CN116390742A

CN116390742A - 环状趋化素-9衍生物

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Publication number: CN116390742A
Application number: CN202180062643.7A
Authority: CN
Inventors: J·R·克雷林; B·里德; A·贝克-西辛格; T·费舍尔; A·切尔尼亚克; S·埃尔斯-海因德尔
Original assignee: Bayer AG
Current assignee: Bayer AG
Priority date: 2020-08-12
Filing date: 2021-08-10
Publication date: 2023-07-04
Also published as: KR20230048130A; WO2022034057A1; BR112023001380A2; US20230303647A1; CA3191321A1; EP4196143A1; IL300295A; AU2021324064A1; JP2023537111A; CL2023000412A1; MX2023001723A

Abstract

本发明涉及本文所述和定义的通式(I)的环状趋化素‑9衍生物，制备所述肽的方法，以及所述化合物用于治疗或预防疾病，特别是癌症、糖尿病、肥胖症和炎症性疾病的用途。

Description

环状趋化素-9衍生物

本发明涉及本文所述和定义的通式(I)的环状趋化素(Chemerin)-9衍生物，制备所述肽的方法，以及所述化合物用于治疗或预防疾病，特别是癌症、糖尿病、肥胖症和炎症性疾病的用途。

背景技术

趋化素是一种小型脂肪因子，2003年由Wittamer等人首次发现(Wittamer,Franssen等人,Specific recruitment of antigen-presenting cells by chemerin,anovel processed ligand from human inflammatory fluids.J Exp Med,2003,198(7):977-985)。它主要由皮肤、肝脏和脂肪组织表达(Roh,Song等人,Chemerin--a newadipokine that modulates adipogenesis via its own receptor.Biochem BiophysRes Commun,2007,362(4):1013-1018,Banas,Zabieglo等人,Chemerin is anantimicrobial agent in human epidermis.PLoS One,2013,8(3):e58709)。趋化素以其非活性形式表达，即163个氨基酸的初前趋化素(preprochemerin)，它是在信号肽的N-端截断后分泌的。由此产生的非活性前体趋化素(prochemerin)可以通过各种蛋白酶的C-端加工而被激活，从而获得活性的趋化素，所述蛋白酶例如激肽释放酶-7(Schultz,Saalbach等人,Proteolytic activation of prochemerin by kallikrein 7breaks an ioniclinkage and results in C-terminal rearrangement.Biochem J,2013,452(2):271-280)、组织蛋白酶G(Zabel,Allen等人,Chemerin activation by serine proteases ofthe coagulation,fibrinolytic,and inflammatory cascades.J Biol Chem,2005,280(41):34661-34666)或血纤维蛋白溶酶(Yamaguchi,Du等人,Proteolytic cleavage ofchemerin protein is necessary for activation to the active form,Chem157S,which functions as a signaling molecule in glioblastoma.J Biol Chem,2011,286(45):39510-39519)。最有活性的异构体是在丝氨酸157(人类蛋白的编号)之后裂解形成的，因此被称为ChemS157。该蛋白的C-端部分对生物活性至关重要，由最后的9个氨基酸组成的肽显示出与全长蛋白相当的活性(Wittamer,Gregoire等人,The C-terminalnonapeptide of mature chemerin activates the chemerin receptor with lownanomolar potency.J Biol Chem,2004,279(11):9956-9962)。这种肽被广泛称为趋化素-9。

趋化素与三个受体结合，所述三个受体为趋化因子样受体1(CMKLR1)、G蛋白偶联受体1(GPR1)和趋化因子(CC-基序)受体样2(CCRL2)(Wittamer,Franssen等人,Specificrecruitment of antigen-presenting cells by chemerin,a novel processed ligandfrom human inflammatory fluids.J Exp Med,2003,198(7):977-985,Barnea,Strapps等人,The genetic design of signaling cascades to record receptoractivation.Proc Natl Acad Sci U S A,2008,105(1):64-69,Zabel,Nakae等人,Mastcell–expressed orphan receptor CCRL2 binds chemerin and is required foroptimal induction of IgE-mediated passive cutaneous anaphylaxis.The Journalof experimental medicine,2008,205(10):2207-2220)。GPR1和CMKLR1密切相关，但只有后者能诱导G蛋白信号传导(De Henau,Degroot等人,Signaling Properties of ChemerinReceptors CMKLR1,GPR1 and CCRL2.PLoS One,2016,11(10):e0164179)。尽管GPR1通过RhoA/ROCK途径诱导下游信号传导，但GPR1经常被记载为一个单纯的诱饵受体(Rourke,Dranse等人,CMKLR1 and GPR1 mediate chemerin signaling through the RhoA/ROCKpathway.Mol Cell Endocrinol,2015,417(36-51))。相反，非典型趋化因子受体CCRL2未能触发细胞内信号传导事件或内化，并被认为是通过增加局部趋化素浓度而发挥作用(Zabel,Nakae等人,Mast cell–expressed orphan receptor CCRL2 binds chemerin andis required for optimal induction of IgE-mediated passive cutaneousanaphylaxis.The Journal of experimental medicine,2008,205(10):2207-2220)。CMKLR1由脂肪细胞表达，但其也由组织特定的巨噬细胞和树突状细胞表达(Wittamer,Franssen等人,Specific recruitment of antigen-presenting cells by chemerin,anovel processed ligand from human inflammatory fluids.J Exp Med,2003,198(7):977-985,Luangsay,Wittamer等人,Mouse ChemR23 is expressed in dendritic cellsubsets and macrophages,and mediates an anti-inflammatory activity ofchemerin in a lung disease model.J Immunol,2009,183(10):6489-6499)。趋化素对CMKLR1的激活导致这些细胞被募集到炎症部位，用趋化素处理软骨细胞和滑膜细胞会触发促炎症细胞因子如TNF-α、CCL2和白细胞介素的释放(Berg,

等人,Humanarticular chondrocytes express ChemR23 and chemerin；ChemR23 promotesinflammatory signalling upon binding the ligand chemerin 21-157.Arthritis ResTher,2010,12(6):R228,Kaneko,Miyabe等人,Chemerin activates fibroblast-likesynoviocytes in patients with rheumatoid arthritis.Arthritis Res Ther,2011,13(5):R158)。相反，趋化素的C-端衍生物(称为C15)被记载为在小鼠腹膜炎模型中具有强大的抗炎作用(Cash,Hart等人,Synthetic chemerin-derived peptides suppressinflammation through ChemR23.J Exp Med,2008,205(4):767-775)。这种肽似乎也能改善体内的伤口愈合，如Cash等人在小鼠模型中所证明的(Cash,Bass等人,Resolutionmediator chemerin15 reprograms the wound microenvironment to promote repairand reduce scarring.Curr Biol,2014,24(12):1406-1414)。

血清中趋化素的水平与身体质量指数相关(Bozaoglu,Bolton等人,Chemerin isa novel adipokine associated with obesity and metabolicsyndrome.Endocrinology,2007,148(10):4687-4694)，因此，趋化素在肥胖相关疾病中的作用获得了越来越多的关注也就不足为奇。用趋化素处理3T3-L1细胞可增加胰岛素信号传导和胰岛素诱导的葡萄糖摄取量(Takahashi,Takahashi等人,Chemerin enhancesinsulin signaling and potentiates insulin-stimulated glucose uptake in 3T3-L1adipocytes.FEBS Lett,2008,582(5):573-578)。这种治疗糖尿病的有希望的特性似乎保留在趋化素-9中：在胰腺糖尿病的小鼠模型中，用趋化素-9治疗显示：通过提高葡萄糖转运体glut2和胰岛素启动因子1的表达水平，可以明显缓解葡萄糖不耐受(Tu,Yang等人,Regulatory effect of chemerin and therapeutic efficacy of chemerin9 inpancreatogenic diabetes mellitus.Mol Med Rep,2020,21(3):981-988)。

除了在炎症和肥胖方面的作用外，有新的证据表明，趋化素也是治疗癌症的潜在目标。趋化素促进了鳞状食道癌细胞的入侵(Kumar,Kandola等人,The role of chemerinand ChemR23 in stimulating the invasion of squamous oesophageal cancercells.Brit J Cancer,2016,114(10):1152-1159)，抑制神经母细胞瘤细胞中的趋化素/CMKLR1轴，可减少体内肿瘤生长和细胞存活率(Tummler,Snapkov等人,Inhibition ofchemerin/CMKLR1 axis in neuroblastoma cells reduces clonogenicity and cellviability in vitro and impairs tumor growth in vivo.Oncotarget,2017,8(56):95135-95151)。在结直肠癌中，CMKLR1被认为是通过促进血管生成而对肿瘤生长很重要(Kiczmer,Senkowska等人,Assessment of CMKLR1 level in colorectal cancer andits correlation with angiogenic markers.Exp Mol Pathol,2020,113(104377))。另一方面，趋化素抑制了小鼠肝细胞癌的转移(Li,Yin等人,Chemerin suppresseshepatocellular carcinoma metastasis through CMKLR1-PTEN-Akt axis.BritishJournal of Cancer,2018,118(10):1337-1348)。

这些结果清楚地证明了趋化素衍生的肽在治疗不同疾病方面的潜力，但天然肽存在着极低的血浆稳定性，需要更稳定和有效的衍生物(Bandholtz,Wichard等人,Molecularevolution of a peptide GPCR ligand driven by artificial neural networks.PLoSOne,2012,7(5):e36948)。先前的研究旨在开发更稳定的趋化素-9衍生物，只关注引入非天然氨基酸，这导致开发的衍生物的血浆半衰期为4小时(Shimamura,Matsuda等人,Identification of a stable chemerin analog with potent activity towardChemR23.Peptides,2009,30(8):1529-1538)。对于潜在的治疗用途来说，这仍然远远不是最佳的。环状趋化素-9衍生物已记载于Journal of Medicinal Chemistry 2021 64(6),3048-3058中。

本发明通常涉及具有改善的血浆稳定性的环状趋化素-9衍生物以及制备和使用其的方法。

本发明提供通式(I)的化合物，或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂合物或其盐的溶剂合物，

其中

R¹不存在，

或者

代表6-羧基四甲基罗丹明(Tam)、##C(O)R³、C₈-C₂₀脂肪酸或序列R⁴GFLG##、R⁴-C＝N-NH-##、R⁴-S-S-##、R⁴-N＝N-##、R⁴-缬氨酸-瓜氨酸-##、R⁴-C(O)O-##或R⁴NH-C(O)O-##，

其中

##标志着与X¹的末端氨基的连接，

R³代表C₁-C₆-亚烷基(alkylene)、芳基、杂芳基、C₃-C₈-环烷基或C₃-C₇-杂环烷基，

其中，C₁-C₆-亚烷基至多被选自以下的基团相同或不同地三取代：羟基、甲氧基、乙氧基、羧基、氨基和卤素，其中，芳基、杂芳基、C₃-C₈-环烷基和C₃-C₇-杂环烷基可至多被选自以下的基团相同或不同地三取代：C₁-C₄-烷基、羟基、甲氧基、乙氧基、羰基、羧基、氨基和卤素，

R⁴代表

其中

R⁵代表C₁-C₆-亚烷基、芳基、杂芳基、C₃-C₈-环烷基或C₃-C₇-杂环烷基，

其中，C₁-C₆-亚烷基至多被选自以下的基团相同或不同地三取代：羟基、甲氧基、乙氧基、羧基、氨基和卤素，

其中，芳基、杂芳基、C₃-C₈-环烷基和C₃-C₇-杂环烷基可至多被选自以下的基团相同或不同地三取代：C₁-C₄-烷基、羟基、甲氧基、乙氧基、羰基、羧基、氨基和卤素，

或者

代表式(IIIa)的基团

其中

**标志着与氮原子的连接，

D¹为C₁-C₄-亚烷基，

Y¹选自羟基、甲氧基、乙氧基、羧基、甲酰胺或氨基，

其中，氨基可被6-羧基四甲基罗丹明(Tam)通过酰胺键取代，

并且

r代表2至15的整数，

R²代表式(II)的基团

或者

代表式(III)的基团

其中

*代表与X³的羧基的羰基原子的连接，

Z代表键或-CH₂-，

m代表1或2，

n代表1或2，

X¹代表选自L、I、F、H、M、W、Y或y的天然氨基酸，或选自以下的非天然氨基酸：L-正亮氨酸(Nle)、2,3,3a,4,5,6,7,7a-八氢吲哚-2-羧酸(Oic)、4-溴苯丙氨酸((4-溴)F)、2,5-二氟苯丙氨酸((2,5-二氟)F)、2-氯苯丙氨酸((2-氯)F)、3-氯苯丙氨酸((3-氯)F)、4-氯苯丙氨酸((4-氯)F)、2-溴苯丙氨酸((2-溴)F)、3-溴苯丙氨酸((3-溴)F)、4-溴苯丙氨酸((4-溴)F)、2-氟苯丙氨酸((2-氟)F)、3-氟苯丙氨酸((3-氟)F)、4-氟苯丙氨酸((4-氟)F)、2,5-二氟-苯丙氨酸、2-甲基-苯丙氨酸((2-Me)F)、3-甲基-苯丙氨酸((3-Me)F)、4-甲基苯丙氨酸((4-Me)F)、(2S)-3-(2,3-二氟苯基)-2-氨基丙酸、苯基甘氨酸(Phg)、N-苯基甘氨酸((N-Ph)G)、3-氯苯基甘氨酸((3-氯-Ph)G)、3-(1,3-苯并噻唑-2-基)-丙氨酸、1-苄基-组氨酸(H(1-Bn))、1-甲基-组氨酸(H(1-Me))、3-甲基组氨酸((3-Me)H)、2-吡啶基丙氨酸(2-Pal)、3-吡啶基丙氨酸(3-Pal)、4-吡啶基丙氨酸(4-Pal)、3-(氨基甲基)苯甲酸、1-萘基丙氨酸(1-Nal)、2-萘基丙氨酸(2-Nal)、(2R)-氨基-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)乙酸和(2S)-3-(吲哚-4-基)-2-(氨基)丙酸，其中来自上述的任何天然氨基酸和/或非天然氨基酸可为D-立体构型或L-立体构型，

X²代表选自L、I、F、H、M、W或Y的天然氨基酸，或选自以下的非天然氨基酸：L-正亮氨酸(Nle)、2,3,3a,4,5,6,7,7a-八氢吲哚-2-羧酸(Oic)、L-4-溴苯丙氨酸((4-溴)F)、2,5-二氟-L-苯丙氨酸((2,5-二氟)F)、2-氯-L-苯丙氨酸((2-氯)F)、3-氯-L-苯丙氨酸((3-氯)F)、4-氯-L-苯丙氨酸((4-氯)F)、L-2-溴苯丙氨酸((2-溴)F)、L-3-溴苯丙氨酸((3-溴)F)、L-4-溴苯丙氨酸((4-溴)F)、2-氟-L-苯丙氨酸((2-氟)F)、3-氟-L-苯丙氨酸((3-氟)F)、4-氟-L-苯丙氨酸((4-氟)F)、2,5-二氟-L-苯丙氨酸、2-甲基-L-苯丙氨酸((2-Me)F)、3-甲基-L-苯丙氨酸((3-Me)F)、4-甲基-L-苯丙氨酸((4-Me)F)、(2S)-3-(2,3-二氟苯基)-2-氨基丙酸、L-苯基甘氨酸(Phg)、N-苯基甘氨酸((N-Ph)G)、3-氯苯基甘氨酸((3-氯-Ph)G)、3-(1,3-苯并噻唑-2-基)-L-丙氨酸、1-苄基-L-组氨酸(H(1-Bn))、1-甲基-L-组氨酸(H(1-Me))、L-3-甲基组氨酸((3-Me)H)、L-2-吡啶基丙氨酸(2-Pal)、L-3-吡啶基丙氨酸(3-Pal)、L-4-吡啶基丙氨酸(4-Pal)、3-(氨基甲基)苯甲酸、L-1-萘基丙氨酸(1-Nal)、L-2-萘基丙氨酸(2-Nal)、(2R)-氨基-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)乙酸和(2S)-3-(吲哚-4-基)-2-(氨基)丙酸，

X³代表天然氨基酸P，或选自以下的非天然氨基酸：

2,3,3a,4,5,6,7,7a-八氢吲哚-2-羧酸(Oic)、L-羟基脯氨酸(Hyp)、(2S,4S)-4-三氟甲基-吡咯烷-2-羧酸((4-CF3)P)、

(2S,4S)-4-氟脯氨酸((顺式-4-氟)P)、反式-4-氟脯氨酸((反式-4-氟)P)、(2S)-2-氨基-4,4,4-三氟丁酸、L-反式-3-羟基脯氨酸((3S-OH)P)、L-哌可酸(Pip)、(1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-羧酸、(6S)-5-氮杂螺[2.4]庚烷-6-羧酸、rel-(1R,3R,5R,6R)-6-(三氟甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-羧酸、(2S)-2-氨基-4,4,4-三氟丁酸、(2S,3aS,6aS)-八氢环戊烯并[b]吡咯-2-羧酸、反式-4-氟脯氨酸((反式-4-氟)P)、

(2S,4S)-4-氟脯氨酸((顺式-4-氟)P)、L-4,4-二氟脯氨酸((二氟)P)、rel-(3R,6R)-1,1-二氟-5-氮杂螺[2.4]庚烷-6-羧酸(对映体1)和rel-(3R,6R)-1,1-二氟-5-氮杂螺[2.4]庚烷-6-羧酸(对映体2)，

X⁴代表任何天然氨基酸或非天然氨基酸，其中任何天然氨基酸和/或非天然氨基酸可为D-立体构型或L-立体构型，

X⁵代表选自F、H、W或Y的天然氨基酸，或选自以下的非天然氨基酸：环己基丙氨酸(Cha)、2,3,3a,4,5,6,7,7a-八氢吲哚-2-羧酸(Oic)、L-4-溴苯丙氨酸((4-溴)F)、2,5-二氟-L-苯丙氨酸((2,5-二氟)F)、2-氯-L-苯丙氨酸((2-氯)F)、3-氯-L-苯丙氨酸((3-氯)F)、4-氯-L-苯丙氨酸((4-氯)F)、L-2-溴苯丙氨酸((2-溴)F)、L-3-溴苯丙氨酸((3-溴)F)、L-4-溴苯丙氨酸((4-溴)F)、2-氟-L-苯丙氨酸((2-氟)F)、3-氟-L-苯丙氨酸((3-氟)F)、4-氟-L-苯丙氨酸((4-氟)F)、2,5-二氟-L-苯丙氨酸、2-甲基-L-苯丙氨酸((2-Me)F)、3-甲基-L-苯丙氨酸((3-Me)F)、4-甲基-L-苯丙氨酸((4-Me)F)、(2S)-3-(2,3-二氟苯基)-2-氨基丙酸、L-苯基甘氨酸(Phg)、N-苯基甘氨酸((N-Ph)G)、3-氯苯基甘氨酸((3-氯-Ph)G)、3-(1,3-苯并噻唑-2-基)-L-丙氨酸、1-苄基-L-组氨酸(H(1-Bn))、1-甲基-L-组氨酸(H(1-Me))、L-3-甲基组氨酸((3-Me)H)、L-2-吡啶基丙氨酸(2-Pal)、L-3-吡啶基丙氨酸(3-Pal)、L-4-吡啶基丙氨酸(4-Pal)、3-(氨基甲基)苯甲酸、L-1-萘基丙氨酸(1-Nal)、L-2-萘基丙氨酸(2-Nal)、(2R)-氨基-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)乙酸和(2S)-3-(吲哚-4-基)-2-(氨基)丙酸，

X⁶代表任何天然氨基酸或非天然氨基酸，其中任何天然氨基酸和/或非天然氨基酸可为D-立体构型或L-立体构型，其中，任何天然氨基酸或带有氨基的非天然氨基酸可被6-羧基四甲基罗丹明(Tam)或##C(O)R³取代，

其中，

##标志着与X¹的末端氨基的连接，

R³代表C₁-C₆-亚烷基、芳基、杂芳基、C₃-C₈-环烷基或C₃-C₇-杂环烷基，

X⁷代表选自F、H、W或Y的天然氨基酸，或选自以下的非天然氨基酸：环己基丙氨酸(Cha)、2,3,3a,4,5,6,7,7a-八氢吲哚-2-羧酸(Oic)、L-4-溴苯丙氨酸((4-溴)F)、2,5-二氟-L-苯丙氨酸((2,5-二氟)F)、2-氯-L-苯丙氨酸((2-氯)F)、3-氯-L-苯丙氨酸((3-氯)F)、4-氯-L-苯丙氨酸((4-氯)F)、L-2-溴苯丙氨酸((2-溴)F)、L-3-溴苯丙氨酸((3-溴)F)、L-4-溴苯丙氨酸((4-溴)F)、2-氟-L-苯丙氨酸((2-氟)F)、3-氟-L-苯丙氨酸((3-氟)F)、4-氟-L-苯丙氨酸((4-氟)F)、2,5-二氟-L-苯丙氨酸、2-甲基-L-苯丙氨酸((2-Me)F)、3-甲基-L-苯丙氨酸((3-Me)F)、4-甲基-L-苯丙氨酸((4-Me)F)、(2S)-3-(2,3-二氟苯基)-2-氨基丙酸、L-苯基甘氨酸(Phg)、N-苯基甘氨酸((N-Ph)G)、3-氯苯基甘氨酸((3-氯-Ph)G)、3-(1,3-苯并噻唑-2-基)-L-丙氨酸、1-苄基-L-组氨酸(H(1-Bn))、1-甲基-L-组氨酸(H(1-Me))、L-3-甲基组氨酸((3-Me)H)、L-2-吡啶基丙氨酸(2-Pal)、L-3-吡啶基丙氨酸(3-Pal)、L-4-吡啶基丙氨酸(4-Pal)、3-(氨基甲基)苯甲酸、L-1-萘基丙氨酸(1-Nal)、L-2-萘基丙氨酸(2-Nal)、(2R)-氨基-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)乙酸和(2S)-3-(吲哚-4-基)-2-(氨基)丙酸，

条件是，不包括化合物YFP[cQFAFC]。

如果式(I)所包含的且在下文提及的化合物未包含盐、溶剂合物和盐的溶剂合物，则本发明的化合物是式(I)的化合物及其盐、溶剂合物和其盐的溶剂合物，式(I)所包含的且为下文提及的式的化合物及其盐、溶剂合物和其盐的溶剂合物，以及式(I)所包含的且为下文作为工作实施例所引用的化合物及其盐、溶剂合物和其盐的溶剂合物。

本发明的化合物同样是式(I)的化合物的N-氧化物和S-氧化物及其盐、溶剂合物和其盐的溶剂合物。

除非本文另有定义，否则本申请中使用的科学和技术术语应具有本领域普通技术人员普遍理解的含义。一般而言，本文所描述的与化学、分子生物学、细胞和癌症生物学、免疫学、微生物学、药理学以及蛋白质和核酸化学有关的术语和技术是本领域众所周知和普遍使用的。

在本说明书中，“包含(comprise)”一词或其变体(如“包含(comprises)”或“包含(comprising)”)将被理解为包含所述的整数(或组分)或一组整数(或组分)，但不排除任何其他整数(或组分)或一组整数(或组分)。除非上下文另有明确规定，否则单数形式的“一(a)”、“一个(an)”和“该(the)”包括复数。术语“包括”和“含有”意指“包括但不限于”，这些表述可以互换使用。特别地，表述“含有肽的化合物”意指含有确定的肽序列的化合物，它可任选含有与肽共价结合的其他化学基团或取代基，例如氨基酸、脂肪酸、增强肽的药效或药代动力学特性的化学基团或任何其他化学基团。还应理解的是，表述“含有肽的化合物”明确包括定义的肽序列，而没有与该肽共价结合的任何其他化学基团或取代基。

如本文所使用的，除非另有说明，否则以下术语具有赋予它们的含义。“基本上由……组成”被理解为肽与其所比较的肽至少有80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同。

术语“蛋白质”、“多肽”和“肽”可互换使用，广义上指两个或更多个氨基酸(优选通过肽(酰胺)键)连接在一起的序列。肽(酰胺)键是在一个氨基酸的羧基与另一个氨基酸的氨基反应时形成的。应进一步理解，术语“蛋白质”、“多肽”和“肽”并不表示氨基酸聚合物的具体长度，也无意暗指或区分多肽是利用重组技术、化学或酶法合成产生的，还是天然存在的。应进一步理解，根据本申请的定义，肽可以包含一个或多个不含氨基酸的部分。这些部分优选存在于肽的N-末端和C-末端。

本文所用的术语“氨基酸”或“任何氨基酸”是指含有胺(-NH₂)和羧基(-COOH)官能团以及一个侧链的有机化合物，并指任何和所有的氨基酸，包括天然存在的氨基酸(如α-L-氨基酸)、非天然的氨基酸、修饰的氨基酸和非天然的氨基酸。“天然氨基酸”包括在自然界中存在的那些氨基酸，例如，23种氨基酸，其结合成肽链以形成大量蛋白质的组成部分。这些主要是L型立体异构体，尽管少数D-氨基酸出现在细菌包膜(envelope)和一些抗生素中。表2中列出了标准遗传密码中的20种蛋白源性天然氨基酸。“非标准的”天然氨基酸是吡咯赖氨酸(存在于产甲烷生物和其他真核生物中)、硒半胱氨酸(存在于许多非真核生物以及大多数真核生物中)和N-甲酰基甲硫氨酸(由细菌、线粒体和叶绿体中的起始密码子AUG编码)。

“非天然(“Unnatural”或“non-natural”)”氨基酸是指天然存在或通过化学方法合成的非蛋白源性氨基酸(即那些在遗传密码中非天然编码或发现的氨基酸)。已知有超过140种天然氨基酸，还有数千种组合是可能的。“非天然”氨基酸的实例包括β-氨基酸(β³和β²)、高氨基酸、脯氨酸和丙酮酸衍生物、3-取代的丙氨酸衍生物、甘氨酸衍生物、环取代的苯丙氨酸和酪氨酸衍生物、线性核心氨基酸、二氨基酸、D-氨基酸和N-甲基氨基酸。非天然氨基酸还包括修饰的氨基酸。“修饰的”氨基酸包括经过化学修饰的氨基酸(例如天然氨基酸)，其中包括氨基酸中非天然存在的一个基团、多个基团或化学部分。根据本发明，优选的非天然氨基酸列于表1。表1示出以D-立体异构体和/或L-立体异构体形式的非天然氨基酸，然而根据本发明优选的非天然氨基酸是表1所列非天然氨基酸的D-立体异构体和L-立体异构体。

表1：优选的非天然氨基酸

(1R,2R)-2-氨基-1-环戊烷羧酸(R,R-ACPC)

(1R,3S)-3-(氨基)环戊烷羧酸

(1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-羧酸

(1S,2S)-2-氨基-1-环戊烷羧酸(S,S-ACPC)

(1S,2S,5R)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-羧酸

(1R,2S,5S)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-羧酸

(1S,3R)-3-(氨基)环戊烷羧酸

(1S,3R,4R)-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-3-羧酸

(2S)-2-(氨基)-2-[(1S,3R)-3-羟基环己基]乙酸

(2S)-2-(氨基)-2-[(1S,3S)-3-羟基环己基]乙酸

(2R)-氨基-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)乙酸

(2S)-2-氨基-5-甲基-己酸

(2S)-2-[(3R)-3-氨基-2-氧代吡咯烷-1-基]-4-甲基戊酸

(2S)-2[(氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)]乙酸

(2S)-2-氨基-3-(1-甲基环丙基)丙酸

(2S)-2-氨基-3-(2,3,4,5,6-五氟苯基)丙酸

(2S)-2-氨基-3-(4-叔丁基苯基)丙酸

(2S)-2-氨基-4-(苄基氨基)-4-氧代丁烷羧酸

(2S)-2-氨基-4,4,4-三氟丁酸

(2S)-2-氨基-5-甲基-己酸

(2S)-3-(2,3-二氟苯基)-2-氨基丙酸

(2S)-3-(3-氰基苯基)-2-氨基丙酸

(2S)-3-(4-羧基苯基)-2-氨基丙酸

(2S)-3-(吲哚-4-基)-2-(氨基)丙酸

(2S)-3-(三唑-1-基)-2-(氨基)丙酸

(2S)-氨基-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)乙酸(2S)-氨基-2-[3-(三氟甲基)双环[1.1.1]戊-1-基]乙酸(2S)-吡咯烷-2-基乙酸(β-高-P)

(2S,3aS,6aS)-八氢环戊烷并[b]吡咯-2-羧酸

(2S,3S)-2-((氨基)甲基)-3-甲基戊酸

(2S,3S)-2-[(3R)-3-氨基-2-氧代吡咯烷-1-基]-3-甲基戊酸(2S,3S)-2-[(3S)-2-氧代哌嗪-1-基]-3-甲基戊酸(2S,4S)-4-氟脯氨酸((顺式-4-氟)P)

(2S,4S)-4-三氟甲基-吡咯烷-2-羧酸((4-CF3)P)

(3R,6R)-1,1-二氟-5-氮杂螺[2.4]庚烷-6-羧酸(对映体1)

(3R,6R)-1,1-二氟-5-氮杂螺[2.4]庚烷-6-羧酸(对映体2)

(4aR,6aR,9S,11aS)-11-氧代-2,3,4,4a,6a,7,8,9,11,11a-十氢-1H-吡啶并[3,2-e]吡咯并[1,2-a]氮杂卓-9-羧酸

(6S)-5-氮杂螺[2.4]庚烷-6-羧酸

(R)-3-氨基己二酸

(R)-4-氨基-6-甲基庚酸

(R)-哌啶-3-羧酸

(R)-吡咯烷-3-羧酸

(S)-(1-哌啶-3-基)-乙酸(S)-(三氟甲基)-L-半胱氨酸(S)-2-(氨基)-1,6-己二酸(AAD)

(S)-2-氨基-2-环丁基乙酸(Cbg)

(S)-2-氨基-3-乙基-戊酸

(S)-3-(1-吡咯烷-2-基)-丙酸

(S)-4-哌嗪-2-羧酸(S)-哌啶-3-羧酸

(S)-吡咯烷-2-羧酸(β-P)

[(2R)-4,4-二氟吡咯烷-2-基]乙酸

1-(氨基甲基)-环丙基-1-羧酸

1,13-二氨基-4,7,10-三氧杂十三烷-琥珀酰胺酸

12-氨基-4,7,10-三氧杂十二烷酸

14-氨基-3,6,9,12-四氧杂十四烷酸

15-氨基-4,7,10,13-四氧杂十五烷酸

17-氨基-3,6,9,12,15-五氧杂十七烷酸

18-氨基-4,7,10,13,16-五氧杂十八烷酸

1-氨基-3,6,9,12,15,18,21,24,27-九氧杂三十烷-30-酸

1-氨基-3,6,9,12,15,18,21,24-八氧杂二十七烷-27-酸

1-氨基-3,6,9,12,15,18,21-七氧杂二十四烷-24-酸

1-氨基-3,6,9,12,15,18-六氧杂二十一烷-21-酸

1-氨基环丁烷-1-羧酸(ACBA)

1-苄基-L-组氨酸(H(1-Bn))

1-甲基-L-组氨酸(H(1-Me))

2-(环己基氨基)乙酸

2,3,3a,4,5,6,7,7a-八氢吲哚-2-羧酸(Oic)

2,5-二氟-L-苯丙氨酸

2-[(1S,2S)-1-(氨基)-2-甲基丁基]-1,3-噁唑-4-羧酸

2-氨基-1,7-庚二酸

2-氨基-5,5,5-三氟-4-甲基-戊酸

2-氨基-7-(叔丁氧基)-7-氧代庚酸

2-氨基异丁酸(Aib)

2-氯-L-苯丙氨酸((2-氯)F)

2-氟-L-苯丙氨酸((2-氟)F)

2-甲基-D-别异亮氨酸

2-甲基-L-苯丙氨酸((2-Me)F)

2-甲基-L-脯氨酸(2-Me)P

3-(1,3-苯并噻唑-2-基)-L-丙氨酸((Bth)A)

3-(氨基甲基)苯甲酸

3-(三甲基硅烷基)-L-丙氨酸

3-氨基-2,2-二甲基丙酸

3-氨基甲基苯基乙酸

3-叠氮基-L-丙氨酸

3-羧基苯丙氨酸

3-氯-L-苯丙氨酸

3-氯苯基甘氨酸((3-氯-Ph)G)

3-氰基-L-苯丙氨酸

3-乙基-L-戊氨酸

3-氟-L-苯丙氨酸

3-甲基-L-苯丙氨酸

4-(3,5-二甲基-1,2-噁唑-4-基)-L-苯丙氨酸

4-(氨基甲基)苯甲酸

4-氨基甲基苯基乙酸

4-乙基-L-正亮氨酸

4-氟-亮氨酸((4-氟)L)

4-氟-L-苯丙氨酸((4-氟)F)

5,5,5-三氟-L-亮氨酸((三氟)L)

5-氮杂螺[2.4]庚烷-6-羧酸

6-氨基己酸(Ahx)

8-氨基立方烷-1-羧酸

9-氨基-4,7-二氧杂壬酸

别-L-异亮氨酸(allo-I)

别-L-苏氨酸(allo-T)

氨基环丁烷羧酸(ACBC)

氨基异丁酸(Aib)

β-丙氨酸(β-A)

环己基丙氨酸(Cha)

D-2-氯苯丙氨酸

D-β-脯氨酸

D-环己基丙氨酸

D-羟基脯氨酸

D-N-甲基丙氨酸

γ-氨基丁酸(γ-Abu)

羟基脯氨酸(Hyp)

亚氨基二乙酸

L-高丝氨酸(hSer)

L-1-萘基丙氨酸(1-Nal)

L-2,3-二氨基丙酸(Dap)

L-2,4-二氨基丁酸(Dab)

L-2,6-二氟苯丙氨酸

L-2-氨基-4-氰基丁酸

L-2-氨基丁酸(Abu)

L-2-溴苯丙氨酸((2-溴)F)

L-2-萘基丙氨酸(2-Nal)

L-2-吡啶基丙氨酸(2-Pal)

L-2-噻吩基丙氨酸

L-3-溴苯丙氨酸((3-溴)F)

L-3-甲基组氨酸(H(3-Me))

L-3-吡啶基丙氨酸(3-Pal)

L-4,4-二氟脯氨酸((二氟)P)

L-4-氨基苯丙氨酸((4-氨基)F)

L-4-溴苯丙氨酸

L-4-吡啶基丙氨酸

L-瓜氨酸(Cit)

L-环丁基丙氨酸(Cba)

L-环丁基甘氨酸

L-环己基丙氨酸

L-环己基甘氨酸

L-环己基甘氨酸(Chg)

L-环戊基丙氨酸

L-环戊基丙氨酸(Cpa)

L-环戊基甘氨酸(Cpg)

L-环丙基甲基丙氨酸

L-二氟甲基丙氨酸

L-二氢乳清酸(Hoo)

L-高半胱氨酸

L-羟基脯氨酸(Hyp)

L-甲硫氨酸-L-亚砜

L-甲硫氨酸-砜

L-N,N-二甲基丙氨酸((N,N-diMe)A)

L-N-甲基丙氨酸

L-N-甲基半胱氨酸((N-Me)C)

L-N-甲基异亮氨酸((N-Me)I)

L-N-甲基苯丙氨酸((N-Me)F)

L-正亮氨酸(Nle)

L-戊氨酸(Nva)

L-鸟氨酸(Orn)

L-青霉胺(Pen)

L-苯基甘氨酸(Phg)

L-哌可酸(Pip)

L-炔丙基甘氨酸

L-焦谷氨酸(Pyr)

L-叔丁基丙氨酸((tBu)A)

L-叔丁基甘氨酸((tBu)G)

L-反式-3-羟基脯氨酸((3S-OH)P)

L-三氟甲基丙氨酸

吗啉-3-羧酸

N(5)-甲基-L-精氨酸((Me)R)

N-e-异丙基-L-赖氨酸

N-甲基-丙氨酸(N-Me)A

N-甲基-甘氨酸((N-Me)G)

N-苯基甘氨酸((N-Ph)G)

棕榈酸(Palm)

rel-(1R,2S)-2-氨基-1-环戊烷羧酸(ACPC)

rel-(1R,3R,5R,6R)-6-(三氟甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-羧酸

rel-(1R,3S)-3-[(氨基)甲基]环己烷羧酸

rel-(3R,6R)-1,1-二氟-5-氮杂螺[2.4]庚烷-6-羧酸(对映体1)

rel-(3R,6R)-1,1-二氟-5-氮杂螺[2.4]庚烷-6-羧酸(对映体2)

S-2-氨基-3-乙基-戊酸

S-3-1-吡咯烷-2-基-丙酸

氨甲环酸(Tranexamic)

反式-2-(3-(氨基)环己基)乙酸

反式-4-氟脯氨酸((反式-4-氟)P)

3-氨基-3-甲基丁酸

更优选的非天然氨基酸选自：N-甲基-丙氨酸(N-Me)A、N-甲基-甘氨酸((N-Me)G)、(1R,3S,4S)-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-3-羧酸、L-3-溴苯丙氨酸((3-溴)F)、L-N,N-二甲基丙氨酸((N,N-diMe)A)、N,N-二甲基甘氨酸((N,N-diMe)G)、N-苯基甘氨酸((N-Ph)G)、(R)-哌啶-3-羧酸、(S)-哌啶-3-羧酸、L-叔丁基丙氨酸((tBu)A)、L-2-吡啶基丙氨酸(2-Pal)、L-3-吡啶基丙氨酸(3-Pal)、L-4-吡啶基丙氨酸(4-Pal)、3-(氨基甲基)苯甲酸、3-氨基-2,2-二甲基丙酸、3-氨基-3-甲基丁酸、4-(氨基甲基)苯甲酸、L-2-氨基丁酸(Abu)、1-氨基环丁烷-1-羧酸(ACBA)、6-氨基己酸(Ahx)、2-氨基异丁酸(Aib)、L-2-噻吩基丙氨酸(β-2-噻吩基丙氨酸)、β-丙氨酸(β-A)、β-脯氨酸(β-P)、L-瓜氨酸(Cit)、L-2,4-二氨基丁酸(Dab)、L-2,3-二氨基丙酸(Dap)、γ-氨基丁酸(γ-Abu)、L-3-甲基组氨酸((3-Me)H)、L-二氢乳清酸(Hoo)、L-正亮氨酸(Nle)、N-甲基-L-脯氨酸((N-Me)P)、L-戊氨酸(Nva)、L-鸟氨酸(Orn)、L-哌可酸(Pip)、(2S)-2[(氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)]乙酸、2,3,3a,4,5,6,7,7a-八氢吲哚-2-羧酸(Oic)、L-N-甲基半胱氨酸((N-Me)C)、N(5)-甲基-L-精氨酸((Me)R)、L-青霉胺(Pen)和氨甲环酸(Tranexamic)。

最优选的非天然氨基酸选自：N-甲基-L-丙氨酸(N-Me)A、N-甲基-甘氨酸((N-Me)G)、L-正亮氨酸(Nle)、L-戊氨酸(Nva)、L-鸟氨酸(Orn)、N(5)-甲基-L-精氨酸((Me)R)、L-叔丁基丙氨酸((tBu)A)、2,3,3a,4,5,6,7,7a-八氢吲哚-2-羧酸(Oic)、L-N-甲基半胱氨酸((N-Me)C)和L-青霉胺(Pen)。

应进一步理解，根据本发明的定义，根据本发明的肽可含有一个或多个不含氨基酸的化学基团。这些化学基团可以存在于肽的N-末端和/或C-末端，并以式X⁰和X¹⁵表示。应理解的是，本发明的肽类的所有氨基酸和化学基团都是通过肽(酰胺)键连接的。一般而言，肽是通过连接α-氨基酸的α-氨基和羧基，然后通过α-肽键连接而形成的。根据本发明，肽键可以由各自的天然或非天然氨基酸中存在的任何羧基和氨基形成。例如，除含有α-氨基(如L-赖氨酸)外还含有第二个氨基的α-氨基酸，或除含有α-羧基外还含有第二个羧基的α-氨基酸(如L-天冬氨酸和L-谷氨酸)可通过额外的氨基或羧基连接。

根据本领域技术人员的理解，本文公开的肽序列代表氨基酸的序列，所述氨基酸通过α-肽键连接。

根据本领域技术人员的理解，本文公开的肽序列从左到右显示，序列的左端是肽的“N-端”(“氨基端”，“N-末端”)，序列的右端是肽的“C-端”(“羧基端”，“C-末端”)。无论肽在N-端是否真的含有一个氨基，这个术语N-端(氨基端，N-末端)都适用。无论肽在C-端是否真的含有一个羧基，这个术语C-端(羧基端，C-末端)都适用。术语“氨基端”是指存在于N-端的任何氨基。术语“羧基端”是指存在于C-端的任何羧基。

根据本发明，在R¹不存在的情况下，N-端可以由X¹形成。或者，N-端可以由R¹形成。

在本发明中，本文使用的天然存在的和非天然存在的氨酰基残基的名称优选遵循IUPAC有机化学命名委员会(Commission on the Nomenclature of Organic Chemistry)和IUPAC-IUB生物化学命名委员会(Commission on Biochemical Nomenclature)建议的命名惯例，如Nomenclature ofα-Amino Acids(Recommendations,1974),Biochemistry,14(2),(1975)中所记载的。

在本说明书中，天然存在的蛋白源性氨基酸通常以其常规的单字母缩写来表示。此外，所述氨基酸也可以用它们的三字母缩写(例如，特别是在序列表中)或用它们的全名来表示，如下表2所示：

表2：天然氨基酸的标准缩写

在非蛋白源性或非天然存在的氨基酸的情况下，除非它们以其全名被提及(如鸟氨酸等)，否则对其残基通常采用三至六个字符的代码，包括下文的缩写表(表3)中所示的那些缩写。

本文所用的术语“L-氨基酸”是指氨基酸的“L”异构体形式，反之，术语“D-氨基酸”是指氨基酸的“D”异构体形式。L-氨基酸用大写字母如Ala/A、Arg/R等表示，D-氨基酸用小写字母如ala/a、arg/r等表示也是常规方式。

以如上表2所示形式的三字母代码(即Ala、Arg、Asn等)以及如在本说明书中通常使用的三字母代码，除非另有明确说明，否则一般应包括D-和L-形式以及同源-和非同源-形式。前缀“非同源”是指一种结构类似物，其可通过去除一个碳原子连同伴随的氢原子而从母体化合物中得到。前缀“同源”表示同源系列中的下一级的成员。如上文所述，提及特定异构体将由大写的前缀L-或D-表示(例如D-Arg、L-Arg等)。具体提及同源-或非同源-形式将相应地由各自的前缀明确表示(例如：同源-Arg、同源-R、非同源-Arg、非同源-R、同源-Cys、同源-C等)。

以上表2中所示形式的单字母代码(即A、R、N等)以及如在本说明书中通常使用的单字母代码通常应包括D-和L-形式以及同源-和非同源-形式。

术语“C₁-C₆-烷基”意指具有1、2、3、4、5或6个碳原子的直链或支链的饱和单价烃基，例如：甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基、戊基、异戊基、2-甲基丁基、1-甲基丁基、1-乙基丙基、1,2-二甲基丙基、新戊基、1,1-二甲基丙基、己基、1-甲基戊基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、1-乙基丁基、2-乙基丁基、1,1-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、3,3-二甲基丁基、2,3-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基或1,3-二甲基丁基，或其异构体。特别地，所述基团具有1、2、3或4个碳原子(“C₁-C₄-烷基”)，例如：甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、仲丁基、异丁基或叔丁基，更特别地，所述基团具有1、2或3个碳原子(“C₁-C₃-烷基”)，例如：甲基、乙基、正丙基或异丙基。特别优选地是甲基、乙基、正丙基。最优选地是甲基。

术语“C₁-C₂₀-烷基”意指具有1至20个碳原子的直链或支链的饱和单价烃基，例如：甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基或戊基、异戊基、己基、异己基、庚基、异庚基、辛基和异辛基、壬基、癸基、十二烷基或二十烷基。

术语“C₁-C₄-亚烷基”意指具有1至4个碳原子的直链或支链烃桥，例如：亚甲基、亚乙基、亚丙基、α-甲基亚乙基、β-甲基亚乙基、α-乙基亚乙基、β-乙基亚乙基、亚丁基、α-甲基亚丙基、β-甲基亚丙基和γ-甲基亚丙基。

术语“C₁-C₆-亚烷基”意指具有1至6个碳原子的直链或支链烃桥，例如：亚甲基、亚乙基、亚丙基、α-甲基亚乙基、β-甲基亚乙基、α-乙基亚乙基、β-乙基亚乙基、亚丁基、α-甲基亚丙基、β-甲基亚丙基、γ-甲基亚丙基、α-乙基亚丙基、β-乙基亚丙基、γ-乙基亚丙基、亚戊基和亚己基。

术语“C₃-C₈-环烷基”意指含有3、4、5、6、7或8个碳原子的饱和烃环。所述C₃-C₈-环烷基为例如单环烃环，例如：环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基或环辛基；双环烃环，例如：双环[4.2.0]辛基或八氢并环戊二烯基(octahydropentalenyl)；或有桥或笼的饱和环状基团，如降冰片烷(norborane)或金刚烷以及立方烷。

术语“C₃-C₇-杂环烷基”意指具有4、5、6或7个的饱和杂环，所述杂环含有一个或两个来自N、O和S系列的相同或不同的环杂原子，所述杂环烷基有可能通过任何碳原子或氮原子(如果存在)与分子的其余部分相连。所述C₃-C₇-杂环基(不限于此)可为4元环，例如，如氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基或硫杂环丁烷基；或5元环，例如，如四氢呋喃基、1,3-二氧杂环戊烷基、四氢噻吩基、吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、1,1-二氧代四氢噻吩基、1,2-噁唑烷基、1,3-噁唑烷基或1,3-噻唑烷基；或6元环，例如，如四氢吡喃基、四氢噻喃基、哌啶基、吗啉基、二噻烷基、硫代吗啉基、哌嗪基、六氢嘧啶基、1,3-二氧杂环己烷基、1,4-二氧杂环己烷基或1,2-氧氮杂环己烷基；或7元环，例如，如氮杂环庚烷基、1,4-二氮杂环庚烷基或1,4-氧氮杂环庚烷基。

术语“芳基”意指具有6至10个碳原子的不饱和或部分不饱和的环。优选的芳基基团是苯基和萘基。

术语“杂芳基”意指具有5、6、8、9、10、11、12、13或14个环原子(“5至14元杂芳基”基团)，特别是5、6、9或10个环原子的单环、双环或三环单价芳环，所述芳环含有至少一个环杂原子和任选地一个、两个或三个来自以下系列的其他环杂原子：N、O和/或S，并且通过环碳原子或任选地通过环氮原子结合(如果价位允许)。所述杂芳基可为5元杂芳基，例如，如噻吩基、呋喃基、吡咯基、噁唑基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、异噁唑基、异噻唑基、噁二唑基、三唑基、噻二唑基或四唑基；或6元杂芳基，例如，如吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基或三嗪基；或三环杂芳基，例如，如咔唑基、吖啶基或吩嗪基；或9元杂芳基，例如，如苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并噁唑基、苯并异噁唑基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、苯并三唑基、吲唑基、吲哚基、异吲哚基、吲哚嗪基或嘌呤基；或10元杂芳基，例如，如喹啉基、喹唑啉基、异喹啉基、噌啉基、酞嗪基、喹喔啉基或蝶啶基。

一般而言，除非另有提及，否则杂芳基或杂亚芳基包括其所有可能的异构体形式，例如：与分子其他部分的连接点有关的互变异构体和位置异构体。因此，对于一些示例性的非限制性实例，术语吡啶基包括吡啶-2-基、吡啶-3-基和吡啶-4-基；或者术语噻吩基包括噻吩-2-基和噻吩-3-基。

在本文公开的序列中，所述序列为在序列的羧基端(C-端)加入“-OH”部分或“-NH₂”部分的序列。位于序列C-端的“-OH”或“-NH₂”部分表示羟基或氨基，分别对应存在于C-端的羧基或酰胺基(-(C＝O)-NH₂)。在本发明的每个序列中，C-端的“-OH”部分可被C-端的“-NH₂”部分取代，这在本发明中也被称为“酰胺化C-端”，反之亦然。然而，在所述的可选方案中，优选C-端的“-OH”部分。

术语“乙酰化的”(也缩写为“Ac”)是指通过肽的N-端乙酰化(肽的N-端被乙酰化)对N-端部分进行乙酰化保护。

在本发明的上下文中，优选的盐是本发明的化合物的生理学上可接受的盐。所述盐还包括本身不适合制药应用但可用于例如分离、纯化或储存本发明化合物的盐。

本发明化合物的合适的药学上可接受的盐可以是例如，在链中或环中带有足够碱性的氮原子的本发明化合物的酸加成盐，例如与无机酸或“矿物酸”的酸加成盐，所述酸例如盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、氨基磺酸、双硫酸、磷酸或硝酸；或与有机酸的酸加成盐，所述酸例如甲酸、乙酸、乙酰乙酸、丙酮酸、三氟乙酸、丙酸、丁酸、己酸、庚酸、十一烷酸、十二烷酸、苯甲酸、水杨酸、2-(4-羟基苯甲酰基)苯甲酸、樟脑酸、肉桂酸、环戊烷丙酸、二葡萄糖酸、3-羟基-2-萘甲酸、烟酸、帕莫酸、果胶酸、3-苯基丙酸、特戊酸、2-羟基乙磺酸、衣康酸、三氟甲磺酸、十二烷基硫酸、乙磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、甲磺酸、2-萘磺酸、萘磺酸、樟脑磺酸、柠檬酸、酒石酸、硬脂酸、乳酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、苹果酸、己二酸、藻酸、马来酸、富马酸、D-葡萄糖酸、扁桃酸、抗坏血酸、葡萄糖庚酸、甘油磷酸、天冬氨酸、磺基水杨酸或硫氰酸。

此外，本发明的充分酸性化合物的另一个合适的药学上可接受的盐是碱金属盐，例如钠盐或钾盐；碱土金属盐，例如钙盐、镁盐或锶盐，或铝盐或锌盐；或从氨或从具有1至20个碳原子的有机一级、二级或三级胺中提取的铵盐，例如乙胺、二乙胺、三乙胺、乙基二异丙胺、一乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、二环己基胺、二甲基氨基乙醇、二乙基氨基乙醇、三(羟甲基)氨基甲烷、普鲁卡因、二苄胺、N-甲基吗啉、精氨酸、赖氨酸、1,2-乙二胺、N-甲基哌啶、N-甲基葡糖胺、N,N-二甲基葡糖胺、N-乙基葡糖胺、1,6-己二胺、氨基葡糖、肌氨酸、丝氨醇、2-氨基-1,3-丙二醇、3-氨基-1,2-丙二醇、4-氨基-1,2,3-丁三醇，或具有1至20个碳原子的季铵离子的盐，如四甲基铵、四乙基铵、四(正丙基)铵、四(正丁基)铵、N-苄基-N,N,N-三甲基铵、胆碱或苄烷铵(benzalkonium)。

本领域的技术人员将进一步认识到，通过将化合物与合适的无机或有机酸通过多种已知方法中的任何一种进行反应来制备所要求保护的化合物的酸加成盐是有可能的。此外，本发明的酸性化合物的碱和碱土金属盐是通过本发明的化合物与合适的碱通过各种已知方法反应来制备的。

本发明包括本发明化合物作为单一的盐，或作为所述盐以任何比例的任何混合物的所有可能的盐。

在本文中，特别是在实验部分，对于本发明的中间体和实施例的合成，当化合物作为与相应的碱或酸的盐形式被提及时，在大多数情况下，通过各自的制备和/或纯化工艺获得的所述盐形式的确切化学计量组成是未知的。除非另有说明，否则与盐有关的化学名称或结构式的后缀(如“盐酸盐”、“三氟乙酸盐”、“钠盐”，或“x HCl”、“x CF₃COOH”、“x Na⁺”)例如意指盐形式，这种盐的化学计量没有具体说明。这同样类似于通过所述制备和/或纯化工艺获得的合成中间体或实例化合物或其盐作为溶剂合物(例如水合物)的情况。

在本发明的上下文中，溶剂合物被描述为本发明的化合物在固体或液体状态下通过与溶剂分子配位形成复合物的那些形式。水合物是一种其中与水配位的特殊形式的溶剂合物。在本发明的上下文中，溶剂合物优选水合物。

本发明的化合物可根据其结构以不同的立体异构体形式存在，即以构型异构体的形式存在，或者以构象异构体(对映体和/或非对映体，包括那些在阻转异构体的情况下)的形式存在(如果合适)。因此，本发明包括对映体和非对映体，以及它们各自的混合物。从此类对映体和/或非对映体的混合物中以已知的方式分离出立体异构均质成分是可能的。为此目的，优先采用色谱方法，特别是在非手性或手性分离相上的HPLC色谱法。对于作为中间体或最终产品的羧酸，前述分离也可以通过使用手性胺碱的非对映体盐进行。

在本发明的上下文中，术语“对映体纯”应理解为有关化合物就手性中心的绝对构型而言，其对映体过量超过95％，优选超过98％。本文中对映体过量(ee)是通过使用以下公式评估手性相上的HPLC分析色谱：

如果本发明的化合物能以互变异构的形式存在，那么本发明就包括所有的互变异构形式。

本发明还包括本发明化合物的所有合适的同位素变体。本发明的化合物的同位素变体在本文中被理解为意指这样的化合物，其中本发明的化合物中至少有一个原子被换成另一个具有相同原子数的原子，但其原子质量与自然界中通常或主要存在的(“非天然部分”)原子质量不同。表述“非天然部分”应理解为意指这种同位素的级分高于其天然存在率。在这方面采用的同位素的天然存在率可以在"Isotopic Compositions of theElements 1997",Pure Appl.Chem.,70(1),217-235,1998中找到。可掺入至本发明的化合物中的同位素的实例为：氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟、氯、溴和碘，如²H(氘)、³H(氚)、¹³C、¹⁴C、¹⁵N、¹⁷O、¹⁸O、³²P、³³P、³³S、³⁴S、³⁵S、³⁶S、¹⁸F、³⁶Cl、⁸²Br、¹²³I、¹²⁴I、¹²⁹I和¹³¹I。本发明的化合物的特定同位素变体(特别是那些加入了一种或多种放射性同位素的化合物)可能有利于例如检查作用机制或活性成分在体内的分布；由于其相对容易制备和检测，因此用³H或¹⁴C同位素标记的化合物特别适合于此目的。此外，同位素(例如氘)的并入可以导致特别的治疗效果，因为化合物的代谢稳定性更高，例如延长在体内的半衰期或减少所需的活性剂量；因此，本发明的化合物的这种修饰也可构成本发明的一个优选实施方案。在治疗和/或预防本文所规定的疾病方面，通式(I)的化合物的同位素变体优选含有氘(“通式(I)的含氘化合物”)。加入一种或多种放射性同位素(如³H或¹⁴C)的通式(I)的化合物的同位素变体例如在药物和/或底物组织分布研究中有益。由于这些同位素易于并入和检测，因此特别优选。可以将正电子发射同位素(如¹⁸F或¹¹C)并入至通式(I)的化合物中。通式(I)的化合物的这些同位素变体适合用于体内成像应用。含氘和含¹³C的通式(I)的化合物可在临床前或临床研究范围内用于质谱分析(H.J.Leis等人,Curr.Org.Chem.,1998,2,131)。本发明化合物的同位素变体可以通过本领域技术人员已知的常用工艺(例如通过下文进一步描述的方法和工作实施例中描述的步骤)通过使用相应的试剂和/或起始化合物的同位素修饰来制备。

通式(I)的化合物的同位素变体通常可以通过本领域技术人员已知的方法通过用试剂的同位素变体取代试剂(优选含氘的试剂)来制备，如本文描述的方案和/或实施例中所述。根据所需的氘化位点，在某些情况下可以将D₂O中的氘直接掺入到化合物中或掺入到可用于合成此类化合物的试剂中(Esaki等人,Tetrahedron,2006,62,10954；Esaki等人,Chem.Eur.J.,2007,13,4052)。光化学氘化和氚化方法也已记载(Y.Y.Loh等人,Science10.1126/science.aap9674(2017))。另一种用于将氘掺入至分子中的有用的试剂是氘气。掺入氘的快速途径是烯烃键的催化氘化(H.J.Leis等人,Curr.Org.Chem.,1998,2,131；J.R.Morandi等人,J.Org.Chem.,1969,34(6),1889)和炔键(N.H.Khan,J.Am.Chem.Soc.,1952,74(12),3018；S.Chandrasekhar等人,Tetrahedron,2011,52,3865)。为了在含有官能团的碳氢化合物中直接用氢交换氘，也可以在氘气存在下使用金属催化剂(即Pd、Pt和Rh)(J.G.Atkinson等人，美国专利3966781)。各种氘代试剂和合成单元可从一些公司获得，例如C/D/N Isotopes,Quebec,Canada；Cambridge Isotope Laboratories Inc.,Andover,MA,USA；和CombiPhos Catalysts,Inc.,Princeton,NJ,USA。与现有技术有关的关于氘-氢交换的进一步信息可在例如Hanzlik等人,J.Org.Chem.,1990,55,3992-3997；R.P.Hanzlik等人,Biochem.Biophys.Res.Commun.,1989,160,844；P.J.Reider等人,J.Org.Chem.,1987,52,3326-3334；M.Jarman等人,Carcinogenesis,1993,16(4),683-688；J.Atzrodt等人,Angew.Chem.,Int.Ed.2007,46,7744；K.Matoishi等人,2000,J.Chem.Soc,Chem.Commun.,1519-1520；K.Kassahun等人,WO2012/112363中找到。

术语“通式(I)的含氘化合物”被定义为这样的通式(I)的化合物，其中一个或多个氢原子被一个或多个氘原子取代，并且通式(I)的化合物中每个氘化位置的氘的存在率高于氘的天然存在率，约为0.015％。更特别地，在通式(I)的含氘化合物中，通式(I)的化合物中每个氘化位置的氘的存在率高于该位置或这些位置的10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％或80％，优选高于90％、95％、96％或97％，甚至进一步优选高于98％或99％。显然，每个氘化位置的氘的存在率与其他氘化位置的氘的存在率无关。

在通式(I)的化合物中选择性地掺入一个或多个氘原子可以改变其理化性质(例如酸度[A.Streitwieser等人,J.Am.Chem.Soc.,1963,85,2759；C.L.Perrin等人,J.Am.Chem.Soc.,2007,129,4490]，碱度[C.L.Perrin等人,J.Am.Chem.Soc.,2003,125,15008；C.L.Perrin in Advances in Physical Organic Chemistry,44,144；C.L.Perrin等人,J.Am.Chem.Soc.,2005,127,9641]，亲油性[B.Testa等人,Int.J.Pharm.,1984,19(3),271])和/或分子的代谢特征，并导致母体化合物和代谢物的比例或形成的代谢物的数量的变化。这种变化可能会导致特定的治疗效果，因此在特定情况下是优选的。已有报道称，代谢率降低和代谢转换，即代谢物的比例发生改变(D.J.Kushner等人,Can.J.Physiol.Pharmacol.,1999,77,79；A.E.Mutlib等人,Toxicol.Appl.Pharmacol.,2000,169,102)。暴露于母体化合物和代谢物的这些变化可能对通式(I)的含氘化合物的药效学、耐受性和疗效产生重要影响。在某些情况下，氘取代可以减少或消除不需要的或有毒的代谢物的形成，并增强所需代谢物的形成(例如Nevirapine:A.M.Sharma等人,Chem.Res.Toxicol.,2013,26,410；Uetrecht等人,Chemical Research in Toxicology,2008,21,9,1862；Efavirenz:A.E.Mutlib等人,Toxicol.Appl.Pharmacol.,2000,169,102)。在其他情况下，氘化的主要作用是降低全身清除率。因此，化合物的生物半衰期增加。潜在的临床益处包括能够维持类似的全身暴露，同时降低峰值水平，增加谷底水平。这可能导致较低的副作用和增强的疗效，其取决于特定化合物的药代动力学/药效学关系。茚地普隆(Indiplon)(A.J.Morales等人,Abstract 285,The 15^th North American Meeting ofthe International Society of Xenobiotics,San Diego,CA,October 12-16,2008)、ML-337(C.J.Wenthur等人,J.Med.Chem.,2013,56,5208)和奥达卡替(Odanacatib)(K.Kassahun等人,WO2012/112363)是这种氘作用的实例。还有其他一些案例报道，代谢率的降低导致药物暴露量的增加而不改变全身清除率(如罗非昔布(rofecoxib)：F.Schneider等人,Arzneim.Forsch.Drug.Res.,2006,56,295；替拉瑞韦(telaprevir):F.Maltais等人,J.Med.Chem.,2009,52,7993)。表现出这种效果的氘化药物可能具有降低的剂量要求(例如较低的剂量数量或较低的剂量以达到预期效果)和/或可能产生较低的代谢物负荷。

通式(I)的化合物可能具有多个潜在的代谢攻击点。为了优化上述对理化性质和代谢特征的影响，可以选择具有一种或多种氘-氢交换的某种模式的通式(I)的含氘化合物。特别地，通式(I)的含氘化合物的氘原子与碳原子和/或位于通式(I)的化合物的那些位置相连，这些位置是代谢酶(如细胞色素P₄₅₀)的攻击点。

本发明还包括本发明的化合物的前药。术语“前药”在本文中是指本身可能具有生物活性或非活性的化合物，但其在体内存在时，前述化合物例如通过代谢或水解途径转化为本发明的化合物。

当本发明化合物中的基团被取代时，除非另有规定，否则基团可单取代或多取代。在本发明的上下文中，所有出现一次以上的基团都是相互独立定义的。当本发明化合物中的基团被取代时，除非另有规定，否则基团可单取代或多取代。取代优选由一个取代基或由两个相同或不同的取代基进行。

在本发明的上下文中，术语“治疗(“treatment”或“treating”)”包括抑制、延缓、检查、减轻、减弱、限制、减少、制止、排斥或治愈疾病、病况、病症、损伤或健康问题，或前述状态和/或前述状态的综合征的发展、过程或进展。术语“疗法(therapy)”在本文中被理解为与术语“治疗(treatment)”同义。

术语“预防(“prevention”、“prophylaxis”)和“阻止(preclusion)”在本发明的上下文中是同义的，其是指避免或减少感染、经历、遭受或患有某种疾病、病况、病症、损伤或健康问题的风险，或避免或减少前述状态和/或前述状态的综合征的发展或进展。

对疾病、病况、病症、损伤或健康问题的治疗或预防可以是部分的或完全的。

在本发明的上下文中，优选式(I)的化合物，或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂合物或其盐的溶剂合物，其中

R¹不存在，

或者

其中

##标志着与X¹的末端氨基的连接，

R⁴代表

其中

或者

代表式(IIIa)的基团

其中

**标志着与氮原子的连接，

D¹为C₁-C₄-亚烷基，

Y¹选自羟基、甲氧基、乙氧基、羧基、甲酰胺或氨基，

其中，氨基可被6-羧基四甲基罗丹明(Tam)通过酰胺键取代，

并且

r代表2至15的整数，

R²代表式(II)的基团

其中

*代表与X³的羧基的羰基原子的连接，

Z代表键或-CH₂-，

m代表1或2，

n代表1或2，

X³代表天然氨基酸P，或选自以下的非天然氨基酸：2,3,3a,4,5,6,7,7a-八氢吲哚-2-羧酸(Oic)、L-羟基脯氨酸(Hyp)、(2S,4S)-4-三氟甲基-吡咯烷-2-羧酸((4-CF3)P)、(2S,4S)-4-氟脯氨酸((顺式-4-氟)P)、反式-4-氟脯氨酸((反式-4-氟)P)、(2S)-2-氨基-4,4,4-三氟丁酸、L-反式-3-羟基脯氨酸((3S-OH)P)、L-哌可酸(Pip)、(1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-羧酸、(6S)-5-氮杂螺[2.4]庚烷-6-羧酸、rel-(1R,3R,5R,6R)-6-(三氟甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-羧酸、(2S)-2-氨基-4,4,4-三氟丁酸、(2S,3aS,6aS)-八氢环戊烯并[b]吡咯-2-羧酸、反式-4-氟脯氨酸((反式-4-氟)P)、

X⁵代表选自F、H、W或Y的天然氨基酸，或选自以下的非天然氨基酸：环己基丙氨酸(Cha)、2,3,3a,4,5,6,7,7a-八氢吲哚-2-羧酸(Oic)、L-4-溴苯丙氨酸((4-溴)F)、2,5-二氟-L-苯丙氨酸((2,5-二氟)F)、2-氯-L-苯丙氨酸((2-氯)F)、3-氯-L-苯丙氨酸((3-氯)F)、4-氯-L-苯丙氨酸((4-氯)F)、L-2-溴苯丙氨酸((2-溴)F)、L-3-溴苯丙氨酸((3-溴)F)、L-4-溴苯丙氨酸((4-溴)F)、2-氟-L-苯丙氨酸((2-氟)F)、3-氟-L-苯丙氨酸((3-氟)F)、4-氟-L-苯丙氨酸((4-氟)F)、2,5-二氟-L-苯丙氨酸、2-甲基-L-苯丙氨酸((2-Me)F)、3-甲基-L-苯丙氨酸((3-Me)F)、4-甲基-L-苯丙氨酸((4-Me)F)、(2S)-3-(2,3-二氟苯基)-2-氨基丙酸、L-苯基甘氨酸(Phg)、N-苯基甘氨酸((N-Ph)G)、3-氯-L-苯基甘氨酸((3-氯-Ph)G)、3-(1,3-苯并噻唑-2-基)-L-丙氨酸、1-苄基-L-组氨酸(H(1-Bn))、1-甲基-L-组氨酸(H(1-Me))、L-3-甲基组氨酸((3-Me)H)、L-2-吡啶基丙氨酸(2-Pal)、L-3-吡啶基丙氨酸(3-Pal)、L-4-吡啶基丙氨酸(4-Pal)、3-(氨基甲基)苯甲酸、L-1-萘基丙氨酸(1-Nal)、L-2-萘基丙氨酸(2-Nal)、(2R)-氨基-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)乙酸和(2S)-3-(吲哚-4-基)-2-(氨基)丙酸，

其中，

##标志着与X¹的末端氨基的连接，

X⁷代表选自F、H、W或Y的天然氨基酸，或选自以下的非天然氨基酸：环己基丙氨酸(Cha)、2,3,3a,4,5,6,7,7a-八氢吲哚-2-羧酸(Oic)、L-4-溴苯丙氨酸((4-溴)F)、2,5-二氟-L-苯丙氨酸((2,5-二氟)F)、2-氯-L-苯丙氨酸((2-氯)F)、3-氯-L-苯丙氨酸((3-氯)F)、4-氯-L-苯丙氨酸((4-氯)F)、L-2-溴苯丙氨酸((2-溴)F)、L-3-溴苯丙氨酸((3-溴)F)、L-4-溴苯丙氨酸((4-溴)F)、2-氟-L-苯丙氨酸((2-氟)F)、3-氟-L-苯丙氨酸((3-氟)F)、4-氟-L-苯丙氨酸((4-氟)F)、2,5-二氟-L-苯丙氨酸、2-甲基-L-苯丙氨酸((2-Me)F)、3-甲基-L-苯丙氨酸((3-Me)F)、4-甲基-L-苯丙氨酸((4-Me)F)、(2S)-3-(2,3-二氟苯基)-2-氨基丙酸、L-苯基甘氨酸(Phg)、N-苯基甘氨酸((N-Ph)G)、3-氯-L-苯基甘氨酸((3-氯-Ph)G)、3-(1,3-苯并噻唑-2-基)-L-丙氨酸、1-苄基-L-组氨酸(H(1-Bn))、1-甲基-L-组氨酸(H(1-Me))、L-3-甲基组氨酸((3-Me)H)、L-2-吡啶基丙氨酸(2-Pal)、L-3-吡啶基丙氨酸(3-Pal)、L-4-吡啶基丙氨酸(4-Pal)、3-(氨基甲基)苯甲酸、L-1-萘基丙氨酸(1-Nal)、L-2-萘基丙氨酸(2-Nal)、(2R)-氨基-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)乙酸和(2S)-3-(吲哚-4-基)-2-(氨基)丙酸，

条件是，不包括化合物YFP[cQFAFC]。

在本发明的上下文中，进一步优选式(I)的化合物，或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂合物或其盐的溶剂合物，其中

R¹不存在，

或者

代表6-羧基四甲基罗丹明(Tam)、##C(O)R³或序列R⁴GFLG##，其中

##标志着与X¹的末端氨基的连接，

R³代表C₁-C₄-亚烷基，

其中，C₁-C₄-亚烷基至多被选自以下的基团相同或不同地三取代：羟基、甲氧基、乙氧基、羧基、氨基、氟和氯，

R⁴代表

其中

R⁵代表C₁-C₄-亚烷基，

其中，C₁-C₄-亚烷基至多被选自以下的基团相同或不同地三取代：羟基、甲氧基、乙氧基、羧基、氨基、氯和氟，

或者

代表式(IIIa)的基团

其中

**标志着与氮原子的连接，

D¹为C₁-C₄-亚烷基，

Y¹选自羟基、甲氧基、乙氧基、羧基、甲酰胺或氨基，

其中，氨基可被6-羧基四甲基罗丹明(Tam)通过酰胺键取代，

并且

r代表2至6的整数，

R²代表式(II)的基团

其中

*代表与X³的羧基的羰基原子的连接，

Z代表键或-CH₂-，

m代表1或2，

n代表1或2，

X¹代表选自L、I、F、H、M、W、Y或y的天然氨基酸，或选自以下的非天然氨基酸：L-正亮氨酸(Nle)、2,3,3a,4,5,6,7,7a-八氢吲哚-2-羧酸(Oic)、4-溴苯丙氨酸((4-溴)F)、2,5-二氟苯丙氨酸((2,5-二氟)F)、2-氯苯丙氨酸((2-氯)F)、3-氯苯丙氨酸((3-氯)F)、4-氯苯丙氨酸((4-氯)F)、2-溴苯丙氨酸((2-溴)F)、3-溴苯丙氨酸((3-溴)F)、4-溴苯丙氨酸((4-溴)F)、2-氟苯丙氨酸((2-氟)F)、3-氟苯丙氨酸((3-氟)F)、4-氟苯丙氨酸((4-氟)F)、2,5-二氟-苯丙氨酸、2-甲基-苯丙氨酸((2-Me)F)、3-甲基-苯丙氨酸((3-Me)F)、4-甲基苯丙氨酸((4-Me)F)、1-苄基-组氨酸(H(1-Bn))、1-甲基-组氨酸(H(1-Me))、3-甲基组氨酸((3-Me)H)、2-吡啶基丙氨酸(2-Pal)、3-吡啶基丙氨酸(3-Pal)、4-吡啶基丙氨酸(4-Pal)，其中来自上述的任何天然氨基酸和/或非天然氨基酸可为D-立体构型或L-立体构型，

X²代表选自L、I、F、H、M、W或Y的天然氨基酸，或选自以下的非天然氨基酸：L-正亮氨酸(Nle)、2,3,3a,4,5,6,7,7a-八氢吲哚-2-羧酸(Oic)、L-4-溴苯丙氨酸((4-溴)F)、2,5-二氟-L-苯丙氨酸((2,5-二氟)F)、2-氯-L-苯丙氨酸((2-氯)F)、3-氯-L-苯丙氨酸((3-氯)F)、4-氯-L-苯丙氨酸((4-氯)F)、L-2-溴苯丙氨酸((2-溴)F)、L-3-溴苯丙氨酸((3-溴)F)、L-4-溴苯丙氨酸((4-溴)F)、2-氟-L-苯丙氨酸((2-氟)F)、3-氟-L-苯丙氨酸((3-氟)F)、4-氟-L-苯丙氨酸((4-氟)F)、2,5-二氟-L-苯丙氨酸、2-甲基-L-苯丙氨酸((2-Me)F)、3-甲基-L-苯丙氨酸((3-Me)F)、4-甲基-L-苯丙氨酸((4-Me)F)、1-苄基-L-组氨酸(H(1-Bn))、1-甲基-L-组氨酸(H(1-Me))、L-3-甲基组氨酸((3-Me)H)、L-2-吡啶基丙氨酸(2-Pal)、L-3-吡啶基丙氨酸(3-Pal)、L-4-吡啶基丙氨酸(4-Pal)，

X³代表天然氨基酸P，或选自以下的非天然氨基酸：L-羟基脯氨酸(Hyp)、(2S,4S)-4-三氟甲基-吡咯烷-2-羧酸((4-CF3)P)、(2S,4S)-4-氟脯氨酸((顺式-4-氟)P)、反式-4-氟脯氨酸((反式-4-氟)P)、(2S)-2-氨基-4,4,4-三氟丁酸、L-反式-3-羟基脯氨酸((3S-OH)P)、(1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-羧酸、(6S)-5-氮杂螺[2.4]庚烷-6-羧酸、rel-(1R,3R,5R,6R)-6-(三氟甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-羧酸、(2S)-2-氨基-4,4,4-三氟丁酸、(2S,3aS,6aS)-八氢环戊烯并[b]吡咯-2-羧酸、(2S,4S)-4-氟脯氨酸((顺式-4-氟)P)、L-4,4-二氟脯氨酸((二氟)P)，

X⁴代表任何天然氨基酸，其中任何天然氨基酸可为D-立体构型或L-立体构型，

X⁵代表选自F、H、W或Y的天然氨基酸，或选自以下的非天然氨基酸：环己基丙氨酸(Cha)、2,3,3a,4,5,6,7,7a-八氢吲哚-2-羧酸(Oic)、L-4-溴苯丙氨酸((4-溴)F)、2,5-二氟-L-苯丙氨酸((2,5-二氟)F)、2-氯-L-苯丙氨酸((2-氯)F)、3-氯-L-苯丙氨酸((3-氯)F)、4-氯-L-苯丙氨酸((4-氯)F)、L-2-溴苯丙氨酸((2-溴)F)、L-3-溴苯丙氨酸((3-溴)F)、L-4-溴苯丙氨酸((4-溴)F)、2-氟-L-苯丙氨酸((2-氟)F)、3-氟-L-苯丙氨酸((3-氟)F)、4-氟-L-苯丙氨酸((4-氟)F)、2,5-二氟-L-苯丙氨酸、2-甲基-L-苯丙氨酸((2-Me)F)、3-甲基-L-苯丙氨酸((3-Me)F)、4-甲基-L-苯丙氨酸((4-Me)F)、1-苄基-L-组氨酸(H(1-Bn))、1-甲基-L-组氨酸(H(1-Me))、L-3-甲基组氨酸((3-Me)H)、L-2-吡啶基丙氨酸(2-Pal)、L-3-吡啶基丙氨酸(3-Pal)、L-4-吡啶基丙氨酸(4-Pal)，

X⁶代表任何天然氨基酸，其中任何天然氨基酸可为D-立体构型或L-立体构型，

其中，赖氨酸的氨基可被6-羧基四甲基罗丹明(Tam)或

##C(O)R³取代，

其中，

##标志着与X¹的末端氨基的连接，

X⁷代表选自F、H、W或Y的天然氨基酸，或选自以下的非天然氨基酸：环己基丙氨酸(Cha)、2,3,3a,4,5,6,7,7a-八氢吲哚-2-羧酸(Oic)、L-4-溴苯丙氨酸((4-溴)F)、2,5-二氟-L-苯丙氨酸((2,5-二氟)F)、2-氯-L-苯丙氨酸((2-氯)F)、3-氯-L-苯丙氨酸((3-氯)F)、4-氯-L-苯丙氨酸((4-氯)F)、L-2-溴苯丙氨酸((2-溴)F)、L-3-溴苯丙氨酸((3-溴)F)、L-4-溴苯丙氨酸((4-溴)F)、2-氟-L-苯丙氨酸((2-氟)F)、3-氟-L-苯丙氨酸((3-氟)F)、4-氟-L-苯丙氨酸((4-氟)F)、2,5-二氟-L-苯丙氨酸、2-甲基-L-苯丙氨酸((2-Me)F)、3-甲基-L-苯丙氨酸((3-Me)F)、4-甲基-L-苯丙氨酸((4-Me)F)、1-苄基-L-组氨酸(H(1-Bn))、1-甲基-L-组氨酸(H(1-Me))、L-3-甲基组氨酸((3-Me)H)、L-2-吡啶基丙氨酸(2-Pal)、L-3-吡啶基丙氨酸(3-Pal)、L-4-吡啶基丙氨酸(4-Pal)，

条件是，不包括化合物YFP[cQFAFC]。

R¹不存在，

或者

代表6-羧基四甲基罗丹明(Tam)或序列R⁴GFLG##，

其中

##标志着与X¹的末端氨基的连接，

R⁴代表

其中

R⁵代表甲基或乙基，

或者

代表式(IIIa)的基团

其中

**标志着与氮原子的连接，

D¹为C₁-C₄-亚烷基，

Y¹选自羟基、甲氧基、乙氧基、羧基、甲酰胺或氨基，

其中，氨基可被6-羧基四甲基罗丹明(Tam)通过酰胺键取代，

并且

r代表2至4的整数，

R²代表式(II)的基团

其中

*代表与X³的羧基的羰基原子的连接，

Z代表键或-CH₂-，

m代表1或2，

n代表1或2，

X¹代表选自F、H、Y或y的天然氨基酸，其中来自前述的任何氨基酸可为D-立体构型或L-立体构型，

X²代表选自F、H、Y或y的天然氨基酸，其中来自前述的任何氨基酸可为D-立体构型或L-立体构型，

X³代表天然氨基酸P，或选自以下的非天然氨基酸：L-羟基脯氨酸(Hyp)、(2S,4S)-4-三氟甲基-吡咯烷-2-羧酸

((4-CF3)P)、(2S,4S)-4-氟脯氨酸((顺式-4-氟)P)、反式

-4-氟脯氨酸((反式-4-氟)P)、(2S)-2-氨基-4,4,4-三氟丁酸、

L-反式-3-羟基脯氨酸、(2S,4S)-4-氟脯氨酸((顺式-4-

氟)P)、L-4,4-二氟脯氨酸((二氟)P)，

X⁴代表选自Q、A和K的天然氨基酸，其中任何天然氨基酸可为D-立体构型或L-立体构型，

X⁵代表选自F、H、W或Y的天然氨基酸，

X⁶代表选自Q、A和K的天然氨基酸，其中任何天然氨基酸可为D-立体构型或L-立体构型，

其中，K的氨基可被6-羧基四甲基罗丹明(Tam)取代，

X⁷代表选自F、H、W或Y的天然氨基酸，

条件是，不包括化合物YFP[cQFAFC]。

在本发明的上下文中，特别优选式(I)的化合物，或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂合物或其盐的溶剂合物，其中

R¹不存在，

或者

代表6-羧基四甲基罗丹明(Tam)或序列R⁴GFLG##，

其中

##标志着与X¹的末端氨基的连接，

R⁴代表

其中

R⁵代表甲基，

或者

代表式(IIIa)的基团

其中

**标志着与X¹的末端氨基的连接，

D¹ 为亚乙基，

Y¹ 为氨基，

其中，氨基可被6-羧基四甲基罗丹明(Tam)通过酰胺键取代，

并且

r代表4，

R²代表式(II)的基团

其中

*代表与X³的羧基的羰基原子的连接，

Z代表键或-CH₂-，

m代表1或2，

n代表1或2，

X¹代表Y或y，

X²代表F，

X³代表P，

X⁴代表Q，

X⁵代表F，

X⁶代表A或K，

X⁷代表F或W，

条件是，不包括化合物YFP[cQFAFC]。

根据另一个实施方案，本发明提供了根据式(I)的化合物，其中R¹不存在，

或者

代表6-羧基四甲基罗丹明(Tam)或序列R⁴GFLG##，

其中

##标志着与X¹的末端氨基的连接，

R⁴代表

其中

R⁵代表甲基，

或者

代表式(IIIa)的基团

其中

**标志着与X¹的末端氨基的连接，

D¹ 为亚乙基，

Y¹ 为氨基，

其中，氨基可被6-羧基四甲基罗丹明(Tam)通过酰胺键取代，

并且

r代表4。

根据另一个实施方案，本发明提供了根据式(I)的化合物，其中

R²代表式(II)的基团

其中

*代表与X³的羧基的羰基原子的连接，

Z代表键或-CH₂-，

m代表1或2，

n代表1或2，

X³代表天然氨基酸P，或选自以下的非天然氨基酸：L-羟基脯氨酸(Hyp)、(2S,4S)-4-三氟甲基-吡咯烷-2-羧酸((4-CF3)P)、(2S,4S)-4-氟脯氨酸((顺式-4-氟)P)、反式-4-氟脯氨酸((反式-4-氟)P)、(2S)-2-氨基-4,4,4-三氟丁酸、L-反式-3-羟基脯氨酸、(2S,4S)-4-氟脯氨酸((顺式-4-氟)P)、L-4,4-二氟脯氨酸((二氟)P)，

X⁵代表选自F、H、W或Y的天然氨基酸，

其中，K的氨基可被6-羧基四甲基罗丹明(Tam)取代，

X⁷代表选自F、H、W或Y的天然氨基酸。

根据另一个实施方案，本发明提供了根据式(I)的化合物，其中R²代表式(II)的基团

其中

*代表与X³的羧基的羰基原子的连接，

Z代表键或-CH₂-，

m代表1或2，

n代表1或2，

X¹代表Y或y，

X²代表F，

X³代表P，

X⁴代表Q，

X⁵代表F，

X⁶代表A或K，

X⁷代表F或W。

X¹代表选自F、H、Y或y的天然氨基酸，其中来自前述的任何氨

基酸可为D-立体构型或L-立体构型。

X²代表选自F、H、Y或y的天然氨基酸，其中来自前述的任何氨

基酸可为D-立体构型或L-立体构型。

X³代表天然氨基酸P，或选自以下的非天然氨基酸：L-羟基脯氨酸(Hyp)、(2S,4S)-4-三氟甲基-吡咯烷-2-羧酸((4-CF3)P)、(2S,4S)-4-氟脯氨酸((顺式-4-氟)P)、反式-4-氟脯氨酸((反式-4-氟)P)、(2S)-2-氨基-4,4,4-三氟丁酸、L-反式-3-羟基脯氨酸、(2S,4S)-4-氟脯氨酸((顺式-4-氟)P)、L-4,4-二氟脯氨酸((二氟)P)。

X⁴代表选自Q、A和K的天然氨基酸，其中任何天然氨基酸可为D-立体构型或L-立体构型。

X⁵代表选自F、H、W或Y的天然氨基酸。

X⁶代表选自Q、A和K的天然氨基酸，其中任何天然氨基酸可为D-立体构型或L-立体构型。

X⁷代表选自F、H、W或Y的天然氨基酸。

X¹代表Y或y。

X²代表F。

X³代表P。

X⁴代表Q。

X⁵代表Q。

X⁶代表A或K。

X⁷代表选自F或Y的天然氨基酸。

不包括化合物YFP[cQFAFC]和yFP[xQFAWC]。

本发明的肽可包含C₈-C₂₀脂肪酸。通常，此类脂肪酸可以是支链或环状的。所述C₈-C₂₀脂肪酸优选与N-端结合。所述C₈-C₂₀脂肪酸可与肽的化学基团和/或氨基酸的任何合适的官能团(例如羟基、羧基、氨基、硫醇基，优选氨基或羧基)结合。优选地，所述C₈-C₂₀脂肪酸通过酰胺键与N-末端结合。优选地，所述由R¹形成的脂肪酸侧链为>C₁₀的脂肪酸，更优选C₁₄-、C₁₆-或C₁₈-脂肪酸。

术语“模拟物(mimetic)”在根据本发明的式(I)或式(II)的若干肽的部分的定义中与一些氨基酸一起使用代表各自的氨基酸模拟物，例如，精氨酸模拟物、异亮氨酸模拟物或脯氨酸模拟物。通常，“蛋白质模拟物”表示在生物学上模拟一些其他蛋白质的作用或活性的分子，如肽、修饰肽或任何其他分子。在使用与某种氨基酸有关的术语“模拟物”的上下文中，所述术语“模拟物”类似地表示任何其他氨基酸、氨基酸类似物、氨基酸衍生物、氨基酸偶联物等，它们在生物学上模拟各自氨基酸的作用或活性。

特别地，根据本发明的脯氨酸模拟物包含(1S,2S,5R)-3-氮杂双环-[3.1.0]己烷-2-羧酸、Hyp、吗啉-3-羧酸、Pip、(4aR,6aR,9S,11aS)-11-氧代-2,3,4,4a,6a,7,8,9,11,11a-十氢-1H-吡啶并[3,2-e]吡咯并[1,2-a]氮杂卓-9-羧酸或(反式-4-氟)P、(1R,2S,5S)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-羧酸、Oic、Hyp、(4-CF3)P、(顺式-4-氟)P、3,3-二甲基-1,3-氮杂硅环戊烷-5-羧酸、(3S-OH)P、(1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-羧酸、(6S)-5-氮杂螺[2.4]庚烷-6-羧酸、rel-(1R,3R,5R,6R)-6-(三氟甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-羧酸、(2S,3aS,6aS)-八氢环戊烷并[b]吡咯-2-羧酸或二氟脯氨酸、(3R,6R)-1,1-二氟-5-氮杂螺[2.4]庚烷-6-羧酸(对映体1)、(3R,6R)-1,1-二氟-5-氮杂螺[2.4]庚烷-6-羧酸(对映体2)和取代的脯氨酸。

特别地，根据本发明的异亮氨酸模拟物包含(N-甲基)-I、allo-Ile、Cba、Nva、Abu、Leu、Cpg、环己基-Gly、(S)-2-氨基-3-乙基-戊酸、3-氯-Phg、allo-Ile、Chg、环丁基甘氨酸、allo-Ile、Cbg、(2S,3S)-2-((氨基)甲基)-3-甲基戊酸、Phg、2-[(1S,2S)-1-(氨基)-2-甲基丁基]-1,3-噁唑-4-羧酸、2-甲基-D-别异亮氨酸、Nva、Abu或Ala。

特别地，根据本发明的亮氨酸模拟物包含(tBu)A、(2-氯)F、(2-溴)F、AAD、(2S)-2-氨基-4,4,4-三氟丁酸、Cnba、(4-氟)L、(S)-(三氟甲基)-L-半胱氨酸、(2S)-2-氨基-3-(1-甲基环丙基)丙酸、Gly(tBu)、3-(三甲基硅烷基)-L-丙氨酸、2,5-二氟-L-苯丙氨酸、2-氨基-7-(叔丁氧基)-7-氧代庚酸、5,5,5-三氟-L-亮氨酸((三氟)L)、(2-Me)F、Cba、Cpa、环丙基甲基丙氨酸、三氟甲基丙氨酸或二氟甲基丙氨酸、(2-氟)F、(2S)-3-(2,3-二氟苯基)-2-氨基丙酸、(2S)-3-(3-氰基苯基)-2-氨基丙酸、2-氨基-5,5,5-三氟-4-甲基-戊酸、(2S)-2-氨基-5-甲基-己酸或(2S)-3-(吲哚-4-基)-2-(氨基)丙酸。

本发明还包含所述肽的类似物和衍生物。根据本发明的肽或氨基酸序列的术语“类似物”或“衍生物”特别包含与所述序列具有至少80％或至少85％，优选至少90％，更优选至少95％，甚至更优选至少99％同一性，并具有相同或可比的特性或活性的任何氨基酸序列。序列同一性可以通过通用技术(如视觉比较或通过本领域普遍使用的任何计算机工具)来确定。实例包含使用默认参数的BLAST程序。

本发明的肽或氨基酸序列的类似物或衍生物可由本发明的肽序列的突变或变异(包括一个或多个氨基酸的删除或插入或一个或多个氨基酸的置换，甚至是选择性剪接)所产生的变化而产生。这些修饰中的几个可以结合起来。优选地，本发明的氨基酸序列的类似物包含相对于氨基酸序列的保守置换。

如本文所使用的术语“保守置换”是指一个或多个氨基酸被另一个生物学上相似的残基所替换。实例包括具有类似特征的氨基酸残基(例如小氨基酸、酸性氨基酸、极性氨基酸、碱性氨基酸、疏水氨基酸和芳族氨基酸)的置换。例如，参见下文表4的方案，其中氨基酸的保守置换物按理化性质分组。I：中性，亲水；II：酸和酰胺；III：碱性；IV：疏水；V：芳族、大体积氨基酸，VI：中性或疏水；VII：酸性；VIII：极性。

表4：根据氨基酸物理化学特性分组的氨基酸

除非另有说明，否则本发明的所有肽都为TFA盐。本发明还包含本文定义的肽的药学上可接受的盐形式和无盐形式。其中，药学上可接受的盐代表本发明的肽或化合物的盐或两性离子形式，这些盐或两性离子是水溶性或油溶性或可分散的，适合治疗无过度的毒性、刺激性和过敏反应的疾病；与合理的收益/风险比相称，并且对其预期用途有效。这些盐可以在化合物的最终分离和纯化期间制备，也可以通过使一个氨基与合适的酸反应来单独制备。代表性的酸加成盐包括乙酸盐、己二酸盐、藻酸盐、柠檬酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、碳酸盐、二葡糖酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、甲酸盐、富马酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐(羟乙基磺酸盐)、乳酸盐、马来酸盐、均三甲基磺酸盐、甲磺酸盐、萘磺酸盐、烟酸盐、2-萘磺酸盐、草酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、三氯乙酸盐、三氟乙酸盐、磷酸盐、谷氨酸盐、碳酸氢盐、对甲苯磺酸盐和十一烷酸盐。优选的酸加成盐包括三氟乙酸盐、甲酸盐、盐酸盐和乙酸盐。

本发明的肽可以用合适的具有重复单元的水溶性聚合物取代。合适的聚合物可选自聚烷氧基聚合物、透明质酸及其衍生物、聚乙烯醇、聚噁唑啉、聚酸酐、聚(原酸酯)、聚碳酸酯、聚氨酯、聚丙烯酸、聚丙烯酰胺、聚丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸酯、聚有机膦腈、聚硅氧烷、聚乙烯吡咯烷酮、聚氰基丙烯酸酯和聚酯。

本发明的肽可以被至少一个聚乙烯基团(PEG基团)取代。PEG基团优选与N-末端结合。PEG基团可以与任何合适的肽的化学基团和/或氨基酸的官能团(例如羟基、羧基、氨基、硫醇基，优选氨基或羧基)结合。优选地，根据本发明的肽含有一个与N-末端结合的PEG基团。更优选地，一个PEG基团通过酰胺键与N-端结合。

根据本发明的PEG基团是任何含有至少两个环氧乙烷单元的基团，以形成环氧乙烷的低聚物或聚合物。

此外，本发明化合物中的氨基可以用以下物质进行季铵化：甲基、乙基、丙基和丁基的氯化物，溴化物和碘化物；二甲基、二乙基、二丁基和二戊基的硫酸盐；癸基、月桂基、肉豆蔻基和甾醇的氯化物，溴化物和碘化物；以及苄基和苯乙基的溴化物。可用于形成治疗上可接受的加成盐的酸的实例包括无机酸，如盐酸、氢溴酸、硫酸和磷酸，以及有机酸，如草酸、马来酸、琥珀酸和柠檬酸。药学上可接受的盐可以合适地为在例如酸加成盐和碱性盐中选择的盐。酸加成盐的实例包括氯化物盐、柠檬酸盐和乙酸盐。

碱性盐的实例包括其中阳离子选自以下的盐：碱金属阳离子，如钠或钾离子；碱土金属阳离子，如钙或镁离子；以及取代的铵离子，如N(R¹)(R²)(R³)(R⁴)⁺类型的离子，其中R¹、R²、R³和R⁴通常彼此独立为氢、任选取代的C_1-6-烷基或任选取代的C_2-6-烯基。相关的C_1-6-烷基的实例包括甲基、乙基、1-丙基和2-丙基。可能相关的C_2-6-烯基的实例包括乙烯基、1-丙烯基和2-丙烯基。其中，其中阳离子选自钠、钾和钙的盐为优选的。

药学上可接受的盐的其他实例记载于"Remington's PharmaceuticalSciences",第17版,Alfonso R.Gennaro(Ed.),Mark Publishing Company,Easton,PA,USA,1985(and more recent editions thereof),in the"Encyclopaedia ofPharmaceutical Technology",第3版,James Swarbrick(Ed.),Informa Healthcare USA(Inc.),NY,USA,2007中。此外，关于合适的盐的评论，参见Handbook of PharmaceuticalSalts:Properties,Selection,and Use by Stahl and Wermuth(Wiley-VCH,2002)。其他合适的碱盐是由形成无毒盐的碱形成的。代表性的实例包括铝盐、精氨酸盐、苄星青霉素盐、钙盐、胆碱盐、二乙胺盐、二乙醇胺盐、甘氨酸盐、赖氨酸盐、镁盐、甲葡胺盐、乙醇胺盐、钾盐、钠盐、氨丁三醇盐和锌盐，优选胆碱盐。也可以形成酸和碱的半盐，例如半硫酸盐和半钙盐。

本发明还包含本文定义的肽的溶剂合物。在此，术语“溶剂合物”是指溶质(例如，根据本发明的肽或其药学上可接受的盐)和溶剂之间形成的具有确定化学计量的复合物。这方面的溶剂可例如为水、乙醇或另一种药学上可接受的、典型的小分子有机物(如但不限于乙酸或乳酸)。当相关的溶剂是水时，这种溶剂合物通常被称为水合物。

本发明的化合物显示了不可预见的有用的药理活性谱。

因此，它们适合作为治疗和/或预防人类和动物疾病的药物使用。

基于它们的药理特性，本发明的化合物可用于治疗和/或预防心血管疾病、代谢紊乱，特别是糖尿病及其后续症状，例如糖尿病大血管和微血管病变、糖尿病肾病和神经病变。

所述化合物还适用于治疗和/或预防肥胖症。

所述化合物还适用于治疗和/或预防哮喘病。

本发明的化合物还适用于治疗和/或预防胃肠道炎症，例如炎性肠病、克罗恩氏(Crohn′s)病、溃疡性结肠炎和肠毒性和血管病症，以及用于治疗和/或预防脓毒症(SIRS)、多器官衰竭(MODS、MOF)、肾脏炎症、慢性肠道炎症(IBD、克罗恩病、溃疡性结肠炎)、胰腺炎、腹膜炎、膀胱炎、尿道炎、前列腺炎、附睾炎、卵巢炎、输卵管炎、外阴阴道炎、类风湿性病症、骨关节炎、中枢神经系统炎症、多发性硬化症、炎症性皮肤病和炎症性眼病。

此外，本发明的化合物适用于治疗癌症，例如皮肤癌、脑瘤、乳腺癌、骨髓瘤、白血病、脂肪肉瘤、胃肠道癌、肝癌、胰腺癌、肺癌、肾癌、输尿管癌、前列腺癌和生殖道癌，以及10种淋巴增生系统的恶性肿瘤，例如霍奇金(Hodgkin)淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤。

进一步公开的是一种使用有效量的根据本发明或根据本文所公开的实施方案之一的至少一种式(I)的化合物、生理上可接受的盐、溶剂合物或其盐的溶剂合物，或包含根据本发明或根据本文所公开的实施方案之一的式(I)的化合物、生理上可接受的盐、溶剂合物或其盐的溶剂合物的药物治疗和/或预防人类或动物的代谢紊乱、糖尿病、肥胖症、哮喘病、炎症性病症和癌症的方法。

本发明进一步提供了一种制备式(I)的化合物或其盐、其溶剂合物或其盐的溶剂合物的方法。

术语“预防(“prevention”、“prophylaxis”)和“阻止”在本发明的上下文中是同义的，其是指避免或减少感染、经历、遭受或患有某种疾病、病况、病症、损伤或健康问题的风险，或避免或减少前述状态和/或前述状态的综合征的发展或推进。

根据本发明的式(I)的化合物、生理学上可接受的盐、溶剂合物或其盐的溶剂合物可用于治疗和/或预防代谢紊乱、癌症和/或炎症性疾病的方法。

根据另一个方面，本发明因此进一步提供了本发明的化合物用于治疗和/或预防病症，特别是上述病症的用途。

根据另一个方面，本发明进一步提供了本发明的化合物用于制备用于治疗和/或预防病症，特别是上述病症的药物的用途。

根据另一个方面，本发明进一步提供了一种包含至少一种本发明的化合物的药物，所述药物用于治疗和/或预防病症，特别是上述病症。

根据另一个方面，本发明进一步提供了本发明的化合物在治疗和/或预防病症，特别是上述病症的方法中的用途。

根据另一个方面，本发明进一步提供了使用有效量的根据本发明的至少一种化合物治疗和/或预防病症，特别是上述病症的方法。

根据另一个方面，如上文所述的通式(I)的化合物或其立体异构体、互变异构体、水合物、溶剂合物和盐，特别是其药学上可接受的盐，或它们的混合物适用于治疗和/或预防糖尿病、肥胖症、哮喘病、炎症性疾病和癌症。

根据另一个方面，本发明因此进一步提供了本发明的化合物用于治疗和/或预防糖尿病、肥胖症、哮喘病、炎症性疾病和癌症的用途。

根据另一个方面，本发明进一步提供了本发明的化合物用于生产用于治疗和/或预防糖尿病、肥胖症、哮喘病、炎症性疾病和癌症的药物的用途。

根据另一个方面，本发明进一步提供了一种包含至少一种本发明的化合物的药物，所述药物用于治疗和/或预防糖尿病、肥胖症、哮喘病、炎症性疾病和癌症。

根据另一个方面，本发明进一步提供了本发明的化合物在治疗和/或预防糖尿病、肥胖症、哮喘病、炎症性疾病和癌症的方法中的用途。

根据另一个方面，本发明进一步提供了一种使用有效量的根据本发明的至少一种化合物治疗和/或预防病症，特别是糖尿病、肥胖症、哮喘病、炎症性疾病和癌症的方法。

本发明的环状趋化素-9肽有可能在全身和/或局部发挥作用。为此目的，它们可以以合适的方式(例如通过胃肠外、肺、鼻、舌下、舌、口腔、皮肤、透皮、结膜、眼部途径或作为植入物或支架)给药。

本发明的化合物可以以适合于这些给药途径的给药形式给药。

胃肠外给药可以避免吸收步骤(如静脉内、动脉内、心内、椎管内或腰椎内)或包含吸收步骤(如肌肉内、皮下、皮内、经皮或腹膜内)。适用于胃肠外给药的给药形式包括以溶液、悬浮液、乳剂、冻干物或无菌粉剂形式的注射和输液制剂。

适用于其他给药途径的有例如，用于吸入的药物形式(包括干粉吸入装置、雾化器)、滴鼻剂、滴眼剂、溶液剂或喷雾剂；薄膜/晶片或水性悬浮液(洗剂、摇匀混合剂)、亲脂性悬浮液、软膏剂、霜剂、透皮治疗系统(如贴片)、奶剂、糊剂、泡沫剂、撒粉剂、植入剂或支架。

优选胃肠外给药，特别是静脉给药。还优选吸入性给药，例如通过使用干粉吸入装置或雾化器。

本发明的化合物可以被转化为所述的给药形式。这可以通过与惰性的、无毒的、药学上合适的赋形剂混合，以本身已知的方式进行。这些赋形剂包括载体(例如微晶纤维素、乳糖、甘露糖醇)、溶剂(例如液体聚乙二醇)、乳化剂和分散剂或润湿剂(例如十二烷基硫酸钠、聚氧山梨醇油酸酯)、粘合剂(例如聚乙烯吡咯烷酮)、合成和天然聚合物(例如白蛋白)、稳定剂(例如抗氧化剂，例如抗坏血酸)、着色剂(例如无机颜料，例如氧化铁)和调味掩蔽剂和/或气味掩蔽剂。

通常，在胃肠外给药的情况下，给药量约为体重的0.001至5mg/kg，优选约0.01至1mg/kg，以达到有效的效果。

然而，在某些情况下可能有必要偏离所述的量；特别是作为体重、给药途径、个体对活性成分的反应、制剂的性质和给药的时间或间隔的函数。例如，在某些情况下，少于上述的最低量就已足够，而在其他情况下，必须超过所述的上限。在给药量较大的情况下，优选在一天内将其分为多个单独的剂量。

根据另一个实施方案，本发明提供了一种药物组合物，其包含至少一种含有可分离和/或纯化的肽的化合物，结合一种或多种惰性的、无毒的、药学上合适的赋形剂，所述肽包含式(I)或式(II)或其衍生物、前药、类似物、药学上可接受的盐、溶剂合物或其盐的溶剂合物，基本上由式(I)或式(II)或其衍生物、前药、类似物、药学上可接受的盐、溶剂合物或其盐的溶剂合物组成，或由式(I)或式(II)或其衍生物、前药、类似物、药学上可接受的盐、溶剂合物或其盐的溶剂合物组成。

本发明的化合物可以掺入至所述的给药形式中。这可以以本身已知的方式通过与药学上合适的赋形剂混合来实现。药学上合适的赋形剂尤其包括，

·填充剂和载体(例如纤维素、微晶纤维素(例如

)、乳糖、甘露醇、淀粉、磷酸钙(例如Di-

)，

·软膏基质(例如凡士林、石蜡、甘油三酯、蜡、羊毛蜡、羊毛蜡醇、羊毛脂、亲水软膏、聚乙二醇)，

·栓剂基质(例如聚乙二醇、可可脂、硬脂)，

·溶剂(例如水、乙醇、异丙醇、甘油、丙二醇、中等链长甘油三酯脂肪油、液体聚乙二醇、石蜡)，

·表面活性剂、乳化剂、分散剂或润湿剂(例如十二烷基硫酸钠)、卵磷脂、磷脂、脂肪醇(例如

)、脱水山梨糖醇脂肪酸酯(例如

)、聚氧乙烯脱水山梨糖醇脂肪酸酯(例如

)、聚氧乙烯脂肪酸甘油酯(例如

)、聚氧乙烯脂肪酸酯、聚氧乙烯脂肪醇醚、甘油脂肪酸酯、泊洛沙姆(例如

)，

·缓冲剂、酸和碱(例如磷酸盐、碳酸盐、柠檬酸、乙酸、盐酸、氢氧化钠溶液、碳酸铵、氨丁三醇、三乙醇胺)，

·等渗剂(例如葡萄糖、氯化钠)，

·吸附剂(例如高分散二氧化硅)，

·增粘剂、凝胶形成剂、增稠剂和/或粘合剂(例如聚乙烯吡咯烷酮、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟丙基纤维素、羧甲基纤维素钠、淀粉、卡波姆、聚丙烯酸(例如

)；藻酸盐、明胶)，

·崩解剂(例如改性淀粉、羧甲基纤维素钠、羟基乙酸淀粉钠(例如

)、交联聚乙烯吡咯烷酮、交联羧甲基纤维素钠(例如

))，

·流量调节剂、润滑剂、助流剂和脱模剂(例如硬脂酸镁、硬脂酸、滑石粉、高分散二氧化硅(例如

))，

·包衣材料(例如糖、虫胶)和用于薄膜或扩散膜的成膜剂，所述成膜剂可以快速溶解或以改性方式溶解(例如聚乙烯吡咯烷酮(例如

)、聚乙烯醇、羟丙基甲基纤维素、羟丙基纤维素、乙基纤维素、羟丙基邻苯二甲酸甲基纤维素、乙酸纤维素、乙酸邻苯二甲酸纤维素、聚丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸酯(例如

))，

·胶囊材料(例如明胶、羟丙基甲基纤维素)，

·合成聚合物(例如聚交酯、聚乙交酯、聚丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸酯(例如

)、聚乙烯吡咯烷酮(例如

)、聚乙烯醇、聚乙酸乙烯酯、聚环氧乙烷、聚乙二醇及其共聚物和嵌段共聚物)，

·增塑剂(例如聚乙二醇、丙二醇、甘油、三醋精、柠檬酸三乙酰酯、邻苯二甲酸二丁酯)，

·渗透增强剂，

·稳定剂(例如，抗氧化剂，例如抗坏血酸、抗坏血酸棕榈酸酯、抗坏血酸钠、丁基羟基苯甲醚、丁基羟基甲苯、没食子酸丙酯)，

·防腐剂(例如对羟基苯甲酸酯、山梨酸、硫柳汞、苯扎氯铵、乙酸氯己定、苯甲酸钠)，

·着色剂(例如，无机颜料，例如氧化铁、二氧化钛)，

·调味剂、甜味剂、掩味剂和/或气味掩蔽剂。

本发明还涉及一种药物组合物，其包含至少一种如本文定义的肽、其衍生物或类似物或如上文定义的其药学上可接受的盐或溶剂合物或复合物。

特别地，本发明涉及一种药物组合物，其包含至少一种如本文定义的肽、其衍生物或类似物或如上文定义的其药学上可接受的盐或溶剂合物或复合物，通常与一种或多种药学上合适的赋形剂一起，还涉及它们根据本发明的用途。

根据本发明的药物组合物可包含至少一种额外的活性成分，例如优选在预防和/或治疗本文定义的病症或疾病方面具有活性的额外活性成分。

至少一种如本文定义的肽、其衍生物或类似物或如上文定义的其药学上可接受的盐或溶剂合物或复合物或药物组合物可经肠内或胃肠外给药，包括静脉内、肌肉内、腹膜内、胸膜内、皮下、皮内和关节内注射和输注、口服、阴道内、腹膜内、直肠内、局部或口腔注射。适用于各给药途径的制剂是技术人员所熟知的，包括但不限于：丸剂、片剂、肠溶片、薄膜片、层析片、口服的缓释或延缓释放制剂、膏药、局部缓释制剂、糖衣丸、阴道剂、凝胶剂、软膏剂、糖浆剂、颗粒剂、栓剂、乳剂、分散剂、微胶囊、微制剂、纳米制剂、脂质体制剂、胶囊、肠溶胶囊、散剂、吸入粉剂、微晶制剂、吸入喷雾剂、散剂、滴剂、滴鼻剂、喷鼻剂、气雾剂、安瓿剂、溶液剂、果汁剂、混悬剂、输液剂或注射剂等。

本发明的环状趋化素-9肽的合适剂量可由主治医生在合理的医学判断范围内决定。对任何特定对象的具体治疗有效剂量水平将与下述各种因素有关，其包括：a)所治疗的病症以及病症的严重程度；b)所采用的特定化合物的活性；c)所采用的特定组合物，患者的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食；d)所采用的特定肝脏抗菌多肽(hepcidin)类似物的给药时间、给药途径和排泄率；e)治疗的持续时间；f)与根据本发明所用的环状趋化素-9衍生物联合或同时使用的药物，以及在医学领域众所周知的类似因素。

在具体的实施方案中，以单剂量或分次剂量向受试者或患者给予的本发明的环状趋化素-9衍生物的日总剂量的量可以为例如0.0001至300mg/kg体重/天或1至300mg/kg体重/天，或约0.0001至约100mg/kg体重/天，如约0.0005至约50mg/kg体重/天，如约0.001至约10mg/kg体重/天，例如约0.01至约1mg/kg体重/天，其以一个或多个剂量(如1至3个剂量)给药。通常，本发明的环状趋化素-9衍生物可以连续给药(例如通过静脉给药或另一种连续给药方法)，也可以对受试者进行间隔给药，通常为定期给药，这取决于熟练从业者为特定受试者选择的所需剂量和药物组合物。定期给药的间隔包括例如，每天一次，每天两次，每两天、三天、四天、五天或六天一次，每周一次或两次，每月一次或两次等。

本发明进一步包含将本文所述的环状趋化素-9衍生物用于制造药物，特别是用于制造用于预防和/或治疗本文定义的病症或疾病的药物的用途。

本发明进一步包含制造本发明的肽、其衍生物或类似物或其药学上可接受的盐或溶剂合物或复合物(均如本文所述)的方法。所述用于制造的方法包含本发明实施例中示出的步骤。

通常，本发明的环状趋化素-9衍生物可通过合成或半重组的方式制造。

根据另一个实施方案，本发明提供了一种制备含有可分离和/或纯化的肽的化合物的方法，所述肽通过使用固相肽合成法包含式(I)或式(II)或其衍生物、前药、类似物或药学上可接受的盐或溶剂合物，基本上由式(I)或式(II)或其衍生物、前药、类似物或药学上可接受的盐或溶剂合物组成，或由式(I)或式(II)或其衍生物、前药、类似物或药学上可接受的盐或溶剂合物组成。

根据另一个实施方案，本发明提供了一种制备含有可分离和/或纯化的肽的化合物的方法，所述肽包含式(I)或式(II)或其衍生物、前药、类似物、药学上可接受的盐、溶剂合物或其盐的溶剂合物，基本上由式(I)或式(II)或其衍生物、前药、类似物、药学上可接受的盐、溶剂合物或其盐的溶剂合物组成，或由式(I)或式(II)或其衍生物、前药、类似物、药学上可接受的盐、溶剂合物或其盐的溶剂合物组成，所述方法包括以下步骤：

1.使用负载量为0.2-1.0mmol/g的2-氯三苯甲基型树脂，或负载量为0.2-1.0mmol/g的Wang型树脂，

2.将所述序列的c-端氨基酸加载到树脂上，

3.用15-25％哌啶在DMF或NMP中的溶液去除fmoc保护，

4.使用化学计量为3-8当量的HBTU、HATU或DIC/Oxyma等偶联试剂对序列中的下一个氨基酸进行偶联，

5.重复步骤3和4，直到序列完成，

6.使用包含TFA和硫醇清除剂的裂解混合物从固相载体上裂解肽，

7.在氧化条件下(空气或I₂)对序列中的两个半胱氨酸进行环化，

8.使用反相HPLC纯化裂解的肽。

或

2.将所述序列的c-端氨基酸加载到树脂上，

3.用15-25％哌啶在DMF或NMP中的溶液去除fmoc保护，

5.重复步骤3和4，直到序列完成，

7.a)在氧化条件下(空气或I₂)对序列中的两个半胱氨酸进行环化，或者b)使用反相HPLC纯化裂解的肽，然后通过与CH₂I₂反应进行环化，

8.使用反相HPLC纯化裂解的肽。

下文的实施例进一步说明了本发明，这些实施例与本发明的某些具体实施方案相关。除非另有说明，否则这些实施例是使用本领域技术人员常规范围内的众所周知的标准技术进行的。下文的实施例仅是为了说明的目的，并不意指本发明的条件或范围是完全限定的。因此，它们不应该以任何方式被解释为限制本发明的范围。

除非另有说明，否则下述试验和实施例中的百分比为重量百分比；份数为重量份。液体/液体溶液的溶剂比率、稀释比率和浓度数据各自均以体积计。

实验部分-合成

缩写

ACN：乙腈，BRET：生物发光共振能量转移，CCRL2：趋化因子(C-C)-基序受体样2，CMKLR1：趋化因子样受体1，DCM：二氯甲烷，Dde：N-[1-(4,4-二甲基-2,6-二氧代环己-1-基亚甲基)乙基]，DIC：N',N'-二异丙基氰胺，DIPEA：N,N-二异丙基乙基胺，DMEM：达尔伯克氏改良伊格尔氏培养基(Dulbecco's Modified Eagle's Medium)，DMF：二甲基甲酰胺，EDTA：乙二胺四乙酸，EG(4)：由4个环氧乙基组成的聚乙二醇，ESI-MS：电喷雾电离质谱法，Et₂O：二乙醚，equiv：当量，FBS：胎牛血清，Fmoc：9-芴甲氧羰基，GPCR：G蛋白偶联受体，GPR1：G蛋白偶联受体1，HATU：O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N,N-四甲基脲六氟磷酸酯，HBSS：汉克(Hank)氏缓冲盐水溶液，HEK：人胚肾，HOBt：羟基苯并三唑，oxyma：2-氰基-2-(羟基亚氨基)乙酸乙酯，MALDI-ToF：基质辅助激光解吸/电离-飞行时间(MS)，PBS：磷酸盐缓冲盐水，PEG:聚乙二醇；RP-HPLC：反相高效液相色谱，rt：室温，TA：硫缩醛，Tam：6-羧基四甲基罗丹明，tBu：叔丁基，TCEP：三(2-羧基乙基)膦盐酸盐，TFA：三氟乙酸，THF：四氢呋喃，X：高半胱氨酸，YFP：黄色荧光蛋白。

根据以下方法对氨基酸和肽序列进行命名：

国际纯粹与应用化学联盟和国际生物化学联盟(International Union of Pureand Applied Chemistry and International Union of Biochemistry)：氨基酸和肽的命名法和符号法(1983年建议)。记载于Pure&Appl.Chem.56,第5卷,1984,第595-624页中。

惯用名	符号	单字母符号
			丙氨酸	Ala	A
谷氨酰胺	Gln	Q
			甘氨酸	Gly	G
苯丙氨酸	Phe	F
			脯酸氨酸	Pro	P
丝氨酸	Ser	S
			高半胱氨	Hcys	X
酪酸氨酸	Tyr	Y

非蛋白源性氨基酸的命名法：

惯用名	符号	单字母符号
			D-半胱氨酸	D-Cys	c
D-高半胱氨	D-Hcy	x
			D酸-酪氨酸	D-Tyr	y

材料

肽的合成：Fmoc保护的氨基酸购自ORPEGEN(Heidelberg,Germany)。肽树脂、1-羟基苯并三唑(HOBt)、二碘甲烷、乙二硫醇(EDT)、二乙醚和三氟乙酸(TFA)均来自Merck(Darmstadt,Germany)。N,N'-二异丙基碳二亚胺(DIC)和2-氰基-2-(羟基亚氨基)乙酸乙酯(oxyma)购自Iris Biotech(Marktredwitz,Germany)。二甲基甲酰胺(DMF)和二氯甲烷(DCM)购自Biosolve(Valkenswaard,Netherlands)，乙腈(ACN)购自VWR(Darmstadt,Germany)，四氢呋喃(THF)购自Grüssing(Filsum,Germany)。O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N,N-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)、三(2-羧基乙基)膦盐酸盐(TCEP)、N,N-二异丙基乙胺(DIPEA)、哌啶和硫代苯甲醚均来自Sigma-Aldrich(St.Louis,USA)。6-羧基四甲基罗丹明(Tam)购自emp biotech(Berlin,Germany)。三乙胺(Et₃N)购自Thermo Fisher Scientific(Waltham,USA)。

细胞培养:细胞培养基(达尔伯克氏改良伊格尔氏培养基(DMEM)，Ham's F12)以及胰蛋白酶-EDTA、达尔伯克氏磷酸盐缓冲盐水(DPBS)和汉克氏平衡盐溶液(HBSS)均来自Lonza(Basel,Switzerland)。胎牛血清(FBS)来自Biochrom GmbH(Berlin,Germany)。Hygromycin B购自Invivogen(Toulouse,France)，Opti-MEM来自Life Technologies(Basel,Switzerland)。LipofectamineTM 2000来自Invitrogen公司(Carlsbad,CA,USA)。MetafecteneProTM来自Biontex Laboratories GmbH(München,Germany)。CoelenterazineH购自DiscoverX(Fremont,CA,USA)，Hoechst33342核染色剂来自Sigma-Aldrich(St.Louis,MO,USA)。牛抑制蛋白-3与mCherry融合用于荧光显微镜检查，或者牛抑制蛋白-3与Rluc8融合并克隆到pcDNA3载体用于BRET研究。Pluronic和Fluo-2 AM来自Abcam(Cambridge,UK)，Probenicid购自Sigma-Aldrich(St.Louis,USA)。嵌合G蛋白GαΔ6qi4myr的序列由E.Kostenis,Rheinische Friedrich-Wilhelms-

Bonn,Germany友好地提供。

肽合成的通用方法

所有肽均使用正交的9-芴甲氧羰基/叔丁基(Fmoc/tBu)固相肽合成策略合成。所有肽的标准合成在Syro II肽合成仪(MultiSynTech,Bochum,Germany)上以15μmol的规模进行。除非另有说明，否则肽是在预装了第一个氨基酸的Wang树脂上合成的。自动肽合成过程中的偶联反应进行了两次，其用8当量的各自的Fmoc保护的氨基酸，其用等摩尔量的oxyma和DIC的DMF溶液原位激活30分钟。Fmoc-脱保护是通过在40％哌啶的DMF溶液(v/v)中孵育3分钟和在20％哌啶的DMF溶液(v/v)中孵育10分钟来实现的。除非另有说明，否则所有反应都在室温下进行。所有肽的纯化均通过在Kinetex 5μm XB-C₁₈

或Jupiter 4μmProteo

C12柱(Phenomenex,Torrence,USA)上用制备型RP-HPLC进行。纯度通过在Jupiter 4μm Proteo

C₁₂(Phenomenex)、Kinetex 5μm biphenyl

(Phenomenex)或Aeris3.6μm

XB-C18(Phenomenex)柱上用RP-HPLC确认。RP-HPLC采用线性梯度的洗脱液B(0.08％ TFA在CAN中)和洗脱液A(0.1％ TFA在H₂O中)进行。利用Ultraflex II上的MALDI-ToF MS和HCT ESI上的ESI MS(Bruker Daltonics,Billerica,USA)来验证产品特性(identity)。

具体实施例：

化合物列表：

X＝高半胱氨酸，x＝D-高半胱氨酸，TA＝硫缩醛。

合成比较实施例：

比较实施例1：趋化素-9($$1)

自动合成YFPGQFAFS后，将所述肽用90％的TFA、7％的硫代苯甲醚和3％的乙二硫醇处理3小时，以脱保护所有的侧链，并将肽从树脂上裂解下来，然后在冰冷的Et₂O/己烷(1:3)中沉淀。洗涤沉淀物，然后将所述肽在Jupiter 4μm Proteo

C12柱上用RP-HPLC纯化，其在30分钟内采用梯度的在A中的30-60％的B，流速为15mL/min，通过测量λ＝220nm处的吸收来检测肽。纯产量为5.8mg(理论值的36％)。纯度分别在Jupiter 4μm Proteo

C12和在Aeris 3.6μm

XB-C18柱上用RP-HPLC测定，其在40分钟内采用线性梯度的在A中的20-70％的B，流速分别为1.0和1.55mL/min。如通过两根柱在220nm处的吸收所确定的，在保留时间分别为17.4分钟和8.2分钟下，所述肽显示出超过95％的纯度。肽的化学式为C₅₄H₆₆N₁₀O₁₃(同位素质量：1062.5Da，平均质量：1063.18Da)。观察到的质量与计算的质量一致，证实了产品的特性：在MALDI-ToF中，观察到在m/z＝1063.6[M+H]⁺、m/z＝1085.6[M+Na]⁺和m/z＝1101.5[M+K]⁺下的信号。在ESI离子阱中，观察到在m/z＝1063.3[M+H]⁺和m/z＝532.3[M+2H]²⁺下的信号。

比较实施例2：Tam-趋化素-9($$2)

自动合成YFPGQFAFS后，将所述肽的N-端通过用2当量的在DMF中的Tam、HATU和DIPEA反应过夜来用6-羧基四甲基罗丹明(Tam)修饰。将所述肽用90％的TFA、7％的硫代苯甲醚和3％的乙二硫醇处理3小时，以脱保护所有的侧链，并将肽从树脂上裂解下来，然后在冰冷的Et₂O/己烷(1:3)中沉淀。洗涤沉淀物，然后将所述肽在Jupiter 4μm Proteo

C12柱上用RP-HPLC纯化，其在40分钟内采用梯度的在A中的30-80％的B，流速为15mL/min，通过测量λ＝220nm处的吸收来检测肽。纯产量为5.3mg(理论值的24％)。纯度分别在Jupiter 4μm Proteo

C12和在Kinetex 5μm biphenyl

柱上用RP-HPLC测定，其在40分钟内采用线性梯度的在A中的20-70％的B，流速分别为1.0和1.55mL/min。如通过两根柱在220nm处的吸收所确定的，在保留时间分别为24.4分钟和19.1分钟下，所述肽显示出超过95％的纯度。肽的化学式为C₇₉H₈₆N₁₂O₁₇(同位素质量：1474.6Da，平均质量：1475.6Da)。观察到的质量与计算的质量一致，证实了产品的特性：在MALDI-ToF中，观察到在m/z＝1475.6[M+H]⁺、m/z＝1497.6[M+Na]⁺和m/z＝1513.5[M+K]⁺下的信号。在ESI离子阱中，观察到在m/z＝1475.4[M+H]⁺和m/z＝738.3[M+2H]²⁺下的信号。

比较实施例3：Tam-EG4-趋化素-9($$3)

自动合成YFPGQFAFS后，将EG(4)与肽的N-端通过5当量的在DMF中的Fmoc-15-氨基-4,7,10,13-四氧杂十五烷酸、HOBt和DIC反应过夜来偶联。所述Fmoc-基团通过用20％哌啶的DMF溶液反应10分钟来裂解，所述反应重复两次。将所述肽通过用2当量在DMF中的Tam、HATU和DIPEA反应过夜来用6-羧基四甲基罗丹明(Tam)修饰N-端。将所述肽用90％的TFA、7％的硫代苯甲醚和3％的乙二硫醇处理3小时，以脱保护所有的侧链，并将肽从树脂上裂解下来，然后在冰冷的Et₂O/己烷(1:3)中沉淀。洗涤沉淀物，然后将所述肽在Jupiter 4μmProteo

C12柱上用RP-HPLC纯化，其在40分钟内采用梯度的在A中的30-80％的B，流速为15mL/min，通过测量λ＝220nm处的吸收来检测肽。纯产量为4.8mg(理论值的18.6％)。纯度分别在Jupiter 4μm Proteo

C12和在Kinetex 5μm biphenyl

柱上用RP-HPLC测定，其在40分钟内采用线性梯度的在A中的20-70％的B，流速分别为1.0和1.55mL/min。如通过两根柱在220nm处的吸收所确定的，在保留时间分别为24.8分钟和16.4分钟下，所述肽显示出超过95％的纯度。肽的化学式为C₉₀H₁₀₇N₁₃O₂₂(同位素质量：1721.7Da，平均质量：1722.9Da)。观察到的质量与计算的质量一致，证实了产品的特性：在MALDI-ToF中，观察到在m/z＝1722.7[M+H]⁺、m/z＝1745.7[M+Na]⁺和m/z＝1760.7[M+K]⁺下的信号。在ESI离子阱中，观察到在m/z＝1722.6[M+H]⁺和m/z＝862.1[M+2H]²⁺下的信号。

比较实施例4：[c4,C9]-趋化素-9($$4)

自动合成YFPcQFAFC。将所述肽用90％的TFA、7％的硫代苯甲醚和3％的乙二硫醇处理3小时，以脱保护所有的侧链，并将肽从树脂上裂解下来，然后在冰冷的Et₂O/己烷(1:3)中沉淀。将沉淀物用Et₂O洗涤，并将肽在TBS、20％ ACN、pH 7.8中孵育48小时，以促进分子内二硫键的形成。所述肽在Kinetex 5μm XB-C18

柱上用RP-HPLC纯化，其在30分钟内采用梯度的在A中的25-55％的B，流速为15mL/min，通过测量λ＝220nm处的吸收来检测肽。纯产量为1.9mg(理论值的11.1％)。纯度分别在Jupiter 4μm Proteo

C12和在Aeris3.6μm

XB-C18柱上用RP-HPLC测定，其在40分钟内采用线性梯度的在A中的20-70％的B，流速分别为1.0和1.55mL/min。如通过两根柱在220nm处的吸收所确定的，在保留时间分别为21.2分钟和11.4分钟下，所述肽显示出超过95％的纯度。肽的化学式为C₅₅H₆₆N₁₀O₁₂S₂(同位素质量：1122.4Da，平均质量：1123.3Da)。观察到的质量与计算的质量一致，证实了产品的特性。在ESI离子阱中，观察到在m/z＝1123.2[M+H]⁺和m/z＝562.3[M+2H]²⁺下的信号。

比较实施例5：[c4,C7]-趋化素-9($$6)

通过自动肽合成法合成YFPcQFCFS。将所述肽用90％的TFA、7％的硫代苯甲醚和3％的乙二硫醇处理3小时，以脱保护所有的侧链，并将肽从树脂上裂解下来，然后在冰冷的Et₂O/己烷(1:3)中沉淀。沉淀物用Et₂O洗涤，并将肽在TBS、20％ ACN、pH 7.8中孵育48小时，以促进分子内二硫键的形成。所述肽在Kinetex 5μm XB-C18

C12和在Aeris3.6μm

XB-C18柱上用RP-HPLC测定，其在40分钟内采用线性梯度的在A中的20-70％的B，流速分别为1.0和1.55mL/min。如通过两根柱在220nm处的吸收所确定的，在保留时间分别为21.0分钟和11.7分钟下，所述肽显示出超过95％的纯度。肽的化学式为C₅₅H₆₈N₁₀O₁₂S₂(同位素质量：1138.4Da，平均质量：1139.3Da)。观察到的质量与计算的质量一致，证实了产品的特性。在ESI离子阱中，观察到在m/z＝1139.2[M+H]⁺和m/z＝570.3[M+2H]²⁺下的信号。

合成实施例：

实施例1：Tam-[c4,C9]-趋化素-9($$5)

自动合成YFPcQFAFC后，将所述肽的N-端通过用2当量的在DMF中的Tam、HATU和DIPEA反应过夜来用6-羧基四甲基罗丹明(Tam)修饰。将所述肽用90％的TFA、7％的硫代苯甲醚和3％的乙二硫醇处理3小时，以脱保护所有的侧链，并将肽从树脂上裂解下来，然后在冰冷的Et₂O/己烷(1:3)中沉淀。洗涤沉淀物，然后将所述肽在TBS、20％ACN、pH 7.8中孵育48小时，以促进分子内二硫键的形成。所述肽在Kinetex 5μm XB-C18

柱上用RP-HPLC纯化，其在40分钟内采用梯度的在A中的30-65％的B，流速为15mL/min，通过测量λ＝220nm处的吸收来检测肽。纯产量为0.7mg(理论值的3％)。纯度分别在Jupiter4μm Proteo

C12和在Kinetex 5μm biphenyl

柱上用RP-HPLC测定，其在40分钟内采用线性梯度的在A中的20-70％的B，流速分别为1.0和1.55mL/min。如通过两根柱在220nm处的吸收所确定的，在保留时间分别为27.5分钟和22.3分钟下，所述肽显示出超过95％的纯度。肽的化学式为C₈₀H₈₆N₁₂O₁₆S₂(同位素质量：1534.6Da，平均质量：1535.8Da)。观察到的质量与计算的质量一致，证实了产品的特性：在MALDI-ToF中，观察到在m/z＝1535.6[M+H]⁺下的信号。在ESI离子阱中，观察到在m/z＝1535.3[M+H]⁺和m/z＝768.7[M+2H]²⁺下的信号。

实施例2：[c4,C9-TA]-趋化素-9($$7)

自动合成YFPcQFAFC后，将所述肽用90％的TFA、7％的硫代苯甲醚、3％的乙二硫醇处理3小时，以脱保护所有的侧链，并将肽从树脂上裂解下来，然后在冰冷的Et₂O/己烷(1:3)中沉淀。洗涤沉淀物，然后将所述肽在Jupiter 4μm Proteo

C12柱上用RP-HPLC纯化，其在40分钟内采用梯度的在A中的20-70％的B，流速为15mL/min，通过测量λ＝220nm处的吸收来检测肽。线性肽的纯产量为5.3mg(理论值的31％)。将0.6mg的肽在3当量K₂CO₃、3当量TCEP和20当量Et₃N的存在下溶解于THF/H₂O(1:2)中。将此溶液逐步加入到20当量CH₂I₂的THF溶液中。所述反应在室温下振荡12小时后完成。将所述肽在Kinetex 5μm XB-C18

柱上进行半制备型纯化，在30分钟内采用线性梯度的在A中的30-60％的B，流速为5mL/min。环状肽的纯产量为0.5mg(理论值的83％)。纯度在Jupiter 4μm Proteo

C12上用RP-HPLC测定，其在40分钟内采用线性梯度的在A中的20-70％的B，流速为1.0mL/min。如通过在220nm处的吸收所确定的，在保留时间为20.4分钟下，所述肽显示出超过95％的纯度。肽的化学式为C₅₆H₆₈N₁₀O₁₂S₂(同位素质量：1136.5Da，平均质量：1137.3Da)。观察到的质量与计算的质量一致，证实了产品的特性：在MALDI-ToF中，观察到在m/z＝1137.5[M+H]⁺、1159.5[M+Na]⁺和1175.4[M+K]⁺下的信号。在ESI离子阱中，观察到在m/z＝1137.3[M+H]⁺和m/z＝569.3[M+2H]²⁺下的信号。

实施例3：Tam-[c4,C9-TA]-趋化素-9($$8)

自动合成YFcGQFAFC后，将所述肽的N-端通过用2当量的在DMF中的Tam、HATU和DIPEA反应过夜来用6-羧基四甲基罗丹明(Tam)修饰。将所述肽用90％的TFA、7％的硫代苯甲醚和3％的乙二硫醇处理3小时，以脱保护所有的侧链，并将肽从树脂上裂解下来，然后在冰冷的Et₂O/己烷(1:3)中沉淀。洗涤沉淀物，然后将所述肽在Kinetex 5μm XB-C18

柱上用RP-HPLC纯化，其在40分钟内采用线性梯度的在A中的30-80％的B，通过测量λ＝220nm处的吸收来检测肽。线性肽的纯产量为2.3mg(理论值的10％)。将肽在3当量K₂CO₃、3当量TCEP和20当量Et₃N的存在下溶解于THF/H₂O(1:2)中。将此溶液逐步加入到20当量CH₂I₂的THF溶液中。所述反应在室温下振荡12小时后完成。将所述肽在Kinetex 5μm XB-C18

柱上进行半制备型纯化，其在30分钟内采用线性梯度的在A中的30-60％的B，流速为5mL/min。环状肽的纯产量为0.73mg(理论值的31％)。纯度分别在Jupiter4μm Proteo

C12和在Kinetex 5μm biphenyl

柱上用RP-HPLC测定，其在40分钟内采用线性梯度的在A中的20-70％的B，流速分别为1.0和1.55mL/min。如通过两根柱在220nm处的吸收所确定的，在保留时间分别为26.9分钟和22.6分钟下，所述肽显示出超过95％的纯度。肽的化学式为C₈₁H₈₈N₁₂O₁₆S₂(同位素质量：1548.6Da，平均质量：1549.8Da)。观察到的质量与计算的质量一致，证实了产品的特性：在MALDI-ToF中，观察到在m/z＝1549.6[M+H]⁺下的信号。在ESI离子阱中，观察到在m/z＝1549.4[M+H]⁺和m/z＝775.3[M+2H]²⁺下的信号。

实施例4：[c4,X9-TA]-趋化素-9($$9)

2-氯三苯甲基氯化物树脂通过将树脂与1.5当量的氨基酸和5当量的DIPEA反应过夜来加载Fmoc-高半胱氨酸。负载通过使用哌啶将Fmoc基团从规定量的树脂上裂解下来，并测量哌啶-Fmoc加合物在λ＝301nm处的吸收来确定。随后自动合成YFPcQFAF后，将所述肽用90％的TFA、7％的硫代苯甲醚和3％的乙二硫醇处理3小时，以脱保护所有的侧链，并将肽从树脂上裂解下来，然后在冰冷的Et₂O/己烷(1:3)中沉淀。洗涤沉淀物，然后将所述肽在Jupiter 4μm Proteo

C12柱上用RP-HPLC纯化，其在35分钟内采用梯度的在A中的30-65％的B，流速为15mL/min，通过测量λ＝220nm处的吸收来检测肽。线性肽的纯产量为1.3mg(理论值的7.5％)。将肽在3当量K₂CO₃、3当量TCEP和20当量Et₃N的存在下溶解于THF/H₂O(1:2)中。将此溶液逐步加入到20当量CH₂I₂的THF溶液中。所述反应在室温下振荡12小时后完成。所述肽在Kinetex 5μm XB-C18

柱上进行半制备型纯化，其在40分钟内采用线性梯度的在A中的20-70％的B，流速为5mL/min。环状肽的纯产量为0.7mg(理论值的53％)。纯度分别在Jupiter 4μm Proteo

C12和在Kinetex 5μm biphenyl

柱上用RP-HPLC测定，其在40分钟内采用线性梯度的在A中的20-70％的B，流速分别为1.0和1.55mL/min。如通过在220nm处的吸收所确定的，在保留时间分别为20.9分钟和13.9分钟下，所述肽显示出超过95％的纯度。肽的化学式为C₅₇H₇₀N₁₀O₁₂S₂(同位素质量：1150.5Da，平均质量：1151.4Da)。观察到的质量与计算的质量一致，证实了产品的特性：在MALDI-ToF中，观察到在m/z＝1151.5[M+H]⁺、1173.5[M+Na]⁺和1189.5[M+K]⁺下的信号。在ESI离子阱中，观察到在m/z＝1151.3[M+H]⁺和m/z＝576.2[M+2H]²⁺下的信号。

实施例5：Tam-[c4,X9-TA]-趋化素-9($$10)

2-氯三苯甲基氯化物树脂通过将树脂与1.5当量的氨基酸和5当量的DIPEA反应过夜来加载Fmoc-高半胱氨酸。负载通过使用哌啶将Fmoc基团从规定量的树脂上裂解下来，并测量哌啶-Fmoc加合物在λ＝301nm处的吸收来确定。随后自动合成YFPcQFAF后，将所述肽的N-端通过用2当量的在DMF中的Tam、HATU和DIPEA反应过夜来用6-羧基四甲基罗丹明(Tam)修饰。将所述肽用90％的TFA、7％的硫代苯甲醚和3％的乙二硫醇处理3小时，以脱保护所有的侧链，并将肽从树脂上裂解下来，然后在冰冷的Et₂O/己烷(1:3)中沉淀。洗涤沉淀物，然后将所述肽在Kinetex 5μm XB-C18

柱上用RP-HPLC纯化，其在40分钟内采用线性梯度的在A中的30-80％的B，通过测量λ＝220nm处的吸收来检测肽。线性肽的纯产量为2.3mg(理论值的10％)。将肽在3当量K₂CO₃、3当量TCEP和20当量Et₃N的存在下溶解于THF/H₂O(1:2)中。将此溶液逐步加入到20当量CH₂I₂的THF溶液中。所述反应在室温下振荡12小时后完成。所述肽在Kinetex 5μm XB-C18

柱上进行半制备型纯化，其在30分钟内采用线性梯度的在A中的30-60％的B，流速为5mL/min。环状肽的纯产量为0.73mg(理论值的31％)。纯度分别在Jupiter 4μm Proteo

C12和在Kinetex 5μm biphenyl

柱上用RP-HPLC测定，其在40分钟内采用线性梯度的在A中的20-70％的B，流速分别为1.0和1.55mL/min。如通过两根柱在220nm处的吸收所确定的，在保留时间分别为26.9分钟和22.6分钟下，所述肽显示出超过95％的纯度。

实施例6：[y1,c4,X9-TA]-趋化素-9($$11)

C12柱上用RP-HPLC纯化，其在35分钟内采用梯度的在A中的30-65％的B，流速为15mL/min，通过测量λ＝220nm处的吸收来检测肽。线性肽的纯产量为2.5mg(理论值的11％)。将肽在3当量K₂CO₃、3当量TCEP和20当量Et₃N的存在下溶解于THF/H₂O(1:2)中。将此溶液逐步加入到20当量CH₂I₂的THF溶液中。所述反应在室温下振荡12小时后完成。所述肽在Kinetex 5μm XB-C18

柱上进行半制备型纯化，其在40分钟内采用线性梯度的在A中的20-70％的B，流速为5mL/min。环状肽的纯产量为0.8mg(理论值的32％)。纯度分别在Jupiter 4μm Proteo

C12和在Aeris 3.6μm

XB-C18柱上用RP-HPLC测定，其在40分钟内采用线性梯度的在A中的20-70％的B，流速分别为1.0和1.55mL/min。如通过在220nm处的吸收所确定的，在保留时间分别为22.3分钟和12.9分钟下，所述肽显示出超过95％的纯度。肽的化学式为C₅₇H₇₀N₁₀O₁₂S₂(同位素质量：1150.5Da，平均质量：1151.4Da)。观察到的质量与计算的质量一致，证实了产品的特性：在MALDI-ToF中，观察到在m/z＝1151.4[M+H]⁺下的信号。在ESI离子阱中，观察到在m/z＝1151.3[M+H]⁺和m/z＝576.3[M+2H]²⁺下的信号。

实施例7：[y1,c4,K7(Tam),C9]-趋化素-9($$12)

如下合成肽：在第7位掺入Dde-保护的赖氨酸，以允许在赖氨酸所述链上对肽进行选择性修饰。自动合成yFPcQFK(Dde)FC后，所述Dde保护基团通过与2％肼的DMF溶液反复反应来裂解，所述反应通过测量λ＝300nm处的Dde-肼加合物的紫外吸收率来监测。所述肽通过用2当量的在DMF中的Tam、HATU和DIPEA反应过夜来用6-羧基四甲基罗丹明(Tam)修饰。将所述肽用90％的TFA、7％的硫代苯甲醚和3％的乙二硫醇处理3小时，以脱保护所有的侧链，并将肽从树脂上裂解下来，然后在冰冷的Et₂O/己烷(1:3)中沉淀。洗涤沉淀物，然后将所述肽在TBS、20％ ACN、pH 7.8中孵育48小时，以促进分子内二硫键的形成。所述肽在Aeris3.6μm

XB-C18柱上用RP-HPLC纯化，其在30分钟内采用线性梯度的在A中的30-60％的B，通过测量λ＝220nm处的吸收来检测肽。纯肽的产量为1.2mg(理论值的5％)。纯度分别在Jupiter 4μm Proteo

C12和在Aeris 3.6μm

XB-C18柱上用RP-HPLC测定，其在40分钟内采用线性梯度的在A中的20-70％的B，流速分别为1.0和1.55mL/min。如通过在220nm处的吸收所确定的，在保留时间分别为24.1分钟和15.9分钟下，所述肽显示出超过95％的纯度。肽的化学式为C₈₃H₉₃N₁₃O₁₆S₂(同位素质量：1591.6Da，平均质量：1592.9Da)。观察到的质量与计算的质量一致，证实了产品的特性：在MALDI-ToF中，观察到在m/z＝1592.7[M+H]⁺、m/z＝1614.7[M+Na]⁺和m/z＝1630.6[M+K]⁺下的信号。在ESI离子阱中，观察到在m/z＝797.0[M+2H]²⁺和m/z＝531.7[M+3H]³⁺下的信号。

实施例8：[x4,C9]-趋化素-9($$13)

自动合成QFAFC后，将D-高半胱氨酸(x)通过5当量在DMF中的HOBt、DIC和Fmoc-D-高半胱氨酸(Trt)-OH反应过夜来偶联，然后自动合成YFP。将所述肽用90％的TFA、7％的硫代苯甲醚和3％的乙二硫醇处理3小时，以脱保护所有的侧链，并将肽从树脂上裂解下来，然后在冰冷的Et₂O/己烷(1:3)中沉淀。用Et₂O洗涤沉淀物，然后将所述肽在TBS、20％ ACN、pH7.8中孵育48小时，以促进分子内二硫键的形成。所述肽在Kinetex 5μm XB-C18

柱上用RP-HPLC纯化，其在30分钟内采用梯度的在A中的25-55％的B流速为15mL/min，通过测量λ＝220nm处的吸收来检测肽。纯产量为1.9mg(理论值的11.1％)。纯度分别在Jupiter 4μmProteo

C12和在Kinetex 5μm biphenyl

柱上用RP-HPLC测定，其在40分钟内采用线性梯度的在A中的20-70％的B，流速分别为1.0和1.55mL/min。如通过两根柱在220nm处的吸收所确定的，在保留时间分别为20.5分钟和11.3分钟下，所述肽显示出超过95％的纯度。肽的化学式为C₅₆H₆₈N₁₀O₁₂S₂(同位素质量：1136.5Da，平均质量：1137.3Da)。观察到的质量与计算的质量一致，证实了产品的特性：在MALDI-ToF中，观察到在m/z＝1137.5[M+H]⁺、m/z＝1159.5[M+Na]⁺和m/z＝1175.5[M+K]⁺下的信号。在ESI离子阱中，观察到在m/z＝1137.2[M+H]⁺和m/z＝569.2[M+2H]²⁺下的信号。

实施例9：[x4,W8,C9]-趋化素-9($$14)

自动合成QFAFC后，将D-高半胱氨酸(x)通过5当量在DMF中的HOBt、DIC和Fmoc-D-高半胱氨酸(Trt)-OH反应过夜来偶联，然后自动合成YFP。将所述肽用90％的TFA、7％的硫代苯甲醚和3％的乙二硫醇处理3小时，以脱保护所有的侧链，并将肽从树脂上裂解下来，然后在冰冷的Et₂O/己烷(1:3)中沉淀。用Et₂O洗涤沉淀物，然后将所述肽在TBS、20％ ACN、pH7.8中孵育48小时，以促进分子内二硫键的形成。所述肽在Jupiter 4μm Proteo

C12柱上用RP-HPLC纯化，其在30分钟内采用梯度的在A中的30-60％的B，流速为15mL/min，通过测量λ＝220nm处的吸收来检测肽。纯产量为2.0mg(理论值的11.3％)。纯度分别在Jupiter 4μm Proteo

C12和在Kinetex 5μm biphenyl

柱上用RP-HPLC测定，其在40分钟内采用线性梯度的在A中的20-70％的B，流速分别为1.0和1.55mL/min。如通过两根柱在220nm处的吸收所确定的，在保留时间分别为20.6分钟和12.1分钟下，所述肽显示出超过95％的纯度。肽的化学式为C₅₈H₆₉N₁₁O₁₂S₂(同位素质量：1175.5Da，平均质量：1176.4Da)。观察到的质量与计算的质量一致，证实了产品的特性：在MALDI-ToF中，观察到在m/z＝1176.5[M+H]⁺和m/z＝1198.5[M+Na]⁺下的信号。在ESI离子阱中，观察到在m/z＝1176.2[M+H]⁺和m/z＝588.8[M+2H]²⁺下的信号。

实施例10：[y1,x4,W8,C9]-趋化素-9($$15)

自动合成QFAFC后，将D-高半胱氨酸(x)通过5当量在DMF中的HOBt、DIC和Fmoc-D-高半胱氨酸(Trt)-OH反应过夜来偶联，然后自动合成yFP。将所述肽用90％的TFA、7％的硫代苯甲醚和3％的乙二硫醇处理3小时，以脱保护所有的侧链，并将肽从树脂上裂解下来，然后在冰冷的Et₂O/己烷(1:3)中沉淀。用Et₂O洗涤沉淀物，然后将所述肽在TBS、20％ ACN、pH7.8中孵育48小时，以促进分子内二硫键的形成。所述肽在Aeris 3.6μm

XB-C18柱上用RP-HPLC纯化，其在30分钟内采用梯度的在A中的20-50％的B，流速为15mL/min，通过测量λ＝220nm处的吸收来检测肽。纯产量为1.8mg(理论值的10.2％)。纯度分别在Jupiter 4μmProteo

C12和在Aeris 3.6μm

XB-C18柱上用RP-HPLC测定，其在40分钟内采用线性梯度的在A中的20-70％的B，流速分别为0.6和1.55mL/min。如通过两根柱在220nm处的吸收所确定的，在保留时间分别为22.7分钟和14.2分钟下，所述肽显示出超过95％的纯度。肽的化学式为C₅₈H₆₉N₁₁O₁₂S₂(同位素质量：1175.46Da，平均质量：1176.38Da)。观察到的质量与计算的质量一致，证实了产品的特性：在MALDI-ToF中，观察到在m/z＝1176.5[M+H]⁺下的信号。在ESI离子阱中，观察到在m/z＝1176.2[M+H]⁺和m/z＝588.8[M+2H]²⁺下的信号。

实施例11：EG4-[x4,C9]-趋化素-9($$16)

自动合成QFAFC后，将D-高半胱氨酸(x)通过5当量在DMF中的HOBt、DIC和Fmoc-D-高半胱氨酸(Trt)-OH反应过夜来偶联，然后自动合成YFP。将EG(4)通过5当量在DMF中的Fmoc-15-氨基-4,7,10,13-四氧杂十五烷酸、HOBt和DIC反应过夜来偶联至肽的N-端。所述Fmoc-基团通过用20％哌啶的DMF溶液反应10分钟来裂解，所述反应重复两次。将所述肽用90％的TFA、7％的硫代苯甲醚和3％的乙二硫醇处理3小时，以脱保护所有的侧链，并将肽从树脂上裂解下来，然后在冰冷的Et₂O/己烷(1:3)中沉淀。用Et₂O洗涤沉淀物，然后将所述肽在TBS、20％ ACN、pH 7.8中孵育48小时，以促进分子内二硫键的形成。所述肽在Aeris 3.6μm

XB-C18柱上用RP-HPLC纯化，其在30分钟内采用梯度的在A中的20-50％的B，流速为15mL/min，通过测量λ＝220nm处的吸收来检测肽。纯产量为4.5mg(理论值的21.6％)。纯度分别在Jupiter 4μm Proteo

C12和在Aeris 3.6μm

XB-C18柱上用RP-HPLC测定，其在40分钟内采用线性梯度的在A中的20-70％的B，流速分别为0.6和1.55mL/min。如通过两根柱在220nm处的吸收所确定的，在保留时间分别为21.9分钟和13.9分钟下，所述肽显示出超过95％的纯度。肽的化学式为C₆₇H₈₉N₁₁O₁₇S₂(同位素质量：1383.59Da，平均质量：1384.63Da)。观察到的质量与计算的质量一致，证实了产品的特性：在MALDI-ToF中，观察到在m/z＝1384.6[M+H]⁺下的信号。在ESI离子阱中，观察到在m/z＝1384.3[M+H]⁺和m/z＝692.9[M+2H]²⁺下的信号。

实施例12：Tam-EG4-[x4,C9]-趋化素-9($$17)

自动合成QFAFC后，将D-高半胱氨酸(x)通过5当量在DMF中的HOBt、DIC和Fmoc-D-高半胱氨酸(Trt)-OH反应过夜来偶联，然后自动合成YFP。将EG(4)通过5当量在DMF中的Fmoc-15-氨基-4,7,10,13-四氧杂十五烷酸、HOBt和DIC反应过夜来偶联至肽的N-端。所述Fmoc-基团通过用20％哌啶的DMF溶液反应10分钟来裂解，所述反应重复两次。所述肽的N-端通过用2当量在DMF中的Tam、HATU和DIPEA反应过夜来用6-羧基四甲基罗丹明(Tam)修饰。将所述肽用90％的TFA、7％的硫代苯甲醚和3％的乙二硫醇处理3小时，以脱保护所有的侧链，并将肽从树脂上裂解下来，然后在冰冷的Et₂O/己烷(1:3)中沉淀。用Et₂O洗涤沉淀物，然后将所述肽在TBS、20％ ACN、pH 7.8中孵育48小时，以促进分子内二硫键的形成。所述肽在Aeris 3.6μm

XB-C18柱上用RP-HPLC纯化，其在30分钟内采用梯度的在A中的20-50％的B，流速为15mL/min，通过测量λ＝220nm处的吸收来检测肽。纯产量为1.8mg(理论值的6.7％)。纯度分别在Jupiter 4μm Proteo

C12和在Aeris 3.6μm

XB-C18柱上用RP-HPLC测定，其在40分钟内采用线性梯度的在A中的20-70％的B，流速分别为0.6和1.55mL/min。如通过两根柱在220nm处的吸收所确定的，在保留时间分别为22.9分钟和14.9分钟下，所述肽显示出超过95％的纯度。肽的化学式为C₉₂H₁₀₉N₁₃O₂₁S₂(同位素质量：1795.73Da，平均质量：1797.07Da)。观察到的质量与计算的质量一致，证实了产品的特性：在MALDI-ToF中，观察到在m/z＝1796.7[M+H]⁺下的信号。在ESI离子阱中，观察到在m/z＝1797.3[M+H]⁺和m/z＝599.7[M+2H]²⁺下的信号。

实施例13：EG4-[x4,W8,C9]-趋化素-9($$18)

XB-C18柱上用RP-HPLC纯化，其在30分钟内采用梯度的在A中的20-50％的B，流速为15mL/min，通过测量λ＝220nm处的吸收来检测肽。纯产量为4.6mg(理论值的22.2％)。纯度分别在Jupiter 4μm Proteo

C12和在Aeris 3.6μm

XB-C18柱上用RP-HPLC测定，其在40分钟内采用线性梯度的在A中的20-70％的B，流速分别为0.6和1.55mL/min。如通过两根柱在220nm处的吸收所确定的，在保留时间分别为21.4分钟和13.4分钟下，所述肽显示出超过95％的纯度。肽的化学式为C₆₇H₈₉N₁₁O₁₇S₂(同位素质量：1383.59Da，平均质量：1384.63Da)。观察到的质量与计算的质量一致，证实了产品的特性：在MALDI-ToF中，观察到在m/z＝1384.6[M+H]⁺下的信号。在ESI离子阱中，观察到在m/z＝1384.3[M+H]⁺和m/z＝692.9[M+2H]²⁺下的信号。

实施例14：Tam-EG4-[x4,W8,C9]-趋化素-9($$19)

XB-C18柱上用RP-HPLC纯化，其在30分钟内采用梯度的在A中的20-50％的B，流速为15mL/min，通过测量λ＝220nm处的吸收来检测肽。纯产量为1.9mg(理论值的6.69％)。纯度分别在Jupiter 4μm Proteo

C12和在Aeris 3.6μm

XB-C18柱上用RP-HPLC测定，其在40分钟内采用线性梯度的在A中的20-70％的B，流速分别为0.6和1.55mL/min。如通过两根柱在220nm处的吸收所确定的，在保留时间分别为22.4分钟和14.4分钟下，所述肽显示出超过95％的纯度。肽的化学式为C₉₂H₁₀₉N₁₃O₂₁S₂(同位素质量：1795.73Da，平均质量：1797.07Da)。观察到的质量与计算的质量一致，证实了产品的特性：在MALDI-ToF中，观察到在m/z＝1796.7[M+H]⁺下的信号。在ESI离子阱中，观察到在m/z＝1797.3[M+H]⁺和m/z＝599.7[M+2H]²⁺下的信号。

实施例15：GFLG-[x4,C9]-趋化素-9($$20)

自动合成QFAFC后，将D-高半胱氨酸(x)通过5当量在DMF中的HOBt、DIC和Fmoc-D-高半胱氨酸(Trt)-OH反应过夜来偶联，然后自动合成GFLGYFP。所述肽的N-端在树脂上用Ac₂O和DIPEA的DCM溶液进行15分钟的乙酰化。将所述肽用90％的TFA、7％的硫代苯甲醚和3％的乙二硫醇处理3小时，以脱保护所有的侧链，并将肽从树脂上裂解下来，然后在冰冷的Et₂O/己烷(1:3)中沉淀。用Et₂O洗涤沉淀物，然后将所述肽在TBS、20％ ACN、pH 7.8中孵育48小时，以促进分子内二硫键的形成。所述肽在Aeris 3.6μm

XB-C18柱上用RP-HPLC纯化，其在30分钟内采用梯度的在A中的20-50％的B，流速为15mL/min，通过测量λ＝220nm处的吸收来检测肽。纯产量为1.7mg(理论值的7.3％)。纯度分别在Jupiter 4μm Proteo

C12和在Aeris 3.6μm

XB-C18柱上用RP-HPLC测定，其在40分钟内采用线性梯度的在A中的20-70％的B，流速分别为0.6和1.55mL/min。如通过两根柱在220nm处的吸收所确定的，在保留时间分别为22.5分钟和14.1分钟下，所述肽显示出超过95％的纯度。肽的化学式为C₇₇H₉₆N₁₄O₁₇S₂(同位素质量：1552.65Da，平均质量：1553.82Da)。观察到的质量与计算的质量一致，证实了产品的特性：在MALDI-ToF中，观察到在m/z＝1575.6[M+Na]⁺下的信号。在ESI离子阱中，观察到在m/z＝1554.6[M+H]+和m/z＝777.3[M+2H]²⁺下的信号。

III实验部分-生物测定

试验系统和方法

细胞培养

COS-7和HEK293细胞分别在补充有10％ FBS的DMEM或补充有15％ FBS的DMEM/Ham's F12中培养。所有细胞都保持在T75细胞培养瓶中，温度为37℃，湿度为95％，二氧化碳为5％(标准条件)。

1.血浆稳定性测定

肽在血浆中的稳定性研究按照先前所记载的进行(Hoppenz,Els-Heindl等人,ASelective Carborane-Functionalized Gastrin-Releasing Peptide Receptor Agonistas Boron Delivery Agent for Boron Neutron Capture Therapy.J Org Chem,2020,85(3):1446-1457)。Tam-标记的肽以10^-5M的浓度溶解在人血浆中，并在37℃和250rpm下孵育。在相应的时间点所取的样品被加入到0.1％ SDS在ACN/EtOH(1:1)的溶液中。在-20℃下孵育20分钟后，将上清液转移到新的试管中，并再次在-20℃下孵育至少3小时。使用CostarSpin-X管(0.22μm)离心过滤溶液，滤液通过在VariTide RPC、6μm、

柱(Agilenttechnologies,Santa Clara,USA)上用RP-HPLC进行分析，其在40分钟内采用线性梯度的在B中的15-65％(v/v)A。在λ＝573nm处检测到肽的荧光。峰值被整合，含有完整肽的峰值被归一至t＝0分钟(100％)时的样品。在GraphPad Prism 5.03中使用单相衰减法测定血浆半衰期。

2.钙调动(Calcium Mobilization)测定

将COS-7细胞在75cm²的细胞培养瓶中用12μg的hCMKLR1_eYFP_G_αΔ6qi4myr_pV2质粒使用Metafectene Pro转染过夜。将转染的细胞接种在96孔板中(在DMEM+10％ FBS中的100μL细胞悬液/孔)并孵育过夜。第二天，按照先前所记载的进行Ca²⁺-调动(Hoppenz,Els-Heindl等人,A Selective Carborane-Functionalized Gastrin-Releasing PeptideReceptor Agonist as Boron Delivery Agent for Boron Neutron Capture Therapy.JOrg Chem,2020,85(3):1446-1457)。简言之，将细胞用Fluo-2-AM溶液(2.3μM Fluo-2-AM,0.06％(v/v)Pluronic-F127在测定缓冲液中)孵育。1小时后，Fluo-2-am溶液被替换为测定缓冲液(20mM HEPES,2.5mM丙磺舒的HBSS溶液,pH 7.5)，用Flexstation 3(λ_ex＝485nm,λ_em＝525nm)测量基础Ca²⁺水平20秒。加入配体，并测量Ca²⁺-反应持续40秒。计算每个孔的由此产生的超过基础值的最大值，并将其归一化为对照曲线(趋化素-9$$1)。所有的实验均一式三份进行，每个实验至少重复两次。非线性回归是用GraphPad Prism 5计算的。

3.生物发光共振能量转移(BRET)

将HEK293细胞使用含单层细胞(汇合度为约80％)的75cm²细胞培养瓶进行瞬时转染。将在pVitro2载体中的C-端eYFP标记的人CMKLR1和嵌合G蛋白G_αΔ6qi4myr的质粒DNA(7.8μg)和在pcDNA3中的海肾-荧光素酶(Renilla-luciferase)8-标记的抑制蛋白3(0.2μg)和24μl MetafectenePro分别加入至900μl DMEM/Ham's F12中并孵育10分钟，然后整合(unification)并在室温下孵育20分钟。在37℃下，在单层细胞上加入6ml含15％ FCS的DMEM/Ham's F12。加入质粒溶液，将细胞孵育过夜，然后接种。细胞接种是在其上涂有聚-D赖氨酸的白色96孔聚苯乙烯细胞培养微孔板中进行的。用1ml胰蛋白酶/EDTA分离转染的细胞，加入21ml含15％ FCS的DMEM/Ham's F12，每孔以100,000–200,000细胞/100μl接种。之后，将细胞在37℃下孵育过夜。测定在无菌条件下进行。首先，用100μl BRET缓冲液(HBSS,25mM HEPES,pH 7.3)替换培养基，并加入50μl荧光素酶底物coelenterazine-h(终浓度为4.2μM)。之后，用溶于BRET缓冲液的不同浓度(10^-5至10^-12M)的肽刺激细胞。将50μl的肽稀释液用于细胞刺激。将不含肽的缓冲液用作阴性对照。激动剂加入15分钟后，用Tecan无限板阅读器在37℃下使用两套滤光片(发光滤光片400nm-470nm和荧光滤光片505nm-590nm)测量BRET效果，并绘制成荧光/发光比率的函数。减去阴性对照的值，用GraphPad Prism计算非线性回归。曲线对阳性对照野生型趋化素9($$1)进行了归一化。所有的测量都在四次技术重复中进行，所有的实验至少重复两次。

4.荧光显微镜检查

在HEK293细胞中验证了细胞抑制蛋白3的募集反应，并测试了CMKLR1受体的摄取。在细胞接种前，用聚D-赖氨酸涂抹Ibidi 15μ-载玻片。将细胞用DPBS清洗，然后用1ml胰蛋白酶/EDTA分离。在加入9ml含15％ FCS的DMEM/Ham's F12后，用纽鲍尔池(Neubauerchamber)来计算细胞/ml培养基的量。细胞悬液被稀释到140,000个细胞/200μl，将其用于接种。孵育在37℃下过夜进行。之后，对细胞进行瞬时转染。将hCMKLR1_eYFP_G_αΔ6qi4myr_pV2(0.9μg)和mCherry_Arr3_pcDNA3(0.1μg)的质粒DNA和8μl Lipofectamine分别加入到100μl DMEM/Ham's F12中并孵育10分钟，然后整合并在室温下孵育20分钟。孵育在37℃下过夜进行。然后，用200μl OptiMEM和1μl Hoechst 33342使细胞饥饿30分钟。用200μl OptiMEM替换培养基，并记录t₀状态。然后用200μl在OptiMEM中的1μl肽替换OptiMEM。根据荧光团的发射波长，使用不同的滤光片分析荧光团的激发，并分别调整每个荧光团的暴露时间。所有的图像都用AxioVision软件(Carl Zeiss AG,Oberkochen,Germany)进行相同的处理。

表1：用于荧光团检测的滤光片组(Zeiss)。

Hoechst33342：2’-(4-乙氧基苯基)-6-(4-甲基-1-哌嗪基)-1H,3’H-2,5’-联苯咪唑；YFP：黄色荧光蛋白；hCMKLR1：趋化因子样受体1；

结果

在Ca²⁺调动测定中的活性研究

为了测试合成的肽在CMKLR1诱导G蛋白介导的信号传导的能力，进行了Ca²⁺调动测定。所有测试的环状趋化素-9变体都显示出至不同延伸(extends)的G蛋白信号传导(表2)。最具活性的环状衍生物实施例8：[x4,C9]-趋化素-9($$13)显示出比线性趋化素-9(比较实施例1)高出2倍的活性。在第8位引入色氨酸使活性进一步提高($$14)，但在一个肽中结合修饰Trp⁸和D-Tyr¹导致活性明显下降($$15)。

表2：趋化素-9衍生物在CMKLR1的Ca²⁺调动测定中的活性数据。

X＝高半胱氨酸，x＝D-高半胱氨酸，TA＝硫缩醛。

血浆稳定性研究

对Tam-修饰的衍生物研究了不同肽在血浆中的稳定性，以便能在RP-HPLC中监测肽的降解情况。所有N-端Tam-标记的环状趋化素-9变体($$5、$$8、$$9)在血浆中24小时内完全稳定。在侧链上引入Tam-标记，同时诱导N-端D-Tyr，得到同样稳定的实施例7：[y1,c4,K7(Tam),C9]-趋化素-9($$12)。这表明可以预期所有具有N-端稳定的环状变体在血浆中都是稳定的。这一点通过测试带有N-端乙二醇接头的趋化素-9变体($$17,$$19)得到了验证，两者在至少48小时内完全稳定。

表3：Tam修饰的趋化素-9衍生物的血浆稳定性。

BRET和显微镜下的内化研究

募集抑制蛋白是GPCR内化过程中的第一步，所述GPCR内化过程在G蛋白途径激活之后。生物发光共振能量转移(BRET)测定被用来确定环状趋化素变体在刺激后募集抑制蛋白3到CMKLR1受体的效力。HEK293细胞瞬时转染了融合了eYFP荧光团的CMKLR1受体和用Rluc8荧光素酶标记的抑制蛋白3。将转染的细胞接种，用荧光素酶底物coelenterazine-h孵育，用不同浓度的肽刺激，产生可测量的BRET信号。S形浓度反应曲线与阳性对照WT趋化素9($$1)进行了归一化。在BRET测定中，可以表明除了一种测试的肽以外，所有的肽仍然能够以不同的效力诱导抑制蛋白3募集到激活的CMKLR1受体(表1)。

表1：在基于BRET的测定中获得的选定肽的抑制蛋白募集数据。所有的数据都是从至少两个单独的实验中获得的，并对对照化合物趋化素-9($$1)进行归一化。

x＝D-高半胱氨酸

与野生型趋化素9相比，通过二硫键使趋化素9环化($$13)仅导致EC₅₀和E_max值的轻微偏移。在第8位与色氨酸的额外交换($$14)也被接受。有趣地，在肽的第1位用D-酪氨酸的进一步修饰导致其不再能够诱导抑制蛋白3-募集，尽管它在Ca²⁺测定中具有激活G蛋白的活性($$15)，使它成为偏置(biased)配体。在抑制蛋白募集方面，用乙二醇接头($$16,$$18)或短肽接头($$20)延长环状肽的N-端也被接受。

图1：抑制蛋白3用趋化素-9变体刺激后被募集到CMKLR1。环化和氨基酸替换对趋化素-9活性的影响

图1中显示了环化和氨基酸替换对趋化素-9活性的影响。A)环化($$13)导致与线性趋化素-9($$1)相比，活性略有损失。将第8位换成色氨酸($$14)没有影响，而将第8位换成色氨酸和第1位换成D-酪氨酸则完全取消了抑制蛋白的募集($$15)。B)用聚乙二醇或肽接头的环状肽的N-端延伸没有影响($$16,$$20)，除非在第8位有色氨酸($$18)。

为了验证抑制蛋白募集并分析CMKLR1受体本身的内化，使用了HEK293细胞，并用荧光标记的两个分子的变体进行瞬时转染。这些细胞表达了与C端的黄色荧光蛋白(YFP)和红色荧光mCherry蛋白的抑制蛋白3融合的人类CMKLR1。

图2：CMKLR1和抑制蛋白3募集的内化。将通过瞬时转染表达hCMKLR1(绿色)和抑制蛋白3(Arr3；红色)的HEK293细胞用于内化研究。细胞核染色(蓝色)后，用1μM刺激30分钟后，通过荧光显微镜观察到受体的内化情况。选择时间点为15分钟的代表性图片，用AxioVision软件进行相同的处理；比例尺：15μm；n≥2。

在没有刺激的情况下，受体位于细胞膜上，抑制蛋白分布在细胞溶质中(图2，0分钟)。用趋化素-9刺激后(比较实施例1，$$1)，抑制蛋白3被募集到CMKLR1受体上，随后CMKLR1-抑制蛋白复合物内化。环状变体实施例8：[x4,C9]-趋化素-9($$13)、实施例9：[x4,W8,C9]-趋化素-9($$14)和实施例11：EG4-[x4,C9]-趋化素-9($$16)也表现出类似的行为。实施例13：EG4-[x4,W8,C9]-趋化素-9($$18)显示良好的抑制蛋白3募集，但与趋化素-9(比较实施例1，$$1)相比受体内化略低。相比之下，实施例10：[y1,x4,W8,C9]-趋化素-9($$15)既不能检测到hCMKLR1的内化，也不能检测到抑制蛋白3募集。因此，这种化合物的偏置(bias)行为得到了验证。这些在荧光显微镜下获得的结果证实了所有肽在基于BRET的测定中获得的结果。

序列表

<110> 拜耳公司

<120> 环状趋化素-9衍生物

<130> CP1230024PCB

<160> 20

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 趋化素-9

<400> 1

Tyr Phe Pro Gly Gln Phe Ala Phe Ser

1 5

<210> 2

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 衍生自趋化素-9的肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> 在aa 1位的Tam (= 6-羧基四甲基罗丹明) 修饰

<400> 2

Tyr Phe Pro Gly Gln Phe Ala Phe Ser

1 5

<210> 3

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 衍生自趋化素-9的肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> 在aa 1位的Tam-EG(4)修饰

<400> 3

Tyr Phe Pro Gly Gln Phe Ala Phe Ser

1 5

<210> 4

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 衍生自趋化素-9的肽

<220>

<221> 二硫化物

<222> (4)..(9)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (4)..(4)

<223> 在aa 4位的D-半胱氨酸

<400> 4

Tyr Phe Pro Cys Gln Phe Ala Phe Cys

1 5

<210> 5

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 衍生自趋化素-9的肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> 在aa 1位的Tam (= 6-羧基四甲基罗丹明) 修饰

<220>

<221> 二硫化物

<222> (4)..(9)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (4)..(4)

<223> 在aa 4位的D-半胱氨酸

<400> 5

Tyr Phe Pro Cys Gln Phe Ala Phe Cys

1 5

<210> 6

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 衍生自趋化素-9的肽

<220>

<221> 二硫化物

<222> (4)..(7)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (4)..(4)

<223> 在aa 4位的D-半胱氨酸

<400> 6

Tyr Phe Pro Cys Gln Phe Cys Phe Ser

1 5

<210> 7

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 衍生自趋化素-9的肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (4)..(9)

<223> 在aa 的4和9位通过CH2基团连接的氨基酸侧链

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (4)..(4)

<223> 在aa 4位的D-半胱氨酸

<400> 7

Tyr Phe Pro Cys Gln Phe Ala Phe Cys

1 5

<210> 8

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 衍生自趋化素-9的肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> 在aa 1位的Tam (= 6-羧基四甲基罗丹明) 修饰

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (4)..(9)

<223> 在aa 的4和9位通过CH2基团连接的氨基酸侧链

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (4)..(4)

<223> 在aa 4位的D-半胱氨酸

<400> 8

Tyr Phe Pro Cys Gln Phe Ala Phe Cys

1 5

<210> 9

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 衍生自趋化素-9的肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (4)..(4)

<223> 在aa 4位的D-半胱氨酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (4)..(9)

<223> 在aa 的4和9位通过CH2基团连接的氨基酸侧链

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9)..(9)

<223> 在aa 9位的Xaa为D-高半胱氨酸

<400> 9

Tyr Phe Pro Cys Gln Phe Ala Phe Xaa

1 5

<210> 10

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 衍生自趋化素-9的肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> 在aa 1位的Tam (= 6-羧基四甲基罗丹明) 修饰

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (4)..(4)

<223> 在aa 4位的D-半胱氨酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (4)..(9)

<223> 在aa 的4和9位通过CH2基团连接的氨基酸侧链

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9)..(9)

<223> 在aa 9位的Xaa为D-高半胱氨酸

<400> 10

Tyr Phe Pro Cys Gln Phe Ala Phe Xaa

1 5

<210> 11

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 衍生自趋化素-9的肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> 在aa 1位的D-酪氨酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (4)..(4)

<223> 在aa 4位的D-半胱氨酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (4)..(9)

<223> 在aa 的4和9位通过CH2基团连接的氨基酸侧链

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9)..(9)

<223> 在aa 9位的Xaa为D-高半胱氨酸

<400> 11

Tyr Phe Pro Cys Gln Phe Ala Phe Xaa

1 5

<210> 12

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 衍生自趋化素-9的肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> 在aa 1位的D-酪氨酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (4)..(4)

<223> 在aa 4位的D-半胱氨酸

<220>

<221> 二硫化物

<222> (4)..(9)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (7)..(7)

<223> 在aa 的7位用Tam修饰的Lys侧链

<400> 12

Tyr Phe Pro Cys Gln Phe Lys Phe Cys

1 5

<210> 13

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 衍生自趋化素-9的肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (4)..(4)

<223> 在aa 4位的Xaa为D-高半胱氨酸

<220>

<221> 二硫化物

<222> (4)..(9)

<400> 13

Tyr Phe Pro Xaa Gln Phe Ala Phe Cys

1 5

<210> 14

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 衍生自趋化素-9的肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (4)..(4)

<223> 在aa 4位的Xaa为D-高半胱氨酸

<220>

<221> 二硫化物

<222> (4)..(9)

<400> 14

Tyr Phe Pro Xaa Gln Phe Ala Trp Cys

1 5

<210> 15

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 衍生自趋化素-9的肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> 在aa 1位的D-酪氨酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (4)..(4)

<223> 在aa 4位的Xaa为D-高半胱氨酸

<220>

<221> 二硫化物

<222> (4)..(9)

<400> 15

Tyr Phe Pro Xaa Gln Phe Ala Trp Cys

1 5

<210> 16

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 衍生自趋化素-9的肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> 在aa 1位的EG(4) 修饰

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (4)..(4)

<223> 在aa 4位的Xaa为D-高半胱氨酸

<220>

<221> 二硫化物

<222> (4)..(9)

<400> 16

Tyr Phe Pro Xaa Gln Phe Ala Phe Cys

1 5

<210> 17

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 衍生自趋化素-9的肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> 在aa 1位的Tam-EG(4) 修饰

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (4)..(4)

<223> 在aa 4位的Xaa为D-高半胱氨酸

<220>

<221> 二硫化物

<222> (4)..(9)

<400> 17

Tyr Phe Pro Xaa Gln Phe Ala Phe Cys

1 5

<210> 18

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 衍生自趋化素-9的肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> 在aa 1位的EG(4) 修饰

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (4)..(4)

<223> 在aa 4位的Xaa为D-高半胱氨酸

<220>

<221> 二硫化物

<222> (4)..(9)

<400> 18

Tyr Phe Pro Xaa Gln Phe Ala Trp Cys

1 5

<210> 19

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 衍生自趋化素-9的肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> 在aa 1位的Tam-EG(4) 修饰

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (4)..(4)

<223> 在aa 4位的Xaa为D-高半胱氨酸

<220>

<221> 二硫化物

<222> (4)..(9)

<400> 19

Tyr Phe Pro Xaa Gln Phe Ala Trp Cys

1 5

<210> 20

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 衍生自趋化素-9的肽

<220>

<221> MOD_RES

<222> (1)..(1)

<223> 乙酰化作用

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (8)..(8)

<223> 在aa 8位的Xaa为D-高半胱氨酸

<220>

<221> 二硫化物

<222> (8)..(13)

<400> 20

Gly Phe Leu Gly Tyr Phe Pro Xaa Gln Phe Ala Phe Cys

1 5 10

Claims

1.通式(I)的化合物，或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂合物或其盐的溶剂合物：

其中

R¹不存在，

或者

其中

##标志着与X¹的末端氨基的连接，

R⁴代表

其中

或者

代表式(IIIa)的基团

其中

**标志着与氮原子的连接，

D¹为C₁-C₄-亚烷基，

Y¹选自羟基、甲氧基、乙氧基、羧基、甲酰胺或氨基，

其中，氨基可被6-羧基四甲基罗丹明(Tam)通过酰胺键取代，

并且

r代表2至15的整数，

R²代表式(II)的基团

或者

代表式(III)的基团

其中

*代表与X³的羧基的羰基原子的连接，

Z代表键或-CH₂-，

m代表1或2，

n代表1或2，

X³代表天然氨基酸P，或选自以下的非天然氨基酸：2,3,3a,4,5,6,7,7a-八氢吲哚-2-羧酸(Oic)、L-羟基脯氨酸(Hyp)、(2S,4S)-4-三氟甲基-吡咯烷-2-羧酸((4-CF3)P)、(2S,4S)-4-氟脯氨酸((顺式-4-氟)P)、反式-4-氟脯氨酸((反式-4-氟)P)、(2S)-2-氨基-4,4,4-三氟丁酸、L-反式-3-羟基脯氨酸((3S-OH)P)、L-哌可酸(Pip)、(1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-羧酸、(6S)-5-氮杂螺[2.4]庚烷-6-羧酸、rel-(1R,3R,5R,6R)-6-(三氟甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-羧酸、(2S)-2-氨基-4,4,4-三氟丁酸、(2S,3aS,6aS)-八氢环戊烯并[b]吡咯-2-羧酸、反式-4-氟脯氨酸((反式-4-氟)P)、(2S,4S)-4-氟脯氨酸((顺式-4-氟)P)、L-4,4-二氟脯氨酸((二氟)P)、rel-(3R,6R)-1,1-二氟-5-氮杂螺[2.4]庚烷-6-羧酸(对映体1)和rel-(3R,6R)-1,1-二氟-5-氮杂螺[2.4]庚烷-6-羧酸(对映体2)，

X⁶代表任何天然氨基酸或非天然氨基酸，其中任何天然氨基酸和/或非天然氨基酸可为D-立体构型或L-立体构型，

其中，任何天然氨基酸或带有氨基的非天然氨基酸可被6-羧基四甲基罗丹明(Tam)或##C(O)R³取代，

其中，

##标志着与X¹的末端氨基的连接，

条件是，不包括化合物YFP[cQFAFC]和yFP[xQFAWC]。

2.根据权利要求1所述的通式(I)的化合物，或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂合物或其盐的溶剂合物，其中

R¹不存在，

或者

代表6-羧基四甲基罗丹明(Tam)、##C(O)R³或序列R⁴GFLG##，

其中

##标志着与X¹的末端氨基的连接，

R³代表C₁-C₄-亚烷基，

R⁴代表

其中

R⁵代表C₁-C₄-亚烷基，

或者

代表式(IIIa)的基团

其中

**标志着与氮原子的连接，

D¹为C₁-C₄-亚烷基，

Y¹选自羟基、甲氧基、乙氧基、羧基、甲酰胺或氨基，

其中，氨基可被6-羧基四甲基罗丹明(Tam)通过酰胺键取代，

并且

r代表2至6的整数，

R²代表式(II)的基团

其中

*代表与X³的羧基的羰基原子的连接，

Z代表键或-CH₂-，

m代表1或2，

n代表1或2，

其中，赖氨酸的氨基可被6-羧基四甲基罗丹明(Tam)或##C(O)R³取代，

其中，

##标志着与X¹的末端氨基的连接，

条件是，不包括化合物YFP[cQFAFC]和yFP[xQFAWC]。

3.根据权利要求1或2所述的通式(I)的化合物，或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂合物或其盐的溶剂合物，其中

R¹不存在，

或者

代表6-羧基四甲基罗丹明(Tam)或序列R⁴GFLG##，

其中

##标志着与X¹的末端氨基的连接，

R⁴代表

其中

R⁵代表甲基或乙基，

或者

代表式(IIIa)的基团

其中

**标志着与氮原子的连接，

D¹为C₁-C₄-亚烷基，

Y¹选自羟基、甲氧基、乙氧基、羧基、甲酰胺或氨基，

其中，氨基可被6-羧基四甲基罗丹明(Tam)通过酰胺键取代，

并且

r代表2至4的整数，

R²代表式(II)的基团

其中

*代表与X³的羧基的羰基原子的连接，

Z代表键或-CH₂-，

m代表1或2，

n代表1或2，

X⁵代表选自F、H、W或Y的天然氨基酸，

其中，K的氨基可被6-羧基四甲基罗丹明(Tam)取代，

X⁷代表选自F、H、W或Y的天然氨基酸，

条件是，不包括化合物YFP[cQFAFC]和yFP[xQFAWC]。

4.根据权利要求1、2或3所述的通式(I)的化合物，或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂合物或其盐的溶剂合物，其中

R¹不存在，

或者

代表6-羧基四甲基罗丹明(Tam)或序列R⁴GFLG##，

其中

##标志着与X¹的末端氨基的连接，

R⁴代表

其中

R⁵代表甲基，

或者

代表式(IIIa)的基团

其中

**标志着与氮原子的连接，

D¹为亚乙基，

Y¹为氨基，

其中，氨基可被6-羧基四甲基罗丹明(Tam)通过酰胺键取代，

并且

r代表4，

R²代表式(II)的基团

其中

*代表与X³的羧基的羰基原子的连接，

Z代表键或-CH₂-，

m代表1或2，

n代表1或2，

X¹代表Y或y，

X²代表F，

X³代表P，

X⁴代表Q，

X⁵代表F，

X⁶代表A或K，

X⁷代表F或W，

条件是，不包括化合物YFP[cQFAFC]和yFP[xQFAWC]。

5.根据前述权利要求1至4中任一项所述的化合物，其用于治疗或预防疾病。

6.根据前述权利要求1至4中任一项所述的化合物，其用于治疗和/或预防代谢紊乱、癌症或炎症性疾病的方法。

7.根据权利要求1至4中任一项所述的化合物，其用于治疗和/或预防糖尿病、肥胖症、哮喘病、炎症性疾病和癌症的方法。

8.根据权利要求1至4中任一项所定义的式(I)的化合物用于制备用于治疗和/或预防糖尿病、肥胖症、哮喘病、炎症性疾病和癌症的药物的用途。

9.药物，其包含权利要求1至4中任一项所定义的式(I)的化合物与惰性的、无毒的、药学上合适的助剂相结合。

10.根据权利要求9所述的药物，其用于治疗和/或预防糖尿病、肥胖症、哮喘病、炎症性疾病和癌症。

11.根据权利要求1至4中任一项的式(I)的化合物用于制备用于治疗或预防疾病的药物的用途。

12.用于治疗和/或预防人类和动物的糖尿病、肥胖症、哮喘病、炎症性疾病和癌症的方法，其使用有效量的根据权利要求1至4中任一项所定义的式(I)的化合物用于权利要求8至10中任一项所定义的药物。