CN116429924A - 一种同时检测多种维生素的方法及其应用 - Google Patents

一种同时检测多种维生素的方法及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN116429924A
CN116429924A CN202310249214.1A CN202310249214A CN116429924A CN 116429924 A CN116429924 A CN 116429924A CN 202310249214 A CN202310249214 A CN 202310249214A CN 116429924 A CN116429924 A CN 116429924A
Authority
CN
China
Prior art keywords
vitamin
solution
hydrochloric acid
vitamins
sample
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202310249214.1A
Other languages
English (en)
Inventor
范中伟
司淑芬
李靖
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Nanjing Northern Lights Quality Inspection Technology Service Co ltd
Original Assignee
Nanjing Northern Lights Quality Inspection Technology Service Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Nanjing Northern Lights Quality Inspection Technology Service Co ltd filed Critical Nanjing Northern Lights Quality Inspection Technology Service Co ltd
Priority to CN202310249214.1A priority Critical patent/CN116429924A/zh
Publication of CN116429924A publication Critical patent/CN116429924A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/26—Conditioning of the fluid carrier; Flow patterns
    • G01N30/28—Control of physical parameters of the fluid carrier
    • G01N30/34—Control of physical parameters of the fluid carrier of fluid composition, e.g. gradient
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N2030/022—Column chromatography characterised by the kind of separation mechanism
    • G01N2030/027—Liquid chromatography
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

本发明公开了一种同时检测多种维生素的方法及其应用，能够同时检测9种维生素，包括维生素B1、B2、B3(烟酸和烟酰胺)、B5(泛酸)、B6(吡哆醇、吡哆醛、吡哆胺)和B12检测方法，用以快速高效的解决药品和保健食品里面维生素B含量。

Description

一种同时检测多种维生素的方法及其应用
技术领域
本发明属于检测领域，尤其是涉及一种多维生素检测方法。
背景技术
B族维生素是人体内糖类、脂肪、蛋白质等代谢时不可缺少的物质。B族维生素多数都溶于水，包括维生素B1、维生素B2、维生素B3、维生素B5、维生B6、维生素B12等，作为辅酶对人体内糖、脂肪和蛋白质的代谢起着至关重要的作用；B族维生素由生物活性相似但化学成分不同的化合物组成，可以以自由形式存在。目前市面上销售的药品和保健食品类别添加的维生素主要包括维生素B1、B2、B3(烟酸和烟酰胺)、B5(泛酸)、B6(吡哆醇、吡哆醛、吡哆胺)和B12，目前尚无同时检测上述9种维生素的的检测分析方法。
发明内容
本发明的目的在于针对现有技术的不足之处，旨在建立一种通用的检测维生素B1、B2、B3(烟酸和烟酰胺)、B5(泛酸)、B6(吡哆醇、吡哆醛、吡哆胺)和B12检测方法，用以快速高效的解决药品和保健食品里面维生素B含量。
本发明提供一种同时检测多种维生素的方法，所述方法采用液相色谱法，步骤包括：(1)采用盐酸水溶液处理样品，并采用盐酸水溶液作为进样溶剂；(2)进行洗脱，洗脱水相采用乙酸水溶液，有机相采用甲醇。
进一步的，采用处理样品的盐酸水溶液，0.05-0.5mol/L盐酸水溶液；优选的，进样溶剂：0.2mol/L盐酸水溶液。
进一步的，处理样品中采用超声和/或离心和/或过滤的操作。例如加入盐酸水溶液，超声超声再振摇，保证样品分散均匀，离心取上清液；并进行重复提取；然后定容后进行过滤。进一步的，定容溶液与处理样品的盐酸水溶液浓度相同或相近。
进一步的，进样溶剂：0.05-0.5mol/L盐酸水溶液；优选的，进样溶剂：0.2mol/L盐酸水溶液。
进一步的，水相：0.0.1％-0.5％乙酸水溶液；优选的，水相：0.1％乙酸水溶液；进一步的，乙酸水溶液中含有庚烷磺酸钠和三乙胺；进一步的，1-100mmol庚烷磺酸钠和0.01-1％三乙胺；优选的10mmol庚烷磺酸钠和0.1％三乙胺。
进一步的，检测波长，维生素B5:180-230nm；其他维生素：240-290nm。进一步的，维生素B5:202nm；其他维生素：266nm。
所述方法，步骤还包括：(3)标准溶液的配制检测，标准曲线的制作；(4)目标检测物的含量计算。
步骤(3)与步骤(1)、(2)并没有顺序上的严格要求；即步骤(3)在步骤(1)、(2)的任何位置进行都在本专利的保护范围之内。
本专利的有益效果：(1)通过高浓度的盐酸水溶液进行处理和进样，将目标化合物溶解在稀释液中，配合液相色谱法，能够快速地、准确地检测目标化合物的含量，专属性强、重现性好，能够弥补现有标准和其他定量的方法的不足，提高色谱柱的保留情况，并且检测目标化合物在酸性条件下更加稳定，此外，能够除去样品中可能包含的蛋白质等。(2)现有技术中没有同时能够检测9种B族维生素的方法，尤其是没有能够同时检测包含维生素B5的检测方法，原因在于，维生素B5检测波长与其他B族维生素检测波长不同，因为针对不同波长均具有良好的效果的流动相是十分重要的。而本专利洗脱水相采用乙酸水溶液，有机相采用甲醇，能够很好的匹配两种不同的波长。(3)本专利流动相中的庚烷磺酸钠和三乙胺，能够更好的稳定峰型，加强保留，提高检测的准确性和重现性。
附图说明
图1为266nm基质空白谱图；
图2为202nm基质空白谱图；
图3为标准工作溶液谱图(混标)；
图4为维生素B1的标准工作溶液谱图；
图5为维生素B2标准工作溶液谱图；
图6为维生素B12标准工作溶液谱图；
图7为吡哆胺标准工作溶液谱图；
图8为吡哆醇标准工作溶液谱图；
图9为吡哆醛标准工作溶液谱图；
图10为烟酸标准工作溶液谱图；
图11为烟酰胺标准工作溶液谱图；
图12为泛酸标准工作溶液谱图；
图13为烟酰胺浓度-峰面积的线性回归图；
图14为烟酸浓度-峰面积的线性回归图；
图15为吡哆醛浓度-峰面积的线性回归图；
图16为维生素B12浓度-峰面积的线性回归图；
图17为吡哆胺浓度-峰面积的线性回归图；
图18为吡哆醇浓度-峰面积的线性回归图；
图19为维生素B2浓度-峰面积的线性回归图；
图20为维生素B1浓度-峰面积的线性回归图；
图21为泛酸浓度-峰面积的线性回归图；
具体实施方式
为了便于本领域技术人员的理解，下面结合实施例对本发明作进一步的说明，实施方式提及的内容并非对本发明的限定。
本发明实施例提供了一种一种通用的保健食品里面维生素B1、B2、B3(烟酸和烟酰胺)、B5(泛酸)、B6(吡哆醇、吡哆醛、吡哆胺)和B12检测方法，具体如下：
液相色谱仪为沃特氏公司生产的Waters 2695，检测器为DAD检测器，具体仪器检测条件如下：
(1)色谱柱：ZORBAX Eclipse Plus C18 4.6mm×250mm，5μm；
(2)流速：1mL/min；
(3)柱温：30℃；
(4)进样量：20μL；
(5)检测波长：
维生素B5:202nm；
其他维生素：266nm
(6)有机相：甲醇；
(7)水相：0.1％乙酸水溶液(10mmol庚烷磺酸钠和0.1％三乙胺)；
(8)进样溶剂：0.2mol/L盐酸水溶液
(9)梯度洗脱：条件如下：
表1梯度洗脱的条件
时间(min) 有机相(％) 水相(％)
0 2 98
3 2 98
35 80 20
40 80 20
41 2 98
45 2 98
标准工作溶液的制备方法：
取标准品适量，精密称定，置于10mL容量瓶中，加0.2mol/L盐酸溶液定容，得到标准品储备液(其中维生素B2、烟酸、烟酰胺、吡哆醇、吡哆醛和吡哆胺需要按照国标要求做浓度校正)，浓度分别为维生素B1：0.5488mg/ml、维生素B2:1.617mg/ml、烟酸：0.5308mg/ml、烟酰胺：0.5458mg/ml、维生素B5(泛酸)：1.176mg/ml、吡哆醇:1.132mg/ml、吡哆醛:0.443mg/ml、吡哆胺:0.499mg/ml和维生素B12:1.050mg/ml；取标准品储备液0.2mL，混匀涡旋2min，得到标准品中间液；并配置标准工作溶液的浓度范围分别为：维生素B1：4.57～91.467μg/ml、维生素B2:13.47～269.5μg/ml、烟酸：4.42～86.47μg/ml、烟酰胺：4.54～90.97μg/ml、维生素B5(泛酸)：9.8～196μg/ml、吡哆醇:9.03～180.67μg/ml、吡哆醛:3.69～73.83μg/ml、吡哆胺:4.158～83.166μg/ml和维生素B12:8.75～175μg/ml；
待测样品溶液的制备方法：称取样品5g(可以根据样品中目标化合物的添加量做调整)于50mL塑料离心管中，加入15mL0.2mol/L的盐酸水溶液，常温超声10min，再振摇，保证样品分散均匀，离心5min(转速3500r/min)，取上清液置于50mL棕色容量瓶；重复提取两次，用0.2mol/L盐酸水溶液溶液定容至刻度，经0.45μm有机相滤膜过滤后待测。
按照上述条件和操作步骤，对目标化合物的分析方法做确认，确认的参数包括：1选择性/专属性/特异性；2线性范围；3检出限，定量限；4样品的检测
选择性/专属性/特异性：
上述仪器分析条件下，对基质空白(266nm和202nm)、标准品进行了检测，基质空白对目标物的分析无干扰，并且液相色谱目标物维生素B1：23.701min、维生素B2：19.604min、维生素B12：16.110min、吡哆胺：16.907min、吡哆醇：17.666min、吡哆醛：13.848min、烟酸：4.037min、烟酰胺：9.558min和泛酸：10.1841min，此方法对目标化合物的检出良好。
线性范围
以对照品浓度c(μg/mL)为横坐标,以各对照品的峰面积Area为纵坐标，绘制标准各对照品的标准曲线，计算得出各目标化合物的浓度-峰面积的线性回归方程和相关系数。
本方法的线性范围分别为：维生素B1：4.57～91.467μg/ml、维生素B2:13.47～269.5μg/ml、烟酸：4.42～86.47μg/ml、烟酰胺：4.54～90.97μg/ml、维生素B5(泛酸)：9.8～196μg/ml、吡哆醇:9.03～180.67μg/ml、吡哆醛:3.69～73.83μg/ml、吡哆胺:4.158～83.166μg/ml和维生素B12:8.75～175μg/ml；线性系数均满足大于0.99的要求。
方法检出限，定量限
分析结果：以3倍的信噪比为检出限，10倍的信噪比为定量限，检出限分别为：方法检出限为维生素B1：0.656μg/ml、维生素B2:2.560μg/ml、烟酸：0.033μg/ml、烟酰胺：0.121μg/ml、维生素B5(泛酸)：2.940μg/ml、吡哆醇:1.189μg/ml、吡哆醛:0.358μg/ml、吡哆胺:0.249μg/ml和维生素B12:1.151μg/ml；
定量限分别为维生素B1：2.184μg/ml、维生素B2:8.525μg/ml、烟酸：0.109μg/ml、烟酰胺：0.403μg/ml、维生素B5(泛酸)：9.790μg/ml、吡哆醇:3.959μg/ml、吡哆醛：1.192μg/ml、吡哆胺:0.829μg/ml和维生素B12:3.833μg/ml。
样品检测
随机检测市面上出售的3种添加了多种维生素B的保健产品.做检测，结果如下,RSD均＜5％。
表2市售产品的检测情况
Figure BDA0004127155030000071
Figure BDA0004127155030000081
由表2可知，本专利的检测方法实际应用在市售的产品中，具有很好的准确性。
本技术领域技术人员可以理解，除非另外定义，这里使用的所有术语(包括技术术语和科学术语)，具有与本发明所属领域中的普通技术人员的一般理解相同的意义。还应该理解的是，诸如通用字典中定义的那些术语，应该被理解为具有与现有技术的上下文中的意义一致的意义，并且除非像这里一样被特定定义，否则不会用理想化或过于正式的含义来解释。
应当理解，以上借助优选实施例对本发明的技术方案进行的详细说明是示意性的而非限制性的。本领域的普通技术人员在阅读本发明说明书的基础上可以对各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。

Claims (8)

1.一种同时检测多种维生素的方法，所述方法采用液相色谱法，其特征在于，步骤包括：(1)采用盐酸水溶液处理样品，并采用盐酸水溶液作为进样溶剂；(2)进行洗脱，洗脱水相采用乙酸水溶液，有机相采用甲醇。
2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，采用处理样品的盐酸水溶液，0.05-0.5mol/L盐酸水溶液；优选的，进样溶剂：0.2mol/L盐酸水溶液。
3.根据权利要求1所述方法，其特征在于，进样溶剂：0.05-0.5mol/L盐酸水溶液；优选的，进样溶剂：0.2mol/L盐酸水溶液。
4.根据权利要求1所述方法，其特征在于，水相：0.0.1％-0.5％乙酸水溶液；优选的，水相：0.1％乙酸水溶液；进一步的，乙酸水溶液中含有庚烷磺酸钠和三乙胺；进一步的，1-100mmol庚烷磺酸钠和0.01-1％三乙胺；优选的10mmol庚烷磺酸钠和0.1％三乙胺。
5.根据权利要求1所述方法，其特征在于，检测波长，维生素B5:180-230nm；其他维生素：240-290nm。进一步的，维生素B5:202nm；其他维生素：266nm。
6.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤还包括：(3)标准溶液的配制检测，标准曲线的制作；(4)目标检测物的含量计算。
7.根据权利要求1所述方法，其特征在于，处理样品中采用超声和/或离心和/或过滤。
8.如权利要求1-7之一的方法在药品或保健食品检测中的应用。
CN202310249214.1A 2023-03-15 2023-03-15 一种同时检测多种维生素的方法及其应用 Pending CN116429924A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202310249214.1A CN116429924A (zh) 2023-03-15 2023-03-15 一种同时检测多种维生素的方法及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202310249214.1A CN116429924A (zh) 2023-03-15 2023-03-15 一种同时检测多种维生素的方法及其应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN116429924A true CN116429924A (zh) 2023-07-14

Family

ID=87086398

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202310249214.1A Pending CN116429924A (zh) 2023-03-15 2023-03-15 一种同时检测多种维生素的方法及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN116429924A (zh)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN106770865B (zh) 一种银杏叶提取物中有机酸含量测定方法
CN106248853B (zh) 测定复方氨基酸注射液的降解杂质蛋氨酸亚砜的含量的方法
Ding et al. Determination of cyanide in bamboo shoots by microdiffusion combined with ion chromatography–pulsed amperometric detection
CN110632203A (zh) 一种同步快速检测维生素a、维生素d3和维生素e的方法
CN106610410B (zh) 一种鱼肉及其制品中生物胺的检测方法
CN108627581B (zh) 一种小儿七星茶颗粒中钩藤碱和异钩藤碱含量测定方法
CN110320301B (zh) 一种含有机铬的预混料中喹乙醇的检测方法
CN113358776A (zh) 一种hplc同时检测nmn中多种有关物质的方法
CN109142597A (zh) 一种检测猪血浆中替米考星的前处理方法
CN106841408A (zh) 一种氨基酸注射液中蛋氨酸亚砜的快速检测方法
CN107271588B (zh) 一种超高效液相色谱测定b族维生素的方法
CN112858531A (zh) 一种杜仲叶及其提取物hplc特征图谱建立方法
CN109709222B (zh) 一种感冒灵和复方感冒灵的成分检测方法
CN116429924A (zh) 一种同时检测多种维生素的方法及其应用
CN115372497B (zh) 一种小活络丸中6种生物碱成分的含量测定方法
CN111693615B (zh) 同时测定烟酸、维生素b1、b6和泛酸的分析方法
CN102749394A (zh) 一种果蔬组织及其相关制品中还原型抗坏血酸和异抗坏血酸的分离测量的方法
CN111189934B (zh) 啤酒中b族维生素的检测方法
CN113156035B (zh) 一种特殊医学用途配方食品中全反式维生素a含量测定的方法
Kim Development of an Ion‐Pairing Reagent and HPLC‐UV Method for the Detection and Quantification of Six Water‐Soluble Vitamins in Animal Feed
CN110596279A (zh) 一种干酪中生物胺的检测方法
CN108627605B (zh) 一种发酵肉制品中酪胺含量的检测方法
Amritkar et al. Single-Laboratory Validation of AOAC Official Method 2011.10 for Vitamin B12 in ‘Indian’Infant and Pediatric Formulas and Adult Nutritionals
CN107917886B (zh) 测定广金钱草总黄酮中总糖含量的方法
CN111830150B (zh) 一测多评法测定新塔花中黄酮类成分含量的方法及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination