CN116585379B - 一种用于防治高尿酸血症及痛风的中药组合物、方法及应用 - Google Patents

一种用于防治高尿酸血症及痛风的中药组合物、方法及应用 Download PDF

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Abstract

本发明属于中医药技术领域，公开了一种用于防治高尿酸血症及痛风的中药组合物，所述组合物由以下重量份数的组分制得：菊花10‑80份、葛花3‑20份、玫瑰花3‑20份。本发明中药组合物经药理研究和临床应用，均表明其具有显著的治疗高尿酸血症和痛风的作用。另外在本发明中所选取的中药均为药食同源且均为水提或醇提，有较高的安全性。相比于传统的西药来讲有着安全性高，可长期足量服用等优势。与此同时，还能避免西药治疗引起的诸多肝肾、皮肤不良等反应，因此中药组合物复方配伍在高尿酸血症药物的开发中有着较好的应用前景。

Description

一种用于防治高尿酸血症及痛风的中药组合物、方法及应用
技术领域
本发明属于中医药技术领域，尤其是一种用于防治高尿酸血症及痛风的中药组合物、方法及应用。
背景技术
高尿酸血症(hyperuricacidemia，HUA)作为一种由嘌呤代谢异常所引起的常见代谢性疾病，摄取大量的高嘌呤食物在高尿酸的发生中占主要原因：人体内的尿酸量处于动态平衡中，一旦嘌呤代谢紊乱体内的尿酸失衡，从而引起HUA。HUA在正常嘌呤饮食的情况下，无论男女，当血尿酸水平超过420μmol/L，即可诊断，另外最终发展为痛风的患者约占5％～12％。HUA还与其他代谢性疾病，如肥胖、高脂血症、胰岛素抵抗的发生、发展关系密切，而且还是多种心脑血管疾病，如冠状动脉疾病、心力衰竭、心肌梗死、高血压等潜在的独立危险因素。
近年来，随着全球经济的快速发展，人们生活方式发生了翻天覆地的改变，且人口老龄化进程加快，HUA的发病率也呈现逐年上升趋势，HUA带给人们的经济负担也不断增加。HUA的流行率和发病率因地理区域的不同而存在显著差异。美国的一项流行病学调查研究发现，在1988～1944年,HUA的流行率为19.1％，而到2007～2008年，大幅增长至21.5％。相关流行病学研究表示，HUA的患病率发达国家普遍高于发展中国家，到21世纪，则迅速上升至10％，在我国沿海和某些发达城市，HUA的发病率和发达国家的患病率相差无几，约为20％。药食同源中的中药的安全性是确定的，适合长期服用。研究发现，很多药食同源中药在防治高尿酸血症和痛风中具有突出作用，并已在实践中获得广泛应用。
中医古籍中有关于HUA的描述，但未找到明确的命名，历代医家根据经验,则将其归为“白虎历节”、“痛风”、“痹证”等范畴。“历节”病名首次出现在《金匮要略》中，且对其作了详细的阐述。对于HUA的治疗,一般分为中医和西医两种手段，西药治疗可有效地降低血尿酸、控制痛风的发作，但损伤肝肾功能，胃肠反应较大，还可出现严重剥脱性皮炎及骨髓抑制；中药治疗HUA，可以减轻肝肾损伤，保护肝肾功能,减轻胃肠反应，且安全有效，对于高尿酸血症的治疗具有明显的优势。
我们在此基础上，优化筛选出了一种能够防治高尿酸血症和痛风的药食同源中药复方，能够安全有效地控制高尿酸血症、缓解痛风及其并发症的症状。
在本复方中筛选了一下几种药食同源中药分别是，菊花性甘、苦，微寒。归肺、肝经。其功能主治为散风清热，平肝明目，清热解毒。用于风热感冒，头痛眩晕，目赤肿痛，眼目昏花，疮痈肿毒等症状。玫瑰花性甘、微苦。其功能主治为行气解郁，和血，止痛。用于肝胃气痛，食少呕恶，月经不调，跌扑伤痛。葛花性甘，凉。其功能主治为解酒醒脾。治伤酒发热烦渴，不思饮食，呕逆吐酸，吐血，肠风下血。以上中药在金匮要略、伤寒论中均有记载，其通过清热利湿、化瘀泄浊、益肾健脾、活血化瘀等方法治疗高尿酸血症。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术上存在的问题，提供一种用于防治高尿酸血症及痛风的中药组合物、方法及应用。
本发明解决技术问题所采用的技术方案是：
