CN117597367A - 血管性血友病因子(vwf)抑制剂 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及血管性血友病因子(VWF)的抑制剂，具体涉及抗VWF抗体。本发明涉及包含该抑制剂的组合物，包括药物组合物和试剂盒。本发明还涉及该抑制剂的制备和使用方法，例如在由血小板介导的聚集引起的病症的治疗和诊断中，包括各种心血管疾病，例如获得性血栓性血小板减少性紫癜(aTTP)、缺血性中风和动脉粥样硬化。
Description
本发明涉及血管性血友病因子(VWF)的抑制剂，并且特别地但不排他地涉及靶向VWF的C1-C6结构域的抑制剂。本发明涉及包含该抑制剂的组合物，包括药物组合物和试剂盒。本发明还涉及该抑制剂的使用方法，例如在由血小板介导的聚集引起的病症的治疗和诊断中，包括各种心血管疾病，例如获得性血栓性血小板减少性紫癜(aTTP)、缺血性中风和动脉粥样硬化。
心血管疾病(CVD)，包括缺血性心脏病、中风、心力衰竭、外周动脉疾病以及其他一些心脏和血管疾病，仍然是全球死亡的主要原因。CVD的特点是由血小板聚集失控引起的血栓事件，导致细胞死亡和器官衰竭。鉴于血小板在引发血栓形成中的核心作用，一些已批准的抗血栓药物都以血小板为靶点，例如阿司匹林、氯吡格雷和阿昔单抗。由于这些药物的作用机制互补，联合使用这些药物比单独使用任何一种药物都能更大程度地抑制血小板聚集。然而，这些抗血小板药物的使用因出血风险增加而受到阻碍，从而减少了它们在更广泛患者群体中的应用。因此，对于既能够治疗血栓性疾病又没有严重出血风险的疗法，仍有很大的医疗需求未得到满足。
血管性血友病因子(VWF)是一种大型多聚体糖蛋白，存在于血浆、内皮细胞、巨核细胞和血小板中，是公认的血栓事件风险因素。VWF在止血过程中发挥着重要作用，它能介导血小板粘附到血管损伤部位并保护凝血因子VIII(FVIII)不被降解。受伤后，受损血管壁中的胶原蛋白暴露于流动的血液和剪切力下。血浆中的VWF与暴露的胶原蛋白结合并展开其结构，支持循环血小板的粘附。然后，结合的VWF与血小板受体GPIb相互作用，并发生血小板束缚。一旦血小板、VWF和相关凝血蛋白结合在一起，达到临界质量，封闭血管壁，就会形成血小板栓塞。据报道，VWF还具有其他功能，包括调节炎症和血管生成。
VWF的积累与CVD风险增加有关。特别是血栓性血小板减少性紫癜(TTP)患者体内超长VWF(ULvWF)的积聚已被广泛研究。目前，卡帕珠单抗(Caplacizumab，一种单克隆抗体)是唯一获批的抗VWF疗法，它已被证明可以阻断VWF与血小板的结合并减少TTP患者的血栓形成。然而，该抗体通过靶向和抑制VWF的A1结构域发挥作用(见图1)。A1结构域对于胶原蛋白的结合至关重要，因此也是在低剪切条件下血小板结合和正常止血的关键。因此，卡帕珠单抗以该区域为靶点，会给患者带来严重的出血风险。对于患有TTP(一种罕见且致命的凝血障碍)的患者来说，服用卡帕珠单抗的益处超过了严重出血的风险。然而，这种严重的出血风险对于患有其他心血管疾病(包括缺血性中风和心肌梗死)的患者来说是不可接受的。因此，对于可用于治疗更广泛的血栓性疾病且没有严重出血风险的新型抗血栓疗法，存在着巨大的未满足医疗需求。
发明人已经确定，VWF的C1-C6结构域内的先前未靶向的区域(参见图1)对于VWF与胶原蛋白的结合至关重要，从而使得血小板能够在高剪切速率下凝结，例如在血栓形成条件下。重要的是，在低剪切条件下(即正常出血)，C1-C6结构域对于胶原蛋白结合并不是必需的，因此对于血小板结合也不是必需的。因此，这确定了VWF的C1-C6结构域是潜在的用于治疗由血小板介导的聚集或血栓相关病症引起的多种病症(包括aTTP、缺血性中风和动脉粥样硬化)的新治疗靶点。
因此，发明人假设，通过抑制VWF的C1-C6区域在高剪切率下与胶原蛋白结合的能力，可以减少血栓形成条件下的血小板凝结。重要的是，通过靶向该区域，VWF仍能在低剪切率下(通过A1结构域)正常地与血小板结合，以实现正常止血，因此不会出现使用卡帕珠单抗所带来的重大问题。这促使发明人进一步致力于开发能够靶向VWF的C1-C6结构域以抑制其促血栓形成功能的抗体。这些抗VWF单克隆抗体可用于治疗、改善或预防多种血栓相关病症，而且比目前可用的治疗方法安全得多，因为降低了严重出血的风险。
