CN116445361A - 一种生物炭基复合益生菌剂及其对植物抗病促生的作用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种生物炭基复合益生菌剂及其对植物抗病促生的作用。采用两种益生菌，枯草芽孢杆菌NG330和粘着剑菌CG365，以玉米秸秆生物炭为基质，制造一种生物炭基复合益生菌剂。所述枯草芽孢杆菌NG330和粘着剑菌CG365已保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号分别为：GDMCCNo.63292和GDMCCNo.63293。本发明的生物炭基复合益生菌剂，具有吸附能力强，提高益生菌的活性的功能，两种益生菌复合可以稳定地发挥作用，显著增强番茄的生长和抗病能力。该复合菌剂有助于减少化学药剂在农产品中的使用量和残留量，使用更安全，且易于工业化生产。
Description
技术领域
本发明涉及农业微生物技术领域，具体涉及一种生物炭基复合益生菌剂及其对植物抗病促生的作用。
背景技术
作为一个农业大国，我国农业在生产过程中投入了大量的化肥、农药等产品，造成土壤质量下降、环境污染、农产品农药残留等问题。为有效提升农业可持续发展能力，我国提出了“减肥、减药、增效”的农业发展口号。从自然环境中获取有益功能微生物(益生菌)，发挥益生菌对农作物的促生功能，或者提升农作物对疾病的抗病性，可以有效减少化肥和农药的使用，不会对原有生态环境造成较大的破坏，有望帮助提升农业的可持续发展能力。
生物炭是一种将农业废弃物(包括农作物秸秆，有机肥等)经高温(300-800℃)缺氧裂解后制成的炭化的生物质材料，具有多孔、疏松、比表面积大等特点。在亚马孙流域的原始土著人很早就有意地在缺氧条件下焚烧植物制成生物质炭黑，这种炭黑可以帮助他们提高农作物产量。生物炭的高吸附性和稳定性使得它可以作为微生物的载体，从而为制取微生物制剂提供帮助。基于生物炭的微生物制剂可以发挥生物炭和益生菌的不同功效，发挥协同作用促进农作物生长，或者增加其抗病能力。
单一的益生菌或者益生菌制剂具有功能相对单一，功效不稳定，抵御环境干扰能力不强的特点。这大大制约了其在实际应用中的效果。近年来，复合微生物菌群的概念越来越受到重视，不同种类的益生菌可能发挥协同作用，提升对环境干扰的能力，从而有助于保证益生菌剂的效果。但是不同种类的微生物不能简单地混合接种在培养基中进行扩大培养，这可能会带来对营养物的竞争，造成某些种类益生菌群的生长受到抑制。
发明内容
为解决上述问题，本发明提供了一种生物炭基复合益生菌剂及其制备方法和在对植物抗病促生的作用。
本发明的第一个目的是提供枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)NG330，保藏编号为GDMCCNo：63292。
枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)NG330是一株从番茄种植土壤分离筛选到的枯草芽孢杆菌，于2023年3月27日保藏于广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，地址为广东省广州市越秀区先烈中路100号大院59号楼5楼，邮编为：510070，其保藏号为：GDMCC No：63292。
本发明的第二个目的是提供粘着剑菌(Ensifer adhaerens)CG365，保藏编号为GDMCCNo：63293。
粘着剑菌(Ensifer adhaerens)CG365是一株从番茄种植土壤分离筛选到的粘着剑菌，于2023年3月27日保藏于广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，地址为广东省广州市越秀区先烈中路100号大院59号楼5楼，邮编为：510070，其保藏号为：GDMCC No：63293。
上述两种细菌可以在番茄干旱胁迫环境下生长，表明其具有较强的抗逆性和环境适应性，同时这两种细菌也可能促进宿主植物应对干旱胁迫，提高其对逆境的抗逆性。
所述枯草芽孢杆菌NG330呈杆状、圆端，多数单个，少数成对或聚团生长，革兰氏染色阳性。平板培养呈现出表面粗糙不透明菌斑，污白色或者淡黄色，边缘微皱。所述粘着剑菌CG365呈短棒装或梭状，多数对生或链状聚团生长，少数单生，革兰氏染色阴性。平板培养呈现出浅白色不透明菌株，挑取为粘稠状。
优选地，所述枯草芽孢杆菌NG330和粘着剑菌CG365的培养条件如下：温度为28-30℃，pH为6-8，摇床转速为150-200转每分。
本发明的第三个目的是提供一种生物炭基复合益生菌剂，其包括上述的枯草芽孢杆菌NG330、上述的粘着剑菌CG365和生物炭。
优选地，所述生物炭为农作物秸秆在500℃缺氧条件下进行高温裂解炭化获得的生物质炭黑。
优选地，所述农作物为玉米、水稻或小麦。
优选地，所述的生物炭基复合益生菌剂中，每种有效益生菌数不少于20亿/g，有效益生菌总数不少于100亿/g。
本发明的第四个目的是提供一种生物炭基复合益生菌剂的制备方法，包括以下步骤：将生物炭分别加入枯草芽孢杆菌NG330菌液和粘着剑菌CG365菌液中，培养后干燥制得枯草芽孢杆菌的生物炭益生菌复合物和粘着剑菌的生物炭益生菌复合物，将两种生物炭益生菌复合物混合制得生物炭基复合益生菌剂。
优选地，所述生物炭为玉米秸秆在500℃缺氧条件下进行高温裂解炭化获得的多孔的生物质炭黑。
所述生物炭和菌液的质量体积比为1g:10mL；
所述培养条件如下：温度为28-30℃，pH为6-8，摇床转速为150-200rpm，40h-48h；
所述干燥温度为37℃；
所述枯草芽孢杆菌的生物炭益生菌复合物和粘着剑菌的生物炭益生菌复合物的混合比例为质量比1:1或1:2。
优选地，包括如下步骤：
1)利用玉米、水稻、小麦等农作物秸秆作为生物质原料，收集风干粉碎的原料，进入炭化炉，经缓慢增温至500℃，在缺氧条件下进行高温裂解炭化操作，炭化2-3h，经冷却至室温，由出料管间歇出料获得生物炭。
2)对两种有益微生物-枯草芽孢杆菌NG330和粘着剑菌CG365分别进行初步培养，培养时间为18h-22h，获得初步发酵液，活菌数目约为5×108CFU/mL。
3)向两种益生菌初步发酵液中分别按0.1g/mL的剂量加入生物炭，继续培养40-48h，培养结束后，离心收集生物炭益生菌复合物，在37℃条件下烘干，将两种益生菌的生物炭益生菌复合物按质量比1:1或1:2的比例混合，使每种有效益生菌的数量不少于20亿/g，所述复合有益菌剂的总数量不少于100亿/g。
本发明的第五个目的是提供上述的生物炭基复合益生菌剂在植物抗病促生中的应用。
优选地，所述植物为番茄，所述抗病为抗疮痂病菌。
本发明的第六个目的是提供一种促进植物生长、提高其抗病能力的方法，其是使用包含上述的生物炭基复合益生菌剂的土壤种植植物。
本发明具有以下有益效果：
1)所获得的生物炭具有疏松多孔，比表面积大，有利于益生菌的吸附和保存。
2)通过实验发现，这两种细菌可以显著抑制番茄叶部病原细菌疮痂病菌的生长，分别与生物炭混合培养后制成的生物炭基复合益生菌剂，可以显著促进番茄的生长，并且可以显著提升番茄对疮痂病菌的抗性。两种益生菌的生物炭基复合益生菌剂，可以让两种益生菌发挥协同作用，增加了菌剂的功能稳定性和环境适应性。该生物炭基复合益生菌剂可以显著促进番茄的生长，生物量是对照的2.63倍；同时可以提升番茄对病原菌如疮痂病菌的抗病性，病情指数降低了55.6％。
3)这种生物炭基复合益生菌剂的使用，不但可以避免施肥和农药对环境造成的污染，而且操作简单、方便。同时，将枯草芽孢杆菌NG330和粘着剑菌CG365以及适量生物炭释放到土壤中，可以丰富土壤有益微生物区系，提升土壤肥力，改善土壤质量。
附图说明
图1是两种细菌的扫描电镜图，A,枯草芽孢杆菌B.substis NG330；B,粘着剑菌E.adhaerens CG365，标尺为5微米。
图2是枯草芽孢杆菌B.substis NG330(A)和粘着剑菌E.adhaerens CG365(B)的发酵液对病原细菌Xanthomonas campestris 10048的平板抑制效果。
图3是生物炭基复合益生菌剂对番茄抗病促生效果的统计图，(C)对照；(B)加生物炭；(S)加益生菌液；(F)加生物炭基复合益生菌剂。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本发明，但不以任何形式限制本发明。应当指出的是，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进。这些都属于本发明的保护范围。
实施例1：番茄根际细菌的分离纯化
1、分离培养基
R2A琼脂培养基(R2A固体培养基)：酵母浸出粉0.5g、蛋白胨0.5g、酪蛋白水解物0.5g、葡萄糖0.5g、可溶性淀粉0.5g、磷酸氢二钾0.3g、无水硫酸镁0.024g、丙酮酸钠0.3g、琼脂15.0g。用蒸馏水溶解定容至1L，调pH 7.2。配制好后121℃高温蒸汽灭菌20min。
2、实验步骤
(1)选择菜园土壤，土壤为红壤，pH 7.88，有机质10.23g/kg。在室内构建番茄种植体系，通过调整土壤含水量的方式，使番茄遭受一定的干旱胁迫(45％土壤持水量)。将遭受干旱的番茄植株(6周龄)拔出，抖落并收集根际土壤。
(2)土壤梯度稀释液准备。收集约5g上述根际土壤，加入到装有50mL无菌水的离心管中，200rpm振荡培养2h。静置5min后取1mL上清液加入到事先装有9mL无菌水的试管中，依次进行梯度稀释至10-2-10-7g/mL的土壤悬浮液备用。
(3)细菌分离：分别取150μL稀释好的土壤悬浮液(10-2-10-7g/mL)加入到R2A平板中用一次性塑料涂布棒均匀涂开，每个浓度设置三个重复，涂布完成后将平板倒置放于30℃恒温培养箱中培养。隔天观察平板上菌落的生长情况，挑取菌落形态不一致的单菌落在R2A平板上划线，对菌株进行纯化。
分离结果，共分离到82株细菌。
实施例2：分离得到的菌株对番茄疮痂病菌的平板拮抗实验
1、培养基
NA固体培养基：利用营养肉汤(NB)培养基(广东环凯微生物科技有限公司，产品编号022010)加入琼脂配制，pH 7.2。
2、实验步骤
2.1菌株的活化
将疮痂病菌X.campestrisACCC 10048和实施例1中的82株土壤分离细菌分别转接至NA固体培养基中，于30℃培养1-2d，备用。
2.2含菌平板的制备
挑取X.campestris ACCC 10048菌株单菌落接种到约5mLNB培养基(不含琼脂的NA培养基，pH 7.2)中，于30℃200rpm培养24h，制成约1010cfu/mL的菌悬液，吸取1mL菌悬液加入冷却至45℃左右的100mLNA培养基中，摇匀后倒板。
2.3拮抗菌初筛
分别将实施例1分离并纯化后的土壤分离细菌在NA平板上划线活化，用灭菌的枪头挑取活化的土壤分离细菌点接到含菌平板上，每个平板点接8个供试菌株，30℃培养48h，观察抑菌圈的有无，并用螺旋测微尺测量其大小，保存有抑菌圈的拮抗菌株用于复筛。
2.4平板拮抗实验-复筛
挑取初筛获得的拮抗菌株，如2.1所示方式活化后，将单菌落接入100mLNB培养基(置于250mL三角瓶)中，28℃200rpm培养48h即得拮抗菌发酵液。取150μLX.campestrisATCC10048菌株菌悬液(如2.2所示方法制备)均匀涂布于NA固体培养基上，用黄色枪头在平板上打孔，然后取100μL拮抗菌发酵液加入孔中，28℃培养1-3d，观察是否有抑菌圈出现，拍照记录结果。
3实验结果
通过筛选获得有明显抑菌圈的菌株共5株，其中菌株NG330和菌株CG365是两株拮抗效果优良的菌株。
图1为菌株NG330(A)和菌株CG365(B)的扫描电子显微镜的图片。
图2为菌株NG330(A)和菌株CG365(B)的拮抗效果图，可以看出有明显的抑菌圈出现，说明菌株NG330和菌株CG365对疮痂病菌具有显著的拮抗作用。
实施例3：分离菌株的鉴定
参考《常见细菌系统鉴定手册》(东秀珠主编，科学出版社)对分离菌株进行鉴定。试验方法如下：通过水煮法分别提取菌株NG330和菌株CG365的DNA，利用细菌的16S rDNA特异性引物27F和1492R和Taq酶对菌株NG330和菌株CG365的16S rDNA基因序列进行扩增，扩增产物经电泳分析产生约1500b左右的条带，切胶回收该条带后送苏州金唯智生物科技有限公司进行sanger测序，测序得到的序列经seqman软件拼接后获得16S rDNA序列，菌株NG330核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，菌株CG365核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。将这两株菌的16S rDNA序列提交至EzBioClode网站(https://www.ezbiocloud.net/)进行鉴定。
鉴定结果为：菌株NG330的16S rDNA序列与Bacillus subtilis subsp.stercoris的同源性达99.84％，其形态特征与Bacillus subtilis(枯草芽孢杆菌)最为相似。革兰氏染色结果为阳性，在LB、NA、R2A等培养基中均能生长良好，菌株细胞为杆状(图1A)。根据16SrDNA序列和形态特征结果，将菌株归为枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)NG330。菌株CG365的16S rDNA序列与Ensifer adhaerens的同源性达100％，其形态特征与Ensiferadhaerens最为相似。革兰氏染色结果为阴性，在LB、NA、R2A等培养基中均能生长良好，菌株细胞为短棒装或梭状(图1B)。根据16S rDNA序列和形态特征结果，将菌株归为粘着剑菌(Ensifer adhaerens)CG365。
根据鉴定结果，将菌株NG330归属为Bacillus subtilis，命名为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)NG330，于2023年3月27日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，地址为广东省广州市越秀区先烈中路100号大院59号楼5楼，邮编为：510070，其保藏号为：GDMCCNo：63292。
根据鉴定结果，将菌株CG365归属为Ensifer adhaerens，命名为粘着剑菌(Ensifer adhaerens)CG365，于2023年3月27日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，地址为广东省广州市越秀区先烈中路100号大院59号楼5楼，邮编为：510070，其保藏号为：GDMCCNo：63293。
上述2个菌株都可以从广东省微生物菌种保藏中心购买到。
实施例4：生物炭基复合益生菌剂的制备
(1)生物炭制备：取10kg玉米秸秆，风干后用粉碎机粉碎，进入炭化炉，经缓慢增温至500℃，在缺氧条件下进行高温裂解炭化操作，炭化3小时后，经冷却至室温，由出料管间歇出料获得生物炭。
(2)两种益生菌初步发酵液的制备：将枯草芽孢杆菌NG330和粘着剑菌CG365经活化(方法如实施例2步骤2.1所示)后，挑单菌落分别接入到400mLNB培养液(于1L三角瓶)中，于30℃，200rpm分别振荡培养18h和22h，得两种益生菌的初步发酵液，益生菌的数目约为5×108CFU/mL。
(3)生物炭与益生菌初步发酵液混合培养：在超净工作台，分别加入约40g已灭菌生物炭到上述的枯草芽孢杆菌NG330初步发酵液和粘着剑菌CG365初步发酵液中，继续于30℃，200rpm分别振荡培养40h和48h。培养结束后通过离心(8000×g，5min)弃上清获得生物炭益生菌复合物。
(4)生物炭基复合益生菌剂的制作：将收集枯草芽孢杆菌NG330和粘着剑菌CG365的生物炭益生菌复合物于37摄氏度恒温烘干，然后将这两种烘干物按照质量比1:1、1:2比例混合，制得生物炭基复合益生菌剂。其中每种有效益生菌的数量不少于20亿/g，所述复合有益菌剂的有效益生菌总数量不少于100亿/g。
实施例5：生物炭基复合益生菌剂对番茄的促生抗病实验
1.番茄生长基质和处理设置
共设置4种处理，包括对照(C)，加生物炭(B)，加益生菌液(S)和加生物炭基复合益生菌剂(F)。其中C处理使用无菌土壤(121℃高温蒸汽灭菌20min的菜园土壤)；B处理使用含质量分数4％的玉米秸秆生物炭(已灭菌)的无菌土壤；S处理使用无菌土壤，并给每株番茄分别浇灌4mL OD600为0.5的两种益生菌的NB培养液(用NB培养基振荡培养24小时后，稀释至OD600为0.5)，每周一次；F处理使用包含实施例4所述的按质量比1：1比例混合的生物炭基复合益生菌剂的无菌土壤，生物炭基复合益生菌剂的质量分数为4％。
2.番茄品种“红莺”育苗及移栽
将番茄种子37℃水浴2h，75％的酒精中浸泡30s，用去离子水冲洗，在5％的NaClO溶液中浸泡消毒10min，然后用去离子水冲洗干净。均匀放在铺有两层纱布的培养皿中，加入适量蒸馏水，保持种子和纱布湿润，置于28℃恒温培养箱中催芽2d。待种子萌发长出1-2mm左右胚根后，将其播种到装有珍珠岩的育苗盘中，每穴播种1粒种子，置于28℃恒温光照培养箱中继续培养，培养条件为湿度80％，光照/黑暗时长为16h/8h。培养10d后，选取长势一致的番茄幼苗，小心将幼苗从育苗盘中取出，移栽到含有不同处理的土壤或基质中。每处理10个平行植株，每个植株生长在含有100g土壤或基质的大育苗盘中，培养条件为湿度80％，光照/黑暗时长为16h/8h。
3.番茄促生效果测定
不同处理的番茄在相同环境条件下培养四周以后，每处理随机选取5植株进行破坏性采样，用直尺测量株高，用电子秤测量植株生物量，计算比生物量。比生物量＝生物量/株高。结果表明，不同处理的番茄株高均值为7.56cm到8.44cm之间，不同处理之间并无显著差异(图3A)。番茄生物量均值为2.05g到5.39g之间，其中F处理显著高于C处理和S处理(pairwise t test,P<0.05)，均值增加幅度分别为263％和186％，B处理与其他处理无显著差异，S处理和C处理无显著差异(图3B)。番茄比生物量均值为0.266g/cm到0.691g/cm之间，F处理显著高于C处理和S处理(pairwise t test,P<0.05)，B处理与显著高于C处理，S处理和C处理无显著差异(图3C)。这部分结果表明，生物炭处理本身对植株的生长有一定的促进作用，但是效果不强，加入含有复合益生菌的生物炭后，对植株生长的促生效果大大加强，而单纯浇灌益生菌液体对植株生长的促进效果较小，提示菌液浇灌不利于其在根际的定殖，而生物炭的固持有助于益生菌的定殖和功能发挥。
4.番茄疮痂病的抗病效果测定
4.1番茄疮痂病菌活化及发酵液制备
挑取疮痂病菌X.campestrisATCC 10048菌株单菌落接种到500mLNB培养基(不含琼脂的NA培养基)中，于30℃200rpm培养24h，加无菌生理盐水进行稀释，得OD600值约0.1的稀释发酵液待用。
4.2病原菌喷洒实验及病情指数
将疮痂病菌稀释发酵菌液装入洁净的喷壶中，摇匀后均匀喷洒在步骤2相同处理的，移栽在大育苗盘中的每棵植株的叶片上，每个植株共5喷。在喷洒后第3天再补喷一次。在第一次喷洒后第14天，观测每棵植株的发病情况，计算病情指数。病情以叶片为单位按0～4级进行评价。0级：无病斑；1级：病斑面积占羽状叶面积的1/4以下；2级：病斑面积占羽状叶面积的1/4～1/2；3级：病斑面积占羽状叶面积的1/2～3/4；4级：病斑面积占羽状叶面积的3/4以上或叶片枯死。发病率＝(染病株数/总株数)×100％；病情指数＝[(∑(病级×各病级叶数))/(4×总叶数)]×100％。统计每个植株的病情指数，结果表明，不同处理的病情指数均值为0.8至1.8。F处理的病情指数显著低于对照，其他各处理之间没有显著差异(pairwise t test,P<0.05)(图3D)。这部分结果预示着生物炭基复合益生菌剂比单一生物炭或者益生菌发酵液对于番茄抵抗疮痂病有着更好的促进作用。
SEQ ID NO.1(16S rDNAofBacillussubtilis NG330)
TGCAGTCGAGCGGACAGATGGGAGCTTGCTCCCTGATGTTAGCGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCTGTAAGACTGGGATAACTCCGGGAAACCGGGGCTAATACCGGATGGTTGTTTGAACCGCATGGTTCAAACATAAAAGGTGGCTTCGGCTACCACTTACAGATGGACCCGCGGCGCATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCAACGATGCGTAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCGCAATGGACGAAAGTCTGACGGAGCAACGCCGCGTGAGTGATGAAGGTTTTCGGATCGTAAAGCTCTGTTGTTAGGGAAGAACAAGTACCGTTCGAATAGGGCGGTACCTTGACGGTACCTAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCGTAAAGGGCTCGCAGGCGGTTTCTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCCCGGCTCAACCGGGGAGGGTCATTGGAAACTGGGGAACTTGAGTGCAGAAGAGGAGAGTGGAATTCCACGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATGTGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACTCTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGAGCGAAAGCGTGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAAGTGTTAGGGGGTTTCCGCCCCTTAGTGCTGCAGCTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGGTCGCAAGACTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCTCTGACAATCCTAGAGATAGGACGTCCCCTTCGGGGGCAGAGTGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGATCTTAGTTGCCAGCATTCAGTTGGGCACTCTAAGGTGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGACAGAACAAAGGGCAGCGAAACCGCGAGGTTAAGCCAATCCCACAAATCTGTTCTCAGTTCGGATCGCAGTCTGCAACTCGACTGCGTGAAGCTGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCACGAGAGTTTGTAACACCCGAAGTCGGTGAGGTAACCTTTTAGGAGCCAGCCGSEQ ID NO.2(16SrDNAofEnsifer adhaerens CG365)
GCCCCGCAAGGGGAGCGGCAGACGGGTGAGTAACGCGTGGGAATCTACCCTTTTCTACGGAATAACGCAGGGAAACTTGTGCTAATACCGTATACGCCCTTCGGGGGAAAGATTTATCGGGAAAGGATGAGCCCGCGTTGGATTAGCTAGTTGGTGGGGTAAAGGCCTACCAAGGCGACGATCCATAGCTGGTCTGAGAGGATGATCAGCCACATTGGGACTGAGACACGGCCCAAACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGGACAATGGGCGCAAGCCTGATCCAGCCATGCCGCGTGAGTGATGAAGGCCCTAGGGTTGTAAAGCTCTTTCACCGGTGAAGATAATGACGGTAACCGGAGAAGAAGCCCCGGCTAACTTCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGAAGGGGGCTAGCGTTGTTCGGAATTACTGGGCGTAAAGCGCACGTAGGCGGACATTTAAGTCAGGGGTGAAATCCCGGGGCTCAACCCCGGAACTGCCTTTGATACTGGGTGTCTAGAGTATGGAAGAGGTGAGTGGAATTCCGAGTGTAGAGGTGAAATTCGTAGATATTCGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGGCTCACTGGTCCATTACTGACGCTGAGGTGCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAATGTTAGCCGTCGGGCAGTTTACTGTTCGGTGGCGCAGCTAACGCATTAAACATTCCGCCTGGGGAGTACGGTCGCAAGATTAAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGCAGAACCTTACCAGCCCTTGACATCCCGATCGCGGATTACGGAGACGTTTTCCTTCAGTTCGGCTGGATCGGAGACAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTCGCCCTTAGTTGCCAGCATTTAGTTGGGCACTCTAAGGGGACTGCCGGTGATAAGCCGAGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAGTCCTCATGGCCCTTACGGGCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGTGGTGACAGTGGGCAGCGAGACCGCGAGGTCGAGCTAATCTCCAAAAGCCATCTCAGTTCGGATTGCACTCTGCAACTCGAGTGCATGAAGTTGGAATCGCTAGTAATCGCAGATCAGCATGCTGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGGGAGTTGGTTCT
Claims (10)
1.枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)NG330，保藏编号为GDMCCNo：63292。
2.粘着剑菌(Ensiferadhaerens)CG365，保藏编号为GDMCCNo：63293。
3.一种生物炭基复合益生菌剂，其特征在于，包括权利要求1所述的枯草芽孢杆菌NG330、权利要求2所述的粘着剑菌CG365和生物炭。
4.根据权利要求3所述的生物炭基复合益生菌剂，其特征在于，所述生物炭为农作物秸秆在500℃缺氧条件下进行高温裂解炭化获得的生物质炭黑，所述农作物为玉米、水稻或小麦。
5.根据权利要求3所述的生物炭基复合益生菌剂，其特征在于，每种有效益生菌数不少于20亿/g，有效益生菌总数不少于100亿/g。
6.一种权利要求3所述的生物炭基复合益生菌剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
将生物炭分别加入枯草芽孢杆菌NG330菌液和粘着剑菌CG365菌液中，培养后干燥制得枯草芽孢杆菌的生物炭益生菌复合物和粘着剑菌的生物炭益生菌复合物，将两种生物炭益生菌复合物混合制得生物炭基复合益生菌剂。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述生物炭为玉米秸秆在500℃缺氧条件下进行高温裂解炭化获得的多孔的生物质炭黑；所述生物炭和菌液的质量体积比为1g:10mL；所述培养条件如下：温度为28-30℃，摇床转速为150-200rpm，40h-48h；所述干燥温度为37℃；所述枯草芽孢杆菌的生物炭益生菌复合物和粘着剑菌的生物炭益生菌复合物的混合比例为质量比1:1或1:2。
8.权利要求3所述的生物炭基复合益生菌剂在植物抗病促生中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述植物为番茄，所述抗病为抗疮痂病菌。
10.一种促进植物生长、提高其抗病能力的方法，其特征在于，使用包含权利要求3所述的生物炭基复合益生菌剂的土壤种植植物。
Priority Applications (1)
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| CN202310556270.XA CN116445361A (zh) | 2023-05-17 | 2023-05-17 | 一种生物炭基复合益生菌剂及其对植物抗病促生的作用 |
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| CN202310556270.XA CN116445361A (zh) | 2023-05-17 | 2023-05-17 | 一种生物炭基复合益生菌剂及其对植物抗病促生的作用 |
Publications (1)
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