一种用于防治高尿酸血症及痛风的中药组合物，所述组合物由以下重量份数的组分制得：
菊花10-80份、葛花3-20份、玫瑰花3-20份。
进一步地，所述组合物由以下重量份数的组分制得：
菊花50份、葛花15份、玫瑰花15份。
进一步地，所述组合物包括以下重量份数的组分：
菊花水提物45.8份、葛花水提物13.2份、玫瑰花醇提物10.1份；
或者为：菊花水提物45份、葛花水提物13份、玫瑰花醇提物10份。
进一步地，所述组合物包括以下重量份数的组分：
菊花水提物42.3份、葛花水提物14.8份、玫瑰花醇提物13.2份。
进一步地，所述菊花水提物的制备步骤为：将菊花中药材粉碎后加入10倍其重量的水，煎煮1h，过滤，再加入同样重量的水量煎煮1h，过滤，合并两次的水煎液，浓缩，烘干，粉碎，得菊花水提物；
所述葛花水提物的制备步骤为：将葛花中药材粉碎后加入10倍其重量的水，煎煮1h，过滤，再加入同样重量的水量煎煮1h，过滤，合并两次的水煎液，浓缩，烘干，粉碎，得葛花水提物；
所述玫瑰花醇提物的制备步骤为：将玫瑰中药材粉碎后加入20倍其重量的80％乙醇，加热至95℃回流提取2次，每次2.5小时，合并两次提取液，过滤，旋蒸，真空减压干燥，将提取物冻干后粉碎，得玫瑰醇提物。
如上所述的中药组合物的制备方法，包括如下步骤：
将菊花水提物、葛花水提物、玫瑰花醇提物按照重量份数准确称取后，再混合均匀，得到中药组合物。
如上所述的中药组合物在制备降低血清尿酸水平药物中的应用。
如上所述的中药组合物在制备抑制黄嘌呤氧化酶活性药物或功能食品中的应用。
如上所述的中药组合物在制备高尿酸血症和/或痛风的药物或功能食品方面中的应用。
如上所述的中药组合物在制备降低氧嗪酸钾诱导的高尿酸血症的血清尿酸、降低肝脏黄嘌呤氧化酶的活性、改善高尿酸血症所致的肝肾损伤的药物或功能食品方面中的应用。
本发明取得的有益效果是：
1、本发明中药组合物经药理研究和临床应用，均表明其具有显著的治疗高尿酸血症和痛风的作用。另外在本发明中所选取的中药均为药食同源且均为水提或醇提，有较高的安全性。相比于传统的西药来讲有着安全性高，可长期足量服用等优势。与此同时，还能避免西药治疗引起的诸多肝肾、皮肤不良等反应，因此中药组合物复方配伍在高尿酸血症药物的开发中有着较好的应用前景。
2、本发明的中药组合物所用原料均为药食同源中药，安全性高，可长期足量服用不会产生不良作用，鉴于高尿酸血症和尿酸升高引发的代谢紊乱相关疾病人群数量巨大，且本发明的中药组合物制成的复方制剂或食品具有无毒、可长期服用的特点，本发明提供的中药组合物具有良好的应用前景。
3、本发明的中药组合物所用原料低廉，制备简便，使用方便，具有成本低廉，便于应用的优势。
4、本发明提供的中药组合物由菊花、玫瑰花、葛花三味药食同源的中药组成。组方的形成系在中药性味归经和功效应用的基础上，根据现代药理和临床研究结果，辨证分析，并经重组优化和药效验证而成。方中玫瑰花仁具有增强免疫、抗肿瘤、镇痛抗炎、调节糖脂代谢、降血压、抗氧化、抗衰老、美白等药理活性。菊花性甘、苦，寒，归肺、肝经；具有疏散风热，清肺润燥，清肝明目的功效；常用于风热感冒，肺热燥咳，头晕头痛，目赤昏花。现代药理研究表明，菊花具有降血糖、抗炎、抗菌、抗病毒、抗衰老、抗癌、降血压、降血脂、通便利尿等生物活性，同时具有抑制黄嘌呤氧化酶的活性。葛花具有镇痛、抗炎、增强免疫、保肝、抗胃溃疡与肠损伤、抗肿瘤等药理活性。
本发明根据高尿酸血症产生的根本原因和产生的并发症，巧妙组方，通过组分之间的配伍，增强中药脾胃代谢机能，加速代谢排泄，使体内内源性代谢失衡状态得到快速复原。并通过恢复及加强人体的机能，有效抑制尿酸的生成，加速尿酸的处置排泄，控制并发症，标本兼治，实现治疗高尿酸血症和痛风的目的。
5、本发明中药组合物在体外实验中对黄嘌呤氧化酶有很好的抑制效果，具有协同作用，同时在体内实验中能够显著性的降低小鼠的血清尿酸，并且对不同组合物的比例进行筛选，筛选出产生较好协同作用的组合物，也为目前中药创新和发展药物的研究拓展了新的思路和方法。
