CN116559448A - 一种基于hpvc1蛋白检测hpv的试纸及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种基于HPVC1蛋白检测HPV的试纸及其制备方法，属于HPV检测技术领域，所述试纸由空白试纸经测试液浸泡5~10分钟后烘干得到；所述测试液包括磷钨酸钠试剂液、酸性缓冲溶液、屏蔽试剂液和HPVC1蛋白培养基；本发明的基于HPVC1蛋白检测HPV的试纸，通过试纸可以对HPV病毒的感染情况进行检测，个人可以通过个体的持续性检测，判断尿液中还原物的梯度变化。由于尿液中还原物梯度的变化与患者病情有高度的吻合性，为HPV病毒感染的自愈性、治疗必要性和治疗后的恢复情况提供科学准确的判断依据。
Description
技术领域
本发明涉及HPV检测技术领域，具体说是一种基于HPVC1蛋白检测HPV的试纸及其制备方法。
背景技术
HPV（人乳头瘤病毒）是一种球形DNA病毒，属于乳多空病毒科的乳头瘤空泡病毒A属，能引起人体皮肤黏膜的鳞状上皮增殖。HPV检测一般是通过染色镜检法、TCT检查或血清学试验来检查是否感染了HPV病毒，检测时间长，需要3-7天时间才能出结果。
HPV早期感染可以通过宫颈样的图片细胞形态学检查或HPV的DNA检测，但是该上述方法属于创伤性采样，易导致出血和恢复期感染，并且由于宫颈和宫颈管口形态的特殊性，刮片采样对病人容易造成伤害；并且采样和检测必须在医院或其他专业机构进行，检测不方便，私密性差，不适用于人群的大规模自检。
尿液HPV病毒感染细胞病变代谢物快速检测是目前国际上前沿性的方法，对200多种HPV病毒所造成的细胞病变的代谢还原物均产生了梯度性的染色反应，感染HPV病毒后不必过度恐慌，根据世界卫生组织的报告，适龄人群有80~90%的曾有过一次性HPV病毒感染，但是大多数人群免疫力较好，感染HPV病毒后可以自愈，但是一部分人群因免疫力造成持续性感染或反复感染，因此，通过简单有效的方法检测HPV病毒是十分必要的。
中国发明专利CN115290904A一种原位杂交HPV检测试纸条、试剂盒及其制备方法，将含HPV病毒的尿液滴定在检测试纸条上，通过C1蛋白弱酸钨酸钠染色而显色，从而可判断尿液中HPV病毒量的多少，进而推算人体是否感染HPV及携带量多少，打开了试纸可以检测HPV病毒感染的新思路；但是在推广应用过程中发现该检测试纸条在保存过程中稳定性差，在保存或使用过程中容易与空气中的碱性物质过度或者过早发生染色反应；在使用过程中尿液中宫颈脱落HPV表象C1蛋白与试剂条产生静电而出现特异性的差异化，造成检测结果有偏差。
发明内容
为解决传统检测方法检测时间长、检查不方便、私密性差，现有检测试纸条稳定性差、检测结果有偏差的问题，本发明的目的是提供一种基于HPVC1蛋白检测HPV的试纸及其制备方法。
本发明为实现上述目的，通过以下技术方案实现：
一种基于HPVC1蛋白检测HPV的试纸，所述试纸由空白试纸经测试液浸泡5~10分钟后烘干得到；以重量份计，所述测试液包括磷钨酸钠试剂液6~10份、酸性缓冲溶液3~5份、屏蔽试剂液1~3份和HPVC1蛋白培养基1份；
所述磷钨酸钠试剂液通过以下步骤制备得到：
称取4.5~5.5g钨酸钠，溶解于35~45ml去离子水中，向其中加入沸石和质量浓度85±0.5%浓磷酸3.5~4.5ml，加热至回流1.5~2.5小时，停止加热，冷却至20~30℃，然后用去离子水定容至100ml，即为磷钨酸钠试剂液，保存至棕色试剂瓶中，备用；