因此，本发明的第一方面提供了一种特异性结合血管性血友病因子(VWF)的C1、C2、C3、C4、C5和/或C6结构域中的一个或多个的抑制剂。
如实施例所示，发明人开发了能够与VWF的C1-C6结构域结合并抑制其功能的抗体。例如，如图3A至图3H所示，发明人开发了八种靶向VWF的C1-C6结构域内的抗体。此外，如图5和图6所示，发明人已经证明，令人惊奇的是，抗体在高剪切速率(即病理条件)下显着减少血小板聚集，但在低剪切速率(即正常条件)下保留了血小板捕获。这表明，靶向VWF的一个或多个C1-C6结构域可抑制VWF的促血栓形成功能，而不会抑制其正常的止血功能。
发明人已经证明，根据本发明的单克隆抗体能与VWF的C5结构域结合，亲和力在亚nM级别(参见图9)。此外，一些抗体克隆表现出与VWF的C3(抗体1-D5)和C4(抗体3-H9)结构域的结合较弱。
因此，在一优选的实施方案中，本发明的抑制剂特异性结合VWF的C3和C5结构域(抗体1-D5)。或者，在另一优选的实施方案中，本发明的抑制剂特异性结合VWF的C4和C5结构域(抗体3-H9)。
在另一优选的实施方案中，本发明的抑制剂特异性结合VWF的C5结构域。在该实施方案中，抑制剂可以额外地结合C1、C2、C3、C4和/或C6结构域中的一个或多个。然而，本发明的抑制剂可以基本上不结合VWF的C1、C2、C3、C4和/或C6结构域。优选地，本发明的抑制剂与VWF的C1、C2、C3、C4和/或C6结构域基本上不具有交叉反应性。优选地，抑制剂基本上不结合VWF的C3和/或C4结构域。
优选地，本发明的抑制剂能够抑制VWF的C1、C2、C3、C4、C5和/或C6结构域中的一个或多个的功能。在一优选的实施方案中，本发明的抑制剂能够抑制VWF的C5结构域的功能。优选地，抑制剂能够抑制VWF的C1、C2、C3、C4、C5和/或C6结构域中的一个或多个的功能，使得血小板结合在高剪切速率条件(即病理条件)下被抑制。优选地，抑制剂能够抑制VWF的C1、C2、C3、C4、C5和/或C6结构域中的一个或多个的功能，使得血小板结合在低剪切速率条件(即正常条件)下不被抑制。
在一实施方案中，VWF的氨基酸序列可以由Genbank ID No:NM_000552.5表示，其在本文中提供为SEQ ID No:1，如下：
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SCPLGYLASTATNDCGCTTTTCLPDKVCVHRSTIYPVGQFWEEGCDVCTCTDMEDAVMGLRVAQCSQKPCEDSCRSGFTYVLHEGECCG
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CMLNGTVIGPGKTVMIDVCTTCRCMVQVGVISGFKLECRKTTCNPCPLGYKEENNTGECCGRCLPTACTIQLRGGQIMTLKRDETLQDG
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YSIDINDVQDQCSCCSPTRTEPMQVALHCTNGSVVYHEVLNAMECKCSPRKCSK
[SEQ ID No:1]
因此抑制剂可以SEQ ID No:1所示的氨基酸位置2255和2722之间的区域，其对应于VWF的C1-C6结构域。
因此，优选地，抑制剂可以结合VWF的氨基酸位置2255和2722之间的一个或多个氨基酸，对应于C1-C6结构域，其在本文中提供为SEQ ID No:2，如下：
TQCIGEDGVQHQFLEAWVPDHQPCQICTCLSGRKVNCTTQPCPTAKAPTCGLCEVARLRQNADQCCPEYECVCDPVSCDLPPVPHCERG
