CN116570753B - 一种组织再生型生物膜组织复合物及制备方法及应用 - Google Patents
一种组织再生型生物膜组织复合物及制备方法及应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN116570753B CN116570753B CN202310856867.6A CN202310856867A CN116570753B CN 116570753 B CN116570753 B CN 116570753B CN 202310856867 A CN202310856867 A CN 202310856867A CN 116570753 B CN116570753 B CN 116570753B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- tissue
- type
- specific binding
- collagen
- binding peptide
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 title claims abstract description 68
- 230000017423 tissue regeneration Effects 0.000 title claims abstract description 57
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 46
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims abstract description 161
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 114
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 claims abstract description 104
- 102000012422 Collagen Type I Human genes 0.000 claims abstract description 66
- 108010022452 Collagen Type I Proteins 0.000 claims abstract description 66
- 108010042086 Collagen Type IV Proteins 0.000 claims abstract description 54
- 102000004266 Collagen Type IV Human genes 0.000 claims abstract description 54
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 claims abstract description 42
- -1 zinc ion compound Chemical class 0.000 claims abstract description 40
- 229920002385 Sodium hyaluronate Polymers 0.000 claims abstract description 34
- 229940010747 sodium hyaluronate Drugs 0.000 claims abstract description 34
- YWIVKILSMZOHHF-QJZPQSOGSA-N sodium;(2s,3s,4s,5r,6r)-6-[(2s,3r,4r,5s,6r)-3-acetamido-2-[(2s,3s,4r,5r,6r)-6-[(2r,3r,4r,5s,6r)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2- Chemical compound [Na+].CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 YWIVKILSMZOHHF-QJZPQSOGSA-N 0.000 claims abstract description 34
- 239000001866 hydroxypropyl methyl cellulose Substances 0.000 claims abstract description 32
- 229920003088 hydroxypropyl methyl cellulose Polymers 0.000 claims abstract description 32
- UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N hydroxypropyl methyl cellulose Chemical compound OC1C(O)C(OC)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(OC2C(C(O)C(OC3C(C(O)C(O)C(CO)O3)O)C(CO)O2)O)C(CO)O1 UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 32
- 235000010979 hydroxypropyl methyl cellulose Nutrition 0.000 claims abstract description 32
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 31
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 claims abstract description 30
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 claims abstract description 23
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims abstract description 19
- 239000002131 composite material Substances 0.000 claims abstract description 14
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 claims abstract description 10
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 8
- 210000001691 amnion Anatomy 0.000 claims description 182
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 60
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 claims description 47
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 claims description 47
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 claims description 47
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 claims description 45
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 36
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims description 28
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 claims description 26
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 26
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 25
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 25
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 21
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 20
- JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L zinc dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Zn+2] JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 20
- 230000008439 repair process Effects 0.000 claims description 14
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 claims description 13
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 claims description 13
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 claims description 13
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 claims description 13
- APKFDSVGJQXUKY-KKGHZKTASA-N Amphotericin-B Natural products O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1C=CC=CC=CC=CC=CC=CC=C[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-KKGHZKTASA-N 0.000 claims description 12
- APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N amphotericin B Chemical compound O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N 0.000 claims description 12
- 229960003942 amphotericin b Drugs 0.000 claims description 12
- 230000002980 postoperative effect Effects 0.000 claims description 10
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 claims description 10
- 235000005074 zinc chloride Nutrition 0.000 claims description 10
- 239000011592 zinc chloride Substances 0.000 claims description 10
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 9
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 claims description 9
- 210000003954 umbilical cord Anatomy 0.000 claims description 8
- 230000000843 anti-fungal effect Effects 0.000 claims description 5
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 claims description 5
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 claims description 5
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 claims description 5
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 4
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 4
- 230000000399 orthopedic effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000002791 soaking Methods 0.000 claims description 3
- NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L zinc sulfate Chemical compound [Zn+2].[O-]S([O-])(=O)=O NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 3
- 229960001763 zinc sulfate Drugs 0.000 claims description 3
- 229910000368 zinc sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims 1
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 abstract description 29
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 abstract description 29
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 25
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 abstract description 12
- 239000012567 medical material Substances 0.000 abstract description 3