6、本发明中药组合物是一种用于防治高尿酸血症及痛风的药食同源中药组合物，能够应用在制备防治高尿酸血症及痛风的药物或食品。确切的讲是治疗以高尿酸和痛风为主表现或诱发的代谢紊乱综合征的中药复合物。
7、本发明的中药组合物可采用常规制备方法制备成制剂或食品，经药理研究和临床应用，表明其具有显著的治疗高尿酸血症和痛风的作用。
8、本发明优化筛选出了一种能够防治高尿酸血症和痛风的药食同源中药复方，能够安全有效地控制高尿酸血症、缓解痛风及其并发症的症状。在本复方中筛选了一下几种药食同源中药分别是，菊花性甘、苦，微寒。归肺、肝经。其功能主治为散风清热，平肝明目，清热解毒。用于风热感冒，头痛眩晕，目赤肿痛，眼目昏花，疮痈肿毒等症状。玫瑰花性甘、微苦。其功能主治为行气解郁，和血，止痛。用于肝胃气痛，食少呕恶，月经不调，跌扑伤痛。葛花性甘，凉。其功能主治为解酒醒脾。治伤酒发热烦渴，不思饮食，呕逆吐酸，吐血，肠风下血。以上中药在金匮要略、伤寒论中均有记载，其通过清热利湿、化瘀泄浊、益肾健脾、活血化瘀等方法治疗高尿酸血症。本发明的中药组合物能够用于制备治疗或预防以高尿酸血症为主要表现的高尿酸血症等各种病症和以高尿酸血症和痛风性关节炎为主要表现的痛风。
附图说明
图1为本发明中各组小鼠尿液尿酸含量的具体变化图；
图2为本发明中中药组合物对高尿酸血症小鼠血清尿酸含量(UA)活性的影响图；
图3为本发明中中药组合物对高尿酸血症小鼠血清黄嘌呤氧化酶(XOD)活性的影响图；
图4为本发明中中药组合物对高尿酸血症小鼠肝脏黄嘌呤氧化酶(XOD)活性的影响图；
图5为本发明中中药组合物对高尿酸血症小鼠肝指数的影响图；
图6为本发明中中药组合物对高尿酸血症小鼠血清谷草转氨酶(AST)的影响图；
图7为本发明中中药组合物对高尿酸血症小鼠血清谷丙转氨酶(ALT)的影响图；
图8为本发明中中药组合物对高尿酸血症小鼠肾指数的影响图；
图9为本发明中中药组合物对高尿酸血症小鼠血清肌酐(CRE)水平的影响图；
图10为本发明中中药组合物对高尿酸血症小鼠血清尿素氮(BEN)的影响图；
图11为本发明中中药组合物对高尿酸血症小鼠肝肾组织病理学(肝指数)的影响图(肝组织HE染色×(400))；
图12为本发明中中药组合物对高尿酸血症小鼠肝肾组织病理学(肾指数)的影响图(肾组织HE染色×(400))。
具体实施方式
为更好理解本发明，下面结合实施例对本发明做进一步地详细说明，但是本发明要求保护的范围并不局限于实施例所表示的范围。
本发明中所使用的原料，如无特殊说明，均为常规市售产品，本发明中所使用的方法，如无特殊说明，均为本领域常规方法，本发明所使用的各物质质量均为常规使用质量。
一种用于防治高尿酸血症及痛风的中药组合物，所述组合物由以下重量份数的组分制得：
菊花10-80份、葛花3-20份、玫瑰花3-20份。
较优地，所述组合物由以下重量份数的组分制得：
菊花50份、葛花15份、玫瑰花15份。
较优地，所述组合物包括以下重量份数的组分：
菊花水提物45.8份、葛花水提物13.2份、玫瑰花醇提物10.1份；
或者为：菊花水提物45份、葛花水提物13份、玫瑰花醇提物10份。
较优地，所述组合物包括以下重量份数的组分：
菊花水提物42.3份、葛花水提物14.8份、玫瑰花醇提物13.2份。
较优地，所述菊花水提物的制备步骤为：将菊花中药材粉碎后加入10倍其重量的水，煎煮1h，过滤，再加入同样重量的水量煎煮1h，过滤，合并两次的水煎液，浓缩，烘干，粉碎，得菊花水提物；
所述葛花水提物的制备步骤为：将葛花中药材粉碎后加入10倍其重量的水，煎煮1h，过滤，再加入同样重量的水量煎煮1h，过滤，合并两次的水煎液，浓缩，烘干，粉碎，得葛花水提物；
所述玫瑰花醇提物的制备步骤为：将玫瑰中药材粉碎后加入20倍其重量的80％乙醇，加热至95℃回流提取2次，每次2.5小时，合并两次提取液，过滤，旋蒸，真空减压干燥，将提取物冻干后粉碎，得玫瑰醇提物。
如上所述的中药组合物的制备方法，包括如下步骤：
将菊花水提物、葛花水提物、玫瑰花醇提物按照重量份数准确称取后，再混合均匀，得到中药组合物。
如上所述的中药组合物在制备降低血清尿酸水平药物中的应用。
