CN116368153A - Zip12抗体 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及ZIP12抗体。本发明还涉及包含抗体的组合物，包括药物组合物和试剂盒。本发明还涉及制备和使用抗体的方法，例如用于治疗和诊断低氧相关疾病，例如低氧相关疾病例如肺动脉高压和癌症。

Description

ZIP12抗体
本发明涉及ZIP12抗体。本发明还涉及包含抗体的组合物，包括药物组合物和试剂盒。本发明还涉及制备和使用抗体的方法，例如用于治疗和诊断低氧相关疾病，例如低氧相关疾病例如肺动脉高压和癌症。
肺动脉高压(PH)是一种病理性疾病，其特征是肺动脉压力升高和肺血管结构重塑。目前肺动脉高压的治疗主要集中在血管活性因子所使用的信号机制的药理学操作上，治疗效果有限。对于这种潜在的致命疾病，对新的治疗方法和诊断方法的医疗需求尚未得到满足。
成年哺乳动物肺循环对低氧环境的典型反应是肺小动脉的血管收缩和结构重塑，导致肺动脉压慢性升高(肺动脉高压)和右心室肥大。然而，一些哺乳动物对缺氧诱导的肺动脉高压表现出遗传抗性(WILKINS,M.R.et al.,Pathophysiology and treatment ofhigh-altitude pulmonary vascular disease.Circulation.2015,131,582-590；ZHAO,L.et al.,Right ventricular hypertrophy secondary to pulmonary hypertension islinked to rat chromosome 17:evaluation of cardiac ryanodine Ryr2 receptor asa candidate.Circulation.2001,103,442-447；RHODES,J.,Comparative physiology ofhypoxic pulmonary hypertension:historical clues from brisket disease.Journalof applied physiology.2005,98,1092-1100).本发明人先前已经报道(ZHAO,L.et al.,Right ventricular hypertrophy secondary to pulmonary hypertension is linkedto rat chromosome 17:evaluation of cardiac ryanodine Ryr2 receptor as acandidate.Circulation.2001,103,442-447)，与Wistar Kyoto(WKY)大鼠品系相比，Fisher 344(F344)大鼠品系对缺氧诱导的肺动脉高压具有抗性。然而，这种抗性产生的原因尚不清楚。
本发明人之前还利用了一种适宜的育种计划和比较基因组学来利用大鼠的这种变异，并已将Slc39a12基因鉴定为缺氧诱导的肺血管重塑的主要调节因子。Slc39a12编码锌转运蛋白ZIP12。他们发现，在易受缺氧诱导的肺动脉高压影响的大鼠、奶牛和人类重塑的肺小动脉中，ZIP12在许多细胞类型中的表达增加，包括内皮细胞、平滑肌细胞和间质细胞。本发明人已经表明，ZIP12在肺血管平滑肌细胞中的表达是缺氧依赖性的，并且靶向抑制ZIP12可抑制缺氧暴露的肺血管平滑肌细胞中细胞内不稳定锌的升高，并抑制其在培养中的增殖。本发明人先前还证明了ZIP12表达的遗传性中断削弱了在缺氧环境中饲养的大鼠的肺动脉高压的发展。
然而，到目前为止，还没有靶向ZIP12蛋白的特异性治疗方法，本发明人认为这可以为治疗肺动脉高压提供一种改进手段。此外，肺动脉高压的诊断通常需要侵入性手术，如右心导管和超声心动图。因此，确定可通过简单和较少侵入性程序测量的肺动脉高压的新标记物也是可取的。
发明人假设，ZIP12的抑制可以阻止缺氧诱导的肺血管平滑肌细胞(PVSMC)在体外的增殖和肺血管的生成。这确定了ZIP12是治疗肺动脉高压潜在疾病机制的潜在新治疗目标，这促使发明人进一步开展工作，开发能够靶向ZIP12细胞外结构域的抗体，以抑制其功能。这些抗体的抗ZIP12活性意味着它们本身就是有用的治疗剂，可用于治疗、改善或预防任何缺氧引起的或与缺氧有关的疾病，特别是，但不限于，肺动脉高压。
因此，在本发明的第一方面，提供了一种抗体或其抗原结合片段，它能特异性地与ZIP12的细胞外区域结合。
如实施例所示，本发明人已经确定ZIP12蛋白的细胞外区域或结构域是其发挥功能的关键，因此已经开发出能够结合并抑制ZIP12的功能的抗体。例如，如图2和图3所示，本发明人已经开发了大量的抗体，他们已经证明这些抗体专门靶向细胞外结构域并抑制ZIP12的功能。此外，如图6、7和9所示，本发明人已经证明，这些抗体不仅能抑制ZIP12的功能，而且不靶向ZIP4蛋白。
优选地，本发明的抗体或其抗原结合片段能够抑制ZIP12的功能。优选地，本发明的抗体或其抗原结合片段能够抑制ZIP12的功能，从而抑制缺氧暴露的肺血管平滑肌细胞中细胞内不稳定锌的升高和它们在培养中的增殖。
ZIP12、ZIP13和ZIP4都是锌转运体。然而，ZIP4不参与肺动脉高压的发病机制，但在组织的平衡、代谢、发育和免疫方面有重要作用。此外，ZIP13已被证明可调节细胞内的锌和smad信号，这对BMP/TGF-beta信号很重要(参见Fakuda et al,J Biol Inorg Chem,2011)。已知BMP信号受损与肺动脉高压有关，如Morrell et al Nature ReviewsCardiology,2015中所示。因此，抑制ZIP13会导致锌浓度降低，进而可能会损害BMP信号并导致肺动脉高压，而不是治愈肺动脉高压。
因此，重要的是，本发明中针对ZIP12的抗体是特异性的，并且与ZIP13和/或ZIP4没有或很少有交叉反应，因为这可能导致显著的不期望的脱靶效应。
因此，优选地，本发明的抗体或其抗原结合片段不与人ZIP13实质性结合。优选地，本发明的抗体或其抗原结合片段与人ZIP13没有交叉反应性。
此外，优选地，本发明的抗体或其抗原结合片段不与人ZIP4实质性结合。优选地，本发明的抗体或其抗原结合片段与人ZIP4没有交叉反应性。
在一个实施方案中，ZIP12可由Genbank ID No:NP-001138667表示，其在本文中提供为SEQ ID No:1，如下所示：
MCFRTKLSVSWVPLFLLLSRVFSTETDKPSAQDSRSRGSSGQPADLLQVLSAGDHPPHNHSRSLIKTLLEKTGCPRRRNGMQGDCNLCFEPDALLLIAGGNFEDQLREEVVQRVSLLLLYYIIHQEEICSSKLNMSNKEYKFYLHSLLSLRQDEDSSFLSQNETEDILAFTRQYFDTSQSQCMETKTLQKKSGIVSSEGANESTLPQLAAMIITLSLQGVCLGQGNLPSPDYFTEYIFSSLNRTNTLRLSELDQLLNTLWTRSTCIKNEKIHQFQRKQNNIITHDQDYSNFSSSMEKESEDGPVSWDQTCFSARQLVEIFLQKGLSLISKEDFKQMSPGIIQQLLSCSCHLPKDQQAKLPPTTLEKYGYSTVAVTLLTLGSMLGTALVLFHSCEENYRLILQLFVGLAVGTLSGDALLHLIPQVLGLHKQEAPEFGHFHESKGHIWKLMGLIGGIHGFFLIEKCFILLVSPNDKQGLSLVNGHVGHSHHLALNSELSDQAGRGKSASTIQLKSPEDSQAAEMPIGSMTASNRKCKAISLLAIMILVGDSLHNFADGLAIGAAFSSSSESGVTTTIAILCHEIPHEMGDFAVLLSSGLSMKTAILMNFISSLTAFMGLYIGLSVSADPCVQDWIFTVTAGMFLYLSLVEMLPEMTHVQTQRPWMMFLLQNFGLILGWLSLLLLAIYEQNIKI
[SEQ ID No:1]
该抗体或其抗原结合片段可与SEQ ID No：1的氨基酸位置1和202之间的区域结合，该区域对应于ZIP12的胞外结构域。
因此，优选地，该抗体或其抗原结合片段可与ZIP12的氨基酸位置1和202之间的一个或多个氨基酸结合，该氨基酸在本文中提供为SEQ ID No:2，如下所示：
MCFRTKLSVSWVPLFLLLSRVFSTETDKPSAQDSRSRGSSGQPADLLQVLSAGDHPPHNHSRSLIKTLLEKTGCPRRRNGMQGDCNLCFEPDALLLIAGGNFEDQLREEVVQRVSLLLLYYIIHQEEICSSKLNMSNKEYKFYLHSLLSLRQDEDSSFLSQNETEDILAFTRQYFDTSQSQCMETKTLQKKSGIVSSEGANE
[SEQ ID No:2]
因此，优选地，该抗体或其抗原结合片段与包括或由SEQ ID No:2中基本列出的序列或其变体或片段组成的序列中的表位结合。
优选地，该抗体或其抗原结合片段与SEQ ID No:2中的一个或多个氨基酸，或其片段或变体结合。优选地，其抗体或抗原结合片段与SEQ ID No:2中的任何5、10、15、20、25、30、35、40或45个氨基酸序列，或其变体或片段结合。
在一个实施方案中，该抗体或其抗原结合片段可与SEQ ID No:2的氨基酸位置20和202之间的一个或多个氨基酸结合。该抗体或其抗原结合片段可与SEQ ID No:2的氨基酸位置20和180之间，或氨基酸位置20和160之间，或氨基酸位置20和140之间，或氨基酸位置20和120之间，或氨基酸位置20和110之间，或氨基酸位置20和108之间的一个或多个氨基酸结合。该抗体或其抗原结合片段可与SEQ ID No:2的氨基酸位置20和104之间一个或多个氨基酸结合。
该抗体或其抗原结合片段可与SEQ ID No：2的氨基酸位置40和202之间，或氨基酸位置60和202之间，或氨基酸位置80和202之间，或氨基酸位置100和202之间，或氨基酸位置120和202之间，或氨基酸位置140和202之间，或氨基酸位置150和202之间的一个或多个氨基酸结合。
该表位可以是线性或构象的。术语"线性表位"可以指由氨基酸残基组成的表位，这些残基在蛋白质抗原的主序列中一起形成序列，即顺序或连续表位。术语"构象表位"可以指由氨基酸残基组成的表位，其中至少有一些在蛋白抗原的主序列中与其他残基分开，但它们一起组装在三维结构中并被抗体识别，即不连续的表位。
在一个实施方案中，ZIP4可由Genbank ID No:NP-570901表示，在本文中提供为SEQ ID No:19，如下所示：
MASLVSLELGLLLAVLVVTATASPPAGLLSLLTSGQGALDQEALGGLLNTLADRVHCANGPCGKCLSVEDALGLGEPEGSGLPPGPVLEARYVARLSAAAVLYLSNPEGTCEDARAGLWASHADHLLALLESPKALTPGLSWLLQRMQARAAGQTPKTACVDIPQLLEEAVGAGAPGSAGGVLAALLDHVRSGSCFHALPSPQYFVDFVFQQHSSEVPMTLAELSALMQRLGVGREAHSDHSHRHRGASSRDPVPLISSSNSSSVWDTVCLSARDVMAAYGLSEQAGVTPEAWAQLSPALLQQQLSGACTSQSRPPVQDQLSQSERYLYGSLATLLICLCAVFGLLLLTCTGCRGVTHYILQTFLSLAVGALTGDAVLHLTPKVLGLHTHSEEGLSPQPTWRLLAMLAGLYAFFLFENLFNLLLPRDPEDLEDGPCGHSSHSHGGHSHGVSLQLAPSELRQPKPPHEGSRADLVAEESPELLNPEPRRLSPELRLLPYMITLGDAVHNFADGLAVGAAFASSWKTGLATSLAVFCHELPHELGDFAALLHAGLSVRQALLLNLASALTAFAGLYVALAVGVSEESEAWILAVATGLFLYVALCDMLPAMLKVRDPRPWLLFLLHNVGLLGGWTVLLLLSLYEDDITF
[SEQ ID No:19]
因此，优选地该抗体或其抗原结合片段不与SEQ ID No:19中基本列出的序列，或其变体或片段结合。
在一个实施方案中，ZIP13可由基因ID号：91252代表，在本文中提供为SEQ ID号：75，如下所示：
MPGCPCPGCGMAGPRLLFLTALALELLERAGGSQPALRSRGTATACRLDNKESESWGALLSGERLDTWICSLLGSLMVGLSGVFPLLVIPLEMGTMLRSEAGAWRLKQLLSFALGGLLGNVFLHLLPEAWAYTCSASPGGEGQSLQQQQQLGLWVIAGILTFLALEKMFLDSKEEGTSQAPNKDPTAAAAALNGGHCLAQPAAEPGLGAVVRSIKVSGYLNLLANTIDNFTHGLAVAASFLVSKKIGLLTTMAILLHEIPHEVGDFAILLRAGFDRWSAAKLQLSTALGGLLGAGFAICTQSPKGVVGCSPAAEETAAWVLPFTSGGFLYIALVNVLPDLLEEEDPWRSLQQLLLLCAGIVVMVLFSLFVD
[SEQ ID No:75]
因此，优选地，该抗体或其抗原结合片段不与SEQ ID No:75中基本列出的序列或其变体或片段结合。
本发明既包括对ZIP12细胞外部分具有免疫特异性的整个抗体(即免疫球蛋白)，也包括相应全长抗体的抗原结合片段或区域。
抗体或其抗原结合片段可以是单价、二价或多价的。单价抗体是二聚体(HL)，包括一条重链(H)与一条轻链(L)通过二硫桥(disulphide bridge)相连。二价抗体是四聚体(H2L2)，包括由至少一个二硫桥连接的两个二聚体。多价抗体也可以被生产出来，例如通过连接多个二聚体。抗体分子的基本结构包括两条相同的轻链和两条相同的重链，它们以非共价方式结合，并且可以通过二硫键连接。每条重链和轻链都包含一个大约110个氨基酸的氨基末端可变区，在链的其余部分有恒定序列。可变区包括几个超变区，或互补决定区(CDRs)，形成抗体分子的抗原结合点，并决定其对抗原的特异性，即ZIP12的细胞外部分，或其变体或片段(如表位)。在重链和轻链的CDRs的两侧是一个框架区，它是一个相对保守的氨基酸序列，用于锚定和定向CDRs。抗体片段可以包括
重链恒定区通常包括三个结构域，CH1、CH2和CH3。每个轻链通常包括一个轻链可变区(VL)和一个轻链恒定区。轻链恒定区通常包括一个结构域，缩写为CL。
每个重链和轻链一般包括三个CDRs和四个FRs，按以下顺序排列(从N端到C端)：FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4。CDRs参与抗原结合并赋予抗原特异性和抗体的结合亲和力。见Kabat等人，Kabat et al.,Sequences of Proteins of Immunological Interest5th ed.(1991)Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD，通过引用全部内容纳入。
任何脊椎动物的重链都可以被归入五个不同的类别(或同种型)之一：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM。这些类别也分别被称为α、δ、ε、γ和μ。根据序列和功能的不同，IgG和IgA类又被进一步划分为亚类。人类表达以下亚类：IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2。
任何脊椎动物的轻链都可以根据恒定结构域的序列被归入两种类型之一，称为kappa和lambda。
恒定区由五个重链序列(μ、γ、ζ、α或ε)之一和两个轻链序列(κ或λ)之一组成。重链恒定区序列决定了抗体的同种型和分子的效应器功能。
优选地，抗体或其抗原结合片段被分离或纯化。
在一个优选的实施方案中，抗体或其抗原结合片段包括多克隆抗体或其抗体结合片段。抗体或其抗原结合片段可以在兔、小鼠或大鼠中产生。
优选地，抗体或其抗原结合片段通过用ZIP12的细胞外部分或其变体或片段免疫宿主动物，然后收集抗体或其抗体结合片段而获得。宿主动物可能是兔子。
在另一个优选实施方案中，抗体或其抗原结合片段包括单克隆抗体或其抗体结合片段。优选地，本发明的抗体是人抗体。如本文所用，术语“人抗体”可指抗体，如单克隆抗体，其包含与在对ZIP12的细胞外部分或其变体或片段表现出免疫特异性的特定人抗体中发现的基本相同的重链和轻链CDR氨基酸序列。与参考序列相比，与重链或轻链CDR基本相同的氨基酸序列表现出相当大的序列同一性。这种身份是明确已知的或可识别的，因为它代表特定人类抗体的氨基酸序列。基本上相同的重链和轻链CDR氨基酸序列可以具有例如氨基酸的微小修饰或保守取代。这样的人抗体维持其选择性结合ZIP12或其变体或片段的细胞外部分的功能。
术语“人单克隆抗体”可以包括具有基本上或完全人CDR氨基酸序列的单克隆抗体，单克隆抗体例如通过重组方法产生，例如通过噬菌体文库、淋巴细胞或杂交瘤细胞产生。
术语“单克隆抗体”是指来自基本上同质的抗体群体的抗体。基本上同质的抗体群体包括基本上相似的抗体，并且结合相同的表位，除了在单克隆抗体的生产过程中通常可能出现的变体。这种变体通常仅以少量存在。单克隆抗体通常通过包括从多种抗体中选择单个抗体的过程获得。例如，选择过程可以是从多个克隆中选择独特的克隆，例如杂交瘤克隆库、噬菌体克隆库、酵母克隆库、细菌克隆库或其他重组DNA克隆库。所选择的抗体可以进一步改变，例如，以提高对靶标的亲和力(通过所谓的“亲和力成熟(affinitymaturation)”)，使抗体人源化，提高其在细胞培养中的产量，和/或降低其在受试者中的免疫原性。
术语“人源化抗体”可以指来自非人类物种(如小鼠或兔子)的抗体，其蛋白质序列经过修饰，以增加其与人类自然产生的抗体的相似性。
抗体可以是重组抗体。术语“重组人抗体”可以包括使用重组DNA技术生产的人抗体。
术语“抗原结合区”可以指抗体的对其靶抗原具有特异性结合亲和力的区域，例如ZIP12的细胞外部分，或其变体或片段。优选地，该片段是表位。抗原结合区可以是高变CDR或其功能部分。CDR的术语“功能部分”可以指CDR内对靶抗原显示特异性亲和力的序列。CDR的功能部分可以包括特异性结合ZIP12的细胞外部分的配体或其片段。
术语“CDR”可以指重链和轻链中的高变区。在抗体的重链和轻链中的每一个中可能存在一个、两个、三个或更多CDR。通常，每条链上至少有三个CDR，当它们配置在一起时，形成抗原结合位点，即抗原结合或特异性反应的三维结合位点。然而，据推测，在一些抗体的重链中可能有四个CDR。
CDR的定义还包括当相互比较时氨基酸残基的重叠或亚群。包含特定CDR或其功能部分的确切残基数将根据CDR的序列和大小而变化。给定抗体的可变区氨基酸序列，本领域技术人员可以常规确定哪些残基包含特定CDR。
CDR的氨基酸序列边界可以通过使用多种已知编号方案中的任何一种来确定，包括Kabat et al.,supra(“Kabat”编号方案)；Al-Lazikani et al.,1997,J.Mol.Biol.,273:927-948(“Chothia”编号方案)；MacCallum et al.,1996,J.Mol.Biol.262:732-745(“Contact”编号方案)；Lefranc et al.,Dev.Comp.Immunol.,2003,27:55-77(“IMGT”编号方案)；以及Honegge and Plückthun,J.Mol.Biol.,2001,309:657-70(“AHo”编号方案)。
抗体的术语“功能片段”可以指抗体中保留功能活性的部分。功能活性可以是例如抗原结合活性或特异性。功能活性也可以是，例如由抗体恒定区提供的效应器功能。术语“功能性片段”还旨在包括，例如通过蛋白酶消化或还原人单克隆抗体和本领域技术人员已知的重组DNA方法产生的片段。人单克隆抗体功能性片段包括，例如单个重链或轻链及其片段，如VL、VH和Fd；单价片段，如Fv、Fab和Fab’；二价片段，如FF(ab')2；单链Fv(scFv)；以及Fc片段。术语“VL片段”可以指人单克隆抗体的轻链片段，其包括全部或部分轻链可变区，包括CDR。VL片段可以进一步包括轻链恒定区序列。
术语“VH片段”可以指人单克隆抗体的重链片段，其包括重链可变区的全部或部分，包括CDR。
术语“Fd片段”可以指与耦合到第一个重链恒定区(即VH和CH-1)的重链可变区。“Fd片段”不包括轻链，也不包括重链的第二和第三恒定区。
术语“Fv片段”可以指人单克隆抗体的单价抗原结合片段，包括重链和轻链的全部或部分可变区，并且不存在重链和重链的恒定区。重链和轻链的可变区包括例如CDR。例如，Fv片段包括重链和轻链的约110个氨基酸的全部或部分氨基末端可变区。
术语“Fab片段”可以指大于Fv片段的人单克隆抗体的单价抗原结合片段。例如，Fab片段包括可变区，以及重链和轻链的第一恒定结构域的全部或部分。因此，Fab片段另外包括例如重链和轻链的约110至约220的氨基酸残基。
术语“Fab’片段”可以指比Fab片段大的人单克隆抗体的单价抗原结合片段。例如，Fab’片段包括所有轻链、所有重链可变区以及所有或部分重链第一和第二恒定结构域。例如，Fab’片段可以另外包括重链的220至330个氨基酸残基中的一些或全部。
术语“F(ab')2片段”可以指人单克隆抗体的二价抗原结合片段。F(ab')2片段包括，例如，两个重链和两个轻链的全部或部分可变区，并且可以进一步包括两条重链和二条轻链的所有或部分第一恒定结构域。
术语“单链Fv(scFv)”可以指与短连接肽连接的重链(VH)和轻链(VL)可变区的融合。
术语“双特异性抗体(BsAb)”可以是指包含两个通过较短连接肽相互连接的scFv的双特异性的抗体。