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 39
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 25
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 23
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 23
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 23
- 210000001136 chorion Anatomy 0.000 description 18
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 17
- 210000002435 tendon Anatomy 0.000 description 17
- 231100000241 scar Toxicity 0.000 description 15
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 13
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 13
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 13
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 12
- 206010040844 Skin exfoliation Diseases 0.000 description 12
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 12
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 12
- 210000005252 bulbus oculi Anatomy 0.000 description 11
- 210000001508 eye Anatomy 0.000 description 11
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 11
- 210000004087 cornea Anatomy 0.000 description 10
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 10
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 10
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 10
- 241000283977 Oryctolagus Species 0.000 description 9
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 9
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 9
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 8
- 230000009471 action Effects 0.000 description 8
- 210000001951 dura mater Anatomy 0.000 description 8
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 8
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 7
- 108010025020 Nerve Growth Factor Proteins 0.000 description 7
- 102000007072 Nerve Growth Factors Human genes 0.000 description 7
- QGMRQYFBGABWDR-UHFFFAOYSA-M Pentobarbital sodium Chemical compound [Na+].CCCC(C)C1(CC)C(=O)NC(=O)[N-]C1=O QGMRQYFBGABWDR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 7
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 7
- 239000003889 eye drop Substances 0.000 description 7
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 7
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 7
- 102000009024 Epidermal Growth Factor Human genes 0.000 description 6
- 102100021866 Hepatocyte growth factor Human genes 0.000 description 6
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 6
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 6
- 239000006196 drop Substances 0.000 description 6
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 6
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 6
- 239000003900 neurotrophic factor Substances 0.000 description 6
- 229960001412 pentobarbital Drugs 0.000 description 6
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 5
- 210000002219 extraembryonic membrane Anatomy 0.000 description 5
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 5
- 239000004745 nonwoven fabric Substances 0.000 description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 206010063560 Excessive granulation tissue Diseases 0.000 description 4
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 4
- 238000010382 chemical cross-linking Methods 0.000 description 4
- 108091006116 chimeric peptides Proteins 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 4
- 210000003414 extremity Anatomy 0.000 description 4
- 229940012356 eye drops Drugs 0.000 description 4
- 210000000720 eyelash Anatomy 0.000 description 4
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000006870 function Effects 0.000 description 4
- 210000001126 granulation tissue Anatomy 0.000 description 4
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 238000011587 new zealand white rabbit Methods 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 4
- 210000003371 toe Anatomy 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 description 3
- 102400001368 Epidermal growth factor Human genes 0.000 description 3
- 101800003838 Epidermal growth factor Proteins 0.000 description 3
- 102000003745 Hepatocyte Growth Factor Human genes 0.000 description 3
- 108090000100 Hepatocyte Growth Factor Proteins 0.000 description 3
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 3
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 3
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 3
- 125000002057 carboxymethyl group Chemical group [H]OC(=O)C([H])([H])[*] 0.000 description 3
- 229940096422 collagen type i Drugs 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 3
- 229940116977 epidermal growth factor Drugs 0.000 description 3
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 3
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 3
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 3
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 3
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 3
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 239000003223 protective agent Substances 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 238000012772 sequence design Methods 0.000 description 3
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 3
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 description 3
- OBMZMSLWNNWEJA-XNCRXQDQSA-N C1=CC=2C(C[C@@H]3NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](NC(=O)N(CC#CCN(CCCC[C@H](NC(=O)[C@@H](CC4=CC=CC=C4)NC3=O)C(=O)N)CC=C)NC(=O)[C@@H](N)C)CC3=CNC4=C3C=CC=C4)C)=CNC=2C=C1 Chemical compound C1=CC=2C(C[C@@H]3NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](NC(=O)N(CC#CCN(CCCC[C@H](NC(=O)[C@@H](CC4=CC=CC=C4)NC3=O)C(=O)N)CC=C)NC(=O)[C@@H](N)C)CC3=CNC4=C3C=CC=C4)C)=CNC=2C=C1 OBMZMSLWNNWEJA-XNCRXQDQSA-N 0.000 description 2
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 2
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 2
- 208000006069 Corneal Opacity Diseases 0.000 description 2
- 206010055665 Corneal neovascularisation Diseases 0.000 description 2
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 2
- 206010015548 Euthanasia Diseases 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101150101014 HST1 gene Proteins 0.000 description 2
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 2
- 101710176384 Peptide 1 Proteins 0.000 description 2
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 2
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 2
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 2
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 239000003519 biomedical and dental material Substances 0.000 description 2
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 2
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000003850 cellular structure Anatomy 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 2
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 2
- 201000000159 corneal neovascularization Diseases 0.000 description 2
- 231100000269 corneal opacity Toxicity 0.000 description 2
- 210000003785 decidua Anatomy 0.000 description 2
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 2
- 239000010440 gypsum Substances 0.000 description 2
- 229910052602 gypsum Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 230000006996 mental state Effects 0.000 description 2
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 2
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 2
- 239000011812 mixed powder Substances 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 2
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 2
- 210000004872 soft tissue Anatomy 0.000 description 2
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 2
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 2
- 229940099259 vaseline Drugs 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 description 1
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 102000007590 Calpain Human genes 0.000 description 1
- 108010032088 Calpain Proteins 0.000 description 1
- 208000018380 Chemical injury Diseases 0.000 description 1
- 208000000860 Compassion Fatigue Diseases 0.000 description 1
- 206010010996 Corneal degeneration Diseases 0.000 description 1
- 208000003556 Dry Eye Syndromes Diseases 0.000 description 1
- 206010013774 Dry eye Diseases 0.000 description 1
- 108010014258 Elastin Proteins 0.000 description 1
- 102000016942 Elastin Human genes 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 1
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 description 1
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 description 1
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 1
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 description 1
- 208000010412 Glaucoma Diseases 0.000 description 1
- 229920002683 Glycosaminoglycan Polymers 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000007547 Laminin Human genes 0.000 description 1
- 108010085895 Laminin Proteins 0.000 description 1
- 206010072138 Limbal stem cell deficiency Diseases 0.000 description 1
- 206010029113 Neovascularisation Diseases 0.000 description 1
- 208000023715 Ocular surface disease Diseases 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 1
- 208000003251 Pruritus Diseases 0.000 description 1
- 201000002154 Pterygium Diseases 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 206010053615 Thermal burn Diseases 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- 206010064996 Ulcerative keratitis Diseases 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- 239000000908 ammonium hydroxide Substances 0.000 description 1
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 210000002469 basement membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 229960002233 benzalkonium bromide Drugs 0.000 description 1
- KHSLHYAUZSPBIU-UHFFFAOYSA-M benzododecinium bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CC1=CC=CC=C1 KHSLHYAUZSPBIU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000010478 bone regeneration Effects 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 201000004781 bullous keratopathy Diseases 0.000 description 1
- 229960001139 cefazolin Drugs 0.000 description 1
- MLYYVTUWGNIJIB-BXKDBHETSA-N cefazolin Chemical compound S1C(C)=NN=C1SCC1=C(C(O)=O)N2C(=O)[C@@H](NC(=O)CN3N=NN=C3)[C@H]2SC1 MLYYVTUWGNIJIB-BXKDBHETSA-N 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 201000007717 corneal ulcer Diseases 0.000 description 1
- 230000002354 daily effect Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 238000005238 degreasing Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 238000011496 digital image analysis Methods 0.000 description 1
- NJDNXYGOVLYJHP-UHFFFAOYSA-L disodium;2-(3-oxido-6-oxoxanthen-9-yl)benzoate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=CC(=O)C=C2OC2=CC([O-])=CC=C21 NJDNXYGOVLYJHP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 230000002900 effect on cell Effects 0.000 description 1
- 229920002549 elastin Polymers 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 210000003560 epithelium corneal Anatomy 0.000 description 1
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 239000005002 finish coating Substances 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 239000010437 gem Substances 0.000 description 1
- 229910001751 gemstone Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 230000023597 hemostasis Effects 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 239000012456 homogeneous solution Substances 0.000 description 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 1
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 description 1
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 1
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 1
- 210000004969 inflammatory cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 230000001788 irregular Effects 0.000 description 1
- 230000007803 itching Effects 0.000 description 1
- 206010023332 keratitis Diseases 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 238000002690 local anesthesia Methods 0.000 description 1
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 description 1
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 238000003801 milling Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 238000000465 moulding Methods 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 230000001338 necrotic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004498 neuroglial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000508 neurotrophic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002188 osteogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000036407 pain Effects 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 229960002275 pentobarbital sodium Drugs 0.000 description 1
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 1
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 1
- 239000011505 plaster Substances 0.000 description 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 238000010298 pulverizing process Methods 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 230000037390 scarring Effects 0.000 description 1
- 210000003786 sclera Anatomy 0.000 description 1
- 230000035807 sensation Effects 0.000 description 1