如上所述的中药组合物在制备抑制黄嘌呤氧化酶活性药物或功能食品中的应用。
如上所述的中药组合物在制备高尿酸血症和/或痛风的药物或功能食品方面中的应用。
如上所述的中药组合物在制备降低氧嗪酸钾诱导的高尿酸血症的血清尿酸、降低肝脏黄嘌呤氧化酶的活性、改善高尿酸血症所致的肝肾损伤的药物或功能食品方面中的应用。
具体地，相关制备及检测如下：
实施例1
一种用于防治高尿酸血症及痛风的中药组合物，所述组合物包括以下组分：菊花水提物、葛花水提物、玫瑰花醇提物；
上述提取物的制备方法为：
菊花水提物的制备步骤为：将菊花中药材粉碎后加入10倍其重量的水，煎煮1h，过滤，再加入同样重量的水量煎煮1h，过滤，合并两次的水煎液，浓缩，烘干，粉碎，得菊花水提物；
葛花水提物的制备步骤为：将葛花中药材粉碎后加入10倍其重量的水，煎煮1h，过滤，再加入同样重量的水量煎煮1h，过滤，合并两次的水煎液，浓缩，烘干，粉碎，得葛花水提物；
玫瑰花醇提物的制备步骤为：将玫瑰中药材粉碎后加入20倍其重量的80％乙醇，加热至95℃回流提取2次，每次2.5小时，合并两次提取液，过滤，旋蒸，真空减压干燥，将提取物冻干后粉碎，得玫瑰醇提物。
实施例2
一种用于防治高尿酸血症及痛风的中药组合物，所述组合物包括以下重量份数的组分、制备方法为：
按菊花水提物45.8重量份、葛花水提物13.2重量份、玫瑰花醇提物10.1重量份，称取提取物，混匀，得到中药组合物。此提取物直接可以包装、冲服或制成各种中药制剂或食品。
所述菊花水提物、葛花水提物、玫瑰花醇提物的制备方法同实施例1。
实施例3
一种用于防治高尿酸血症及痛风的中药组合物，所述组合物包括以下重量份数的组分、制备方法为：
按菊花水提物42.3重量份、葛花水提物14.8重量份、玫瑰花醇提物13.2重量份，称取提取物，混匀，得到中药组合物。此提取物直接可以包装、冲服或制成各种中药制剂或食品。
所述菊花水提物、葛花水提物、玫瑰花醇提物的制备方法同实施例1。
实施例4
一种特殊营养食品的制作，步骤如下：
将实施例2或3方法制备的三药组合物100g，加入200g糊精，按碳水化合物含量添加足够量的碳水化合物(如蔗糖和膳食纤维)、维生素C(按每日80mg添加)和D(按每日8mg添加)，混匀，50℃干燥2小时，得到既有利于降尿酸又能补充能量的补充能量类运动营养食品。
实施例5
一种颗粒剂的制作，步骤如下：
将实施例2或3方法制备的三药组合物100g，加糊精200g，混匀，加入适量60％乙醇制成软材，过24目筛制粒，50℃干燥2小时，干燥颗粒过30目筛整粒，分装，得到颗粒剂。
一种防治高尿酸血症的中药组合物，其原料及重量份数如下：在三药组合物中菊花
10-80份、葛花3-20份、玫瑰花3-20份。
较优地，所述原材料的重量配比如下：菊花水提物45.8份、葛花水提物13..2份、玫瑰花醇提物10.1份。
本发明具有预防治疗高尿酸血症的中药组合物的药效试验证明了其防治高尿酸的作用，具体数据如下：
一、中药组合物对氧嗪酸钾与次黄嘌呤联合诱导的高尿酸血症模型小鼠的作用
1.材料与仪器
1.1动物：SPF级昆明小鼠72只，雄性，体重18～20g，由河南斯克贝斯生物科技股份有限公司提供，实验动物饲养许可证号：SYXK(津)2019-0004。
1.2药物与制备
三药组合物一：菊花水提物45.8份、葛花水提物13.2份、玫瑰花醇提物10.1份。
三药组合物二：菊花水提物42.3份、葛花水提物14.8份、玫瑰花醇提物13.2份。
制备方法：将菊花、玫瑰花、葛花三味中药材粉碎后加入20倍其重量的80％乙醇，加热至95℃回流提取2次，每次2.5小时，合并两次提取液，过滤，旋蒸，真空减压干燥得提取物。将提取物冻干后，用双蒸水进行超声溶解，加热回流后得水提物。
1.3试剂与仪器
1.3.1试剂别嘌呤醇；苯溴马隆；氧嗪酸钾；羧甲基纤维素钠；尿酸(UA)试剂盒、肌酐试剂盒(CRE)、尿素氮(BUN)试剂盒、谷丙转氨酶(ALT)试剂盒，谷草转氨酶(AST)试剂盒，以上试剂盒均由南京建成生物工程研究所提供。