LQPTLTNPGECRPNFTCACRKEECKRVSPPSCPPHRLPTLRKTQCCDEYECACNCVNSTVSCPLGYLASTATNDCGCTTTTCLPDKVCV
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VISGFKLECRKTTCNPCPLGYKEENNTGECCGRCLPTACTIQLRGGQIMTLKRDETLQDGCDTHFCKVNERGEYFWEKRVTGCPPFDEH
KCLAEGGKIMKIPGTCCDTCEEP
[SEQ ID No:2]
因此，优选地，抑制剂与包含或基本上由如SEQ ID No:2所示的序列或其变体或片段组成的一个或多个氨基酸结合。
在一实施方案中，VWF的C1结构域的氨基酸序列可以在本文中提供为SEQ ID No:3，如下：
TQCIGEDGVQHQFLEAWVPDHQPCQICTCLSGRKVNCTTQPCPTAKAPTCGLCEVARLRQNADQCCPEYECVCDPVSCD
[SEQ ID No:3]
因此，优选地，抑制剂与包含或基本上由如SEQ ID No:3所示的序列或其变体或片段组成的一个或多个氨基酸或表位结合。
在一实施方案中，VWF的C2结构域的氨基酸序列可以在本文中提供为SEQ ID No:4，如下：
LPPVPHCERGLQPTLTNPGECRPNFTCACRKEECKRVSPPSCPPHRLPTLRKTQCCDEYECACNCVNST
[SEQ ID No:4]
因此，优选地，抑制剂与包含或基本上由如SEQ ID No:4所示的序列或其变体或片段组成的一个或多个氨基酸或表位结合。
在一实施方案中，VWF的C3结构域的氨基酸序列可以在本文中提供为SEQ ID No:5，如下：
VCVHRSTIYPVGQFWEEGCDVCTCTDMEDAVMGLRVAQCSQKPCEDSCRSGFTYVLHEGECCGRCLP
[SEQ ID No:5]
因此，优选地，抑制剂与包含或基本上由如SEQ ID No:5所示的序列或其变体或片段组成的一个或多个氨基酸或表位结合。
在一实施方案中，VWF的C4结构域的氨基酸序列可以在本文中提供为SEQ ID No:6，如下：
SACEVVTGSPRGDSQSSWKSVGSQWASPENPCLINECVRVKEEVFIQQRNVSCPQLEVPVCPSGFQLSCKTSACCPSCRCE
[SEQ ID No:6]
因此，优选地，抑制剂与包含或基本上由如SEQ ID No:6所示的序列或其变体或片段组成的一个或多个氨基酸或表位结合。
在一实施方案中，VWF的C5结构域的氨基酸序列可以在本文中提供为SEQ ID No:7，如下：
RMEACMLNGTVIGPGKTVMIDVCTTCRCMVQVGVISGFKLECRKTTCNPCPLGYKEENNTGECCGRCLP
[SEQ ID No:7]
因此，优选地，抑制剂与包含或基本上由如SEQ ID No:7所示的序列或其变体或片段组成的一个或多个氨基酸或表位结合。
在一实施方案中，VWF的C6结构域的氨基酸序列可以在本文中提供为SEQ ID No:8，如下：
TACTIQLRGGQIMTLKRDETLQDGCDTHFCKVNERGEYFWEKRVTGCPPFDEHKCLAE
GGKIMKIPGTCCDTCEEP
[SEQ ID No:8]
因此，优选地，抑制剂与包含或基本上由如SEQ ID No:8所示的序列或其变体或片段组成的一个或多个氨基酸或表位结合。
以往针对VWF的治疗靶点主要集中在A1和A3结构域，例如靶向A1的卡帕珠单抗和靶向A3的82D6A3。然而，A1和A3结构域对于胶原蛋白结合以及血小板结合至关重要。因此，靶向A1和A3结构域会在低剪切率条件(即正常条件)下抑制血小板结合，导致患者严重的出血风险。
因此，重要的是，本发明的抑制剂以VWF的C1、C2、C3、C4、C5和/或C6结构域中的一个或多个结构域为靶点，具有特异性，并且与VWF的A1、A2和/或A3结构域没有或几乎没有交叉反应，因为这可能会导致严重的不良脱靶效应，例如严重的出血风险。