- 238000010008 shearing Methods 0.000 description 1
- 238000007873 sieving Methods 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 1
- 229960002668 sodium chloride Drugs 0.000 description 1
- 229910052979 sodium sulfide Inorganic materials 0.000 description 1
- GRVFOGOEDUUMBP-UHFFFAOYSA-N sodium sulfide (anhydrous) Chemical compound [Na+].[Na+].[S-2] GRVFOGOEDUUMBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000009864 tensile test Methods 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 230000008733 trauma Effects 0.000 description 1
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 description 1
- 229960001322 trypsin Drugs 0.000 description 1
- 238000009777 vacuum freeze-drying Methods 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L15/00—Chemical aspects of, or use of materials for, bandages, dressings or absorbent pads
- A61L15/16—Bandages, dressings or absorbent pads for physiological fluids such as urine or blood, e.g. sanitary towels, tampons
- A61L15/18—Bandages, dressings or absorbent pads for physiological fluids such as urine or blood, e.g. sanitary towels, tampons containing inorganic materials
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L15/00—Chemical aspects of, or use of materials for, bandages, dressings or absorbent pads
- A61L15/16—Bandages, dressings or absorbent pads for physiological fluids such as urine or blood, e.g. sanitary towels, tampons
- A61L15/22—Bandages, dressings or absorbent pads for physiological fluids such as urine or blood, e.g. sanitary towels, tampons containing macromolecular materials
- A61L15/28—Polysaccharides or their derivatives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L15/00—Chemical aspects of, or use of materials for, bandages, dressings or absorbent pads
- A61L15/16—Bandages, dressings or absorbent pads for physiological fluids such as urine or blood, e.g. sanitary towels, tampons
- A61L15/22—Bandages, dressings or absorbent pads for physiological fluids such as urine or blood, e.g. sanitary towels, tampons containing macromolecular materials
- A61L15/32—Proteins, polypeptides; Degradation products or derivatives thereof, e.g. albumin, collagen, fibrin, gelatin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L15/00—Chemical aspects of, or use of materials for, bandages, dressings or absorbent pads
- A61L15/16—Bandages, dressings or absorbent pads for physiological fluids such as urine or blood, e.g. sanitary towels, tampons
- A61L15/22—Bandages, dressings or absorbent pads for physiological fluids such as urine or blood, e.g. sanitary towels, tampons containing macromolecular materials
- A61L15/32—Proteins, polypeptides; Degradation products or derivatives thereof, e.g. albumin, collagen, fibrin, gelatin
- A61L15/325—Collagen
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L15/00—Chemical aspects of, or use of materials for, bandages, dressings or absorbent pads
- A61L15/16—Bandages, dressings or absorbent pads for physiological fluids such as urine or blood, e.g. sanitary towels, tampons
- A61L15/40—Bandages, dressings or absorbent pads for physiological fluids such as urine or blood, e.g. sanitary towels, tampons containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. plant or animal extracts
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L15/00—Chemical aspects of, or use of materials for, bandages, dressings or absorbent pads
- A61L15/16—Bandages, dressings or absorbent pads for physiological fluids such as urine or blood, e.g. sanitary towels, tampons
- A61L15/42—Use of materials characterised by their function or physical properties
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L15/00—Chemical aspects of, or use of materials for, bandages, dressings or absorbent pads
- A61L15/16—Bandages, dressings or absorbent pads for physiological fluids such as urine or blood, e.g. sanitary towels, tampons
- A61L15/42—Use of materials characterised by their function or physical properties
- A61L15/44—Medicaments
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Botany (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Materials For Medical Uses (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
本发明属于医用材料技术领域,尤其涉及一种组织再生型生物膜组织复合物及制备方法及应用,包括生物膜组织提取物和促进吸附凝胶缓释系统;所述促进吸附凝胶缓释系统含透明质酸钠、羟丙基甲基纤维素、I型胶原特异性结合肽、Ⅳ型胶原特异性结合肽和锌离子化合物的混合水溶液,调配促进吸附凝胶缓释系统的浓度获得相应滴液或膏状物形式的复合物;其中,以生物膜组织复合物质量体积百分比为计算,生物膜组织提取物的质量浓度为1%~10%。本发明中组织再生型生物膜组织复合物提高了材料在创面的吸附效率,进而有效提高了其在促进伤口愈合的效果。
Description
技术领域
本发明属于医用材料技术领域,尤其涉及一种组织再生型生物膜组织复合物及制备方法及应用。
背景技术
羊膜在再生医学中有广泛的应用,例如可用作利于细胞生长黏合的天然支架,或作为多种类型的干细胞和生长因子的来源。羊膜是胎盘的最内层,含上皮细胞,光滑,无血管、神经及淋巴,具有一定的弹性,厚约0.02~0.5mm。其成份主要为胶原蛋白、纤维粘连蛋白、层粘连蛋白、弹性蛋白以及粘多糖等。类似的,脐带或胎盘,具有与羊膜相近的促进组织再生功能。
羊膜在伤口护理方面具有广阔的临床应用,包括眼科、骨科、皮肤科及口腔科的伤口管理及术后修复。其中,羊膜在眼科疾病相关动物实验和临床观察显示:羊膜可以促进角膜上皮细胞移行、抑制新生血管增生、抗炎等功能。羊膜尤其新鲜羊膜含有生长因子,这些生长因子能促进上皮化发生,有利于上皮细胞的分化、移行和增强上皮细胞的粘附性。羊膜可阻止白细胞浸润,抑制多种蛋白酶如:胰蛋白酶、纤维蛋白酶、胶原蛋白酶等的活性,通过抑制相应的蛋白酶,从而减轻炎症程度、缩短炎症持续时间及抑制新生血管形成。综上所述,羊膜可作为一种可靠的供体材料而应用于眼科临床。现有中国药监局获批的羊膜医疗器械产品为膜片状,其在眼科领域适应的疾病包括翼状胬肉、化学伤、热烧伤、角膜炎、角膜溃疡、睑球粘连、青光眼、大泡性角膜病变等。
然而,现有羊膜产品需要手术缝合,这一方面给医生提高了手术操作的难度,另一方面会对患者造成缝合手术的二次创伤。为了促进羊膜产品的应用,避免手术缝合类型羊膜移植物对患者带来的创伤,免缝合类型的羊膜材料(如羊膜滴眼液)逐步在文献中公开报道。
论文《Amniotic membrane extract eye drops: a new approach to severeocular surface pathologies》(Cell and tissue banking, 23(3), 473–481)报道了将羊膜制备成为滴眼液用于治疗慢性干眼病、角膜缘干细胞缺乏性等眼表疾病患者(25例患者的36只眼睛)的临床随访研究,其结果表明:局部应用羊膜滴眼液是安全的,患者耐受性良好,能够显著改善眼部症状,如异物感,瘙痒和刺痛。其中,羊膜滴眼液的制备方法如下:经捐赠者知情同意后,收集胎盘。冲洗胎盘以清除血凝块后,通过钝性工具剥离羊膜。然后用抗生素/抗真菌溶液对羊膜进行冲洗和净化。第二天,将羊膜用盐水冲洗以去除抗生素,然后浸泡在液氮中冷冻。将冷冻的羊膜在室温下研磨并离心。将上清液分成1毫升小瓶,冷冻干燥,并在室温下保存直到使用。每个含有羊膜粉状的小瓶都单独包装。最后的包装包括粉末再水化所需的所有材料,即一个注射器,一个针和一瓶10毫升的无菌水。在使用前,每瓶羊膜粉末被重组为4毫升无菌水。
美国专利《Use of a human amniotic membrane composition for prophylaxisand treatment of diseases and conditions of the eye and skin》(Application #:US 2004/0057938;Status: Abandoned -- Failure to Respond to an Office Action -12/10/2007)公开了一种制备羊膜提取物的方法,包括从怀孕的哺乳动物(如猪、牛、马或人)获得健康的羊膜,将羊膜均质以获得均匀的溶液,将匀浆溶液冷冻,并将冷冻的匀浆溶液冷冻干燥。优选地,将冻干的匀浆碾磨成粉末。具体实施例如下:在剖腹产的时刻,从孕妇的手术室中取出羊膜,从胎盘的其他组织中分离出来,并在无菌溶液中冲洗,如磷酸盐缓冲盐水(PBS)。将羊膜在无菌条件下分成1厘米×1厘米的小片,4℃保存,在含有1000 u/mL青霉素和20 mg/mL链霉素的PBS中进行处理。以下步骤均在无菌条件、4℃和中性pH值下进行,并避免直接光照。称量羊膜片,调整体积,使羊膜中性缓冲溶液的比值约为0.3 g/mL。然后使用超声仪对膜片进行超声处理,匀浆在4°C下离心10分钟。然后将上清液以14000转/分钟的转速离心5分钟,以去除提取物中任何不需要的残留物。
中国专利《一种治疗角膜碱烧伤的羊膜滴眼液》(申请号:200910178422.7)公开了一种羊膜滴眼液及其制备方法,是以羊膜匀浆上清液为主要活性成分,再加入海藻糖,玻璃酸或其盐,肝素或其盐,氯化钠,苯扎溴铵,维生素等物质。所述羊膜匀浆上清液是采用如下方法制备得到:在超净台上将羊膜在 PBS 液中清洗3次,约10~15分钟,取适当大小称湿重,按1:1加PBS液放入匀浆机中,每分钟5000转,10冲程磨制匀浆,每冲程30秒。取出匀浆按1:5加 PBS液于离心管中离心2000 r/min,10分钟,取上清液备用。
中国专利《一种脱细胞羊膜粉的制备方法》(申请号:201710237111.8)公开了一种脱细胞羊膜粉的制备方法,包括1)、将羊膜清洗、剪碎;2)、在4℃的振荡器中洗涤12~24小时;3 )、在4℃的振荡器中用1%的Triton x-100和氢氧化铵洗涤1~3天;4)、在4℃的振荡器中用去离子水洗涤12~24小时;然后用PBS洗涤12~24小时;5)、-80℃保存24小时,然后冻干;6)、低温环境下研磨成粉;7)、消毒后-80℃储存。
