CN116568810A - 新型抗糖链抗体及其用途 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种抗体或其片段，其特异性地结合于6‑磺基唾液酸路易斯X糖链，该结合要求构成6‑磺基唾液酸路易斯X糖链的岩藻糖、硫酸基和唾液酸。

Description

新型抗糖链抗体及其用途
技术领域
本发明广泛涉及以糖链为靶标的新型抗体，特别是涉及抗体或其片段、及其用途等，所述抗体或其片段特异性地结合于6-磺基唾液酸路易斯X(6-sulfo sialyl Lewis X)糖链，该结合要求构成6-磺基唾液酸路易斯X糖链的岩藻糖、硫酸基和唾液酸。
背景技术
大多数免疫相关疾病的病情机理尚不明确，其中，自身免疫疾病是未满足的医疗需求(unmet medical needs)较高的疾病之一。在
自身免疫疾病中，关于多发性硬化症的治疗，针对作为掌管炎症细胞向中枢神经系统的浸润的粘附分子的VLA-4整联蛋白的抗体那他珠单抗显示出病情改善效果，但有时会引起由JC病毒感染引起的进行性多灶性白质脑病。此外，作为低分子药物的Fingolimod(FTY720)虽然确认了作为多发性硬化症治疗药的有效性，但也已知传染病、缓脉性心律失常等副作用，期望开发作用机理不同的新型治疗药。FTY720将使受到抗原致敏的淋巴细胞停留在淋巴结内作为作用机理，但如果能够抑制淋巴细胞迁移到淋巴结内的过程(淋巴细胞归巢)，则认为有可能抑制淋巴结内的抗原致敏，得到包括多发性硬化症在内的各种免疫相关疾病的根本治疗。但是，迄今为止还不清楚是否能够通过抑制淋巴细胞向淋巴结的归巢来治疗自身免疫疾病等免疫相关疾病。
在免疫系统中，大量免疫细胞经由血液/淋巴液在生物体内循环，对外来抗原进行监视。其中，在外周血中循环的淋巴细胞向次级淋巴组织游走的现象被称为淋巴细胞归巢，通过多阶段的粘附分子级联而被严密地控制。因此，理解这些粘附分子级联，对于理解淋巴细胞的体内动态和组织指向性是重要的。
淋巴细胞归巢是为了高效地诱导免疫响应而具备的生物体防御机制，在淋巴细胞向外周淋巴结、肠系膜淋巴结、派尔集合淋巴结(Peyer's patch)等次级淋巴组织迁移时，在与由骰子状的特殊形态的内皮细胞构成的高内皮微静脉(high endothelial venule：HEV)粘附后向组织内浸润。
如果能够通过阻碍淋巴细胞归巢来抑制该淋巴细胞与HEV的特异性粘附，则认为例如能够控制生物体的过敏反应，有可能有助于各种疾病的治疗。但是，由于自身免疫疾病、过敏性疾病等免疫相关疾病的发病与各种因素相关，因此通过阻碍淋巴细胞归巢，是否能够治疗这些免疫相关疾病并不明确。
在粘合分子级联中，6-磺基唾液酸路易斯X承担向介导淋巴细胞浸润的高内皮微静脉的初始粘附，因此是淋巴细胞归巢所必需的糖链结构。本发明人等制备了在糖链上转移硫酸基的硫酸基转移酶的基因缺失小鼠，证明了HEV中特异性表达的作为硫酸化糖链的6-磺基唾液酸路易斯X对淋巴细胞向次级淋巴组织的归巢和接触性皮炎的发病起到必须的作用(非专利文献1：Kawa shima et al.，Nat.Immunol.，11：1096-1104，2005)。
也已知有识别HEV的抗体，但由于在生物体内表达的糖链具有微量且多样的结合方式，因此通过抗体而识别的糖链结构不同。例如，对外周淋巴结的HEV进行特异性染色的MECA-79(非专利文献2：Streeter et al.，J.Cell Biol.，107：1853-1862，1988)仅在存在于被称为伸长型核心1结构的特殊的O-型糖链上的情况下识别6-磺基唾液酸路易斯X。此外，该识别需要6-磺基唾液酸路易斯X中的硫酸基，但在构成6-磺基唾液酸路易斯X的糖链中，不需要对淋巴细胞归巢起重要作用的岩藻糖、唾液酸。此外，S1抗体及S2抗体(非专利文献3：Hirakawa et al.，J.Biol.Chem.，285：40864-40878，2010)也识别6-磺基唾液酸路易斯X，但该识别需要6-磺基唾液酸路易斯X中的硫酸基及唾液酸，不需要岩藻糖。因此，这些抗体不仅与HEV结合，还与表达缺少岩藻糖的6-磺基唾液酸LacNAc糖链的组织结合，无法否定对生物体带来淋巴细胞归巢的阻碍以外的意料之外的副作用的可能性。此外，作为抗唾液酸路易斯X单克隆抗体的F1抗体和F2抗体(非专利文献4：Matsumura et al.，J.Biol.Chem.，290：15313-15326，2015)也识别6-磺基唾液酸路易斯X，但该识别中不需要6-磺基唾液酸路易斯X中的硫酸基，识别未被硫酸化的唾液酸路易斯X。因此，这些抗体除了与HEV结合而阻碍淋巴细胞归巢以外，还与表达唾液酸路易斯X的白细胞结合，也抑制P-选择素、E-选择素依赖性的白细胞的滚动。
S1抗体、S2抗体均为IgM级的抗体，因此难以以高纯度大量制备，因此难以验证其对需要频繁给药的自身免疫疾病等免疫相关疾病的治疗效果，其对自身免疫疾病等免疫相关疾病的治疗效果不明确。
此外，除了S1抗体、S2抗体以外，还已知有对6-磺基唾液酸路易斯X具有结合性的抗体(非专利文献2、4、5、6)，但这些抗体对自身免疫疾病等免疫相关疾病的治疗效果也不明确。
现有技术文献
非专利文献
非专利文献1：Kawashima et al.,Nat.Immunol.,11：1096-1104，2005
非专利文献2：Streeter et al.,J.Cell Biol.,107：1853-1862，1988
非专利文献3：Hirakawa et al.,J.Biol.Chem.,285：40864-40878，2010
非专利文献4：Matsumura et al.,J.Biol.Chem.,290：15313-15326，2015
非专利文献5：Mitsuoka et al.,J.Biol.Chem.,273：11225-11233，1998
非专利文献6：松浦宽明等,日本药学会第135年会要旨集(CD-ROM),页：ROMBUNNO.27X-PM05S,2015
发明内容
发明所解决的技术问题
本发明的目的在于，发现成为多发性硬化症等免疫相关疾病的有效的治疗靶标的糖链，并且提供与以该糖链为靶标的新型抗体，特别是提供特异性地结合于6-磺基唾液酸路易斯X糖链并且该结合要求构成6-磺基唾液酸路易斯X糖链的岩藻糖、硫酸基和唾液酸的抗体或其片段、及其用途等。
解决问题的技术手段
本发明人使用对使糖链合成酶过量表达于糖链合成酶缺失小鼠的细胞进行免疫这样的本发明人等设计的方法，而制备了多种抗体。从其中，通过免疫组织化学研究，筛选与表达6-磺基唾液酸路易斯X糖链的HEV特异性结合的IgG1类的抗糖链单克隆抗体(SF1抗体)，进行其结合特异性和序列分析。结果发现，所得到的抗糖链抗体的序列是新型的，识别出6-磺基唾液酸路易斯X，在该识别中同时要求构成6-磺基唾液酸路易斯X糖链的岩藻糖、硫酸基和唾液酸这3种，严格地从其他糖链结构中识别出6-磺基唾液酸路易斯X。作为利用生物膜层干涉法的分析的结果，SF1抗体与6-磺基唾液酸路易斯X的结合的KD值为6.09×10-9(M)。
本发明人明确了SF1抗体具有抑制作为淋巴细胞归巢受体的L-选择素与HEV的结合，并且抑制6-磺基唾液酸路易斯X表达细胞上的淋巴细胞的L-选择素依赖性的滚动的活性，对于阻碍淋巴细胞归巢是有效的。
接着，本发明人着眼于参与淋巴细胞归巢的糖链成为多发性硬化症等免疫相关疾病的有效治疗靶标的可能性，使用因参与淋巴细胞归巢的6-磺基唾液酸路易斯X糖链的合成缺陷而导致淋巴细胞归巢显著降低的硫酸基转移酶GlcNAc6ST-1/2双重缺失小鼠，进行了实验性自身免疫性脑脊髓炎的分析。结果发现，由GlcNAc6ST-1/2合成的6-磺基唾液酸路易斯X糖链成为多发性硬化症等免疫相关疾病的治疗靶标。
因此，本发明人通过使用了动物模型的非临床试验，多方面地研究了SF 1抗体对免疫相关疾病的治疗效果。结果发现，具有实验性自身免疫性脑脊髓炎的显著预防效果和治疗效果。进一步明确了在类风湿性关节炎模型和过敏性鼻炎模型中也具有疾病抑制效果。由以上可知，SF1抗体与6-磺基唾液酸路易斯X糖链特异性结合，特异性阻碍淋巴细胞向淋巴结的归巢，由此发挥对自身免疫疾病和过敏性疾病等免疫相关疾病的显著治疗效果。
本发明人发现，使用SF1抗体进行人正常组织的免疫组织染色，SF1抗体与人的外周淋巴结和扁桃体HEV特异性结合。
SF1抗体是小鼠抗体，因此为了用于人免疫相关疾病的治疗，抗体的人源化是重要的。因此，本发明人进一步制备了将SF1抗体的超变区的序列移植到人抗体可变区的框架序列中而得到的人源化单链SF1抗体，结果表明其保持与HEV的特异性结合性。因此，制备将该可变区序列替换为人IgG1重链和人κ轻链的完整型的人源化SF1抗体，结果表明以硫酸基、岩藻糖依赖性地显示出与HEV的特异性结合性，保持对6-磺基唾液酸路易斯X糖链的特异性结合特异性。
接着，本发明人明确了人源化SF1抗体与小鼠SF1抗体同样地对淋巴细胞归巢的阻碍和实验性自身免疫性脑脊髓炎的发病抑制是有效的。
进而，本发明人发现，制备将Fc部分的序列修饰成已知使抗体的Fc部分介导的效应活性降低、降低副作用风险的序列而得到的人源化SF1抗体，保持特异性的组织结合性。可认为这些修饰了Fc部分的序列的人源化SF1抗体作为自身免疫疾病、过敏性疾病等免疫相关疾病的治疗抗体是有用的。
即，本申请发明包含以下的发明。
[1]一种抗体或其片段，其特异性地结合于6-磺基唾液酸路易斯X糖链，该结合要求构成6-磺基唾液酸路易斯X糖链的岩藻糖、硫酸基和唾液酸，其中，所述抗体或其片段包含选自下述中的至少一个以上的CDR：
(a)由SEQ ID NO.1所述的氨基酸序列构成的CDRH1；
(b)由SEQ ID NO.2所述的氨基酸序列构成的CDRH2；
(c)由SEQ ID NO.3所述的氨基酸序列构成的CDRH3；
(d)由SEQ ID NO.4所述的氨基酸序列构成的CDRL1；
(e)由SEQ ID NO.5所述的氨基酸序列构成的CDRL2；
(f)由SEQ ID NO.6所述的氨基酸序列构成的CDRL3；
或者，
所述抗体或其片段包含至少一个以上的由在各CDR的氨基酸序列中具有1个或数个氨基酸的缺失、替换或添加的氨基酸序列构成的CDR，
或者，
所述抗体或其片段包含至少一个以上的由与各CDR的氨基酸序列具有80％以上的同一性的氨基酸序列构成的CDR。
[2]根据[1]所述的抗体或其片段，其中，
所述抗体或其片段含有包含下述CDR的重链可变区：
(a)由SEQ ID NO.1所述的氨基酸序列构成的CDRH1；
(b)由SEQ ID NO.2所述的氨基酸序列构成的CDRH2；和
(c)由SEQ ID NO.3所述的氨基酸序列构成的CDRH3；
或者，
所述抗体或其片段含有包含由在各CDR的氨基酸序列中具有1个或数个氨基酸的缺失、替换或添加的氨基酸序列构成的CDRH1、CDRH2和CDRH3的重链可变区，
或者，
所述抗体或其片段含有包含由与各CDR的氨基酸序列具有80％以上的同一性的氨基酸序列构成的CDRH1、CDRH2和CDRH3的重链可变区。
[3]根据[2]所述的抗体或其片段，其中，
重链可变区包含SEQ ID NO.13、15～17中任一项所述的氨基酸序列的至少90个连续的氨基酸。
[4]根据[2]或[3]所述的抗体或其片段，其中，
重链可变区包含：SEQ ID NO.13、15～17中任一项所述的氨基酸序列、在SEQ IDNO.13、15～17中任一项所述的氨基酸序列中具有1个或数个氨基酸的缺失、替换或添加的氨基酸序列、或与SEQ ID NO.13、15～17中任一项所述的氨基酸序列具有80％以上的同一性的氨基酸序列。
[5]根据[2]～[4]中任一项所述的抗体或其片段，其中，
重链包含：SEQ ID NO.25、27或28所述的氨基酸序列、在SEQ ID NO.25、27或28所述的氨基酸序列中具有1个或数个氨基酸的缺失、替换或添加的氨基酸序列、或与SEQ IDNO.25、27或28所述的氨基酸序列具有80％以上的同一性的氨基酸序列。
[6]根据[1]～[5]中任一项所述的抗体或其片段，其中，
所述抗体或其片段含有包含下述CDR的轻链可变区：
(d)由SEQ ID NO.4所述的氨基酸序列构成的CDRL1；
(e)由SEQ ID NO.5所述的氨基酸序列构成的CDRL2；和
(f)由SEQ ID NO.6所述的氨基酸序列构成的CDRL3；
或者，
所述抗体或其片段含有包含由在各CDR的氨基酸序列中具有1个或数个氨基酸的缺失、替换或添加的氨基酸序列构成的CDRL1、CDRL2和CDRL3的轻链可变区，
或者，
所述抗体或其片段含有包含由与各CDR的氨基酸序列具有80％以上的同一性的氨基酸序列构成的CDRL1、CDRL2和CDRL3的轻链可变区。
[7]根据[6]所述的抗体或其片段，其中，
轻链可变区包含：SEQ ID NO.14、18～20中任一项所述的氨基酸序列的至少80个连续的氨基酸。
[8]根据[6]或[7]所述的抗体或其片段，其中，
轻链可变区包含：SEQ ID NO.14、18～20中任一项所述的氨基酸序列、在SEQ IDNO.14、18～20中任一项所述的氨基酸序列中具有1个或数个氨基酸的缺失、替换或添加的氨基酸序列、或与SEQ ID NO.14、18～20中任一项所述的氨基酸序列具有80％以上的同一性的氨基酸序列。
[9]根据[6]～[8]中任一项所述的抗体或其片段，其中，
轻链包含：SEQ ID NO.26所述的氨基酸序列、在SEQ ID NO.26所述的氨基酸序列中具有1个或数个氨基酸的缺失、替换或添加的氨基酸序列、或与SEQ ID NO.26所述的氨基酸序列具有80％以上的同一性的氨基酸序列。
[10]根据[1]～[9]中任一项所述的抗体或其片段，其中，
所述抗体或其片段含有包含下述的CDR：
(a)由SEQ ID NO.1所述的氨基酸序列构成的CDRH1；
(b)由SEQ ID NO.2所述的氨基酸序列构成的CDRH2；
(c)由SEQ ID NO.3所述的氨基酸序列构成的CDRH3；
(d)由SEQ ID NO.4所述的氨基酸序列构成的CDRL1；
(e)由SEQ ID NO.5所述的氨基酸序列构成的CDRL2；和
(f)由SEQ ID NO.6所述的氨基酸序列构成的CDRL3；
或者，
所述抗体或其片段包含由在各CDR的氨基酸序列中具有1个或数个氨基酸的缺失、替换或添加的氨基酸序列构成的CDRH1、CDRH2和CDRH3以及CDRL1、CDRL2和CDRL3，
或者，
所述抗体或其片段包含由与各CDR的氨基酸序列具有80％以上的同一性的氨基酸序列构成的CDRH1、CDRH2和CDRH3以及CDRL1、CDRL2和CDRL3。
[11]根据[1]～[10]中任一项所述的抗体或其片段，其阻碍表达6-磺基唾液酸路易斯X糖链的高内皮微静脉与L-选择素的结合。
[12]根据[1]～[11]中任一项所述的抗体或其片段，其恒定区源自人。
[13]根据[1]～[12]中任一项所述的抗体或其片段，其进行了人源化。
[14]根据[1]～[13]中任一项所述的抗体或其片段，其选自Fab、F(ab’)2、Fab’、Fv和单链抗体。
[15]根据[14]所述的抗体或其片段，其中，
单链抗体包含：SEQ ID NO.21～24中任一项所述的氨基酸序列中的第1～117个和第133～238个的氨基酸序列、在SEQ ID NO.21～24中任一项所述的氨基酸序列中的第1～117个和第133～238个的氨基酸序列中具有1个或数个氨基酸的缺失、替换或添加的氨基酸序列、或与SEQ ID NO.21～24中任一项所述的氨基酸序列中的第1～117个和第133～238个的氨基酸序列具有80％以上的同一性的氨基酸序列。
[16]根据[1]～[15]中任一项所述的抗体或其片段，其中，
抗体或其片段对于6-磺基唾液酸路易斯X糖链表现出1×10-6M以下的解离常数(KD值)。
[17]一种多核苷酸，其编码：
[1]～[16]中任一项所述的抗体或其片段。
[18]一种表达载体，其包含：
[17]所述的多核苷酸。
[19]一种宿主细胞，其通过[18]所述的表达载体进行了转染。
[20]根据[19]所述的宿主细胞，其为真核细胞。
[21]一种杂交瘤，其产生：
[1]～[16]中任一项所述的抗体。
[22]一种淋巴细胞归巢抑制剂，其包含：
[1]～[16]中任一项所述的抗体或其片段、[17]所述的多核苷酸、或[18]所述的表达载体。
[23]一种药物组合物，其包含：
[1]～[16]中任一项所述的抗体或其片段、[17]所述的多核苷酸、或[18]所述的表达载体。
[24]根据[23]所述的药物组合物，其用于治疗或预防因淋巴细胞归巢而引起的免疫响应过度作用而产生的疾病。
[25]根据[24]所述的药物组合物，其中，
因淋巴细胞归巢而引起的免疫响应过度作用而产生的疾病为免疫相关疾病。
[26]根据[25]所述的药物组合物，其中，
免疫相关疾病为过敏性疾病或自身免疫疾病。
[27]根据[26]所述的药物组合物，其中，
免疫相关疾病为选自过敏性鼻炎、特应性皮炎、食物过敏、口腔过敏综合征、药剂过敏、花粉症、过敏性结膜炎、嗜酸性粒细胞性肺炎、过敏性胃肠炎、荨麻疹、光线过敏症、金属过敏、猫过敏、螨虫过敏和哮喘中的过敏性疾病。
[28]根据[26]所述的药物组合物，其中，
免疫相关疾病为选自复发缓解型多发性硬化症、一次进展型多发性硬化症和二次进展型多发性硬化症的多发性硬化症；银屑病；类风湿关节炎；银屑病性关节炎；系统性红斑狼疮(SLE)；溃疡性大肠炎；克罗恩病；良性淋巴细胞性血管炎；血小板减少性紫癜；突发性血小板减少症；特发性自身免疫性溶血性贫血；红细胞再生障碍；舍格伦综合征；风湿性疾病；结缔组织疾病；炎症性风湿病；变形性风湿病；非关节性风湿病；青少年类风湿关节炎；肌肉风湿病；慢性多发性关节炎；冷球蛋白血管炎；ANCA相关血管炎；抗磷脂综合征；重症肌无力；自身免疫性溶血性贫血；吉兰-巴雷综合征；慢性免疫性多发神经病；自身免疫性甲状腺炎；胰岛素依赖性糖尿病；1型糖尿病；艾迪森病；膜性肾小球肾病；抗肾小球基底膜肾病；自身免疫性胃炎；自身免疫性萎缩性胃炎；恶性贫血；天疱疮；寻常性天疱疮；肝硬化；原发性胆汁性肝硬化；皮肌炎；多发性肌炎；纤维肌炎；肌硬症；乳糜泻；免疫球蛋白A肾病；Henoch-Schonlein紫癜；埃文斯综合征；银屑病；关节症性银屑病；格雷夫斯病；格雷夫斯眼病；硬皮症；系统性硬皮症；进行性系统性硬皮症；原发性胆汁性肝硬化；桥本甲状腺炎；原发性粘液水肿；交感性眼炎；自身免疫性葡萄膜炎；肝炎；慢性活动性肝炎；胶原病；强直性脊椎炎；肩关节周围炎；结节性多动脉炎；软骨钙化症；韦格纳氏肉芽肿症；显微镜下多血管炎；慢性荨麻疹；水疱性皮肤病；类天疱疮；德维克病；小儿自身免疫性溶血性贫血；难治性或慢性自身免疫性血细胞减少症；后天性血友病A；冷凝集素病；视神经脊髓炎；全身僵硬综合征；胰腺炎；心肌炎；血管炎；胃炎；痛风；痛风性关节炎；银屑病；正补体血症性荨麻疹样血管炎；心膜炎；肌炎；抗合成酶综合征；巩膜炎；巨噬细胞活化综合征；贝赫切特综合征；PAPA综合征；Blau综合征；成人和青少年斯蒂尔病；Cryopyrin相关周期性综合征；Muckle-Wells综合征；家族性冷因性自身炎症性综合征；新生儿期发病多脏器性炎症性疾病；家族性地中海热；慢性婴儿期发病神经皮肤关节综合征；全身型青少年特发性关节炎；高IgD综合征；施尼茨勒综合征；自身免疫性视网膜症；动脉粥样硬化；慢性前立腺炎；和TNF受体相关周期性综合征(TRAPS)中的自身免疫疾病。
[29]根据[28]所述的药物组合物，其中，
自身免疫疾病为多发性硬化症或胶原病。
[30]根据[28]或[29]所述的药物组合物，其中，
胶原病为选自类风湿关节炎、系统性红斑狼疮、硬皮症、皮肌炎、结节性多发动脉炎、混合性结缔组织病、舍格伦综合征、显微镜下多血管炎、嗜酸性肉芽肿性多血管炎、过敏性血管炎、贝赫切特病、科干综合征、RS3PE、巨细胞性动脉炎、成人斯蒂尔病、风湿性多发肌痛症、纤维肌痛症和SAPHO综合征中的一种或多种疾病。
[31]根据[24]～[30]中任一项所述的药物组合物，其进一步包含：
用于治疗或预防因淋巴细胞归巢而引起的免疫响应过度作用而产生的疾病的药剂。
[32]一种制造[1]～[16]中任一项所述的抗体或其片段的方法，其包含：
培养[19]或[20]所述的宿主细胞或[21]所述的杂交瘤的工序。
[33]一种用于治疗或预防因淋巴细胞归巢而引起的免疫响应过度作用而产生的疾病的药物组合物，其包含：
抗体或其片段、编码该抗体或其片段的多核苷酸、或包含该多核苷酸的表达载体，所述抗体或其片段特异性地结合于6-磺基唾液酸路易斯X糖链，该结合要求构成6-磺基唾液酸路易斯X糖链的岩藻糖、硫酸基和唾液酸。
[34]根据[33]所述的药物组合物，其中，
因淋巴细胞归巢而引起的免疫响应过度作用而产生的疾病为免疫相关疾病。
[35]根据[34]所述的药物组合物，其中，
免疫相关疾病为过敏性疾病或自身免疫疾病。
[36]根据[35]所述的药物组合物，其中，
免疫相关疾病为选自过敏性鼻炎、特应性皮炎、食物过敏、口腔过敏综合征、药剂过敏、花粉症、过敏性结膜炎、嗜酸性粒细胞性肺炎、过敏性胃肠炎、荨麻疹、光线过敏症、金属过敏、猫过敏、螨虫过敏和哮喘中的过敏性疾病。
[37]根据[35]所述的药物组合物，其中，
免疫相关疾病为选自复发缓解型多发性硬化症、一次进展型多发性硬化症和二次进展型多发性硬化症的多发性硬化症；银屑病；类风湿关节炎；银屑病性关节炎；系统性红斑狼疮(SLE)；溃疡性大肠炎；克罗恩病；良性淋巴细胞性血管炎；血小板减少性紫癜；突发性血小板减少症；特发性自身免疫性溶血性贫血；红细胞再生障碍；舍格伦综合征；风湿性疾病；结缔组织疾病；炎症性风湿病；变形性风湿病；非关节性风湿病；青少年类风湿关节炎；肌肉风湿病；慢性多发性关节炎；冷球蛋白血管炎；ANCA相关血管炎；抗磷脂综合征；重症肌无力；自身免疫性溶血性贫血；吉兰-巴雷综合征；慢性免疫性多发神经病；自身免疫性甲状腺炎；胰岛素依赖性糖尿病；1型糖尿病；艾迪森病；膜性肾小球肾病；抗肾小球基底膜肾病；自身免疫性胃炎；自身免疫性萎缩性胃炎；恶性贫血；天疱疮；寻常性天疱疮；肝硬化；原发性胆汁性肝硬化；皮肌炎；多发性肌炎；纤维肌炎；肌硬症；乳糜泻；免疫球蛋白A肾病；Henoch-Schonlein紫癜；埃文斯综合征；银屑病；关节症性银屑病；格雷夫斯病；格雷夫斯眼病；硬皮症；系统性硬皮症；进行性系统性硬皮症；原发性胆汁性肝硬化；桥本甲状腺炎；原发性粘液水肿；交感性眼炎；自身免疫性葡萄膜炎；肝炎；慢性活动性肝炎；胶原病；强直性脊椎炎；肩关节周围炎；结节性多动脉炎；软骨钙化症；韦格纳氏肉芽肿症；显微镜下多血管炎；慢性荨麻疹；水疱性皮肤病；类天疱疮；德维克病；小儿自身免疫性溶血性贫血；难治性或慢性自身免疫性血细胞减少症；后天性血友病A；冷凝集素病；视神经脊髓炎；全身僵硬综合征；胰腺炎；心肌炎；血管炎；胃炎；痛风；痛风性关节炎；银屑病；正补体血症性荨麻疹样血管炎；心膜炎；肌炎；抗合成酶综合征；巩膜炎；巨噬细胞活化综合征；贝赫切特综合征；PAPA综合征；Blau综合征；成人和青少年斯蒂尔病；Cryopyrin相关周期性综合征；Muckle-Wells综合征；家族性冷因性自身炎症性综合征；新生儿期发病多脏器性炎症性疾病；家族性地中海热；慢性婴儿期发病神经皮肤关节综合征；全身型青少年特发性关节炎；高IgD综合征；施尼茨勒综合征；自身免疫性视网膜症；动脉粥样硬化；慢性前立腺炎；和TNF受体相关周期性综合征(TRAPS)中的任一种自身免疫疾病。
[38]根据[37]所述的药物组合物，其中，
自身免疫疾病为多发性硬化症或胶原病。
[39]根据[38]所述的药物组合物，其中，
胶原病为选自类风湿关节炎、系统性红斑狼疮、硬皮症、皮肌炎、结节性多发动脉炎、混合性结缔组织病、舍格伦综合征、显微镜下多血管炎、嗜酸性肉芽肿性多血管炎、过敏性血管炎、贝赫切特病、科干综合征、RS3PE、巨细胞性动脉炎、成人斯蒂尔病、风湿性多发肌痛症、纤维肌痛症和SAPHO综合征中的一种或多种疾病。
[40]根据[33]～[39]中任一项所述的药物组合物，其中，
抗体或其片段阻碍表达6-磺基唾液酸路易斯X糖链的高内皮微静脉与L-选择素的结合。
[41]根据[33]～[40]中任一项所述的药物组合物，其中，
抗体或其片段为[1]～[16]中任一项所述的抗体或其片段。
[42]一种用于治疗或预防对象中的因淋巴细胞归巢而引起的免疫响应过度作用而产生的疾病的方法，其包含：
将有效量的抗体或其片段、编码该抗体或其片段的多核苷酸、或包含该多核苷酸的表达载体施用于该对象的步骤，所述抗体或其片段特异性地结合于6-磺基唾液酸路易斯X糖链，该结合要求构成6-磺基唾液酸路易斯X糖链的岩藻糖、硫酸基和唾液酸。
[43]根据[42]所述的方法，其中，
因淋巴细胞归巢而引起的免疫响应过度作用而产生的疾病为免疫相关疾病。
[44]根据[43]所述的方法，其中，
免疫相关疾病为过敏性疾病或自身免疫疾病。
[45]根据[44]所述的方法，其中，
免疫相关疾病为选自过敏性鼻炎、特应性皮炎、食物过敏、口腔过敏综合征、药剂过敏、花粉症、过敏性结膜炎、嗜酸性粒细胞性肺炎、过敏性胃肠炎、荨麻疹、光线过敏症、金属过敏、猫过敏、螨虫过敏和哮喘中的过敏性疾病。
[46]根据[44]所述的方法，其中，
免疫相关疾病为选自复发缓解型多发性硬化症、一次进展型多发性硬化症和二次进展型多发性硬化症的多发性硬化症；银屑病；类风湿关节炎；银屑病性关节炎；系统性红斑狼疮(SLE)；溃疡性大肠炎；克罗恩病；良性淋巴细胞性血管炎；血小板减少性紫癜；突发性血小板减少症；特发性自身免疫性溶血性贫血；红细胞再生障碍；舍格伦综合征；风湿性疾病；结缔组织疾病；炎症性风湿病；变形性风湿病；非关节性风湿病；青少年类风湿关节炎；肌肉风湿病；慢性多发性关节炎；冷球蛋白血管炎；ANCA相关血管炎；抗磷脂综合征；重症肌无力；自身免疫性溶血性贫血；吉兰-巴雷综合征；慢性免疫性多发神经病；自身免疫性甲状腺炎；胰岛素依赖性糖尿病；1型糖尿病；艾迪森病；膜性肾小球肾病；抗肾小球基底膜肾病；自身免疫性胃炎；自身免疫性萎缩性胃炎；恶性贫血；天疱疮；寻常性天疱疮；肝硬化；原发性胆汁性肝硬化；皮肌炎；多发性肌炎；纤维肌炎；肌硬症；乳糜泻；免疫球蛋白A肾病；Henoch-Schonlein紫癜；埃文斯综合征；银屑病；关节症性银屑病；格雷夫斯病；格雷夫斯眼病；硬皮症；系统性硬皮症；进行性系统性硬皮症；原发性胆汁性肝硬化；桥本甲状腺炎；原发性粘液水肿；交感性眼炎；自身免疫性葡萄膜炎；肝炎；慢性活动性肝炎；胶原病；强直性脊椎炎；肩关节周围炎；结节性多动脉炎；软骨钙化症；韦格纳氏肉芽肿症；显微镜下多血管炎；慢性荨麻疹；水疱性皮肤病；类天疱疮；德维克病；小儿自身免疫性溶血性贫血；难治性或慢性自身免疫性血细胞减少症；后天性血友病A；冷凝集素病；视神经脊髓炎；全身僵硬综合征；胰腺炎；心肌炎；血管炎；胃炎；痛风；痛风性关节炎；银屑病；正补体血症性荨麻疹样血管炎；心膜炎；肌炎；抗合成酶综合征；巩膜炎；巨噬细胞活化综合征；贝赫切特综合征；PAPA综合征；Blau综合征；成人和青少年斯蒂尔病；Cryopyrin相关周期性综合征；Muckle-Wells综合征；家族性冷因性自身炎症性综合征；新生儿期发病多脏器性炎症性疾病；家族性地中海热；慢性婴儿期发病神经皮肤关节综合征；全身型青少年特发性关节炎；高IgD综合征；施尼茨勒综合征；自身免疫性视网膜症；动脉粥样硬化；慢性前立腺炎；和TNF受体相关周期性综合征(TRAPS)中的任一种自身免疫疾病。
[47]根据[46]所述的方法，其中，
自身免疫疾病为多发性硬化症或胶原病。
[48]根据[46]或[47]所述的方法，其中，
胶原病为选自类风湿关节炎、系统性红斑狼疮、硬皮症、皮肌炎、结节性多发动脉炎、混合性结缔组织病、舍格伦综合征、显微镜下多血管炎、嗜酸性肉芽肿性多血管炎、过敏性血管炎、贝赫切特病、科干综合征、RS3PE、巨细胞性动脉炎、成人斯蒂尔病、风湿性多发肌痛症、纤维肌痛症和SAPHO综合征中的一种或多种疾病。
[49]根据[42]～[48]中任一项所述的方法，其中，
抗体或其片段为[1]～[16]中任一项所述的抗体或其片段。
[50]根据[42]～[49]中任一项所述的方法，其进一步包含：
施用用于治疗或预防因淋巴细胞归巢而引起的免疫响应过度作用而产生的疾病的药剂的步骤。
[51]根据[1]～[16]中任一项所述的抗体或其片段，其用于治疗或预防因淋巴细胞归巢而引起的免疫响应过度作用而产生的疾病。
[52]根据[51]所述的抗体或其片段，其中，
因淋巴细胞归巢而引起的免疫响应过度作用而产生的疾病为免疫相关疾病。
[53]根据[52]所述的抗体或其片段，其中，
免疫相关疾病为过敏性疾病或自身免疫疾病。
[54]根据[53]所述的抗体或其片段，其中，
免疫相关疾病为选自过敏性鼻炎、特应性皮炎、食物过敏、口腔过敏综合征、药剂过敏、花粉症、过敏性结膜炎、嗜酸性粒细胞性肺炎、过敏性胃肠炎、荨麻疹、光线过敏症、金属过敏、猫过敏、螨虫过敏和哮喘中的过敏性疾病。
[55]根据[53]所述的抗体或其片段，其中，
免疫相关疾病为选自复发缓解型多发性硬化症、一次进展型多发性硬化症和二次进展型多发性硬化症的多发性硬化症；银屑病；类风湿关节炎；银屑病性关节炎；系统性红斑狼疮(SLE)；溃疡性大肠炎；克罗恩病；良性淋巴细胞性血管炎；血小板减少性紫癜；突发性血小板减少症；特发性自身免疫性溶血性贫血；红细胞再生障碍；舍格伦综合征；风湿性疾病；结缔组织疾病；炎症性风湿病；变形性风湿病；非关节性风湿病；青少年类风湿关节炎；肌肉风湿病；慢性多发性关节炎；冷球蛋白血管炎；ANCA相关血管炎；抗磷脂综合征；重症肌无力；自身免疫性溶血性贫血；吉兰-巴雷综合征；慢性免疫性多发神经病；自身免疫性甲状腺炎；胰岛素依赖性糖尿病；1型糖尿病；艾迪森病；膜性肾小球肾病；抗肾小球基底膜肾病；自身免疫性胃炎；自身免疫性萎缩性胃炎；恶性贫血；天疱疮；寻常性天疱疮；肝硬化；原发性胆汁性肝硬化；皮肌炎；多发性肌炎；纤维肌炎；肌硬症；乳糜泻；免疫球蛋白A肾病；Henoch-Schonlein紫癜；埃文斯综合征；银屑病；关节症性银屑病；格雷夫斯病；格雷夫斯眼病；硬皮症；系统性硬皮症；进行性系统性硬皮症；原发性胆汁性肝硬化；桥本甲状腺炎；原发性粘液水肿；交感性眼炎；自身免疫性葡萄膜炎；肝炎；慢性活动性肝炎；胶原病；强直性脊椎炎；肩关节周围炎；结节性多动脉炎；软骨钙化症；韦格纳氏肉芽肿症；显微镜下多血管炎；慢性荨麻疹；水疱性皮肤病；类天疱疮；德维克病；小儿自身免疫性溶血性贫血；难治性或慢性自身免疫性血细胞减少症；后天性血友病A；冷凝集素病；视神经脊髓炎；全身僵硬综合征；胰腺炎；心肌炎；血管炎；胃炎；痛风；痛风性关节炎；银屑病；正补体血症性荨麻疹样血管炎；心膜炎；肌炎；抗合成酶综合征；巩膜炎；巨噬细胞活化综合征；贝赫切特综合征；PAPA综合征；Blau综合征；成人和青少年斯蒂尔病；Cryopyrin相关周期性综合征；Muckle-Wells综合征；家族性冷因性自身炎症性综合征；新生儿期发病多脏器性炎症性疾病；家族性地中海热；慢性婴儿期发病神经皮肤关节综合征；全身型青少年特发性关节炎；高IgD综合征；施尼茨勒综合征；自身免疫性视网膜症；动脉粥样硬化；慢性前立腺炎；和TNF受体相关周期性综合征(TRAPS)中的自身免疫疾病。
[56]根据[55]所述的抗体或其片段，其中，
自身免疫疾病为多发性硬化症或胶原病。
[57]根据[55]或[56]所述的抗体或其片段，其中，
胶原病为选自类风湿关节炎、系统性红斑狼疮、硬皮症、皮肌炎、结节性多发动脉炎、混合性结缔组织病、舍格伦综合征、显微镜下多血管炎、嗜酸性肉芽肿性多血管炎、过敏性血管炎、贝赫切特病、科干综合征、RS3PE、巨细胞性动脉炎、成人斯蒂尔病、风湿性多发肌痛症、纤维肌痛症和SAPHO综合征中的一种或多种疾病。
[58]一种[1]～[16]中任一项所述的抗体或其片段的用途，其为在制造用于治疗或预防因淋巴细胞归巢而引起的免疫响应过度作用而产生的疾病的药物中的用途。
[59]根据[58]所述的用途，其中，
因淋巴细胞归巢而引起的免疫响应过度作用而产生的疾病为免疫相关疾病。
[60]根据[59]所述的用途，其中，
免疫相关疾病为过敏性疾病或自身免疫疾病。
[61]根据[59]所述的用途，其中，
免疫相关疾病为选自过敏性鼻炎、特应性皮炎、食物过敏、口腔过敏综合征、药剂过敏、花粉症、过敏性结膜炎、嗜酸性粒细胞性肺炎、过敏性胃肠炎、荨麻疹、光线过敏症、金属过敏、猫过敏、螨虫过敏和哮喘中的过敏性疾病。
[62]根据[59]所述的用途，其中，
免疫相关疾病为选自复发缓解型多发性硬化症、一次进展型多发性硬化症和二次进展型多发性硬化症的多发性硬化症；银屑病；类风湿关节炎；银屑病性关节炎；系统性红斑狼疮(SLE)；溃疡性大肠炎；克罗恩病；良性淋巴细胞性血管炎；血小板减少性紫癜；突发性血小板减少症；特发性自身免疫性溶血性贫血；红细胞再生障碍；舍格伦综合征；风湿性疾病；结缔组织疾病；炎症性风湿病；变形性风湿病；非关节性风湿病；青少年类风湿关节炎；肌肉风湿病；慢性多发性关节炎；冷球蛋白血管炎；ANCA相关血管炎；抗磷脂综合征；重症肌无力；自身免疫性溶血性贫血；吉兰-巴雷综合征；慢性免疫性多发神经病；自身免疫性甲状腺炎；胰岛素依赖性糖尿病；1型糖尿病；艾迪森病；膜性肾小球肾病；抗肾小球基底膜肾病；自身免疫性胃炎；自身免疫性萎缩性胃炎；恶性贫血；天疱疮；寻常性天疱疮；肝硬化；原发性胆汁性肝硬化；皮肌炎；多发性肌炎；纤维肌炎；肌硬症；乳糜泻；免疫球蛋白A肾病；Henoch-Schonlein紫癜；埃文斯综合征；银屑病；关节症性银屑病；格雷夫斯病；格雷夫斯眼病；硬皮症；系统性硬皮症；进行性系统性硬皮症；原发性胆汁性肝硬化；桥本甲状腺炎；原发性粘液水肿；交感性眼炎；自身免疫性葡萄膜炎；肝炎；慢性活动性肝炎；胶原病；强直性脊椎炎；肩关节周围炎；结节性多动脉炎；软骨钙化症；韦格纳氏肉芽肿症；显微镜下多血管炎；慢性荨麻疹；水疱性皮肤病；类天疱疮；德维克病；小儿自身免疫性溶血性贫血；难治性或慢性自身免疫性血细胞减少症；后天性血友病A；冷凝集素病；视神经脊髓炎；全身僵硬综合征；胰腺炎；心肌炎；血管炎；胃炎；痛风；痛风性关节炎；银屑病；正补体血症性荨麻疹样血管炎；心膜炎；肌炎；抗合成酶综合征；巩膜炎；巨噬细胞活化综合征；贝赫切特综合征；PAPA综合征；Blau综合征；成人和青少年斯蒂尔病；Cryopyrin相关周期性综合征；Muckle-Wells综合征；家族性冷因性自身炎症性综合征；新生儿期发病多脏器性炎症性疾病；家族性地中海热；慢性婴儿期发病神经皮肤关节综合征；全身型青少年特发性关节炎；高IgD综合征；施尼茨勒综合征；自身免疫性视网膜症；动脉粥样硬化；慢性前立腺炎；和TNF受体相关周期性综合征(TRAPS)中的自身免疫疾病。
[63]根据[62]所述的用途，其中，
自身免疫疾病为多发性硬化症或胶原病。
[64]根据[62]或[63]所述的用途，其中，
胶原病为选自类风湿关节炎、系统性红斑狼疮、硬皮症、皮肌炎、结节性多发动脉炎、混合性结缔组织病、舍格伦综合征、显微镜下多血管炎、嗜酸性肉芽肿性多血管炎、过敏性血管炎、贝赫切特病、科干综合征、RS3PE、巨细胞性动脉炎、成人斯蒂尔病、风湿性多发肌痛症、纤维肌痛症和SAPHO综合征中的一种或多种疾病。
发明的效果
根据本发明的抗糖链抗体，能够阻碍在淋巴细胞上表达的L-选择素与高内皮微静脉(HEV)上的糖链的结合，能够通过阻碍淋巴细胞归巢而治疗免疫相关疾病(例如多发性硬化症等自身免疫疾病)。
附图说明
[图1]图1为6-磺基唾液酸路易斯X糖链结构的示意图。
[图2]图2表示分析了基于荧光免疫染色的SF1抗体和MECA-79抗体对小鼠淋巴结高内皮微静脉(HEV)的反应性的免疫染色结果。
[图3]图3表示分析了基于荧光免疫染色的SF1抗体、F2抗体和S2抗体对小鼠淋巴结高内皮微静脉(HEV)的反应性的免疫染色结果。
[图4]图4表示对唾液酸酶处理对SF1抗体对小鼠淋巴结HEV的反应性的影响进行分析而得到的免疫染色结果。
[图5]图5表示通过聚糖阵列(Glycan Array)分析SF1抗体对各种糖链的反应性的结果。
[图6]图6表示利用生物膜层干涉法测定SF1抗体与6-磺基唾液酸路易斯X的结合的解离常数的结果。
[图7]图7表示SF1抗体的重链和轻链可变区的超变区氨基酸序列。
[图8]图8表示SF1抗体的重链可变区的氨基酸序列。
[图9]图9表示SF1抗体的轻链可变区的氨基酸序列。
[图10]图10表示SF1抗体针对L-选择素-Fc对小鼠淋巴结HEV的结合的抑制效果。
[图11]图11表示SF1抗体对L-选择素依赖性淋巴细胞滚动的抑制效果。
[图12]图12表示对SF1抗体对淋巴细胞归巢的抑制效果进行分析的结果。
[图13]图13是比较GlcNAc6ST-1/2双重缺失小鼠和野生型小鼠的EAE临床评分的图表。
[图14]图14是表示抗原致敏时SF1抗体给药对EAE临床评分的影响的图表。
[图15]图15是表示EAE发病后SF1抗体给药(初次抗原致敏后第八天至SF1抗体给药)对EAE临床评分的影响的图表。
[图16]图16是表示EAE发病后SF1抗体给药(初次抗原致敏后第二十一天至SF1抗体给药)对EAE临床评分的影响的图表。
[图17]图17是表示SF1抗体给药对胶原诱导关节炎(CIA)发病率(左)和临床评分(右)造成的影响的图表。
[图18]图18是表示小鼠过敏性鼻炎模型中的SF1抗体对打喷嚏(左图)和抓鼻行为(右图)的抑制效果的图表。
[图19]图19表示基于SF1抗体的正常人组织的免疫染色结果。
[图20]图20是放大了图19的免疫染色照片中的淋巴结和扁桃体的结果的图。
[图21]图21表示人源化SF1抗体的重链可变区和轻链可变区的氨基酸序列。
[图22]图22表示人源化SF1单链抗体(scFv)的氨基酸序列。
[图23]图23表示基于人源化SF1单链抗体(scFv)的小鼠淋巴结的荧光免疫染色结果。
[图24]图24表示人源化SF1抗体的重链的全长氨基酸序列。
[图25]图25表示人源化SF1抗体的轻链的全长氨基酸序列。
[图26]图26表示基于由图24、图25所示的人源化SF1抗体的重链和轻链构成的人源化SF1抗体的小鼠淋巴结的荧光免疫染色结果。
[图27]图27表示分析人源化SF1抗体(HSF1抗体)对淋巴细胞归巢的抑制效果的结果。
[图28]图28是表示抗原致敏时人源化SF1抗体(HSF1抗体)给药对EAE临床评分的影响的图表。
[图29]图29表示人源化SF1抗体的重链IgG1-LALA体的全长氨基酸序列。
[图30]图30表示人源化SF1抗体的重链IgG4-SPLE体的全长氨基酸序列。
[图31]图31表示基于由图29、图30所示的人源化SF1抗体的重链变体和图25所示的轻链构成的人源化SF1抗体-IgG1-LALA体(HSF1-LALA)和人源化SF1抗体-IgG4-SPLE体(HSF1-G4PE)的小鼠淋巴结的荧光免疫染色结果。
具体实施方式
(抗糖链抗体)