1.3.2仪器酶标仪；电子天平；微孔板恒温振荡器。
2.方法与结果
2.1动物分组与造模
雄性昆明小鼠，随机分9组(n＝8)：正常组、模型组、别嘌呤醇组、苯溴马隆组、菊花组、玫瑰花组、葛花组、中药组合物一组、中药组合物二组。
小鼠适应性饲养一周后，按体重随机分组，每组8只。除正常对照组外，其余小鼠于每天早上9:00腹腔注射氧嗪酸钾(PO)100mg/kg，灌胃次黄嘌呤(HX)500mg/kg用于建立高尿酸血症模型。正常对照组小鼠腹腔注射和灌胃给予等体积生理盐水。实验第3天，给药组于造模后1h分别给予相应药物。阳性药组给予别嘌呤醇(10mg/kg)，中药处方不同比例组给药剂量按照处方剂量换算为小鼠等效剂量，其中，菊花水提物6.17mg/kg、葛花水提物6.32mg/kg、玫瑰醇提物3.11mg/kg；在三药组合物一中剂量为12mg/kg其中(菊花水提物：葛花水提物：玫瑰醇提物的质量比为4:1:1)，在三药组合物二中剂量为12mg/kg(菊花水提物：葛花水提物：玫瑰醇提物的质量比为213.98:122.78:78.95)。正常对照组和高尿酸血症组灌胃给予等体积的生理盐水。每日灌胃一次，连续5天。末次给药前，禁食不禁水24h最后一天给予造模药物之后1小时取血，离心取上清。
2.2最后一天给予造模药物后一小时，取血，血清13500rpm离心20min，试剂盒测定血清UA、CRE、BEN、ALT、AST，处死小鼠，取肝、肾，称重。中药组合物对高尿酸血症小鼠各项指标的影响
2.2.1中药组合物对高尿酸血症小鼠尿液尿酸水平的影响
尿酸是一种含有碳、氮、氧、氢的杂环化合物，其分子式为C5H4N4O3，分子量为168.1103g/mol.。体内尿酸的生成量和排泄量不平衡，导致血尿酸升高引起的疾病。如图1所示，自第四天开始各组尿酸含量显著上升，经过几天治疗后各组尿酸含量开始下降，其中APL效果最为显著，中药组合物治疗效果也较为显著。
2.2.2中药组合物对高尿酸血症小鼠血清尿酸水平的影响
如图2所示，与对照组相比，模型组血清尿酸含量显著增加，阳性药组别嘌呤醇、苯溴马隆组显著降低，说明该模型建立成功。中药单药组有一定的降尿酸作用，但远远比不上中药组合物组，说明中药组合物降尿酸作用更为明显。从图2可以看出，在组方剂量下(大部分低于药典规定的最低剂量或为最低剂量)，这些药食同源中药的降尿酸作用非常有限，仅有葛花表现出明显的降尿酸作用。与其相比三药合用的降尿酸作用较为突出，与模型组比较，血尿酸水平显著降低，且其作用明显优于单独给药。注：与正常组比较，P#＜0.0001；与模型组对比，P**＜0.0001
同时也可以看出，菊花水提物、葛花水提物、玫瑰花醇提物三者之间具有协同作用，能够协同提高所制得中药的降尿酸作用。
2.2.3中药组合物对高尿酸血症小鼠XOD水平的影响
对痛风和高尿酸血症来说，降尿酸作用是优先考虑事项，而黄嘌呤氧化酶抑制作用强弱则体现从根本上抑制尿酸生成的效果，对痛风和高尿酸血症的治疗具有重要意义。在图3中我们可以看到，模型组血清中XOD含量显著上升，阳性药组使XOD含量显著下降，其中以苯溴马隆效果最优，在单药剂量中葛花对于血清XOD的抑制作用最为明显，在中药组合物中则是三药组合物二的作用更为明显。因为是短期模型，血清中的XOD抑制作用较肝脏XOD的抑制作用更为明显。影响血尿酸水平的因素较多，我们通过从根本上抑制尿酸的生成而降低尿酸水平，能够排除饮水量大小等外部因素对降尿酸效果的影响，因而对大多数患者来说最为有效(目前市场上的一线化学药物大多为黄嘌呤氧化酶抑制剂即能说明这一点)，因此，在保证较低的血尿酸水平下保留较低的黄嘌呤氧化酶抑制活性是我们筛选中药组方的主要依据。
注：与正常组比较，P#＜0.0001；与模型组对比，P**＜0.0001，P*＜0.001；
同时也可以看出，菊花水提物、葛花水提物、玫瑰花醇提物三者之间具有协同作用，能够协同提高所制得中药对血清XOD的抑制作用。