中国专利《一种复合羊膜粉制剂的制备方法》(申请号:201811264525.0)公开了一种复合羊膜粉制剂的制备方法,包括:获取胎膜,用生理盐水对所述胎膜进行第一洗涤处理后进行剥离处理,得到羊膜及原始绒毛膜;去除附着在所述原始绒毛膜表面的蜕膜组织,得到绒毛膜;依次用所述生理盐水、氯化钠水溶液和所述生理盐水对所述羊膜及所述绒毛膜进行多次洗涤处理;用干燥保护剂进行浸润处理后,通过冻干处理、粉碎处理和灭菌处理后加入羧甲基壳聚糖,再加入所述生理盐水,得到复合羊膜粉制剂。其具体步骤如下:S1:获取胎膜,用生理盐水对所述胎膜进行第一洗涤处理后,对所述胎膜进行剥离处理,得到羊膜及原始绒毛膜;S2:去除附着在所述原始绒毛膜表面的蜕膜组织,得到绒毛膜;S3:用所述生理盐水对所述羊膜及所述绒毛膜进行第二洗涤处理,然后用质量百分比为16%~20%的氯化钠水溶液对所述羊膜及所述绒毛膜进行第三洗涤处理,最后用所述生理盐水对所述羊膜及所述绒毛膜进行第四洗涤处理;S4:将所述羊膜及所述绒毛膜浸入干燥保护剂中进行5~30分钟的浸润处理,从所述干燥保护剂中取出所述羊膜及所述绒毛膜,然后对所述羊膜及所述绒毛膜进行冻干处理,得到冻干羊膜和冻干绒毛膜;S5:对所述冻干羊膜和所述冻干绒毛膜依次进行粉碎处理和灭菌处理,得到羊膜粉末和绒毛膜粉末;S6:向所述羊膜粉末和所述绒毛膜粉末中加入羧甲基壳聚糖后混合均匀,得到混合粉末,所述羊膜粉末与所述绒毛膜粉末的质量比为2.5:1~1:2.5,所述羊膜粉末与所述羧甲基壳聚糖重量比为1:5~1:40,向所述混合粉末中加入所述生理盐水,得到复合羊膜粉制剂,所述生理盐水与所述羊膜粉末的重量比为200:1。
中国专利《一种化学交联脱细胞羊膜支架的制备方法》(申请号:202110152324.7)公开了一种化学交联脱细胞羊膜支架的制备方法,包括以下步骤:(1)取预处理后得到的羊膜置于脱脂液中,封口膜密封,搅拌;(2)冲洗,沥干后置于脱细胞液中浸泡,搅拌;(3)冲洗,沥干后置于SDS溶液中搅拌;(4)冲洗,沥干后称重并粉碎,期间不间断的加入乙酸溶液;(5)将粉碎后的脱细胞羊膜过滤,向粉碎后的羊膜溶液中加入为胰蛋白酶消化,过滤获得滤液,真空冻干并粉碎;(6)将PEG溶液与脱细胞羊膜粉末混合,静置,置于37℃恒温箱反应后冷冻干燥,获得化学交联脱细胞羊膜支架。
中国专利《复合羊膜敷料及其制备方法》(申请号:202111520327.8)公开了一种复合羊膜敷料,包括:重组羊膜层,由含羧基多糖以及负载于所述含羧基多糖的羊膜粉末组成;所述羊膜粉末的平均直径为5-500微米,占所述重组羊膜层的质量百分比为5-83%,所述含羧基多糖的重均分子量为10-200万,占所述重组羊膜层的质量百分比为17-95%;无纺布层,密度为0.02-0.2克/立方厘米,所述无纺布层由含钙亲水纤维组成,所述含钙亲水纤维的直径为5-60微米,所述含钙亲水纤维中的钙含量为4-9wt%;所述重组羊膜层和所述无纺布层均呈三维网络结构,所述重组羊膜层与部分所述无纺布层交联形成互穿网络层。制备方法包括以下步骤:S1:提供混合分散液和无纺布材料;S2:将所述混合分散液涂布于所述无纺布材料表面,以完成涂布处理;S3:对经所述涂布处理得到的无纺布材料进行冻干处理,得到所述复合羊膜敷料。
论文(Cell and tissue banking, 23(3), 473–481)及专利(申请号:US 2004/0057938;200910178422.7; 201710237111.8; 201811264525.0; 202110152324.7;202111520327.8)公开了将膜片状的羊膜粉碎成粉末或浆液的制备方法,以达到免缝合治疗疾病的目的,然而,现有技术存在一个共同的局限性:难以有效提高其在创面的吸附效率,这就导致其作为组织再生型生物医学材料在促进伤口愈合效果方面欠佳。
为了提高羊膜等组织再生性医用材料在人体创面的吸附效率,采用特异性胶原结合肽是一种可能的方式。
论文《Collagen binding site in collagenase can be determined using theconcept of sense-antisense peptide interactions》(Journal of BiologicalChemistry, 1992, 267(19) 13763-13767)报道了一种由七肽(TKKTLRT)组成的胶原结合域(CBD),可以特异性地结合I型胶原。
专利《用于神经修复的功能组织工程材料及其制备方法》(申请号:201310425493.9)发明公开了一种用于神经修复的功能组织工程材料,其包括:作为载体的人羊膜;通过胶原蛋白特异结合的促进神经修复的神经营养因子;以及固定结合钙蛋白酶的抑制剂。所述的促进神经修复的神经营养因子,包括脑源性神经营养质子,神经生长因子、神经营养因子3和胶质细胞源性神经营养因子中的一种或多和;该神经营养因子是通过基因工程方法构建成神经营养因子与胶原蛋白特异结合域的融合蛋白。胶原蛋白特异结合域CBD的基因序列为TKKTLRT。该技术仅公开了利用具备特异性胶原结合域的多肽与其他功能因子叠加重组,其特异性胶原结合域的多肽仅与羊膜胶原发生配位作用结合力,这种结合力是一种弱相互作用, 对提高粉碎后的羊膜在创面的吸附效率效果较小。
专利《一种嵌合肽修饰的SIS膜、其制备方法及应用》(申请号:202180001723.1)公开了一种嵌合肽修饰的SIS膜、其制备方法及应用,其中为修饰SIS膜以促进软组织愈合和骨再生的功能,提供了一种嵌合肽修饰的GBR膜,该嵌合肽由三部分组成:P9和P10:TKKTLRT(结合至SIS膜的I型胶原)、Hst1/JH8194(起到抗菌、成骨和愈合促进能力的功能)和GGGGSGGGGS(连接前两部分),P11和P12:KELNLVY(结合至SIS膜的III型胶原)、Hst1/JH8194和GGGGSGGGGS。
论文(Journal of Biological Chemistry, 1992, 267(19) 13763-13767)及专利(申请号:201310425493.9;202180001723.1)公开了可以通过设计特定序列多肽实现特异性结合胶原的方法。然而,人体组织中不同部位的组织中含有不同胶原类型,例如,人体眼部的角膜及巩膜中的胶原主要为I型胶原及Ⅳ型胶原,现有公开的特异性胶原结合肽存在作用力较弱、吸附效率欠佳的问题,需要重新优化设计。
综上所述,亟需开发一种组织再生型新材料,提高其在创面的吸附效率及促进伤口愈合效果,更大程度满足临床需求。
发明内容
为了解决以上技术问题,本发明提供一种组织再生型的生物膜组织复合物,在创面的吸附效率高,进而有效提高了其作为免缝合组织再生型材料在促进伤口愈合方面的作用效果。
解决以上技术问题的本发明中一种组织再生型生物膜组织复合物,包括生物膜组织提取物和促进吸附凝胶缓释系统;所述促进吸附凝胶缓释系统含透明质酸钠、羟丙基甲基纤维素、I型胶原特异性结合肽、Ⅳ型胶原特异性结合肽和锌离子化合物的混合水溶液,调配促进吸附凝胶缓释系统的组织浓度获得相应滴液或膏状物形式的复合物;其中,以生物膜组织复合物质量体积百分比为计算,生物膜组织提取物的质量浓度为1%~10%。
制备成滴液使用的所述促进吸附凝胶缓释系统包括以下质量浓度的组份:透明质酸钠0.1%~0.3%、羟丙基甲基纤维素0.2%~0.5%、I型胶原特异性结合肽2%~5%、Ⅳ型胶原特异性结合肽1%~2%和锌离子化合物0.1%~0.5%,其余为水。
制备成膏状物使用的所述促进吸附凝胶缓释系统包括以下质量浓度的组份及用量:透明质酸钠5%~10%、羟丙基甲基纤维素1%~2%、I型胶原特异性结合肽2%~5%、Ⅳ型胶原特异性结合肽1%~2%和锌离子化合物0.5%~1%,其余为水。
所述生物膜组织提取物提取自新鲜生物膜组织,提取来源包括且不限于人或哺乳类动物的羊膜、脐带或胎盘。所述生物膜组织提取物为水溶性固体,水为去离子水。
所述透明质酸钠的平均分子量为200KDa~1.8MDa,羟丙基甲基纤维素的平均分子量为90KDa~120KDa。
所述I型胶原特异性结合肽的氨基酸序列为RRRKHHK,对应三字母的氨基酸序列为Arg-Arg-Arg-Lys-His-His-Lys,结构式如下:
,
所述Ⅳ型胶原特异性结合肽的氨基酸序列为HHRKKR,对应三字母的氨基酸序列为His-His-Arg-Lys-Lys-Arg,结构式如下:
。
所述锌离子化合物为氯化锌或硫酸锌。
本发明中生物膜组织提取物为经过组织粉碎机处理后并离心后收集上清液而得,获得的提取物主要为羊膜中水溶性成份,约为羊膜干重的5%~10%;避免羊膜等生物膜组织中不溶性固体颗粒对人体创面的不良刺激。
本发明中制备的滴液或膏状物形式生物膜组织复合物性能由测试数据体现:其有效地提升了对生物膜组织中的I型胶原及Ⅳ型胶原在创面的吸附,同时有效地提升了对生物膜组织中的表皮生长因子及肝细胞生长因子的固定效果。
本发明中的一种组织再生型生物膜组织复合物的制备方法,包括以下步骤:
(1)制备生物膜组织提取物:将新鲜生物膜组织置于抗生素/抗真菌溶液中浸泡、生理盐水漂洗、采用组织粉碎机处理并离心后收集上清液、冷冻干燥后成水溶性固体;新鲜生物膜组织是采用生理盐水清除血凝块后,通过钝性工具剥离得到。
(2)制备促进吸附凝胶缓释系统:将透明质酸钠、羟丙基甲基纤维素、I型胶原特异性结合肽、Ⅳ型胶原特异性结合肽和锌离子化合物加入水中进行搅拌混合,呈混合水溶液;
(3)制备组织再生型羊膜复合物:将步骤(1)中羊膜提取物均匀分散到步骤(2)中促进吸附凝胶缓释系统中,通过调配促进吸附凝胶缓释系统的组织浓度获得相应滴液或膏状物形式的组织再生型羊膜复合物,即可。使用时滴加或涂抹组织再生型羊膜复合物到创面上。
所述步骤(1)中“制备生物膜组织提取物”的抗生素/抗真菌溶液为:含有浓度为10~100 mg/mL两性霉素B、100~2000 u/mL青霉素和10~100 mg/mL链霉素的生理盐水或PBS溶液。
所述步骤(1)中“制备生物膜组织提取物”生理盐水漂洗为:保持羊膜湿重与生理盐水体积比值为1g/L,在无菌条件和中性pH值下进行,连续漂洗三次。
所述步骤(1)中“制备生物膜组织提取物”采用组织粉碎机处理并离心后收集上清液为:在无菌条件下进行,组织粉碎机处理时间为10min~4h,离心速率为800~2000rpm,离心时间为10min。
本发明中I型胶原特异性结合肽及Ⅳ型胶原特异性结合肽的作用是用于实现生物膜组织提取物中的I型胶原与创面的I型胶原,或Ⅳ型胶原与创面的Ⅳ型胶原的结合作用,这种结合作用来自于蛋白质之间的受体-配体空间配位作用及静电结合作用,其示意图如图8所示。
将生物膜组织提取物均匀分散到促进吸附凝胶缓释系统中,通过调配促进吸附凝胶缓释系统的浓度获得相应滴液或膏状物形式的组织再生型羊膜复合物,所以制备不同物理形态时的组织再生型生物膜组织复合物时,促进吸附凝胶缓释系统中原料所用用量有所调整。
本发明中锌离子化合物的作用是实现I型胶原特异性结合肽及Ⅳ型胶原特异性结合肽与透明质酸钠之间的离子键结合作用,提高促进吸附凝胶缓释系统内部的结合力,进而提高对生物膜组织复合物在创面的吸附,其示意图如图9和图10所示。
本发明中组织再生型生物膜组织复合物的有益效果如下:
(1)提高了材料在创面的吸附效率:相比现有技术中将羊膜粉碎物直接在去离子水中配制成为悬浮滴液后使用,简单用去离子水配制的滴液的很容易流淌到创面的外围,导致存在其难以在创面吸附的技术问题,本发明开发了含有透明质酸钠、羟丙基甲基纤维素、I型胶原特异性结合肽、Ⅳ型胶原特异性结合肽、锌离子化合物的促进吸附凝胶缓释系统,透明质酸钠、羟丙基甲基纤维素可以提高系统的粘度;I型胶原特异性结合肽、Ⅳ型胶原特异性结合肽能够促进生物膜组织提取物中的I型胶原或Ⅳ型胶原和人体创面的I型胶原或Ⅳ型胶原的结合;锌离子化合物可以实现I型胶原特异性结合肽及Ⅳ型胶原特异性结合肽与透明质酸钠之间的离子键结合作用,提高促进吸附凝胶缓释系统内部的结合力,进而提高对生物膜组织复合物在创面的吸附。这三方面的综合作用,有效提高了生物膜组织提取物在创面的吸附效率,进而有效提高了其作为免缝合组织再生型材料在促进伤口愈合及防黏连方面的效果。
(2)相比于现有公开的在羊膜负载胶原特异性结合肽的技术(专利《用于神经修复的功能组织工程材料及其制备方法》,申请号:201310425493.9),本发明促进吸附凝胶缓释系统中的I型胶原特异性结合肽、Ⅳ型胶原特异性结合肽的序列设计,进一步提升了其与锌离子化合物之间的离子键作用,提高了促进吸附凝胶缓释系统内部网络结构中的化学交联点,达到大幅提升对生物膜组织复合物吸附效率的效果;且本发明中针对生物膜组织及人体软组织中占较大比重的两种胶原,即I型胶原及Ⅳ型胶原,单独优化设计了对应的胶原特异性结合肽,进一步提升了配位作用力。
(3)发明中的I 型胶原特异性结合肽、Ⅳ型胶原特异性结合肽可以将多种细胞生长因子固定在相应I 型胶原及Ⅳ型胶原上。
本发明中的组织再生型羊膜复合物的应用,为在制备眼科、骨科、皮肤科及口腔科的伤口管理和术后修复的材料的应用。
附图说明
图1为本发明中荧光强度结果图;
图2为本发明中I型胶原含量结果图;
图3为本发明中Ⅳ型胶原含量结果图;
图4为本发明中生长因子EGF含量结果图;
图5为本发明中生长因子HGF含量结果图;
图6为本发明中采用生理盐水清除血凝块后通过钝性工具剥离得到的羊膜实物图;
图7为本发明中采用组织粉碎机处理并离心后收集上清液、冷冻干燥后得到的羊膜提取物实物图;
图8为本发明中I型胶原特异性结合肽及Ⅳ型胶原特异性结合肽的作用原理图;
图9为本发明中中I型胶原特异性结合肽与锌离子化合物的作用原理图;
图10为本发明中Ⅳ型胶原特异性结合肽与锌离子化合物的作用原理图。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明中做进一步的阐述,其中所用I型胶原特异性结合肽的氨基酸序列为RRRKHHK,对应三字母的氨基酸序列为Arg-Arg-Arg-Lys-His-His-Lys,结构式如下:
,
所述Ⅳ型胶原特异性结合肽的氨基酸序列为HHRKKR,对应三字母的氨基酸序列为His-His-Arg-Lys-Lys-Arg,结构式如下:
。
实施例1
一种组织再生型生物膜组织复合物,由生物膜组织提取物和促进吸附凝胶缓释系统组成;促进吸附凝胶缓释系统由透明质酸钠、羟丙基甲基纤维素、I型胶原特异性结合肽、Ⅳ型胶原特异性结合肽和锌离子化合物组成的混合水溶液,调配促进吸附凝胶缓释系统的浓度获得相应滴液形式的复合物;其中,以生物膜组织复合物质量体积为计算,生物膜组织提取物的质量浓度为1%;促进吸附凝胶缓释系统由以下质量浓度的组份及用量组成:透明质酸钠0.1%、羟丙基甲基纤维素0.2%、I型胶原特异性结合肽2%、Ⅳ型胶原特异性结合肽1%和锌离子化合物0.1%,其余为水。
制备方法为以下具体步骤:
(1)制备生物膜组织提取物
采用生理盐水清除血凝块后,通过钝性工具剥离得到新鲜人体羊膜。将新鲜羊膜在同时含有浓度(以下相同)为两性霉素B(10 mg/mL)、青霉素(100 u/mL)、链霉素(10 mg/mL)的生理盐水中浸泡2小时。保持羊膜湿重与生理盐水体积比值为1g/L, 在无菌条件和中性pH值下进行,将羊膜用生理盐水连续漂洗三次。采用组织粉碎机处理并离心后收集上清液:在无菌条件下进行,组织粉碎机处理时间为10分钟,离心速率为800rpm,离心时间为10分钟。
