CN116548437B - 一种防治橡胶树炭疽病的环保型制剂、其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种防治橡胶树炭疽病的环保型制剂，以含有亚精胺、油菜素内酯和褪黑素的组合物为活性成分。本发明将亚精胺、油菜素内酯和褪黑素进行组合配比，首次应用于橡胶树炭疽病防治，三种活性成分协同作用，与单用亚精胺、油菜素内酯、褪黑素相比，能够显著地抑制炭疽菌和炭疽病菌孢子萌发，从而抑制橡胶树炭疽病菌致病，而且安全、高效、环保，有益于橡胶树生长、抗逆、产胶。
Description
技术领域
本发明属于农业技术技术领域，具体涉及一种防治橡胶树炭疽病的环保型制剂、其制备方法和应用。
背景技术
炭疽病是巴西橡胶树（Hevea brasiliensis，简称橡胶树）主要的叶部“两病”之一，其病原菌能够为害各物候期的橡胶树叶片以及橡胶树的多个组织。炭疽病的发生会使橡胶树二次甚至多次落叶，叶片光合效率下降、物候参差不齐，乳管橡胶生物合成和再生减慢，造成开割推迟，严重时甚至造成林段无法开割，最终导致减产。此外，由于橡胶树遗传背景狭窄、胶园生态系统单一也加速炭疽病的传播。
培育抗病新品种和施用化学农药是植物病害防治的主要策略，但是由于橡胶树育种周期长且缺乏对炭疽病高抗的育种材料，目前橡胶树炭疽病的防治主要以化学防治为主。长期的化学防治造成了农业残留和环境污染等生物安全问题。此外，由于炭疽病的发病时期多为早春橡胶树抽叶期，农药的施用还易对橡胶树叶片造成伤害，引起新抽叶干枯、脱落等伤害。
油菜素内酯是世界公认的第六大激素，在调节植物生长、增强植物生物和非生物胁迫方面具有重要作用。亚精胺是橡胶树中主要多胺，能促进橡胶树乳管胶乳合成，增强对不良环境的适应性。褪黑素是一种天然的、价格低廉的小分子吲哚类神经激素，以用于促进植物生长和植物多种微生物病原的病害防治方面。本发明将亚精胺、油菜素内酯和褪黑素进行组合配比，首次应用于橡胶树炭疽病防治。
针对上述问题，本发明提供一种安全、高效、环保且有益于橡胶树生长、抗逆、产胶的炭疽病防治制剂。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术中的不足，提供一种防治橡胶树炭疽病的环保型制剂、其制备方法和应用，该环保型制剂安全、高效、环保，在防治炭疽病的同时促进橡胶树的生长、抗逆和产胶。
本发明的第一个方面是提供一种防治橡胶树炭疽病的组合物，其组分包括亚精胺、油菜素内酯和褪黑素。
优选地，按照摩尔份数计，其组分包括亚精胺100-5000份、油菜素内酯0.1-20份和褪黑素100-20000份。
优选地，按照摩尔份数计，其组分包括亚精胺1000-5000份、油菜素内酯5-10份和褪黑素1000-10000份。
优选地，按照摩尔份数计，其组分包括亚精胺1000-5000份、油菜素内酯5-10份和褪黑素1000-5000份。
本发明的第二个方面是提供一种防治橡胶树炭疽病的环保型制剂，其活性成分为本发明第一个方面所述的组合物。
优选地，所述环保型制剂还含有农药学上可接受的辅剂。
所述环保型制剂可根据实际使用情况，制备成各种农药学上可接受的剂型，本发明对此不作特别限定。根据剂型的不同，本领域技术人员和合理选择合适的辅剂，本发明对此不作特别限定。
在本发明一个具体的实施方式中，出于成本和使用便利等方面的考虑，所述环保型制剂为水溶液制剂。在这种情况下，为了溶解褪黑素，所述环保型制剂可以添加适量助溶剂，比如无水乙醇、1,2-丙二醇、乙二醇乙醚、1,4-二氧六环、THF、DMSO、DMF、DMAC、NMP中的一种或几种的混合物。
在环保型制剂为水溶液制剂的情况，所述环保型制剂还含有农药粘附剂，以提高试剂在叶片上的粘附，增强药效。
优选地，所述农药粘附剂为吐温-80。
优选地，所述环保型制剂中，亚精胺与农药粘附剂的比例为0.1-5mol: 10-15g，更优选为1-5 mol: 10-15g。
本发明的第三个方面是提供所述环保型制剂为水溶液制剂时的制备方法：使用助溶剂将褪黑素助溶，用含有吐温-80的清水将油菜素内酯和亚精胺溶解，所得各溶剂混匀既得。
本发明的第四个方面是提供如本发明第一个方面所述的组合物、或者本发明第二个方面所述环保型制剂在抑制橡胶树炭疽病菌、和/或抑制橡胶树炭疽病菌致病、和/或抑制橡胶树炭疽病菌孢子萌发中的应用。
本发明将亚精胺、油菜素内酯和褪黑素进行组合配比，首次应用于橡胶树炭疽病防治，三种活性成分协同作用，与单用亚精胺、油菜素内酯、褪黑素相比，能够显著地抑制炭疽菌和炭疽病菌孢子萌发，从而抑制橡胶树炭疽病菌致病，而且安全、高效、环保，有益于橡胶树生长、抗逆、产胶。
附图说明
图1是本发明环保型制剂与其活性成分单独抑制橡胶树炭疽病菌生长情况。
图2是本发明实施例1的环保型制剂与其活性成分单独抑制橡胶树炭疽病菌生长结果。
图3是本发明实施例2的环保型制剂与其活性成分单独抑制橡胶树炭疽病菌生长结果。
图4是该本发明环保型制剂抑制橡胶树炭疽病菌致病情况。
图5是本发明环保型制剂抑制橡胶树炭疽病菌孢子萌发情况。
具体实施方式
下面参照附图，结合具体的实施例对本发明作进一步的说明，以更好地理解本发明。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。供试病原菌为橡胶树炭疽病菌（Colletotrichum gloeosporioides）。
实施例1：本发明环保型制剂与其活性成分单独抑制橡胶树炭疽病菌生长比较
本实施例的环保型制剂的活性成分按照摩尔份数计包括亚精胺1000份，油菜素内酯10份，褪黑素5000份。
取适量褪黑素、油菜素内酯和亚精胺，配置油菜素内酯终浓度为10 μmol/L、褪黑素终浓度为5 mmol/L、含亚精胺终浓度为1 mmol/L的PDA平板4，超净工作台中风干凝固。
取适量褪黑素，配置褪黑素终浓度为5 mmol/L的PDA平板3，超净工作台中风干凝固。
取适量油菜素内酯，配置成油菜素内酯终浓度为10 μmol/L的PDA平板1，超净工作台中风干凝固。
取适量亚精胺，配置成亚精胺终浓度为1 mmol/L的PDA平板2，超净工作台中风干凝固。
在上述各个凝固的平板中央点20 μl 浓度为1×105的炭疽菌孢子液，然后在无菌超净工作台中吹干孢子液；将吹干的孢子平板封口膜封好后放入28℃培养箱中培养7 d。抑菌结果如图1、图2和表1所示，结果表明，本实施例的环保型制剂的对炭疽菌的抑菌率达到92.79%以上，对炭疽菌具有显著抑制作用，与单用亚精胺、油菜素内酯、褪黑素相比，具有显著性差异。
表1
| PDA板活性成分 | 抑菌率（%） | |
| PDA平板1 | 10 μmol/L油菜素内酯(BR) | 46.45322116 |
| PDA平板2 | 1 mmol/L亚精胺(Spm) | 51.53968996 |
| PDA平板3 | 5 mmol/L褪黑素(Me) | 83.84435616 |
| PDA平板4 | 10 μM BR+1 mM Spm+5mM Me | 92.79543507 |
实施例2：本发明环保型制剂与其活性成分单独抑制橡胶树炭疽病菌生长比较
本实施例的环保型制剂的活性成分按照摩尔份数计包括亚精胺1000份，油菜素内酯10份，褪黑素1000份。
取适量褪黑素、油菜素内酯和亚精胺，配置油菜素内酯终浓度为10 μmol/L、褪黑素终浓度为1 mmol/L、含亚精胺终浓度为1 mmol/L的PDA平板6，超净工作台中风干凝固。
取适量褪黑素，配置褪黑素终浓度为1 mmol/L的PDA平板5，超净工作台中风干凝固。
在上述各个凝固的平板中央点20 μl 浓度为1×105的炭疽菌孢子液，然后在无菌超净工作台中吹干孢子液；将吹干的孢子平板封口膜封好后放入28℃培养箱中培养7 d。抑菌结果如图1、图3和表2所示，结果表明，本实施例的环保型制剂的对炭疽菌的抑菌率达到87.63%左右，对炭疽菌具有显著抑制作用，与单用亚精胺、油菜素内酯、褪黑素相比，具有显著性差异。
表2
| PDA板活性成分 | 抑菌率（%） | |
| PDA平板1 | 10 μmol/L油菜素内酯(BR) | 46.45322116 |
| PDA平板2 | 1 mmol/L亚精胺(Spm) | 51.53968996 |
| PDA平板5 | 1 mmol/L褪黑素(Me) | 63.92887746 |
| PDA平板6 | 10 μM BR+1 mM Spm+1mM Me | 87.62717146 |
实施例3：本发明环保型制剂抑制橡胶树炭疽病菌致病
本实施例的环保型制剂的活性成分按照摩尔份数计包括亚精胺5000份，油菜素内酯10份，褪黑素5000份。