图4表示的是肝脏中XOD的含量。与空白组相比，模型组肝脏中XOD的含量显著上升，分别给予阳性药物别嘌呤醇或者苯溴马隆后，抑制了造模药物引起的肝脏中XOD的含量显著上升，其中，别嘌呤醇作用最优。在给药组中，三种单一提取物均没有表现出抑制肝脏中XOD的含量上升的活性；而三药组合物一、二均抑制了造模药物引起的肝脏中XOD的含量显著上升，其活性与阳性药物苯溴马隆类似。说明三药组合物一、二具有治疗高尿酸血症的作用。同时也可以看出，菊花水提物、葛花水提物、玫瑰花醇提物三者之间具有协同作用，能够协同提高所制得中药的降尿酸作用。
2.2.4中药组合物对高尿酸血症小鼠肝脏和肾脏的影响
肝指数是指肝湿重与体重的比值，肾指数是指两肾湿重与体重的比值，结果如图5、图8所示，各组小鼠的肾指数没有统计学上的差异，但模型组肝肾指数比正常组升高，说明造摸后肝肾有一定的炎症发生，而给药组降低了肝肾指数，说明给药后对肝肾有一定的保护作用。
注：与正常组比较，P#＜0.01；与模型组对比，P*＜0.001；
谷草转氨酶(AST)和谷丙转氨酶(ALT)是肝脏功能的重要指标。ALT在肝细胞中分布最多，其升高是急性肝细胞损害的敏感标志。AST主要分布在心肌和肝脏细胞中，正常时血清中的AST含量较低，但相应细胞受损时，其血清浓度可升高。
如图6、图7所示，与正常组相比，模型组的血清AST、ALT活性有显著性的升高，表明高尿酸血症模型组的肝脏功能受损；与模型组相比阳性药组与中药给药组能在一定程度上降低AST、和ALT的含量，该结果表明中药组合物能够有效保护高尿酸血症引起的肝脏损伤。
注：与正常组比较，P#＜0.01；与模型组对比，P*＜0.001；
血清肌酐(CRE)和尿素氮(BEN)是肾功能重要的评价指标，其中CRE主要由肾小球滤过并排出，当肾小球滤过率下降时，血清CRE迅速上升，因此血清CRE明显高于正常时，肾功能受损。BUN是体内氨基酸分解代谢的产物，经过肾小球自由滤过随尿排出，血清BUN浓度增加，表示肾功能受损。
如图9、图10所示，与正常组相比，模型组的CRE有所升高，给药组的CRE均降低，苯溴马隆和中药组合物组均能显著降低血清CRE这表明药物可能增加了排尿量使CRE其降低，但并不影响肾脏的排毒功能。与正常组比较，模型组的BEN有显著性差异，但别嘌呤醇的血清BEN有显著性的升高，另外APL也会严重影响肾功能，而中药组合物的血清BEN与正常组和模型组比较有显著性的下降，说明中药组合物对于尿素氮(BEN)的作用优于阳性药。
注：与正常组比较，P#＜0.0001；与模型组对比，P**＜0.0001
同时也可以看出，菊花水提物、葛花水提物、玫瑰花醇提物三者之间具有协同作用。
2.2.5中药组合物对高尿酸血症小鼠HE染色的影响
如图11所示，空白组肝组织结构完整，细胞排列整齐，血窦走行脉络清晰。模型组肝组织可见肝细胞气球样变，出现部分水肿坏死、肝细胞胞质内出现脂肪空泡，肝窦变窄并伴有明显炎性细胞浸润。与模型组相比，别嘌呤醇组小鼠肝脏结构完整，与空白组类似，说明别嘌呤醇可以改善了造模药物引起的肝脏病变。与模型组相比，苯溴马隆并没有改善小鼠肝脏病理变化，甚至加剧了肝脏病变，说明苯溴马隆有一定的肝毒性。在给药组中，与模型组相比，菊花、玫瑰花、葛花、三药组合物一及三药组合物二均改善了高尿酸血症引起的肝脏病理变化，说明菊花、玫瑰花、葛花、三药组合物一及三药组合物二具有良好的治疗高尿酸血症引起的肝脏病变的活性。
如图12所示，空白组肾单位结构完整，肾小管结构清晰，细胞形态正常且饱满。模型组胞质疏松，部分严重至空泡化，肾小管扩张并产生局部炎性细胞浸润，肾小球边缘模糊。阳性组广泛肾小管扩张，肾小球萎缩变形，炎性细胞浸润，管腔内可见炎性细胞和坏死细胞碎片，说明别嘌呤醇具有严重肾毒性。苯溴马隆肾脏损伤程度与模型类似，说明苯溴马隆无严重肾毒性。在给药组中，与模型组相比，菊花、玫瑰花、葛花、三药组合物一及三药组合物二均改善了高尿酸血症引起的肾脏病理变化，说明菊花、玫瑰花、葛花、三药组合物一及三药组合物二具有良好的治疗高尿酸血症引起的肾脏病变的活性。
综述，三药组合物一和二均能显著降低高尿酸血症中的尿酸水平，能显著改善高尿酸血症引起的肝脏及肾脏病变；其中，三药组合物一的作用效果更佳。三药组合物一和二具有开发成治疗或者辅助治疗高尿酸血症的药物或者功能食品的潜力。
二、中药组合物在体外酶水平对于黄嘌呤氧化酶的抑制作用
1.材料与仪器
1.1材料
菊花、玫瑰花、葛花购自北京同仁堂有限公司，别嘌呤醇；黄嘌呤；黄嘌呤氧化酶；磷酸氢二钾；磷酸二氢钾；EDTA-2Na；氢氧化钠。
1.2仪器
酶标仪；酸碱指示计；旋转蒸发器。
1.3溶液的配制
磷酸缓冲液(0.2mol/L，pH＝7.4，PB)的配制：称取K2HPO4·3H2O 9.742g，KH2 PO40.995g，EDTA-2Na 0.09305g，用蒸馏水溶解，0.1mol/LNaOH调节pH，并定容于250mL容量瓶中，再倒入试剂瓶中，可在4℃长时间保存。
黄嘌呤溶液：精密称量黄嘌呤，用0.1mol/LNaOH充分溶解，再加入磷酸缓冲液进行稀释。
黄嘌呤氧化酶溶液:将XOD用一定量的磷酸缓冲液稀释至3U/L。
别嘌呤醇溶液：精密称取一定量的别嘌呤醇，用DMSO溶解。
样品溶液：分别称取一定量的中药提取物溶于DMSO，过0.45μM的膜。
2.方法与结果
2.1组合物抑制黄嘌呤氧化酶实验
在96孔板中加入98μL的磷酸缓冲液，再加入不同浓度配比的组合物和0.05mM的黄嘌呤溶液，37℃孵育5min，294nm测加药组的吸光度为OD3，不加抑制剂的反应体系为对照组，检测的吸光度为OD1，加入黄嘌呤氧化酶3U/L，37℃条件下反应30min，294nm下测加药组的吸光度OD4，以不加抑制剂的反应体系为对照组OD2，每组实验三个平行。
抑制率＝(1-(OD4-OD3)/(OD2-OD1))*100％
2.2采用逐步筛选法确定中药组合物对黄嘌呤氧化酶的抑制作用
逐步筛选法是以两药联合为起点，确定最佳剂量，加入第三味药，确定三味药物的剂量，指标是以药物对黄嘌呤氧化酶的抑制率为观测点，计算联合指数(CI)。
根据每种药物的IC50，确定药物的最大浓度，每个药物五个水平，进行联合，运用2.1的实验方法测定对黄嘌呤氧化酶的抑制效果。
两药联合结果如表1-1至表1-2所示，玫瑰醇提物200μg/mL和葛花水提物200μg/mL具有很好的抑制作用，但CI均大于1，因此不采用。
两药联合结果如表2-1至表2-2所示，当菊花水提物200μg/mL和葛花水提物50μg/mL时，抑制率为76.78％，具有很好的抑制作用，且CI值较低，因此采用。
两药联合结果如表3-1至表3-2所示，玫瑰醇提物200μg/mL和菊花水提物100μg/mL也具有很好的抑制作用，但CI大于1，因此不采用。
三药联合结果如表4所示，菊花水提物200μg/mL和葛花水提物50μg/mL联合玫瑰醇提物50μg/mL时，此时得到最优抑制率98.02％，且具有良好的协同效果。
表1-1玫瑰醇提物和葛花水提物联合抑制黄嘌呤氧化酶的作用(％)
表1-2玫瑰醇提物和葛花水提物联合抑制黄嘌呤氧化酶的CI值
表2-1菊花水提物和葛花水提物联合抑制黄嘌呤氧化酶的作用(％)
表2-2菊花水提物和葛花水提物联合抑制黄嘌呤氧化酶的CI值
表3-1玫瑰醇提物和菊花水提物联合抑制黄嘌呤氧化酶的作用(％)
表3-2玫瑰醇提物和葛花水提物联合抑制黄嘌呤氧化酶的CI值
表4玫瑰醇提物、菊花水提物、葛花水提物联合抑制黄嘌呤氧化酶的作用(％)
2.3采用均匀设计法确定中药组合物对黄嘌呤氧化酶的抑制作用
如表5至表7所均匀实验设计相较于全面试验和正交试验设计的最主要的优点是能够大幅度的较少实验次数，缩短试验周期，从而大量节约人工和时间。对于三因素八水平即83试验，如果进行全面试验需做2987次试验，利用正交表L64安排试验至少要做64次试验，但用均匀设计表U8安排实验，只需做8次试验即可。因此均匀设计法能有效解决实验中的筛选问题。采用DPS软件对实验数据进行二次多项式逐步回归分析，得方程为Y＝-12.45615827+2.5117027210*X1+1.2869487096*X2-0.17765990236*X1*X2+0.31141740733*X1*X3-0.03877598241*X2*X3，解得X1＝249.51，X2＝73.15，X3＝64.88。
换算成百分制为菊花水提物42.3份、葛花水提物14.8份、玫瑰花醇提物13.2份。验证均匀设计法得到的最佳配比，对黄嘌呤氧化酶的抑制率为98.02％，运用CompuSyn软件计算CI值，得0.64，其小于1，因此具有协同作用。菊花水提物42.3份、葛花水提物14.8份、玫瑰花醇提物13.2份之间具有协同作用，能够协同提高所制备得到的中药组合物对黄嘌呤氧化酶的抑制作用。
表5三因素八水平表
表6三因素八水平均匀设计表
表7三因素八水平均匀设计使用表
尽管为说明目的公开了本发明的实施例，但是本领域的技术人员可以理解：在不脱离本发明及所附权利要求的精神和范围内，各种替换、变化和修改都是可能的，因此，本发明的范围不局限于实施例所公开的内容。

Claims (7)

1.一种用于防治高尿酸血症及痛风的中药组合物，其特征在于：所述组合物由以下重量份数的组分组成：
菊花水提物45.8份、葛花水提物13.2份、玫瑰花醇提物10.1份；
所述菊花水提物的制备步骤为：将菊花中药材粉碎后加入10倍其重量的水，煎煮1 h，过滤，再加入同样重量的水量煎煮1 h，过滤，合并两次的水煎液，浓缩，烘干，粉碎，得菊花水提物；
所述葛花水提物的制备步骤为：将葛花中药材粉碎后加入10倍其重量的水，煎煮1 h，过滤，再加入同样重量的水量煎煮1 h，过滤，合并两次的水煎液，浓缩，烘干，粉碎，得葛花水提物；
所述玫瑰花醇提物的制备步骤为：将玫瑰中药材粉碎后加入20倍其重量的80％乙醇，加热至95℃回流提取2次，每次2.5小时，合并两次提取液，过滤，旋蒸，真空减压干燥，将提取物冻干后粉碎，得玫瑰花醇提物。
2.一种用于防治高尿酸血症及痛风的中药组合物，其特征在于：所述组合物由以下重量份数的组分组成：
菊花水提物45份、葛花水提物13份、玫瑰花醇提物10份；
所述菊花水提物的制备步骤为：将菊花中药材粉碎后加入10倍其重量的水，煎煮1 h，过滤，再加入同样重量的水量煎煮1 h，过滤，合并两次的水煎液，浓缩，烘干，粉碎，得菊花水提物；
所述葛花水提物的制备步骤为：将葛花中药材粉碎后加入10倍其重量的水，煎煮1 h，过滤，再加入同样重量的水量煎煮1 h，过滤，合并两次的水煎液，浓缩，烘干，粉碎，得葛花水提物；
所述玫瑰花醇提物的制备步骤为：将玫瑰中药材粉碎后加入20倍其重量的80％乙醇，加热至95℃回流提取2次，每次2.5小时，合并两次提取液，过滤，旋蒸，真空减压干燥，将提取物冻干后粉碎，得玫瑰花醇提物。
3.一种用于防治高尿酸血症及痛风的中药组合物，其特征在于：所述组合物由以下重量份数的组分组成：
菊花水提物42.3份、葛花水提物14.8份、玫瑰花醇提物13.2份；
所述菊花水提物的制备步骤为：将菊花中药材粉碎后加入10倍其重量的水，煎煮1 h，过滤，再加入同样重量的水量煎煮1 h，过滤，合并两次的水煎液，浓缩，烘干，粉碎，得菊花水提物；
所述葛花水提物的制备步骤为：将葛花中药材粉碎后加入10倍其重量的水，煎煮1 h，过滤，再加入同样重量的水量煎煮1 h，过滤，合并两次的水煎液，浓缩，烘干，粉碎，得葛花水提物；
所述玫瑰花醇提物的制备步骤为：将玫瑰中药材粉碎后加入20倍其重量的80％乙醇，加热至95℃回流提取2次，每次2.5小时，合并两次提取液，过滤，旋蒸，真空减压干燥，将提取物冻干后粉碎，得玫瑰花醇提物。
4.如权利要求1至3任一项所述的中药组合物的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：
将菊花水提物、葛花水提物、玫瑰花醇提物按照重量份数准确称取后，再混合均匀，得到中药组合物。
5.如权利要求1至3任一项所述的中药组合物在制备降低血清尿酸水平药物中的应用。
6.如权利要求1至3任一项所述的中药组合物在制备治疗高尿酸血症和/或痛风的药物方面中的应用。
7.如权利要求1至3任一项所述的中药组合物在制备降低氧嗪酸钾诱导的高尿酸血症的血清尿酸、改善高尿酸血症所致的肝肾损伤的药物方面中的应用。
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