CN116474172A - 表皮干细胞与脂肪混合注射方法和隆胸及丰臀再生方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及自体表皮干细胞与自体脂肪混合后进行丰胸的方法领域，具体为表皮干细胞与脂肪混合注射方法和隆胸及丰臀再生方法。本发明自体表皮干细胞与自体脂肪混合注射方法，包括：提取脂肪，通过负压或水动力将脂肪抽出来，提取部位至少包括腰背部、上腹部和下腹部、双侧大腿；将提取的脂肪进行处理和纯化脂肪细胞；吸取自体脂肪合计1200毫升；离心浓缩及处理后，取高密度脂肪颗粒，合计500毫升左右；取2cm2自体刃厚皮片获得10ml的自体表皮干细胞；将所述高密度脂肪颗粒与所述自体表皮干细胞混合；容量合计为510毫升；每侧乳房注射填充205毫升；其中胸大肌内皮下层注射填充45毫升；乳腺下间隙注射填充80毫升；乳腺皮下注射填充80毫升。
Description
技术领域
本发明涉及自体表皮干细胞与自体脂肪混合后进行丰胸的方法领域，具体为表皮干细胞与脂肪混合注射方法和隆胸及丰臀再生方法。
背景技术
丰胸，也叫隆胸或丰乳，是女性为了提升个人女性魅力而针对乳房进行的一种增大行为，主要依靠外力手法，对胸部的形状进行塑造。常见的丰胸方法有：食物丰胸，即通过调整饮食规律，借用蔬菜里面的营养物质达到丰胸目的；药物丰胸，就是使用或服用药物进行丰胸；手术丰胸，对胸部填充硅胶等制品达到丰胸目的。
首先是假体隆胸，假体隆胸是世界上开展时间最长、方法最多的体态整形方式。假体隆胸是指在胸部的周围做一个切口，然后将雕塑好的乳房假体植入进去最后进行缝合来达到效果的，假体材料由硅凝胶制成。但假体隆胸的缺点非常多、且非常大。由于人体对于异物的排异反应，会在假体周围形成一层包膜，正常情况是没有影响的，如果排异反应过重会导致包膜挛缩，乳房变硬、畸形，因此出现假体移位或者包膜挛缩的风险较大。另外假体属于异物，会携带细菌，术后引流不畅，或者抵抗力下降会引起感染。如果早期没有固定好假体或者上臂过度活动，会导致假体移位；甚至患者在术后不注意睡觉姿势，压迫到了手术的部位，可能会导致假体移位从而表现出胸部疼痛等不适症状。另外由于术中损伤神经，或者假体压迫神经，术后容易反复出现疼痛不适。以及选择的假体太大导致张力过大，皮肤会变薄，还会使假体出现外露，或者切口愈合不良导致假体外露。假体隆胸除了手感差和以上现有问题以外，另外在日常睡觉时胸也会向两边下垂，造成其本人不舒服。
另外一个是自体脂肪丰胸，也称为自体脂肪移植隆胸、自体脂肪注射隆胸，是从身体腰、腹、臀、腿等脂肪较丰厚的部位提取脂肪颗粒并移植到胸部的一种隆胸术。手术将隆胸者本身的多余脂肪用细针吸出，活化并提纯成纯净脂肪颗粒，通过微型管针分条理均匀注入隆乳区使之成活。不开刀、不出血，丰胸效果真实自然，同时还能达到减肥塑身的效果。自体脂肪隆胸的基本原理是将身体上其他部位的多余脂肪细胞移植注射到胸部，让脂肪细胞重新生长，与自身胸部组织融为一体，使乳房丰满、有型。本质上是自身的脂肪细胞换了个地方生长，相当于乳房的二次发育。由于是自己的脂肪细胞移植，所以不存在排异反应，从根本上保障了手术的安全。但自体脂肪丰胸依然存在至少以下问题：
1.自体脂肪丰胸，填充的脂肪70％-80％会在一个月后被吸收，20％-30％会在3个月之后被吸收，5％-10％会在6个月之后被吸收，吸收之后就会趋于稳定；因此需要多次植入才能达到较好的效果；术后效果和脂肪细胞存活率不理想；
2.如果胸部组织吸收脂肪不充分，可能会导致胸部有硬块或者硬疙瘩的情况；
3.如果在注射的过程中损伤到了胸部神经，可能会出现皮肤瘀斑的现象；
4.以及抽吸脂肪后局部潜在的创面较大，腔隙过多均会造成血液渗出，也会造成皮肤瘀斑；
5.同时自体脂肪来源自身，如果填充方法不当填充后脂肪成活量不足，填充后可能会产生感染、结节形成甚至气胸等并发症。尤其是注射量超过100毫升，出现结节基本接近百分之百，结节有大有小，小的叫结节，大的叫囊肿，远期还会出现钙化；