在第1方式中，提供一种抗体或其片段，其与6-磺基唾液酸路易斯X糖链特异性地结合，该结合要求构成6-磺基唾液酸路易斯X糖链的岩藻糖、硫酸基和唾液酸。在本说明书中，以下也将该抗体简称为抗糖链抗体。在用于本说明书中的情况下，在与6-磺基唾液酸路易斯X的结合或6-磺基唾液酸路易斯X的识别中“要求构成6-磺基唾液酸路易斯X糖链的岩藻糖、硫酸基和唾液酸”是指，抗体在与6-磺基唾液酸路易斯X的结合中需要岩藻糖、硫酸基和唾液酸这3者，与6-磺基唾液酸路易斯X糖链中缺失了岩藻糖、硫酸基和唾液酸中的任一者的糖链的结合活性相比于与6-磺基唾液酸路易斯X的结合活性有所降低。
6-磺基唾液酸路易斯X糖链与抗体的反应性可以通过常规方法测定，例如可以使用糖链固定于基板上的糖链阵列来进行。糖链阵列例如可以使用美国功能性糖组学(Consortium for Functional Glycomics)的聚糖阵列来实施。6-磺基唾液酸路易斯X糖链与抗体的反应性也可以使用表面等离子体共振、等温滴定型量热仪进行评价。
在一个实施方式中，抗原抗体反应中的本发明的抗体或其片段对6-磺基唾液酸路易斯X糖链的结合亲和性的解离常数(KD值)通常为1×10-6M以下(例如1×10-7M以下、1×10-8M以下、1×10-9M以下、1×10-10M以下、1×10-11M以下)。
在一个实施方式中，本发明的抗体或其片段对于在6-磺基唾液酸路易斯X糖链中缺失了岩藻糖、硫酸基或唾液酸中的至少一者的糖链(例如，6-磺基路易斯X、6-磺基唾液酸LacNAc、唾液酸路易斯X)的结合亲和性的KD值，与对于6-磺基唾液酸路易斯X糖链的KD值相比，通常为大10倍以上(例如，102倍以上、103倍以上、104倍以上、105倍以上)的值。
在一个实施方式中，本发明的抗体或其片段对于6-磺基路易斯X、6-磺基唾液酸LacNAc及唾液酸路易斯X的结合亲和性的KD值均与对于6-磺基唾液酸路易斯X糖链的KD值相比，通常为大10倍以上(例如，102倍以上、103倍以上、104倍以上、105倍以上)的值。
就抗体或其片段对糖链抗原的结合亲和性的KD值而言，可以按照后述的实施例，通过使用Octet RED96(Pall-Fortebio公司制)的生物膜层干涉法，对结合于链霉亲和素生物传感器的生物素化的糖链的抗体或其片段的结合特性进行分析，从而测定。
6-磺基唾液酸路易斯X是在由半乳糖、N-乙酰葡糖胺(GlcNAc)构成的N-乙酰乳糖胺(LacNAc)结构上添加唾液酸、岩藻糖和硫酸基而成的糖链(图1)。6-磺基唾液酸路易斯X的生物合成需要N-乙酰葡糖胺的6位的硫酸化，作为催化硫酸化的硫酸基转移酶(ST)，在小鼠中克隆有N-乙酰葡糖胺-6-O-磺基转移酶(GlcNAc6ST)-1～GlcNAc6ST-4。
在淋巴细胞归巢中，淋巴细胞通过在淋巴细胞上表达的L-选择素与在高内皮微静脉(HEV)内腔中表达的6-磺基唾液酸路易斯X的特异性结合的HEV上的滚动(淋巴细胞滚动)而浸润到淋巴结内。这样，作为硫酸化糖链的6-磺基唾液酸路易斯酸X承担向介导淋巴细胞的浸润的HEV的初始粘附，因此是淋巴细胞归巢所必需的糖链结构。
L-选择素与6-磺基唾液酸路易斯X糖链的结合，与岩藻糖、硫酸基、唾液酸相关。由于岩藻糖、硫酸基、唾液酸在淋巴细胞的归巢中发挥重要的作用，因此认为同时识别岩藻糖、硫酸基和唾液酸这3者的抗糖链抗体或其片段高效率地阻碍淋巴细胞归巢、特别是源自表达6-磺基唾液酸路易斯X糖链的细胞、例如外周淋巴结、肠道膜淋巴结等淋巴结或扁桃体的高内皮微静脉的淋巴细胞归巢，进而对因淋巴细胞归巢而引起的免疫响应过度作用而产生的疾病的治疗或预防有效。在优选的实施方式中，抗糖链抗体或其片段在归巢过程中阻碍L-选择素依赖性的淋巴细胞的滚动。
对于与6-磺基唾液酸路易斯X糖链特异性结合，并且该结合要求构成6-磺基唾液酸路易斯X糖链的岩藻糖、硫酸基和唾液酸的抗体而言，例如，可以使用通过岩藻糖转移酶和硫酸基转移酶的基因导入而表达了硫酸化糖链的细胞对负责HEV中表达的唾液酸路易斯X的硫酸化的硫酸基转移酶、GlcNA c6ST-1和GlcNAc6ST-2缺失的小鼠(以下，也称为硫酸基转移酶双重缺失小鼠或DKO小鼠)进行免疫，并使用将抗体产生细胞与骨髓瘤融合而得到的杂交瘤来产生。硫酸基转移酶双重缺失小鼠可以使用本领域技术人员公知的方法、例如Kawashima et al.，(如上所述)中记载的方法来制备。产生的抗体也可以在回收之前进一步经过纯化工序等追加的工序，例如为了提高纯度，优选进行盐析、过滤器过滤、使用离心分离的澄清化、基于亲和力的回收、基于离子交换的中间纯化、基于凝胶过滤的最终纯化。
作为这样得到的抗糖链抗体的实例，可举出具有识别6-磺基唾液酸路易斯X的互补决定区(CDR)的抗体，例如可举出包含下述中的至少1个以上的CDR、优选包含全部6个CDR的抗体：
(a)由SEQ ID NO.1所述的氨基酸序列(GFSLTSYA)构成的CDRH1；
(b)由SEQ ID NO.2所述的氨基酸序列(IWGGGST)构成的CDRH2；
(c)由SEQ ID NO.3所述的氨基酸序列(AKHEKLGRFPY)构成的CDRH 3；
(d)由SEQ ID NO.4所述的氨基酸序列(SSVSY)构成的CDRL1；
(e)由SEQ ID NO.5所述的氨基酸序列(EIS)构成的CDRL2；和
(f)由SEQ ID NO.6所述的氨基酸序列(QQWNYPLAT)构成的CDRL3。
抗体通常具有2个重链和2个轻链通过二硫键共价键合而成的结构，各重链分为重链可变区和重链恒定区，并且各轻链分为轻链可变区和轻链恒定区。在各可变区中各包含3个CDR。此处，CDRH1、CDRH2、CDRH3从重链氨基酸序列的氨基末端侧起依次表示重链的互补决定区，CDRL1、CDRL2、CDRL3从轻链氨基酸序列的氨基末端侧起依次表示轻链的互补决定区。
因此，抗糖链抗体或其片段优选包含含有下述CDRH的重链可变区，并且/或者包含含有下述CDRL的轻链可变区：
(a)由SEQ ID NO.1所述的氨基酸序列(GFSLTSYA)构成的CDRH1；
(b)由SEQ ID NO.2所述的氨基酸序列(IWGGGST)构成的CDRH2；
(c)由SEQ ID NO.3所述的氨基酸序列(AKHEKLGRFPY)构成的CDRH 3；
(d)由SEQ ID NO.4所述的氨基酸序列(SSVSY)构成的CDRL1；
(e)由SEQ ID NO.5所述的氨基酸序列(EIS)构成的CDRL2；
(f)由SEQ ID NO.6所述的氨基酸序列(QQWNYPLAT)构成的CDRL3。
只要抗糖链抗体或其片段与6-磺基唾液酸路易斯X糖链特异性结合，并且该结合要求构成6-磺基唾液酸路易斯X糖链的岩藻糖、硫酸基和唾液酸，则各CDR的氨基酸序列中可以具有1个或数个氨基酸的缺失、替换或添加。在用于本说明书中的情况下，“数个”根据序列的长度而有所不同，是指2～10个，优选为2～5个，更优选为2或3个。
替换后的氨基酸优选为保存有以下分类那样的原来的氨基酸侧链的性质的氨基酸。然而，氨基酸替换并不限定于保守性替换。
疏水性氨基酸(A、I、L、M、F、P、W、Y、V)；
亲水性氨基酸(R、D、N、C、E、Q、G、H、K、S、T)；
具有脂肪族侧链的氨基酸(G、A、V、L、I、P)；
具有含羟基侧链的氨基酸(S、T、Y)；
具有含硫原子侧链的氨基酸(C、M)；
具有含羧酸和酰胺侧链的氨基酸(D、N、E、Q)；
具有含碱基侧链的氨基酸(R、K、H)；
具有含芳香族侧链的氨基酸(H、F、Y、W)。
在一个实施方式中，氨基酸替换可以是在天然的人抗体中存在于对应的位置的氨基酸。
在一个实施方式中，氨基酸替换可以存在于互补决定区(CDR)的外侧。
在一个实施方式中，氨基酸替换可以存在于重链可变区或轻链可变区。
或者，只要与6-磺基唾液酸路易斯X糖链特异性结合，并且该结合要求构成6-磺基唾液酸路易斯X糖链的岩藻糖、硫酸基和唾液酸，则各CDR的氨基酸序列也可以由与各SEQID NO.所示的序列具有80％以上的同源性，优选80％以上的同一性的氨基酸序列构成。序列的同源性或同一性优选为81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％以上，更优选为99％以上。
在一个实施方式中，抗糖链抗体可以为与下述抗体或其片段结合的表位结合的抗体或其片段，所述抗体或其片段包含含有下述中的至少1个以上的CDR的可变区：
(a)由SEQ ID NO.1所述的氨基酸序列构成的CDRH1；
(b)由SEQ ID NO.2所述的氨基酸序列构成的CDRH2；
(c)由SEQ ID NO.3所述的氨基酸序列构成的CDRH3；
(d)由SEQ ID NO.4所述的氨基酸序列构成的CDRL1；
(e)由SEQ ID NO.5所述的氨基酸序列构成的CDRL2；
(f)由SEQ ID NO.6所述的氨基酸序列构成的CDRL3，或者，
所述抗体或其片段包含至少一个以上的包含由在各CDR的氨基酸序列中具有1个或数个氨基酸的缺失、替换或添加的氨基酸序列构成的CDR的可变区，或者，
所述抗体或其片段包含至少一个以上的包含由与各CDR的氨基酸序列具有80％以上的同一性的氨基酸序列构成的CDR的可变区。
在用于本说明书中的情况下，“表位”是指与6-磺基唾液酸路易斯X糖链特异性地结合，并且该结合要求构成6-磺基唾液酸路易斯X糖链的岩藻糖、硫酸基和唾液酸的抗体或其片段所结合的6-磺基唾液酸路易斯X糖链的部分结构。表位为立体结构表位时，可以通过利用X射线晶体结构分析等对与抗体结合的6-磺基唾液酸路易斯X糖链的结构进行分析来确定表位。
在一个实施方式中，抗糖链抗体可以为下述抗体或其片段，所述抗体或其片段含有包含下述CDR的重链可变区：
(a)由SEQ ID NO.1所述的氨基酸序列构成的CDRH1；
(b)由SEQ ID NO.2所述的氨基酸序列构成的CDRH2；和
(c)由SEQ ID NO.3所述的氨基酸序列构成的CDRH3，或者，
所述抗体或其片段含有包含由在各CDR的氨基酸序列中具有1个或数个氨基酸的缺失、替换或添加的氨基酸序列构成的CDRH1、CDRH2和CDRH3的重链可变区，或者，
所述抗体或其片段含有包含由与各CDR的氨基酸序列具有80％以上的同一性的氨基酸序列构成的CDRH1、CDRH2和CDRH3的重链可变区。
在一个实施方式中，抗糖链抗体或其片段中的重链可变区可以包含SEQ IDNO.13、15～17中任一项所述的氨基酸序列的至少90个连续的氨基酸。
在用于本说明书中的情况下，“SEQ ID NO.13、15～17中任一项所述的氨基酸序列的至少90个连续的氨基酸”是指SEQ ID NO.13、15～17中任一项所述的氨基酸序列中的90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116或117个连续的氨基酸。这样的连续的氨基酸优选依次包含第26～33位的氨基酸、第51～57位的氨基酸、第96～106位的氨基酸所表示的CDRH1、CDRH2和CDRH3。
在一个实施方式中，抗糖链抗体或其片段中的重链可变区可以包含：SE Q IDNO.15～17中任一项所述的氨基酸序列、在SEQ ID NO.15～17中任一项所述的氨基酸序列中具有1个或数个氨基酸的缺失、替换或添加的氨基酸序列、或者与SEQ ID NO.15～17中任一项所述的氨基酸序列具有80％以上的同一性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，抗糖链抗体或其片段中的重链可以包含：SEQ ID NO.25、27或28所述的氨基酸序列、在SEQ ID NO.25、27或28所述的氨基酸序列中具有1个或数个氨基酸的缺失、替换或添加的氨基酸序列、或者与SEQ ID NO.25所述的氨基酸序列具有80％以上的同一性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，抗糖链抗体可以为下述抗体或其片段，所述抗体或其片段含有包含下述CDR的轻链可变区：
(d)由SEQ ID NO.4所述的氨基酸序列构成的CDRL1；
(e)由SEQ ID NO.5所述的氨基酸序列构成的CDRL2；和
(f)由SEQ ID NO.6所述的氨基酸序列构成的CDRL3，或者，
所述抗体或其片段含有包含由在各CDR的氨基酸序列中具有1个或数个氨基酸的缺失、替换或添加的氨基酸序列构成的CDRL1、CDRL2和CDRL3的轻链可变区，或者，
所述抗体或其片段含有包含由与各CDR的氨基酸序列具有80％以上的同一性的氨基酸序列构成的CDRL1、CDRL2和CDRL3的轻链可变区。
在一个实施方式中，抗糖链抗体可以为下述抗体或其片段，所述抗体或其片段含有包含下述CDR的可变区：
(a)由SEQ ID NO.1所述的氨基酸序列构成的CDRH1；
(b)由SEQ ID NO.2所述的氨基酸序列构成的CDRH2；
(c)由SEQ ID NO.3所述的氨基酸序列构成的CDRH3；
(d)由SEQ ID NO.4所述的氨基酸序列构成的CDRL1；
(e)由SEQ ID NO.5所述的氨基酸序列构成的CDRL2；和
(f)由SEQ ID NO.6所述的氨基酸序列构成的CDRL3，或者，
所述抗体或其片段含有包含由在各CDR的氨基酸序列中具有1个或数个氨基酸的缺失、替换或添加的氨基酸序列构成的CDRH1、CDRH2和CDRH3以及CDRL1、CDRL2和CDRL3的可变区，或者，
所述抗体或其片段含有包含由与各CDR的氨基酸序列具有80％以上的同一性的氨基酸序列构成的CDRH1、CDRH2和CDRH3以及CDRL1、CDRL2和CDRL3的可变区。
在一个实施方式中，抗糖链抗体或其片段中的轻链可变区可以包含SEQ IDNO.14、18～20中任一项所述的氨基酸序列的至少80个连续的氨基酸。
在用于本说明书中的情况下，“SEQ ID NO.14、18～20中任一项所述的氨基酸序列的至少80个连续的氨基酸”是指SEQ ID NO.14、18～20中任一项所述的氨基酸序列中的80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105或106个连续的氨基酸。这样的连续的氨基酸优选依次包含第27～31位的氨基酸、第49～51位的氨基酸、第88～96位的氨基酸表示的CDRL1、CDRL2和CDR L3。
在一个实施方式中，抗糖链抗体或其片段中的轻链可变区可以包含：SE Q IDNO.14、18～20中任一项所述的氨基酸序列、在SEQ ID NO.14、18～20中任一项所述的氨基酸序列中具有1个或数个氨基酸的缺失、替换或添加的氨基酸序列、或者与SEQ ID NO.14、18～20中任一项所述的氨基酸序列具有80％以上的同一性的氨基酸序列。
在一个实施方式中，抗糖链抗体或其片段中的轻链可以包含：SEQ ID NO.26所述的氨基酸序列、在SEQ ID NO.26所述的氨基酸序列中具有1个或数个氨基酸的缺失、替换或添加的氨基酸序列、或者与SEQ ID NO.26所述的氨基酸序列具有80％以上的同一性的氨基酸序列。
抗糖链抗体只要具有所述CDR，则其他结构、例如CDR以外的可变区、恒定区的结构没有特别限定，作为分别编码所述包含CDRH1、CDRH2和CDRH3的重链可变区和包含CDRL1、CDRL2和CDRL3的轻链可变区的氨基酸序列的实例，分别可举出SEQ ID NO.13、15、16、17的氨基酸序列和SE Q ID NO.14、18、19、20的氨基酸序列。
在优选的实施方式中，抗糖链抗体或其片段可以包含：具有SEQ ID NO.13、15、16或17中的任一氨基酸序列的重链可变区和具有SEQ ID NO.14、18、19或20中的任一氨基酸序列的轻链可变区。
在优选的实施方式中，人源化抗糖链抗体或其片段可以包含：具有SEQ ID NO.15、16或17中的任一氨基酸序列的重链可变区和具有SEQ ID NO.18、19或20中的任一氨基酸序列的轻链可变区。
(组合的实例：SEQ ID NO.15与SEQ ID NO.18、SEQ ID NO.15与SE Q ID NO.19、SEQ ID NO.15与SEQ ID NO.20、SEQ ID NO.16与SEQ ID NO.18、SEQ ID NO.16与SEQ IDNO.19、SEQ ID NO.16与SEQ ID NO.20、SEQ ID NO.17与SEQ ID NO.18、SEQ ID NO.17与SEQID NO.19、SEQ ID NO.17与SEQ ID NO.20)
在更优选的实施方式中，抗糖链抗体或其片段可以包含以下所示的重链可变区和轻链可变区的组合中的任一种:
·包含SEQ ID NO.13所示的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO.14所示的氨基酸序列(SEQ ID NO.4)的轻链可变区(SF1)；
·包含SEQ ID NO.15所示的氨基酸序列的重链可变区(H1)和包含SEQ ID NO.18所示的氨基酸序列的轻链可变区(L1)；
·包含SEQ ID NO.15所示的氨基酸序列的重链可变区(H1)和包含SEQ ID NO.19所示的氨基酸序列的轻链可变区(L2)；
·包含SEQ ID NO.16所示的氨基酸序列的重链可变区(H2)和包含SEQ ID NO.18所示的氨基酸序列的轻链可变区(L1)；
·包含SEQ ID NO.17所示的氨基酸序列的重链可变区(H3)和包含SEQ ID NO.20所示的氨基酸序列的轻链可变区(L3)。
在用于本说明书中的情况下，“抗体”是指天然的、或者通过整体或部分合成而制造得到的人工免疫球蛋白或其片段。抗体可以是IgG、IgM、IgA、IgE、IgD中的任一种类型。作为人的免疫球蛋白，已知有IgG1、IgG2、IgG3、Ig G4、IgA1、IgA2、IgD、IgE、IgM这9种类型(同种型)。
抗体的来源不限，可以是任意的哺乳类，例如人、小鼠、大鼠、豚鼠、仓鼠、兔、山羊、绵羊、骆驼等非人动物。不仅可以使用人抗体，还可以使用人源化抗体、嵌合抗体等重组抗体。在用于本说明书中的情况下，“人源化抗体”是指将人抗体的CDR用源自非人动物抗体的CDR替换而得到的抗体。除CDR外还可以将部分框架的氨基酸残基移植到人抗体中。将源自非人动物抗体的CDR用于人时，优选与人抗体的恒定区组合。抗体可以是多克隆抗体，也可以是单克隆抗体，优选为单克隆抗体，特别优选为源自哺乳动物的单克隆抗体。
对于抗糖链抗体，只要发挥所期望的效果，则也可以实施化学或生物学修饰。化学修饰体包含与氨基酸骨架的化学部分的结合、N-键或O-键碳水化合物链的化学修饰体等。生物学修饰体中可包含：经翻译后修饰(例如，向N-键或O-键的糖链添加、N末端或C末端的处理、脱酰胺化、天冬氨酸的异构化、甲硫氨酸的氧化)的修饰体、使用原核生物宿主细胞通过表达而在N末端添加甲硫氨酸残基而得到的修饰体等。
修饰体还可以是在其重链羧基末端缺失了1个或2个氨基酸的缺失体、以及经过酰胺化的该缺失体(例如，羧基末端部位的脯氨酸残基被酰胺化的重链)等。
已知根据Eu编号(Kabat的Eu编号)，IgG1的Leu234-Leu235的氨基酸是通过抗体与Fc受体及补体的结合而对效应活性表达产生影响的部位。有时通过将IgG1的该区域中所含的Leu替换为Ala(将所得到的变异体称为“IgG1-LALA体”)，能够降低抗体的Fc部分介导的效应活性，降低副作用风险(美国专利公报US5885573)，也可以根据需要对抗体的Fc部分实施这样的修饰。除了这些变异以外，有时通过将Pro329替换为Gly(将得到的变异体称为“IgG1-P329GLALA体”)，能够降低抗体的Fc部分介导的效应活性，进一步降低副作用风险(美国专利公报US8969526，Protein Eng.Des Sel.,29：457-466,2016)，也可以根据需要对抗体的Fc部分实施这样的修饰。作为IgG1-LALA体的重链的实例，可举出包含SEQ ID NO.27所述的氨基酸序列的重链。
根据Eu编号，已知通过将IgG4的Ser228替换为Pro，可抑制IgG4成为半抗体(halfantibody)。此外，已知通过将IgG4的Leu235替换为Glu来降低由抗体与Fc受体的结合引起的效应活性表达。有时通过将IgG4的该区域中包含的Ser228替换为Pro，将Leu235替换为Glu(将得到的变异体称为“IgG4-SPLE体”)，能够降低抗体的Fc部分介导的效应活性，降低副作用风险(New man et al.,Clin.Immunol.,98：164-174,2001)，根据需要可以对抗体的Fc部分实施这样的改变。作为IgG4-SPLE体的重链的实例，可举出包含SEQ ID NO.28所述的氨基酸序列的重链。
在另一方式中，也可以对抗体的Fc部分实施已知使抗体的Fc部分介导的效应活性表达降低的其他氨基酸替换或缺失(例如，根据Eu编号，Asp265向Ala的替换、Glu294的缺失、Asn297向Ala的替换、Lys322向Ala的替换、Ala330向Leu的替换、Pro331向Ser的替换)。
构成抗糖链抗体的2条重链可以由选自由全长和所述缺失体组成的组中的重链中的任一种的组合构成，也可以由任两种的组合构成。各缺失体的量比可能受到产生抗糖链抗体的哺乳类培养细胞的种类和培养条件的影响，作为抗糖链抗体的主要成分，可举出在2条重链中羧基末端的1个氨基酸残基缺失的情况。
在用于本说明书中的情况下，抗体的“片段”是指发挥进行片段化之前的抗体所发挥的功能的至少一部分的功能性片段，作为其实例，可举出Fab、F(ab’)2、scFv、Fab’、单链抗体(scFv)等。片段并不限定于这些分子，只要与6-磺基唾液酸路易斯X糖链特异性地结合，并且该结合要求构成6-磺基唾液酸路易斯X糖链的岩藻糖、硫酸基和唾液酸，则可以是任意的片段。例如，抗糖链抗体也可以是如单结构域抗体或纳米抗体那样具有单一的重链可变区且不具有轻链序列的抗体。
作为设想的抗糖链抗体的功能的实例，可举出6-磺基唾液酸路易斯X糖链的识别、淋巴细胞归巢抑制等。抗体或其片段可以是对6-磺基唾液酸路易斯X糖链以外的其他1种或多种抗原具有特异性的多特异性抗体。除了赋予多种特异性以外，还可以根据所期望等的用途对抗糖链抗体进行基于抗癌剂等的修饰、以结合亲和性的提高为目的的多价化。
抗糖链抗体根据目的可以包含Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(SEQ ID NO.29)的3次重复序列等接头，例如在如单链抗体等那样构成抗体的抗原结合部位的数个可变区进行了结合的情况下，接头可以介于其间。例如，通过经由接头连接重链可变区和轻链可变区，得到单链抗体。接头的序列可以由本领域技术人员适当决定。
作为包含编码所述包含CDRH1、CDRH2和CDRH3的重链可变区和包含CDRL1、CDRL2和CDRL3的轻链可变区的氨基酸序列的单链抗体的实例，可举出包含SEQ ID NO.21、22、23或24所述的氨基酸序列中的第1～117位和第133～238位的氨基酸序列的抗体。该单链抗体例如包含SEQ ID NO.21、22、23或24所述的氨基酸序列。
抗糖链抗体的片段可以通过用木瓜蛋白酶、胃蛋白酶等酶对抗体蛋白质的全长分子进行处理而得到。或者，也可以通过在适当的宿主细胞中表达编码期望的片段的基因来产生。在转化宿主细胞时，重链序列基因和轻链序列基因可以插入同一表达载体中，也可以插入不同的表达载体中。宿主细胞可以是原核细胞或真核细胞中的任一种。作为原核细胞的实例，可举出大肠杆菌、枯草芽孢杆菌等细菌细胞。使用真核细胞作为宿主时，可以使用动物细胞、植物细胞、真核微生物。可以使用动物细胞、植物细胞或真菌细胞。作为动物细胞的实例，可例示如下的细胞。
(1)哺乳类细胞：CHO、COS、骨髓瘤、BHK(幼仓鼠肾，baby hamster ki dney)、Hela、Vero、HEK293、Ba/F3、HL-60、Jurkat、SK-HEP1等。
(2)两栖类细胞：非洲爪蟾卵母细胞等。
(3)昆虫细胞：sf9、sf21、Tn5等。
在优选的实施方式中，抗糖链抗体可以包含以下所示的重链和轻链的组合中的任一种：
·包含SEQ ID NO.25所示的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO.26所示的氨基酸序列的轻链；
·包含SEQ ID NO.27所示的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO.26所示的氨基酸序列的轻链；以及
·包含SEQ ID NO.28所示的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO.26所示的氨基酸序列的轻链。
(多核苷酸)
在第2方式中，提供编码所述本发明的抗糖链抗体或其片段的多核苷酸(本发明的多核苷酸)。
本发明的多核苷酸可以是包含编码抗糖链抗体或其片段的氨基酸序列的核苷酸序列和/或其互补链的1条链或2条链的多核苷酸(DNA(cDNA等)、RNA(mRNA、cRNA等))。
抗糖链抗体或其片段的重链可变区(或重链)和轻链可变区(或轻链)可以编码在同一多核苷酸上，也可以编码在不同的多核苷酸上，可以作为其组合而提供。编码重链可变区(或重链)的多核苷酸与编码轻链可变区(或轻链)的多核苷酸的组合也包含在“编码抗糖链抗体或其片段的多核苷酸”中。
作为编码抗糖链抗体或其片段的多核苷酸的实例，可举出具有编码下述中的至少1个以上的CDR的碱基序列、优选编码全部6个CDR的碱基序列的多核苷酸：
(a)编码由SEQ ID NO.1所述的氨基酸序列构成的CDRH1的碱基序列；
(b)编码由SEQ ID NO.2所述的氨基酸序列构成的CDRH2的碱基序列；
(c)编码由SEQ ID NO.3所述的氨基酸序列构成的CDRH3的碱基序列；
(d)编码由SEQ ID NO.4所述的氨基酸序列构成的CDRL1的碱基序列；
(e)编码由SEQ ID NO.5所述的氨基酸序列构成的CDRL2的碱基序列；
(f)编码由SEQ ID NO.6所述的氨基酸序列构成的CDRL3的碱基序列。
(a)～(f)的碱基序列的实例依次用SEQ ID NO.7～12表示。编码抗体或其片段的基因的多核苷酸可以具有与SEQ ID NO.7～12中的任一者所示的碱基序列实质上相同的碱基序列。与SEQ ID NO.7～12中的任一者所示的碱基序列实质上相同的碱基序列是指，由与SEQ ID NO.7～12中的任一者所示的碱基序列具有80％以上的同源性，优选80％以上的同一性、例如81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％以上，优选99％以上的同一性的序列构成的多核苷酸，或者是能够与由与SEQ ID NO.7～12中的任一者所示的碱基序列互补的序列构成的多核苷酸在严格条件下杂交的多核苷酸，由该多核苷酸编码的蛋白质具有所期望的功能，例如与6-磺基唾液酸路易斯X糖链特异性结合，并且该结合要求构成6-磺基唾液酸路易斯X糖链的岩藻糖、硫酸基和唾液酸。
此处，严格条件是指由本领域技术人员容易确定的杂交的条件，通常是依赖于核酸的碱基长度、清洗温度和盐浓度的经验性实验条件。通常，若碱基变长，则用于适当退火的温度变高，若碱基变短，则温度变低。杂交体形成通常依赖于互补链在比其熔点稍低的环境下的再退火能力。
在一个实施方式中，编码抗糖链抗体或其片段的多核苷酸可以具有：
(a)编码由SEQ ID NO.1所述的氨基酸序列构成的CDRH1的碱基序列；
(b)编码由SEQ ID NO.2所述的氨基酸序列构成的CDRH2的碱基序列；以及
(c)编码由SEQ ID NO.3所述的氨基酸序列构成的CDRH3的碱基序列，或者，
编码抗糖链抗体或其片段的多核苷酸可以具有：由在编码各CDR的碱基序列中具有1个或数个碱基的缺失、替换或添加的碱基序列构成的、编码CD RH1、CDRH2和CDRH3的碱基序列，或者，
编码抗糖链抗体或其片段的多核苷酸可以具有：由与编码各CDR的碱基序列具有80％以上的同一性的碱基序列构成的、编码CDRH1、CDRH2和CDRH3的碱基序列。
在一个实施方式中，编码抗糖链抗体或其片段的多核苷酸可以具有：
(d)编码由SEQ ID NO.4所述的氨基酸序列构成的CDRL1的碱基序列；
(e)编码由SEQ ID NO.5所述的氨基酸序列构成的CDRL2的碱基序列；以及
(f)编码由SEQ ID NO.6所述的氨基酸序列构成的CDRL3的碱基序列，或者，
编码抗糖链抗体或其片段的多核苷酸可以具有：由在编码各CDR的碱基序列中具有1个或数个碱基的缺失、替换或添加的碱基序列构成的、编码CD RL1、CDRL2和CDRL3的碱基序列，或者，
编码抗糖链抗体或其片段的多核苷酸可以具有：由与编码各CDR的碱基序列具有80％以上的同一性的碱基序列构成的、编码CDRL1、CDRL2和CD RL3的碱基序列。
在一个实施方式中，编码抗糖链抗体或其片段的基因的多核苷酸可以具有：
(a)编码由SEQ ID NO.1所述的氨基酸序列构成的CDRH1的碱基序列；
(b)编码由SEQ ID NO.2所述的氨基酸序列构成的CDRH2的碱基序列；
(c)编码由SEQ ID NO.3所述的氨基酸序列构成的CDRH3的碱基序列；
(d)编码由SEQ ID NO.4所述的氨基酸序列构成的CDRL1的碱基序列；
(e)编码由SEQ ID NO.5所述的氨基酸序列构成的CDRL2的碱基序列；以及
(f)编码由SEQ ID NO.6所述的氨基酸序列构成的CDRL3的碱基序列，或者，
编码抗糖链抗体或其片段的基因的多核苷酸可以具有：由在编码各CDR的碱基序列中具有1个或数个碱基的缺失、替换或添加的碱基序列构成的、编码CDRH1、CDRH2和CDRH3以及CDRL1、CDRL2和CDRL3的碱基序列，或者，
编码抗糖链抗体或其片段的基因的多核苷酸可以具有：由与编码各CDR的碱基序列具有80％以上的同一性的碱基序列构成的、编码CDRH1、CDRH 2和CDRH3以及CDRL1、CDRL2和CDRL3的碱基序列。
(载体和宿主细胞)
在第3方式中，提供包含编码抗糖链抗体或其片段的多核苷酸的表达载体、以及用该表达载体进行了转染的宿主细胞。用该表达载体进行了转染的宿主细胞可产生抗糖链抗体或其片段。
编码抗糖链抗体或其片段的重链可变区(或重链)的多核苷酸和编码抗糖链抗体或其片段的轻链可变区(或轻链)的多核苷酸可以包含在同一表达载体中，也可以整合到不同的表达载体中，作为其组合提供。包含编码重链可变区(或重链)的多核苷酸的表达载体(重链可变区(或重链)的表达载体)与包含编码轻链可变区(或轻链)的多核苷酸的表达载体(轻链可变区(或轻链)的表达载体)的组合也包含在“包含编码抗糖链抗体或其片段的多核苷酸的表达载体”中。
包含编码抗糖链抗体或其片段的多核苷酸的表达载体和用该表达载体进行了转染的宿主细胞可以通过本领域技术人员公知的方法获得。例如，通过将编码单链的抗糖链抗体的多核苷酸等整合到适合其表达的载体中，并将其导入宿主，从而表达抗糖链抗体或其片段。表达载体优选包含适合于抗糖链抗体或其片段在宿主细胞中的表达的启动子、终止子等。表达载体还可以包含增强子等其他适当的调控序列。
载体可以考虑宿主细胞的种类、抗糖链抗体或其片段的表达效率等，从本领域技术人员公知的表达载体中适当选择，其种类可以是质粒载体，也可以是源自逆转录病毒或腺病毒的病毒载体。
作为宿主细胞，只要是能够从表达载体表达抗糖链抗体或其片段的细胞就没有限制，可以是大肠杆菌这样的原核细胞、CHO、COS、NIH3T3、HEK 293、HEK293T、COS-7等源自哺乳动物的细胞、F9等源自昆虫的细胞、酵母细胞等真核细胞。作为哺乳动物，可举出：人、黑猩猩等灵长类；小鼠、大鼠、仓鼠等啮齿类。
表达载体向宿主细胞的转染例如可以使用电穿孔法、磷酸钙法、脂质体转染法、DEAE葡聚糖法等本领域技术人员公知的方法、使用了市售的试剂的方法来进行。
在用包含编码抗糖链抗体或其片段的多核苷酸的表达载体进行了转染的宿主细胞(转染子)中包含：
·包含该表达载体并且表达抗糖链抗体或其片段的转染子；和
·通过将编码抗糖链抗体或其片段的多核苷酸以可表达的方式整合到宿主细胞的染色体上，从而表达抗糖链抗体或其片段的转染子(稳定转染子)
该稳定转染子中可以包含表达载体，也可以不包含表达载体，所述表达载体包含编码抗糖链抗体或其片段的多核苷酸。该转染子优选为CHO、COS、NIH3T3、HEK293、HEK293T、COS-7等源自哺乳动物的细胞。
(杂交瘤)
在第4方式中，提供产生抗糖链抗体的杂交瘤。
产生抗糖链抗体的杂交瘤可以如下得到：通过注射添加有6-磺基唾液酸路易斯X糖链的糖蛋白来免疫免疫动物，或者通过施用设计成能够在免疫动物内表达6-磺基唾液酸路易斯X糖链的载体来对免疫动物进行免疫，使由免疫动物得到的免疫细胞通过通常的细胞融合法与公知的骨髓瘤细胞融合，从而得到，其中，所述载体是编码6-磺基唾液酸路易斯X糖链的载体。从这样的杂交瘤中筛选出产生抗糖链抗体的细胞。作为免疫动物的实例，可举出小鼠、大鼠、仓鼠、兔子等啮齿类、猴子等哺乳类。
在一个实施方式中，产生抗糖链抗体的杂交瘤可以如下得到：用通过岩藻糖转移酶和硫酸基转移酶的基因导入而表达了6-磺基唾液酸路易斯X糖链的细胞对负责在HEV中表达的6-磺基唾液酸路易斯X的硫酸化的硫酸基转移酶、GlcNAc6ST-1和GlcNAc6ST-2缺失的小鼠进行免疫，由得到的小鼠制备脾细胞，在与骨髓瘤进行细胞融合而得到的数个杂交瘤中，使用其培养上清进行小鼠外周淋巴结的免疫荧光染色，进行分泌与野生型小鼠的HEV特异性地显示结合性的IgG类的抗体的杂交瘤的筛选。
(抗糖链抗体的制造方法)
在第5方式中，提供一种抗糖链抗体或其片段的制造方法。抗糖链抗体或其片段的制造可以通过培养所述宿主细胞、转染子、杂交瘤来进行，也可以使用重组DNA技术来进行。
作为通过重组DNA技术以重组蛋白质的形式制造的抗体，例如可举出嵌合抗体、人源化抗体、人抗体等。这些抗体例如可以通过培养用抗体、编码其重链或轻链的重组载体进行了转化的宿主细胞来制造。重组抗体也可以使用导入了编码期望的抗体的基因的转基因动物来制造。
宿主细胞、转染子、杂交瘤的培养条件可以由本领域技术人员根据期望的抗糖链抗体或其片段、宿主细胞的种类适当决定。制造方法可以进一步包含从培养工序中得到的培养物中回收抗体或其片段的工序，所述抗体或其片段与6-磺基唾液酸路易斯X糖链特异性结合，并且该结合要求构成6-磺基唾液酸路易斯X糖链的岩藻糖、硫酸基和唾液酸。
所制造的抗体或其片段也可以在回收之前进一步经过纯化工序等追加的工序，例如为了提高纯度，优选进行盐析、过滤器过滤、使用离心分离的澄清化、基于亲和力的回收、基于离子交换的中间纯化、基于凝胶过滤的最终纯化。
(淋巴细胞归巢抑制剂)
在第6方式中，提供一种淋巴细胞归巢抑制剂，其包含抗糖链抗体或其片段。
淋巴细胞归巢是为了高效地诱导免疫响应而具备的生物体防御机制，向淋巴结的淋巴细胞归巢由以下三个步骤控制。即，步骤1：在淋巴细胞上表达的L-选择素与在HEV内腔中表达的硫酸化糖链6-磺基唾液酸路易斯X的结合介导的淋巴细胞滚动，步骤2：通过HEV内腔的硫酸乙酰肝素呈递的趋化因子与趋化因子受体的结合所介导的信号转导，进行粘附分子整联蛋白的活化，步骤3：活化整联蛋白与免疫球蛋白超家族的粘附分子ICAM-1(细胞间粘附分子-1，intercellular adhesion molecule-1)、VCAM-1(血管细胞粘附分子-1，vascular cell adhesion molecule-1)的牢固的粘附和向淋巴组织的浸润，经过这三个步骤，淋巴细胞向淋巴组织实质(lymphoid tissue parenchyma)迁移。
其中，在步骤1中，在HEV内腔中表达的硫酸化糖链6-磺基唾液酸路易斯X承担重要的功能，在步骤2中，硫酸乙酰肝素承担重要的功能。因此，可通过使用与构成6-磺基唾液酸路易斯X糖链的岩藻糖、硫酸基和唾液酸特异性结合的抗体或其片段作为有效成分，制备淋巴细胞归巢抑制剂。淋巴细胞归巢抑制剂特别优选阻碍源自表达6-磺基唾液酸路易斯X糖链的淋巴结、例如外周淋巴结、肠系膜淋巴结或扁桃体的高内皮微静脉的淋巴细胞归巢，更具体而言，阻碍L-选择素依赖性的淋巴细胞的滚动。
(药物组合物)
在第7方式中，提供一种抗糖链抗体或其片段的药物用途，例如包含抗糖链抗体或其片段的药物组合物。
作为抗糖链抗体或其片段的药物用途，可举出因淋巴细胞归巢而引起的免疫响应过度作用而产生的疾病的治疗或预防。具体而言，可举出在疾病的发病前施用抗糖链抗体或其片段所带来的疾病预防效果、在疾病发病后施用抗糖链抗体或其片段所带来的疾病治疗效果、反复进行复发-缓解的慢性疾病的复发防止效果。在因淋巴细胞归巢而引起的过量的免疫响应中，作为产生抗糖链抗体的给药特别有效的免疫响应的组织，可举出：外周淋巴结、肠系膜淋巴结、扁桃体。因淋巴细胞归巢、特别是由淋巴细胞与HEV的特异性粘附引起的免疫响应超过通常水平而过度作用而产生的疾病的实例，可举出自身免疫疾病等免疫相关疾病。免疫相关疾病例如包含选自下述中的自身免疫疾病：复发缓解型多发性硬化症、一次进展型多发性硬化症和二次进展型多发性硬化症的多发性硬化症；银屑病；类风湿关节炎；银屑病性关节炎；系统性红斑狼疮(SLE)；溃疡性大肠炎；克罗恩病；良性淋巴细胞性血管炎；血小板减少性紫癜；突发性血小板减少症；特发性自身免疫性溶血性贫血；红细胞再生障碍；舍格伦综合征；风湿性疾病；结缔组织疾病；炎症性风湿病；变形性风湿病；非关节性风湿病；青少年类风湿关节炎；肌肉风湿病；慢性多发性关节炎；冷球蛋白血管炎；ANCA相关血管炎；抗磷脂综合征；重症肌无力；自身免疫性溶血性贫血；吉兰-巴雷综合征；慢性免疫性多发神经病；自身免疫性甲状腺炎；胰岛素依赖性糖尿病；1型糖尿病；艾迪森病；膜性肾小球肾病；抗肾小球基底膜肾病；自身免疫性胃炎；自身免疫性萎缩性胃炎；恶性贫血；天疱疮；寻常性天疱疮；肝硬化；原发性胆汁性肝硬化；皮肌炎；多发性肌炎；纤维肌炎；肌硬症；乳糜泻；免疫球蛋白A肾病；Henoch-Sch onlein紫癜；埃文斯综合征；银屑病；关节症性银屑病；格雷夫斯病；格雷夫斯眼病；硬皮症；系统性硬皮症；进行性系统性硬皮症；原发性胆汁性肝硬化；桥本甲状腺炎；原发性粘液水肿；交感性眼炎；自身免疫性葡萄膜炎；肝炎；慢性活动性肝炎；胶原病；强直性脊椎炎；肩关节周围炎；结节性多动脉炎；软骨钙化症；韦格纳氏肉芽肿症；显微镜下多血管炎；慢性荨麻疹；水疱性皮肤病；类天疱疮；德维克病；小儿自身免疫性溶血性贫血；难治性或慢性自身免疫性血细胞减少症；后天性血友病A；冷凝集素病；视神经脊髓炎；全身僵硬综合征；胰腺炎；心肌炎；血管炎；胃炎；痛风；痛风性关节炎；银屑病；正补体血症性荨麻疹样血管炎；心膜炎；肌炎；抗合成酶综合征；巩膜炎；巨噬细胞活化综合征；贝赫切特综合征；PAPA综合征；Blau综合征；成人和青少年斯蒂尔病；Cryopyrin相关周期性综合征；Muckle-Wel ls综合征；家族性冷因性自身炎症性综合征；新生儿期发病多脏器性炎症性疾病；家族性地中海热；慢性婴儿期发病神经皮肤关节综合征；全身型青少年特发性关节炎；高IgD综合征；施尼茨勒综合征；自身免疫性视网膜症；动脉粥样硬化；慢性前立腺炎；和TNF受体相关周期性综合征(TRAPS)。
自身免疫疾病可以是多发性硬化症或胶原病。胶原病例如可以是类风湿关节炎、系统性红斑狼疮、硬皮症、皮肌炎、结节性多发动脉炎、混合性结缔组织病、舍格伦综合征、显微镜下多血管炎、嗜酸性肉芽肿性多血管炎、过敏性血管炎、贝赫切特病、科干综合征、RS3PE、巨细胞性动脉炎、成人斯蒂尔病、风湿性多发肌痛症、纤维肌痛症、SAPHO综合征等。自身免疫疾病，除了上述疾病以外，可以是选自其他过度免疫响应对自身造成伤害的疾病中的1种或多种疾病。
因淋巴细胞归巢而引起的免疫响应过度作用而产生的其他疾病的实例有过敏性疾病等免疫相关疾病。免疫相关疾病可以是选自下述中的1种或多种疾病：过敏性鼻炎、特应性皮炎、食物过敏、口腔过敏综合征、药剂过敏、花粉症、过敏性结膜炎、嗜酸性粒细胞性肺炎、过敏性胃肠炎、荨麻疹、光线过敏症、金属过敏、猫过敏、螨虫过敏和哮喘。
药物组合物除了作为有效成分的抗糖链抗体或其片段以外，还可以根据给药途径、适用疾病等进一步包含追加的成分，例如药学上可接受的稀释剂、载体、增溶剂、乳化剂、保存剂、辅助剂等。抗糖链抗体的给药量可以根据疾病的种类、患者的年龄、性别、体重、疾病和治疗的程度等适当决定。药物组合物还可以包含抗糖链抗体以外的已知有治疗或预防因淋巴细胞归巢而引起的免疫响应过度作用而产生的疾病的效果的药剂。
药物组合物的剂型有液剂、冷冻干燥制剂等，作为药物组合物的给药途径的实例，例如可举出点滴静脉注射、皮下注射或肌肉注射等，但并不限定于这些。
在另一方式中，提供一种治疗或预防因淋巴细胞归巢、特别是因淋巴细胞与HEV的特异性粘附而引起的免疫响应过度作用而产生的疾病的方法，该方法包含对需要治疗或预防的对象施用抗糖链抗体或其片段的步骤。抗糖链抗体或其片段也可以与除此以外的已知对因淋巴细胞归巢而引起的免疫响应过度作用而产生的疾病的治疗或预防有效果的药剂进行组合使用。
以下举出实施例对本发明进行更具体的说明，但本发明并不限定于这些实施例。
实施例
1.抗糖链抗体的制备
进行针对6-磺基唾液酸路易斯X糖链的单克隆抗体的制备。首先，通过导入编码岩藻糖转移酶FucT-VII和硫酸基转移酶GlcNAc6ST-2的基因，使中国仓鼠卵巢(Chinesehamster ovary(CHO))细胞表达6-磺基唾液酸路易斯X糖链。用该CHO细胞对缺少硫酸基转移酶GlcNAc6ST-1和GlcNAc6ST-2的硫酸基转移酶双重缺失小鼠(Kawashima et al.(如上所述))进行免疫。使用P3X63Ag8.653骨髓瘤细胞和聚乙二醇对该脾细胞进行细胞融合，通过基于免疫组织染色的筛选，建立产生对野生型(WT)小鼠的高内皮微静脉(HEV)具有反应性的抗硫酸化糖链单克隆抗体SF1(小鼠IgG1，kappa)的杂交瘤。所得到的抗体如后述那样对于硫酸化且岩藻糖基化的糖链具有反应性，因此命名为SF1抗体(S是指识别硫酸基的克隆，F是指识别岩藻糖的克隆)。
2.SF1抗体对HEV的反应性的分析
纯化SF1抗体，按照常规方法进行生物素标记，将WT小鼠、岩藻糖转移酶(FucT)-IV和FucT-VII基因双重缺失小鼠(FucT DKO)、硫酸基转移酶(Gl cNAc6ST)-1和GlcNAc6ST-2双重缺失小鼠(G6ST DKO)的淋巴结冷冻切片在4℃下孵育一夜，用PBS清洗切片后，将作为荧光物质的AlexaFluor594标记链霉亲和素在室温下进一步孵育1小时，进行荧光免疫染色(图2)。
其结果，SF1抗体与WT小鼠的淋巴结HEV强烈反应，但与FucT DKO和G6ST DKO的HEV完全不反应。由此可知，岩藻糖和硫酸基这两者都参与SF1抗体对小鼠淋巴结的反应。另一方面，作为已知的抗体的MECA-79(Streeter et al.，(如上所述))与小鼠淋巴结HEV反应，但在FucT DKO中反应性没有消失，因此对淋巴细胞归巢起重要作用的岩藻糖与反应性无关。
进而，使用识别其他的HEV上的糖链的抗体，进行荧光免疫染色。与上述同样地，SF1抗体与WT小鼠的淋巴结HEV强烈反应，但与FucT DKO和G6ST DKO的HEV完全不反应。另一方面，作为已知的抗体的F2抗体(Mat sumura et al.，(如上所述))与WT小鼠淋巴结HEV反应，不与FucT DKO反应，但在G6ST DKO中反应性没有消失，因此对淋巴细胞归巢起重要作用的硫酸基与反应性无关。与之相对，作为已知的抗体的S2抗体(Hirakawa et al.，(如上所述))与WT小鼠淋巴结HEV反应，不与G6ST DKO反应，但在FucTDKO中反应性没有消失，因此对淋巴细胞归巢起到重要作用的岩藻糖与反应性无关。将结果用图3表示。
接着，通过对WT小鼠的淋巴结冷冻切片进行唾液酸酶处理，研究了唾液酸在对HEV的反应性中的参与。将结果示于图4。
通过唾液酸酶处理，SF1抗体的反应性消失，因此可知，SF1抗体对小鼠淋巴结的反应性除了岩藻糖和硫酸基以外，还与对淋巴细胞归巢起重要作用的唾液酸相关。另一方面，已知的抗糖链单克隆抗体MECA-79的反应性与唾液酸无关。由以上的免疫荧光染色的结果可知，本研究中得到的SF1抗体是特异性地识别小鼠淋巴结HEV上包含岩藻糖、硫酸基、唾液酸的糖链结构的抗糖链单克隆抗体。
3.SF1抗体对合成糖链的反应性的分析
接着，使用美国功能性糖组学(Consortium for Functional Glycomics)的聚糖阵列，分析SF1抗体对各种糖链的反应性。其结果，在聚糖阵列上的611种糖链中，SF1抗体仅与6-磺基唾液酸路易斯X糖链特异性地结合。图5中摘录表示聚糖阵列上存在的6-磺基唾液酸路易斯X糖链和与该糖链部分结构类似的9种糖链的结果。图中的括号内的数字表示聚糖阵列中的各糖链的ID编号。由图5可知，SF1抗体完全不与LacNAc(ID编号170)、唾液酸LacNAc(ID编号261)结合。此外，可知SF1抗体不与从6-磺基唾液酸路易斯X糖链中去除了岩藻糖的6-磺基唾液酸LacNAc(ID编号252)、从6-磺基唾液酸路易斯X糖链中去除了硫酸基的唾液酸路易斯X(ID编号255)、以及从6-磺基唾液酸路易斯X糖链去除了唾液酸的6-磺基路易斯X(ID编号291)中的任一者结合，而与6-磺基唾液酸路易斯X(ID编号253)特异性地结合。进而，SF1抗体不与以下任一种结合：硫酸基添加于半乳糖而不是GlcNAc的6’-磺基唾液酸路易斯X(ID编号231)、代替6-磺基唾液酸路易斯X的末端的α2-3键合的唾液酸(Neu5Ac)而将硫酸基添加于半乳糖的3位的糖链(ID编号220)、代替α2-3键合的Neu5Ac而将岩藻糖以α1-2键合添加于半乳糖的糖链(ID编号222)、以及半乳糖的6位和GlcNAc的6位均被硫酸化的6,6’-二磺基LacNAc(ID编号445)。由以上可知，SF1抗体与6-磺基唾液酸路易斯X糖链特异性地结合。
4.SF1抗体与6-磺基唾液酸路易斯X的结合的解离常数的确定
接着，通过使用Octet RED96(Pall-Fortebio公司制)的生物膜层干涉法，进行SF1抗体与6-磺基唾液酸路易斯X的结合的解离常数(KD)的测定。使生物素标记6-磺基唾液酸路易斯X与链霉亲和素生物传感器结合后，实时分析与SF1抗体的结合和解离。将结果示于图6。
其结果可知，SF1抗体与6-磺基唾液酸路易斯X的结合的KD值为6.09×10-9(M)。在使用生物素标记唾液酸LacNAc作为阴性对照的情况下，完全未观察到结合。
5.抗糖链抗体的氨基酸序列的确定
接着，从产生SF1抗体的杂交瘤取得抗体基因，进行其碱基序列的分析，确定SF1抗体的重链和轻链可变区的超变区的氨基酸序列。将SF1抗体的重链CDR1、CDR2、CDR3分别作为SEQ ID NO.1(CDRH1)、SEQ ID NO.2(CDRH2)、SEQ ID NO.3(CDRH3)示于图7，将SF1抗体的轻链CDR1、CDR2、CDR3分别作为SEQ ID NO.4(CDRL1)、SEQ ID NO.5(CDRL2)、SEQ ID NO.6(CDRL3)示于图7。由于具有这样的超变区的抗体至今没有被报告，因此可知是具有新的序列的抗体。
将SF1抗体的重链可变区的全长氨基酸序列设为SEQ ID NO.13，示于图8。用粗体字表示CDRH1、CDRH2、CDRH3的序列。
将SF1抗体的轻链可变区的全长氨基酸序列设为SEQ ID NO.14，示于图9。用粗体字表示CDRL1、CDRL2、CDRL3的序列。
6.SF1抗体对L-选择素与HEV的结合的抑制作用的分析
将小鼠淋巴结冷冻切片在室温下2小时，与仅缓冲液A(0.1％ BSA，20mM HEPES-NaOH，0.15M NaCl，1mM CaCl2，1mM MgCl2，pH7.4)或溶解于缓冲液A的SF1抗体在室温下孵育2小时后，与溶解于缓冲液A的L-选择素和人IgG的融合蛋白(L-selectin-Fc)在4℃下孵育一夜，将切片用缓冲液A清洗后，与生物素标记抗人IgG抗体在室温下孵育2小时。用缓冲液A清洗切片后，将作为荧光物质的AlexaFluor 594标记链霉亲和素在室温下进一步孵育1小时，进行荧光免疫染色(图10)。
其结果，SF1抗体强烈地抑制了L-选择素-Fc与HEV的结合。由此可知，SF1抗体抑制作为淋巴细胞归巢受体的L-选择素与HEV上表达的配体的相互作用。
7.SF1抗体对L-选择素依赖性的淋巴细胞的滚动的抑制作用的分析
在培养皿中培养稳定表达核心蛋白CD34和6-磺基唾液酸路易斯X糖链的、重构了在HEV上表达的L-选择素的配体的CHO细胞，将其设置在流动室中。接着，使由小鼠脾脏制备的淋巴细胞以各种剪切应力(0.5、1.0、1.5、2.0dynes/cm2)流动，进行重构了L-选择素的配体的细胞上滚动细胞数的测定。此时，分为未处理(图中为未处理)、将重构了L-选择素的配体的细胞预先与SF1抗体进行了孵育的组(图中为SF1)和将淋巴细胞预先与抗L-选择素抗体进行了孵育的组(图中为MEL-14)这3组进行测定。将结果示于图11。
其结果，观察到的滚动被抗L-选择素抗体抑制，因此确认为L-选择素依赖性的，可知SF1抗体具有抑制L-选择素依赖性的滚动的作用。
8.SF1抗体的淋巴细胞归巢抑制效果的分析
向WT小鼠尾静脉内注射SF1抗体或PBS后，尾静脉内注射用荧光物质CFSE标记的淋巴细胞(源自肠系膜淋巴结和脾脏)，2小时后采集各淋巴组织，调查浸润(归巢)到各个组织的CFSE标记淋巴细胞数(图12)。
其结果可知，SF1抗体是具有抑制90％以上淋巴细胞向小鼠外周淋巴结的归巢的活性的抗体。此外，向肠系膜淋巴结的归巢也抑制了约60％。另一方面，可知对于向仅在5％以下的HEV中表达由SF1抗体识别的糖链的派尔集合淋巴结和完全不表达该糖链的脾脏的归巢，是不显示显著的抑制效果的特异性高的抗体。在派尔集合淋巴结中，发生针对肠道内的微生物、食物来源的抗原的肠道免疫响应，在脾脏中，发生侵入血液中的外来异物的免疫响应，因此，可预想到SF1抗体对因外周淋巴结和肠系膜淋巴结中的过度免疫响应而产生的免疫相关疾病的治疗或预防有用，而不会引起因抑制派尔集合淋巴结和脾脏中的它们的正常的免疫响应而产生的副作用。
9.EAE模型中的SF1抗体的效果的分析
使用作为难治性自身免疫相关疾病的一种的多发性硬化症的动物模型而已知的实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis，EAE)模型，进行SF1抗体对免疫相关疾病的效果的分析。在该模型中，通过用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(myelin oligodendrocyte glycoprotein(MOG))肽对小鼠进行免疫，通过淋巴细胞向淋巴结的归巢诱导免疫响应，导致自身免疫性的脑脊髓炎发病。首先，进行WT小鼠和G6ST DKO小鼠中的EAE的症状的比较研究(图13)。
其结果，在G6ST DKO小鼠中确认到发病的延迟、高峰时的症状的减轻、以及复发时的症状的减轻，因此可知在HEV中由GlcNAc6ST-1和GlcNAc6ST-2合成的6-磺基唾液酸路易斯X糖链成为多发性硬化症的治疗靶标。
因此，进行了特异性地结合于相同糖链的SF1抗体的EAE的发病的抑制实验。在进行了基于MOG肽的致敏的第0天和第2天对EAE模型小鼠给药2次SF1抗体，结果与所述的DKO小鼠同样地，确认到发病的延迟、高峰时的症状的减轻以及复发时的症状的减轻(图14)。
由此可知，通过SF1抗体抑制了EAE的发病。
进而，通过将SF1抗体从开始出现EAE症状的初次抗原致敏后第8天的时间点起每3天给药12次，第30天以后出现的复发得到显著抑制，中断抗体给药的第42天以后也保持复发得到抑制的状态(图15)。同样地，通过将SF1抗体从超过EAE的初发峰的初次抗原致敏后第21天的时间点起每隔3天给药12次，第30天以后出现的复发被显著抑制，中断抗体给药的第54天以后也保持复发得到抑制的状态(图16)。
已知多发性硬化症反复进行复发和缓解。根据所述结果，SF1抗体具有抑制复发的效果，因此被认为是能够适用于多发性硬化症的治疗的抗体。
10.小鼠类风湿性关节炎模型中的SF1抗体的效果的分析
接着，研究EAE以外的自身免疫相关疾病模型中的SF1抗体的效果。具体而言，在作为小鼠类风湿性关节炎模型的胶原诱导关节炎模型中，第0天进行第1次抗原皮下给药和第21天进行第2次抗原皮下给药、以及在第24天、第27天、第30天、第33天给药PBS或SF1并进行研究(图17)。
其结果显示，关节炎症状的发病率和临床评分均在SF1抗体给药组中得到抑制。
11.小鼠过敏性鼻炎模型中的SF1抗体的效果的分析
接着，研究SF1抗体在小鼠过敏性鼻炎模型中的效果。具体而言，在通过将作为抗原的卵清蛋白(ovalbumin，OVA)和具有佐剂作用的霍乱毒素(CT)每隔1周对小鼠经鼻给药4次而引起的过敏性鼻炎模型中，将PBS或SF1抗体在1周内腹腔内给药2次并进行了研究(图18)。
其结果，在OVA和CT的第4次的经鼻给药后12分钟内观察到的小鼠的打喷嚏的次数以及抓鼻行为的次数在SF1抗体给药组中得到显著抑制。
12.基于SF1抗体的正常人组织的免疫染色
进行了基于SF1抗体的正常人组织的免疫组织染色，结果在主动脉、乳腺、小脑、大脑、心脏、肺、小肠、大肠、皮肤、脾脏未观察到染色，但在淋巴结和扁桃体上观察到染色(图19、20)。
由图20的放大照片可知，SF1抗体与淋巴细胞向这些淋巴组织迁移时穿过的血管即高内皮微静脉HEV(图中箭头)特异性地结合。
13.人源化单链SF1抗体的制备及使用其的免疫染色
在与图8所示的小鼠SF1抗体的重链可变区框架序列同源性高的人抗体重链可变区框架序列中，反复试验的结果发现使用IGHV4-59时活性被良好地保持。具体而言，设计将图7所示的SF1抗体的重链超变区序列移植到IG HV4-59中而得到的人源化序列SF1重链可变区序列H1、H2，用于活性评价。H1的序列是使H2的序列中的人重链可变区框架序列部分的2处氨基酸突变回(mutated back)小鼠SF1抗体的氨基酸而得到的序列。进而，反复试验的结果发现，作为另一序列的实例，在与图8所示的SF1抗体的重链可变区框架序列同源性高的人抗体重链可变区框架序列中，使用IGHV3-43，使其2处氨基酸突变回小鼠SF1抗体的氨基酸时，活性也被良好地保持。具体而言，设计将图7所示的重链超变区序列移植到具有这样的重链可变区框架序列的IG HV3-43中而得到的人源化序列SF1重链可变区序列H3，用于活性评价。
同样地，在与图9所示的小鼠SF1抗体的轻链可变区框架序列同源性高的人抗体轻链可变区框架序列中，反复试验的结果发现使用IGKV1-39时活性被良好地保持。具体而言，设计将图7所示的SF1抗体的轻链超变区序列移植到IGKV1-39中而得到的人源化序列SF1轻链可变区序列L1、L2，用于活性评价。L1的序列是使L2的序列中的人轻链可变区框架序列部分的1处氨基酸突变回小鼠SF1抗体的氨基酸而得到的序列。进而，反复试验的结果发现，作为另一序列的实例，在与图9所示的SF1抗体的轻链可变区框架序列同源性高的人抗体轻链可变区框架序列中，使用IGKV6-21，使其1处氨基酸突变回小鼠SF1抗体的氨基酸时，活性也被良好地保持。具体而言，设计将图7所示的轻链超变区序列移植到具有这样的轻链可变区框架序列的IGK V6-21中而得到的人源化序列SF1轻链可变区序列L3，用于活性评价。
将以上的人源化SF1重链可变区H1、H2、H3和人源化SF1轻链可变区L1、L2、L3的氨基酸序列示于图21。以粗体字表示CDRH1、CDRH2、CD RH3、CDRL1、CDRL2、CDRL3的序列。
接着，使用利用小麦胚芽提取液的无细胞蛋白质合成体系，制备以各种组合包含图21所示的人源化SF1重链可变区H1～H3和人源化SF1轻链可变区L1～L3的人源化SF1单链抗体(scFv)。将制备的各种人源化SF1scFv的全长氨基酸序列示于图22。下划线部分的Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(GGGGS)的3次重复序列(G4S接头)为重链和轻链的接头序列，C末端侧的双重下划线部分的Gly-Leu-Gln-Gln-Gly-Gly-Thr-His-His-His-His-His-His(GLQQGGTHHHHHH)序列是用于与生物素化抗(His)6抗体结合的标签序列。粗体的序列从N末端侧起分别表示CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2、CDRL3的序列。人源化SF1-scFv-H1L1是包含人源化SF1重链可变区H1和人源化SF1轻链可变区L1的序列，人源化SF1-scFv-H1L2是包含人源化SF1重链可变区H1和人源化SF1轻链可变区L2的序列，人源化SF1-scFv-H2L1是包含人源化SF1重链可变区H2和人源化SF1轻链可变区L1的序列，人源化SF1-scFv-H3L3是包含人源化SF1重链可变区H3和人源化SF1轻链可变区L3的序列。
将预先与生物素化抗(His)6抗体孵育而形成复合体的人源化SF1-scFv与小鼠淋巴结冷冻切片在4℃下孵育一夜，用PBS清洗切片后，将作为荧光物质的AlexaFluor 594标记链霉亲和素在室温下进一步孵育1小时，进行荧光免疫染色，结果，以任意组合制备的人源化SF1-scFv均对HEV显示出特异性的染色性(图23)。由以上可知，图7所示的SF1抗体的超变区的序列是在与人抗体和小鼠抗体的各种可变区框架序列连接时也具有活性的具有通用性的序列。
14.人源化SF1抗体的制备及使用其的免疫染色
将图21所示的人源化SF1重链可变区序列H1与人抗体重链IgG1恒定区连接，设计人源化SF1重链全长氨基酸序列(图24)。同样地，将图21所示的人源化SF1轻链可变区序列L1与作为人抗体轻链的κ链恒定区连接，设计人源化SF1轻链全长氨基酸序列(图25)。将编码这些人源化SF1重链全长氨基酸序列和人源化SF1轻链全长氨基酸序列的基因导入作为人源细胞株的HEK293T细胞，制备人源化SF1抗体。
将人源化SF1抗体的重链全长氨基酸序列设为SEQ ID NO.25，示于图24。用粗体字表示CDRH1、CDRH2、CDRH3的序列。
将人源化SF1抗体的轻链可变区的全长氨基酸序列设为SEQ ID NO.26，示于图25。用粗体字表示CDRL1、CDRL2、CDRL3的序列。
使用人源化SF1抗体进行小鼠淋巴结的荧光免疫染色，结果人源化SF1抗体特异性地结合于野生型(WT)小鼠的高内皮微静脉，与缺失6-磺基唾液酸路易斯X的硫酸基的G6STDKO小鼠和缺失岩藻糖的FucT DKO完全不反应(图26)。这表示人源化SF1抗体对6-磺基唾液酸路易斯X的特异性高。
由所述结果可以确认，具有SF1抗体的重链和轻链可变区的超变区氨基酸序列的人源化抗体与小鼠SF1抗体同样地保持了对6-磺基唾液酸路易斯X的特异性的糖结合特异性。
15.人源化SF1抗体的淋巴细胞归巢抑制效果的分析
接着，向WT小鼠尾静脉注射人源化SF1抗体或PBS后，尾静脉注射用荧光物质CFSE标记的淋巴细胞(源自肠系膜淋巴结和脾脏)。在2小时后采集各淋巴组织，调查向各组织归巢的CFSE标记淋巴细胞数(图27)。
其结果，人源化SF1抗体与小鼠SF1抗体同样地将淋巴细胞向小鼠外周淋巴结的归巢抑制了约90％以上。此外，向肠系膜淋巴结的归巢也抑制了约70％。另一方面，对于向派尔集合淋巴结和脾脏的归巢，没有显示出显著的阻碍效果。
16.EAE模型中的人源化SF1抗体的效果的分析
进行基于人源化SF1抗体的EAE发病的抑制实验。在进行了基于MOG肽的致敏的第0天和第2天，对EAE模型小鼠施用2次人源化SF1抗体，结果与小鼠SF1抗体同样地，确认到发病的延迟、高峰时的症状的减轻、以及复发时的症状的减轻(图28)。
由此可知，通过人源化SF1抗体抑制了EAE的发病。
17.修饰了Fc部分序列的人源化SF1抗体的制备
此外，进行修饰了Fc部分的序列的人源化SF1抗体的制备。即，关于图24所示的人源化SF1重链IgG1恒定区，设计了根据Eu编号将Leu234-Leu235替换为Ala234-Ala235的人源化SF1重链IgG1-LALA体的全长氨基酸序列(图29)。此外，同样地，将图24所示的人源化SF1重链IgG1恒定区替换为IgG4恒定区后，设计根据Eu编号将Ser228替换为Pro、将Leu235替换为Glu的人源化SF1重链IgG4-SPLE体的全长氨基酸序列(图30)。将编码这些修饰了Fc部分的序列的人源化SF1重链全长氨基酸序列的基因分别与编码图25所示的人源化SF1轻链全长氨基酸序列的基因一起导入HEK293T细胞，制备人源化SF1抗体-IgG1-LALA体(HSF1-LALA)和人源化SF1抗体-IgG4-SPLE体(HSF1-G4PE)。
将人源化SF1抗体的重链IgG1-LALA体的全长氨基酸序列设为SEQ ID NO.27，示于图29。用粗体字表示CDRH1、CDRH2、CDRH3的序列。
将人源化SF1抗体的重链IgG4-SPLE体的全长氨基酸序列设为SEQ ID NO.28，示于图30。用粗体字表示CDRH1、CDRH2、CDRH3的序列。
接着，使用包含由图29、图30所示的人源化SF1抗体的重链变体和图25所示的轻链构成的、人源化SF1抗体-IgG1-LALA体(HSF1-LALA)和人源化SF1抗体-IgG4-SPLE体(HSF1-G4PE)的293T细胞的培养上清，进行小鼠淋巴结的荧光免疫染色。其结果，在仅未进行基因导入的293T细胞的培养上清中完全未观察到染色，但通过包含HSF1-LALA的培养上清和包含HSF1-G4PE的培养上清，在小鼠淋巴结高内皮微静脉中确认到特异性结合(图31)。
由所述结果确认，修饰了Fc部分的序列的人源化SF1抗体也保持了特异性的组织结合性。已知这些修饰了Fc部分的序列的人源化抗体使抗体的Fc部分介导的效应活性降低，使副作用风险降低。由以上可以认为，人源化SF 1抗体和修饰了Fc部分的序列的人源化SF1抗体与小鼠SF1抗体同样地通过特异性的组织结合性而具有高效率的淋巴细胞归巢抑制作用，作为对自身免疫疾病、过敏性疾病等免疫相关疾病发挥治疗效果的治疗用抗体是有用的。
本申请以日本特愿2020-169966为基础，其内容全部包含在本说明书中。
SEQ ID NO.1：表示SF1抗体的CDRH1的氨基酸序列。
SEQ ID NO.2：表示SF1抗体的CDRH2的氨基酸序列。
SEQ ID NO.3：表示SF1抗体的CDRH3的氨基酸序列。
SEQ ID NO.4：表示SF1抗体的CDRL1的氨基酸序列。
SEQ ID NO.5：表示SF1抗体的CDRL2的氨基酸序列。
SEQ ID NO.6：表示SF1抗体的CDRL3的氨基酸序列。
SEQ ID NO.7：表示SF1抗体CDRH1的碱基序列。
SEQ ID NO.8：表示SF1抗体CDRH2的碱基序列。
SEQ ID NO.9：表示SF1抗体CDRH3的碱基序列。
SEQ ID NO.10：表示SF1抗体CDRL1的碱基序列。
SEQ ID NO.11：表示SF1抗体CDRL2的碱基序列。
SEQ ID NO.12：表示SF1抗体CDRL3的碱基序列。
SEQ ID NO.13：表示SF1抗体的重链可变区的氨基酸序列。
SEQ ID NO.14：表示SF1抗体的轻链可变区的氨基酸序列。
SEQ ID NO.15：表示人源化SF1抗体的重链可变区H1的氨基酸序列。
SEQ ID NO.16：表示人源化SF1抗体的重链可变区H2的氨基酸序列。
SEQ ID NO.17：表示人源化SF1抗体的重链可变区H3的氨基酸序列。
SEQ ID NO.18：表示人源化SF1抗体的轻链可变区L1的氨基酸序列。
SEQ ID NO.19：表示人源化SF1抗体的轻链可变区L2的氨基酸序列。
SEQ ID NO.20：表示人源化SF1抗体的轻链可变区L3的氨基酸序列。
SEQ ID NO.21：表示人源化SF1-scFv-H1L1的氨基酸序列。
SEQ ID NO.22：表示人源化SF1-scFv-H1L2的氨基酸序列。
SEQ ID NO.23：表示人源化SF1-scFv-H2L1的氨基酸序列。
SEQ ID NO.24：表示人源化SF1-scFv-H3L3的氨基酸序列。
SEQ ID NO.25：表示人源化SF1抗体的重链的全长氨基酸序列。
SEQ ID NO.26：表示人源化SF1抗体的轻链的全长氨基酸序列。
SEQ ID NO.27：表示人源化SF1抗体的重链IgG1-LALA体的全长氨基酸序列。
SEQ ID NO.28：表示人源化SF1抗体的重链IgG4-SPLE体的全长氨基酸序列。
SEQ ID NO.29：表示G4S接头的氨基酸序列。
序列表
<110> 国立大学法人千叶大学
<120> 新型抗糖链抗体及其用途
<130> C0951MP003
<150> JP2020-169966
<151> 2020-10-07
<160> 29
<170> PatentIn version 3.5
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<213> 小鼠
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20 25 30
Ala Val His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Ile Ile Trp Gly Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Ser Ala Leu Met
50 55 60
Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu
65 70 75 80
Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Lys His Glu Lys Leu Gly Arg Phe Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 14
<211> 106
<212> PRT
<213> 小鼠
<400> 14
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Thr Ala Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Lys Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Pro Trp Ile Tyr
35 40 45
Glu Ile Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Ile Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Asn Tyr Pro Leu Ala Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 15
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化SF1重链可变区H1
<400> 15
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Tyr
20 25 30
Ala Val His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Ile Ile Trp Gly Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Ser Ala Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Lys His Glu Lys Leu Gly Arg Phe Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 16
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化SF1重链可变区H2
<400> 16
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Tyr
20 25 30
Ala Val His Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Ile Ile Trp Gly Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Ser Ala Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Lys His Glu Lys Leu Gly Arg Phe Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 17
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化SF1重链可变区H3
<400> 17
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Tyr
20 25 30
Ala Val His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Ile Ile Trp Gly Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Ser Ala Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Ser Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Thr Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Lys His Glu Lys Leu Gly Arg Phe Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 18
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化SF1重链可变区L1
<400> 18
Glu Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Pro Leu Ile Tyr
35 40 45
Glu Ile Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu
65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Asn Tyr Pro Leu Ala Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 19
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化SF1重链可变区L2
<400> 19
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Pro Leu Ile Tyr
35 40 45
Glu Ile Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu
65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Asn Tyr Pro Leu Ala Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 20
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化SF1重链可变区L3
<400> 20
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Pro Leu Ile Tyr
35 40 45
Glu Ile Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Asn Tyr Pro Leu Ala Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 21
<211> 251
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化SF1-scFv-H1L1
<400> 21
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Tyr
20 25 30
Ala Val His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Ile Ile Trp Gly Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Ser Ala Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Lys His Glu Lys Leu Gly Arg Phe Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
115 120 125
Gly Gly Gly Ser Glu Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser
130 135 140
Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser
145 150 155 160
Val Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys
165 170 175
Pro Leu Ile Tyr Glu Ile Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg
180 185 190
Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser
195 200 205
Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Asn Tyr
210 215 220
Pro Leu Ala Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Leu
225 230 235 240
Gln Gln Gly Gly Thr His His His His His His
245 250
<210> 22
<211> 251
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化SF1-scFv-H1L2
<400> 22
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Tyr
20 25 30
Ala Val His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Ile Ile Trp Gly Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Ser Ala Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Lys His Glu Lys Leu Gly Arg Phe Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
115 120 125
Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser
130 135 140
Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser
145 150 155 160
Val Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys
165 170 175
Pro Leu Ile Tyr Glu Ile Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg
180 185 190
Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser
195 200 205
Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Asn Tyr
210 215 220
Pro Leu Ala Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Leu
225 230 235 240
Gln Gln Gly Gly Thr His His His His His His
245 250
<210> 23
<211> 251
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化SF1-scFv-H2L1
<400> 23
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Tyr
20 25 30
Ala Val His Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Ile Ile Trp Gly Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Ser Ala Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Lys His Glu Lys Leu Gly Arg Phe Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
115 120 125
Gly Gly Gly Ser Glu Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser
130 135 140
Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser
145 150 155 160
Val Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys
165 170 175
Pro Leu Ile Tyr Glu Ile Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg
180 185 190
Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser
195 200 205
Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Asn Tyr
210 215 220
Pro Leu Ala Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Leu
225 230 235 240
Gln Gln Gly Gly Thr His His His His His His
245 250
<210> 24
<211> 251
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化SF1-scFv-H3L3
<400> 24
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Tyr
20 25 30
Ala Val His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Ile Ile Trp Gly Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Ser Ala Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Ser Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Thr Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Lys His Glu Lys Leu Gly Arg Phe Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
115 120 125
Gly Gly Gly Ser Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser
130 135 140
Val Thr Pro Lys Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser
145 150 155 160
Val Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys
165 170 175
Pro Leu Ile Tyr Glu Ile Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg
180 185 190
Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Asn Ser
195 200 205
Leu Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Asn Tyr
210 215 220
Pro Leu Ala Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Leu
225 230 235 240
Gln Gln Gly Gly Thr His His His His His His
245 250
<210> 25
<211> 447
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 全长人源化SF1重链
<400> 25
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Tyr
20 25 30
Ala Val His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Ile Ile Trp Gly Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Ser Ala Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Lys His Glu Lys Leu Gly Arg Phe Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180 185 190
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
210 215 220
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 26
<211> 213
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 全长人源化SF1轻链
<400> 26
Glu Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Pro Leu Ile Tyr
35 40 45
Glu Ile Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu
65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Asn Tyr Pro Leu Ala Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro
100 105 110
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr
115 120 125
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys
130 135 140
Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
145 150 155 160
Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser
165 170 175
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala
180 185 190
Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe
195 200 205
Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 27
<211> 447
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 全长人源化SF1重链IgG1-LALA
<400> 27
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Tyr
20 25 30
Ala Val His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Ile Ile Trp Gly Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Ser Ala Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Lys His Glu Lys Leu Gly Arg Phe Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180 185 190
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
210 215 220
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 28
<211> 444
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 全长人源化SF1重链IgG4-SPLE
<400> 28
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Tyr
20 25 30
Ala Val His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Ile Ile Trp Gly Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Ser Ala Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Lys His Glu Lys Leu Gly Arg Phe Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180 185 190
Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro
210 215 220
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
225 230 235 240
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
245 250 255
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe
260 265 270
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
275 280 285
Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
290 295 300
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
305 310 315 320
Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
325 330 335
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln
340 345 350
Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
355 360 365
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
370 375 380
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
385 390 395 400
Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu
405 410 415
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
420 425 430
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
435 440
<210> 29
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> G4S接头
<400> 29
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15

Claims (64)

1.一种抗体或其片段，其特异性地结合于6-磺基唾液酸路易斯X糖链，该结合要求构成6-磺基唾液酸路易斯X糖链的岩藻糖、硫酸基和唾液酸，其中，
所述抗体或其片段包含选自下述中的至少一个以上的CDR：
(a)由SEQ ID NO.1所述的氨基酸序列构成的CDRH1；
(b)由SEQ ID NO.2所述的氨基酸序列构成的CDRH2；
(c)由SEQ ID NO.3所述的氨基酸序列构成的CDRH3；
(d)由SEQ ID NO.4所述的氨基酸序列构成的CDRL1；
(e)由SEQ ID NO.5所述的氨基酸序列构成的CDRL2；
(f)由SEQ ID NO.6所述的氨基酸序列构成的CDRL3，或者，
所述抗体或其片段包含至少一个以上的由在各CDR的氨基酸序列中具有1个或数个氨基酸的缺失、替换或添加的氨基酸序列构成的CDR，或者，
所述抗体或其片段包含至少一个以上的由与各CDR的氨基酸序列具有80％以上的同一性的氨基酸序列构成的CDR。
2.根据权利要求1所述的抗体或其片段，其中，
所述抗体或其片段含有包含下述CDR的重链可变区：
(a)由SEQ ID NO.1所述的氨基酸序列构成的CDRH1；
(b)由SEQ ID NO.2所述的氨基酸序列构成的CDRH2；和
(c)由SEQ ID NO.3所述的氨基酸序列构成的CDRH3，或者，
所述抗体或其片段含有包含由在各CDR的氨基酸序列中具有1个或数个氨基酸的缺失、替换或添加的氨基酸序列构成的CDRH1、CDRH2和CD RH3的重链可变区，或者，
所述抗体或其片段含有包含由与各CDR的氨基酸序列具有80％以上的同一性的氨基酸序列构成的CDRH1、CDRH2和CDRH3的重链可变区。
3.根据权利要求2所述的抗体或其片段，其中，
重链可变区包含SEQ ID NO.13、15～17中任一项所述的氨基酸序列的至少90个连续的氨基酸。
4.根据权利要求2或3所述的抗体或其片段，其中，
重链可变区包含：SEQ ID NO.13、15～17中任一项所述的氨基酸序列、在SEQ IDNO.13、15～17中任一项所述的氨基酸序列中具有1个或数个氨基酸的缺失、替换或添加的氨基酸序列、或与SEQ ID NO.13、15～17中任一项所述的氨基酸序列具有80％以上的同一性的氨基酸序列。
5.根据权利要求2～4中任一项所述的抗体或其片段，其中，
重链包含：SEQ ID NO.25、27或28所述的氨基酸序列、在SEQ ID NO.25、27或28所述的氨基酸序列中具有1个或数个氨基酸的缺失、替换或添加的氨基酸序列、或与SEQ IDNO.25、27或28所述的氨基酸序列具有80％以上的同一性的氨基酸序列。
6.根据权利要求1～5中任一项所述的抗体或其片段，其中，
所述抗体或其片段含有包含下述CDR的轻链可变区：
(d)由SEQ ID NO.4所述的氨基酸序列构成的CDRL1；
(e)由SEQ ID NO.5所述的氨基酸序列构成的CDRL2；和
(f)由SEQ ID NO.6所述的氨基酸序列构成的CDRL3，或者，
所述抗体或其片段含有包含由在各CDR的氨基酸序列中具有1个或数个氨基酸的缺失、替换或添加的氨基酸序列构成的CDRL1、CDRL2和CDR L3的轻链可变区，或者，
所述抗体或其片段含有包含由与各CDR的氨基酸序列具有80％以上的同一性的氨基酸序列构成的CDRL1、CDRL2和CDRL3的轻链可变区。
7.根据权利要求6所述的抗体或其片段，其中，
轻链可变区包含：SEQ ID NO.14、18～20中任一项所述的氨基酸序列的至少80个连续的氨基酸。
8.根据权利要求6或7所述的抗体或其片段，其中，
轻链可变区包含：SEQ ID NO.14、18～20中任一项所述的氨基酸序列、在SEQ IDNO.14、18～20中任一项所述的氨基酸序列中具有1个或数个氨基酸的缺失、替换或添加的氨基酸序列、或与SEQ ID NO.14、18～20中任一项所述的氨基酸序列具有80％以上的同一性的氨基酸序列。
9.根据权利要求6～8中任一项所述的抗体或其片段，其中，
轻链包含：SEQ ID NO.26所述的氨基酸序列、在SEQ ID NO.26所述的氨基酸序列中具有1个或数个氨基酸的缺失、替换或添加的氨基酸序列、或与SEQ ID NO.26所述的氨基酸序列具有80％以上的同一性的氨基酸序列。
10.根据权利要求1～9中任一项所述的抗体或其片段，其中，
所述抗体或其片段含有包含下述CDR的可变区：
(a)由SEQ ID NO.1所述的氨基酸序列构成的CDRH1；
(b)由SEQ ID NO.2所述的氨基酸序列构成的CDRH2；
(c)由SEQ ID NO.3所述的氨基酸序列构成的CDRH3；
(d)由SEQ ID NO.4所述的氨基酸序列构成的CDRL1；
(e)由SEQ ID NO.5所述的氨基酸序列构成的CDRL2；和
(f)由SEQ ID NO.6所述的氨基酸序列构成的CDRL3，或者，
所述抗体或其片段含有包含由在各CDR的氨基酸序列中具有1个或数个氨基酸的缺失、替换或添加的氨基酸序列构成的CDRH1、CDRH2和CD RH3以及CDRL1、CDRL2和CDRL3的可变区，或者，
所述抗体或其片段含有包含由与各CDR的氨基酸序列具有80％以上的同一性的氨基酸序列构成的CDRH1、CDRH2和CDRH3以及CDRL1、CD RL2和CDRL3的可变区。
11.根据权利要求1～10中任一项所述的抗体或其片段，其阻碍表达6-磺基唾液酸路易斯X糖链的高内皮微静脉与L-选择素的结合。
12.根据权利要求1～11中任一项所述的抗体或其片段，其恒定区源自人。
13.根据权利要求1～12中任一项所述的抗体或其片段，其进行了人源化。
14.根据权利要求1～13中任一项所述的抗体或其片段，其选自Fab、F(ab’)2、Fab’、Fv和单链抗体。
15.根据权利要求14所述的抗体或其片段，其中，
单链抗体包含：SEQ ID NO.21～24中任一项所述的氨基酸序列中的第1～117个和第133～238个的氨基酸序列、在SEQ ID NO.21～24中任一项所述的氨基酸序列中的第1～117个和第133～238个的氨基酸序列中具有1个或数个氨基酸的缺失、替换或添加的氨基酸序列、或与SEQ ID NO.21～24中任一项所述的氨基酸序列中的第1～117个和第133～238个的氨基酸序列具有80％以上的同一性的氨基酸序列。
16.根据权利要求1～15中任一项所述的抗体或其片段，其中，
抗体或其片段对于6-磺基唾液酸路易斯X糖链表现出1×10-6M以下的解离常数(KD值)。
17.一种多核苷酸，其编码权利要求1～16中任一项所述的抗体或其片段。
18.一种表达载体，其包含：
权利要求17所述的多核苷酸。
19.一种宿主细胞，其通过权利要求18所述的表达载体进行了转染。
20.根据权利要求19所述的宿主细胞，其为真核细胞。
21.一种杂交瘤，其产生权利要求1～16中任一项所述的抗体。
22.一种淋巴细胞归巢抑制剂，其包含：
权利要求1～16中任一项所述的抗体或其片段、权利要求17所述的多核苷酸、或权利要求18所述的表达载体。
23.一种药物组合物，其包含：
权利要求1～16中任一项所述的抗体或其片段、权利要求17所述的多核苷酸、或权利要求18所述的表达载体。
24.根据权利要求23所述的药物组合物，其用于治疗或预防因淋巴细胞归巢而引起的免疫响应过度作用而产生的疾病。
25.根据权利要求24所述的药物组合物，其中，
因淋巴细胞归巢而引起的免疫响应过度作用而产生的疾病为免疫相关疾病。
26.根据权利要求25所述的药物组合物，其中，
免疫相关疾病为过敏性疾病或自身免疫疾病。
27.根据权利要求26所述的药物组合物，其中，
免疫相关疾病为选自过敏性鼻炎、特应性皮炎、食物过敏、口腔过敏综合征、药剂过敏、花粉症、过敏性结膜炎、嗜酸性粒细胞性肺炎、过敏性胃肠炎、荨麻疹、光线过敏症、金属过敏、猫过敏、螨虫过敏和哮喘中的过敏性疾病。
28.根据权利要求26所述的药物组合物，其中，
免疫相关疾病为选自复发缓解型多发性硬化症、一次进展型多发性硬化症和二次进展型多发性硬化症的多发性硬化症；银屑病；类风湿关节炎；银屑病性关节炎；系统性红斑狼疮(SLE)；溃疡性大肠炎；克罗恩病；良性淋巴细胞性血管炎；血小板减少性紫癜；突发性血小板减少症；特发性自身免疫性溶血性贫血；红细胞再生障碍；舍格伦综合征；风湿性疾病；结缔组织疾病；炎症性风湿病；变形性风湿病；非关节性风湿病；青少年类风湿关节炎；肌肉风湿病；慢性多发性关节炎；冷球蛋白血管炎；ANCA相关血管炎；抗磷脂综合征；重症肌无力；自身免疫性溶血性贫血；吉兰-巴雷综合征；慢性免疫性多发神经病；自身免疫性甲状腺炎；胰岛素依赖性糖尿病；1型糖尿病；艾迪森病；膜性肾小球肾病；抗肾小球基底膜肾病；自身免疫性胃炎；自身免疫性萎缩性胃炎；恶性贫血；天疱疮；寻常性天疱疮；肝硬化；原发性胆汁性肝硬化；皮肌炎；多发性肌炎；纤维肌炎；肌硬症；乳糜泻；免疫球蛋白A肾病；Henoch-Schonlein紫癜；埃文斯综合征；银屑病；关节症性银屑病；格雷夫斯病；格雷夫斯眼病；硬皮症；系统性硬皮症；进行性系统性硬皮症；原发性胆汁性肝硬化；桥本甲状腺炎；原发性粘液水肿；交感性眼炎；自身免疫性葡萄膜炎；肝炎；慢性活动性肝炎；胶原病；强直性脊椎炎；肩关节周围炎；结节性多动脉炎；软骨钙化症；韦格纳氏肉芽肿症；显微镜下多血管炎；慢性荨麻疹；水疱性皮肤病；类天疱疮；德维克病；小儿自身免疫性溶血性贫血；难治性或慢性自身免疫性血细胞减少症；后天性血友病A；冷凝集素病；视神经脊髓炎；全身僵硬综合征；胰腺炎；心肌炎；血管炎；胃炎；痛风；痛风性关节炎；银屑病；正补体血症性荨麻疹样血管炎；心膜炎；肌炎；抗合成酶综合征；巩膜炎；巨噬细胞活化综合征；贝赫切特综合征；PAPA综合征；Blau综合征；成人和青少年斯蒂尔病；Cryopy rin相关周期性综合征；Muckle-Wells综合征；家族性冷因性自身炎症性综合征；新生儿期发病多脏器性炎症性疾病；家族性地中海热；慢性婴儿期发病神经皮肤关节综合征；全身型青少年特发性关节炎；高IgD综合征；施尼茨勒综合征；自身免疫性视网膜症；动脉粥样硬化；慢性前立腺炎；和TNF受体相关周期性综合征(TRAPS)中的自身免疫疾病。
29.根据权利要求28所述的药物组合物，其中，
自身免疫疾病为多发性硬化症或胶原病。
30.根据权利要求28或29所述的药物组合物，其中，
胶原病为选自类风湿关节炎、系统性红斑狼疮、硬皮症、皮肌炎、结节性多发动脉炎、混合性结缔组织病、舍格伦综合征、显微镜下多血管炎、嗜酸性肉芽肿性多血管炎、过敏性血管炎、贝赫切特病、科干综合征、RS3PE、巨细胞性动脉炎、成人斯蒂尔病、风湿性多发肌痛症、纤维肌痛症和SAPH O综合征中的一种或多种疾病。
31.根据权利要求24～30中任一项所述的药物组合物，其进一步包含：用于治疗或预防因淋巴细胞归巢而引起的免疫响应过度作用而产生的疾病的药剂。
32.一种方法，其为制造权利要求1～16中任一项所述的抗体或其片段的方法，其中，所述方法包含：
培养权利要求19或20所述的宿主细胞或权利要求21所述的杂交瘤的工序。
33.一种用于治疗或预防因淋巴细胞归巢而引起的免疫响应过度作用而产生的疾病的药物组合物，其包含：
抗体或其片段、编码该抗体或其片段的多核苷酸、或包含该多核苷酸的表达载体，所述抗体或其片段特异性地结合于6-磺基唾液酸路易斯X糖链，该结合要求构成6-磺基唾液酸路易斯X糖链的岩藻糖、硫酸基和唾液酸。
34.根据权利要求33所述的药物组合物，其中，
因淋巴细胞归巢而引起的免疫响应过度作用而产生的疾病为免疫相关疾病。
35.根据权利要求34所述的药物组合物，其中，
免疫相关疾病为过敏性疾病或自身免疫疾病。
36.根据权利要求35所述的药物组合物，其中，
免疫相关疾病为选自过敏性鼻炎、特应性皮炎、食物过敏、口腔过敏综合征、药剂过敏、花粉症、过敏性结膜炎、嗜酸性粒细胞性肺炎、过敏性胃肠炎、荨麻疹、光线过敏症、金属过敏、猫过敏、螨虫过敏和哮喘中的过敏性疾病。
37.根据权利要求35所述的药物组合物，其中，
免疫相关疾病为选自复发缓解型多发性硬化症、一次进展型多发性硬化症和二次进展型多发性硬化症的多发性硬化症；银屑病；类风湿关节炎；银屑病性关节炎；系统性红斑狼疮(SLE)；溃疡性大肠炎；克罗恩病；良性淋巴细胞性血管炎；血小板减少性紫癜；突发性血小板减少症；特发性自身免疫性溶血性贫血；红细胞再生障碍；舍格伦综合征；风湿性疾病；结缔组织疾病；炎症性风湿病；变形性风湿病；非关节性风湿病；青少年类风湿关节炎；肌肉风湿病；慢性多发性关节炎；冷球蛋白血管炎；ANCA相关血管炎；抗磷脂综合征；重症肌无力；自身免疫性溶血性贫血；吉兰-巴雷综合征；慢性免疫性多发神经病；自身免疫性甲状腺炎；胰岛素依赖性糖尿病；1型糖尿病；艾迪森病；膜性肾小球肾病；抗肾小球基底膜肾病；自身免疫性胃炎；自身免疫性萎缩性胃炎；恶性贫血；天疱疮；寻常性天疱疮；肝硬化；原发性胆汁性肝硬化；皮肌炎；多发性肌炎；纤维肌炎；肌硬症；乳糜泻；免疫球蛋白A肾病；Henoch-Schonlein紫癜；埃文斯综合征；银屑病；关节症性银屑病；格雷夫斯病；格雷夫斯眼病；硬皮症；系统性硬皮症；进行性系统性硬皮症；原发性胆汁性肝硬化；桥本甲状腺炎；原发性粘液水肿；交感性眼炎；自身免疫性葡萄膜炎；肝炎；慢性活动性肝炎；胶原病；强直性脊椎炎；肩关节周围炎；结节性多动脉炎；软骨钙化症；韦格纳氏肉芽肿症；显微镜下多血管炎；慢性荨麻疹；水疱性皮肤病；类天疱疮；德维克病；小儿自身免疫性溶血性贫血；难治性或慢性自身免疫性血细胞减少症；后天性血友病A；冷凝集素病；视神经脊髓炎；全身僵硬综合征；胰腺炎；心肌炎；血管炎；胃炎；痛风；痛风性关节炎；银屑病；正补体血症性荨麻疹样血管炎；心膜炎；肌炎；抗合成酶综合征；巩膜炎；巨噬细胞活化综合征；贝赫切特综合征；PAPA综合征；Blau综合征；成人和青少年斯蒂尔病；Cryopy rin相关周期性综合征；Muckle-Wells综合征；家族性冷因性自身炎症性综合征；新生儿期发病多脏器性炎症性疾病；家族性地中海热；慢性婴儿期发病神经皮肤关节综合征；全身型青少年特发性关节炎；高IgD综合征；施尼茨勒综合征；自身免疫性视网膜症；动脉粥样硬化；慢性前立腺炎；和TNF受体相关周期性综合征(TRAPS)中的任一种自身免疫疾病。
38.根据权利要求37所述的药物组合物，其中，
自身免疫疾病为多发性硬化症或胶原病。
39.根据权利要求38所述的药物组合物，其中，
胶原病为选自类风湿关节炎、系统性红斑狼疮、硬皮症、皮肌炎、结节性多发动脉炎、混合性结缔组织病、舍格伦综合征、显微镜下多血管炎、嗜酸性肉芽肿性多血管炎、过敏性血管炎、贝赫切特病、科干综合征、RS3PE、巨细胞性动脉炎、成人斯蒂尔病、风湿性多发肌痛症、纤维肌痛症和SAPH O综合征中的一种或多种疾病。
40.根据权利要求33～39中任一项所述的药物组合物，其中，
抗体或其片段阻碍表达6-磺基唾液酸路易斯X糖链的高内皮微静脉与L-选择素的结合。
41.根据权利要求33～40中任一项所述的药物组合物，其中，
抗体或其片段为权利要求1～16中任一项所述的抗体或其片段。
42.一种用于治疗或预防对象中的因淋巴细胞归巢而引起的免疫响应过度作用而产生的疾病的方法，其包含：
将有效量的抗体或其片段、编码该抗体或其片段的多核苷酸、或包含该多核苷酸的表达载体施用于该对象的步骤，所述抗体或其片段特异性地结合于6-磺基唾液酸路易斯X糖链，该结合要求构成6-磺基唾液酸路易斯X糖链的岩藻糖、硫酸基和唾液酸。
43.根据权利要求42所述的方法，其中，
因淋巴细胞归巢而引起的免疫响应过度作用而产生的疾病为免疫相关疾病。
44.根据权利要求43所述的方法，其中，
免疫相关疾病为过敏性疾病或自身免疫疾病。
45.根据权利要求44所述的方法，其中，
免疫相关疾病为选自过敏性鼻炎、特应性皮炎、食物过敏、口腔过敏综合征、药剂过敏、花粉症、过敏性结膜炎、嗜酸性粒细胞性肺炎、过敏性胃肠炎、荨麻疹、光线过敏症、金属过敏、猫过敏、螨虫过敏和哮喘中的过敏性疾病。
46.根据权利要求44所述的方法，其中，
免疫相关疾病为选自复发缓解型多发性硬化症、一次进展型多发性硬化症和二次进展型多发性硬化症的多发性硬化症；银屑病；类风湿关节炎；银屑病性关节炎；系统性红斑狼疮(SLE)；溃疡性大肠炎；克罗恩病；良性淋巴细胞性血管炎；血小板减少性紫癜；突发性血小板减少症；特发性自身免疫性溶血性贫血；红细胞再生障碍；舍格伦综合征；风湿性疾病；结缔组织疾病；炎症性风湿病；变形性风湿病；非关节性风湿病；青少年类风湿关节炎；肌肉风湿病；慢性多发性关节炎；冷球蛋白血管炎；ANCA相关血管炎；抗磷脂综合征；重症肌无力；自身免疫性溶血性贫血；吉兰-巴雷综合征；慢性免疫性多发神经病；自身免疫性甲状腺炎；胰岛素依赖性糖尿病；1型糖尿病；艾迪森病；膜性肾小球肾病；抗肾小球基底膜肾病；自身免疫性胃炎；自身免疫性萎缩性胃炎；恶性贫血；天疱疮；寻常性天疱疮；肝硬化；原发性胆汁性肝硬化；皮肌炎；多发性肌炎；纤维肌炎；肌硬症；乳糜泻；免疫球蛋白A肾病；Henoch-Schonlein紫癜；埃文斯综合征；银屑病；关节症性银屑病；格雷夫斯病；格雷夫斯眼病；硬皮症；系统性硬皮症；进行性系统性硬皮症；原发性胆汁性肝硬化；桥本甲状腺炎；原发性粘液水肿；交感性眼炎；自身免疫性葡萄膜炎；肝炎；慢性活动性肝炎；胶原病；强直性脊椎炎；肩关节周围炎；结节性多动脉炎；软骨钙化症；韦格纳氏肉芽肿症；显微镜下多血管炎；慢性荨麻疹；水疱性皮肤病；类天疱疮；德维克病；小儿自身免疫性溶血性贫血；难治性或慢性自身免疫性血细胞减少症；后天性血友病A；冷凝集素病；视神经脊髓炎；全身僵硬综合征；胰腺炎；心肌炎；血管炎；胃炎；痛风；痛风性关节炎；银屑病；正补体血症性荨麻疹样血管炎；心膜炎；肌炎；抗合成酶综合征；巩膜炎；巨噬细胞活化综合征；贝赫切特综合征；PAPA综合征；Blau综合征；成人和青少年斯蒂尔病；Cryopy rin相关周期性综合征；Muckle-Wells综合征；家族性冷因性自身炎症性综合征；新生儿期发病多脏器性炎症性疾病；家族性地中海热；慢性婴儿期发病神经皮肤关节综合征；全身型青少年特发性关节炎；高IgD综合征；施尼茨勒综合征；自身免疫性视网膜症；动脉粥样硬化；慢性前立腺炎；和TNF受体相关周期性综合征(TRAPS)中的任一种自身免疫疾病。
47.根据权利要求46所述的方法，其中，
自身免疫疾病为多发性硬化症或胶原病。
48.根据权利要求46或47所述的方法，其中，
胶原病为选自类风湿关节炎、系统性红斑狼疮、硬皮症、皮肌炎、结节性多发动脉炎、混合性结缔组织病、舍格伦综合征、显微镜下多血管炎、嗜酸性肉芽肿性多血管炎、过敏性血管炎、贝赫切特病、科干综合征、RS3PE、巨细胞性动脉炎、成人斯蒂尔病、风湿性多发肌痛症、纤维肌痛症和SAPH O综合征中的一种或多种疾病。
49.根据权利要求42～48中任一项所述的方法，其中，
抗体或其片段为权利要求1～16中任一项所述的抗体或其片段。
50.根据权利要求42～49中任一项所述的方法，其进一步包含：
施用用于治疗或预防因淋巴细胞归巢而引起的免疫响应过度作用而产生的疾病的药剂的步骤。
51.根据权利要求1～16中任一项所述的抗体或其片段，其用于治疗或预防因淋巴细胞归巢而引起的免疫响应过度作用而产生的疾病。
52.根据权利要求51所述的抗体或其片段，其中，
因淋巴细胞归巢而引起的免疫响应过度作用而产生的疾病为免疫相关疾病。
53.根据权利要求52所述的抗体或其片段，其中，
免疫相关疾病为过敏性疾病或自身免疫疾病。
54.根据权利要求53所述的抗体或其片段，其中，
免疫相关疾病为选自过敏性鼻炎、特应性皮炎、食物过敏、口腔过敏综合征、药剂过敏、花粉症、过敏性结膜炎、嗜酸性粒细胞性肺炎、过敏性胃肠炎、荨麻疹、光线过敏症、金属过敏、猫过敏、螨虫过敏和哮喘中的过敏性疾病。
55.根据权利要求53所述的抗体或其片段，其中，
免疫相关疾病为选自复发缓解型多发性硬化症、一次进展型多发性硬化症和二次进展型多发性硬化症的多发性硬化症；银屑病；类风湿关节炎；银屑病性关节炎；系统性红斑狼疮(SLE)；溃疡性大肠炎；克罗恩病；良性淋巴细胞性血管炎；血小板减少性紫癜；突发性血小板减少症；特发性自身免疫性溶血性贫血；红细胞再生障碍；舍格伦综合征；风湿性疾病；结缔组织疾病；炎症性风湿病；变形性风湿病；非关节性风湿病；青少年类风湿关节炎；肌肉风湿病；慢性多发性关节炎；冷球蛋白血管炎；ANCA相关血管炎；抗磷脂综合征；重症肌无力；自身免疫性溶血性贫血；吉兰-巴雷综合征；慢性免疫性多发神经病；自身免疫性甲状腺炎；胰岛素依赖性糖尿病；1型糖尿病；艾迪森病；膜性肾小球肾病；抗肾小球基底膜肾病；自身免疫性胃炎；自身免疫性萎缩性胃炎；恶性贫血；天疱疮；寻常性天疱疮；肝硬化；原发性胆汁性肝硬化；皮肌炎；多发性肌炎；纤维肌炎；肌硬症；乳糜泻；免疫球蛋白A肾病；Henoch-Schonlein紫癜；埃文斯综合征；银屑病；关节症性银屑病；格雷夫斯病；格雷夫斯眼病；硬皮症；系统性硬皮症；进行性系统性硬皮症；原发性胆汁性肝硬化；桥本甲状腺炎；原发性粘液水肿；交感性眼炎；自身免疫性葡萄膜炎；肝炎；慢性活动性肝炎；胶原病；强直性脊椎炎；肩关节周围炎；结节性多动脉炎；软骨钙化症；韦格纳氏肉芽肿症；显微镜下多血管炎；慢性荨麻疹；水疱性皮肤病；类天疱疮；德维克病；小儿自身免疫性溶血性贫血；难治性或慢性自身免疫性血细胞减少症；后天性血友病A；冷凝集素病；视神经脊髓炎；全身僵硬综合征；胰腺炎；心肌炎；血管炎；胃炎；痛风；痛风性关节炎；银屑病；正补体血症性荨麻疹样血管炎；心膜炎；肌炎；抗合成酶综合征；巩膜炎；巨噬细胞活化综合征；贝赫切特综合征；PAPA综合征；Blau综合征；成人和青少年斯蒂尔病；Cryopy rin相关周期性综合征；Muckle-Wells综合征；家族性冷因性自身炎症性综合征；新生儿期发病多脏器性炎症性疾病；家族性地中海热；慢性婴儿期发病神经皮肤关节综合征；全身型青少年特发性关节炎；高IgD综合征；施尼茨勒综合征；自身免疫性视网膜症；动脉粥样硬化；慢性前立腺炎；和TNF受体相关周期性综合征(TRAPS)中的自身免疫疾病。
56.根据权利要求55所述的抗体或其片段，其中，
自身免疫疾病为多发性硬化症或胶原病。
57.根据权利要求55或56所述的抗体或其片段，其中，
胶原病为选自类风湿关节炎、系统性红斑狼疮、硬皮症、皮肌炎、结节性多发动脉炎、混合性结缔组织病、舍格伦综合征、显微镜下多血管炎、嗜酸性肉芽肿性多血管炎、过敏性血管炎、贝赫切特病、科干综合征、RS3PE、巨细胞性动脉炎、成人斯蒂尔病、风湿性多发肌痛症、纤维肌痛症和SAPH O综合征中的一种或多种疾病。
58.一种权利要求1～16中任一项所述的抗体或其片段的用途，其为在制造用于治疗或预防因淋巴细胞归巢而引起的免疫响应过度作用而产生的疾病的药物中的用途。
59.根据权利要求58所述的用途，其中，
因淋巴细胞归巢而引起的免疫响应过度作用而产生的疾病为免疫相关疾病。
60.根据权利要求59所述的用途，其中，
免疫相关疾病为过敏性疾病或自身免疫疾病。
61.根据权利要求60所述的用途，其中，
免疫相关疾病为选自过敏性鼻炎、特应性皮炎、食物过敏、口腔过敏综合征、药剂过敏、花粉症、过敏性结膜炎、嗜酸性粒细胞性肺炎、过敏性胃肠炎、荨麻疹、光线过敏症、金属过敏、猫过敏、螨虫过敏和哮喘中的过敏性疾病。
62.根据权利要求60所述的用途，其中，
免疫相关疾病为选自复发缓解型多发性硬化症、一次进展型多发性硬化症和二次进展型多发性硬化症的多发性硬化症；银屑病；类风湿关节炎；银屑病性关节炎；系统性红斑狼疮(SLE)；溃疡性大肠炎；克罗恩病；良性淋巴细胞性血管炎；血小板减少性紫癜；突发性血小板减少症；特发性自身免疫性溶血性贫血；红细胞再生障碍；舍格伦综合征；风湿性疾病；结缔组织疾病；炎症性风湿病；变形性风湿病；非关节性风湿病；青少年类风湿关节炎；肌肉风湿病；慢性多发性关节炎；冷球蛋白血管炎；ANCA相关血管炎；抗磷脂综合征；重症肌无力；自身免疫性溶血性贫血；吉兰-巴雷综合征；慢性免疫性多发神经病；自身免疫性甲状腺炎；胰岛素依赖性糖尿病；1型糖尿病；艾迪森病；膜性肾小球肾病；抗肾小球基底膜肾病；自身免疫性胃炎；自身免疫性萎缩性胃炎；恶性贫血；天疱疮；寻常性天疱疮；肝硬化；原发性胆汁性肝硬化；皮肌炎；多发性肌炎；纤维肌炎；肌硬症；乳糜泻；免疫球蛋白A肾病；Henoch-Schonlein紫癜；埃文斯综合征；银屑病；关节症性银屑病；格雷夫斯病；格雷夫斯眼病；硬皮症；系统性硬皮症；进行性系统性硬皮症；原发性胆汁性肝硬化；桥本甲状腺炎；原发性粘液水肿；交感性眼炎；自身免疫性葡萄膜炎；肝炎；慢性活动性肝炎；胶原病；强直性脊椎炎；肩关节周围炎；结节性多动脉炎；软骨钙化症；韦格纳氏肉芽肿症；显微镜下多血管炎；慢性荨麻疹；水疱性皮肤病；类天疱疮；德维克病；小儿自身免疫性溶血性贫血；难治性或慢性自身免疫性血细胞减少症；后天性血友病A；冷凝集素病；视神经脊髓炎；全身僵硬综合征；胰腺炎；心肌炎；血管炎；胃炎；痛风；痛风性关节炎；银屑病；正补体血症性荨麻疹样血管炎；心膜炎；肌炎；抗合成酶综合征；巩膜炎；巨噬细胞活化综合征；贝赫切特综合征；PAPA综合征；Blau综合征；成人和青少年斯蒂尔病；Cryopy rin相关周期性综合征；Muckle-Wells综合征；家族性冷因性自身炎症性综合征；新生儿期发病多脏器性炎症性疾病；家族性地中海热；慢性婴儿期发病神经皮肤关节综合征；全身型青少年特发性关节炎；高IgD综合征；施尼茨勒综合征；自身免疫性视网膜症；动脉粥样硬化；慢性前立腺炎；和TNF受体相关周期性综合征(TRAPS)中的自身免疫疾病。
63.根据权利要求62所述的用途，其中，
自身免疫疾病为多发性硬化症或胶原病。
64.根据权利要求62或63所述的用途，其中，
胶原病为选自类风湿关节炎、系统性红斑狼疮、硬皮症、皮肌炎、结节性多发动脉炎、混合性结缔组织病、舍格伦综合征、显微镜下多血管炎、嗜酸性肉芽肿性多血管炎、过敏性血管炎、贝赫切特病、科干综合征、RS3PE、巨细胞性动脉炎、成人斯蒂尔病、风湿性多发肌痛症、纤维肌痛症和SAPH O综合征中的一种或多种疾病。
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