(2)制备组织再生型生物膜组织复合物
配制促进吸收凝胶缓释系统,即在常温(25℃)下配制质量浓度0.1%的透明质酸钠(平均分子量为200KDa)、质量浓度0.2%的羟丙基甲基纤维素(平均分子量为90KDa)、质量浓度2%的人源I型胶原特异性结合肽(氨基酸序列为RRRKHHK,采购于上海强耀生物科技有限公司)、质量浓度1%的人源Ⅳ型胶原特异性结合肽(氨基酸序列为HHRKKR,采购于上海强耀生物科技有限公司)、质量浓度0.1%的氯化锌的混合水溶液。随后将质量浓度为1%的羊膜提取物加入到促进吸收凝胶缓释系统中,磁力搅拌直至羊膜提取物均匀分散到促进吸收凝胶缓释系统中,即得组织再生型羊膜复合物。
实施例2
一种组织再生型生物膜组织复合物,由生物膜组织提取物和促进吸附凝胶缓释系统组成;促进吸附凝胶缓释系统由透明质酸钠、羟丙基甲基纤维素、I型胶原特异性结合肽、Ⅳ型胶原特异性结合肽和锌离子化合物组成的混合水溶液,调配促进吸附凝胶缓释系统的浓度获得相应膏状物形式的复合物;其中,以生物膜组织复合物质量体积为计算,生物膜组织提取物的质量浓度为10%;促进吸附凝胶缓释系统由以下质量浓度的组份及用量组成:透明质酸钠10%、羟丙基甲基纤维素2%、I型胶原特异性结合肽5%、Ⅳ型胶原特异性结合肽2%和锌离子化合物1%,其余为水。
制备方法为以下具体步骤:
(1)制备生物膜组织提取物
采用生理盐水清除血凝块后,通过钝性工具剥离得到新鲜人体羊膜。将新鲜羊膜在同时含有两性霉素B(100 mg/mL)、青霉素(2000 u/mL)、链霉素(100 mg/mL)的生理盐水中浸泡2小时。保持羊膜湿重与生理盐水体积比值为1g/L, 在无菌条件和中性pH值下进行,将羊膜用生理盐水连续漂洗三次。采用组织粉碎机处理并离心后收集上清液:在无菌条件下进行,组织粉碎机处理时间为2小时,离心速率为2000rpm,离心时间为10分钟。
(2)制备组织再生型生物膜组织复合物
配制促进吸收凝胶缓释系统,即在常温(25℃)下配制质量浓度10%的透明质酸钠(平均分子量为1.8MDa)、质量浓度2%的羟丙基甲基纤维素(平均分子量为120KDa)、质量浓度5%的人源I型胶原特异性结合肽(氨基酸序列为RRRKHHK,采购于上海强耀生物科技有限公司)、质量浓度2%的人源Ⅳ型胶原特异性结合肽(氨基酸序列为HHRKKR,采购于上海强耀生物科技有限公司)、质量浓度1%的氯化锌的混合水溶液。随后将质量浓度为10%的羊膜提取物加入到促进吸收凝胶缓释系统,磁力搅拌直至羊膜提取物均匀分散到促进吸收凝胶缓释系统中,即得组织再生型羊膜复合物。
实施例3
一种组织再生型生物膜组织复合物,由生物膜组织提取物和促进吸附凝胶缓释系统组成;促进吸附凝胶缓释系统由透明质酸钠、羟丙基甲基纤维素、I型胶原特异性结合肽、Ⅳ型胶原特异性结合肽和锌离子化合物组成的混合水溶液,调配促进吸附凝胶缓释系统的浓度获得相应滴液形式的复合物;其中,以生物膜组织复合物质量体积为计算,生物膜组织提取物的质量浓度为5%;促进吸附凝胶缓释系统由以下质量浓度的组份及用量组成:透明质酸钠0.3%、羟丙基甲基纤维素0.5%、I型胶原特异性结合肽5%、Ⅳ型胶原特异性结合肽2%和锌离子化合物0.5%,其余为水。
制备方法为以下具体步骤:
(1)制备生物膜组织提取物
采用生理盐水清除血凝块后,通过钝性工具剥离得到新鲜人体胎盘。将新鲜胎盘在同时含有两性霉素B(100 mg/mL)、青霉素(2000 u/mL)、链霉素(100 mg/mL)的生理盐水中浸泡2小时。保持羊膜湿重与生理盐水体积比值为1g/L, 在无菌条件和中性pH值下进行,将羊膜用生理盐水连续漂洗三次。采用组织粉碎机处理并离心后收集上清液:在无菌条件下进行,组织粉碎机处理时间为2小时,离心速率为2000rpm,离心时间为10分钟。
(2)制备组织再生型生物膜组织复合物
配制促进吸收凝胶缓释系统,即在常温(25℃)下配制质量浓度0.3%的透明质酸钠(平均分子量为1.8MDa)、质量浓度0.5%的羟丙基甲基纤维素(平均分子量为120KDa)、质量浓度5%的人源I型胶原特异性结合肽(氨基酸序列为RRRKHHK,采购于上海强耀生物科技有限公司)、质量浓度2%的人源Ⅳ型胶原特异性结合肽(氨基酸序列为HHRKKR,采购于上海强耀生物科技有限公司)的、质量浓度0.5%的硫酸锌混合水溶液。随后将质量浓度为5%的羊膜提取物加入到促进吸收凝胶缓释系统,磁力搅拌直至羊膜提取物均匀分散到促进吸收凝胶缓释系统中,即得组织再生型羊膜复合物。
实施例4
一种组织再生型生物膜组织复合物,由生物膜组织提取物和促进吸附凝胶缓释系统组成;促进吸附凝胶缓释系统由透明质酸钠、羟丙基甲基纤维素、I型胶原特异性结合肽、Ⅳ型胶原特异性结合肽和锌离子化合物组成的混合水溶液,调配促进吸附凝胶缓释系统的浓度获得相应膏状物形式的复合物;其中,以生物膜组织复合物质量体积为计算,生物膜组织提取物的质量浓度为10%;促进吸附凝胶缓释系统由以下质量浓度的组份及用量组成:透明质酸钠10%、羟丙基甲基纤维素2%、I型胶原特异性结合肽5%、Ⅳ型胶原特异性结合肽2%和锌离子化合物1%,其余为水。
制备方法包括以下步骤:
(1)制备生物膜组织提取物
采用生理盐水清除血凝块后,通过钝性工具剥离得到新鲜猪的羊膜。将新鲜猪的羊膜在同时含有两性霉素B(100 mg/mL)、青霉素(2000 u/mL)、链霉素(100 mg/mL)的生理盐水中浸泡2小时。保持羊膜湿重与生理盐水体积比值为1g/L, 在无菌条件和中性pH值下进行,将羊膜用生理盐水连续漂洗三次。采用组织粉碎机处理并离心后收集上清液:在无菌条件下进行,组织粉碎机处理时间为2小时,离心速率为2000rpm,离心时间为10分钟。
(2)制备组织再生型生物膜组织复合物
配制促进吸收凝胶缓释系统,即在常温(25℃)下配制质量浓度10%的透明质酸钠(平均分子量为1.8MDa)、质量浓度2%的羟丙基甲基纤维素(平均分子量为120KDa)、质量浓度5%的人源I型胶原特异性结合肽(氨基酸序列为RRRKHHK,采购于上海强耀生物科技有限公司)、质量浓度2%的人源Ⅳ型胶原特异性结合肽(氨基酸序列为HHRKKR,采购于上海强耀生物科技有限公司)、质量浓度1%的氯化锌的混合水溶液。随后将质量浓度为10%的羊膜提取物加入到促进吸收凝胶缓释系统,磁力搅拌直至羊膜提取物均匀分散到促进吸收凝胶缓释系统中,即得组织再生型羊膜复合物。
实施例5
一种组织再生型生物膜组织复合物,由生物膜组织提取物和促进吸附凝胶缓释系统组成;促进吸附凝胶缓释系统由透明质酸钠、羟丙基甲基纤维素、I型胶原特异性结合肽、Ⅳ型胶原特异性结合肽和锌离子化合物组成的混合水溶液,调配促进吸附凝胶缓释系统的浓度获得相应膏状物形式的复合物;其中,以生物膜组织复合物质量体积为计算,生物膜组织提取物的质量浓度为10%;促进吸附凝胶缓释系统由以下质量浓度的组份及用量组成:透明质酸钠10%、羟丙基甲基纤维素2%、I型胶原特异性结合肽5%、Ⅳ型胶原特异性结合肽2%和锌离子化合物1%,其余为水。
制备方法为以下具体步骤:
(1)制备生物膜组织提取物
采用生理盐水清除血凝块后,通过钝性工具剥离得到新鲜人体脐带。将新鲜脐带在同时含有两性霉素B(100 mg/mL)、青霉素(2000 u/mL)、链霉素(100 mg/mL)的生理盐水中浸泡2小时。保持羊膜湿重与生理盐水体积比值为1g/L, 在无菌条件和中性pH值下进行,将羊膜用生理盐水连续漂洗三次。采用组织粉碎机处理并离心后收集上清液:在无菌条件下进行,组织粉碎机处理时间为2小时,离心速率为2000rpm,离心时间为10分钟。
(2)制备组织再生型生物膜组织复合物
配制促进吸收凝胶缓释系统,即在常温(25℃)下配制质量浓度10%的透明质酸钠(平均分子量为1.8MDa)、质量浓度2%的羟丙基甲基纤维素(平均分子量为120KDa)、质量浓度5%的人源I型胶原特异性结合肽(氨基酸序列为RRRKHHK,采购于上海强耀生物科技有限公司)、质量浓度2%的人源Ⅳ型胶原特异性结合肽(氨基酸序列为HHRKKR,采购于上海强耀生物科技有限公司)、质量浓度1%的氯化锌的混合水溶液。随后将质量浓度为10%的脐带提取物加入到促进吸收凝胶缓释系统,磁力搅拌直至脐带提取物均匀分散到促进吸收凝胶缓释系统中,即得组织再生型脐带复合物。
实施例6
制备方法如实施例1中内容,一种组织再生型生物膜组织复合物,由生物膜组织提取物和促进吸附凝胶缓释系统组成;促进吸附凝胶缓释系统由透明质酸钠、羟丙基甲基纤维素、I型胶原特异性结合肽、Ⅳ型胶原特异性结合肽和锌离子化合物组成的混合水溶液,调配促进吸附凝胶缓释系统的浓度获得相应膏状物形式的复合物;其中,以生物膜组织复合物质量体积为计算,生物膜组织提取物的质量浓度为8%;促进吸附凝胶缓释系统由以下质量浓度的组份及用量组成:透明质酸钠5%、羟丙基甲基纤维素1.5%、I型胶原特异性结合肽2%、Ⅳ型胶原特异性结合肽1%和氯化锌0.5%,其余为水。
步骤(1)中两性霉素B(30 mg/mL)、青霉素(500 u/mL)、链霉素(30 mg/mL),采用组织粉碎机处理并离心后收集上清液:在无菌条件下进行,组织粉碎机处理时间为1小时,离心速率为1500rpm,离心时间为10分钟。
对比例1
对比例1为不含胶原特异性结合肽的羊膜复合物。包括以下步骤:
(1)制备生物膜组织提取物
采用生理盐水清除血凝块后,通过钝性工具剥离得到新鲜人体羊膜。将新鲜羊膜在同时含有两性霉素B(100 mg/mL)、青霉素(2000 u/mL)、链霉素(100 mg/mL)的生理盐水中浸泡2小时。保持羊膜湿重与生理盐水体积比值为1g/L, 在无菌条件、4℃和中性pH值下进行,将羊膜用生理盐水连续漂洗三次。采用组织粉碎机处理并离心后收集上清液:在无菌条件下进行,组织粉碎机处理时间为2小时,离心速率为2000rpm,离心时间为10分钟。
(2)制备组织再生型生物膜组织复合物
配制促进吸收凝胶缓释系统,即在常温(25℃)下配制质量浓度10%的透明质酸钠(平均分子量为1.8MDa)、质量浓度2%的羟丙基甲基纤维素(平均分子量为120KDa)、质量浓度1%的氯化锌的混合水溶液。随后将质量浓度为10%的羊膜提取物加入到促进吸收凝胶缓释系统,磁力搅拌直至羊膜提取物均匀分散到促进吸收凝胶缓释系统中,即得组织再生型羊膜复合物。
对比例2
对比例2为参考论文(Journal of Biological Chemistry, 1992, 267(19)及专利(申请号:201310425493.9;202180001723.1)中胶原结合肽序列制备的羊膜复合物。包括以下步骤:
(1)制备生物膜组织提取物
采用生理盐水清除血凝块后,通过钝性工具剥离得到新鲜人体羊膜。将新鲜羊膜在同时含有两性霉素B(100 mg/mL)、青霉素(2000 u/mL)、链霉素(100 mg/mL)的生理盐水中浸泡2小时。保持羊膜湿重与生理盐水体积比值为1g/L, 在无菌条件、4℃和中性pH值下进行,将羊膜用生理盐水连续漂洗三次。采用组织粉碎机处理并离心后收集上清液:在无菌条件下进行,组织粉碎机处理时间为2小时,离心速率为2000rpm,离心时间为10分钟。
(2)制备组织再生型生物膜组织复合物
配制促进吸收凝胶缓释系统,即在常温(25℃)下配制质量浓度10%的透明质酸钠(平均分子量为1.8MDa)、质量浓度2%的羟丙基甲基纤维素(平均分子量为120KDa)、质量浓度5%的胶原结合肽(氨基酸序列为TKKTLRT,采购于上海强耀生物科技有限公司)的混合水溶液。随后将质量浓度为10%的羊膜提取物加入到促进吸收凝胶缓释系统,磁力搅拌直至羊膜提取物均匀分散到促进吸收凝胶缓释系统中,即得组织再生型羊膜复合物。
对比例3
对比例3为参考论文(Journal of Biological Chemistry, 1992, 267(19)及专利(申请号:201310425493.9;202180001723.1) 中胶原结合肽序列制备的羊膜复合物且添加了锌离子化合物后制备的羊膜复合物。包括以下步骤:
(1)制备生物膜组织提取物
采用生理盐水清除血凝块后,通过钝性工具剥离得到新鲜人体羊膜。将新鲜羊膜在同时含有两性霉素B(100 mg/mL)、青霉素(2000 u/mL)、链霉素(100 mg/mL)的生理盐水中浸泡2小时。保持羊膜湿重与生理盐水体积比值为1g/L, 在无菌条件、4℃和中性pH值下进行,将羊膜用生理盐水连续漂洗三次。采用组织粉碎机处理并离心后收集上清液:在无菌条件下进行,组织粉碎机处理时间为2小时,离心速率为2000rpm,离心时间为10分钟。
(2)制备组织再生型生物膜组织复合物
配制促进吸收凝胶缓释系统,即在常温(25℃)下配制质量浓度10%的透明质酸钠(平均分子量为1.8MDa)、质量浓度2%的羟丙基甲基纤维素(平均分子量为120KDa)、质量浓度5%的胶原结合肽(氨基酸序列为TKKTLRT,采购于上海强耀生物科技有限公司)、质量浓度1%的氯化锌的混合水溶液。随后将质量浓度为10%的羊膜提取物加入到促进吸收凝胶缓释系统,磁力搅拌直至羊膜提取物均匀分散到促进吸收凝胶缓释系统中,即得组织再生型羊膜复合物。
对比例4
对比例4为仅含有本发明所述I型胶原特异性结合肽且添加了锌离子化合物后制备的羊膜复合物。包括以下步骤:
(1)制备生物膜组织提取物
采用生理盐水清除血凝块后,通过钝性工具剥离得到新鲜人体羊膜。将新鲜羊膜在同时含有两性霉素B(100 mg/mL)、青霉素(2000 u/mL)、链霉素(100 mg/mL)的生理盐水中浸泡2小时。保持羊膜湿重与生理盐水体积比值为1g/L, 在无菌条件、4℃和中性pH值下进行,将羊膜用生理盐水连续漂洗三次。采用组织粉碎机处理并离心后收集上清液:在无菌条件下进行,组织粉碎机处理时间为2小时,离心速率为2000rpm,离心时间为10分钟。
(2)制备组织再生型生物膜组织复合物
配制促进吸收凝胶缓释系统,即在常温(25℃)下配制质量浓度10%的透明质酸钠(平均分子量为1.8MDa)、质量浓度2%的羟丙基甲基纤维素(平均分子量为120KDa)、质量浓度5%的人源I型胶原特异性结合肽(氨基酸序列为RRRKHHK,采购于上海强耀生物科技有限公司)、质量浓度1%的氯化锌的混合水溶液。随后将质量浓度为10%的羊膜提取物加入到促进吸收凝胶缓释系统,磁力搅拌直至羊膜提取物均匀分散到促进吸收凝胶缓释系统中,即得组织再生型羊膜复合物。
试验例1 生物膜组织复合物在眼表的吸附效率测试
本测试包含以下材料:实施例1-5及对比例1-4。
其中,实施例1-5为采用本发明所述的方法制备的组织再生型生物膜组织复合物。对比例1为不含胶原特异性结合肽的羊膜复合物。对比例2为参考论文(Journal ofBiological Chemistry, 1992, 267(19)及专利(申请号:201310425493.9;202180001723.1)中胶原结合肽序列制备的羊膜复合物。对比例3为参考论文(Journal ofBiological Chemistry, 1992, 267(19)及专利(申请号:201310425493.9;202180001723.1) 中胶原结合肽序列制备的羊膜复合物且添加了锌离子化合物后制备的羊膜复合物。对比例4为仅含有本发明所述I型胶原特异性结合肽且添加了锌离子化合物后制备的羊膜复合物。
测试方法:
