CN116514602B - 一种液体微生物菌肥及其应用方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种液体微生物菌肥及其应用方法，属于微生物技术领域，液体微生物菌肥是将侧孢短芽孢杆菌APS01（Brevibacillus laterosporus）在液体培养基中培养30小时，用无菌水稀释500倍后加入助剂，混合均匀后制备而成，并用于蔬菜种植过程中土壤改良、根肿病防治；本发明的液体微生物菌肥成分简单、制备工艺简单、应用方法简单，具有提高土壤疏松、增加土壤肥力的功能。本发明的液体微生物菌肥制备只涉及一种菌种，有效降低杂菌数量，并且对蔬菜根肿病有效防治。产品无毒无害，减少了化学农药的用量，提高了经济和环境效益。
Description
技术领域
本发明属于微生物肥技术领域，具体涉及一种液体微生物菌肥及其应用方法。
背景技术
土壤是农产品生产的基础，在种植过程中长期使用化肥导致的土壤板结、营养成分流失已成为国家农业种植面临的重要问题，尤其对于蔬菜大棚种植，同一地块连续多年种植相同植物造成植物生长发育不良、病虫害严重、产量品质下降的现象。根肿病是一种世界性病害，近年来，人类对蔬菜消费的需求量逐年增加，十字花科作物栽培面积不断扩大，种植基地蔬菜生产轮作年限增加，南北菜和种子的相互调运使得十字花科作物根肿病发生面积迅速扩大，危害程度也是逐年加重，根肿病已成为十字花科作物的重要病害之一。
目前，对于土壤治理多是采用农家肥、生物肥进行营养补充与修复，对于根肿病的防治，主要是采用化学制剂，但是具有一定的副作用。此外，枯草芽孢杆菌、链霉菌、地衣芽孢杆菌等在土壤修复、根肿病生防实践中取得了良好的防治效果。但总体而言，国内对于根肿病生物防治刚起步，菌株太少、应用效果不明显，且没有同时具有预防根肿病和土壤改良的功能。
发明内容
针对现有技术缺点，本发明运用生物技术，提供一种液体微生物菌肥及其应用方法。
第一方面，本发明提供一种液体微生物菌肥。将侧孢短芽孢杆菌APS01（Brevibacillus laterosporus）在液体培养基中培养30小时，用无菌水稀释500倍后加入助剂，混合均匀后制备为液体微生物菌肥。
进一步的，所述侧孢短芽孢杆菌APS01（Brevibacillus laterosporus），于2022年10月31号保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGCMCCNo.25993；保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
进一步的，所述液体培养基成分按质量百分数计包括：胰蛋白胨0.1-0.2%，酵母提取物0.2-0.5%，NaCl 0.5-1%，余量为无菌水，pH=7.0。
进一步的，所述助剂为黄腐酸、氨基酸的一种或多种组合；黄腐酸的添加量0-2%，氨基酸的添加量0-1%。
进一步的，所述液体微生物菌肥中侧孢短芽孢杆菌APS01（Brevibacilluslaterosporus）菌数为1×108cfu/ml。
第二方面，本发明提供液体微生物菌肥的应用方法，包括以下步骤：
方法一：液体微生物菌肥按每次每株10-20ml的量进行灌根处理，蔬菜移栽后第1天、5天、10天、20天处理4次。
方法二：液体微生物菌肥按每次每株20-30ml的量进行喷雾处理，蔬菜移栽后第1天、5天、10天、20天处理4次。
进一步的，所述方法一中，灌根处理中菌液的用量为每株15ml。
进一步的，所述方法二中，喷雾处理中菌液的用量为每株25ml。
进一步的，所述蔬菜为甘蓝。
本发明的有益效果：
（1）本发明的液体微生物菌肥成分简单、制备工艺简单、应用方法简单，具有提高土壤疏松、增加土壤肥力的功能。
（2）本发明的液体微生物菌肥制备只涉及一种菌种，有效降低杂菌数量，并且对蔬菜根肿病有效防治。产品无毒无害，减少了化学农药的用量，提高了经济和环境效益。
附图说明
图1为本发明不同处理对甘蓝维生素C含量的影响；
图2 为本发明不同处理对甘蓝游离氨基酸含量的影响；
图3 为本发明不同处理对甘蓝可溶性蛋白含量的影响；
具体实施方式
以下是本发明的具体实施例，对本发明的技术方案做进一步描述，但是本发明的保护范围并不限于这些实施例。凡是不背离本发明构思的改变或等同替代均包括在本发明的保护范围之内。
实施例
将侧孢短芽孢杆菌APS01（Brevibacillus laterosporus）液体培养30小时，培养温度30℃，通气量为1:0.8（V/V·m），搅拌速率200rpm。用无菌水稀释500倍后，加入2%黄腐酸、1%氨基酸，混合均匀后制备为液体微生物菌肥a，菌数为1×108cfu/ml。将液体微生物菌肥a按每次每株甘蓝15ml的量进行灌根处理，蔬菜移栽后第1天、5天、10天、20天处理4次。
将侧孢短芽孢杆菌APS01（Brevibacillus laterosporus）液体培养30小时，培养温度30℃，通气量为1:0.8（V/V·m），搅拌速率200rpm。用无菌水稀释500倍后，制备为液体微生物菌肥b，菌数为1×108cfu/ml。将液体微生物菌肥b按每次每株甘蓝15ml的量进行灌根处理，蔬菜移栽后第1天、5天、10天、20天处理4次。
将制备的液体微生物菌肥a，按每次每株甘蓝25ml的量进行喷雾处理，蔬菜移栽后第1天、5天、10天、20天处理4次。
将制备的液体微生物菌肥b，按每次每株甘蓝25ml的量进行喷雾处理，蔬菜移栽后第1天、5天、10天、20天处理4次。
对比试验例1
寿光某甘蓝种植大棚，甘蓝移栽后在大棚内选取6个试验样方，每个长1米、宽1米，分别为对照1组、对照2组、试验1组、试验2组、试验3组、试验4组。
具体试验方法：
对照1组：无菌水按每株15ml灌根处理，第1天、5天、10天、20天处理4次。
对照2组：无菌水按每株25ml喷雾处理，第1天、5天、10天、20天处理4次。
试验1组：制备的液体微生物菌肥a，按每株15ml灌根处理，第1天、5天、10天、20天处理4次。
试验2组：制备的液体微生物菌肥a，按每株25ml喷雾处理，第1天、5天、10天、20天处理4次。
试验3组：制备的液体微生物菌肥b，按每株15ml灌根处理，第1天、5天、20天处理3次。
试验4组：制备的液体微生物菌肥b，按每株25ml喷雾处理，第1天、5天、20天处理3次。
在第21天，在6个样方地块中采用“W”形5点取样法，用土钻采集土壤样本混合后磨碎过筛，测定土壤中的容重、有机质、碱解氮、速效磷、速效钾理化指标。每个样方随机取植物10片，测定维生素C、可溶性蛋白、游离氨基酸的含量。
表1 不同处理对土壤理化性质的影响
备注：*表示与对照1组相比（P＜0.05），▲表示与对照2组相比（P＜0.05）。
根据表1的数据可知，施用本发明所述液体微生物菌肥后土壤容重比降低，土壤容重是土壤结构特性的重要指标，反映了土壤通透性的状况。说明土壤较之前变得疏松，有机质含量均有提高，尤其试验1组，有机质增加30%以上，与对照1组具有显著差异。同时，碱解氮、有效磷、速效钾的含量均有不同程度提高，说明，施用本发明液体微生物菌肥可以改良土壤的透气性、提高土壤中碱解氮、速效磷和速效钾的含量，间接提高土壤的肥料利用率，对甘蓝的生长发育具有良好的促进作用。
表2 不同处理对甘蓝质量的影响
备注：*表示与对照1组相比（P＜0.05），▲表示与对照2组相比（P＜0.05）。
根据表2的数据可知，与对照组相比，试验组维生素C、游离氨基酸与可溶性蛋白都显著性增长，可以表明本发明对于甘蓝的质量具有明显的提升。
对比试验例2
将20g甘蓝根肿病组织切碎，加入100mL无菌水，研碎后过滤，将滤液3000r/min离心15min，将沉淀物重新加无菌水后离心2次。最后将沉淀溶于5ml无菌水，利用血球计数板计数后用无菌水稀释至1×108cfu/mL，备用。挑选长势均一的甘蓝秧苗移栽60盆，分为6组，每组10盆，移栽时进行试验。
试验方法如下：
对照组1：移栽后第1天，每株浇灌无菌水15ml和根肿病原菌孢子悬液10ml。第5天、10天、20天继续浇灌无菌水15ml，第21天进行统计。
对照组2：移栽后第1天，每株喷雾无菌水25ml和根肿病原菌孢子悬液10ml。第5天、10天、20天继续喷雾无菌水25ml，第21天进行统计。
试验1组：移栽后第1天，每株浇灌实施例1制备的液体微生物菌肥15ml和根肿病原菌孢子悬液10ml。第5天、10天、20天继续浇灌实施例1制备的液体微生物菌肥15ml，第21天进行统计。
试验2组：移栽后第1天，每株浇灌实施例2制备的液体微生物菌肥15ml和根肿病原菌孢子悬液10ml。第5天、10天、20天继续浇灌实施例2制备的液体微生物菌肥15ml，第21天进行统计。
试验3组：移栽后第1天，每株喷雾实施例1制备的液体微生物菌肥25ml和根肿病原菌孢子悬液10ml。第5天、10天、20天继续喷雾实施例1制备的液体微生物菌肥25ml，第21天进行统计。
试验4组：移栽后第1天，每株喷雾实施例2制备的液体微生物菌肥25ml和根肿病原菌孢子悬液10ml。第5天、10天、20天继续喷雾实施例2制备的液体微生物菌肥25mll，第21天进行统计。
病情分析：
0级：根部无根肿。
1级：侧根有小根肿。
3级：主根肿大，其直径小于2倍茎基部。
5级：主根肿大，其根茎是茎基部的2-3倍。
7级：主根肿大，其根茎是茎基部的3-4倍。
9级：主根肿大，其根茎是茎基部的4倍以上或肿大的根部变黑。
病情指数=[Σ(各级病株数×相对级数值)/最高级别×调查总株数]×100%。
相对防效＝(对照病情指数-处理病情指数) /对照病情指数×100%。
表3甘蓝的效果验证
| 组别 | 病情指数 | 相对防效 |
| 对照组1 | 44.5% | / |
| 对照组2 | 43.6% | / |
| 试验1组 | 6.6% | 85.2% |
| 试验2组 | 8.5% | 80.5% |
| 试验3组 | 7.3% | 83.6% |
| 试验4组 | 7.6% | 83.3% |
病情统计结果表明，本发明制备的液体微生物菌肥，通过浇灌或喷雾进行根肿病防治，相对防效达到80%以上，说明本发明对根肿病原菌具有抑制效果。
尽管通过优选实施例的方式对本发明进行了详细描述，但本发明并不限于此。在不脱离本发明的精神和实质的前提下，本领域普通技术人员可以对本发明的实施例进行各种等效的修改或替换，而这些修改或替换都应在本发明的涵盖范围内/任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应以权利要求所述的保护范围。
Claims (7)
1.一种液体微生物菌肥，其特征在于：所述液体微生物菌肥是将侧孢短芽孢杆菌APS01（Brevibacillus laterosporus）在液体培养基中培养30小时，用无菌水稀释500倍后加入助剂，混合均匀后制备而成，并用于蔬菜种植过程中土壤改良、根肿病防治；所述侧孢短芽孢杆菌APS01（Brevibacillus laterosporus），于2022年10月31号保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC No .25993；保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
2.根据权利要求1所述的液体微生物菌肥，其特征在于：所述液体培养基成分按质量百分数计包括：胰蛋白胨0 .1-0 .2%，酵母提取物0 .2-0 .5%，NaCl 0 .5-1%，余量为无菌水，pH=7 .0。
3.根据权利要求1所述的液体微生物菌肥，其特征在于：所述助剂为黄腐酸、氨基酸的一种或多种组合；黄腐酸的添加量0-2%，氨基酸的添加量0-1%。
4.根据权利要求1所述的液体微生物菌肥，其特征在于：所述液体微生物菌肥中侧孢短芽孢杆菌APS01（Brevibacillus laterosporus）菌数为1×108cfu/ml。
5.一种根据权利要求1所述液体微生物菌肥的应用方法，其特征在于：包括以下步骤：方法一：液体微生物菌肥按每次每株10-20ml的量进行灌根处理，蔬菜移栽后第1天、5天、10天、20天共处理4次；方法二：液体微生物菌肥按每次每株20-30ml的量进行喷雾处理，蔬菜移栽后第1天、5天、10天、20天共处理4次。
6.根据权利要求5所述的液体微生物菌肥的应用方法，其特征在于：所述方法一中，灌根处理中液体微生物菌肥的用量为每次每株15ml；所述方法二中，喷雾处理中液体微生物菌肥的用量为每次每株25ml。
7.根据权利要求5所述的液体微生物菌肥的应用方法，其特征在于：所述蔬菜为甘蓝。
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| CN114763311A (zh) * | 2022-03-25 | 2022-07-19 | 中诚国联（河南）生物科技有限公司 | 一种防治果蔬细菌病害的复合微生物菌剂及其制备方法和应用 |
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