6.吸脂一方面给人造成伤害和疼痛，并且需要很长时间来恢复；
7.吸脂后，皮肤表面会存在凹凸不平，因为被吸走脂肪的部位，其他脂肪是慢慢填充到空白区域的，而不是一下子就过去了，因此吸脂后还需要配合穿戴束身衣恢复；个别严重的还会在皮肤表面形成永久性凹凸不平的后遗症；
8.充填不均匀还会造成皮肤局部有凹陷，或者是形状、大小不对称，后期还要入院予以矫正治疗；
9.吸脂过程中医生动作不够轻柔，会大量的破坏的皮肤与血管组织，导致感染或坏死；再者，即使医生动作轻柔，也一样会对皮肤和相关人体组织造成伤害；
10.以及吸脂手术中有出血的可能，若凝血功能因手术中伤及小血管发生障碍即会形成血肿，但术前和术后禁用抗凝血药物；
11.术后可能会有瘙痒感；
12并且吸脂会对身体造成伤害，若吸的量过多，可能威胁生命安全；
13.并且吸脂部位还会产生麻木或硬化，也需要很长时间来恢复。并且若吸脂的过程中误伤了感觉神经末梢，这种情况不是不可逆的伤害；
14.脂肪填充丰胸，除了移植后存活率低的问题以外，主要缺点就是注入后脂肪组织自然聚集成块，脂肪会发生液化坏死，坏死的脂肪会导致钙化、硬结、整个乳房发硬等情况，严重者发生大面积坏死，需到医院穿刺抽出液体，或负压引流；
15.手术可能会导致局部皮肤坏死；
16.还会由于静脉回流不畅导致吸脂后皮下积液；
17.还会由于皮下堆积了脂肪细胞形成脂肪瘤；
18.脂肪丰胸，若将皮脂颗粒注入到血管中，就会引起栓塞、、休克、偏瘫、感染，肿胀甚至更严重的情况。
随着技术进步，现目前还有了脂肪干细胞丰胸，通过提取受术者身体隐蔽部位脂肪进行提纯，回注到双乳中，能够使其更不容易吸收，长久定型。经过实验室提取的脂肪，在其胸部的存活率要比传统意义上的自体脂肪丰胸有所提高。但依然至少存在以下问题：
1.提取细胞活性低，往往会影响手术后的效果；
2.需要准备的时间比较长；这个时间长也包括两个方面，一方面是现有的修复手术由于需要准备的器械比较多，需要准备的时间比较长；另一方面是细胞培养和提取完成后，很多时间还没有及时使用；因此以上两个造成时间长的原因，无论是哪一个，都会造成细胞不能及时使用，使细胞存活率再次降低；并且以上两个细分问题分别还存在成本高的问题；
3.医疗费用高，因为脂肪干细胞、骨髓间充质干细胞在提取过程中需要使用离心机进行离心，对设备要求较高，成本也高。
4.在实验室条件下进行细胞传代培养需要的时间比较长；脂肪干细胞、骨髓间充质干细胞的提取需要较长的消化时间，或者需要提前一到两周提取患者的相关自体组织；
5.现目前虽然有用脂肪干细胞，但脂肪很难提取出干细胞；脂肪干细胞无论是提取的过程、成本、或是提取的比例都非常不理想。
发明内容
本发明的目的是至少解决以上部分现有问题。
为解决上述技术问题，本发明自体表皮干细胞与自体脂肪混合注射方法，包括：
提取脂肪，通过负压或水动力将脂肪抽出来，提取部位至少包括腰背部、上腹部和下腹部、双侧大腿；
将提取的脂肪进行处理和纯化脂肪细胞；
吸取自体脂肪合计1200毫升；离心浓缩及处理后，取高密度脂肪颗粒，合计500毫升左右；
取2cm2自体刃厚皮片获得10ml的自体表皮干细胞；
将所述高密度脂肪颗粒与所述自体表皮干细胞混合；容量合计为510毫升；
每侧乳房注射填充205毫升；
其中胸大肌内皮下层注射填充45毫升；乳腺下间隙注射填充80毫升；乳腺皮下注射填充80毫升。
作为本发明自体表皮干细胞与自体脂肪混合注射方法的一种优选实施方案，所述处理和纯化脂肪细胞包括以下方法至少其中之一：
方法一、将脂肪放入无菌纱网过滤器中，4℃的0.9％生理盐水冲洗3-5次，直至冲洗液变清彻，用长针扎除其中的条索状、纤维结缔组织，最后以纱布轻叩过滤器底以吸取多余水分，直至脂肪变成一种半固体状态即可；
方法二、使用高心机，利用转速将杂质与脂肪精密区分，转速为每分钟1000转或2000转或3000转其中之一；
方法三、将提取的脂肪长时间静置，使膨胀液、水分、血液、脂肪之间分层；
用注射器将杂质吸出。
作为本发明自体表皮干细胞与自体脂肪混合注射方法的一种优选实施方案，在术中30分钟快速提取自体表皮干细胞；及时将自体表皮干细胞与高密度脂肪颗粒混合并注射填充。
作为本发明自体表皮干细胞与自体脂肪混合注射方法的一种优选实施方案，所述自体表皮干细胞在未混合或未注射时放置于保温台保温；
所述保温台具有电池独立供电。
本发明隆胸再生方法，包括前文任一项所述的自体表皮干细胞与自体脂肪混合注射方法，将该方法应用于女性隆胸，其中胸大肌内皮下层、乳腺及乳腺皮下分别均匀注入。
本发明丰臀再生方法，包括前文所述的隆胸再生方法，其中将胸部替换为臀部，高密度脂肪颗粒与自体表皮干细胞混合后注射于臀部。
有益效果
本发明解决了以上背景技术中的现有问题(由于背景技术中列出的现有问题过多，在此不一一复述)及以上未一一提及的其他现有问题并相应至少带来以下创新优点：
1.本发明自体脂肪混合自体表皮干细胞，2cm2自体刃厚皮片可以获得10ml的表皮干细胞，可以搭配500ml的自体脂肪联合应用，提高自体脂肪存活率；
2.表皮干细胞的定向血管分化提升自体脂肪存活率；
3.精准的提取自体表皮干细胞混合自体脂肪再行注射，为自体脂肪隆胸治疗提供创新的治疗方法；
4.表皮干细胞的作用是利用干细胞的分化潜能，将健康的干细胞移植到患者体内，进而达到组织再生修复的作用；
5.将复杂的实验室操作简单化了，并克服复杂的手术室环境，使临床医生易于掌握，产品先进简单易行；
6.所获得的表皮干细胞最大优点不需体外培养，手术中可以即刻使用，减少感染等问题；
7.本发明通过利用保温台，使手术等待过程中避免细胞存活率的降低；
8.本发明在术中30分钟快速提取自体表皮干细胞；及时将自体表皮干细胞与高密度脂肪颗粒混合并注射填充，从而使得不需要术前花费大量的时间和人工。
附图说明
图1展示了本发明保温台的示意图；
图2展示了本发明脂肪提取部位及注射部位的示意图；
图3展示了本发明将高密度脂肪颗粒与自体表皮干细胞混合后注射的示意图；
图4展示了本发明实施例2的流程步骤图；
图5为本发明的实验数据，体外ESCs促大鼠VEC小管形成，ADM培养的ESCs上清液刺激大鼠血管内皮细胞表现出更强的促血管形成作用；
图6为转录组测序探索促血管形成的机制，可以促进血管增生、修复组织，以及促进表皮的生长，还可以促进组织的活细胞进行生长和分化，可以加速组织愈合；
图7为动物体内实验；
图8为ESCs促进ADM基底部及内部的血管化；
图9为ESCs促进组织工程皮片表面的血液灌注流量；
图10为ESCs促进组织工程皮片支架基底部和内部的血管生成；
图11为表皮干细胞在创面中定植、分裂；
图12为表皮干细胞定植于新生血管并向血管方向分化；
图13为ESC免疫荧光成分鉴定；
图14为快速分选后获得的即刻ESCs的活性鉴定；
图15为ESC流式细胞术成分鉴定。
具体实施方式
为了使得本公开的技术方案的目的、技术方案和优点更加清楚，下文中将结合本公开具体实施例的附图，对本公开实施例的技术方案进行清楚、完整的描述。
附图中相同的附图标记代表相同的部件。需要说明的是，所描述的实施例是本公开的一部分实施例，而不是全部的实施例。
基于所描述的本公开的实施例，本领域普通技术人员在无需创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本公开保护的范围。
表皮干细胞是一类具有无限增殖能力，可增殖分化为表皮中各种功能细胞的细胞群。主要位于表皮基底层，属于成体干细胞，具有很强的分裂增殖能力，以补充衰老脱落的角质细胞。表皮干细胞具有干细胞的特征：未成熟、体积小、细胞器小、克隆形成能力高、细胞周期慢、无限次分裂等。皮肤干细胞具有强大的自我更新能力，在体外培养时呈克隆性生长。通常情况下，皮肤干细胞通过不对称分裂产生一个子代干细胞和一个定向祖细胞即短暂增殖细胞。子代干细胞具有高度的增殖潜能，但分化较慢。短暂增殖细胞增殖潜能有限，但可不断增加分化细胞数量，产生终末分化细胞。表皮干细胞及其产生的短暂增殖细胞、终末分化细胞构成一个表皮增殖单位，分布在表皮不同的空间。表皮更新时，由基底层表皮干细胞分化产生的短暂增殖细胞失去对基底膜的黏附，向上迁移，最后经过一系列生物化学和形态学变化，达到表皮最外层，形成角质化表皮细胞，角质化表皮细胞最终脱落为皮屑。表皮受到外来损伤时，还可通过对称分裂产生两个干细胞或两个祖细胞，增加干细胞或分化细胞的数量，从而更好地适应机体的需要。
由于现有细胞治疗均须在实验室条件下进行细胞传代培养及体外修饰，时间比较长且相关伦理学问题有待解决，目前都无法用于临床。其中胚胎干细胞受制于伦理学限制，研究较多，但限于基础研究；成纤维细胞，无法诱导分化。因此本发明采用表皮干细胞还可以解决以上问题。
本发明采用表皮干细胞的具体进一步操作参见以下内容。
实施例1
本发明自体表皮干细胞与自体脂肪混合注射方法，包括：
首先提取脂肪，通过负压或水动力将脂肪抽出来，提取部位至少包括腰背部、上腹部和下腹部、双侧大腿；
将提取的脂肪进行处理和纯化脂肪细胞；
优选从大腿及腰部吸取自体脂肪合计1200毫升；离心浓缩及处理后，取高密度脂肪颗粒，合计500毫升左右；
取2cm2自体刃厚皮片获得10ml的自体表皮干细胞；
将所述高密度脂肪颗粒与所述自体表皮干细胞混合；容量合计为510毫升；
每侧乳房注射填充205毫升；
其中胸大肌内皮下层注射填充45毫升；乳腺下间隙注射填充80毫升；乳腺皮下注射填充80毫升。
进一步的，前文所述的处理和纯化脂肪细胞包括以下方法至少其中之一：
方法一、将脂肪放入无菌纱网过滤器中，4℃的0.9％生理盐水冲洗3-5次，直至冲洗液变清彻，用长针扎除其中的条索状、纤维结缔组织，最后以纱布轻叩过滤器底以吸取多余水分，直至脂肪变成一种半固体状态即可；本方法一的优点在于：对脂肪细胞几乎没有损伤，水分含量相对静置法更低；缺点在于：脂肪细胞损失数量较多；因此该方法适用于小面积或小量的填充。
方法二、使用高心机，利用转速将杂质与脂肪精密区分，转速为每分钟1000转或2000转或3000转其中之一；通常转速越高得到的脂肪纯度越高，但是转速对脂肪活性有一定影响。因此该方法二的优点在于：脂肪纯度可控，所得脂肪在注射的时候更均匀；其缺点在于：转速过高影响脂肪细胞活性；因此该方式同样适用于小面积或小量的填充。
方法三、将提取的脂肪长时间静置，使膨胀液、水分、血液、脂肪之间分层；用注射器将杂质吸出。该方法三的优点在于：对脂肪活性损伤最小；但其缺点在于：时间较长，且脂肪的水分含量较大；因此该方式适用于大面积或大量的填充。
以上理和纯化脂肪细胞的方法根据需要填充的量的不同来选择不同的方法。
进一步的，其中前文所述的表皮干细胞是在术中30分钟进行提取自体表皮干细胞；以便能够更加及时地将自体表皮干细胞与高密度脂肪颗粒混合并注射填充，以提高细胞存活率。
进一步的，所述自体表皮干细胞在未混合或未注射时放置于保温台保温；
所述保温台具有电池独立供电。其中图1展示了本发明保温台的示意图。
实施例2
本发明隆胸再生方法，本实施例2隆胸再生方法包括前文实施例1的本发明自体表皮干细胞与自体脂肪混合注射方法，在进行其中隆胸操作时，在女性胸部的胸大肌内皮下层、乳腺及乳腺皮下分别均匀注入。避免了硬结、脂肪成团，钙化、包块等隐患。其中图2展示了本发明脂肪提取部位及注射部位的示意图；图3展示了本发明将高密度脂肪颗粒与自体表皮干细胞混合后注射的示意图；图4展示了本发明实施例2的流程步骤图。
实施例3
本发明还包括一种丰臀再生方法，本发明丰臀再生方法包括实施例1及实施例2的全部方案，其中不同之处在于将实施例2中描述的胸部替换为臀部，也就是实施例1中所述的高密度脂肪颗粒与自体表皮干细胞混合后用来注射于臀部。
本发明表皮干细胞与脂肪混合注射方法和隆胸及丰臀再生方法，也就是实施例1至实施例3的方案分别具有的优点总结如下：
自体表皮干细胞它可以促进血管增生、修复组织可以促进组织的活细胞进行生长和分化，加速组织修复，其中图5为本发明的实验数据，体外ESCs促大鼠VEC小管形成，ADM培养的ESCs上清液刺激大鼠血管内皮细胞表现出更强的促血管形成作用；
图6为转录组测序探索促血管形成的机制，可以促进血管增生、修复组织，以及促进表皮的生长，还可以促进组织的活细胞进行生长和分化，可以加速组织愈合；通过转录组测序发现相关促血管形成通路：“TNF signalling pathway,”“regulation of actincytoskeleton,”“FoxOsignalling pathway,”“HIF-1signalling pathway,”“TGF-betasignalling pathway。”
图7为动物体内实验；图8为ESCs促进ADM基底部及内部的血管化；图9为ESCs促进组织工程皮片表面的血液灌注流量；图10为ESCs促进组织工程皮片支架基底部和内部的血管生成；图11为表皮干细胞在创面中定植、分裂，图12为表皮干细胞定植于新生血管并向血管方向分化；图13为ESC免疫荧光成分鉴定；图14为快速分选后获得的即刻ESCs的活性鉴定；图15为ESC流式细胞术成分鉴定。
尽管已描述了本发明的优选实施例，但本领域内的技术人员一旦得知了基本创造性概念，则可对这些实施例作出另外的变更和修改。所以，所附权利要求意欲解释为包括优选实施例以及落入本发明范围的所有变更和修改。
显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。
Claims (6)
1.自体表皮干细胞与自体脂肪混合注射方法，其特征在于，包括：
提取脂肪，通过负压或水动力将脂肪抽出来，提取部位至少包括腰背部、上腹部和下腹部、双侧大腿；
将提取的脂肪进行处理和纯化脂肪细胞；
吸取自体脂肪合计1200毫升；离心浓缩及处理后，取高密度脂肪颗粒，合计500毫升左右；
取2cm2自体刃厚皮片获得10ml的自体表皮干细胞；
将所述高密度脂肪颗粒与所述自体表皮干细胞混合；容量合计为510毫升；
每侧乳房注射填充205毫升；
其中胸大肌内皮下层注射填充45毫升；乳腺下间隙注射填充80毫升；乳腺皮下注射填充80毫升。
2.根据权利要求1所述的自体表皮干细胞与自体脂肪混合注射方法，其特征在于，所述处理和纯化脂肪细胞包括以下方法至少其中之一：
方法一、将脂肪放入无菌纱网过滤器中，4℃的0.9％生理盐水冲洗3-5次，直至冲洗液变清彻，用长针扎除其中的条索状、纤维结缔组织，最后以纱布轻叩过滤器底以吸取多余水分，直至脂肪变成一种半固体状态即可；
方法二、使用高心机，利用转速将杂质与脂肪精密区分，转速为每分钟1000转或2000转或3000转其中之一；
方法三、将提取的脂肪长时间静置，使膨胀液、水分、血液、脂肪之间分层；
用注射器将杂质吸出。
3.根据权利要求1或2所述的自体表皮干细胞与自体脂肪混合注射方法，其特征在于，在术中30分钟快速提取自体表皮干细胞；及时将自体表皮干细胞与高密度脂肪颗粒混合并注射填充。
4.根据权利要求3所述的自体表皮干细胞与自体脂肪混合注射方法，其特征在于，所述自体表皮干细胞在未混合或未注射时放置于保温台保温；
所述保温台具有电池独立供电。
5.隆胸再生方法，其特征在于，包括权利要求1至4任一项所述的自体表皮干细胞与自体脂肪混合注射方法，将该方法应用于女性隆胸，其中胸大肌内皮下层、乳腺及乳腺皮下分别均匀注入。
6.丰臀再生方法，其特征在于包括权利要求5所述的隆胸再生方法，其中将胸部替换为臀部，高密度脂肪颗粒与自体表皮干细胞混合后注射于臀部。
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