度将SEMK2细胞接种到6孔板中，且然后用指示的浓度化合物处理并孵育指示的时间。用台盼蓝染色后，使用II FL自动细胞计数仪(ThermoFisher Scientific)进行细胞计数。

结果如图11所示。其表明，本发明的双功能化合物6以剂量依赖性方式且在早期时间点降低SEMK2细胞活力。

实施例18：用本发明的双功能化合物在THP1(急性单核细胞白血病)细胞中进行细 胞增殖测定。

以0.25×10⁶细胞/孔的密度将THP1细胞接种到6孔板中，且然后用指示浓度的化合物处理并孵育指示的时间。用台盼蓝染色后，使用II FL自动细胞计数仪(ThermoFisher Scientific)进行细胞计数。

结果如图12所示。其表明，本发明的双功能化合物6以剂量依赖性方式且在早期时间点降低THP1细胞活力。

所有专利出版物和非专利出版物都表明了本发明所属领域技术人员的技术水平。所有这些出版物(包括所引用的其任何特定部分)在此通过引用并入，其程度与每个单独的出版物被具体和单独指示为通过引用并入相同。

虽然已经参照特定实施方案描述了本发明，但是应理解，这些实施方案仅仅是本发明的原理和应用的说明。因此，应当理解，在不脱离由所附权利要求限定的本发明的精神和范围情况下，可以对本说明性实施方案进行多次修改，并且可以设计其他安排。

Claims (19)

1.一种双功能化合物，其包含结合类端粒沉默干扰体1(DOT1L)的部分和降解子，所述结合DOT1L的部分和降解子通过包含无中断的C₄至C₂₀亚烷基链或包含2至8个PEG单元的聚乙二醇(PEG)链的接头彼此共价连接，其中所述化合物具有由式(I)表示的结构：

其中：

R₁表示H、卤素、CH₃、CH₂F、CF₂H、CF₃、CN或NH₂；

R₂表示

且降解子表示结合cereblon(CRBN)的配体，

或其药学上可接受的盐或立体异构体。

2.根据权利要求1所述的双功能化合物，其中R₁是H或CN。

3.根据权利要求1或2所述的双功能化合物，其具有以下结构中的任一个：

或其药学上可接受的盐或立体异构体。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的双功能化合物，其中所述亚烷基链包含11个至15个无中断的亚烷基单元。

5.根据权利要求1-3中任一项所述的双功能化合物，其中所述接头包含3个PEG单元。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的双功能化合物，其中所述接头还包含选自以下的至少一个基团：–O–、–S–、–N(R')–、–C≡C–、–C(O)–、–C(O)O–、–OC(O)–、–OC(O)O–、–C(NOR')–、–C(O)N(R')–、–C(O)N(R')C(O)–、–C(O)N(R')C(O)N(R')–、–N(R')C(O)–、–N(R')C(O)N(R')–、–N(R')C(O)O–、–OC(O)N(R')–、–C(NR')–、–N(R')C(NR')–、–C(NR')N(R')–、–N(R')C(NR')N(R')–、–OB(Me)O–、–S(O)₂–、–OS(O)–、–S(O)O–、–S(O)–、–OS(O)₂–、–S(O)₂O–、–N(R')S(O)₂–、–S(O)₂N(R')–、–N(R')S(O)–、–S(O)N(R')–、–N(R')S(O)₂N(R')–、–N(R')S(O)N(R')–、C₃-C₁₂碳环烯、3元至12元杂环烯和5元至12元杂芳烯，其中R’是H或C₁-C₆亚烷基，并且其中所述基团可以是相同的或不同的。

7.根据权利要求1所述的双功能化合物，其中所述接头还包含

基团。

8.根据权利要求7所述的双功能化合物，其中所述接头包含基团。

9.根据权利要求1所述的双功能化合物，其中所述接头是以下结构中的任何一种：

10.根据权利要求1所述的双功能化合物，其由结构(I-5)至(I-28)中的任何一种来表示：

或其药学上可接受的盐或立体异构体。

11.根据权利要求1-10中任一项所述的双功能化合物，其中所述降解子由结构(D1a)至(D1d)中的任何一种来表示：

式中X₁是CH₂或C(O)且X₂是CH₂、NH或O。

12.根据权利要求1-11中任一项所述的双功能化合物，其由结构(I-29)至(I-44)中的任何一种表示：

或其药学上可接受的盐或立体异构体。

13.一种双功能化合物，其是结构(1)至(11)中的任何一种：

或其药学上可接受的盐或立体异构体。

14.一种药物组合物，其包含治疗有效量的根据权利要求1-13中任一项所述的双功能化合物或其药学上可接受的盐或立体异构体，以及药学上可接受的载体。

15.一种治疗由异常DOT1L活性表征或介导的疾病或病症的方法，其包括向需要其的受试者施用治疗有效量的根据权利要求1-13中任一项所述的双功能化合物或其药学上可接受的盐或立体异构体。

16.根据权利要求15所述的方法，其中所述疾病或病症是癌症。

17.根据权利要求16所述的方法，其中所述癌症是血液系统癌症。

18.根据权利要求17所述的方法，其中所述血液系统癌症为多发性骨髓瘤、淋巴瘤或白血病。

19.根据权利要求18所述的方法，其中所述白血病是急性髓系白血病、混合谱系白血病(MLL)重排的急性髓系白血病、具有核仁磷酸蛋白1(NPM1)突变的急性髓系白血病、具有DNA甲基转移酶3A(DNMT3A)突变的急性髓系白血病或急性髓系嗜酸性粒细胞白血病。