CN116406746A - 含菌酶协发酵食用菌副产品的生长育肥猪饲料及制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种含菌酶协发酵食用菌副产品的生长育肥猪饲料及制备方法，包括以下原料：玉米、豆粕、玉米、石粉、磷酸氢钙、氯化钠、菌酶协同发酵处理食用菌副产品、生长育肥猪用复合预混料；菌酶协同发酵处理食用菌副产品包括以下原料：食用菌副产品、豆粕、糖蜜、菌液、酶和水。本发明的有益效果：弥补饲料资源严重不足的问题，同时降低养殖成本，开发出一种低成本、营养丰富、健康的饲料，食用菌副产品本身的营养价值充分挖掘和利用；将其包含的半纤维素、纤维素和木质素等物质转化为菌类多糖、生物腐殖酸、有机酸和酸溶蛋白等营养物质，提高其营养物质含量，改善适口性，促进消化吸收。
Description
技术领域
本发明属于生物发酵饲料技术领域，尤其涉及一种含菌酶协发酵食用菌副产品的生长育肥猪饲料及制备方法。
背景技术
随着我国正式开启绿色养殖时代，生物发酵饲料也逐渐得到广泛的关注和应用。我国是世界上食用菌生产第一大国，每年的食用菌副产物产量也十分巨大，如菌糠、菇脚等，现有技术中如果处理不当，不仅会造成资源浪费，还会污染环境。
食用菌副产品价格低廉，营养物质含量丰富，包含大量的粗纤维、蛋白质、氨基酸、微量元素和维生素等，这些都是畜禽生长发育所必须的营养物质，目前多数直接用做饲料的载体或者填充物，价值没有被充分挖掘。如果直接饲喂适口性差，影响采食量，同时食用菌副产品中含有的木质纤维结构限制了饲喂单胃动物的可能，所以我们需寻找一种合适的方法解决这些问题。
市场现有少数食用菌副产品应用方案，主要通过发酵的方式，提取菌菇素，作为饲料添加剂应用在饲料上，但因其成本高，不能作为大宗原料，大比例应用到饲料中。对于食用菌副产物的应用处理数量小，性价比不好，有应用的局限性。还有的食用菌副产品应用方案，虽然经过了发酵处理，但因为菌种选择、菌种组方的不同，发酵底物中与菌菇副产品复配的其它原料选择及组方的不同，以及发酵处理工艺及过程控制的不同，导致最终可利用的产物和价值是不同的。大多还是食用菌副产品本身价值的应用，没有完全挖掘出食用菌副产品作为有益菌的培养基的价值，没有使得有益菌以一定比例、数量合理扩繁，没有产生足够数量的菌菇多糖、有机酸、复合酶、生物腐殖酸及抗菌肽等。并且现有对食用菌副产品的处理方案，常常在饲料中应用效果有限，小比例在饲料中添加，能降低些饲料成本，但超过一定比例后，对动物的生产性能容易带来负面的影响，使用效果与添加比例之间，是二次曲线的关系。
生猪在生长育肥阶段，不仅要提供适宜的生存环境，还要满足猪的营养需要，优质的饲料是确保生长育肥效果的关键。我们需要寻求和充分挖掘利用新的地产资源含菌酶协同发酵食用菌副产品饲料资源的价值，解决此突出矛盾。
发明内容
为解决上述问题，本发明提供一种含菌酶协发酵食用菌副产品的生长育肥猪饲料及制备方法，弥补饲料资源严重不足的问题，同时降低养殖成本，开发出一种低成本、营养丰富、健康的饲料。
本发明的技术方案：一种含菌酶协发酵食用菌副产品的生长育肥猪饲料，其特征在于包括以下的原料：玉米、豆粕、玉米DDGS、石粉、磷酸氢钙、氯化钠、菌酶协同发酵处理食用菌副产品、生长育肥猪用复合预混料。
优选地，包括以下质量份数的原料：玉米57-67、豆粕12-18、玉米DDGS 7-11、石粉0.5-2、磷酸氢钙0.5-2、氯化钠0.5-2、菌酶协同发酵处理食用菌副产品8-12、生长育肥猪用复合预混料、生长育肥猪用复合预混料1-2，生长育肥猪用复合预混料包括以下质量份数的原料：植酸酶0.01-0.03、猪矿物质0.10-0.15、猪维生素0.03-0.06、70％L-赖氨酸硫酸盐0.2-0.3、60％氯化胆碱0.02-0.05、抗氧化剂0.005-0.02、沸石粉0.3-0.5、稻壳粉0.3-0.5
优选地，包括以下质量份数的原料：玉米62.08、豆粕15.00、玉米DDGS 9.32、石粉0.88、磷酸氢钙0.87、氯化钠0.35、菌酶协同发酵处理食用菌副产品10.00、生长育肥猪用复合预混料1.50，生长育肥猪用复合预混料包括以下质量份数的原料：植酸酶0.02、猪矿物质0.12、猪维生素0.05、70％L-赖氨酸硫酸盐0.26、60％氯化胆碱0.03、抗氧化剂0.01、沸石粉0.45、稻壳粉0.48。
优选地，菌酶协同发酵处理食用菌副产品包括以下质量份数的原料：食用菌副产品58-68、豆粕8-14、糖蜜4-5、菌液3-4、酶2-3和水12-18。
优选地，菌液为液体扩繁产生的菌液，液体扩繁产生的菌液包括以下质量份数的原料：水91-97，甘蔗糖蜜4-5，菌粉0.2-1。
优选地，液体扩繁产生的菌液的液体发酵条件：菌粉菌株为粪肠球菌≥1×109CFU/g，丁酸梭菌≥1×107CFU/g。
优选地，菌粉的菌株品种及数量：枯草芽孢杆菌≥0.8×108CFU/g，地衣芽孢杆菌≥0.5×108CFU/g，粪肠球菌≥1×108CFU/g，酿酒酵母≥0.8×108CFU/g。
优选地，饲料营养指标用质量份数表示为：水分11-14、粗蛋白13-19、粗脂肪3-4、粗纤维4-5、粗灰分5-6、钙0.5-1、磷0.5-、食盐0.5-1、总赖氨酸0.8-15，饲料营养代谢能3275kcal/kg。
优选地，菌酶协同发酵处理食用菌副产品的技术指标用质量份数表示为：水分18-22，粗蛋白18-22，粗纤维6-7，粗灰分6-7，钙0.2-1，磷0.1-1，赖氨酸0.2-1，酸溶性蛋白(占粗蛋白质)26-36；生物腐植酸,3-7，粪肠球菌1.5×109CFU/kg，酿酒酵母9×108CFU/kg，枯草芽孢杆菌6.5×108CFU/kg，地衣芽孢杆菌8×108CFU/kg，丁酸梭菌5×108CFU/kg。
一种含菌酶协发酵食用菌副产品的生长育肥猪饲料制备方法，其特征在于包括以下步骤：
步骤一：按配方领料投入原料并粉碎，至待配料仓；
步骤二：按配方比例配置原料，进行混合机混合，至待制粒仓；
步骤三：按制粒工艺进行产品调质、制粒、冷却、筛分出颗粒产品。
其中，步骤一中的原料包括菌酶协同发酵处理食用菌副产品；
制备菌酶协同发酵处理食用菌副产品包括以下步骤；
步骤A：提前将酶制剂溶于水中稀释溶解；
步骤B：按照比例计算原料用量，混合顺序是食用菌副产品、豆粕与水先混合，再加糖蜜、菌液和酶制剂溶进混合机；
步骤C：将混合好的物料移到发酵池中，物料堆积、压实，进行厌氧发酵；
步骤D：发酵结束后进行烘干粉碎。
本发明有益效果是：
(1)应用合适的菌种组方和发酵工艺及发酵过程控制，把食用菌副产品本身的营养价值充分挖掘和利用。将其包含的半纤维素、纤维素和木质素等物质转化为菌类多糖、生物腐殖酸、有机酸和酸溶蛋白等营养物质，提高其营养物质含量，改善适口性，促进消化吸收，使其适于饲喂单胃动物。
(2)利用菌酶协同，固液联用的发酵技术，以食用菌副产品及组方原料作为培养基，获得大量的有益菌、菌体蛋白，以及产生大量的具有抑菌效果的生物腐殖酸、有机酸、生物酶、抗菌肽等产物。
(3)获得的发酵产物，体外实验就要具有很好的抑制大肠杆菌和金黄色葡萄球菌等有害菌的效果。
(4)本申请涉及的“一种含菌酶协同发酵处理食用菌副产品的生长育肥猪饲料”，在猪场的田间试验中要与传统的使用抗生素促生长的饲料相比，有效提高生长育肥猪的抗病力，改善猪舍环境，提高饲料转化率，显著提高生长育肥猪的生产性能。
(5)本申请涉及的“一种含菌酶协同发酵处理食用菌副产品的生长育肥猪饲料”营养丰富，适口性好，含有大量蛋白质及动物生长所必需的微量元素及复合维生素，促进猪的生长发育，且生产成本低，性价比更好；并且添加的菌酶协同发酵食用菌副产品中含有丰富的有益微生物，能够抑制病原微生物的生长和繁殖，调控机体微生态平衡，增强机体免疫力。
(6)本申请涉及的“一种含菌酶协同发酵处理食用菌副产品的生长育肥猪饲料”含有丰富的有机酸，能降低肠道pH，杀菌、防腐，调控胃肠道的菌群平衡，有利于有益菌的繁殖生长，抑制大肠杆菌等有害菌的数量，调节动物体内微环境；包含丰富的菌体蛋白，与植物蛋白相比，菌体蛋白中氨基酸比例更加均衡，更易被畜禽吸收利用；
(7)本申请涉及的饲料通过对地产资源食用菌副产品的利用，减少资源浪费，减轻环境污染，减缓我国饲料原料资源匮乏带来的压力，降低养殖成本，提高养殖经济效益的目的。
附图说明
图1是本发明的一种含菌酶协发酵食用菌副产品的生长育肥猪饲料制备方法流程图。
图2是本发明实施例5的一种含菌酶协发酵食用菌副产品的生长育肥猪饲料制备方法的发酵工艺流程图。
图3是本发明实施例5的一种含菌酶协发酵食用菌副产品的生长育肥猪饲料制备方法的生产工艺流程图。
图4是本发明的一种含菌酶协发酵食用菌副产品的生长育肥猪饲料的细菌OD630值曲线图。
具体实施方式
下面结合附图对本发明的具体实施方式做出说明。
一种含菌酶协发酵食用菌副产品的生长育肥猪饲料，包括以下的原料：玉米、豆粕、玉米DDGS、石粉、磷酸氢钙、氯化钠、菌酶协同发酵处理食用菌副产品、生长育肥猪用复合预混料。
包括以下质量份数的原料：玉米57-67、豆粕12-18、玉米DDGS 7-11、石粉0.5-2、磷酸氢钙0.5-2、氯化钠0.5-2、菌酶协同发酵处理食用菌副产品8-12、生长育肥猪用复合预混料、生长育肥猪用复合预混料1-2。
包括以下质量份数的原料：玉米62.08、豆粕15.00、玉米DDGS 9.32、石粉0.88、磷酸氢钙0.87、氯化钠0.35、菌酶协同发酵处理食用菌副产品10.00、生长育肥猪用复合预混料1.50，生长育肥猪用复合预混料包括以下质量份数的原料：植酸酶0.02、猪矿物质0.12、猪维生素0.05、70％L-赖氨酸硫酸盐0.26、60％氯化胆碱0.03、抗氧化剂0.01、沸石粉0.45、稻壳粉0.48。
菌酶协同发酵处理食用菌副产品包括以下质量份数的原料：食用菌副产品58-68、豆粕8-14、糖蜜4-5、菌液3-4、酶2-3和水12-18。
菌液为液体扩繁产生的菌液，液体扩繁产生的菌液包括以下质量份数的原料：水91-97，甘蔗糖蜜4-5，菌粉0.2-1。
液体扩繁产生的菌液的液体发酵条件：菌粉菌株为粪肠球菌≥1×109CFU/g，丁酸梭菌≥1×107CFU/g。
菌粉的菌株品种及数量：枯草芽孢杆菌≥0.8×108CFU/g，地衣芽孢杆菌≥0.5×108CFU/g，粪肠球菌≥1×108CFU/g，酿酒酵母≥0.8×108CFU/g。
饲料营养指标用质量份数表示为：水分11-14、粗蛋白13-19、粗脂肪3-4、粗纤维4-5、粗灰分5-6、钙0.5-1、磷0.5-、食盐0.5-1、总赖氨酸0.8-15，饲料营养代谢能3275kcal/kg。
菌酶协同发酵处理食用菌副产品的技术指标用质量份数表示为：水分18-22，粗蛋白18-22，粗纤维6-7，粗灰分6-7，钙0.2-1，磷0.1-1，赖氨酸0.2-1，酸溶性蛋白(占粗蛋白质)26-36；生物腐植酸,3-7，粪肠球菌1.5×109CFU/kg，酿酒酵母9×108CFU/kg，枯草芽孢杆菌6.5×108CFU/kg，地衣芽孢杆菌8×108CFU/kg，丁酸梭菌5×108CFU/kg。
一种含菌酶协发酵食用菌副产品的生长育肥猪饲料制备方法，其特征在于包括以下步骤：
步骤一：按配方领料投入原料并粉碎，至待配料仓；
步骤二：按配方比例配置原料，进行混合机混合，至待制粒仓；
步骤三：按制粒工艺进行产品调质、制粒、冷却、筛分出颗粒产品。
其中，步骤一中的原料包括菌酶协同发酵处理食用菌副产品；
制备菌酶协同发酵处理食用菌副产品包括以下步骤；
步骤A：提前将酶制剂溶于水中稀释溶解；
步骤B：按照比例计算原料用量，混合顺序是食用菌副产品、豆粕与水先混合，再加糖蜜、菌液和酶制剂溶进混合机；
步骤C：将混合好的物料移到发酵池中，物料堆积、压实，进行厌氧发酵；
步骤D：发酵结束后进行烘干粉碎。
实施例1
一种含菌酶协发酵食用菌副产品的生长育肥猪饲料，包括以下的原料：玉米、豆粕、玉米DDGS、石粉、磷酸氢钙、氯化钠、菌酶协同发酵处理食用菌副产品、生长育肥猪用复合预混料。
生长育肥猪用复合预混料包括植酸酶、猪矿物质、猪维生素、70％L-赖氨酸硫酸盐、60％氯化胆碱、抗氧化剂、沸石粉、稻壳粉。
实施例2
一种含菌酶协发酵食用菌副产品的生长育肥猪饲料，包括以下质量份数的原料：玉米57-67、豆粕12-18、玉米DDGS 7-11、石粉0.5-2、磷酸氢钙0.5-2、氯化钠0.5-2、菌酶协同发酵处理食用菌副产品8-12、生长育肥猪用复合预混料1-2；生长育肥猪用复合预混料包括以下质量份数的原料：植酸酶0.01-0.03、猪矿物质0.10-0.15、猪维生素0.03-0.06、70％L-赖氨酸硫酸盐0.2-0.3、60％氯化胆碱0.02-0.05、抗氧化剂0.005-0.02、沸石粉0.3-0.5、稻壳粉0.3-0.5。
实施例3
一种含菌酶协发酵食用菌副产品的生长育肥猪饲料，包括以下质量份数的原料：玉米62.08、豆粕15.00、玉米DDGS 9.32、石粉0.88、磷酸氢钙0.87、氯化钠0.35、菌酶协同发酵处理食用菌副产品10.00、生长育肥猪用复合预混料1.50；生长育肥猪用复合预混料包括以下质量份数的原料：植酸酶0.02、猪矿物质0.12、猪维生素0.05、70％L-赖氨酸硫酸盐0.26、60％氯化胆碱0.03、抗氧化剂0.01、沸石粉0.45、稻壳粉0.48。
菌酶协同发酵处理食用菌副产品包括以下质量份数的原料：食用菌副产品58-68、豆粕8-14、糖蜜4-5、菌液3-4、酶2-3和水12-18。
菌液为液体扩繁产生的菌液，液体扩繁产生的菌液包括以下质量份数的原料：水91-97，甘蔗糖蜜4-5，菌粉0.2-1。
液体扩繁产生的菌液的液体发酵条件：菌粉菌株为粪肠球菌≥1×109CFU/g，丁酸梭菌≥1×107CFU/g。
菌粉的菌株品种及数量：枯草芽孢杆菌≥0.8×108CFU/g，地衣芽孢杆菌≥0.5×108CFU/g，粪肠球菌≥1×108CFU/g，酿酒酵母≥0.8×108CFU/g。
饲料营养指标用质量份数表示为：水分11-14，粗蛋白13-19，粗脂肪3-4，粗纤维4-5，粗灰分5-6，钙0.5-1，磷0.5-1，食盐0.5-1，总赖氨酸0.8-15，饲料营养代谢能3275kcal/kg。
菌酶协同发酵处理食用菌副产品的技术指标用质量份数表示为：水分18-22，粗蛋白18-22，粗纤维6-7，粗灰分6-7，钙0.2-1，磷0.1-1，赖氨酸0.2-1，酸溶性蛋白(占粗蛋白质)26-36；生物腐植酸,3-7，粪肠球菌1.5×109CFU/kg，酿酒酵母9×108CFU/kg，枯草芽孢杆菌6.5×108CFU/kg，地衣芽孢杆菌8×108CFU/kg，丁酸梭菌5×108CFU/kg。
实施例4
一种含菌酶协发酵食用菌副产品的生长育肥猪饲料
本生长育肥猪饲料配方如下(其中的发酵处理食用菌副产品含量为10％)：
生长育肥猪饲料原料配比：玉米62.08％、豆粕15.00％、玉米DDGS 9.32％、石粉0.88％、磷酸氢钙0.87％、氯化钠0.35％、菌酶协同发酵处理食用菌副产品10.00％、生长育肥猪用复合预混料1.50％；
菌酶协同发酵处理食用菌副产品原料配比(其中液体扩繁产生的菌液占比3.3％)：
食用菌副产品63.80％、豆粕11.20％、糖蜜4.60％、菌液3.30％、酶2.10％和水15.00％；液体扩繁的菌液的原料组成和发酵条件控制(其中菌粉用量为3公斤/吨)。
水：甘蔗糖蜜：菌粉＝94.7:5:0.3。
菌粉菌株为粪肠球菌≥1×109CFU/g，丁酸梭菌≥1×107CFU/g
菌粉中菌株品种及数量：
枯草芽孢杆菌≥0.8×108CFU/g，地衣芽孢杆菌≥0.5×108CFU/g，粪肠球菌≥1×108CFU/g，酿酒酵母≥0.8×108CFU/g.
生长育肥猪饲料营养指标：
水分13.00％，粗蛋白16.50％，粗脂肪3.10％，粗纤维4.60％，粗灰分5.90％，钙0.63％，磷0.55％，食盐0.50％，总赖氨酸1.00％，代谢能3275kcal/kg；
菌酶协同发酵处理食用菌副产品的技术指标：
水分20.00％，粗蛋白20.10％，粗纤维6.40％，粗灰分6.01％，钙0.30％，磷0.20％，赖氨酸0.35％，酸溶性蛋白(占粗蛋白质)31.41％；粪肠球菌1.5×109CFU/kg，酿酒酵母9×108CFU/kg，枯草芽孢杆菌6.5×108CFU/kg，地衣芽孢杆菌8×108CFU/kg，丁酸梭菌5×108CFU/kg，生物腐植酸5％。
实施例5
一种含菌酶协发酵食用菌副产品的生长育肥猪饲料制备方法，包括以下
步骤1：原料准备：配方原料投入粉碎后，按配方比例投入称量，需要菌液、糖蜜、水(按照40％水份计算)
步骤2：菌液发酵：
做菌液前，用清水将发酵罐内清洗干净；
按照比例准确称发酵培养基加入发酵罐内，然后向发酵罐内加入冷水将物料浸没，通蒸汽到水中，将冷水加热到95℃以上，浸泡培养基30分钟；
30min后，按照计划做菌液量加入适当的水，并通入蒸汽，调节水温在37℃，开启搅拌，使培养基混合均匀；
按照总水量的1‰添加乳酸菌粉，密封发酵罐，搅拌一分钟后关闭搅拌，静置发酵；发酵8小时左右后，开启搅拌，搅拌15分钟，关闭搅拌；发酵16小时左右后，开启搅拌，搅拌15分钟，关闭搅拌，静止发酵。发酵24后结束发酵，可使用生产，并取样送到品管部检测pH值。培养温度：最好保持35～37℃左右。
培养时间：在20～24小时左右(pH值在4.5以下为最佳)；
整个发酵过程要做好记录。
步骤3：发酵食用菌副产品的生产步骤：
提前将酶制剂溶于水中稀释溶解。
按照比例(即水分为40％)计算原料用量，混合顺序是食用菌菇副产品、豆粕与水先混合，再加糖蜜、菌液和酶制剂溶进混合机，混合时间为45～60s。
将混合好的物料移到发酵池中，初步堆积高度为200cm左右。初步堆积结束后，人力或用工具将物料压实到185～190cm左右，表面铺平后盖上薄膜(冬季需加盖保温被)，插上温度计，厌氧发酵72h～96h。
发酵结束后进行烘干粉碎。
步骤4：生长育肥猪饲料生产步骤：
按原料配方领料投入原料并粉碎，至待配料仓。
按配方比例配置原料，进行混合机混合，至待制粒仓。
按制粒工艺进行产品调质、制粒、冷却、筛分出颗粒产品。
实施例6
除实施例5的方案外还包括以下技术方案：
液体扩繁阶段，菌种发酵罐需保持温度36-38摄氏度，静置发酵20-2小时；
发酵完成后现场检测菌液pH≤4.5为合格；原料粉碎细度：全部过3.0mm筛网；
混合均匀度：变异系数CV≤8％；
发酵槽发酵起始温度：控制在28-36摄氏度；发酵槽发酵时间：发酵时间72小时；
发酵槽结束温度：结束温度在46-50摄氏度；
烘干温度控制：烘干温度控制450-500摄氏度。
技术指标比对
(1)本发明通过筛选出不同作用的菌，利用不同菌种之间的互作效应，采用多菌联合和发酵的方法，同时复合菌种按照“双向发酵”的要求与相应的原料形成“组合”，实现既有利于菌种的生长，又有利于基质中功能物质的转化工艺流程。
对于筛选出来的菌的特性、产物、效果以及本发明的产品应用效果的描述如下：
宽温乳酸菌的产酸能力，可抑制吲哚等有害物的积累，降低PH值，抑制有害菌增值；可以产生各种消化酶将大分子物质分解为小肽、葡萄糖等小分子物质，提高饲料的营养价值；改善饲料风味，进一步促进饲料的消化吸收，本发明筛选出在宽温范围内生长性能良好的W3乳酸菌，50℃培养48h菌液pH为4.3，相较于其他菌液PH 4.6左右，更接近于猪胃内环境，同时相对于乳酸菌传统的发酵温度为37℃，50℃更加接近于饲料制粒温度70-75℃，更有利于在饲料生产中保持稳定，提高饲料品质。
产酶芽孢杆菌是好氧菌，在发酵过程中能消化大量的氧气，促进厌氧乳酸菌的生长，芽孢杆菌在饲料发酵过程中能够分泌多种酶，包括蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶等，这些酶类能将饲料中的大分子营养物质分解成小分子物质，提高饲料利用率，促进营养物质消化吸收。本发明筛选出产蛋白酶性能较佳的M1芽孢菌，透明圈菌落直径比为2.6，相较于其他直径比2.2、2.14等，产酶量更高。
耐酸耐高温酵母菌富含多种酶、维生素、氨基酸、蛋白质等营养成分，能够增加饲料的营养物质，改善适口性，促进饲料的消化吸收。本发明筛选出耐酸耐高温效果最佳的JM3酵母菌，酵母菌的正常生长pH在4.5-5.5，但较低的pH可抑制杂菌的生长，JM3酵母菌在pH大于2.0后生长性能良好；在低温范围内，温度越高，酶反应越快，酵母菌的生长代谢加快，可以加速底物发酵，提高发酵效率，当温度升高到一定程度时，继续升温会加速酶的失活，表现出酵母菌易衰老、发酵周期变短，菌种可利用率降低，一般来说酵母菌的适宜温度为37℃，而JM3酵母菌的耐温效果最好，能达到40-45℃，且更加接近饲料制粒温度70-75℃，更有利于保证饲料的质量。
抑菌芽孢杆菌能产生抗生素、细菌素、细胞降解酶及抗菌蛋白等多种代谢产物，能抑制病原菌的毒害作用，抑制病原菌的生长繁殖。抑菌丁酸梭菌是一种梭状革兰氏阳性菌，能产生多种酶，还可以通过发酵水解碳水化合物最终产生丁酸、乙酸、乳酸等，能够有效抑制肠道中的致病菌，尤其是丁酸，是肠道上皮细胞修复和再生的主要物质，能促进肠道发育，增强机体免疫力。本发明通过抑菌评估方法-牛津杯法，筛选出对革兰氏阴性、阳性均有抑制作用的丁酸梭菌CB5和抑制革兰氏阳性菌的芽孢菌Y3、抑制革兰氏阴性菌Y10作为组合抑菌发酵菌种，抑菌菌种组合使用，可大大提升发酵样品的抑菌性能，减少致病菌在肠道中的定植，从而提高猪的生长性能和免疫性能。
食用菌副产品中有香菇、金针菇、黑木耳、玉米粉、棉籽壳、米糠、木屑、麦皮、玉米芯、碳酸钙、石灰，包含丰富的粗纤维、蛋白质、氨基酸、碳水化合物、维生素、微量元素等营养物质，但其水分含量高、在常温下极易腐败，其纤维木质结构也会影响单胃动物的采食，尤其是菌糠，其主要组成为木质纤维结构，木质纤维素主要由约40％纤维素、30％左右木质素和23％左右半纤维素组成，导致其适口性差。本发明利用不同菌种之间的互作效应，采用多菌联合和发酵的方法，利用菌酶协同发酵技术处理食用菌副产品，将纤维素、半纤维素等转化成菌类多糖、有机酸、菌体蛋白等营养物质，能够显著提高粗蛋白、粗脂肪含量，降低中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维的含量，乳酸含量显著升高，降低PH，提高了饲料的品质。
(2)本发明的含菌酶协发酵食用菌副产品的生长育肥猪饲料抑菌效果更好。
1抑菌效果评价
利用菌酶协同发酵食用菌副产品的生长猪育肥饲料，包含大量的益生菌，能抑制大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等有害菌的生长繁殖，促进有益菌的生长，能够调节肠道菌群平衡，本项目评价了公司生产的生物发酵原料(自产)和其他3个厂家生产生物发酵原料(竞品)之间对大肠杆菌的体外抑菌效果。
1.1试验菌株
大肠杆菌(O141∶K88)、金黄色葡萄球菌(ATCC29213)由天津市农业科学院畜牧兽医研究所保存和提供。
1.2对照药物
硫酸阿米卡星粉末(产品批号：S17045-250mg；CAS#39831-55-5)购自上海源叶生物科技有限公司。
1.3试剂耗材
LB肉汤，青岛高新园海博生物技术有限公司；哥伦比亚血琼脂平板，比克曼生物科技有限公司；氯化钠，天津市赢达稀贵化学试剂厂。
1.4仪器设备
超净工作台、恒温培养箱和恒温振荡器、分析天平、高压灭菌器、酶标仪。
1.5.试验方法
1.5.1菌液制备
用灭菌生理盐水将冻干的大肠杆菌K88菌种稀释后接种于哥伦比亚血琼脂平板，37℃恒温培养18h，选取4-5个菌落接种于10mL LB肉汤，37℃180rpm振荡培养12h，备用。
1.5.2对照药物溶液配制
用分析天平称取5.12mg硫酸阿米卡星标准品粉末置于容量瓶内，加入去离子水定容至1mL，配置浓度为5120μg/mL的储存液，应用0.22μm过滤器过滤除菌，分装至1.5mL EP管中，-20℃保存备用。
1.5.3待测样品溶液配制
分别精确称取待测样品各50.00g，按1∶3(m/v)比例使用去离子水溶解待测样品，振荡摇匀30min，10000rpm离心15min，取上清液121℃灭菌20min，再次离心，取上清液，存放于4℃冰箱中。
1.5.4 4种生物发酵原料样品对大肠杆菌K88的体外抑菌效果测定
(1)取10mL待测发酵饲料溶液于50mL LB肉汤中，使待测溶液的终浓度为4％，摇动混匀作为待测样品试验组；同时设待测样品对照组、菌液对照组、对照药物组和空白对照组，分别加入10mL的待测溶液、灭菌生理盐水、AMK溶液、灭菌生理盐水。
(2)分别吸取500μL大肠杆菌K88菌液接种至待测样品试验组、菌液对照组和对照药物组的LB肉汤混悬液中，摇动混匀，具体如下。混匀后各组取样用于测定0h的初始OD630nm值。
(3)将接种后的各组混悬液置于恒温振荡器中，37℃180rpm震荡培养8h。
(4)每隔1h取样，测定OD 630nm并记录，每个样品设置3个重复，计算得到样品的OD630nm平均值绘制曲线图。
计算方式：OD630平均值＝((待测样品试验组OD630值-待测样品对照组OD630值)+重复1值+重复2值)/3。
1.6公司生产的生物发酵原料(自产)和其他3个厂家生产发酵原料(竞品)之间对大肠杆菌K88株的体外抑菌效果测定结果。
两次重复试验测定结果显示，大肠杆菌K88株对照组培养物OD630值随着时间增长逐渐增大；对照药物组杀菌OD630值未发生明显变化(见表1、表2)。
待测试验组竞品1、竞品2、竞品3和自产生物发酵原料分别与大肠杆菌K88株混合后进行培养，通过细菌OD630值曲线可以看出四种饲料样品均具有不同程度的抑菌效果，其中自产生物发酵原料抑菌效果最明显(见图2)。
在相同的试验条件下，作用0～4h时，4种样品的抑菌效果从强到弱关系：自产生物发酵原料＞竞品2＞竞品3＞竞品1；作用5～8h时，4种样品的抑菌效果从强到弱关系：自产发酵原料＞竞品3＞竞品2＞竞品1(见表1、表2)(见图4)。
1.7结论
4种生物发酵原料样品对大肠杆菌K88株均具有体外抑菌作用。在相同的试验条件下，自产发酵原料抑菌效果最好，其次为竞品2和竞品3，抑菌效果最不明显的是竞品1。
表1生物发酵原料对大肠杆菌K88体外抑菌试验菌液OD630值
表2生物发酵原料对大肠杆菌K88体外抑菌试验菌液OD630值(重复试验)
(3)本发明“一种含菌酶协同发酵处理食用菌副产品的生长育肥猪饲料”，在猪场的田间试验中要与传统的使用抗生素促生长的饲料相比，显著提高生长育肥猪的生产性能。具体表现在以下方面：
1有效提高饲料的营养价值：通过饲料发酵处理后，饲料中的大分子蛋白转化为小肽，部分纤维素转化为功能性成分，显著提高营养物质利用率；大豆寡糖、蛋白酶抑制剂、胰蛋白酶抑制因子、植酸等抗营养因子被降解，降低了毒害作用；
2增加饲料的适口性：通过微生物作用使饲料产生特殊的酸香味；
3增强肠道黏膜免疫功能，提高抗病力：经检测复合发酵料中的乳酸菌和芽孢杆菌的菌群数量达到4×108CFU/kg以上，改善了猪消化道菌群、增强肠道黏膜免疫功能，提高抗病力；大幅降低腹泻、便秘等消化道疾病的发病率；
4有效降低饲料有害菌污染和体内氧化导致的病变：饲料中产生的乳酸等有机酸具有很强的抑菌作用和抗氧化功能；
5提高育肥猪的平均日增重，降低饲料的料肉比，降低了饲养成本；
6减少氨气等有害气体的排放，减少粪便臭味，改善了猪舍环境；猪的呼吸道疾病(氨少)，猪的贫血状态(氧足)，猪的产仔数、抗病力得到很好地提升；
7饲料中添加复合发酵料可以有效降低采食过程中饲料粉尘的吸入量，降低了呼吸道疾病的发生。
8本发明的含菌酶协发酵食用菌副产品的生长育肥猪饲料与不含发酵料的生长育肥猪饲料进行比较饲喂，在3个不同的猪场进行饲喂效果及猪舍空气中氨气浓度对比。
本试验分别选取健康、日龄及体重相近的试验猪，试验正式开始及结束时分别在晨饲前空腹称重及对应猪舍空气中的氨气浓度情况。
实证1试验效果最佳组：试验2组
实证2试验效果最佳组：试验2组
实证3试验效果最佳组：试验2组
结果表明，在不同生长阶段，饲喂本发明的含菌酶协发酵食用菌副产品的生长育肥猪饲料能够提高猪的生产性能，降低料肉比，提高经济效益。
以上对本发明的实例进行了详细说明，但内容仅为本发明的较佳实施例，不能被认为用于限定本发明的实施范围。凡依本发明申请范围所作的均等变化与改进等，均应仍归属于本发明的专利涵盖范围之内。
Claims (10)
1.一种含菌酶协发酵食用菌副产品的生长育肥猪饲料，其特征在于包括以下的原料：玉米、豆粕、玉米DDGS、石粉、磷酸氢钙、氯化钠、菌酶协同发酵处理食用菌副产品、生长育肥猪用复合预混料。
2.根据权利要求1所述的一种含菌酶协发酵食用菌副产品的生长育肥猪饲料，其特征在于包括以下质量份数的原料：玉米57-67、豆粕12-18、玉米DDGS 7-11、石粉0.5-2、磷酸氢钙0.5-2、氯化钠0.5-2、菌酶协同发酵处理食用菌副产品8-12、生长育肥猪用复合预混料1-2。
3.根据权利要求2所述的一种含菌酶协发酵食用菌副产品的生长育肥猪饲料，其特征在于包括以下质量份数的原料：玉米62.08、豆粕15.00、玉米DDGS 9.32、石粉0.88、磷酸氢钙0.87、氯化钠0.35、菌酶协同发酵处理食用菌副产品10.00、生长育肥猪用复合预混料1.50。
4.根据权利要求2或3所述的一种含菌酶协发酵食用菌副产品的生长育肥猪饲料，其特征在于菌酶协同发酵处理食用菌副产品包括以下质量份数的原料：食用菌副产品58-68、豆粕8-14、糖蜜4-5、菌液3-4、酶2-3和水12-18。
5.根据权利要求4所述的一种含菌酶协发酵食用菌副产品的生长育肥猪饲料，其特征在于菌液为液体扩繁产生的菌液，液体扩繁产生的菌液包括以下质量份数的原料：水91-97，甘蔗糖蜜4-5，菌粉0.2-1。
6.根据权利要求2-5任一所述的一种含菌酶协发酵食用菌副产品的生长育肥猪饲料，其特征在于液体扩繁产生的菌液的液体发酵条件：菌粉菌株为粪肠球菌≥1×109CFU/g，丁酸梭菌≥1×107CFU/g。
7.根据权利要求5-6任一所述的一种含菌酶协发酵食用菌副产品的生长育肥猪饲料，其特征在于菌粉的菌株品种及数量：枯草芽孢杆菌≥0.8×108CFU/g，地衣芽孢杆菌≥0.5×108CFU/g，粪肠球菌≥1×108CFU/g，酿酒酵母≥0.8×108CFU/g。
8.根据权利要求1-7任一所述的一种含菌酶协发酵食用菌副产品的生长育肥猪饲料，其特征在于饲料营养指标用质量份数表示为：水分11-14，粗蛋白13-19，粗脂肪3-4，粗纤维4-5，粗灰分5-6，钙0.5-1，磷0.5-1，食盐0.5-1，总赖氨酸0.8-15。
9.一种含菌酶协发酵食用菌副产品的生长育肥猪饲料制备方法，其特征在于包括以下步骤：
步骤一：按配方领料投入原料并粉碎，至待配料仓；
步骤二：按配方比例配置原料，进行混合机混合，至待制粒仓；
步骤三：按制粒工艺进行产品调质、制粒、冷却、筛分出颗粒产品。
10.根据权利要求9所述的一种含菌酶协发酵食用菌副产品的生长育肥猪饲料制备方法，其特征在于步骤一中的原料包括菌酶协同发酵处理食用菌副产品；
制备菌酶协同发酵处理食用菌副产品包括以下步骤：
步骤A：提前将酶制剂溶于水中稀释溶解；
步骤B：按照比例计算原料用量，混合顺序是食用菌副产品、豆粕与水先混合，再加糖蜜、菌液和酶制剂溶进混合机；
步骤C：将混合好的物料移到发酵池中，物料堆积、压实，进行厌氧发酵；
步骤D：发酵结束后进行烘干粉碎。
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