用无水乙醇将褪黑素助溶，用含有吐温-80的清水分别将油菜素内酯和亚精胺溶解，备用。取适量所得备用液，加清水配置成亚精胺浓度为5 mol/L、油菜素内酯浓度为5mmol/L、褪黑素浓度为10 mol/L，吐温-80为1.5%的环保型制剂溶液。使用时，取50 ml药剂用去离子水稀释至10L。
将橡胶树叶片同无菌一次性针头轻轻刮出大小基本一致的小伤口。
用无菌水或稀释的药剂将橡胶树炭疽病菌孢子稀释为1×105个/L。取20 μl稀释好的孢子点在叶片伤口处。
将接有孢子的橡胶树苗放入28℃、湿度为80%的光照培养箱中培养直至形成明显菌斑。
结果如图4所示。结果显示未添加药剂的对照组形成明显菌斑，而添加本实施例环保型制剂的处理组菌斑明显小于对照组，说明本实施例的环保型制剂能有效地抑制橡胶树炭疽病菌致病。
实施例4：本发明环保型制剂抑制橡胶树炭疽病菌孢子萌发
本实施例的环保型制剂的活性成分按照摩尔份数计包括亚精胺5000份，油菜素内酯5份，褪黑素10000份。
用无水乙醇将褪黑素助溶，用含有吐温-80的清水分别将油菜素内酯和亚精胺溶解，备用。取适量所得备用液，加清水配置成亚精胺浓度为5 mol/L、油菜素内酯浓度为5mmol/L、褪黑素浓度为10 mol/L、吐温-80为1.5%的的环保型制剂溶液。使用时，取50 ml药剂用去离子水稀释至10L。
用无菌水或稀释的药剂将橡胶树炭疽病菌孢子稀释为1×105个/L。
将20 μl稀释好的孢子点在疏水玻璃表面。
将含有孢子液的玻璃片放入28℃、湿度为80%的培养箱中避光培养24 h。
显微镜下观察孢子萌发和附着胞形成情况，结果如图5所示。结果显示，未添加药剂的对照组孢子正常萌发、芽管伸长、侵染结构附着胞形成并黑化，而添加本实施例环保型制剂的处理组仅少量孢子能够萌发且芽管较短，说明本实施例的环保型制剂能有效地抑制抑制橡胶树炭疽病菌孢子萌发。
以上对本发明的具体实施例进行了详细描述，但其只作为范例，本发明并不限制于以上描述的具体实施例。对于本领域技术人员而言，任何对该实用进行的等同修改和替代也都在本发明的范畴之中。因此，在不脱离本发明的精神和范围下所作的均等变换和修改，都应涵盖在本发明的范围内。
Claims (13)
1.一种防治橡胶树炭疽病的组合物，其特征在于，按照摩尔份数计，其组分组成为：亚精胺100-5000份、油菜素内酯0.1-20份和褪黑素100-20000份。
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，按照摩尔份数计，其组分组成为：亚精胺1000-5000份、油菜素内酯5-10份和褪黑素1000-10000份。
3.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于，按照摩尔份数计，其组分组成为：亚精胺1000-5000份、油菜素内酯5-10份和褪黑素1000-5000份。
4.一种防治橡胶树炭疽病的环保型制剂，其特征在于，其活性成分为权利要求1-3中任意一项所述的组合物。
5.根据权利要求4所述的环保型制剂，其特征在于，其还含有农药学上可接受的辅剂。
6.根据权利要求5所述的环保型制剂，其特征在于，其含有助溶剂。
7.根据权利要求6所述的环保型制剂，其特征在于，所述助溶剂为无水乙醇、1,2-丙二醇、乙二醇乙醚、1,4-二氧六环、THF、DMSO、DMF、DMAC、NMP中的一种或几种的混合物。
8.根据权利要求5所述的环保型制剂，其特征在于，其含有农药粘附剂。
9.根据权利要求8所述的环保型制剂，其特征在于，所述农药粘附剂为吐温-80。
10.根据权利要求8所述的环保型制剂，其特征在于，亚精胺与农药粘附剂的比例为0.1-5mol: 10-15g。
11.根据权利要求8所述的环保型制剂，其特征在于，亚精胺与农药粘附剂的比例为1-5mol: 10-15g。
12.如权利要求4-9中任意一项所述环保型制剂的制备方法，其特征在于，使用助溶剂将褪黑素助溶，用含有吐温-80的清水将油菜素内酯和亚精胺溶解，所得各溶剂混匀既得。
13.如权利要求1-3中任意一项所述的组合物、或者权利要求4-9中任意一项所述环保型制剂在抑制橡胶树炭疽病菌、和/或抑制橡胶树炭疽病菌致病、和/或抑制橡胶树炭疽病菌孢子萌发中的应用。
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