首先对实施例1-5及对比例1-5的材料采用荧光素进行标记,步骤如下:将异硫氰酸荧光素(FITC)溶于二甲基亚砜(DMSO)中,浓度为20mg/mL。称量1g的样品(即实施例1-5及对比例1-4的材料),按照(样品:FITC)=1mg:150μg的比例将FITC缓慢加入于样品中,边加边轻轻晃动使其混合均匀,避光4℃反应8h。加入5M的NH4Cl至终浓度50mM,4℃终止反应2h。将标记产物在PBS中透析4次以上,至透析液清亮。
取新西兰兔(2±0.5kg)采用戊巴比妥钠静脉注射麻醉后,眼球向上侧身固定,用剃须刀去除眼部周围绒毛和睫毛,用碘伏进行消毒处理;用奥布卡因对眼表进行局部麻醉。将实施例及对比例中制备的荧光素标记的羊膜复合物涂覆到兔眼球表面,每两小时一次,持续三次;第二天,将新西兰兔安乐死后取出眼球,随后将兔眼球放入匀浆机中提取水溶性物质,采用酶标仪对490nm激发波长、520nm发射波长的荧光进行定量检测。
实验结果如表1和图1所示:
表1
,
实验结果表明,实施例1-5中的组织再生型生物膜组织复合物,相比于对比例1-4,FITC的荧光强度有大幅提升,即反映其吸附效率有大幅提升。
相比于对比例1(不含胶原特异性结合肽的羊膜复合物),对比例2及对比例3对吸附效率的提升效果较小。相比于仅含有本发明所述I型胶原特异性结合肽且添加了锌离子化合物后制备的羊膜复合物(对比例4),实施例1-5中同时含有I型胶原特异性结合肽、Ⅳ型胶原特异性结合肽,对吸附效率提升效果更好。
本发明中促进吸附凝胶缓释系统的I型胶原特异性结合肽、Ⅳ型胶原特异性结合肽的序列设计,进一步提升了其与锌离子化合物之间的离子键作用,提高了促进吸附凝胶缓释系统内部网络结构中的化学交联点,达到大幅提升对生物膜组织复合物吸附效率的效果;且本发明中针对生物膜组织及人体眼表组织中占主要比重的两种胶原,即I型胶原及Ⅳ型胶原,单独优化设计了对应的胶原特异性结合肽,进一步提升了配位作用力。
试验例2 生物膜组织复合物中I 型胶原及Ⅳ型胶原在眼表的吸附效率测试
本测试包含以下材料:实施例1-5及对比例1-4。
其中,实施例1-5为采用本发明所述的方法制备的组织再生型生物膜组织复合物。对比例1为不含胶原特异性结合肽的羊膜复合物。对比例2为参考论文(Journal ofBiological Chemistry, 1992, 267(19)及专利(申请号:201310425493.9;202180001723.1)中胶原结合肽序列制备的羊膜复合物。对比例3为参考论文(Journal ofBiological Chemistry, 1992, 267(19)及专利(申请号:201310425493.9;202180001723.1) 中胶原结合肽序列制备的羊膜复合物且添加了锌离子化合物后制备的羊膜复合物。对比例4为仅含有本发明所述I型胶原特异性结合肽且添加了锌离子化合物后制备的羊膜复合物。
测试方法:取新西兰兔(2±0.5kg)采用戊巴比妥钠静脉注射麻醉后,眼球向上侧身固定,用剃须刀去除眼部周围绒毛和睫毛,用碘伏进行消毒处理;用奥布卡因对眼表进行局部麻醉。将实施例及对比例中制备的羊膜复合物涂覆到兔眼球表面,每两小时一次,持续三次;第二天,将新西兰兔安乐死后取出眼球,随后将兔眼球放入匀浆机中提取总蛋白。采用I 型胶原及Ⅳ型胶原ELISA试剂盒对I 型胶原及Ⅳ型胶原含量进行分析。
实验结果如表2、表3和图2、图3所示:
表2
,
表3
,
实验结果表明,实施例1-5中的组织再生型生物膜组织复合物,相比于对比例1-4,大幅提高了对生物膜组织复合物中I 型胶原及Ⅳ型胶原总含量,即吸附效率。相比于对比例1(不含胶原特异性结合肽的羊膜复合物),对比例2-4对I 型胶原及Ⅳ型胶原吸附的提升效果较小。
试验例3 生物膜组织复合物对细胞生长因子的固定效果测试
本测试包含以下材料:实施例1-5及对比例1-4。
其中,实施例1-5为采用本发明所述的方法制备的组织再生型生物膜组织。对比例1为不含胶原特异性结合肽的羊膜复合物。对比例2为参考论文(Journal of BiologicalChemistry, 1992, 267(19)及专利(申请号:201310425493.9;202180001723.1)中胶原结合肽序列制备的羊膜复合物。对比例3为参考论文(Journal of Biological Chemistry,1992, 267(19)及专利(申请号:201310425493.9;202180001723.1) 中胶原结合肽序列制备的羊膜复合物且添加了锌离子化合物后制备的羊膜复合物。对比例4为仅含有本发明所述I型胶原特异性结合肽且添加了锌离子化合物后制备的羊膜复合物。
测试方法:取新西兰兔(2±0.5kg)采用戊巴比妥钠静脉注射麻醉后,眼球向上侧身固定,用剃须刀去除眼部周围绒毛和睫毛,用碘伏进行消毒处理。用奥布卡因对眼表进行局部麻醉。将实施例及对比例中制备的羊膜复合物涂覆到不同兔的眼球表面,每两小时一次,持续三次。第二天,将新西兰兔安乐死后取出眼球,随后将兔眼球放入匀浆机中提取总蛋白。采用表皮生长因子(Epidermal growth factor , EGF)及肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor , HGF)ELISA试剂盒对两种生长因子含量进行分析。
实验结果如表4、表5和图4、图5所示:
表4
,
表5
,
实验结果表明,实施例1-5中的组织再生型生物膜组织,相比于对比例1-4,大幅提高了对EGF及HGF的固定效果。与实验例1中I 型胶原及Ⅳ型胶原含量测试结果类似,相比于对比例1,对比例2-3对细胞生长因子EGF及HGF的固定效果提升较小。且相比于仅含有本发明所述I型胶原特异性结合肽且添加了锌离子化合物后制备的羊膜复合物(对比例4),实施例1-5中同时含有I型胶原特异性结合肽、Ⅳ型胶原特异性结合肽,对细胞生长因子EGF及HGF的固定效果更好。
本发明促进吸附凝胶缓释系统中的I型胶原特异性结合肽、Ⅳ型胶原特异性结合肽的序列设计,进一步提升了其与锌离子化合物之间的离子键作用,提高了促进吸附凝胶缓释系统内部网络结构中的化学交联点,达到大幅提升对细胞生长因子EGF及HGF的固定效果的效果。
试验例4 生物膜组织复合物对促进眼伤口愈合的效果测试
建立动物烧伤模型:取20只新西兰兔(2±0.5kg)采用戊巴比妥钠静脉注射麻醉后,右眼向上侧身固定,用剃须刀去除右眼周围绒毛和睫毛,用碘伏进行消毒处理。用奥布卡因对眼表进行局部麻醉,干滤纸吸去角膜上多余水分,用浸润了浓度为1mol/L的H2SO4溶液的直径约6 mm的单层圆形滤纸,贴附于角膜中央区域表面,计时30秒除去滤纸。用干滤纸吸去角膜上多余酸液后用大量生理盐水冲洗 5 min。
造模一周后观察创面愈合情况,去除烧伤较轻已自愈和过重烧伤角膜全层的模型,取中轻度烧伤。自身修复能力不能使创面愈合的16个模型用于修复实验。
手术方法:手术操作均使用无菌手术器械,严格按照临床手术要求进行。
(1)实验组
随机取8只烧伤模型(2±0.5kg)采用戊巴比妥钠静脉注射麻醉后,前后肢用绳子固定,手术洞巾包裹实验兔全身,用电动剃须刀将兔右眼周围绒毛去除干净,用碘伏进行消毒处理,尽量减少对手术过程和后期角膜修复的影响。手术部位为角膜酸烧伤模型创面区域,在显微镜下首先对受损部位进行清创,用宝石刀将坏死的角膜上皮、组织彻底清理干净。取优选实施例2中制备的生物膜组织复合物,涂覆于眼表创面部位,每两小时一次,每天3次,持续3天。
(2)空白对照组
取其余8只烧伤模型,手术方法与实验组手术方法相同,不使用羊膜复合物,其余操作及后期护理与实验组相同。
术后评价:观察并拍照记录如下评价项目:
(1)每天观察实验兔子的精神状态及活动情况、观察角膜修复情况。
(2)动物实验评价标准:整体观察角膜修复后的形态,按照下表分类对动物实验中角膜的修复情况进行评价,如下表6:
表6
,
(注:参考全国眼外伤职业眼病学组的分度标准,以及Roper—Hall对眼部化学损伤程度的分级,评价指标为0-1级为有效,2-4级为无效,整体有效性评价时单项无效即判定无效,评价后对所有数据进行统计学分析。)
(3)采用上述“动物实验评价标准”评价方法,于术后8周观察空白对照组和实验组的角膜浑浊度及角膜新生血管情况。于8周对空白对照组和实验组进行荧光素钠染色,观察角膜上皮缺损面积。综合评估材料的安全性和有效性。
结果分析:
(1)术后血管化(角膜新生血管)评分结果.如下表7:
表7
,
(2)术后瘢痕化(角膜浑浊度)评分结果,如下表8:
表8
,
(3)术后上皮化(角膜上皮缺损面积)评分结果,如下表9:
表9
,
通过采用兔角膜酸烧伤模型进行实验组与空白对照组的有效性对比研究,结果表明,本发明提供的羊膜复合物实验组能较好辅助修复角膜中轻度酸烧伤。
试验例5 羊膜复合物在皮肤缺损中的应用
选择国际标准实验动物纯种健康新西兰白兔12只,雌雄不限,体重2.5~3.0 kg。随机分为2个处理组:实验组植入本发明中优选的实施例制备的样品,对照组为凡士林油纱组。
具体实验步骤如下:
术前用8%硫化钠溶液背部脱毛,2%戊巴比妥钠(30mg/kg)腹腔注射麻醉成功后,背部术野皮肤消毒,铺巾。在背部中线两侧制作2×2cm正方形全层皮肤缺损,左侧为实验组,取优选实施例2中制备的羊膜复合物,涂覆于创面部位。右侧为对照组,创面覆盖凡士林油纱。术毕,包扎固定。
术后观察:术后1W(周)、2W、3W、4W观察创面愈合情况,测量伤口大小,计算伤口愈合率。术后4W取愈合区组织用病理学观察。
创面愈合率=愈合面积/原创面面积×100%
结果如下表10:
表10 实验组和对照组创面愈合率比较
,
从上述结果可以看出,本发明提供的羊膜复合物跟传统的油纱相比较,可以加快创面组织愈合。
试验例6 羊膜复合物在肌腱修复中的应用
选择国际标准实验动物纯种健康新西兰白兔40只,雌雄不限,体重2.5~3.0 kg。随机分为2个处理组:实验组采用本发明中优选的实施例2制备的样品,对照组为空白对照组。
兔趾肌腱动物模型具体实验步骤:
(1)实验分组
实验组:取20只新西兰大白兔(2±0.5kg)采用戊巴比妥钠静脉注射麻醉后,大白兔放入固定盒中将兔子左肢伸出固定盒外,用剃须刀将兔左后肢毛除尽后,用碘伏进行消毒处理。手术部位为兔中指屈指肌腱,用手术刀在手术部位行纵切口,找出屈指肌腱,用血管钳挑起后,手术剪造缺损(宽度约为肌腱的1/2),缺损的肌腱采用Bunnell缝合方式缝合,所用的缝合线为5-0单股聚丙烯缝合线,缝合后采用本发明中优选的实施例2制备的样品涂覆于创面部位。最后采用石膏将手术肢固定3周。
空白对照组:取20只新西兰大白兔手术方法与实验组手术方法相同,只是将肌腱缝合完后直接对外周伤口进行缝合,石膏固定。
以上操作均使用无菌手术器械,严格按照临床手术要求进行。术后3天内对实验动物注射头孢唑林(40mg/天)抗菌,注射carprophen(4mg/kg)减轻疼痛感。每天观察实验兔子的精神状态及活动情况。
(2)术后取材
术后3周拆除所有试验兔子的石膏,观察其自由活动的情况,特别是手术肢的活动情况,并且对手术趾进行手动的牵拉,在牵拉的过程中感觉趾的伸缩阻力,与正常趾是否有明显差异。
术后3周、6周分别从实验组与空白对照组中随机抽选10只兔进行取材观察,先用手术刀片将手术部位划开,大体观察肌腱的粘连情况。耳缘静脉注射空气20mL 处死动物,立即取出手术部肌腱,使用电子万能试验机(型号:RGM-6002T)对各组样品进行拉伸强度测试,以5 mm/min 速度对试样施加拉力。样品破坏后,计算机自动输出各组标本的弹性模量数据,评价肌腱生物力学特征。
(2)肌腱生物力学特征结果
拉伸实验分析结果显示,各个观察时间点实验组以及空白对照组肌腱弹性模量均得到明显改善。术后第3周,实验组肌腱弹性模量(最大断裂荷载量)明显优于空白对照组(P< 0.05);术后第6周,实验组和空白对照组样本弹性模量未见显著差异。说明羊膜复合物在修复早期即可有效提高损伤肌腱的抗拉伸强度,实验组组表现出最佳的肌腱修复效果,详见下表11:
表11肌腱生物力学特征结果
,
实验组与空白对照组比较;。
试验例7羊膜复合物在脊柱手术中的应用
选成年新西兰兔40只,体重2.0~3.0 kg,雌雄不拘。依据椎板缺损处硬膜外覆盖物的不同,将40只白兔随机分为实验组和空白对照组,每组20只。
无菌操作下取后正中切口长约20mm,逐层切开,剪去L5 棘突,用微型椎板咬骨钳咬除L5 椎板,造成10mm×5mm的硬脊膜裸露区,去除硬膜外脂肪。彻底止血后,根据术前随机分组,在硬膜外分别覆盖实验组(本发明中优选的实施例2制备的样品),无任何间置物覆盖组作为空白对照组。所有动物术后同等条件下分笼饲养,不服任何药物。
观察内容和方法:
标本收集处理各组分别于术后2、4、8、12周时各处死5只,动物处死后完整取出包括骶棘肌及椎体附件在内的L5 段脊柱,福尔马林溶液固定后行石蜡包埋切片,厚度5μm。分别对组织切片行HE、Masson和苦味酸-天狼猩红染色。
光学显微镜观察在普通光学显微镜下观察硬膜外瘢痕分布及与硬膜和神经根的关系;
计算机图像分析(Axiioplan2 image, 美国)计算出不规则形态的瘢痕横切面面积,将其与椎管面积的比值作瘢痕指数测定。
分析结果:
通过普通显微镜观察,术后2周空白对照组硬膜外有大量的肉芽组织填充缺损,由背侧向椎管侧方延伸,有的达神经根部。实验组肉芽组织和成纤维细胞增生不活跃,实验组基质及基底膜肿胀疏松,有少许成纤维细胞和炎性细胞浸润。术后4周空白对照组胶原纤维增多,部分成纤维细胞转化为纤维细胞,毛细血管减少,实验组成纤维细胞较少,胶原纤维稀少,硬膜外间隙存在。复合羊膜材料与其后方纤维组织相融合,结构模糊,与硬膜间无粘连;胶原密度低,无明显炎性反应。8周时肉芽组织纤维化,空白对照组胶原致密,硬膜与瘢痕粘连,并见骨组织在原椎板缺损处形成,它与硬膜间有瘢痕存在。术后12周时空白对照组可见大量胶原纤维,排列紧密紊乱;细胞成分基本消失,硬膜与瘢痕粘连致密,并与新生椎板相连。实验组术后8周及12周,瘢痕面积缩小,细胞成分稀少,新生骨板下硬膜表面无粘连,部分标本有硬膜外脂肪再生,复合羊膜材料被胶原取代。
微机图像处理系统计算侵入椎管内瘢痕面积与整个椎管面积的比值,测量3张切片,取其均值,计算椎管内相对瘢痕指数。2周内椎板缺损处修复以肉芽组织形成为主,胶原纤维较少,瘢痕指数差异不显著(P>0.05)。4周时胶原纤维增多,瘢痕初步形成,实验组数值最小,显示了羊膜复合物预防粘连作用(P<0.01)。12周时实验组瘢痕指数较空白对照组小(P<0.01),但两组间差异有显著性(P<0.05),见下表12:
表12不同时间相对瘢痕指数比较(n=5;%)
,
(注:实验组与空白对照组比较;统计学分析采用ANOVA分析方法)
如图6为本发明中羊膜实物图,具体为采用生理盐水清除血凝块后通过钝性工具剥离得到的羊膜;图7为浸泡在液氮中冷冻脆化、研磨并过筛后得到的羊膜提取物实物图。
上述实施/试验例仅仅是为清楚地说明所作的举例,而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说,在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。
Claims (9)
1.一种组织再生型生物膜组织复合物,其特征在于:包括生物膜组织提取物和促进吸附凝胶缓释系统;所述促进吸附凝胶缓释系统含透明质酸钠、羟丙基甲基纤维素、I型胶原特异性结合肽、Ⅳ型胶原特异性结合肽和锌离子化合物的混合水溶液,调配促进吸附凝胶缓释系统的组织浓度获得相应滴液或膏状物形式的复合物;其中,以生物膜组织复合物质量体积百分比为计算,生物膜组织提取物的质量浓度为1%~10%;