本领域技术人员知道，抗体片段的确切边界并不重要，只要该片段保持功能活性即可。使用众所周知的重组方法，本领域技术人员可以设计多核苷酸序列来表达具有特定应用所需的任何终点的功能片段。抗体的功能性片段可以包含或由具有与人抗体基本相同的重链和轻链可变区的片段组成。
优选地，关于本发明的第一方面，其抗原结合片段对ZIP12的细胞外部分内的表位具有免疫特异性。其抗原结合片段可包含或由选自VH、VL、Fd、Fv、Fab、Fab、scFv、F(ab')2和Fc片段的任何片段组成。
其抗原结合片段可以是单结构域抗体(sdAb)，也称为纳米抗体(nanobody)，本领域技术人员将其理解为由单个单体可变抗体结构域组成的抗体片段。
其抗原结合片段可包含或由VL的抗原结合区序列中的任何一个、VH的抗原接合区序列中任何一个或人抗体的VL和VH抗原结合区的组合组成。VH和VL抗原结合区序列的适当数量和组合可以由本领域技术人员根据所需的亲和力和特异性以及抗原结合片段的预期用途来确定。抗体的功能片段或抗原结合片段可以使用本领域技术人员熟知的方法容易地产生和分离。这些方法包括例如蛋白水解方法、重组方法和化学合成。用于分离功能片段的蛋白质水解方法包括使用人抗体作为起始材料。适合于人免疫球蛋白蛋白水解的酶可以包括，例如木瓜蛋白酶和胃蛋白酶。适当的酶可以由本领域的技术人员容易地选择，这取决于例如是否需要单价或二价片段。例如，木瓜蛋白酶切割产生两个结合抗原的单价Fab'片段和一个Fc片段。例如，肽切割产生二价F(ab')片段。本发明的F(ab')2片段可以使用例如DTT或2-巯基乙醇进一步还原以产生两个单价Fab片段。
通过蛋白水解产生的抗体的功能性或抗原结合片段可以通过亲和和柱色谱程序纯化。例如，未消化的抗体和Fc片段可以通过与蛋白质A结合来去除。此外，功能性片段可以通过它们的电荷和大小来纯化，例如使用离子交换和凝胶过滤色谱。这样的方法对于本领域的技术人员来说是众所周知的。
抗体或其抗原结合片段可以通过重组方法产生。优选地，首先分离编码抗体重链和轻链的期望区域的多核苷酸。这样的区域可以包括，例如，重链和轻链的可变区域的全部或部分。优选地，这样的区域可以特别包括重链和轻链的抗原结合区域，优选抗原结合位点，最优选CDR。
根据本发明，编码抗体或其抗原结合片段的多核苷酸可使用本领域技术人员已知的方法生产。编码抗体或抗原结合碎片的多核苷酸可以通过本领域已知的寡核苷酸合成方法直接合成。或者，可以使用本领域已知的重组方法合成并连接较小的片段以形成较大的功能片段。
如本文所用，术语“免疫特异性”可以指抗体或其抗原结合片段的结合区能够通过与ZIP12的细胞外部分或其变体或片段特异性结合而与之发生免疫反应。抗体或其抗原结合片段可以优选地选择性地与抗原(ZIP12的细胞外部分)相互作用，所述抗原的亲和常数为约10-5至10-13M-1,优选10-6至10-9M-1,甚至更优选10-10至10-12M-1。抗体或其抗原结合片段优选基本上不与ZIP4和/或ZIP13结合，使得亲和常数约大于10-10M-1、10-9M-1、10-8M-1、10-7M-1或10-6M-1，优选大于10-5M-1、10-4M-1或10-3M-1甚至更优选10-2M-1、10-1M-1或10-2M-1，最优选10+ 1M-1、10+2M-1或10+3M-1。
术语“免疫反应物”可以指结合区能够在与ZIP12的细胞外区或其表位结合时引发免疫反应。
术语“表位”可以指具有引发抗体或其抗原结合片段的结合区并与其结合的能力的抗原的任何区域。
因此，抗体、抗体或其抗原结合片段可以包含重链。重链可以选自IgA、IgD、IgE、IgG和IgM。优选地，重链是IgG。优选地，重链是IgA。
重链可以是IgG1。重链可以是IgG2。重链可以是IgG3。重链可以是IgG4。重链可以是IgA1。重链可以是IgA2。
如实施例中所述，如图2所示，发明人已经令人惊讶地证明，本文中称为19212(“38F02”)、19213(“51B12”)、19214(“63A11”)和19218(“89G11”)的抗体都能够显著靶向和抑制ZIP12的功能。这四种抗体的CDR/VH/VL、HC和LC序列方便地总结在图13所示的表中。有利地，并且优选地，本发明人还证明了63A11和51B12谱系的亲本抗体和人源化抗体都保持活性，并且没有表现出与ZIP4的交叉反应性。
19214(“63A11”)
因此，在一个实施方案中，抗体或其抗原结合片段在本文中被称为63A11。抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:3的CDR-H1结构域，如下所示：
DHGMH
[SEQ ID No:3]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H1结构域，其包含或由基本上如SEQ ID No:3所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含SEQ ID No:4的CDR-H2结构域，其在本文中提供如下：
YISSGSSAIFYADTVKG
[SEQ ID No:4]
因此，所述抗体或其抗原结合片段包含CDR-H2结构域，CDR-H2域包含或由基本上如SEQ ID No:4所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含SEQ ID No:5的CDR-H3结构域，其在本文中提供如下：
WTNLYAMDY
[SEQ ID No:5]
因此，优选抗体或其抗原结合片段包含CDR-H3结构域，CDR-H3域包含或由基本上如SEQ ID No:5所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H1结构域、CDR-H2结构域和/或CDR-H3结构域，其中，CDR-H1结构域包含或由SEQ ID No:3组成，CDR-H2结构域包含或由SEQ ID No:4组成，CDR-H3结构域包含或由SEQ ID No:5组成。然而，优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H1结构域、CDR-H2结构域和CDR-H3结构域，其中，CDR-H1结构域包含或由SEQ ID No:3组成，CDR-H2结构域包含或由SEQ ID No:4组成，CDR-H3结构域包含或由SEQ ID No:5组成。
抗体或其抗原结合片段可包含SEQ ID No:41中的重链可变(VH)序列，其在本文中提供如下：
EVQLVESGGGLVKPGGSRKLSCAASGFTFSDHGMHWVRQAPEKGLEWVAYISSGSSAIFYADTVKGRFTMSRDNAKNTLFLQMTSLRSEDTAMYFCARWTNLYAMDYWGQGTSVTVSS
[SEQ ID No:41]
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变区(VH)，VH区包含或由基本上如SEQID No:41所示的序列、或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含如本文提供的SEQ ID No:6中所述的重链序列，如下所示：EVQLVESGGGLVKPGGSRKLSCAASGFTFSDHGMHWVRQAPEKGLEWVAYISSGSSAIFYADTVKGRFTMSRDNAKNTLFLQMTSLRSEDTAMYFCARWTNLYAMDYWGQGTSVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
[SEQ ID No:6]
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链区，该重链区包含或由基本上如SEQ IDNo:6所示的序列、或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含SEQ ID No:49中所述的重链序列，其在本文中提供如下：QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSDHGMHWVRQAPGKGLEWVAYISSGSSAIFYADTVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARWTNLYAMDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
[SEQ ID No:49]
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链区，重链区包含或由基本上如SEQ IDNo:49所示的序列、或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含SEQ ID No:50中所述的重链序列，其在本文中提供如下：QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSDHGMHWVRQAPGKGLEWVAYISSGSSAIFYADTVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYFCARWTNLYAMDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
[SEQ ID No:50]
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链区，该重链区包含或由基本上如SEQ IDNo:50所示的序列、或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含SEQ ID No:51中所述的重链序列，其在本文中提供如下：QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSDHGMHWVRQAPGKGLEWVAYISSGSSAIFYADTVKGRFTMSRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARWTNLYAMDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
[SEQ ID No:51]
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链区，该重链区包含或由基本上如SEQ IDNo:51所示的序列、或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含SEQ ID No:52中所述的重链序列，其在本文中提供如下：QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSDHGMHWVRQAPGKGLEWVAYISSGSSAIFYADTVKGRFTMSRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYFCARWTNLYAMDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
[SEQ ID No:52]
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链区，该重链区包含或由基本上如SEQ IDNo:52所示的序列、或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:7的轻链CDR-L1结构域，如下所示：
RASKSVSTSGYSYMH
[SEQ ID No:7]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L1结构域，其包含或由基本上如SEQ ID No:7所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含SEQ ID No:8的CDR-L2结构域，其在本文中提供如下：
LASNLES
[SEQ ID No:8]
因此，优选抗体或其抗原结合片段包含CDR-L2结构域，CDR-L2结构域包含或由基本上如SEQ ID No:8所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含SEQ ID No:9的CDR-L3结构域，其在本文中提供如下：
QHSRELPLT
[SEQ ID No:9]
因此，优选抗体或其抗原结合片段包含CDR-L3结构域，该CDR-L3结构域包含或由基本上如SEQ ID No:9所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L1结构域、CDR-L2结构域和/或CDR-L3结构域，其中，CDR-L1结构域包含或由SEQ ID No:7组成，CDR-L2结构域包含或由SEQ ID No:8组成，CDR-L3结构域包含或由SEQ ID No:9组成。然而，优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L1结构域、CDR-L2结构域和CDR-L3结构域，其中，CDR-L1结构域包含或由SEQ ID No:7组成，CDR-L2结构域包含或由SEQ ID No:8组成，CDR-L3结构域包含或由SEQ ID No:9组成。
抗体或其抗原结合片段可包含如SEQ ID No:42中所述的轻链可变(VL)序列，其在本文中提供如下：
DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLNIHPVEEEDAATYYCQHSRELPLTFGAGTKLELK
[SEQ ID No:42]
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区，其包含或由基本上如SEQ IDNo:42所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含如本文提供的SEQ ID No:10中所述的轻链序列，如下所示：
DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLNIHPVEEEDAATYYCQHSRELPLTFGAGTKLELKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
[SEQ ID No:10]
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链区，该轻链区包含或由基本上如SEQ IDNo:10所示的序列、或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含SEQ ID No:53中所述的轻链序列，其在本文中提供如下：
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQHSRELPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
[SEQ ID No:53]
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链区，该轻链区包含或由基本上如SEQ IDNo:53所示的序列、或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含SEQ ID No:54中所述的轻链序列，其在本文中提供如下：DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCRASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQHSRELPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
[SEQ ID No:54]
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链区，该轻链区包含或由基本上如SEQ IDNo:54所示的序列、或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含至少一个、至少两个、至少三个、至少四个、至少五个或至少六个CDR。优选地，抗体或其抗原结合片段至少包含CDR-H3。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H1结构域、CDR-H2结构域、CDR-H3结构域、CDR-L1结构域、CDR-L2结构域和CDR-L3结构域。其中，CDR-H1结构域包含或由SEQ IDNo:3组成，CDR-H2结构域包含或由SEQ ID No:4组成，CDR-H3结构域包含或由SEQ ID No:5组成，CDR-L1结构域包含或由SEQ ID No:7组成，CDR-L2结构域包含或由SEQ ID No:8组成，CDR-L3结构域包含或由SEQ ID No:9组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含包含或由SEQ ID No:41组成的重链可变区和包含或由SEQ ID No:42组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含包含或由SEQ ID No:6组成的重链区和包含或由SEQ ID No:10组成的轻链区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链区和轻链区，该重链区选自由SEQ IDNo:49、SEQ ID No:50、SEQ ID No:51和SEQ ID No.52，该轻链区包含或由SEQ ID No:53或SEQ ID No-54组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链区和轻链区，该重链区包含或由SEQ IDNo:49组成，该轻链区包含或由SEQ ID No:53或SEQ ID No:54组成。优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链区和轻链区，重链区包含或由SEQ ID No:50组成，轻链区包含或由SEQID No:53或SEQ ID No:54组成。优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链和轻链区，该重链包含或由SEQ ID No:51组成，轻链区包含或由SEQ ID No:53或SEQ ID No:54组成。优选地，抗体或其抗原结合片段包含由SEQ ID No:52组成的重链区和包含或由SEQ ID No:53或SEQID No.54组成的轻链区。
19213(“51B12”)
在一个实施方案中，抗体或其抗原结合片段在本文中被称为51B12。抗体或其抗原结合片段可包含SEQ ID No:11的CDR-H1结构域，其在本文中提供如下：
DYGMH
[SEQ ID No:11]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H1结构域，其包含或由基本上如SEQ ID No:11所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:12的CDR-H2结构域，如下所示：
YISSGGTTIYYADTVKG
[SEQ ID No:12]
因此，优选抗体或其抗原结合片段包含CDR-H2结构域，该CDR-H2域包含或由基本上如SEQ ID No:12所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含SEQ ID No:13的CDR-H3结构域，其在本文中提供如下：
WTNLYAMDY
[SEQ ID No:13]
因此，优选抗体或其抗原结合片段包含CDR-H3结构域，该CDR-H3域包含或由基本上如SEQ ID No:13所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H1结构域、CDR-H2结构域和/或CDR-H3结构域，其中，CDR-H1域包含或由SEQ ID No:11组成，CDR-H2域包含或由SEQ ID No:12组成，CDR-H3结构域包含或由SEQ ID No:13组成。然而，优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H1结构域、CDR-H2结构域和CDR-H3结构域，其中，CDR-H1域包含或由SEQ ID No:11组成，CDR-H2域包含或由SEQ ID No:12组成，CDR-H3结构域包含或由SEQ ID No:13组成。
抗体或其抗原结合片段可包含SEQ ID No:43中所述的重链可变(VH)序列，其在本文中提供如下：
EVQLVESGGGLVKPGGSRKLSCAASGFTFSDYGMHWVRQAPEKGLEWVAYISSGGTTIYYADTVKGRFTISRDNAKNTLFLQMTSLRSEDTAMYYCARWTNLYAMDYWGQGTSVTVSS
[SEQ ID No:43]
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，该重链可变区包含或由基本上如SEQ ID No:43所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含SEQ ID No:14中所述的重链序列，其在本文中提供如下：EVQLVESGGGLVKPGGSRKLSCAASGFTFSDYGMHWVRQAPEKGLEWVAYISSGGTTIYYADTVKGRFTISRDNAKNTLFLQMTSLRSEDTAMYYCARWTNLYAMDYWGQGTSVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
[SEQ ID No:14]
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链区，该重链区包含或由基本上如SEQ IDNo:14所示的序列、或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含SEQ ID No:55中所述的重链序列，其在本文中提供如下：QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSDYGMHWVRQAPGKGLEWVAYISSGGTTIYYADTVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARWTNLYAMDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
[SEQ ID No:55]
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链区，该重链区包含或由基本上如SEQ IDNo:55所示的序列、或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:15的轻链CDR-L1结构域，如下：
RASKSVSTSGYSYMH
[SEQ ID No:15]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L1结构域，其包含或由基本上如SEQ ID No:15所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含SEQ ID No:16的CDR-L2结构域，其在本文中提供如下：
LASNLES
[SEQ ID No:16]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L2结构域，该CDR-L2域包含或由基本上如SEQ ID No:16所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含SEQ ID No:17的CDR-L3结构域，其在本文中提供如下：
QHSREVPYT
[SEQ ID No:17]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L3结构域，该CDR-L3域包含或由基本上如SEQ ID No:17所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L1结构域、CDR-L 2结构域和/或CDR-L3结构域，其中，CDR-L1结构域包含或由SEQ ID No:15组成，CDR-L 2结构域包含或由SEQ IDNo:16组成，CDR-L3结构域包含或由SEQ ID No:17组成。然而，优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L1结构域、CDR-L 2结构域和CDR-L3结构域，其中，CDR-L1结构域包含或由SEQID No:15组成，CDR-L 2结构域包含或由SEQ ID No:16组成，CDR-L3结构域包含或由SEQ IDNo:17组成。
抗体或其抗原结合片段可包含如SEQ ID No:44中所述的轻链可变(VL)序列，其在本文中提供如下：
DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKFLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLNIHPVEEEDAATYYCQHSREVPYTFGGGTKLEIK
[SEQ ID No:44]
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，该轻链可变区包含或由基本上如SEQ ID No:44所示的序列、或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:18中所述的轻链序列，如下：
DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKFLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLNIHPVEEEDAATYYCQHSREVPYTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
[SEQ ID No:18]
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链区，该轻链区包含或由基本上如SEQ IDNo:18所示的序列、或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:56中所述的轻链序列，如下：DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQHSREVPYTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
[SEQ ID No:56]
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链区，该轻链区包含或由基本上如SEQ IDNo:56所示的序列、或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含SEQ ID No:57中所述的轻链序列，其在本文中提供如下：DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCRASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQHSREVPYTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
[SEQ ID No:57]
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链区，该轻链区包含或由基本上如SEQ IDNo:57所示的序列、或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含SEQ ID No:58中所述的轻链序列，其在本文中提供如下：DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKFLIYLASNLESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQHSREVPYTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
[SEQ ID No:58]
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链区，轻链区包含或由基本上如SEQ IDNo:58所示的序列、或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含SEQ ID No:59中所述的轻链序列，其在本文中提供如下：DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCRASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKFLIYLASNLESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQHSREVPYTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
[SEQ ID No:59]
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链区，该轻链区包含或由基本上如SEQ IDNo:59所示的序列、或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含至少一个、至少两个、至少三个、至少四个、至少五个或至少六个CDR。优选地，抗体或其抗原结合片段至少包含CDR-H3。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H1结构域、CDR-H2结构域、CDR-H3结构域、CDR-L1结构域、CDR-L2结构域和CDR-L3结构域，其中，CDR-H1结构域包含或由SEQ IDNo:11组成，CDR-H2结构域包含或由SEQ ID No:12组成，CDR-H3结构域包含或由SEQ ID No:13组成，CDR-L1结构域包含或由SEQ ID No:15组成，CDR-L2结构域包含或由SEQ ID No:16组成，CDR-L3结构域包含或由SEQ ID No:17组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含包含或由SEQ ID No:43组成的重链可变区和包含或由SEQ ID No:44组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含包含或由SEQ ID No:14组成的重链区和包含或由SEQ ID No:18组成的轻链区。
优选地，所述抗体或其抗原结合片段包含重链区和轻链区，该重链区包含或由SEQID No:55组成，该轻链区选自SEQ ID No:56、SEQ ID No:57、SEQ ID No:58和SEQ ID No:59。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含包含或由SEQ ID No:55组成的重链区和包含或由SEQ ID No:56组成的轻链区。优选地，抗体或其抗原结合片段包含包含或由SEQ IDNo:55组成的重链区和包含或由SEQ ID No:57组成的轻链区。优选地，抗体或其抗原结合片段包含包含或由SEQ ID No:55组成的重链区和包含或由SEQ ID No:58组成的轻链区。优选地，抗体或其抗原结合片段包含包含或由SEQ ID No:55组成的重链区和包含或由SEQ IDNo:59组成的轻链区。
38F02(19212)
在一个实施方案中，抗体或其抗原结合片段在本文中被称为19212。抗体或其抗原结合片段可包含SEQ ID No:20的CDR-H1结构域，其在本文中提供如下：
DYAMH
[SEQ ID No:20]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H1结构域，其包含或由基本上如SEQ ID No:20所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含SEQ ID No:21的CDR-H2结构域，其在本文中提供如下：
VIRTNYGGASYNQKFKG
[SEQ ID No:21]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H2结构域，该CDR-H2结构域包含或由基本上如SEQ ID No:21所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含SEQ ID No:22的CDR-H3结构域，其在本文中提供如下：
GVGRAWFAY
[SEQ ID No:22]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H3结构域，该CDR-H3结构域包含或由基本上如SEQ ID No:22所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H1结构域、CDR-H2结构域和/或CDR-H3结构域，其中，CDR-H1结构域包含或由SEQ ID No:20组成，CDR-H2结构域包含或由SEQ ID No:21组成，CDR-H3结构域包括或由SEQ ID No:22组成。然而，优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H1结构域、CDR-H2结构域和CDR-H3结构域，其中，CDR-H1结构域包含或由SEQ IDNo:20组成，CDR-H2结构域包含或由SEQ ID No:21组成，CDR-H3结构域包括或由SEQ ID No:22组成。
抗体或其抗原结合片段可包含SEQ ID No:45中所述的重链可变(VH)序列，其在本文中提供如下：
QVQLQQSGAELVRPGVSVKISCKGSGYTFTDYAMHWVKQSHAKSLEWIGVIRTNYGGASYNQKFKGKATMTVDKSSSTAYMELARLTSEDSAIYYCARGVGRAWFAYWGQGTLVTVSA
[SEQ ID No:45]
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变区(VH)，VH区包含或由基本上如SEQID No:45所示的序列、或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含如本文提供的SEQ ID No:23中所述的重链序列，如下所示：
QVQLQQSGAELVRPGVSVKISCKGSGYTFTDYAMHWVKQSHAKSLEWIGVIRTNYGGASYNQKFKGKATMTVDKSSSTAYMELARLTSEDSAIYYCARGVGRAWFAYWGQGTLVTVSAASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
[SEQ ID No:23]
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链区，该重链区包含或由基本上如SEQ IDNo:23所示的序列、或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:24的轻链CDR-L1结构域，如下所示：
KASQSVDYDGDSYMN
[SEQ ID No:24]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L1结构域，其包含或由基本上如SEQ ID No:24所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含SEQ ID No:25的CDR-L2结构域，其在本文中提供如下：
AASNLES
[SEQ ID No:25]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L2结构域，该CDR-L2结构域包含或由基本上如SEQ ID No:25所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:26的CDR-L3结构域，如下所示：
QQSYDDPYT
[SEQ ID No:26]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L3结构域，该CDR-L3结构域包含或由基本上如SEQ ID No:26所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L1结构域、CDR-L 2结构域和/或CDR-L3结构域，其中，CDR-L1结构域包含或由SEQ ID No:24组成，CDR-L 2结构域包含或由SEQ IDNo:25组成，CDR-L3结构域包含或由SEQ ID No:26组成。然而，优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L1结构域、CDR-L 2结构域和CDR-L3结构域，其中，CDR-L1结构域包含或由SEQID No:24组成，CDR-L 2结构域包含或由SEQ ID No:25组成，CDR-L3结构域包含或由SEQ IDNo:26组成。
抗体或其抗原结合片段可包含如SEQ ID No:46中所述的轻链可变(VL)序列，其在本文中提供如下：
DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCKASQSVDYDGDSYMNWYQQKPGQPPKLLIYAASNLESGIPARFSGSGSGTDFTLNIHPVEEEDAATYYCQQSYDDPYTFGGGTKLEIK
[SEQ ID No:46]
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，该轻链可变区包含或由基本上如SEQ ID No:46所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:27中所述的轻链序列，如下所示：DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCKASQSVDYDGDSYMNWYQQKPGQPPKLLIYAASNLESGIPARFSGSGSGTDFTLNIHPVEEEDAATYYCQQSYDDPYTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLS
SPVTKSFNRGEC
[SEQ ID No:27]
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链区，该轻链区包含或由基本上如SEQ IDNo:27所示的序列、或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含至少一个、至少两个、至少三个、至少四个、至少五个或至少六个CDR。优选地，抗体或其抗原结合片段至少包含CDR-H3。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H1结构域、CDR-H2结构域、CDR-H3结构域、CDR-L1结构域、CDR-L2结构域和CDR-L3结构域。其中，CDR-H1结构域包含SEQ ID No:20组成，CDR-H2结构域包含SEQ ID No:21组成，CDR-H3结构域包含SEQ ID No:22组成，CDR-L1结构域包含SEQ ID No:24组成，CDR-L2结构域包含SEQ ID No:25组成，CDR-L3结构域包含SEQ ID No:26组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含包含或由SEQ ID No:45组成的重链可变区和包含或由SEQ ID No:46组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含包含或由SEQ ID No:23组成的重链区和包含或由SEQ ID No:27组成的轻链区。
89G11(19218)
在一个实施方案中，抗体或其抗原结合片段在本文中被称为19218。抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:28的CDR-H1结构域，如下所示：
DYEMF
[SEQ ID No:28]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H1结构域，其包含或由基本上如SEQ ID No:28所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含SEQ ID No:29的CDR-H2结构域，其在本文中提供如下：
VIDPETGGTAYNQKFKG
[SEQ ID No:29]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H2结构域，该CDR-H2结构域包含或由基本上如SEQ ID No:29所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含SEQ ID No:30的CDR-H3结构域，其在本文中提供如下：
GYGDYPFAY
[SEQ ID No:30]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H3结构域，该CDR-H3结构域包含或由基本上如SEQ ID No:30所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H1结构域、CDR-H2结构域和/或CDR-H3结构域，其中，CDR-H1结构域包含或由SEQ ID No:28组成，CDR-H2结构域包含或由SEQ ID No:29组成，CDR-H3结构域包含或由SEQ ID No:30组成。然而，优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H1结构域、CDR-H2结构域和CDR-H3结构域，其中，CDR-H1结构域包含或由SEQ IDNo:28组成，CDR-H2结构域包含或由SEQ ID No:29组成，CDR-H3结构域包含或由SEQ ID No:30组成。
抗体或其抗原结合片段可包含SEQ ID No:47中所述的重链(VH)可变序列，其在本文中提供如下：
QVQLQQSGAELVRPGASVKLSCKASGYTFTDYEMFWVKQTPVYGLEWIGVIDPETGGTAYNQKFKGKATLTADKSSSTAYMELRSLTSEDSAVYYCTRGYDGYPFAYWGQGTLVTVSA
[SEQ ID No:47]
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变区(VH)，该VH区包含或由基本上如SEQ ID No:47所示的序列、或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含SEQ ID No:31中所述的重链序列，其在本文中提供如下：QVQLQQSGAELVRPGASVKLSCKASGYTFTDYEMFWVKQTPVYGLEWIGVIDPETGGTAYNQKFKGKATLTADKSSSTAYMELRSLTSEDSAVYYCTRGYDGYPFAYWGQGTLVTVSAASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
[SEQ ID No:31]
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链区，该重链区包含或由基本上如SEQ IDNo:31所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:32的轻链CDR-L1结构域，如下所示：
KSSQLYSSNQKNFLA
[SEQ ID No:32]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L1结构域，其包含或由基本上如SEQ ID No:32所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含SEQ ID No:33的CDR-L2结构域，其在本文中提供如下：
WASTRES
[SEQ ID No:33]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L2结构域，该CDR-L2结构域包含或由基本上如SEQ ID No:33所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:34的CDR-L3结构域，如下所示：
LQYLSSYT
[SEQ ID No:34]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L3结构域，该CDR-L3结构域包含或由基本上如SEQ ID No:34所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L1结构域、CDR-L2结构域和/或CDR-L3结构域，其中，CDR-L1结构域包含或由SEQ ID No:32组成，CDR-L2结构域包含或由SEQ ID No:33组成，CDR-L3结构域包含或由SEQ ID No:34组成。然而，优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L1结构域、CDR-L2结构域和CDR-L3结构域，其中，CDR-L1结构域包含或由SEQ IDNo:32组成，CDR-L2结构域包含或由SEQ ID No:33组成，CDR-L3结构域包含或由SEQ ID No:34组成。
抗体或其抗原结合片段可包含如SEQ ID No:48中所述的轻链可变(VL)序列，其在本文中提供如下：
NIMMTQSPSSLAVSAGEKVTMSCKSSQSVLYSSNQKNFLAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVRAEDLAVYYCLQYLSSYTFGGGTRLDIK
[SEQ ID No:48]
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，该轻链可变区包含或由基本上如SEQ ID No:48所示的序列、或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:35中所述的轻链序列，如下所示：
NIMMTQSPSSLAVSAGEKVTMSCKSSQSVLYSSNQKNFLAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVRAEDLAVYYCLQYLSSYTFGGGTRLDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
[SEQ ID No:35]
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链区，该轻链区包含或由基本上如SEQ IDNo:35所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含至少一个、至少两个、至少三个、至少四个、至少五个或至少六个CDR。优选地，所述抗体或其抗原结合片段至少包含CDR-H3。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H1结构域、CDR-H2结构域、CDR-H3结构域、CDR-L1结构域、CDR-L2结构域和CDR-L3结构域。其中，CDR-H1结构域包含SEQ ID No:28组成，CDR-H2结构域包含SEQ ID No:29组成，CDR-H3结构域包含SEQ ID No:30组成，CDR-L1结构域包含SEQ ID No:32组成，CDR-L2结构域包含SEQ ID No:33组成，CDR-L3结构域包含SEQ ID No:34组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含包含或由SEQ ID No:47组成的重链可变区和包含或由SEQ ID No:48组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含包含或由SEQ ID No:31组成的重链区和包含或由SEQ ID No:35组成的轻链区。
如图5所示，51B12和63A11的抗体具有高度的序列同一性，这使本发明人能够鉴定被认为对保持抗ZIP12活性很重要的氨基酸残基，并使它们能够产生一致序列。
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:36的CDR-H1结构域，如下：
DXGMH
[SEQ ID No:36]
因此，优选抗体或其抗原结合片段包含CDR-H1结构域，该CDR-H1域包含或由基本上如SEQ ID No:36所示的序列或其变体或片段组成，其中X可以是任何氨基酸。优选地，X是H或Y。
抗体或其抗原结合片段可包含SEQ ID No:37的CDR-H2结构域，其在本文中提供如下：
YISSGX1X2X3IX4YADTVKG
[SEQ ID No:37]
因此，优选抗体或其抗原结合片段包含CDR-H2结构域，该CDR-H2域包含或由基本上如SEQ ID No:37所示的序列或其变体或片段组成，其中X1、X2、X3和X4可以是任何氨基酸。优选地，X1可以是S或G。优选地，X2可以是S或T。优选地是，X3可以是A或T，X4可以是F或Y。
抗体或其抗原结合片段可包含SEQ ID No:5的CDR-H3结构域，其在本文中提供如下：
WTNLYAMDY
[SEQ ID No:5]
因此，优选所述抗体或其抗原结合片段包含CDR-H3结构域，所述CDR-H3域包含或由基本上如SEQ ID No:5所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含SEQ ID No:38的可变重链结构域，其在本文中如下提供：
EVQLVESGGGLVKPGGSRKLSCAASGFTFSDX1GMHWVRQAPEKGLEWVAYISSGX2X3X4IX5YADTVKGRFTX6SRDNAKNTLFLQMTSLRSEDTAMYX7CARWTNLYAMDYWGQGTSVTVSS
[SEQ ID No:38]
因此，优选地，抗体或抗原结合片段或其片段或变体包含或由SEQ ID No:38组成，其中X1至X7可以是任何氨基酸。优选地，X1可以是Y或H。优选地，X2可以是G或S。优选地说，X3可以是T或S，X4可以是T或者A，X5可以是Y或者F。优选地，X6可以是I或M，X7可以是Y或F。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:7的轻链CDR-L1结构域，如下：
RASKSVSTSGYSYMH
[SEQ ID No:7]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L1结构域，该CDR-L1结构域包含或由基本上如SEQ ID No:7所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含SEQ ID No:8的CDR-L2结构域，其在本文中提供如下：
LASNLES
[SEQ ID No:8]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L2结构域，该CDR-L2结构域包含或由基本上如SEQ ID No:8所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:39的CDR-L3结构域，如下所示：
QHSREX1PX2T
[SEQ ID No:39]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L3结构域，该CDR-L3结构域包含或由基本上如SEQ ID No:39所示的序列或其变体或片段组成，其中X1和X2可以是任何氨基酸。优选地，X1可以是L或V。优选地，X2可以是L或Y。
抗体或其抗原结合片段可包含如本文提供的SEQ ID No:40中所述的轻链可变序列，如下所示：
DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLNIHPVEEEDAATYYCQHSREX1PX2TFGX3GTKLELK
[SEQ ID No:40]
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区，该轻链可变区包含或由基本上如SEQ ID No:40所示的序列或其变体或片段组成，其中X1和X2可以是任何氨基酸。优选地，X1可以是L或V。优选地，X2可以是L或Y，X3可以是G或A。
本发明的抗体可包含或由图14至19中任一项所定义的任何序列组成。
例如，抗体或其抗原结合片段可包含重链可变序列，该重链可变序列包含或由基本上如SEQ ID No:69、71或72所示的序列或其变体或片段组成。因此，优选地，抗体或其抗原结合片段可以包含重链可变序列，该重链可变序列包含或由基本上如SEQ ID No:69所示的序列或其变体或片段组成。优选地，抗体或其抗原结合片段可包含重链可变序列，该重链可变序列包含或由基本上如SEQ ID No:71所示的序列或其变体或片段组成。优选地，抗体或其抗原结合片段可包含重链可变序列，该重链可变序列包含或由基本上如SEQ ID No:72所示的序列或其变体或片段组成。
例如，抗体或其抗原结合片段可包含轻链可变序列，其包含或由基本上如SEQ IDNo:70、73或74所示的序列或其变体或片段组成。因此，优选地，抗体或其抗原结合片段可包含轻链可变序列，该轻链可变序列包含或由基本上如SEQ ID No:70所示的序列或其变体或片段组成。优选地，抗体或其抗原结合片段可包含轻链可变序列，轻链可变序列包含或由基本上如SEQ ID No:73所示的序列或其变体或片段组成。优选地，抗体或其抗原结合片段可包含轻链可变序列，轻链可变序列包含或由基本上如SEQ ID No:74所示的序列或其变体或片段组成。
在一个实施方案中，抗体或其抗原结合片段可包含重链可变序列和轻链可变序列，该重链可变序列包含或由基本上如SEQ ID No:69、71或72所示的序列组成，该轻链可变序列包括或由基本如SEQ ID No:70、73或74所述的序列组成。
因此，有利地，根据本发明第一方面的抗体或其抗原结合片段的抗ZIP12活性意味着它本身具有作为治疗剂的效用，并且可以用于治疗、改善或预防缺氧诱导的或缺氧相关的病症，特别是肺动脉高压。
因此，在本发明的第二方面中，提供了用于治疗的根据第一方面的抗体或其抗原结合片段。
在本发明的第三方面中，提供了根据第一方面的抗体或其抗原结合片段在治疗、预防或改善缺氧相关病症中的应用。
根据本发明的第四方面，提供了一种治疗、预防或改善受试者缺氧相关病症的方法，该方法包括向需要这种治疗的患者给予或已经给予治疗有效量的根据第一方面的抗体或其抗原结合片段。
缺氧相关病症可选自：缺血再灌注损伤(IRI)、心血管疾病、缺血性心脏病、缺血性脑疾病、黄斑变性、眼部缺血性综合征、缺血性视神经病变(ION)、糖尿病视网膜病变、关节炎、炎症、败血症、败血症诱导的休克、肾脏疾病、组织纤维化、胃肠道疾病，神经退行性疾病、呼吸窘迫综合征、支气管肺发育不良、肺动脉高压、低氧性肺高压、严重肺动脉高压，慢性阻塞性肺病、特发性肺纤维化(IPF)、糖尿病视网膜病变、糖尿病、角膜新生血管、致病性血管生长、癌症和肌肉骨骼疾病。
本发明人已经证明，肿瘤的缺氧核心是缺氧刺激的新生血管生成的位点(Zhao etal 2015,The zinc transporter,ZIP12,regulates the pulmonary vascular responseto chronic hypoxia,Nature,Vol:524,ISSN:0028-0836,Pages:356-360)，并且缺氧被认为是肿瘤的普遍标志，并且有助于抵抗辐射和化疗。因此，ZIP12被发明人确定为癌症的理想治疗靶点，发明人已证明其在缺氧条件下上调，是疾病进展的关键因素。在肿瘤微环境中抑制ZIP12可以限制对肿瘤的血液供应，从而限制肿瘤生长和/或诱导缺氧性肿瘤细胞死亡。
因此，在一个实施例中，低氧相关疾病是癌症。
优选地，治疗、预防或改善癌症的用途或方法包括抑制血管生成。优选地，用途或方法包括限制对肿瘤的血液供应。
然而，与缺氧相关的情况最好是肺动脉高压。最优选地，缺氧相关的病症是缺氧性肺动脉高压。
应当理解，根据本发明的抗体、其片段(本文统称为“制剂”)可用于单药治疗(例如单独使用抗体或其抗原结合片段)，用于治疗、改善或预防缺氧相关病症，优选肺动脉高压。或者，本发明的药物可以作为治疗、改善或预防缺氧相关疾病的已知疗法的辅助或与之组合，缺氧相关疾病优选肺动脉高压，已知疗法例如：抗凝血剂，例如华法林(warfarin)、利尿剂(diuretics)、地高辛(digoxin)；内皮素受体拮抗剂，例如波生坦(bosentan)、安立生坦(ambrisentan)和马西坦(macitentan)；磷酸二酯酶5抑制剂，如西地那非(sildenafil)和他达拉非(tadalafil)；前列腺素，如依前列醇(epoprostenol)、伊洛前列素(iloprost)和曲前列素(treprostinil)；可溶性鸟苷酸环化酶刺激剂，如里奥雪卡(riociguat)；以及钙通道阻滞剂硝苯地平(nifedipine)、地尔硫卓(diltiazem)、尼卡地平(nicardipine)和氨氯地平(amlodipine)。
根据本发明的试剂可以组合成具有多种不同形式的组合物，具体取决于组合物的使用方式。因此，例如，组合物可以是粉末、片剂、胶囊、液体、软膏、乳膏、凝胶、水凝胶、气雾剂、喷雾、胶束溶液、透皮贴剂、脂质体悬浮液或任何其他合适的形式，其可以给药于需要治疗的人或动物。应当理解，根据本发明的药物载体应当是被给予药物的受试者能够良好耐受的载体。
包含本发明药剂的药物可以以多种方式使用。例如，可能需要口服给药，在这种情况下，药剂可以包含在组合物中，该组合物可以例如以片剂、胶囊或液体的形式口服。包含本发明的药剂和药物的组合物可以通过吸入(例如鼻内)给药。组合物也可以配制为局部使用。例如，可以将药膏或软膏涂抹在皮肤上。
根据本发明的药剂和药物也可以结合在缓释或延迟释放装置中。例如，这种装置可以插入皮肤上或皮肤下，并且药物可以在数周甚至数月内释放。该装置可以位于至少邻近治疗部位的位置。当需要用根据本发明使用的药剂进行长期治疗并且通常需要频繁给药(例如至少每天注射)时，这种装置可能是特别有利的。
在一个优选的实施方案中，根据本发明的药剂和药物可以通过注射到血流中或直接注射到需要治疗的部位来给药于受试者。注射可以是静脉内注射(推注或输注)或皮下注射(推注或输注)。
需要了解的是，所需抗体和片段(即制剂)的数量取决于其生物活性和生物利用度，而生物利用度又取决于给药方式、制剂的理化特性，以及它是用作单一疗法还是用于联合疗法。给药频率也会受到受试者体内药剂半衰期的影响。给药的最佳剂量可由本领域技术人员确定，并将随着使用的特定药剂、药物组合物的强度、给药方式和肺动脉高压的进展而变化。取决于接受治疗的特定受试者的其他因素将导致需要调整剂量，包括受试者年龄、体重、性别、饮食和给药时间。
一般来说，本发明的药剂的日剂量在0.01μg/kg体重和100mg/kg体重之间可用于治疗、改善或预防冠状病毒感染，具体日剂量取决于使用哪种药剂。更优选地，药剂的日剂量在1μg/kg体重和100mg/kg体重之间，更优选地在10μg/kg和10mg/kg体重之间，最优选地在约100μg/kg和10mg/kg体重之间。
该药剂可以在肺动脉高压发作之前、期间或之后给药。每日剂量可作为一次给药(例如，每日一次注射)。或者，该药剂可能需要在一天内给药两次或多次。例如，药剂可以两次(或更多次，取决于正在治疗的肺动脉高压的严重程度)给药，日剂量在0.07μg和700mg(即，假设体重为70kg)。接受治疗的患者可以在醒来时服用第一剂，然后在晚上服用第二剂(如果是两剂的方案)，或者之后每隔3或4小时服用一次。或者，可以使用缓释装置向患者提供最佳剂量的本发明药剂，而不需要给予重复剂量。已知的程序，例如制药工业常规使用的程序(例如体内实验、临床试验等)，可以用于形成本发明的制剂的特定制剂和精确的治疗方案(例如制剂的日剂量和给药频率)。
在本发明的第五方面，提供了一种药物组合物，其包含根据第一方面的抗体或其抗原结合片段，以及任选的药学上可接受的载体。
药物组合物优选是抗高血压的，即用于治疗性改善、预防或治疗肺动脉高压的药物制剂。
本发明还在第六方面提供了制备根据第五方面的药物组合物的方法，该方法包括将治疗有效量的第一方面中定义的抗体或其抗原结合片段与药学上可接受的载体组合。
抗体或其抗原结合片段可以如关于第一方面所定义。
“受试者”可能是脊椎动物、哺乳动物或家畜。因此，根据本发明的药物可以用于治疗任何哺乳动物，例如牲畜(例如马)、宠物，或者可以用于其他兽医应用。最优选地，受试者是人。
抗体或其抗原结合片段的“治疗有效量”是当给予受试者时，是治疗肺动脉高压或产生所需效果所需的药剂量的任何量。
例如，所使用的抗体或其片段的治疗有效量可以为约0.1ng/kg至约100mg/kg，优选为约1ng/kg至约10mg/kg。优选抗体或片段的量为约10ng/kg至约10mg/kg，最优选约50ng/kg至约5mg/kg。
本文所指的“可药用载体”是本领域技术人员已知的可用于配制药物组合物的任何已知化合物或已知化合物的组合。
在一个实施方案中，药学上可接受的载体可以是固体，并且组合物可以是粉末或片剂的形式。固体药学上可接受的载体可以包括一种或多种物质，其也可以用作调味剂、润滑剂、增溶剂、悬浮剂、染料、填料、增粘剂、压缩助剂、惰性粘合剂、甜味剂、防腐剂、染料、涂层或片剂崩解剂。载体也可以是封装材料。在粉末中，载体是与本发明的细碎活性剂混合的细碎固体。在片剂中，活性剂可与具有必要压缩特性的载体以适当比例混合，并按所需形状和尺寸压实。粉末和片剂优选含有高达99％的活性剂。合适的固体载体包括，例如磷酸钙、硬脂酸镁、滑石、糖、乳糖、糊精、淀粉、明胶、纤维素、聚乙烯吡咯烷、低熔点蜡和离子交换树脂。在另一个实施方案中，药物载体可以是凝胶，并且组合物可以是乳膏或类似物的形式。
然而，药物载体可以是液体，并且药物组合物是溶液的形式。液体载体用于制备溶液、悬浮液、乳液、糖浆、酏剂(elixirs)和加压组合物。本发明的活性剂可以溶解或悬浮在药学上可接受的液体载体中，例如水、有机溶剂、二者的混合物或药学上可接收的油或脂肪。液体载体可以包含其他合适的药物添加剂，例如增溶剂、乳化剂、缓冲剂、防腐剂、甜味剂、调味剂、悬浮剂、增稠剂、着色剂、粘度调节剂、稳定剂或渗透调节剂。用于口服和非肠道给药的液体载体的合适实例包括水(部分含有如上所述的添加剂，例如纤维素衍生物，优选羧甲基纤维素钠溶液)、醇(包括一元醇和多元醇，例如二醇)及其衍生物，以及油(例如分馏椰子油和花生油)。对于非肠道给药，载体也可以是油性酯，如油酸乙酯和肉豆蔻酸异丙酯。无菌液体载体可用于非肠道给药的无菌液体形式组合物。用于加压组合物的液体载体可以是卤代烃或其他药学上可接受的推进剂(propellant)。
作为无菌溶液或悬浮液的液体药物组合物可以通过例如肌内注射、鞘内注射、硬膜外注射、腹膜内注射、静脉内注射，特别是皮下注射来使用。该药剂可以制备成无菌固体组合物，其可以在施用时使用无菌水、盐水或其他适当的无菌可注射培养基溶解或悬浮。
本发明的药剂和组合物可以无菌溶液或悬浮液的形式口服，其中含有其他溶质或悬浮剂(例如，足够的盐水或葡萄糖使溶液等渗)、胆汁盐、金合欢(acacia)、明胶、山梨糖醇单油酸酯、聚山梨酯80(山梨醇及其酸酐与环氧乙烷共聚的油酸酯)等。根据本发明使用的药剂也可以以液体或固体组合物的形式进行口服。适合口服的组合物包括固体形式，如丸剂、胶囊、颗粒、片剂和粉剂；以及液体形式，如溶液、糖浆、酏剂和悬浮液。适用于肠外给药的形式包括无菌溶液、乳剂和悬浮液。
本发明还扩展到制备第一方面抗体的方法以及如此产生的抗体。
在第七方面，提供了通过以下方法获得的抗体或抗原结合片段：-
(i)如第一方面所定义的，用ZIP12细胞外结构域或ZIP12蛋白区域免疫宿主生物体；和
(ii)从宿主收集抗体或其抗原结合片段。
宿主可以是哺乳动物，并且可以是人、兔或小鼠。
优选地，该方法包括给宿主动物放血，然后优选从血液，最优选血清中收集抗体或其抗原结合片段。优选地，使血清通过具有共价结合的肽载体的重力柱。洗涤后，优选将抗体或其抗原结合片段在优选为酸性缓冲液的缓冲液中洗脱，然后可以中和该溶液。该方法可以进一步包括对合适的缓冲液(例如PBS)进行透析并可选择进行冻干。
在本发明的第八方面中，提供了编码第一方面中定义的抗体或其抗原结合片段的多核苷酸序列。
在本发明的第九方面，提供了包含根据第八方面的多核苷酸序列的表达盒。
编码本发明的抗体或抗原结合片段的多核苷酸序列优选包含在重组载体中，例如用于递送到目的宿主细胞中以产生抗体或其抗原结合片段的重组载体。
因此，在本发明的第十方面，提供了包含根据第九方面的表达盒的重组载体。
编码第一方面的抗体或其抗原结合片段的载体可以例如是质粒、粘粒或噬菌体和/或病毒载体。这种重组载体在本发明的递送系统中非常有用，用于用核苷酸序列转化细胞。核苷酸序列可以优选是DNA序列，并且正是该DNA序列编码形成第一方面的抗体或其抗原结合片段的抗体或其抗原结合片段。
编码第一方面的抗体或其抗原结合片段的重组载体也可以包括其他功能元件。例如，它们可以进一步包含多种其他功能元件，包括用于在将载体引入宿主细胞后启动转基因表达的合适启动子。例如，载体优选能够在宿主细胞的细胞核中自主复制。在这种情况下，重组载体中可能需要诱导或调节DNA复制的元件。或者，可以设计重组载体，使其整合到宿主细胞的基因组中。在这种情况下，设想有利于靶向整合的DNA序列(例如通过同源重组)。合适的启动子可以包括SV40启动子、CMV、EF1a、PGK、病毒长末端重复序列以及诱导型启动子，作为实例，例如四环素诱导系统。盒或载体还可以包含终止子，例如β-珠蛋白、SV40多腺苷酸化序列或合成多腺苷酸化序列。重组载体还可以包含启动子或调节子(regulator)或增强子，以根据需要控制核酸的表达。
该载体还可以包含编码可以在克隆过程中用作选择标记的基因的DNA，即能够选择已经转染或转化的细胞，并且能够选择携带掺入异源DNA的载体的细胞。例如，设想对氨苄青霉素、新霉素、嘌呤霉素或氯霉素具有抗性。另外，选择标记基因可以在与含有转基因的载体同时使用的不同载体中。盒或载体还可以包含涉及调节核苷酸序列表达或用于将表达的多肽靶向宿主细胞的某一部分的DNA。
可以通过合适的手段将纯化的载体直接插入宿主细胞中，例如直接内吞摄取。可以通过转染、感染、电穿孔、显微注射、细胞融合、原生质体融合、磷酸钙、基于阳离子脂质的脂质转染、基于聚合物或树枝状聚合物的方法(dendrimer-based methods)或弹道轰击(ballistic bombardment)将载体直接引入宿主细胞(例如真核或原核细胞)。或者，可以使用粒子枪将本发明的载体直接引入宿主细胞中。
或者，递送系统可以将多核苷酸提供给宿主细胞而不将其掺入载体中。例如，核酸分子可以掺入脂质体或病毒颗粒内。备选地，可以通过合适的手段例如直接内吞摄取将“裸”多核苷酸插入宿主细胞中。
在本发明的第十一方面，提供了包含根据第八方面的多核苷酸序列、根据第九方面的表达盒或根据第十方面的载体的宿主细胞。
宿主细胞可以是真核或原核宿主细胞。优选地，宿主细胞是真核宿主细胞。更优选地，宿主细胞是哺乳动物宿主细胞，例如NS0鼠骨髓瘤细胞，PER.
Figure BDA0004144392550000231
人细胞，人胚肾293细胞或中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。最优选地，宿主细胞是CHO细胞。
在第十二方面，提供了一种根据第一方面制备抗体或抗原结合片段的方法，该方法包括：
a)向宿主细胞中引入第十方面的载体；和
b)根据第一方面在条件下培养宿主细胞以产生抗体或抗原结合片段。
步骤a)的宿主细胞可以是真核或原核宿主细胞。优选地，宿主细胞是真核宿主细胞。更优选地，宿主细胞是哺乳动物宿主细胞，例如NS0鼠骨髓瘤细胞、PER.
Figure BDA0004144392550000232
人细胞、人胚肾293细胞或中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。最优选地，宿主细胞是CHO细胞。
该方法可以进一步包括(c)采集、离心和/或过滤细胞培养基以获得包含抗体或其抗原结合片段的细胞培养上清液。
该方法可进一步包括步骤(d)从细胞培养上清液中分离和纯化抗体或其抗原结合片段。优选地，通过至少一个色谱步骤进行纯化。
合适的色谱步骤包括亲和层析和/或离子交换色谱。优选地，亲和层析是蛋白A层析。离子交换色谱可以是阴离子交换色谱和/或阳离子交换色谱。
优选地，步骤(d)包括通过以下方法从细胞培养上清液中分离和纯化抗体或其抗原结合片段：
i)蛋白A层析；
ii)阴离子交换色谱；和/或
iii)阳离子交换色谱。
该方法可以进一步包括步骤(e)过滤由步骤(d)产生的纯化的抗体或其抗原结合片段。优选地，步骤(e)包括病毒过滤。因此，优选使用病毒滤膜过滤由步骤(d)产生的纯化的抗体或其抗原结合片段。合适的膜对本领域技术人员来说是已知的。
如本文所讨论的，ZIP12的表达在许多细胞类型中增加，包括内皮细胞、平滑肌细胞和间质细胞，并且在易受缺氧诱导的肺动脉高压的大鼠、牛和人的重塑肺小动脉中增加。因此，鉴于本发明的抗体能够结合ZIP12的细胞外结构域，通过检测ZIP12的存在并确定其浓度，可以将抗体或其抗原结合片段用作稳健的诊断工具。
因此，在第十三方面，提供了根据第一方面的抗体或抗体结合片段在诊断或预后中的应用。
根据本发明的第十四方面，提供了根据第一方面的抗体或抗体结合片段在诊断或预测缺氧相关病症中的应用。
根据第十五方面，提供了一种诊断或预测受试者中缺氧相关病症的方法，该方法包括检测从受试者获得的生物样品中的ZIP12，其具有根据第一方面的抗体或抗体结合片段。
优选地，缺氧相关病症选自：缺血再灌注损伤(IRI)、心血管疾病、缺血性心脏病、缺血性脑病症、黄斑变性、眼缺血综合征、缺血性视神经病变(ION)、糖尿病性视网膜病、关节炎、炎症、败血症、败血症诱发的休克、肾病、组织纤维化、胃肠疾病、神经退行性疾病、呼吸窘迫综合征、支气管肺发育不良、肺动脉高压、低氧性肺动脉高压、严重肺动脉高压、COPD、特发性肺纤维化(IPF)、糖尿病视网膜病变、糖尿病、角膜新血管形成、致病性血管生长和肌肉骨骼疾病。
优选地，缺氧相关病症是癌症或肺动脉高压。最优选地，缺氧相关病症是肺动脉高压。
该方法可以是体外或离体方法。优选地，该方法是体外方法。
上述应用或方法可以包括确定受试者中ZIP12的表达水平，优选其中当与来自健康对照群体的参考浓度相比时，生物样品中ZIP12浓度的增加指示肺动脉高压或不良预后。
在一个实施方案中，肺中ZIP12的存在可被认为是肺动脉高压或预后不良的指征。ZIP12的存在可以通过免疫细胞化学检测。
在一个实施方案中，与来自健康对照群体的参考相比，ZIP12增加1倍表明肺动脉高压或预后不良。在一个实施方案中，与来自健康对照群体的参考相比，ZIP12增加2倍、3倍、4倍或5倍表明肺动脉高压或预后不良。在一个实施方案中，与来自健康对照群体的参考相比，ZIP12增加10倍、50倍或100倍表明肺动脉高压或预后不良。
根据本发明的第十六方面，提供了用于诊断患有缺氧相关病症的受试者或用于提供受试者病症的预后的试剂盒，该试剂盒包含抗体或其抗原结合片段，用于检测来自测试受试者的样品中的ZIP12的第一方面。
该试剂盒可以进一步包括使用说明书和/或用于从受试者获得生物样品的容器。
优选地，缺氧相关病症如第十四方面所定义，并且优选肺动脉高压。
预后可能与确定已诊断患有肺动脉高压的受试者的治疗结果有关。预后可以涉及预测受试者中肺动脉高压的进展或改善速率和/或持续时间，存活概率和/或各种治疗方案的功效。因此，不良预后可能表明肺动脉高压进展、存活概率低和治疗方案疗效降低。预后良好可能表明肺动脉高压消退、存活率高和治疗方案疗效提高。
优选地，样品包含生物样品。样品可以是从可从其获得蛋白质的受试者获得的任何材料。
生物样品可以是组织或生物流体。生物样品可以是从可从其获得内皮细胞、平滑肌细胞和/或间质细胞的受试者获得的任何材料。此外，样本可以是血液、血浆、血清、脊髓液、尿液、汗液、唾液、泪液、乳房抽吸物、母乳、前列腺液、精液、阴道液、粪便、宫颈刮伤、细胞、羊水、眼内液、粘液、呼吸水分、动物组织、细胞裂解物、肿瘤组织、头发、皮肤、颊刮、淋巴、间质液、指甲、骨髓、软骨、朊病毒、骨粉、耳蜡、淋巴、肉芽肿、癌症活组织检查或其组合。
样品可以是液体吸出物。例如，样品可以是支气管肺泡灌洗(BAL)、腹水、胸膜灌洗或心包灌洗。
样品可以包含血液、尿液、组织等。在一个优选实施方案中，生物样品包含血液样品。血液可以是静脉或动脉血。可以立即测定血液样品。或者，血液样品可以在低温下储存，例如在冰箱中或甚至在进行该方法之前冷冻。或者，在进行该方法之前，血液样品可以在室温下储存，例如在18至22℃之间。血液样品可以包含血清。血液样品可以包含血浆。然而，优选地，检测在全血上进行，最优选地血液样品是外周血。
在进行第一方面的使用之前，可以进一步处理血液。例如，可以加入抗凝血剂，例如柠檬酸盐(例如柠檬酸钠)、水蛭素(hirudin)、肝素，PPACK或氟化钠。因此，样品收集容器可以包含抗凝血剂以防止血液样品凝结。
优选地，样品可以包含内皮细胞、平滑肌细胞和/或间质细胞，优选肺内皮细胞、平滑肌细胞和/或间质细胞。
应当理解，本发明延伸至其任何核酸或肽或变体、衍生物或类似物，其基本上包含本文所述序列中的任何序列的氨基酸或核酸序列，包括变体或其片段。术语“实质上(substantially)氨基酸/核苷酸/肽序列”，“变体”和“片段”可以是与任何一种序列的氨基酸/核苷酸/肽序列具有至少40％序列同一性的序列。本文所述的序列，例如与鉴定为SEQID Nos:1-75等的序列具有40％的同一性。
也可以设想氨基酸/多核苷酸/多肽序列与上述任何序列的序列同一性大于65％，更优选大于70％，甚至更优选大于75％，更优选大于80％。优选地，氨基酸/核苷酸/多肽序列与本文提及的任何序列具有至少85％的同一性，更优选地至少90％的同一性，甚至更优选地至少92％的同一性，甚至更优选地至少95％的同一性，甚至更优选地至少97％的同一性，甚至更优选地至少98％的同一性，最优选地与本文提及的任何序列有至少99％的同一性。
本领域技术人员将了解如何计算两个氨基酸/多核苷酸/多肽序列之间的百分比同一性。为了计算两个氨基酸/多核苷酸/多肽序列之间的同一性百分比，必须首先制备两个序列的比对，然后计算序列同一性值。两个序列的同一性百分比可以取不同的值，具体取决于：-(i)用于比对序列的方法，例如，ClustalW、BLAST、FASTA、Smith-Waterman(在不同程序中实现)，或来自3D的结构比对比较；(ii)比对方法使用的参数，例如局部比对与全局比对，使用的对得分矩阵(例如BLOSUM62、PAM250、Gonnet等)和空位罚分(gap-penalty)，例如函数形式和常数。
在进行了比对之后，有许多不同的方法来计算两个序列之间的百分比同一性。例如，可以将身份数除以：(i)最短序列的长度；(ii)对齐长度；(iii)序列的平均长度；(iv)非空位位置的数量；或(v)不包括突出部分(overhangs)的等效位置(equivalencedpositions)的数量。此外，将认识到，百分比同一性也强烈依赖于长度。因此，一对序列越短，人们可能期望偶然出现的序列同一性就越高。
因此，可以理解的是，蛋白质或DNA序列的精确比对是一个复杂的过程。流行的多重比对程序ClustalW(Thompson et al.,1994,Nucleic Acids Research,22,4673-4680；Thompson et al.,1997,Nucleic Acids Research,24,4876-4882)是根据本发明产生蛋白质或DNA多重比对的优选方式。ClustalW的合适参数如下：DNA比对：空位开放罚分(GapOpen Penalty)＝15.0，空位扩展罚分(Gap Extension Penalty)＝6.66，矩阵＝同一性。对于蛋白质比对：空位开放罚分＝10.0，空位扩展罚分＝0.2，矩阵＝Gonnet。对于DNA和蛋白质比对：ENDGAP＝-1，GAPDIST＝4。本领域技术人员将意识到，可能需要改变这些和其他参数以实现最佳序列比对。
优选地，然后，两个氨基酸/多核苷酸/多肽序列之间的百分比同一性的计算可以根据(N/T)*100这样的比对来计算，其中N是序列共享相同残基的位置的数量，T是包括空位和包括或不包括突出部分的比较位置的总数。优选地，计算中包括突出部分。因此，用于计算两个序列之间的百分比同一性的最优选方法包括(i)使用ClustalW程序使用合适的一组参数准备序列比对，例如，如上所述；以及(ii)将N和T的值插入以下公式：-序列同一性＝(N/T)*100。
本领域技术人员熟知识别相似序列的其他替代方法。例如，基本相似的核苷酸序列将由在严格条件下与DNA序列或其互补物杂交的序列编码。通过严格的条件，本发明人指的是在约45℃下在3x氯化钠/柠檬酸钠(SSC)中与过滤结合的DNA或RNA杂交，然后在约20-65℃下在0.2x SSC/0.1％SDS中至少洗涤一次。或者，基本上类似的多肽可以与例如SEQ IDNos:1至75中所示的氨基酸序列的序列相差至少1个但少于5、10、20、50或100个氨基酸。
由于遗传密码的退化，很明显，本文所述的任何核酸序列都可以在基本上不影响由此编码的蛋白质序列的情况下改变或改变，以提供其功能变体。合适的核苷酸变体是那些具有通过替换编码序列中相同氨基酸的不同密码子而改变的序列，从而产生沉默(同义)变化的核苷酸变体。其他合适的变体是那些具有同源核苷酸序列但包含全部或部分序列的变体，这些变体通过将编码氨基酸的不同密码子替换为其替代氨基酸的具有类似生物物理财产的侧链来改变，从而产生保守变化。例如，小的非极性疏水性氨基酸包括甘氨酸、丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、脯氨酸和蛋氨酸。大的非极性疏水性氨基酸包括苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸。极性的中性氨基酸包括丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、天冬酰胺和谷氨酰胺。带正电的(碱性)氨基酸包括赖氨酸、精氨酸和组氨酸。带负电的(酸性)氨基酸包括天冬氨酸和谷氨酸。因此，可以理解哪些氨基酸可以用具有类似生物物理特性的氨基酸替代，熟练的技术人员会知道编码这些氨基酸的核苷酸序列。
本文所述的所有特征(包括任何附带的权利要求、摘要和附图)和/或如此公开的任何方法或过程的所有步骤可以以任何组合与上述任何方面组合，但至少一些这样的特征和/或步骤是相互排斥的组合除外。
为了更好地理解本发明并显示如何将其实施例生效，现在将通过示例性方式参考附图，其中：-
图1A提供了用于刺激许多小鼠品系中的免疫反应的各种ZIP12免疫原的总结以及这些小鼠对免疫原的反应，通过ELISA和流式细胞术测量并在图1B中以图形方式显示。
图2显示了本发明人开发的抗体的初始FLIPR筛选，证明许多抗体表现出ZIP12抑制活性。数据计算为最大荧光信号-添加Zn之前30秒(最小信号)和添加Zn+测试剂之后5分钟(最大信号)采集的最小荧光信号。
图3显示在初始筛选中鉴定的四种最有希望的(promising)ZIP12抗体在FLIPR试验中表现出对锌摄取的剂量依赖性抑制。抗体19220用作阴性对照。抗体批次19213和19214对应于前导抗体杂交瘤63A11(19214)和51B12(19213)。
图4显示了图3对63A11的放大剂量反应图。
图5显示了51B12和63A11抗体的VH序列之间的比对，显示了高度的序列同源性，包括CDRH3区域的100％序列同一性。图中还显示了由比对产生的共有序列。
图6显示了63A11谱系：基于ELISA的反应性筛选，并显示亲本抗体以及人源化的重链和轻链表显示抗ZIP12活性并且不与ZIP4反应。
图7显示了基于63A11谱系流式细胞术的反应性筛选，并显示亲本抗体以及人源化的重链和轻链显示抗ZIP12活性并且不与ZIP4反应。
图8显示了63A11谱系抗体的特性总结。
图9显示了51B12谱系：基于ELISA的反应性筛选，并显示亲本抗体以及人源化的重链和轻链显示抗ZIP12活性并且不与ZIP4反应。
图10显示了51B12谱系抗体的特性总结。
图11显示了63A11的分子相互作用分析数据(biacore data)。
图12显示了51B12的分子相互作用分析数据。
图13是显示本发明的抗ZIP12抗体的四个实施方案的序列的表。
图14显示了89G11、38F02、51B12和63A11的重链序列(a)和轻链序列(b)之间的比对和共有序列，所有这些都是本发明的实施方案。多数序列(SEQ ID No:69)中表示为X的氨基酸序列可以包括任何氨基酸序列或在89G11、38F02、51B12和63A11的序列的相同位置表示的氨基酸序列之一。
图15显示了89G11、38F02、51B12和63A11的重链可变序列之间的比对和共有序列，所有这些都构成了本发明的一部分。多数序列(SEQ ID No:70)中表示为X的氨基酸序列可以包括任何氨基酸序列或在89G11、38F02、51B12和63A11的序列的相同位置表示的氨基酸。
图16显示了51B12和63A11的重链可变序列之间的比对和共有序列，所有这些都构成了本发明的一部分。多数序列(SEQ ID No:71)中表示为X的氨基酸序列可以包括任何氨基酸序列或在51B12和63A11序列的相同位置表示的氨基酸。
图17显示了89G11和38F02的重链可变序列之间的比对和共有序列，所有这些都构成了本发明的一部分。多数序列(SEQ ID No:72)中表示为X的氨基酸序列可以包括任何氨基酸序列或在89G11和38F02的序列的相同位置表示的氨基酸。
图18显示了89G11、38F02、51B12和63A11的轻链可变序列之间的比对和共有序列，所有这些都构成了本发明的一部分。多数序列(SEQ ID No:73)中表示为X的氨基酸序列可以包括任何氨基酸序列或在89G11、38F02、51B12和63A11的序列的相同位置表示的氨基酸。
图19显示了38F02、51B12和63A11的轻链可变序列之间的比对和共有序列，所有这些都构成了本发明的一部分。多数序列(SEQ ID No:74)中表示为X的氨基酸序列可以包括任何氨基酸序列或在38F02、51B12和63A11的序列的相同位置表示的氨基酸。
图20显示，在1.25μM和500μM锌离子的FLIPR试验中，亲本抗体显示出对锌摄取的剂量依赖性抑制。
图21A和图21B显示，人源化抗体(63A11和51B12)在FLIPR试验中表现出对锌摄取的剂量依赖性抑制。
实施例
ZIP12与肺动脉高压的发病机制有关，ZIP12的表达增加与这种情况有关。因此，本发明人着手开发能够特异性结合并抑制ZIP12功能的抗体，以改善肺动脉高压的治疗和诊断。
实施例1–ZIP12抗体的产生
抗人ZIP12 mAbs由用人ZIP12-ECD-Fc、人ZIP11-DNA、人ZIP12-VLPs或人ZIP12ModiVacc(MV)稳定细胞系免疫的小鼠(BALB/c、C3H、AIC或C57BL/6)产生(图1A)。小鼠用抗原免疫，并在大约一个月的间隔内进行了1-3次增殖。
基于ELISA的血清对hZIP12-ECD-Fc和hZIP12-ECD-GST(涂布5μg/ml)以及相应的无关对照蛋白人IgG和hZIP4-ECD-GST(分别涂布1和5μg/ml)进行反应性筛选。在VLP免疫小鼠的第37天，从免疫血液中提取的血清也在ELISA中针对hZIP12-VLPs和无效颗粒(涂布2U/孔)进行筛选。血清样品被连续稀释(3倍稀释，从1:100或1:1,000稀释开始，各稀释7次)，用抗小鼠IgG-HRP二抗(1:5,000)检测。使用抗ZIP12(1:5,000)、抗ZIP4(1:2,500)并以抗兔IgG-HRP(1:5,000)或抗人IgG-HRP(1:5,000)检测，确认涂层正确。基于流式细胞仪的血清对MV(-)-hZIP12-3A11、MV(-)亲本、MV(+)亲本和CHO-k1-huZIP4-HA-3C4进行反应性筛选。用MV(+)-hZIP12稳定细胞系免疫的小鼠血清也在MV(+)-hZIP12-1E8、MV(+)-hZIP12-2G3和MV(+)-hZIP12-4D6稳定细胞系上进行流式细胞仪筛选。血清样本被连续稀释(3倍稀释，从1:100的稀释度开始，每次稀释7次)，并用抗小鼠IgG-PE二级抗体(1:300)检测。
小鼠品系和数量、免疫原和血清滴度的概述如图1A所示，以EC50值表示(指产生半最大信号的血清稀释度)。NA指不适用；由于响应过低，无法计算EC50值。选择4只小鼠用于脾细胞和骨髓的采集和储存。
使用ClonaCell-HY杂交瘤克隆试剂盒(StemCell Technologies,Vancouver,BC)或使用常规方法产生并克隆杂交瘤。在常规方法中，在PEG(Sigma-Aldrich,St.Louis,MO)的存在下，通过使用Modifuse技术进行电融合，将来自免疫动物脾脏的B细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合。在过夜恢复后，将融合的细胞以有限稀释液(limiting dilution)的形式接种在96孔板中，并进行次黄嘌呤-氨基蝶呤胸苷选择。通过ELISA和流式细胞术检测杂交瘤培养上清液中是否存在抗ZIP12抗体(图1B)。从来源于用人ZIP12病毒样颗粒免疫的BALB/c和C3H小鼠的杂交瘤，以及从用融合到人Fc的人ZIP12-细胞外结构域免疫的BALB/c、AIP和C3H鼠的杂交瘤中观察免疫血清活性。
实施例2-杂交瘤可变基因测序
从TRIzol样品中分离出RNA。生成cDNA并根据标准程序完成V区的扩增。使用MQR标准程序或通过使用简并正向引物对VH-和VL-基因片段进行PCR扩增。将扩增的V基因进行凝胶纯化，并使用T4连接酶将其克隆到人IgG1/IgK载体中进行DNA测序。将配体混合物(～25ng载体)转化为具有化学感受性的E.coli XL1-Blue细胞。从含有克隆的全长插入物中分离出Miniprep DNA。使用标准方法对分离的DNA(每个杂交瘤最多10个VH和VL片段)进行测序和分析。将含有正确基因的质粒以甘油储备。
实施例3-嵌合抗体的产生
使用用于克隆到哺乳动物表达载体中的限制性位点以及人信号序列来制备编码嵌合抗体的DNA表达构建体。引入BsiWI和BsmI限制性位点以构建包含信号序列的可变结构域，以便克隆到包含人γ1或人kappa恒定区(constant regions)的哺乳动物表达载体中。
使用DNA测序确认了正确的克隆。使用FectoPro将质粒DNA转染到HEK293细胞中。约5天后采集上清液。在培养上清液中测量抗体浓度，使用Octet或ELISA计算产率。通过蛋白A(Mab-Select-SuRe)树脂纯化抗体，并使用Nanodrop测量抗体浓度。使用还原性SDS-PAGE确认抗体的完整性和纯度。使用ELISA和FACS测定抗体靶向反应性。
实施例4–Zn2+FLIPR试验中的抗体活性
诱导型ZIP12细胞系的产生：通过将ZIP12与FLAG标签融合转染HEK293或CHO细胞来产生诱导型ZIP12细胞系。使用PCR和蛋白质印迹(Western blotting)来确认ZIP12的表达。在随后的试验中，在筛选之前用四环素诱导细胞。
染料加载程序：在细胞诱导和接种后，制备抗体用于预孵育。在生长培养基中将加入终浓度为0.1％的BSA和浓度为1μg/ml的四环素。以所需浓度添加抗体，并在37℃下孵育4h或24h。约24h后除去培养基。在反应孔中加入EBSS、丙磺舒和Fluozin-3并在黑暗中孵育1h。除去染料溶液，加入不含Ca2+的EBSS+2.5mM丙磺酸钠并转移到FLIPR中。
FLIPR检测程序：每孔加入10μL的测定缓冲液(无Ca2+的EBSS+2.5mM丙磺舒)。每孔加入20μL的测定缓冲液，并加入2倍最终所需浓度的ZnSO4。荧光监测10分钟。抑制率的计算方法是最大荧光信号-最小荧光信号，取自加入Zn前30s(最小信号)和加入Zn+测试剂后5min(最大信号)。
实施例5-ZIP12抗体的人源化
(i)人源化51B12和63A11变异体的克隆
编码人源化抗体变体的DNA表达构建体是通过构建重叠的寡核苷酸从头制备的(prepared de novo)，寡核苷酸包括用于克隆到哺乳动物表达载体中的限制性位点以及人类信号序列。引入Hindll和Spel限制性位点来构建含有信号序列的VH结构域，以便克隆到含有人类γ1恒定区的哺乳动物表达载体中。引入Hindll和BsiWI限制性位点以构建含有信号序列的VL结构域，以便克隆到含有人kappa恒定区的哺乳动物表达载体中。
(ii)重组51B12和63A11抗体的表达(包括抗体定量)
将分别编码重链和轻链的表达质粒瞬时共转染到HEK 2936E细胞中，并小规模表达以产生抗体。抗体通过ELISA进行定量。ELISA板用1mg/ml的抗人IgG(Sigma I3382)包被，并用封闭溶液(4％BSA,Tris缓冲盐水)封闭。加入不同稀释度的组织培养上清液，并将平板在室温下孵育1h。将已知标准抗体的稀释液也加入到平板中。用TBST洗板，并通过在封闭溶液中加入1/1000稀释度的过氧化物标记的抗人kappa轻链抗体(Sigma A7164)来检测结合情况(binding)。将平板在室温下孵育1h后，用TBST清洗。加入OPD底物(substrate)(SigmaP9187)对平板进行显色，并通过添加2M H2S04停止显色。在490nm处测量吸光度，并使用已知标准稀释液的数据绘制标准曲线。使用标准曲线来估计组织培养上清液中抗体的浓度。更大规模的抗体使用蛋白A进行纯化，并使用Nanodrop(Thermo Scientific)测量浓度。
实施例6–ELISA实验显示人源化63A11与重组人ZIP12蛋白的结合
测试人源化63A11抗体与人ZIP12细胞外结构域(表达为GST融合蛋白)的结合。将人ZIP12胞外结构域涂布到ELISA板上，并使用BSA封闭板以减少非特异性结合。将浓度范围为10ug/ml至0.1ug/ml的人源化抗体添加到人ZIP12包被的ELISA板中。使用抗人IgG HRP结合的二级抗体检测任何结合的人源性抗体。加入HRP底物(TMB)以建立ELISA。这表明63A11人源化抗体在ELISA测定中与重组人ZIP12结合。结果如图6和图8所示。
实施例7-人源化抗体与ZIP12转染的细胞结合
通过FACS测定人源化63A11与ZIP12转染的细胞的结合情况。
表达人ZIP12的转染细胞用63A11的人源化变体H0L0、H0L1、H1L0、H1L1、H2L0、H2L1、H3L0和H3L1以不同浓度在室温下染色20min。然后用FACS缓冲液(PBS+0.5％BSA+0.1％叠氮化钠)洗涤细胞以去除未结合的抗体。将细胞与二级PE标记的抗人IgG抗体在4℃的黑暗中孵育1h，然后用FACS缓冲液洗涤以去除未结合的抗体。通过FACS分析细胞，并测量平均荧光强度(MFI)值以确定结合情况。
结果显示，所有测试的抗体以剂量依赖的方式与表达人ZIP12的转染细胞结合。结果如图7和图8所示。
实施例8-ELISA实验，显示人源化51B12抗体与重组人ZIP12蛋白的结合
测试人源化51B12抗体与人ZIP12细胞外结构域的结合(表达为GST融合)。将人ZIP12胞外结构域涂布到ELISA板上，并使用BSA封闭板以减少非特异性结合。将浓度范围为10ug/ml至0.1ug/ml的人源化抗体添加到人ZIP12包被的ELISA板中。使用抗人IgG HRP结合的二级抗体检测任何结合的人源性抗体。加入HRP底物(TMB)以建立ELISA。这表明51B12人源化抗体在ELISA测定中与重组人ZIP12结合。结果如图9所示。
实施例9-通过FACS测定人源化51B12与ZIP12转染的细胞的结合
表达人ZIP12的转染细胞用51B12的人源化变体H0L0、H0L1、H0L2和H0L3以不同浓度在室温下染色20min。然后用FACS缓冲液(PBS+0.5％BSA+0.1％叠氮化钠)洗涤细胞以去除未结合的抗体。将细胞与二级PE标记的抗人IgG抗体在室温下孵育15min，然后用FACS缓冲液洗涤以除去未结合的抗体。通过FACS分析细胞，并测量平均荧光强度(MFI)值以确定结合情况。结果显示，所有测试的抗体以剂量依赖的方式与表达人ZIP12的转染细胞结合。结果如图10所示。
实施例10-抗ZIP1263A11人源化构建体的BIAcore分析
对63A11克隆进行单一浓度的hZIP12-ECD-GST(100nM)测试。该阶段证实了抗体捕获水平的有效性，并且我们可以在继续进行检测开发之前观察hZIP12-ECD-GST融合蛋白的结合情况。结果还证实，再生条件(即通过注射10mM甘氨酸pH1.5和10mM NaOH的溶液将hZIP12-ECD-GST从表面完全去除)是合适的，完全恢复到了基线。
蛋白质A通过一级胺偶联(primary amine coupling)固定在S系列蛋白A传感器芯片(Cyvita)上，然后使用这该表面来捕获抗体分子。所有测量均在25℃下进行，隔室温度保持在10℃，以帮助保持试剂的稳定性。数据采集频率为10Hz。在25℃下进行两次单循环实验。在运行缓冲液(1xHBS-EP+pH7.4)中，huZIP12-ECD-GST和huZIP4-ECD-GST的2倍稀释浓度系列，范围从6.25nM到400nM的63A11克隆，以30μl/min的速度注入传感器表面，63A11克隆的接触时间120s，解离时间2100s。在两个循环之间，用10mM甘氨酸pH 1.5以50μl/min的速度注入60s，用10mM NaOH以50μl/min的速度注入60s，使传感器表面再生。使用BiacoreInsight Evaluation软件(版本3.0.11.15423Cytiva)，通过拟合1:1de结合模型，从参考和空白减去的传感图中计算结合率常数(ka)和解离率常数(kd)。就对人ZIP12的总体亲和力而言，两次实验都将63A11 H0L1鉴定为最佳抗体。该实验产生的数据如图11所示。
实施例11-抗ZIP1251B12人源化构建体的BIAcore分析
蛋白质A通过一级胺偶联固定在S系列蛋白A传感器芯片(Cyvita)上，然后使用该表面捕获抗体分子。所有测量均在25℃下进行，隔室温度保持在10℃，以帮助保持试剂的稳定性。数据采集频率为10Hz。在25℃下进行两次单循环实验。在运行缓冲液(1xHBS-EP+pH7.4)中，huZIP12-ECD-GST和huZIP4-ECD-GST的2倍稀释浓度系列，范围从12.5nM至800nM的51B12克隆，以30μl/min的速度在传感器表面上注射，51B12克隆的接触时间为120s，解离时间为2520s。在两个循环之间，用10mM甘氨酸pH 1.5以50μl/min的速度注入60s，用10mMNaOH以50μl/min的速度注入60s，使传感器表面再生。使用Biacore Insight Evaluation软件(版本3.0.11.15423Cytiva)，通过拟合1:1结合模型，从参考和空白减去的传感图中计算结合率常数(ka)和解离率常数(kd)。就对人ZIP12的总体亲和力而言，两次试验都将51B12H0L3鉴定为最佳抗体。该实验产生的数据如图13所示。
讨论与结论
本发明人已经确定ZIP12蛋白的胞外区或结构域是其功能的关键，因此已经开发出能够结合并抑制ZIP12功能的抗体。例如，如图2和图3所示，发明人已经开发了大量抗体，他们已经证明这些抗体专门靶向细胞外结构域并抑制ZIP12功能。此外，如图6、7和9所示，本发明人已经证明，抗体不仅抑制ZIP12的功能，而且不会靶向ZIP4蛋白。
本发明人先前已经证明ZIP12是用于治疗缺氧相关病症，特别是肺动脉高压的潜在疾病机制的新的治疗靶点。因此，本发明开发的抗体本身具有作为治疗剂的效用，并且可以用于治疗、改善或预防缺氧诱导的或缺氧相关的病症，特别是肺动脉高压。
实施例12-Zn2+FLIPR测定中的抗体活性(2)
方法
接种细胞并用1μg/ml四环素诱导ZIP12表达。在细胞诱导和接种4-6h后，制备抗体用于预孵育。诱导的对照组没有加入四环素。向已经含有25μl/孔培养基的细胞生长板中加入25μl/孔的抗体。BSA的终浓度为0.1％，四环素的终浓度为1μg/ml，抗体的终浓度为1:10稀释液。在加入细胞板之前，在单独的培养基中设置抗体的系列稀释液。抗体和细胞在37℃下一起孵育1-72h，然后在抗体预孵育后除去细胞培养基。对于384孔板，根据制造商的说明，加入10μL/孔EBSS+2.5mM丙磺酸钠+5μM FluoZin-3。在黑暗中孵育1h后，除去染料溶液，加入10μL/孔不含Ca2+的EBSS+2.5mM丙磺酸钠，并对平板进行分析。
在时间0h，向每个孔中加入10μL的检测缓冲液。1min后，向每个孔中加入20μL最终所需浓度的两倍的ZnSO4的分析缓冲液。荧光监测10min。数据的计算方法是：最大荧光信号-最小荧光信号，取自加入Zn前30s(最小信号)和加入Zn+测试剂后5min(最大信号)。抑制率的计算方法是＝(1-(测试孔-平板低对照)/(平板高对照-平板低控制))*100。还计算了相对于最大抑制的抑制率。
结果
图20显示，在初始筛选中鉴定的两种有希望的ZIP12抗体在FLIPR测定中显示出对锌摄取的剂量依赖性抑制。使用具有相同Fc区的不相关的人抗体作为阴性对照。
图21A和21B显示了来源于初始筛选中鉴定的两种有前景的ZIP12抗体的人源化抗体(即63A11和51B12)。这些在FLIPR试验中显示了锌摄取的剂量依赖性抑制。
<110> IP2IPO创新有限公司
<120> ZIP12
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<150> 2015115.5
<151> 2020-09-24
<160> 75
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<213> Artificial Sequence
<220>
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<400> 8
Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser
1 5
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<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 63A11 CDR-L3
<400> 9
Gln His Ser Arg Glu Leu Pro Leu Thr
1 5
<210> 10
<211> 218
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
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<400> 10
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser
20 25 30
Gly Tyr Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg
85 90 95
Glu Leu Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg
100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
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<213> Artificial Sequence
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<220>
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1 5 10 15
Gly
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<213> Artificial Sequence
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
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<400> 14
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Arg Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Gly Thr Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Thr Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Trp Thr Asn Leu Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr
210 215 220
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
225 230 235 240
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
245 250 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
260 265 270
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
275 280 285
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
290 295 300
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
305 310 315 320
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
325 330 335
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340 345 350
Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
355 360 365
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
370 375 380
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
385 390 395 400
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
405 410 415
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
420 425 430
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
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<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
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<400> 15
Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser Gly Tyr Ser Tyr Met His
1 5 10 15
<210> 16
<211> 7
<212> PRT
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<220>
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<400> 16
Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser
1 5
<210> 17
<211> 9
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<400> 17
Gln His Ser Arg Glu Val Pro Tyr Thr
1 5
<210> 18
<211> 218
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 51B12 LC
<400> 18
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser
20 25 30
Gly Tyr Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Phe Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg
85 90 95
Glu Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 19
<211> 647
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 19
Met Ala Ser Leu Val Ser Leu Glu Leu Gly Leu Leu Leu Ala Val Leu
1 5 10 15
Val Val Thr Ala Thr Ala Ser Pro Pro Ala Gly Leu Leu Ser Leu Leu
20 25 30
Thr Ser Gly Gln Gly Ala Leu Asp Gln Glu Ala Leu Gly Gly Leu Leu
35 40 45
Asn Thr Leu Ala Asp Arg Val His Cys Ala Asn Gly Pro Cys Gly Lys
50 55 60
Cys Leu Ser Val Glu Asp Ala Leu Gly Leu Gly Glu Pro Glu Gly Ser
65 70 75 80
Gly Leu Pro Pro Gly Pro Val Leu Glu Ala Arg Tyr Val Ala Arg Leu
85 90 95
Ser Ala Ala Ala Val Leu Tyr Leu Ser Asn Pro Glu Gly Thr Cys Glu
100 105 110
Asp Ala Arg Ala Gly Leu Trp Ala Ser His Ala Asp His Leu Leu Ala
115 120 125
Leu Leu Glu Ser Pro Lys Ala Leu Thr Pro Gly Leu Ser Trp Leu Leu
130 135 140
Gln Arg Met Gln Ala Arg Ala Ala Gly Gln Thr Pro Lys Thr Ala Cys
145 150 155 160
Val Asp Ile Pro Gln Leu Leu Glu Glu Ala Val Gly Ala Gly Ala Pro
165 170 175
Gly Ser Ala Gly Gly Val Leu Ala Ala Leu Leu Asp His Val Arg Ser
180 185 190
Gly Ser Cys Phe His Ala Leu Pro Ser Pro Gln Tyr Phe Val Asp Phe
195 200 205
Val Phe Gln Gln His Ser Ser Glu Val Pro Met Thr Leu Ala Glu Leu
210 215 220
Ser Ala Leu Met Gln Arg Leu Gly Val Gly Arg Glu Ala His Ser Asp
225 230 235 240
His Ser His Arg His Arg Gly Ala Ser Ser Arg Asp Pro Val Pro Leu
245 250 255
Ile Ser Ser Ser Asn Ser Ser Ser Val Trp Asp Thr Val Cys Leu Ser
260 265 270
Ala Arg Asp Val Met Ala Ala Tyr Gly Leu Ser Glu Gln Ala Gly Val
275 280 285
Thr Pro Glu Ala Trp Ala Gln Leu Ser Pro Ala Leu Leu Gln Gln Gln
290 295 300
Leu Ser Gly Ala Cys Thr Ser Gln Ser Arg Pro Pro Val Gln Asp Gln
305 310 315 320
Leu Ser Gln Ser Glu Arg Tyr Leu Tyr Gly Ser Leu Ala Thr Leu Leu
325 330 335
Ile Cys Leu Cys Ala Val Phe Gly Leu Leu Leu Leu Thr Cys Thr Gly
340 345 350
Cys Arg Gly Val Thr His Tyr Ile Leu Gln Thr Phe Leu Ser Leu Ala
355 360 365
Val Gly Ala Leu Thr Gly Asp Ala Val Leu His Leu Thr Pro Lys Val
370 375 380
Leu Gly Leu His Thr His Ser Glu Glu Gly Leu Ser Pro Gln Pro Thr
385 390 395 400
Trp Arg Leu Leu Ala Met Leu Ala Gly Leu Tyr Ala Phe Phe Leu Phe
405 410 415
Glu Asn Leu Phe Asn Leu Leu Leu Pro Arg Asp Pro Glu Asp Leu Glu
420 425 430
Asp Gly Pro Cys Gly His Ser Ser His Ser His Gly Gly His Ser His
435 440 445
Gly Val Ser Leu Gln Leu Ala Pro Ser Glu Leu Arg Gln Pro Lys Pro
450 455 460
Pro His Glu Gly Ser Arg Ala Asp Leu Val Ala Glu Glu Ser Pro Glu
465 470 475 480
Leu Leu Asn Pro Glu Pro Arg Arg Leu Ser Pro Glu Leu Arg Leu Leu
485 490 495
Pro Tyr Met Ile Thr Leu Gly Asp Ala Val His Asn Phe Ala Asp Gly
500 505 510
Leu Ala Val Gly Ala Ala Phe Ala Ser Ser Trp Lys Thr Gly Leu Ala
515 520 525
Thr Ser Leu Ala Val Phe Cys His Glu Leu Pro His Glu Leu Gly Asp
530 535 540
Phe Ala Ala Leu Leu His Ala Gly Leu Ser Val Arg Gln Ala Leu Leu
545 550 555 560
Leu Asn Leu Ala Ser Ala Leu Thr Ala Phe Ala Gly Leu Tyr Val Ala
565 570 575
Leu Ala Val Gly Val Ser Glu Glu Ser Glu Ala Trp Ile Leu Ala Val
580 585 590
Ala Thr Gly Leu Phe Leu Tyr Val Ala Leu Cys Asp Met Leu Pro Ala
595 600 605
Met Leu Lys Val Arg Asp Pro Arg Pro Trp Leu Leu Phe Leu Leu His
610 615 620
Asn Val Gly Leu Leu Gly Gly Trp Thr Val Leu Leu Leu Leu Ser Leu
625 630 635 640
Tyr Glu Asp Asp Ile Thr Phe
645
<210> 20
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 38F02 CDR-H1
<400> 20
Asp Tyr Ala Met His
1 5
<210> 21
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 38F02 CDR-H2
<400> 21
Val Ile Arg Thr Asn Tyr Gly Gly Ala Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 22
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 38F02 CDR-H3
<400> 22
Gly Val Gly Arg Ala Trp Phe Ala Tyr
1 5
<210> 23
<211> 448
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 38F02 HC
<400> 23
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Val
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Lys Gln Ser His Ala Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Val Ile Arg Thr Asn Tyr Gly Gly Ala Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Met Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ala Arg Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Ile Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Val Gly Arg Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr
210 215 220
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
225 230 235 240
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
245 250 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
260 265 270
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
275 280 285
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
290 295 300
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
305 310 315 320
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
325 330 335
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
340 345 350
Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
355 360 365
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
370 375 380
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
385 390 395 400
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
405 410 415
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
420 425 430
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 24
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 38F02 CDR-L1
<400> 24
Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp Gly Asp Ser Tyr Met Asn
1 5 10 15
<210> 25
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 38F02 CDR-L2
<400> 25
Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser
1 5
<210> 26
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 38F02 CDR-L3
<400> 26
Gln Gln Ser Tyr Asp Asp Pro Tyr Thr
1 5
<210> 27
<211> 218
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 38F02 LC
<400> 27
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp
20 25 30
Gly Asp Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr
85 90 95
Asp Asp Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 28
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 89G11 CDR-H1
<400> 28
Asp Tyr Glu Met Phe
1 5
<210> 29
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 89G11 CDR-H2
<400> 29
Val Ile Asp Pro Glu Thr Gly Gly Thr Ala Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 30
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 89G11 CDR-H3
<400> 30
Gly Tyr Gly Asp Tyr Pro Phe Ala Tyr
1 5
<210> 31
<211> 448
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 89G11 HC
<400> 31
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Glu Met Phe Trp Val Lys Gln Thr Pro Val Tyr Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Val Ile Asp Pro Glu Thr Gly Gly Thr Ala Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Gly Tyr Asp Gly Tyr Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr
210 215 220
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
225 230 235 240
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
245 250 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
260 265 270
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
275 280 285
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
290 295 300
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
305 310 315 320
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
325 330 335
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
340 345 350
Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
355 360 365
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
370 375 380
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
385 390 395 400
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
405 410 415
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
420 425 430
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 32
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 89G11 CDR-L1
<400> 32
Lys Ser Ser Gln Leu Tyr Ser Ser Asn Gln Lys Asn Phe Leu Ala
1 5 10 15
<210> 33
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 89G11 CDR-L2
<400> 33
Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser
1 5
<210> 34
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 89G11 CDR-L3
<400> 34
Leu Gln Tyr Leu Ser Ser Tyr Thr
1 5
<210> 35
<211> 219
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 89G11 LC
<400> 35
Asn Ile Met Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Ala Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Gln Lys Asn Phe Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Arg Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln
85 90 95
Tyr Leu Ser Ser Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Arg Leu Asp Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 36
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CDR-H1 consensus sequence. X can be any amino acid. Preferably, X
is H or Y.
<220>
<221> misc_feature
<222> (2)..(2)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<400> 36
Asp Xaa Gly Met His
1 5
<210> 37
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CDR-H2 consensus sequence; X1, X2, X3 and X4 may be any amino
acid. Preferably, X1 may be S or G. Preferably, X2 may be S or T.
Preferably, X3 may be A or T, and X4 may be F or Y.
<220>
<221> misc_feature
<222> (6)..(8)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<220>
<221> misc_feature
<222> (10)..(10)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<400> 37
Tyr Ile Ser Ser Gly Xaa Xaa Xaa Ile Xaa Tyr Ala Asp Thr Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 38
<211> 118
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> VH consensus sequence. X1 to X7 can be any amino acid.
Preferably, X1 may be Y or H. Preferably, X2 may be G or S.
Preferably, X3 may be T or S, and X4 may be T or A, X5 may be Y
or F. Preferably, X6 may be I or M. Preferably, X7 may be Y or F.
<220>
<221> misc_feature
<222> (32)..(32)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<220>
<221> misc_feature
<222> (55)..(57)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<220>
<221> misc_feature
<222> (59)..(59)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<220>
<221> misc_feature
<222> (70)..(70)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<220>
<221> misc_feature
<222> (95)..(95)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<400> 38
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Arg Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Xaa
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Xaa Xaa Xaa Ile Xaa Tyr Ala Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Xaa Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Thr Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Xaa Cys
85 90 95
Ala Arg Trp Thr Asn Leu Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 39
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CDR-L3 consensus sequence. X1 and X2 may be any amino acid.
Preferably, X1 may be L or V. Preferably, X2 may be L or Y.
<220>
<221> misc_feature
<222> (6)..(6)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<220>
<221> misc_feature
<222> (8)..(8)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<400> 39
Gln His Ser Arg Glu Xaa Pro Xaa Thr
1 5
<210> 40
<211> 111
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> VL consensus sequence. X1 and X2 may be any amino acid.
Preferably, X1 may be L or V. Preferably, X2 may be L or Y, X3
may be G or A.
<220>
<221> misc_feature
<222> (98)..(98)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<220>
<221> misc_feature
<222> (100)..(100)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<220>
<221> misc_feature
<222> (104)..(104)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<400> 40
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser
20 25 30
Gly Tyr Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg
85 90 95
Glu Xaa Pro Xaa Thr Phe Gly Xaa Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105 110
<210> 41
<211> 118
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 63A11 VH
<400> 41
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Arg Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp His
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Ser Ser Ala Ile Phe Tyr Ala Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Met Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Thr Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Trp Thr Asn Leu Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 42
<211> 111
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 63A11 VL
<400> 42
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser
20 25 30
Gly Tyr Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg
85 90 95
Glu Leu Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105 110
<210> 43
<211> 118
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 51B12 VH
<400> 43
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Arg Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Gly Thr Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Thr Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Trp Thr Asn Leu Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 44
<211> 111
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 51B12 VL
<400> 44
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser
20 25 30
Gly Tyr Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Phe Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg
85 90 95
Glu Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 45
<211> 118
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 38F02 VH
<400> 45
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Val
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Lys Gln Ser His Ala Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Val Ile Arg Thr Asn Tyr Gly Gly Ala Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Met Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ala Arg Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Ile Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Val Gly Arg Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 46
<211> 111
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 38F02 VL
<400> 46
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp
20 25 30
Gly Asp Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr
85 90 95
Asp Asp Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 47
<211> 118
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 89G11 VH
<400> 47
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Glu Met Phe Trp Val Lys Gln Thr Pro Val Tyr Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Val Ile Asp Pro Glu Thr Gly Gly Thr Ala Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Gly Tyr Asp Gly Tyr Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 48
<211> 112
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 89G11 VL
<400> 48
Asn Ile Met Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Ala Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Gln Lys Asn Phe Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Arg Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln
85 90 95
Tyr Leu Ser Ser Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Arg Leu Asp Ile Lys
100 105 110
<210> 49
<211> 448
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 63A11 HC
<400> 49
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp His
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Ser Ser Ala Ile Phe Tyr Ala Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Trp Thr Asn Leu Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr
210 215 220
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
225 230 235 240
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
245 250 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
260 265 270
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
275 280 285
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
290 295 300
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
305 310 315 320
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
325 330 335
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
340 345 350
Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
355 360 365
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
370 375 380
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
385 390 395 400
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
405 410 415
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
420 425 430
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 50
<211> 448
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 63A11 HC
<400> 50
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp His
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Ser Ser Ala Ile Phe Tyr Ala Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Trp Thr Asn Leu Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr
210 215 220
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
225 230 235 240
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
245 250 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
260 265 270
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
275 280 285
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
290 295 300
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
305 310 315 320
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
325 330 335
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
340 345 350
Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
355 360 365
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
370 375 380
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
385 390 395 400
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
405 410 415
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
420 425 430
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 51
<211> 448
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 63A11 HC
<400> 51
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp His
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Ser Ser Ala Ile Phe Tyr Ala Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Met Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Trp Thr Asn Leu Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr
210 215 220
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
225 230 235 240
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
245 250 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
260 265 270
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
275 280 285
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
290 295 300
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
305 310 315 320
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
325 330 335
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
340 345 350
Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
355 360 365
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
370 375 380
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
385 390 395 400
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
405 410 415
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
420 425 430
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 52
<211> 448
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 63A11 HC
<400> 52
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp His
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Ser Ser Ala Ile Phe Tyr Ala Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Met Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Trp Thr Asn Leu Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr
210 215 220
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
225 230 235 240
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
245 250 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
260 265 270
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
275 280 285
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
290 295 300
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
305 310 315 320
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
325 330 335
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
340 345 350
Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
355 360 365
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
370 375 380
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
385 390 395 400
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
405 410 415
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
420 425 430
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 53
<211> 218
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 63A11 LC
<400> 53
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser
20 25 30
Gly Tyr Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg
85 90 95
Glu Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190
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Gly Met His Trp Val Xaa Gln Ala Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Xaa
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Glu Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu
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Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser
20 25 30
Gly Tyr Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
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Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg
85 90 95
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100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu
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Xaa Val Gln Leu Xaa Xaa Ser Gly Xaa Xaa Leu Val Xaa Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Xaa Lys Leu Ser Cys Xaa Ala Ser Gly Xaa Thr Phe Xaa Asp Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Xaa Gln Ala Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Xaa
35 40 45
Xaa Xaa Ile Ser Ser Gly Xaa Gly Gly Ile Xaa Tyr Xaa Xaa Xaa Xaa
50 55 60
Lys Gly Xaa Xaa Thr Met Xaa Arg Asp Xaa Xaa Xaa Xaa Thr Xaa Xaa
65 70 75 80
Xaa Xaa Xaa Thr Ser Leu Xaa Ser Glu Asp Xaa Ala Met Tyr Tyr Cys
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Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
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Ser Arg Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Xaa
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Xaa Xaa Xaa Ile Xaa Tyr Ala Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Xaa Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Thr Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Xaa Cys
85 90 95
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Ser Val Thr Val Ser Ser
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Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Xaa
1 5 10 15
Ser Val Lys Xaa Ser Cys Lys Xaa Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Xaa Met Xaa Trp Val Lys Gln Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Val Ile Xaa Xaa Xaa Xaa Gly Gly Xaa Xaa Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Xaa Thr Xaa Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Xaa Xaa Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Xaa Tyr Tyr Cys
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100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ala
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Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Xaa Ala Ser Xaa Ser Val Ser Xaa Ser
20 25 30
Gly Tyr Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Xaa Ser Arg
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Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
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Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser
20 25 30
Gly Tyr Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
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Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg
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Glu Xaa Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
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<212> PRT
<213> Homo sapiens
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Met Pro Gly Cys Pro Cys Pro Gly Cys Gly Met Ala Gly Pro Arg Leu
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Ser Gln Pro Ala Leu Arg Ser Arg Gly Thr Ala Thr Ala Cys Arg Leu
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Leu Gln Gln Gln Gln Gln Leu Gly Leu Trp Val Ile Ala Gly Ile Leu
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Thr Phe Leu Ala Leu Glu Lys Met Phe Leu Asp Ser Lys Glu Glu Gly
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Ala Val Val Arg Ser Ile Lys Val Ser Gly Tyr Leu Asn Leu Leu Ala
210 215 220
Asn Thr Ile Asp Asn Phe Thr His Gly Leu Ala Val Ala Ala Ser Phe
225 230 235 240
Leu Val Ser Lys Lys Ile Gly Leu Leu Thr Thr Met Ala Ile Leu Leu
245 250 255
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260 265 270
Gly Phe Asp Arg Trp Ser Ala Ala Lys Leu Gln Leu Ser Thr Ala Leu
275 280 285
Gly Gly Leu Leu Gly Ala Gly Phe Ala Ile Cys Thr Gln Ser Pro Lys
290 295 300
Gly Val Val Gly Cys Ser Pro Ala Ala Glu Glu Thr Ala Ala Trp Val
305 310 315 320
Leu Pro Phe Thr Ser Gly Gly Phe Leu Tyr Ile Ala Leu Val Asn Val
325 330 335
Leu Pro Asp Leu Leu Glu Glu Glu Asp Pro Trp Arg Ser Leu Gln Gln
340 345 350
Leu Leu Leu Leu Cys Ala Gly Ile Val Val Met Val Leu Phe Ser Leu
355 360 365
Phe Val Asp
370

Claims (32)

1.一种特异性结合ZIP12的细胞外区域的抗体或其抗原结合片段。
2.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于：
其中，所述抗体或其抗体结合片段基本上不与人ZIP4和/或ZIP13结合。
3.根据权利要求1或2所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于：
其中，所述抗体或其抗原结合片段结合ZIP12的氨基酸位置1和202之间的区域，基本上如SEQ ID No:1所示。
4.根据权利要求1-3中任意一项所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于：
其中，所述抗体或抗原结合片段与包含或由基本上如SEQ ID No:2所示的序列或其变体或片段组成的序列中的表位结合。
5.根据权利要求1-4中任意一项中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于：
其中，所述抗体或其抗原结合片段与SEQ ID No:2中的一个或多个氨基酸或其片段或变体结合，
优选地，其中所述抗体或其抗原结合片段与SEQ ID No:2的氨基酸位置20和202之间、或(i)SEQ ID No:2的氨基酸位置20和104之间、或(ii)SEQ IDNo:2的氨基酸位156和202之间的一个或者多个氨基酸结合，
更优选地，其中抗体或其抗原结合片段与SEQ ID No:2中的任何5、10、15、20、25、30、35、40或45个氨基酸序列或其变体或片段结合。
6.根据权利要求1-5中任意一项所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于：
其中，所述抗体或其抗原结合片段是单克隆抗体或其抗原结合片段。
7.根据权利要求1-6中任意一项所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于：
其中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
(i)CDR-H1结构域，其包含或由基本上如SEQ ID No:36所示的序列或其变体或片段组成，其中X是任何氨基酸，任选地其中X是H或Y；
(ii)CDR-H2结构域，其包含或由基本上如SEQ ID No:37所示的序列或其变体或片段组成，其中X1、X2、X3和X4是任何氨基酸，任选地其中X1是S或G；X2是S或T；X3是A或T；和/或X4是F或Y；
(iii)CDR-H3结构域，其包含或由基本上如SEQ ID No:5所示的序列、或其变体或片段组成；
(iv)CDR-L1结构域，其包含或由基本上如SEQ ID No:7所示的序列、或其变体或片段组成；
(v)CDR-L2结构域，其包含或由基本上如SEQ ID No:8所示的序列、或其变体或片段组成，和/或
(v)CDR-L3结构域，其包含或由基本上如SEQ ID No:39所示的序列或其变体或片段组成，其中X1和X2是任何氨基酸，任选地其中X1是L或v；和/或X2是L或Y。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于：
其中，所述抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:3的CDR-H1结构域、包含SEQID No:4的CDR-H2结构域、包含SEQ ID No:5的CDR-ho3结构域、包含SEQ ID No:7的CDR-L1结构域，和/或包含SEQ ID No:9的CDR-L3结构域，
任选地，其中所述抗体或其抗原结合片段包含至少一个、至少两个、至少三个、至少四个、至少五个或至少六个CDR。
9.根据权利要求1-8中任意一项所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于：
其中，所述抗体或其抗原结合片段包含：包含或由SEQ ID No:41组成的重链可变区和包含或由SEQ ID No:42组成的轻链可变区，
任选地，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：包含或由SEQ ID No:6组成的重链区和包含或由SEQ ID No:10组成的轻链区。
10.根据权利要求1-9中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于：
其中，所述抗体或其抗原结合片段包含重链区和轻链区，所述重链区包含或由选自SEQID Nos:49、50、51和52的序列组成，所述轻链区包含或由SEQ IDNo:53或54的序列组成。
11.根据权利要求1-7中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于：
其中，所述抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:11的CDR-H1结构域、包含SEQID No:12的CDR-H2结构域、包含SEQ ID No:13的CDR-H3结构域、包含SEQ ID No:15的CDR-L1结构域、包含SEQ ID No:16的CDR-L2结构域，和/或包含SEQ ID No:17的CDR-L3结构域，
任选地，其中所述抗体或其抗原结合片段包含至少一个、至少两个、至少三个、至少四个、至少五个或至少六个CDR。
12.根据权利要求1-7中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于：
其中，所述抗体或其抗原结合片段包含：包含或由SEQ ID No:43组成的重链可变区和包含或由SEQ ID No:44组成的轻链可变区，
任选地，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：包含或由SEQ ID No:14组成的重链区和包含或由SEQ ID No:18组成的轻链区。
13.根据权利要求1-7中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于：
其中，所述抗体或其抗原结合片段包含重链区和轻链区，所述重链区包含或由SEQ IDNo:55组成，所述轻链区包含或由选自SEQ ID Nos:56、57、58和59的序列组成。
14.根据权利要求1-7中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于：
其中，所述抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:20的CDR-H1结构域、包含SEQID No:21的CDR-H2结构域、包含SEQ ID No:22的CDR-H3结构域、包含SEQ ID No:24的CDR-L1结构域、包含SEQ ID No:25的CDR-L2结构域，和/或包含SEQ ID No:26的CDR-L3结构域，
任选地，其中所述抗体或其抗原结合片段包含至少一个、至少两个、至少三个、至少四个、至少五个或至少六个CDR。
15.根据权利要求1-7中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于：
其中，所述抗体或其抗原结合片段包含：包含或由SEQ ID No:45组成的重链可变区和包含或由SEQ ID No:46组成的轻链可变区，
任选地，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：包含或由SEQ ID No:23组成的重链区和包含或由SEQ ID No:27组成的轻链区。
16.根据权利要求1-7中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于：
其中，所述抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:28的CDR-H1结构域、包含SEQID No:29的CDR-H2结构域、包含SEQ ID No:30的CDR-H3结构域、包含SEQ ID No:32的CDR-L1结构域、包含SEQ ID No:33的CDR-L2结构域，和/或包含SEQ ID No:34的CDR-L3结构域，
任选地，其中所述抗体或其抗原结合片段包含至少一个、至少两个、至少三个、至少四个、至少五个或至少六个CDR。
17.根据权利要求1-7中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于：
其中所述抗体或其抗原结合片段包含：包含或由SEQ ID No:47组成的重链可变区和包含或由SEQ ID No:48组成的轻链可变区，
任选地，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：包含或由SEQ ID No:31组成的重链区和包含或由SEQ ID No:35组成的轻链区。
18.如权利要求1-17中任意一项所述的抗体或其抗原结合片段在治疗中的应用。
19.如权利要求1-17中任一项所述的抗体或其抗原结合片段在治疗、预防或改善缺氧相关病症中的应用。
20.根据权利要求19所述的抗体或其抗原结合片段的应用，其特征在于：
其中，所述缺氧相关疾病是肺动脉高压或癌症。
21.一种药物组合物，其特征在于，包含：
根据权利要求1-17中任一项所述的抗体或其抗原结合片段；以及
任选的药学上可接受的载体。
22.一种抗体或其抗原结合片段，其特征在于，通过包括以下步骤的方法获得：
(i)用权利要求1-17中任一项所定义的ZIP12胞外结构域或ZIP12蛋白区域免疫宿主生物体；和
(ii)从宿主收集抗体或其抗原结合片段。
23.一种多核苷酸序列，其特征在于：其编码权利要求1-17中任一项所述的抗体或其抗原结合片段。
24.一种表达盒，其特征在于，包含：根据权利要求23所述的多核苷酸序列。
25.一种重组载体，其特征在于，包含：根据权利要求24所述的表达盒。
26.一种宿主细胞，其特征在于，包含：根据权利要求23所述的多核苷酸序列、根据权利要求24所述的表达盒或根据权利要求25所述的载体。
27.一种制备根据权利要求1-17中任一项所述的抗体或抗原结合片段的方法，其特征在于，该方法包括：
a)将权利要求25所述的载体引入宿主细胞；和
b)在产生根据权利要求1-17中任一项所述的抗体或抗原结合片段的条件下培养宿主细胞。
28.如权利要求1-17中任一项所述的抗体或抗体结合片段在诊断或预后中的应用。
29.如权利要求1-17中任一项所述的抗体或抗体结合片段在诊断或预测缺氧相关病症中的应用。
30.一种诊断或预测受试者缺氧相关状况的方法，其特征在于，该方法包括用权利要求1-17中任一项的抗体或抗体结合片段检测从受试者获得的生物样品中的ZIP12。
31.一种用于诊断患有缺氧相关病症的受试者或用于提供所述受试者病症的预后的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含：根据权利要求1至17中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，用于检测来自受试者的样品中的ZIP12。
32.根据权利要求29所述的用途、根据权利要求30所述的方法或根据权利要求2931所述的试剂盒，其特征在于：
其中，所述低氧相关疾病是肺动脉高压或癌症。
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