所述酸性缓冲溶液的pH为5.4~5.8；
所述屏蔽试剂液为碘酸钠或高碘酸钠水溶液，所述屏蔽试剂液的质量体积浓度为0.4~0.6g/L；
所述HPVC1蛋白培养基按照以下步骤制备得到：
将HPVC1蛋白加入到无血清培养基中，混合均匀，静置8-12小时，得到蛋白混合液，利用8~10KG剂量的β射线电离辐照蛋白混合液，得到HPVC1蛋白培养基。
优选的，所述酸性缓冲溶液为pH=5.4的醋酸钠-醋酸缓冲溶液或pH=5.7~5.8的磷酸盐缓冲溶液。
优选的，所述HPVC1蛋白和无血清培养基的添加比例为1~5个HPVC1蛋白：30ml无血清培养基。
优选的，以重量份计，所述测试液还包括无水乙醇0.7~0.8份和蔗糖0.4~0.5份，在测试液中加入无水乙醇和蔗糖，可以提高试纸的晕染均匀性和亲水性。
本发明还包括一种基于HPVC1蛋白检测HPV的试纸的制备方法，包括以下步骤：
①以重量份计，将磷钨酸钠试剂液6~10份、酸性缓冲溶液3~5份、屏蔽试剂液1~3份和HPVC1蛋白培养基1份混合均匀，利用1~3KG剂量的β射线电离辐照，得到测试液；
所述磷钨酸钠试剂液通过以下步骤制备得到：
称取4.5~5.5g钨酸钠，溶解于35~45ml去离子水中，向其中加入沸石和质量浓度85±0.5%浓磷酸3.5~4.5ml，加热至回流1.5~2.5小时，停止加热，冷却至20~30℃，然后用去离子水定容至100ml，即为磷钨酸钠试剂液，保存至棕色试剂瓶中，备用；
所述酸性缓冲溶液的pH为5.4~5.8；
所述屏蔽试剂液为碘酸钠或高碘酸钠水溶液，所述屏蔽试剂液的质量体积浓度为0.4~0.6g/L；
所述HPVC1蛋白培养基按照以下步骤制备得到：
将HPVC1蛋白加入到无血清培养基中，混合均匀，得到蛋白混合液，利用8~10KG剂量的β射线电离辐照蛋白混合液，得到HPVC1蛋白培养基；
②将空白试纸浸泡到步骤①所得测试液中5~10分钟，真空干燥1.5~2.5小时，得到基于HPVC1蛋白检测HPV的试纸。
优选的，一种基于HPVC1蛋白检测HPV的试纸的制备方法，包括以下步骤：
①以重量份计，将磷钨酸钠试剂液6~10份、酸性缓冲溶液3~5份、屏蔽试剂液1~3份和HPVC1蛋白培养基1份混合均匀，利用1~3KG剂量的β射线电离辐照，向其中加入无水乙醇0.7~0.8份和蔗糖0.4~0.5份，得到测试液；
所述磷钨酸钠试剂液通过以下步骤制备得到：
称取4.5~5.5g钨酸钠，溶解于35~45ml去离子水中，向其中加入沸石和质量浓度85±0.5%浓磷酸3.5~4.5ml，加热至回流1.5~2.5小时，停止加热，冷却至20~30℃，然后用去离子水定容至100ml，即为磷钨酸钠试剂液，保存至棕色试剂瓶中，备用；
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所述屏蔽试剂液为碘酸钠或高碘酸钠水溶液，所述屏蔽试剂液的质量体积浓度为0.4~0.6g/L；
所述HPVC1蛋白培养基按照以下步骤制备得到：
将HPVC1蛋白加入到无血清培养基中，混合均匀，得到蛋白混合液，利用8~10KG剂量的β射线电离辐照蛋白混合液，得到HPVC1蛋白培养基；
②将空白试纸浸泡到步骤①所得测试液中5~10分钟，真空干燥1.5~2.5小时，得到基于HPVC1蛋白检测HPV的试纸。
优选的，步骤②中的真空干燥温度为50~60℃。
本发明相比现有技术具有以下优点：
本发明的基于HPVC1蛋白检测HPV的试纸，通过试纸可以对HPV病毒的感染情况进行检测，个人可以通过个体的持续性检测，判断尿液中还原物的梯度变化。由于尿液中还原物梯度的变化与患者病情有高度的吻合性，为HPV病毒感染的自愈性、治疗必要性和治疗后的恢复情况提供科学准确的判断依据。
本发明的基于HPVC1蛋白检测HPV的试纸，在检测时尿液中的HPVC1碱性蛋白脱落物与制备形成的测试液（杂交显色试剂）中磷钨酸钠反应形成络合物而显色，并且随着尿液中病毒载量的不同显色的程度不同，不仅能区分出HPV病毒的阳性或者阴性，而且能够判断HPV病毒载量的感染程度。如果尿液HPV检测呈阳性，检测试纸条染色显蓝色，颜色越深说明尿液中携带HPV病毒量越多，染色较浅说明尿液中携带HPV病毒量较少；如果尿液HPV检测呈阴性，检测试纸条不显颜色（无色），说明尿液中没有感染HPV病毒或病毒脱落物。
本发明的基于HPVC1蛋白检测HPV的试纸，在空气中的稳定性好，不会与空气中碱性物质发生染色反应，检测精度高；检测过程方便，私密性好，便于HPV病毒的早期检测，适用于人群的大规模自检。
附图说明
图1为和本发明基于HPVC1蛋白检测HPV的试纸配合使用比色卡示意图。
具体实施方式
本发明的目的是提供一种基于HPVC1蛋白检测HPV的试纸及其制备方法，通过以下技术方案实现：
HPVC1蛋白是指HPV病毒的外壳蛋白C1，也称HPV L1蛋白，是指HPV病毒的外壳。活动性感染的HPV病毒主要包括含有病毒的DNA和外壳蛋白C1，而潜伏的HPV病毒只有DNA没有外壳蛋白C1，所以检测HPV病毒主要表象为外壳蛋白C1的表达而来确定感染HPV与否。
本发明测试液中的HPVC1蛋白培养基经特定剂量的β射线辐照后形成单链的碳、氢基排列组合，经过辐照后能使蛋白碱性变性，结合蛋白酶消化，容易将碱性蛋白移除，避免测试液本身或者接受空气中的碱性物而过度或过早反应染色，提高试纸的稳定性；
在试纸制备过程中，利用1~3KG剂量的β射线电离辐照后所得的测试液，经过辐照后单链的碳、氢基经氢键结合作用形成α-3倍螺旋和β-2倍折叠的螺旋体，组织蛋白中的碱性基团通过辐照被阻断，杜绝了尿液中宫颈脱落HPV表象C1蛋白与试剂产生静电而出现特异性的差异化，提高检测精度。
以下结合具体实施例来对本发明作进一步的描述。
HPVC1蛋白的来源可以是采集HPV病毒感染者的尿液，通过层析过滤，磁珠捕获得到HPV病毒的蛋白脱落物。
实施例1
一种基于HPVC1蛋白检测HPV的试纸，所述试纸由空白试纸经测试液浸泡5分钟后烘干得到；所述测试液包括磷钨酸钠试剂液60g、酸性缓冲溶液30g、屏蔽试剂液10g和HPVC1蛋白培养基10g；
所述磷钨酸钠试剂液通过以下步骤制备得到：
称取4.5g钨酸钠，溶解于35ml去离子水中，向其中加入沸石和质量浓度85%浓磷酸3.5ml，加热至回流1.5小时，停止加热，冷却至20℃，然后用去离子水定容至100ml，即为磷钨酸钠试剂液，保存至棕色试剂瓶中，备用；
所述酸性缓冲溶液为pH=5.4的醋酸钠-醋酸缓冲溶液；
所述屏蔽试剂液为碘酸钠水溶液，所述屏蔽试剂液的质量体积浓度为0.4g/L；
所述HPVC1蛋白培养基按照以下步骤制备得到：
将单个HPVC1蛋白加入到30ml无血清培养基中，混合均匀，静置8小时，得到蛋白混合液，利用8KG剂量的β射线电离辐照蛋白混合液，得到HPVC1蛋白培养基。
上述基于HPVC1蛋白检测HPV的试纸的制备方法，包括以下步骤：
①将磷钨酸钠试剂液60g、酸性缓冲溶液30g、屏蔽试剂液10g和HPVC1蛋白培养基10g混合均匀，利用1KG剂量的β射线电离辐照，得到测试液；
②将空白试纸浸泡到步骤①所得测试液中5分钟，在50℃下真空干燥1.5小时，得到基于HPVC1蛋白检测HPV的试纸。
实施例2
一种基于HPVC1蛋白检测HPV的试纸，所述试纸由空白试纸经测试液浸泡10分钟后烘干得到；所述测试液包括磷钨酸钠试剂液100g、酸性缓冲溶液50g、屏蔽试剂液30g和HPVC1蛋白培养基10g；
所述磷钨酸钠试剂液通过以下步骤制备得到：
称取5.5g钨酸钠，溶解于45ml去离子水中，向其中加入沸石和质量浓度85%浓磷酸4.5ml，加热至回流2.5小时，停止加热，冷却至30℃，然后用去离子水定容至100ml，即为磷钨酸钠试剂液，保存至棕色试剂瓶中，备用；
所述酸性缓冲溶液为pH=5.8的磷酸盐缓冲溶液；
所述屏蔽试剂液为碘酸钠水溶液，所述屏蔽试剂液的质量体积浓度为0.6g/L；
所述HPVC1蛋白培养基按照以下步骤制备得到：
将5个HPVC1蛋白加入到30ml无血清培养基中，混合均匀，静置12小时，得到蛋白混合液，利用10KG剂量的β射线电离辐照蛋白混合液，得到HPVC1蛋白培养基。
上述基于HPVC1蛋白检测HPV的试纸的制备方法，包括以下步骤：
①将磷钨酸钠试剂液100g、酸性缓冲溶液50g、屏蔽试剂液30g和HPVC1蛋白培养基10g混合均匀，利用3KG剂量的β射线电离辐照，得到测试液；
②将空白试纸浸泡到步骤①所得测试液中10分钟，在60℃下真空干燥2.5小时，得到基于HPVC1蛋白检测HPV的试纸。
实施例3
一种基于HPVC1蛋白检测HPV的试纸，所述试纸由空白试纸经测试液浸泡6分钟后烘干得到；所述测试液包括磷钨酸钠试剂液80g、酸性缓冲溶液35g、屏蔽试剂液15g和HPVC1蛋白培养基10g；
所述磷钨酸钠试剂液通过以下步骤制备得到：
称取4.8g钨酸钠，溶解于40ml去离子水中，向其中加入沸石和质量浓度85.5%浓磷酸4ml，加热至回流2小时，停止加热，冷却至24℃，然后用去离子水定容至100ml，即为磷钨酸钠试剂液，保存至棕色试剂瓶中，备用；
所述酸性缓冲溶液为pH=5.7的磷酸盐缓冲溶液；
所述屏蔽试剂液为高碘酸钠水溶液，所述屏蔽试剂液的质量体积浓度为0.5g/L；
所述HPVC1蛋白培养基按照以下步骤制备得到：
将3个HPVC1蛋白加入到30ml无血清培养基中，混合均匀，静置9小时，得到蛋白混合液，利用9KG剂量的β射线电离辐照蛋白混合液，得到HPVC1蛋白培养基。
上述基于HPVC1蛋白检测HPV的试纸的制备方法，包括以下步骤：
①将磷钨酸钠试剂液80g、酸性缓冲溶液35g、屏蔽试剂液15g和HPVC1蛋白培养基10g混合均匀，利用2KG剂量的β射线电离辐照，得到测试液；
②将空白试纸浸泡到步骤①所得测试液中6分钟，在52℃下真空干燥2小时，得到基于HPVC1蛋白检测HPV的试纸。
实施例4
一种基于HPVC1蛋白检测HPV的试纸，所述试纸由空白试纸经测试液浸泡8分钟后烘干得到；所述测试液包括磷钨酸钠试剂液70g、酸性缓冲溶液45g、屏蔽试剂液25g和HPVC1蛋白培养基10g；
所述磷钨酸钠试剂液通过以下步骤制备得到：
称取5.2g钨酸钠，溶解于42ml去离子水中，向其中加入沸石和质量浓度84.5%浓磷酸4.2ml，加热至回流2小时，停止加热，冷却至26℃，然后用去离子水定容至100ml，即为磷钨酸钠试剂液，保存至棕色试剂瓶中，备用；
所述酸性缓冲溶液为pH=5.7的磷酸盐缓冲溶液；
所述屏蔽试剂液为高碘酸钠水溶液，所述屏蔽试剂液的质量体积浓度为0.45g/L；
所述HPVC1蛋白培养基按照以下步骤制备得到：
将2个HPVC1蛋白加入到30ml无血清培养基中，混合均匀，静置11小时，得到蛋白混合液，利用8.5KG剂量的β射线电离辐照蛋白混合液，得到HPVC1蛋白培养基。
上述基于HPVC1蛋白检测HPV的试纸的制备方法，包括以下步骤：
①将磷钨酸钠试剂液70g、酸性缓冲溶液45g、屏蔽试剂液25g和HPVC1蛋白培养基10g混合均匀，利用1.5KG剂量的β射线电离辐照，得到测试液；
②将空白试纸浸泡到步骤①所得测试液中8分钟，在58℃下真空干燥2小时，得到基于HPVC1蛋白检测HPV的试纸。
实施例5
一种基于HPVC1蛋白检测HPV的试纸，所述试纸由空白试纸经测试液浸泡7分钟后烘干得到；所述测试液包括磷钨酸钠试剂液80g、酸性缓冲溶液40g、屏蔽试剂液20g和HPVC1蛋白培养基10g；
所述磷钨酸钠试剂液通过以下步骤制备得到：
称取5.0g钨酸钠，溶解于40ml去离子水中，向其中加入沸石和质量浓度85%浓磷酸4.0ml，加热至回流2.0小时，停止加热，冷却至25℃，然后用去离子水定容至100ml，即为磷钨酸钠试剂液，保存至棕色试剂瓶中，备用；
所述酸性缓冲溶液为pH=5.4的醋酸钠-醋酸缓冲溶液；
所述屏蔽试剂液为高碘酸钠水溶液，所述屏蔽试剂液的质量体积浓度为0.5g/L；
所述HPVC1蛋白培养基按照以下步骤制备得到：
将3个HPVC1蛋白加入到30ml无血清培养基中，混合均匀，静置10小时，得到蛋白混合液，利用9KG剂量的β射线电离辐照蛋白混合液，得到HPVC1蛋白培养基。
上述基于HPVC1蛋白检测HPV的试纸的制备方法，包括以下步骤：
①将磷钨酸钠试剂液80g、酸性缓冲溶液40g、屏蔽试剂液20g和HPVC1蛋白培养基10g混合均匀，利用2.5KG剂量的β射线电离辐照，得到测试液；
②将空白试纸浸泡到步骤①所得测试液中7分钟，在55℃下真空干燥2小时，得到基于HPVC1蛋白检测HPV的试纸。
实施例6
一种基于HPVC1蛋白检测HPV的试纸，所述试纸由空白试纸经测试液浸泡5分钟后烘干得到；所述测试液包括磷钨酸钠试剂液60g、酸性缓冲溶液30g、屏蔽试剂液10g、HPVC1蛋白培养基10g、无水乙醇7g和蔗糖4g；
其中磷钨酸钠试剂液、酸性缓冲溶液、屏蔽试剂液和HPVC1蛋白培养基的种类或制备过程均同实施例1。
上述基于HPVC1蛋白检测HPV的试纸的制备方法，包括以下步骤：
①将磷钨酸钠试剂液60g、酸性缓冲溶液30g、屏蔽试剂液10g和HPVC1蛋白培养基10g混合均匀，利用1KG剂量的β射线电离辐照，向其中加入无水乙醇7g和蔗糖4g，得到测试液；
②将空白试纸浸泡到步骤①所得测试液中5分钟，在50℃下真空干燥100分钟，得到基于HPVC1蛋白检测HPV的试纸。
实施例7
一种基于HPVC1蛋白检测HPV的试纸，所述试纸由空白试纸经测试液浸泡10分钟后烘干得到；所述测试液包括磷钨酸钠试剂液100g、酸性缓冲溶液50g、屏蔽试剂液30g、HPVC1蛋白培养基10g、无水乙醇8g和蔗糖5g；
其中磷钨酸钠试剂液、酸性缓冲溶液、屏蔽试剂液和HPVC1蛋白培养基的种类或制备过程均同实施例2。
上述基于HPVC1蛋白检测HPV的试纸的制备方法，包括以下步骤：
①将磷钨酸钠试剂液100g、酸性缓冲溶液50g、屏蔽试剂液30g和HPVC1蛋白培养基10g混合均匀，利用3KG剂量的β射线电离辐照，向其中加入无水乙醇8g和蔗糖5g，得到测试液；
②将空白试纸浸泡到步骤①所得测试液中10分钟，在60℃下真空干燥2小时，得到基于HPVC1蛋白检测HPV的试纸。
实施例8
一种基于HPVC1蛋白检测HPV的试纸，所述试纸由空白试纸经测试液浸泡6分钟后烘干得到；所述测试液包括磷钨酸钠试剂液80g、酸性缓冲溶液35g、屏蔽试剂液15g、HPVC1蛋白培养基10g、无水乙醇7.8g和蔗糖4.2g；
其中磷钨酸钠试剂液、酸性缓冲溶液、屏蔽试剂液和HPVC1蛋白培养基的种类或制备过程均同实施例3。
上述基于HPVC1蛋白检测HPV的试纸的制备方法，包括以下步骤：
①将磷钨酸钠试剂液80g、酸性缓冲溶液35g、屏蔽试剂液15g和HPVC1蛋白培养基10g混合均匀，利用2KG剂量的β射线电离辐照，向其中加入无水乙醇7.8g和蔗糖4.2g，得到测试液；
②将空白试纸浸泡到步骤①所得测试液中6分钟，在52℃下真空干燥2小时，得到基于HPVC1蛋白检测HPV的试纸。
实施例9
一种基于HPVC1蛋白检测HPV的试纸，所述试纸由空白试纸经测试液浸泡8分钟后烘干得到；所述测试液包括磷钨酸钠试剂液70g、酸性缓冲溶液45g、屏蔽试剂液25g、HPVC1蛋白培养基10g、无水乙醇7.2g和蔗糖4.8g；
其中磷钨酸钠试剂液、酸性缓冲溶液、屏蔽试剂液和HPVC1蛋白培养基的种类或制备过程均同实施例4。
上述基于HPVC1蛋白检测HPV的试纸的制备方法，包括以下步骤：
①将磷钨酸钠试剂液70g、酸性缓冲溶液45g、屏蔽试剂液25g和HPVC1蛋白培养基10g混合均匀，利用1.5KG剂量的β射线电离辐照，向其中加入无水乙醇7.2g和蔗糖4.8g，得到测试液；
②将空白试纸浸泡到步骤①所得测试液中8分钟，在58℃下真空干燥100分钟，得到基于HPVC1蛋白检测HPV的试纸。
实施例10
一种基于HPVC1蛋白检测HPV的试纸，所述试纸由空白试纸经测试液浸泡7分钟后烘干得到；所述测试液包括磷钨酸钠试剂液80g、酸性缓冲溶液40g、屏蔽试剂液20g、HPVC1蛋白培养基10g、无水乙醇7.5g和蔗糖4.5g；
其中磷钨酸钠试剂液、酸性缓冲溶液、屏蔽试剂液和HPVC1蛋白培养基的种类或制备过程均同实施例5。
上述基于HPVC1蛋白检测HPV的试纸的制备方法，包括以下步骤：
①将磷钨酸钠试剂液80g、酸性缓冲溶液40g、屏蔽试剂液20g和HPVC1蛋白培养基10g混合均匀，利用2.5KG剂量的β射线电离辐照，向其中加入无水乙醇7.5g和蔗糖4.5g，得到测试液；
②将空白试纸浸泡到步骤①所得测试液中7分钟，在55℃下真空干燥2小时，得到基于HPVC1蛋白检测HPV的试纸。
稳定性试验
准备中国发明专利CN115290904A一种原位杂交HPV检测试纸（试纸1）20张和本发明的基于HPVC1蛋白检测HPV的试纸（试纸2）20张，静置在空气中，观察纸条的变化，试纸1在空气中经过48~60小时后边缘均显示浅蓝色或者浅蓝紫色；而试纸2经过48~60小时后均为无色，经10天后仍未变色，可以看出试纸2不容易和空气中的碱性物质发生染色反应，存储稳定性好。
采用本发明的基于HPVC1蛋白检测HPV的试纸的流程为，将试纸插入晨尿（或晨尿后4~6小时以上的空腹尿）中至少2分钟，然后将试纸放在干净平坦的台面上静置10~15分钟，观察试纸的颜色，若显色则为阳性。本发明的试纸检出限为2.8mmol/L，检测范围为2.8~47mmol/L。
本发明的基于HPVC1蛋白检测HPV的试纸，可以和比色卡配合使用，如图1所示的比色卡，阴性为白色，弱阳性为浅蓝色或浅蓝紫色，阳性为深蓝色或深蓝紫色，并随着尿液HPV中浓度的增加颜色逐渐加深。如结果为阴性，建议一年或半年使用一次；如结果是弱阳性，建议每月使用一次；如结果是阳性或连续检测3~6月显色梯度性上升，建议到医院进一步检查。
本发明的基于HPVC1蛋白检测HPV的试纸，适用于检验科、体检中心、妇科、皮肤科、泌尿科、口腔科、整形美容科、肛肠科、五官性病科等临床科室和基层医疗机构的初筛普查、辅助诊断、动态评估病变进展。方便、快捷、准确、重复性高、也可居家自检、男性及高风险人群可夫妻同测。
采用中国发明专利CN115290904A一种原位杂交HPV检测试剂盒（以下简称试剂盒）、本发明的基于HPVC1蛋白检测HPV的试纸（以下简称试纸）和HPV-DNA检测，其中观察组为病理确认子宫颈癌患者（236例），对照组为体检正常妇女（300例），结果如表1和表2所示。
表1 试剂盒检测和HPV-DNA检测比对结果表
表2 试纸检测和HPV-DNA检测比对结果表
由表1和表2的结果可以看出相比试剂盒，本发明的基于HPVC1蛋白检测HPV的试纸的真阳性吻合度和真阴性吻合度大大提高，尤其是真阴性吻合度高达98%以上，能够对人群进行HPV病毒初筛。
Claims (7)
1.一种基于HPVC1蛋白检测HPV的试纸，其特征在于：所述试纸由空白试纸经测试液浸泡5~10分钟后烘干得到；以重量份计，所述测试液包括磷钨酸钠试剂液6~10份、酸性缓冲溶液3~5份、屏蔽试剂液1~3份和HPVC1蛋白培养基1份；
所述磷钨酸钠试剂液通过以下步骤制备得到：
称取4.5~5.5g钨酸钠，溶解于35~45ml去离子水中，向其中加入沸石和质量浓度85±0.5%浓磷酸3.5~4.5ml，加热至回流1.5~2.5小时，停止加热，冷却至20~30℃，然后用去离子水定容至100ml，即为磷钨酸钠试剂液，保存至棕色试剂瓶中，备用；
所述酸性缓冲溶液的pH为5.4~5.8；
所述屏蔽试剂液为碘酸钠或高碘酸钠水溶液，所述屏蔽试剂液的质量体积浓度为0.4~0.6g/L；
所述HPVC1蛋白培养基按照以下步骤制备得到：
将HPVC1蛋白加入到无血清培养基中，混合均匀，静置8-12小时，得到蛋白混合液，利用8~10KG剂量的β射线电离辐照蛋白混合液，得到HPVC1蛋白培养基。
2.根据权利要求1所述的一种基于HPVC1蛋白检测HPV的试纸，其特征在于：所述酸性缓冲溶液为pH=5.4的醋酸钠-醋酸缓冲溶液或pH=5.7~5.8的磷酸盐缓冲溶液。
3.根据权利要求1所述的一种基于HPVC1蛋白检测HPV的试纸，其特征在于：所述HPVC1蛋白和无血清培养基的添加比例为1~5个HPVC1蛋白：30ml无血清培养基。
4.根据权利要求1所述的一种基于HPVC1蛋白检测HPV的试纸，其特征在于：以重量份计，所述测试液还包括无水乙醇0.7~0.8份和蔗糖0.4~0.5份。
5.权利要求1所述的一种基于HPVC1蛋白检测HPV的试纸的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
①以重量份计，将磷钨酸钠试剂液6~10份、酸性缓冲溶液3~5份、屏蔽试剂液1~3份和HPVC1蛋白培养基1份混合均匀，利用1~3KG剂量的β射线电离辐照，得到测试液；
所述磷钨酸钠试剂液通过以下步骤制备得到：
称取4.5~5.5g钨酸钠，溶解于35~45ml去离子水中，向其中加入沸石和质量浓度85±0.5%浓磷酸3.5~4.5ml，加热至回流1.5~2.5小时，停止加热，冷却至20~30℃，然后用去离子水定容至100ml，即为磷钨酸钠试剂液，保存至棕色试剂瓶中，备用；
所述酸性缓冲溶液的pH为5.4~5.8；
所述屏蔽试剂液为碘酸钠或高碘酸钠水溶液，所述屏蔽试剂液的质量体积浓度为0.4~0.6g/L；
所述HPVC1蛋白培养基按照以下步骤制备得到：
将HPVC1蛋白加入到无血清培养基中，混合均匀，得到蛋白混合液，利用8~10KG剂量的β射线电离辐照蛋白混合液，得到HPVC1蛋白培养基；
②将空白试纸浸泡到步骤①所得测试液中5~10分钟，真空干燥1.5~2.5小时，得到基于HPVC1蛋白检测HPV的试纸。
6.权利要求4所述的一种基于HPVC1蛋白检测HPV的试纸的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
①以重量份计，将磷钨酸钠试剂液6~10份、酸性缓冲溶液3~5份、屏蔽试剂液1~3份和HPVC1蛋白培养基1份混合均匀，利用1~3KG剂量的β射线电离辐照，向其中加入无水乙醇0.7~0.8份和蔗糖0.4~0.5份，得到测试液；
所述磷钨酸钠试剂液通过以下步骤制备得到：
称取4.5~5.5g钨酸钠，溶解于35~45ml去离子水中，向其中加入沸石和质量浓度85±0.5%浓磷酸3.5~4.5ml，加热至回流1.5~2.5小时，停止加热，冷却至20~30℃，然后用去离子水定容至100ml，即为磷钨酸钠试剂液，保存至棕色试剂瓶中，备用；
所述酸性缓冲溶液的pH为5.4~5.8；
所述屏蔽试剂液为碘酸钠或高碘酸钠水溶液，所述屏蔽试剂液的质量体积浓度为0.4~0.6g/L；
所述HPVC1蛋白培养基按照以下步骤制备得到：
将HPVC1蛋白加入到无血清培养基中，混合均匀，得到蛋白混合液，利用8~10KG剂量的β射线电离辐照蛋白混合液，得到HPVC1蛋白培养基；
②将空白试纸浸泡到步骤①所得测试液中5~10分钟，真空干燥1.5~2.5小时，得到基于HPVC1蛋白检测HPV的试纸。
7.根据权利要求5或6所述的任一种基于HPVC1蛋白检测HPV的试纸的制备方法，其特征在于：步骤②中的真空干燥温度为50~60℃。
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Legal Events
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| GR01 | Patent grant | ||
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