所述I型胶原特异性结合肽的氨基酸序列为RRRKHHK,对应三字母的氨基酸序列为Arg-Arg-Arg-Lys-His-His-Lys,结构式如下:
;
所述Ⅳ型胶原特异性结合肽的氨基酸序列为HHRKKR,对应三字母的氨基酸序列为His-His-Arg-Lys-Lys-Arg,结构式如下:
。
2.根据权利要求1所述的一种组织再生型生物膜组织复合物,其特征在于:制备成滴液使用的所述促进吸附凝胶缓释系统包括以下质量浓度的组份:透明质酸钠0.1%~0.3%、羟丙基甲基纤维素0.2%~0.5%、I型胶原特异性结合肽2%~5%、Ⅳ型胶原特异性结合肽1%~2%和锌离子化合物0.1%~0.5%,其余为水;
制备成膏状物使用的所述促进吸附凝胶缓释系统包括以下质量浓度的组份及用量:透明质酸钠5%~10%、羟丙基甲基纤维素1%~2%、I型胶原特异性结合肽2%~5%、Ⅳ型胶原特异性结合肽1%~2%和锌离子化合物0.5%~1%,其余为水。
3.根据权利要求1所述的一种组织再生型生物膜组织复合物,其特征在于:所述生物膜组织提取物提取自新鲜生物膜组织,提取来源包括且不限于人或哺乳类动物的羊膜、脐带或胎盘;所述生物膜组织提取物为水溶性固体,水为去离子水。
4.根据权利要求1所述的一种组织再生型生物膜组织复合物,其特征在于:所述透明质酸钠的平均分子量为200KDa~1.8MDa,羟丙基甲基纤维素的平均分子量为90KDa~120KDa。
5.根据权利要求1所述的一种组织再生型生物膜组织复合物,其特征在于:所述锌离子化合物为氯化锌或硫酸锌。
6.根据权利要求1所述的一种组织再生型生物膜组织复合物的制备方法,其特征在于:包括以下步骤:
(1)制备生物膜组织提取物:将新鲜生物膜组织置于抗生素/抗真菌溶液中浸泡、生理盐水漂洗、采用组织粉碎机处理并离心后收集上清液、冷冻干燥;
(2)制备促进吸附凝胶缓释系统:将透明质酸钠、羟丙基甲基纤维素、I型胶原特异性结合肽、Ⅳ型胶原特异性结合肽和锌离子化合物混合于水中形成混合水溶液;
(3)制备组织再生型生物膜组织复合物:将步骤(1)中生物膜组织提取物均匀分散到步骤(2)中促进吸附凝胶缓释系统中,通过调配促进吸附凝胶缓释系统的组织浓度获得相应滴液或膏状物形式的组织再生型生物膜组织复合物,即可。
7.根据权利要求6所述的一种组织再生型生物膜组织复合物的制备方法,其特征在于:所述步骤(1)中抗生素/抗真菌溶液为:含有浓度为10~100 mg/mL两性霉素B、100~2000 U/mL青霉素和10~100 mg/mL链霉素的生理盐水或PBS溶液。
8.根据权利要求6所述的一种组织再生型生物膜组织复合物的制备方法,其特征在于:所述步骤(1)中采用组织粉碎机处理并离心后收集上清液为:在无菌条件下进行,组织粉碎机处理时间为10min~4 h,离心速率为800~2000rpm,离心时间为10min。
9.根据权利要求1所述的一种组织再生型生物膜组织复合物的应用,其特征在于:在制备眼科、骨科、皮肤科及口腔科的伤口管理和术后修复的材料的应用。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202310856867.6A CN116570753B (zh) | 2023-07-13 | 2023-07-13 | 一种组织再生型生物膜组织复合物及制备方法及应用 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202310856867.6A CN116570753B (zh) | 2023-07-13 | 2023-07-13 | 一种组织再生型生物膜组织复合物及制备方法及应用 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN116570753A CN116570753A (zh) | 2023-08-11 |
CN116570753B true CN116570753B (zh) | 2023-09-22 |
Family
ID=87540041
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202310856867.6A Active CN116570753B (zh) | 2023-07-13 | 2023-07-13 | 一种组织再生型生物膜组织复合物及制备方法及应用 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN116570753B (zh) |
Citations (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103705979A (zh) * | 2013-09-18 | 2014-04-09 | 中国人民解放军海军总医院 | 用于神经修复的功能组织工程材料及其制备与用途 |
CN108339154A (zh) * | 2017-01-25 | 2018-07-31 | 中国科学院遗传与发育生物学研究所 | 一种诱导颅脑损伤组织再生的功能生物材料及其应用 |
CN112494729A (zh) * | 2020-12-02 | 2021-03-16 | 健诺维(成都)生物科技有限公司 | 含药组织移植物及其制备方法、应用 |
CN113490517A (zh) * | 2021-04-27 | 2021-10-08 | 北京博辉瑞进生物科技有限公司 | 一种嵌合肽修饰的sis膜、其制备方法及应用 |
CN114129767A (zh) * | 2021-09-09 | 2022-03-04 | 戴钲昊 | 表面封闭性软组织创面保护胶及其应用 |
CN114917413A (zh) * | 2022-06-14 | 2022-08-19 | 健诺维(成都)生物科技有限公司 | 一种负载重组多肽的羊膜及其制备方法 |
CN115181187A (zh) * | 2022-07-18 | 2022-10-14 | 吾奇生物医疗科技(江苏)有限公司 | 一种促进上皮细胞粘附的多肽、功能胶原材料及其制备方法和应用 |
CN115845141A (zh) * | 2023-03-02 | 2023-03-28 | 健诺维(成都)生物科技有限公司 | 一种干态羊膜的制备方法及应用 |
Family Cites Families (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE60232688D1 (de) * | 2001-11-20 | 2009-07-30 | Univ Duke | Grenzflächen-biomaterialien |
KR100739528B1 (ko) * | 2006-02-03 | 2007-07-13 | 재단법인서울대학교산학협력재단 | 제1형 교원질 부착 유도 펩타이드가 고정된 골이식재 및 조직공학용 지지체 |
US20200048333A1 (en) * | 2016-10-26 | 2020-02-13 | Thomas Jefferson University | Antigen-binding domains of the monoclonal anti-collagen i antibody |
WO2020068665A1 (en) * | 2018-09-27 | 2020-04-02 | Fabius Biotechnology | Use of collagen binding domains to deliver products to skin |
-
2023
- 2023-07-13 CN CN202310856867.6A patent/CN116570753B/zh active Active
Patent Citations (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103705979A (zh) * | 2013-09-18 | 2014-04-09 | 中国人民解放军海军总医院 | 用于神经修复的功能组织工程材料及其制备与用途 |
CN108339154A (zh) * | 2017-01-25 | 2018-07-31 | 中国科学院遗传与发育生物学研究所 | 一种诱导颅脑损伤组织再生的功能生物材料及其应用 |
CN112494729A (zh) * | 2020-12-02 | 2021-03-16 | 健诺维(成都)生物科技有限公司 | 含药组织移植物及其制备方法、应用 |
CN113490517A (zh) * | 2021-04-27 | 2021-10-08 | 北京博辉瑞进生物科技有限公司 | 一种嵌合肽修饰的sis膜、其制备方法及应用 |
CN114129767A (zh) * | 2021-09-09 | 2022-03-04 | 戴钲昊 | 表面封闭性软组织创面保护胶及其应用 |
CN114917413A (zh) * | 2022-06-14 | 2022-08-19 | 健诺维(成都)生物科技有限公司 | 一种负载重组多肽的羊膜及其制备方法 |
CN115181187A (zh) * | 2022-07-18 | 2022-10-14 | 吾奇生物医疗科技(江苏)有限公司 | 一种促进上皮细胞粘附的多肽、功能胶原材料及其制备方法和应用 |
CN115845141A (zh) * | 2023-03-02 | 2023-03-28 | 健诺维(成都)生物科技有限公司 | 一种干态羊膜的制备方法及应用 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
Adhesive Hydrogel Patch-Mediated Combination Drug Therapy Induces Regenerative Wound Healing through Reconstruction of Regenerative Microenvironment;Lee Soung-Hoon等;ADVANCED HEALTHCARE MATERIALS;第12卷(第18期);文献号202203094 * |
Collagen binding site in collagenase can be determined using the concept of sense-antisense peptide interactions;SOUZA S J D等;Journal of Biological Chemistry;第267卷(第19期);13763-13767页 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN116570753A (zh) | 2023-08-11 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US11660376B2 (en) | Decellularized biomaterial from non-mammalian tissue | |
US7709017B2 (en) | Implantable preparations | |
WO2016178586A2 (en) | Collagen compositions and preparation and uses thereof | |
US20050287223A1 (en) | Use of amniotic membrane as biocompatible devices | |
JPH0751512B2 (ja) | 創傷治癒剤 | |
CN115845141B (zh) | 一种干态羊膜的制备方法及应用 | |
CN117838931B (zh) | 一种提高力学强度的干态羊膜及其制备方法 | |
US20210268032A1 (en) | Flowable birth tissue composition and related methods | |
US20210369598A1 (en) | Compositions and methods relating to amnion | |
CN116570753B (zh) | 一种组织再生型生物膜组织复合物及制备方法及应用 | |
CN115843780B (zh) | 生物膜保存液及其制备方法和应用 | |
Jay et al. | Amniotic membrane in clinical medicine: History, current status, and future use | |
Hanumanthappa et al. | Amniotic membrane dressing versus conventional dressing in lower limb varicose ulcer: a prospective comparative study | |
Arantrinita et al. | The effect of collagen-chitosan-natrium hyaluronate composite on neovascularization as angiogenesis reaction in rabbit corneal stroma wound (Experimental study on Oryctolagus cuniculus) | |
Miljudin et al. | Silica gel dissication of amniotic membrane with related epithelium cells for ocular surface reconstruction | |
US20230310707A1 (en) | Porcine Scaffolds and Methods of Preparation | |
CN117679564A (zh) | 一种复合生物活性膜材及制备方法及应用 | |
Guide | Dedicated to.... My | |
WO2021186181A1 (en) | Combinations, kits and methods for wound treatment | |
WO2024076708A1 (en) | Mesodermal compositions and methods for their use | |
Tdrnbull et al. | Histological evaluation of the osteogenic capacity of sclera | |
Akmalin et al. | The Effect of Collagen-Chitosan-Sodium Hyaluronate Implantation Composite on Inflammation Reaction (Flare) In New Zealand Rabbit Corneal Stroma | |
CN117120465A (zh) | 胶原蛋白颗粒于促进毛囊生成或血管生成的用途 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |