CN116421494A - 肌肽锌与谷胱甘肽锌联用在美白和/或抗衰中的应用 - Google Patents

肌肽锌与谷胱甘肽锌联用在美白和/或抗衰中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了肌肽锌与谷胱甘肽锌联用在美白和/或抗衰中的应用。本发明首次发现，肌肽锌与谷胱甘肽锌联合使用具有优异的美白和抗衰功效，且对皮肤安全无刺激，因此本发明将两者联用，在美白抗衰方面发挥两者协同增效的作用，不仅提供了肌肽锌与谷胱甘肽锌的新用途，还为美白和/或抗衰产品提供了一种新选择。

Description

肌肽锌与谷胱甘肽锌联用在美白和/或抗衰中的应用
技术领域
本发明属于化妆品技术领域。更具体地，涉及肌肽锌与谷胱甘肽锌联用在美白和/或抗衰中的应用。
背景技术
随着社会经济的发展和生活水平的提高，人们对美的追求也越来越高。从根本上美白、淡化色斑，不仅是爱美人士的护肤追求，更是化妆品行业研发工作关注的焦点。
随着年龄的增长，大多数人会出现皮肤衰老的情况，通常表现为皮肤松弛和产生皱纹。其中，皮肤松弛的表现为皮下组织脂肪层开始变得松弛而欠缺弹性，耳垂到下巴的面部线条开始变得松弛，颧骨上的皮肤也不再饱满紧致；产生皱纹的表现为眼角长出细纹、鱼尾纹，面部的最高点逐渐往下移动，出现法令纹、抬头纹以及脖颈处的皱褶等。因此，皮肤的紧致和抗皱成为当前人们抗衰的首要选择。
肌肽锌，作为营养补充剂行列的物质之一，不仅可用于治疗溃疡，帮助伤口愈合，还可用于保护胃黏膜，减少胃肠损伤，在医药临床上已被广泛应用，但却鲜有用于化妆品领域。谷胱甘肽锌是谷胱甘肽与锌离子结合得到的有机金属化合物，在化妆品领域也鲜有应用。虽然有现有技术公开了肌肽锌在制备具有紫外线屏蔽和抗炎作用的防晒剂中的应用，但目前尚未见肌肽锌与谷胱甘肽锌联用的相关报道，更未见这两者联用在化妆品领域，尤其是在皮肤美白或抗衰方面的相关应用。
发明内容
本发明针对现有技术的不足，旨在提供肌肽锌与谷胱甘肽锌联用在美白和/或抗衰中的应用，或在制备美白和/或抗衰产品中的应用，为肌肽锌与谷胱甘肽锌联用在化妆品领域提供了一种新应用。
本发明的目的之一是提供一种美白抗衰组合物。
本发明的又一目的是提供上述美白抗衰组合物在制备美白和/或抗衰产品中的应用。
本发明的另一目的是提供一种美白抗衰精华液。
本发明的另一目的是提供上述精华液的制备方法。
本发明的另一目的是提供上述精华液在美白和/或抗衰中的应用，或在制备美白和/或抗衰产品中的应用。
本发明的另一目的是提供谷胱甘肽锌在美白中的应用，或在制备美白产品中的应用。
本发明的另一目的是提供肌肽锌在抗衰中的应用，或在制备抗衰产品中的应用。
本发明的另一目的是提供谷胱甘肽锌在提升肌肽锌抗衰功效或制备肌肽锌抗衰增效剂中的应用。
本发明的另一目的是提供肌肽锌在提升谷胱甘肽锌美白功效或制备谷胱甘肽锌美白增效剂中的应用。
本发明上述目的通过以下技术方案实现：
本发明首次发现将肌肽锌与谷胱甘肽锌(GSH-Zn)结合得到的组合物具有优异的美白和抗衰功效，且对皮肤安全无刺激，适用于制备美白和/或抗衰产品，因此，肌肽锌与谷胱甘肽锌联用在美白和/或抗衰中的应用或在制备美白和/或抗衰产品中的应用，包含肌肽锌与谷胱甘肽锌的美白抗衰组合物，以及该美白抗衰组合物在制备美白和/或抗衰产品中的应用均应在本发明的保护范围之内。
优选地，肌肽锌与谷胱甘肽锌的质量比为0.5～2：0.5～2，进一步优选为1：0.5～2，最优选为1：1。
优选地，所述产品为精华液、啫喱、乳液、面膜或面霜。
优选地，所述美白抗衰组合物在美白和/或抗衰产品中的用量占比为0.1～0.4wt％，最优选为0.2wt％。
本发明还提供了一种美白抗衰精华液，具体包含水相1、水相2，pH为5.0～7.0；其中，所述水相1含有肌肽锌0.1～0.4wt％、谷胱甘肽锌0.1～0.4wt％，余量为水；所述水相2含有保湿剂7～15wt％、增稠剂0.01～0.03wt％、增溶剂0.1～0.3wt％，余量为水。
优选地，所述水相1含有肌肽锌0.1～0.3wt％、谷胱甘肽锌0.1～0.2wt％，余量为水。最优选地，所述水相1含有肌肽锌0.2wt％、谷胱甘肽锌0.2wt％，余量为水。
优选地，所述水相2含有保湿剂8～12wt％、增稠剂0.01～0.02wt％、增溶剂0.1～0.2wt％，余量为水。最优选地，所述水相2含有保湿剂10wt％、增稠剂0.02wt％、增溶剂0.1wt％，余量为水。
优选地，所述水相2还含有香精0.05～0.1wt％、防腐剂0.1～0.3wt％。最优选地，所述水相2含有香精0.1wt％、防腐剂0.2wt％。
优选地，水相2中，所述保湿剂为海藻糖、甜菜碱、丁二醇的一种或几种。
进一步优选地，所述海藻糖、甜菜碱、丁二醇的质量比为1～3：4～8：2～4。
优选地，水相2中，所述增稠剂包括但不限于羧甲基纤维素钠(CMC-Na)。
优选地，水相2中，所述增溶剂为氢化蓖麻油、聚丙二醇、聚氧乙烯硬化蓖麻油中的一种或几种。加入增溶剂是为了提高精华液的透明度和稳定性。
优选地，水相2中，所述香精包括但不限于艾纳香油。
优选地，水相2中，所述防腐剂为对羟基苯乙酮、羟苯甲酯、苯氧乙醇中的一种或几种。
优选地，所述水相1与水相2的质量比为0.8～1.2：0.8～1.2，最优选为1：1。
此外，本发明还提供了上述精华液的制备方法，包括如下步骤：
S1.制备水相1：将配方量的肌肽锌、谷胱甘肽锌加入水中，混匀；
S2.制备水相2：将保湿剂、增稠剂、增溶剂、任选的香精、任选的防腐剂加入水中，混匀；
S3.将S1所得水相1与S2所得水相2混匀后，加入pH调节剂至pH 5.0～7.0。
优选地，S2所述制备水相2为：将保湿剂、增稠剂加入水中，加热混匀，降温后依次加入增溶剂、香精，冷却后加入防腐剂，混匀；
优选地，S2所述加热为加热至70～90℃，最优选为80℃。
优选地，S2所述降温为降温至50～70℃，最优选为60℃。
优选地，S2所述冷却为冷却至20～30℃，最优选为25℃。
优选地，S3所述pH调节剂为三乙醇胺、乳酸、醋酸中的一种或几种。
上述精华液具有优异的抗衰和美白功效，且对皮肤安全无刺激。此外，谷胱甘肽锌具有优异的美白功效，肌肽锌具有优异的抗衰(抗皱和紧致)功效，且谷胱甘肽锌可提升肌肽锌的抗衰功效，肌肽锌可提升谷胱甘肽锌的美白功效。因此，上述精华液在美白和/或抗衰中的应用、或在制备美白和/或抗衰产品中的应用，谷胱甘肽锌在美白中的应用、或在制备美白产品中的应用，肌肽锌在抗衰中的应用、或在制备抗衰产品中的应用，谷胱甘肽锌在提升肌肽锌抗衰功效或制备肌肽锌抗衰增效剂中的应用，以及肌肽锌在提升谷胱甘肽锌美白功效或制备谷胱甘肽锌美白增效剂中的应用均应在本发明的保护范围之内。
本发明具有以下有益效果：
本发明首次发现肌肽锌与谷胱甘肽锌联合使用具有优异的美白和抗衰功效，且对皮肤安全无刺激，为美白和/或抗衰产品提供了一种新选择，也为肌肽锌与谷胱甘肽锌提供了一种新应用。
具体实施方式
以下结合具体实施例来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。
除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。
实施例1谷胱甘肽锌具有美白的功效
(1)谷胱甘肽锌的制备
按照还原型谷胱甘肽：去离子水为1：20的质量比，将还原型谷胱甘肽加入去离子水中，加热至沸腾，冷却至4℃，加入到反应器中，搅拌至明显涡流，得谷胱甘肽溶液；按照还原型谷胱甘肽：氯化锌＝1：1.2的摩尔比称取氯化锌，将氯化锌加入到10倍质量比的去离子水中，搅拌溶解得氯化锌溶液；将氯化锌溶液滴加入到谷胱甘肽溶液中，搅拌螯合3h，制得谷胱甘肽锌溶液；将得到的谷胱甘肽锌溶液置于-45℃冻干2h，再在350μbar、-5℃的条件下冻干8h，然后在5℃和20℃分别干燥1h后得到谷胱甘肽锌冻干粉。
(2)黑色素抑制率实验
将生长于DMEM培养基、处于对数生长期的B16F10细胞，以1×105个/mL的密度接种于6孔板中，每孔2mL，分为样品组、阴性对照组、GSH阳性对照组和α-熊果苷阳性对照组，每组均设立3个复孔。
将上述6孔板置于37℃、5％CO2浓度的CO2培养箱中孵育24h后，弃去上清液，样品组中加入2mL样品溶液(含0.00078125mg/mLGSH-Zn的PBS溶液)；阴性对照组以DEME培养基代替样品溶液；GSH阳性对照组以含0.2mg/mLGSH的PBS溶液代替样品溶液；α-熊果苷阳性对照组以含0.4mg/mLα-熊果苷的PBS溶液代替样品溶液。
将样品组、阴性对照组、GSH阳性对照组和α-熊果苷阳性对照组在37℃、5％CO2浓度的CO2培养箱中培养72h，弃去上清液，PBS洗涤两遍，吸去PBS，每孔加入200μL0.25％胰酶溶液消化细胞，放入5％CO2、37℃的CO2培养箱中消化5分钟。分两次加入2mLPBS吹打细胞，将细胞放入离心管中，4000rpm离心5min，弃去上清液，于沉淀中加入200μL含有10％ DMSO的1mol/L NaOH溶液，振摇均匀，放入80℃水浴中加热1小时。冷却后，离心下管壁液滴，吹打均匀，吸取各离心管中的150μL溶液，移入96孔板中，酶标仪检测各孔405nm波长处吸光度。
样品的黑色素生成抑制率(I)按以下公式计算：
Figure SMS_1
式中：T为样品孔吸光度的3次平均值；C为阴性对照组吸光度的3次平均值；C0为含有10％ DMSO的1mol/L NaOH溶液吸光度的3次平均值。
结果如表1所示，其中，统计学分析p<0.05表示与阴性对照组相比，该组有显著差异。
表1谷胱甘肽锌的美白功效测试结果
测试样品 GSH-Zn GSH α-熊果苷
浓度(mg/mL) 0.00078125 0.2 0.4
黑色素生成抑制率/％ 31％ 15％ 15％
P值 ＜0.01 ＜0.05 ＜0.05
结果 显著 显著 显著
可见，谷胱甘肽锌(GSH-Zn)即使在显著低于谷胱甘肽(GSH)和α-熊果苷的浓度下，仍保持有显著高于GSH和α-熊果苷的黑色素生成抑制率，表明谷胱甘肽锌更易结合于酪氨酸酶的活性中心，具有更优异的美白功效，可用于制备优异的美白产品。
实施例2肌肽锌具有抗衰的功效
(1)肌肽锌具有抗皱功效
筛选正常发育的受精后96小时的斑马鱼，随机分配到6孔板中，每孔30条。分为空白对照组和4个样品组，每组设置3个复孔。在不伤害幼鱼的情况下除去6孔板中的斑马鱼培养水，空白对照组中加入斑马鱼培养水3mL；样品组分别加入0.05wt％、0.1wt％、0.2wt％的肌肽锌溶液和0.1wt％的肌肽溶液各3mL。盖上培养面板，在28.5℃的生化培养箱中避光孵育24h。其中，肌肽锌和肌肽溶液均采用斑马鱼培养水配制。
采用RNA快速提取试剂盒提取各组斑马鱼总RNA，并合成cDNA；采用荧光定量PCR仪检测，记录各组内参基因(β-actin)、目的基因Colla1a的qPCR检测的Ct值；根据下述公式计算各组样品的基因相对表达量。
RNA相对表达量＝2ΔΔct，
ΔΔCt＝ΔCt(空白对照组)-ΔCt(样品)，
ΔCt＝Ct(目的基因)-Ct(β-actin)。
结果如表2所示，其中，统计学分析p＜0.05表示与空白对照组相比，该组有显著差异。样品组与空白对照组对比，若胶原蛋白基因Collala的相对表达量增加，则可证明样品具有抗皱功效。
表2肌肽锌的抗皱功效测试结果
品名 浓度 Collala基因表达量 P值 结果
肌肽锌 0.05wt％ 1.82 ＜0.001 显著
肌肽锌 0.1wt％ 2.29 ＜0.0001 显著
肌肽锌 0.2wt％ 2.31 ＜0.0001 显著
肌肽 0.1wt％ 1.39 ＜0.05 显著
可见，肌肽锌的Collala基因表达量显著高于肌肽，表明肌肽锌具有优异的抗皱功效，且显著优于肌肽。此外，当肌肽锌的浓度为0.05～0.1wt％时，其抗皱功效随浓度增加而增强；而在0.1～0.2wt％时，其抗皱功效无明显变化，表明肌肽锌的最适添加浓度为0.1wt％。
(2)肌肽锌具有紧致功效
筛选正常发育的受精后96小时的斑马鱼，随机分配到6孔板中，每孔30条。分为空白对照组和4个样品组，每组设置3个复孔。在不伤害幼鱼的情况下除去6孔板中的斑马鱼培养水，空白对照组中加入斑马鱼培养水3mL；样品组分别加入0.05wt％、0.1wt％、0.2wt％的肌肽锌溶液和0.1wt％的肌肽溶液各3mL。盖上培养面板，在28.5℃的生化培养箱中避光孵育24h。其中，肌肽锌和肌肽溶液均采用斑马鱼培养水配制。
采用RNA快速提取试剂盒提取各组斑马鱼总RNA，并合成cDNA；采用荧光定量PCR仪检测，记录各组内参基因(β-actin)、目的基因elnl的qPCR检测的Ct值；根据下述公式计算各组样品的基因相对表达量。
RNA相对表达量＝2ΔΔct，
ΔΔCt＝ΔCt(空白对照组)-ΔCt(样品)，
ΔCt＝Ct(目的基因)-Ct(β-actin)。
结果如表3所示，其中，统计学分析p＜0.05表示与空白对照组相比，该组有显著差异。样品组与空白对照组对比，若弹性蛋白基因elnl的相对表达量增加，则可证明样品具有紧致功效。
表3肌肽锌的紧致功效测试结果
品名 浓度 elnl基因表达量 P值 结果
肌肽锌 0.05wt％ 2.02 ＜0.001 显著
肌肽锌 0.1wt％ 2.34 ＜0.0001 显著
肌肽锌 0.2wt％ 2.36 ＜0.0001 显著
肌肽 0.1wt％ 1.53 ＜0.05 显著
可见，肌肽锌的elnl基因表达量显著高于肌肽，表明肌肽锌具有优异的紧致功效，且显著优于肌肽。此外，当肌肽锌的浓度为0.05～0.1wt％时，其紧致功效随浓度增加而增强；而在0.1～0.2wt％时，其紧致功效无明显变化，表明肌肽锌的最适添加浓度为0.1wt％。
综上，肌肽锌具有极佳的抗皱和紧致功效，可用于制备优异的抗衰产品。
实施例3～7、对比例1～12组合物的功效
(1)组合物的制备
根据表4中各组分及其用量，将配方量的各原料加入到水中，搅拌均匀，得到组合物，避光保存。
表4实施例3～7、对比例1～12各组分及其用量(wt％)
Figure SMS_2
(2)抗衰、美白效果测试
选取170名30～50岁皮肤状态接近的女性作为受试者，分成17组，每组10人，每组分别用实施例3～7、对比例1～12制得的组合物。
第0天，受试者洗净面部后，在温度25℃、RH 50％～60％的环境中待30min，再利用VISA-CR进行面部皱纹测试和面部斑点测试，得到初次评分数据D0。
第0天起，受试者每晚洗净面部后涂抹组合物，每天涂抹一次，连续使用30天，并在第30天洗净面部后，用VISA-CR进行面部皱纹测试和面部斑点测试，得到评分数据D30。
需要说明的是，每组D0和D30均为该组对应数值的平均值，经仪器软件计算反映使用组合物前后面部的皱纹和斑点改善情况，评分越低表示改善效果越差，ΔD＝D30-D0，反映组合物对皮肤的改善情况。
表5组合物的美白抗衰功效测试结果
Figure SMS_3
Figure SMS_4
由表5可知，实施例3～7的美白抗衰功效均显著优于对比例1～12，其中实施例3的美白抗衰功效最佳，即当组合物中肌肽锌与谷胱甘肽锌的含量均为0.1wt％时，其功效最佳。
实施例8肌肽锌、谷胱甘肽锌、美白抗衰组合物对皮肤安全
挑选30名志愿者(男6人，女24人，年龄20～52岁，平均年龄32.32±8.94岁)。
采用封闭型斑贴试验方法，分别将0.025mL0.1wt％肌肽锌水溶液、0.025mL0.1wt％谷胱甘肽锌水溶液和0.025mL美白抗衰组合物(含有0.1wt％肌肽锌和0.1wt％谷胱甘肽锌的水溶液)置于斑试器小室内，作为受试组；并以不添加任何物质的小室作为空白对照组。外用低致敏胶带贴敷于志愿者前臂曲侧，24h后去除受试样品，分别于去除后0.5、24、48h观察皮肤反应，按《化妆品安全技术规范》(2015年版)中的皮肤反应分级标准(如表6所示)记录其结果，结果如表7所示。
表6皮肤反应分级标准
Figure SMS_5
Figure SMS_6
表7斑贴试验结果
Figure SMS_7
结合表6和表7可知，在斑贴试验下，使用并去除0.1wt％肌肽锌水溶液、0.1wt％谷胱甘肽锌水溶液和美白抗衰组合物0.5h、24h和48h后，志愿者皮肤均呈阴性反应，表明本发明的肌肽锌、谷胱甘肽锌和美白抗衰组合物对皮肤均无刺激。
应用例1、应用对比例1～3精华液的安全性和功效
一、应用例1、应用对比例1～3精华液的制备
(1)应用例1：
S1.称取等质量的肌肽锌、谷胱甘肽锌，加入到水中，配制得到肌肽锌和谷胱甘肽锌质量百分比均为0.2wt％的溶液，得到水相1。
S2.将2wt％海藻糖、4wt％甜菜碱、4wt％丁二醇、0.02wt％羧甲基纤维素钠依次加入水中，加热至80℃，搅拌均匀后，降温至60℃；依次加入0.1wt％的氢化蓖麻油和0.1wt％的艾纳香油，搅拌均匀，降温至25℃；加入0.2wt％的对羟基苯乙酮，搅拌混合均匀备用，得到水相2；其中，水相2中各组分的百分比为对应组分在水相2中的质量百分比。
S3.将S1所得水相1与S2所得水相2按照1：1的质量比混合，加入1wt％的乳酸调节pH为6.0，制得精华液。
(2)应用对比例1：
同应用例1，区别在于本应用对比例的水相1中未加入肌肽锌和谷胱甘肽锌。
(3)应用对比例2：
同应用例1，区别在于本应用对比例的水相1中仅加入0.2wt％的肌肽锌。
(4)应用对比例3：
同应用例1，区别在于本应用对比例的水相1中仅加入0.2wt％的谷胱甘肽锌。
二、应用例1精华液的安全性评价
按照实施例8的封闭型斑贴试验方法和皮肤反应分级标准，对应用例1制得的精华液进行安全性评价。
在使用并去除精华液0.5h、24h和48h后，观察所有志愿者的皮肤反应，发现志愿者的皮肤均呈阴性反应，表明本发明的精华液对皮肤无刺激。
三、应用例1、应用对比例1～3精华液的抗衰、美白效果测试
选取40名30～50岁的女性作为受试者，分成4组，每组10人，每组分别用应用例1、应用对比例1～3制得的精华液。
第0天，受试者洗净面部后，在温度25℃、RH 50％～60％的环境中待30min，再利用VISA-CR进行面部皱纹测试和面部斑点测试，得到初次评分数据D0。
第0天起，受试者每晚洗净面部后涂抹精华液，每天涂抹一次，连续使用30天，并在第30天洗净面部后，用VISA-CR进行面部皱纹测试和面部斑点测试，得到评分数据D30。
需要说明的是，每组D0和D30均为该组对应数值的平均值，经仪器软件计算反映使用精华液前后面部的皱纹和斑点改善情况，评分越低表示改善效果越差，ΔD＝D30-D0，反映精华液对皮肤的改善情况。
表8精华液的美白抗衰功效测试结果
Figure SMS_8
Figure SMS_9
由表8可知，应用例1的皱纹和斑点改善情况均显著优于应用对比例1～3，表明含有本发明美白抗衰组合物(肌肽锌+谷胱甘肽锌)的精华液具有优异的美白抗衰功效。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.肌肽锌与谷胱甘肽锌联用在美白和/或抗衰中的应用，或在制备美白和/或抗衰产品中的应用。
2.一种美白抗衰组合物，其特征在于，包含肌肽锌与谷胱甘肽锌。
3.根据权利要求2所述组合物，其特征在于，肌肽锌与谷胱甘肽锌的质量比为0.5～2：0.5～2。
4.权利要求2或3任一所述美白抗衰组合物在制备美白和/或抗衰产品中的应用。
5.根据权利要求4所述应用，其特征在于，所述产品为精华液、啫喱、乳液、面膜或面霜。
6.一种美白抗衰精华液，其特征在于，包含水相1、水相2，pH为5.0～7.0；其中，所述水相1含有肌肽锌0.1～0.4wt％、谷胱甘肽锌0.1～0.4wt％，余量为水；所述水相2含有保湿剂7～15wt％、增稠剂0.01～0.03wt％、增溶剂0.1～0.3wt％，余量为水。
7.权利要求6所述精华液的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1.制备水相1：将配方量的肌肽锌、谷胱甘肽锌加入水中，混匀；
S2.制备水相2：将保湿剂、增稠剂、增溶剂加入水中，混匀；
S3.将S1所得水相1与S2所得水相2混匀后，加入pH调节剂至pH 5.0～7.0。
8.权利要求6所述精华液在美白和/或抗衰中的应用，或在制备美白和/或抗衰产品中的应用。
9.谷胱甘肽锌在美白中的应用，或在制备美白产品中的应用。
10.肌肽锌在抗衰中的应用，或在制备抗衰产品中的应用。
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