CN116445367B - 改善口腔健康的戊糖片球菌jypr 9330及其菌剂和应用 - Google Patents

改善口腔健康的戊糖片球菌jypr 9330及其菌剂和应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及微生物应用技术领域,具体涉及一种改善口腔健康的戊糖片球菌JYPR 9330及其菌剂和应用。戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus)JYPR 9330于2022年8月19日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号,保藏编号为CGMCC No.25554。该菌株可以有效抑制口腔中变异链球菌的生长,服用戊糖片球菌JYPR 9330菌剂可以减少牙菌斑和牙结石形成,且停用后仍有持续抑制效果,可用于制备改善口腔健康的产品。

Description

改善口腔健康的戊糖片球菌JYPR 9330及其菌剂和应用
技术领域
本发明涉及微生物应用技术领域,具体涉及一种改善口腔健康的戊糖片球菌JYPR9330及其菌剂和应用。
背景技术
随着生活水平的不断提高,口腔健康越来越受到人们的关注。口腔里生存着多种多样的微生物,包括细菌、真菌、病毒、支原体、原虫等,其存在形式包括游离态和聚集态,游离态的微生物称为浮游微生物,聚集态的微生物主要以牙菌斑生物膜的形式存在于人的口腔。口腔里众多的微生物彼此之间处于一种平衡状态,一旦这种平衡被打破,就将导致龋齿、牙龈炎、牙周炎和口源性口臭病等多种口腔微生物疾病的发生。
口腔中大多数的致病菌存在于牙菌斑生物膜中,牙菌斑生物膜中的微生物远比游离菌难被杀灭。人们在日常生活中的口腔护理产品,多通过摩擦剂、清洁剂来清理牙面,但这些物质较难渗透到牙菌斑内部,去除口腔中的致病菌、抑制牙菌斑形成的效果不明显。当致病菌增殖引发口腔疾病时,多数患者会选择使用药物治疗,但是当口腔内致病菌产生耐药性,则需加大药量或更换药物,长期使用药物容易破坏口腔内菌群平衡,适得其反。对于已经形成实质性缺损的牙齿使用手术治疗,对口腔的伤害较大,会破坏牙齿结构。因此,目前亟需一种有效去除口腔致病菌、抑制牙菌斑形成、改善口腔健康的非药物产品。
发明内容
针对目前口腔护理产品去除致病菌、抑制牙菌斑效果较差的技术问题,本发明提供一种改善口腔健康的戊糖片球菌JYPR 9330及其菌剂和应用,有助改善口腔健康。
第一方面,本发明提供一种改善口腔健康的戊糖片球菌JYPR 9330,戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus)JYPR 9330保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号,保藏编号为CGMCC No.25554,保藏日期为2022年8月19日。
第二方面,本发明提供一种戊糖片球菌JYPR 9330菌剂,包括上述戊糖片球菌JYPR9330菌粉。
进一步的,制备方法包括:
(1)制备MRS平板培养基和MRS液体培养基;
(2)取保藏的戊糖片球菌JYPR 9330在MRS平板培养基上活化,将活化后的菌接种于MRS液体培养基中,培养获得菌液;
(3)将菌液离心后,收集菌体,使用无菌生理盐水洗涤后,重悬于复原脱脂乳中,获得悬浊液;调整悬浊液的浓度为1.0×1010~2.0×1010cfu/mL,获得菌悬液,将菌悬液冷冻干燥后,获得菌粉;将菌粉与葡萄糖混合,制成菌剂。
进一步的,步骤(1)中,MRS平板培养基的制备方法为:将原料蛋白胨10g、牛肉粉5g、三水醋酸钠5g、七水磷酸氢二钾2g、吐温80 1mL、四水硫酸锰0.05g、柠檬酸三铵2g、葡萄糖20g、七水硫酸镁0.2g、琼脂15g、蒸馏水1000mL混合后,自然pH,搅拌菌液后,在121℃、0.1MPa下灭菌20min,将灭菌后的培养基倒入平皿中,放凉后待用。
进一步的,步骤(1)中,MRS液体培养基的制备方法为:将原料蛋白胨10g、牛肉粉5g、三水醋酸钠5g、七水磷酸氢二钾2g、吐温80 1mL、四水硫酸锰0.05g、柠檬酸三铵2g、葡萄糖20g、七水硫酸镁0.2g、蒸馏水1000mL混合后,调pH为6.8,搅拌菌液后,在121℃、0.1MPa下灭菌20min,即可。
进一步的,步骤(2)中,活化后菌接种于MRS液体培养基中的接种量为1%~2%。
进一步的,步骤(2)中,培养条件为35~37℃下培养24~36h。
进一步的,步骤(3)中,复原脱脂乳的质量浓度为15%。
第三方面,本发明提供一种上述戊糖片球菌JYPR 9330在制备改善口腔健康的产品方面的应用。
进一步的,改善口腔健康的产品为抑制口腔中变异链球菌的生长的产品。
进一步的,改善口腔健康的产品为减少牙菌斑和牙结石形成的产品。
本发明的有益效果在于:
经实验验证,本发明提供的戊糖片球菌JYPR 9330可以有效抑制口腔中变异链球菌的生长,服用戊糖片球菌JYPR 9330菌剂可以减少牙菌斑和牙结石形成,且停用后仍有持续抑制效果,可用于制备改善口腔健康的产品。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案,下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍,显而易见地,对于本领域普通技术人员而言,在不付出创造性劳动的前提下,还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1是本发明实施例6中大鼠牙结石形成结果图。
具体实施方式
为了使本技术领域的人员更好地理解本发明中的技术方案,下面将结合本发明实施例中的附图,对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都应当属于本发明保护的范围。
实施例1 菌种的分离鉴定
1、菌株筛选及纯化
(1)菌株来源:酒糟,于2021年11月采集于山东省潍坊市青州市;
(2)制备样品:
①取灭菌后的0.85%生理盐水至于无菌三角瓶中,然后将1g酒糟加入其中,振荡,待用;
②对步骤①的溶液稀释制成不同浓度梯度的样品,分别为10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7,标号分别为1#、2#、3#、4#、5#、6#、7#,待用;
(3)制备MRS平板培养基:将原料蛋白胨10g、牛肉粉5g、三水醋酸钠5g、七水磷酸氢二钾2g、吐温80 1mL、四水硫酸锰0.05g、柠檬酸三铵2g、葡萄糖20g、七水硫酸镁0.2g、琼脂15g、蒸馏水1000mL混合后,自然pH,搅拌菌液后,在121℃、0.1MPa下灭菌20min,将灭菌后的培养基倒入平皿中,放凉后待用;
(4)培养:将步骤②的1#、2#、3#、4#、5#、6#、7#号溶液分别使用涂布器涂布MRS平板培养基上,于37℃、厌氧条件下培养48h;
(5)按照以下菌落特征挑选菌落:
菌落直径1~2mm,乳白色圆形菌落,表面光滑圆润、边缘整齐、不透明中间有凸起;
(6)分离纯化:根据步骤(5)的菌落特征挑取5个单菌落,采用划线法接种至MRS平板培养基上,于37℃、厌氧条件下培养48h,挑取单菌落,置于甘油管中-70℃保藏。
2、鉴定
将分离纯化后得到的单菌落送去鉴定,鉴定单位:生工生物工程(上海)股份有限公司。
(1)鉴定过程中,使用的引物如下:
27F:5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3'
1492R:5'-GGTTACCTTGTTACGACTT-3'
(2)鉴定过程中,得到菌株的基因序列如下:
CAGGATGAACGCTGGCGGCGTGCCTAATACATGCAAGTCGAACGAACTTCCGTTAATTGATTATGACGTACTTGTACTGATTGAGATTTTAACACGAAGTGAGTGGCGAACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCCAGAAGTAGGGGATAACACCTGGAAACAGATGCTAATACCGTATAACAGAGAAAACCGCATGGTTTTCTTTTAAAAGATGGCTCTGCTATCACTTCTGGATGGACCCGCGGCGTATTAGCTAGTTGGTGAGGTAAAGGCTCACCAAGGCAGTGATACGTAGCCGACCTGAGAGGGTAATCGGCCACATTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCACAATGGACGCAAGTCTGATGGAGCAACGCCGCGTGAGTGAAGAAGGGTTTCGGCTCGTAAAGCTCTGTTGTTAAAGAAGAACGTGGGTAAGAGTAACTGTTTACCCAGTGACGGTATTTAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTATCCGGATTTATTGGGCGTAAAGCGAGCGCAGGCGGTCTTTTAAGTCTAATGTGAAAGCCTTCGGCTCAACCGAAGAAGTGCATTGGAAACTGGGAGACTTGAGTGCAGAAGAGGACAGTGGAACTCCATGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGATATATGGAAGAACACCAGTGGCGAAGGCGGCTGTCTGGTCTGCAACTGACGCTGAGGCTCGAAAGCATGGGTAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCATGCCGTAAACGATGATTACTAAGTGTTGGAGGGTTTCCGCCCTTCAGTGCTGCAGCTAACGCATTAAGTAATCCGCCTGGGGAGTACGACCGCAAGGTTGAAACTCAAAAGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCTACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCTTCTGACAGTCTAAGAGATTAGAGGTTCCCTTCGGGGACAGAATGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTATTACTAGTTGCCAGCATTAAGTTGGGCACTCTAGTGAGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGACGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGATGGTACAACGAGTCGCGAGACCGCGAGGTTAAGCCAATCTCTTAAAACCATTCTCAGTTCGGACTGTAGGCTGCAACTCGCCTACACGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGAGAGTTTGTAACACCCAAAGCCGGTGGGGTAACCTTTTAGGAG
(3)鉴定结果:该菌株被鉴定为片球菌属Pediococcus,推测为戊糖片球菌Pediococcus pentosaceus
将鉴定后的菌株命名为戊糖片球菌JYPR 9330,将该菌株送至中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏,保藏信息如下;
分类命名:戊糖片球菌Pediococcus pentosaceus;保藏日期:2022年8月19日;保藏地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号,邮编:100101;保藏编号:CGMCC No.25554。
实施例2 制备戊糖片球菌JYPR 9330菌剂
(1)制备MRS平板培养基和MRS液体培养基,MRS平板培养基制备方法同实施例1,MRS液体培养基的制备方法如下:
将原料蛋白胨10g、牛肉粉5g、三水醋酸钠5g、七水磷酸氢二钾2g、吐温80 1mL、四水硫酸锰0.05g、柠檬酸三铵2g、葡萄糖20g、七水硫酸镁0.2g、蒸馏水1000mL混合后,调pH为6.8,搅拌菌液后,在121℃、0.1MPa下灭菌20min,即可。
(2)取保藏的戊糖片球菌JYPR 9330在MRS平板培养基上活化,将活化后菌按照1%的接种量接种于MRS液体培养基中,然后在37℃条件下培养24h,获得菌液;
(3)将菌液离心后,收集菌体,使用无菌生理盐水洗涤后,重悬于15%(w/w)的复原脱脂乳中,获得悬浊液;调整悬浊液的浓度为1.0×1010cfu/mL,获得菌悬液,将菌悬液冷冻干燥后,获得菌粉;将菌粉与葡萄糖混合,制成戊糖片球菌JYPR 9330菌剂;葡萄糖购自山东西王糖业有限公司。
在本实施例中,制备的菌剂中菌体数量为1.0×1010/g。
实施例3 制备戊糖片球菌JYPR 9330菌剂
(1)同实施例2步骤(1)。
(2)取保藏的戊糖片球菌JYPR 9330在MRS平板培养基上活化,将活化后菌按照2%的接种量接种于MRS液体培养基中,然后在35℃条件下培养36h,获得菌液;
(3)将菌液离心后,收集菌体,使用无菌生理盐水洗涤后,重悬于15%(w/w)的复原脱脂乳中,获得悬浊液;调整悬浊液的浓度为2.0×1010cfu/mL,获得菌悬液,将菌悬液冷冻干燥后,获得菌粉;将菌粉与葡萄糖混合,制成戊糖片球菌JYPR 9330菌剂;葡萄糖购自山东西王糖业有限公司。
在本实施例中,制备的菌剂中菌体数量为2.0×1010/g。
实施例4 戊糖片球菌JYPR 9330对牙菌斑生物膜中细菌生长的影响
变异链球菌是公认的主要致龋菌,在正常釉质表面的“健康”牙菌斑内变异链球菌的含量很低,而当个体的口腔卫生差且长期高糖饮食时,牙菌斑内的致龋菌逐渐转变为优势菌,变异链球菌的含量显著增高。血链球菌作为口腔中的常驻菌之一,可以产生血链素和H2O2,对口腔中多种致病菌均有抑制作用,抵抗外界致龋菌的定植。血链球菌与变异链球菌间具有拮抗关系,在龋病发生时,口腔中变异链球菌等致龋菌的比例增加,而血链球菌的比例降低。因此,本次实验选取变异链球菌和血链球菌作为标准菌株。
1、购买菌株及制备增菌液
(1)从中国工业微生物菌种保藏管理中心(CICC)购买变异链球菌CICC 10387,上海保藏生物技术中心(SHBCC)购买血链球菌SHBCC D24639。
(2)分别取变异链球菌CICC 10387和血链球菌SHBCC D24639的真空冻干粉,打管后用无菌吸管吸取0.5mL BHI液体培养基,于冻干管中将冻干菌粉全部溶解。将溶解后的菌悬液转移至盛有5mL BHI液体培养基的试管中混匀,将残留在吸管中的1~2滴菌悬液转接至盛有固体培养基的斜面试管中。将液体试管和斜面试管于37℃厌氧静置培养48h,以液体培养结果为准。
(3)将液体试管转接至150mL BHI液体培养基摇瓶中,37℃厌氧培养18h,获得两种标准菌株增菌液。使用分光光度计调整各菌液浓度为A550=0.25±0.05(3.0×108cfu/mL),将两菌株增菌液等量混合,得到标准菌株菌悬液,备用。
2、配制人工唾液
人工唾液配方为改良生物膜培养基BM-5,改良生物膜培养基BM-5包括猪胃黏蛋白2.5g/L,肽胨2g/L,胰酶分解酪蛋白胨1g/L,酵母提取物1g/L,氯化钾2.5g/L,葡萄糖0.5g/L,胱氨酸盐酸盐0.1g/L,氯化血红素1mg/L,磷酸氢二钾0.114g/L,磷酸二氢钾0.2g/L,其余为蒸馏水。
向人工唾液中加入10g/L蔗糖,用1mol/L氢氧化钠溶液调整pH值为7.5,121℃高压灭菌15min,备用。
3、羟基磷灰石片(HA)的制备
取32片羟基磷灰石片,一面用指甲油粘固于有孔塑料托盘孔板上,经过氧化氢低温等离子灭菌后备用。
4、搭建人工口腔模型
人工口腔使用厌氧操作台设计,由人工唾液装置、菌悬液装置、恒温连续培养室、废液装置构成。各装置间用硅胶管连接,其中人工唾液装置与菌悬液装置、人工唾液装置与恒温连续培养室、菌悬液装置与恒温连续培养室之间均安放有数显恒流泵。设置两组人工口腔模型,分别为实验组和对照组。
(1)菌悬液装置培养条件:37℃厌氧;90r/min低速搅拌,由磁力搅拌仪控制,混匀菌液;废液清除率:0.05mL/min,由流速调节器控制。
(2)恒温连续培养室条件:37℃厌氧;废液清除率:0.2mL/min,由流速调节器控制。
分别取16片羟基磷灰石片预先悬吊于2个恒温连续培养室中,均低于液面约2cm。将预先制备好的标准菌株菌悬液置于菌悬液装置中,人工唾液以0.1mL/min的流速加入菌悬液装置中,37℃厌氧培养24h,达到稳定生长状态。
5、试验处理:
对照组使用的实验试剂为去离子水,实验组使用的实验试剂为戊糖片球菌JYPR9330菌液,戊糖片球菌JYPR 9330菌液是实施例2制备的戊糖片球菌JYPR 9330菌剂1g溶于50mL去离子水制得。
将菌悬液装置与人工唾液装置接通恒温连续培养室,将菌悬液(0.1mL/min)与人工唾液(0.9mL/min)持续同时泵入恒温连续培养室中,24h后停止泵入菌悬液,继续给予人工唾液(0.2mL/min)48h。在整个恒流连续培养室培养的3天,每组每天给予2次50mL实验试剂(1mL/min),同时以相同的速率排出废液,模拟口腔吞咽作用。实验过程中废气由厌氧培养箱排出。
6、Real-time PCR检测羟基磷灰石片粘附的两种细菌数量比
(1)在连续培养的6h、24h、48h、72h分别从对照组和实验组各取出4片羟基磷灰石片,用无菌挖器刮取羟基磷灰石片表面的全部菌斑,收集到1.5mL离心管内,加入200uL浓度为20mg/mL的溶菌酶,37℃反应30min以上,充分裂解细胞壁,释放细胞内的核酸物质,继而使用微量样品基因组DNA提取试剂盒(DP316),按照试剂盒说明抽提DNA。
(2)将抽提DNA送至上海生工进行Real-time PCR检测,得到实验组在培养不同时间点两种标准菌株的菌体数量比(以对照组的菌体数量为1),结果如表1所示:
表1 戊糖片球菌JYPR 9330对牙菌斑生物膜中细菌生长的影响
*表示与对照组间的比较有统计学差异(P<0.01)。
从上表可以看出,在连续培养的6h、24h、48h、72h,与对照组相比,实验组中变异链球菌的数量减少,有统计学意义(P<0.01),说明戊糖片球菌JYPR 9330能有效抑制口腔中变异链球菌的生长。
实施例5 戊糖片球菌JYPR 9330对牙菌斑形成的影响
1、实验准备
将60只3周龄雄性Wistar大鼠(体重为40~50g)饲养于温度和湿度均恒定的屏障环境中,按12h光照-12h黑夜条件进行饲养。所有大鼠前一星期适应环境和饮食(饲喂正常水+普通饲料),之后随机分为3组,每组20只,其中一组设置为空白对照组,一组设置为牙菌斑模型组,一组设置为实验组。
实验过程中使用的普通饲料购自北京科澳协力公司,Diet 2000饲料(龋齿模型饲料,饲料代码:TP 100352D20)购自南通特洛菲饲料科技有限公司。
2、实验内容
1)空白对照组:正常饮水+普通饲料,饲喂8周。
2)牙菌斑模型组:饲喂5%蔗糖水+Diet 2000饲料,饲喂4周后,更换饲喂正常水+普通饲料,再饲喂4周。
3)实验组:饲喂5%蔗糖水+Diet 2000饲料,并在水中添加实施例2中制备的戊糖片球菌JYPR 9330菌剂(每只鼠5.0×106cfu/天,2小时内使用完毕),饲喂4周,更换饲喂正常水+普通饲料,再饲喂4周。
4)在实验的第0天、28天、56天各统计每只大鼠牙齿的牙菌斑情况1次,用菌斑显示剂对测试的牙齿进行染色并用纯水冲洗,参考改良的Quigley-Hein法对测试牙齿的牙菌斑判定评分,评分标准如下:
①牙菌斑覆盖面积:0分=牙面无菌斑;1分=牙颈部龈缘处有散在的点状菌斑;2分=牙颈部菌斑宽度不超过1mm;3分=牙颈部菌斑覆盖宽度超过1mm,但在牙面1/3以下;4分=菌斑覆盖面积占牙面1/3~2/3;5分=菌斑覆盖面积占牙面2/3以上。
②牙菌斑厚度:0分=无颜色;1分=轻度,点状或浅红色;2分=中度,红色;3分=重度,深红色。
③牙菌斑总体评分计算:覆盖面积分值×厚度分值。
每组根据测试牙齿牙菌斑总体评分计算算术平均值,得到结果如下:
表2 实验第28天和第56天大鼠牙菌斑形成评分结果
由表2可以看出,实验组在饲喂第28天时,牙菌斑评分最低,仅有0.90,牙菌斑形成率低,在停止添加实施例2中制备的戊糖片球菌JYPR 9330菌剂后,第56天牙菌斑评分仍是三组实验中最低的。与空白组相比,实验组第28天牙菌斑评分均值减少85.37%,第56天牙菌斑评分均值减少87.86%;与模型组相比,实验组第28天牙菌斑评分均值减少92.89%,第56天牙菌斑评分均值减少92.91%。由此可见,戊糖片球菌JYPR 9330菌剂对减少牙菌斑形成方面有明显效果,在停止服用后第28天,仍未形成明显牙菌斑。
实施例6 戊糖片球菌JYPR 9330对牙结石形成的影响
1、实验准备
将60只3周龄雄性Wistar大鼠(体重为40~50g)饲养于温度和湿度均恒定的屏障环境中,按12h光照-12h黑夜条件进行饲养。所有大鼠前一星期适应环境和饮食(饲喂正常水+普通饲料),之后随机分为3组,每组20只,其中一组设置为空白组,一组设置为模型组,一组设置为实验组。
实验过程中使用的普通饲料购自北京科澳协力公司,TP 100352D100饲料(牙结石造模饲料)购自南通特洛菲饲料科技有限公司。
2、实验内容
1)空白组:正常饮水+普通饲料,饲喂6周。
2)模型组:正常饮水+TP 100352D100饲料,饲喂3周,更换饲喂正常水+普通饲料,再饲喂3周。
3)实验组:正常饮水+TP 100352D100饲料,并在饮用水中添加5.0×106cfu/天的实验菌剂JYPR 9330,饲喂3周,更换饲喂正常水+普通饲料,再饲喂3周。
4)在实验第0天、21天、42天各统计大鼠牙齿的牙结石情况,结果如表3和图1所示。
表3 实验第21天和第42天形成牙结石的大鼠数量
从表3和图1可以看出,牙结石模型组在饲喂第21天时,所有大鼠均已形成牙结石;空白组在饲喂第21天,15%的大鼠形成牙结石,但是饲喂第42天,形成牙结石的大鼠数量显著增加,达到50%;实验组在饲喂第21天形成牙结石大鼠仅有1只,占5%,直到饲喂第42天,形成牙结石大鼠仍为1只。由此可见,戊糖片球菌JYPR 9330对减少牙结石形成有明显效果,在停止服用后第21天,仍未形成牙结石,抑制效果持久。
尽管通过参考附图并结合优选实施例的方式对本发明进行了详细描述,但本发明并不限于此。在不脱离本发明的精神和实质的前提下,本领域普通技术人员可以对本发明的实施例进行各种等效的修改或替换,而这些修改或替换都应在本发明的涵盖范围内/任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内,可轻易想到变化或替换,都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (8)

1. 一种改善口腔健康的戊糖片球菌JYPR 9330,其特征在于,戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus)JYPR 9330保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号,保藏编号为CGMCC No.25554,保藏日期为2022年8月19日。
2. 一种戊糖片球菌JYPR 9330菌剂,其特征在于,包括如权利要求1所述戊糖片球菌JYPR 9330的菌粉。
3. 如权利要求2所述的戊糖片球菌JYPR 9330菌剂,其特征在于,制备方法包括:
(1)制备MRS平板培养基和MRS液体培养基;
(2)取保藏的戊糖片球菌JYPR 9330在MRS平板培养基上活化,将活化后的菌接种于MRS液体培养基中,培养获得菌液;
(3)将菌液离心后,收集菌体,使用无菌生理盐水洗涤后,重悬于复原脱脂乳中,获得悬浊液;调整悬浊液的浓度为1.0×1010~2.0×1010cfu/mL,获得菌悬液,将菌悬液冷冻干燥后,获得菌粉;将菌粉与葡萄糖混合,制成菌剂。
4. 如权利要求3所述的戊糖片球菌JYPR 9330菌剂,其特征在于,步骤(2)中,活化后菌接种于MRS液体培养基中的接种量为1%~2%。
5. 如权利要求3所述的戊糖片球菌JYPR 9330菌剂,其特征在于,步骤(2)中,培养条件为35~37℃下培养24~36h。
6. 一种如权利要求1所述的戊糖片球菌JYPR 9330在制备改善口腔健康的产品方面的应用。
7.如权利要求6所述的应用,其特征在于,改善口腔健康的产品为抑制口腔中变异链球菌的生长的产品。
8.如权利要求6所述的应用,其特征在于,改善口腔健康的产品为减少牙菌斑和牙结石形成的产品。
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