因此，优选地，本发明的抑制剂基本上不结合VWF的A1、A2和/或A3结构域。优选地，本发明的抑制剂与VWF的A1、A2和/或A3结构域基本上不具有交叉反应性。最优选地，本发明的抑制剂与VWF的A1结构域基本上不具有交叉反应性。
在一实施方案中，VWF的A1结构域的氨基酸序列可以在本文中提供为SEQ ID No:153，如下：
DLVFLLDGSSRLSEAEFEVLKAFVVDMMERLRISQKWVRVAVVEYHDGSHAYIGLKDRKRPSELRRIASQVKYAGSQVASTSEVLKYTL
FQIFSKIDRPEASRITLLLMASQEPQRMSRNFVRYVQGLKKKKVIVIPVGIGPHANLKQIRLIEKQAPENKAFVLSSVDELEQQRDEI
[SEQ ID No:153]
因此，优选地，抑制剂不结合基本上如SEQ ID No:153所示的序列或其变体或片段。
在一实施方案中，VWF的A2结构域的氨基酸序列可以在本文中提供为SEQ ID No:154，如下：
DVAFVLEGSDKIGEADFNRSKEFMEEVIQRMDVGQDSIHVTVLQYSYMVTVEYPFSEAQSKGDILQRVREIRYQGGNRTNTGLALRYLS
DHSFLVSQGDREQAPNLVYMVTGNPASDEIKRLPGDIQVVPIGVGPNANVQELERIGWPNAPILIQDFETLPREAPDLVQRCC
[SEQ ID No:154]
因此，优选地，抑制剂不结合基本上如SEQ ID No:154所示的序列或其变体或片段。
在一实施方案中，VWF的A3结构域的氨基酸序列可以在本文中提供为SEQ ID No:155，如下：
DVILLLDGSSSFPASYFDEMKSFAKAFISKANIGPRLTQVSVLQYGSITTIDVPWNVVPEKAHLLSLVDVMQREGGPSQIGDALGFAVR
YLTSEMHGARPGASKAVVILVTDVSVDSVDAAADAARSNRVTVFPIGIGDRYDAAQLRILAGPAGDSNVVKLQRIEDLPTMVTLGNSFL
HKL
[SEQ ID No:155]
因此，优选地，抑制剂不结合基本上如SEQ ID No:155所示的序列或其变体或片段。
在一优选的实施方案中，抑制剂是抗体或其抗原结合片段。
因此，本发明的另一方面提供了一种抗体或其抗原结合片段抑制剂，其特异性结合血管性血友病因子(VWF)的C1、C2、C3、C4、C5和/或C6结构域中的一个或多个，并且其优选地基本上不结合VWF的A1、A2和/或A3结构域。
本发明涉及对VWF的C1、C2、C3、C4、C5和/或C6结构域中的一个或多个(优选C5)具有免疫特异性的完整抗体(即免疫球蛋白)，以及相应的全长抗体的抗原结合片段或区域。
抗体或其抗原结合片段可以是单价、二价或多价的。单价抗体是二聚体(HL)，包含重(H)链和轻链(L)，通过二硫桥相连。二价抗体是四聚体(H2L2)，包含通过至少一个二硫桥连接的两个二聚体。还可以例如通过连接多个二聚体来产生多价抗体。抗体分子的基本结构由两条相同的轻链和两条相同的重链组成，它们以非共价方式结合并且可以通过二硫键连接。每条重链和轻链均包含约110个氨基酸的氨基末端可变区，以及链其余部分的恒定序列。可变区包括几个高变区或互补决定区(CDR)，其形成抗体分子的抗原结合位点并决定其对抗原的特异性，即VWF的C1、C2、C3、C4、C5和/或C6结构域中的一个或多个(优选C5)或其变体或片段(例如表位)。重链和轻链CDR的两侧是框架区，是相对保守的氨基酸序列，用于锚定和定向CDR。抗体片段可包括双特异性抗体(BsAb)或嵌合抗原受体(CAR)。
重链恒定区通常包含三个结构域：CH1、CH2和CH3。每条轻链通常包含轻链可变区(VL)和轻链恒定区。轻链恒定区通常包含一个结构域，缩写为CL。
每条重链和轻链通常包含三个CDR和四个FR，按以下顺序(从N端到C端)排列：FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4。CDR参与抗原结合并赋予抗原特异性和与抗体的结合亲和力。参见Kabat et al.,Sequences of Proteins of Immunological Interest 5th ed.(1991)Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD，其内容通过引用整体并入本文。
任何脊椎动物的重链可归入五种不同类别(或同种型)之一：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM。这些类别也分别指定为α、δ、ε、γ和μ。根据序列和功能的差异，IgG和IgA类别进一步分为亚类。人类表达以下亚类：IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2。优选IgG抗体类别。
根据恒定结构域的序列，任何脊椎动物的轻链都可以归入两种类型之一，即kappa和lambda。
恒定区由五个重链序列之一(μ、γ、ζ、α或ε)和两个轻链序列之一(κ或λ)组成。重链恒定区序列决定抗体的同种型和分子的效应子功能。
优选地，抗体或其抗原结合片段是分离的或纯化的。
在一优选的实施方案中，抗体或其抗原结合片段包括多克隆抗体或其抗原结合片段。抗体或其抗原结合片段可以在兔、小鼠或大鼠中产生。
优选地，抗体或其抗原结合片段通过用C1-C6-Fc蛋白或其变体或片段(例如C1、C2、C3、C4、C5和/或C6结构域中的任一个或多个)免疫宿主动物，然后收集抗体或其抗原结合片段来获得。宿主动物可以是兔子。
在另一优选的实施方案中，抗体或其抗原结合片段包括单克隆抗体或其抗原结合片段。抗体或其片段可以是哺乳动物的。优选地，本发明的抗体是人抗体。如本文所用，术语“人抗体”可以指抗体，例如单克隆抗体，其包含的重链和轻链CDR氨基酸序列与对VWF的C1、C2、C3、C4、C5和/或C6结构域中的一个或多个(优选C5)具有免疫特异性的特定人抗体中的氨基酸序列(或其变体或片段)基本相同。与重链或轻链CDR基本相同的氨基酸序列与参考序列相比表现出相当高的序列同一性。这种同一性是明确已知的或可识别为代表了特定人抗体的氨基酸序列。基本上相同的重链和轻链CDR氨基酸序列可以具有例如较小的氨基酸修饰或保守取代。这样的人抗体或其片段可保持其选择性结合VWF的C1、C2、C3、C4、C5和/或C6结构域中的至少一个(优选C5)或其变体或片段的功能。
术语“人单克隆抗体”可以包括具有基本上或完全人类CDR氨基酸序列的单克隆抗体，例如通过重组方法产生(例如通过噬菌体文库、通过淋巴细胞或通过杂交瘤细胞产生)。
术语“单克隆抗体”是指来自基本上同质的抗体群体的抗体。基本上同质的抗体群体包含基本上相似并且结合相同表位的抗体，除了在单克隆抗体生产过程中通常可能出现的变体之外。此类变体通常仅存在少量。单克隆抗体通常通过从多种抗体中选择单个抗体的方法获得。例如，选择过程可以是从多个克隆(例如杂交瘤克隆、噬菌体克隆、酵母克隆、细菌克隆或其他重组DNA克隆)中选择独特的克隆。所选择的抗体可以被进一步改变，例如，以提高对靶标的亲和力(通过所谓的“亲和力成熟”)、使抗体人源化、提高其在细胞培养物中的产量和/或降低其在受试者中的免疫原性。
术语“人源化抗体”可以指来自非人类物种(例如小鼠或兔)的抗体，其蛋白质序列已被修饰以增加其与人类天然产生的抗体的相似性。
抗体可以是重组抗体。术语“重组人抗体”可以包括使用重组DNA技术产生的人抗体。
术语“抗原结合片段”可指抗体对其靶抗原具有特异性结合亲和力的区域，例如VWF的C1、C2、C3、C4、C5和/或C6结构域中的一个或多个(优选C5)或其变体或片段。优选地，片段是表位。表位可以是线性的或构象的。抗原结合区可以是高变CDR或其功能部分。术语CDR的“功能部分”可以指CDR内对靶抗原具有特异性亲和力的序列。CDR的功能部分可包含特异性结合VWF的C1、C2、C3、C4、C5和/或C6结构域中的一个或多个(优选C5)或其片段的配体。
术语“CDR”可以指重链可变区和轻链可变区中的高变区。抗体的每条重链和轻链中可以存在一个、两个、三个或更多个CDR。通常，每条链上至少有3个CDR，当它们配置在一起时，就形成抗原结合位点，即与抗原结合或发生特异性反应的三维结合位点。然而，也有推测某些抗体的重链中可能有四个CDR。
在相互比较时，CDR的定义还包括氨基酸残基的重叠或子集。包含特定CDR或其功能部分的精确残基数目将根据CDR的序列和大小而变化。本领域技术人员可以根据抗体的可变区氨基酸序列，常规地确定哪些残基包含特定CDR。
CDR的氨基酸序列边界可以通过使用多种已知编号方案中的任一种来确定，这些方案包括：Kabat等人(同上，“Kabat”编号方案)；Al-Lazikani et al.,1997,J.Mol.Biol.,273:927-948(“Chothia”编号方案)；MacCallum et al.,1996,J.Mol.Biol.262:732-745(“Contact”编号方案)；Lefranc et al.,Dev.Comp.Immunol.,2003,27:55-77(“IMGT”编号方案)和Honegge and Plückthun,J.Mol.Biol.,2001,309:657-70(“AHo”编号方案)描述的那些。
术语抗体的“功能片段”可以指抗体中保留功能活性的部分。功能活性可以是抗原结合活性或特异性等。功能活性还可以是由抗体恒定区提供的效应子功能等。术语“功能片段”还旨在包括例如通过蛋白酶消化或还原人单克隆抗体以及通过本领域技术人员已知的重组DNA方法产生的片段。人单克隆抗体功能片段包括，例如单独的重链或轻链及其片段，例如VL、VH和Fd；单价片段，例如Fv、Fab和Fab'；二价片段，例如F(ab')2；单链Fv(scFv)；和Fc片段。另外，正如下文所讨论和举例说明的那样，可以通过将氨基酸取代引入Fc区来使抗体的Fc片段失效，从而抑制或降低抗体的效应子功能。
术语“VL片段”可以指人单克隆抗体的轻链片段，其包括全部或部分轻链可变区，包括CDR。VL片段还可包括轻链恒定区序列。
术语“VH片段”可以指人单克隆抗体的重链片段，其包括全部或部分重链可变区，包括CDR。
术语“Fd片段”可以指与第一重链恒定区偶联的重链可变区，即VH和CH-1。“Fd片段”不包括轻链，或重链的第二恒定区和第三恒定区。
术语“Fv片段”可以指人单克隆抗体的单价抗原结合片段，包括全部或部分的重链和轻链的可变区，并且不存在重链和轻链的恒定区。重链和轻链的可变区包括例如CDR。例如，Fv片段包括重链和轻链的约110个氨基酸的氨基末端可变区的全部或部分。
术语“Fab片段”可以指大于Fv片段的人单克隆抗体的单价抗原结合片段。例如，Fab片段包括可变区以及重链和轻链的第一恒定结构域的全部或部分。因此，Fab片段还另外包括例如重链和轻链的约110至约220个氨基酸残基。
术语“Fab'片段”可以指大于Fab片段的人单克隆抗体的单价抗原结合片段。例如，Fab'片段包括全部轻链、全部重链可变区、以及重链的第一恒定结构域和第二恒定结构域的全部或部分。例如，Fab'片段还可以另外包括重链的220至330个氨基酸残基中的一些或全部。
术语“F(ab')2片段”可以指人单克隆抗体的二价抗原结合片段。例如，F(ab')2片段包括两条重链和两条轻链的全部或部分可变区，并且还可以包括两条重链和两条轻链的第一恒定结构域的全部或部分。
术语“单链Fv(scFv)”可以指用短连接肽连接的重链(VH)和轻链(VL)的可变区的融合体。
术语“双特异性抗体(BsAb)”可以指包含通过较短连接肽彼此连接的两个scFv的双特异性抗体。
本领域技术人员知晓，抗体片段的确切边界并不重要，只要该片段保持功能活性即可。使用众所周知的重组方法，本领域技术人员可以设计多核苷酸序列以表达具有特定应用所需的任何端点的功能片段。抗体的功能片段可以包含或由与人抗体重链和轻链可变区基本上相同的片段组成。
优选地，就本发明的第一方面而言，抗体或其抗原结合片段对于VWF的C1、C2、C3、C4、C5和/或C6结构域中的一个或多个内的表位具有免疫特异性。在一优选的实施方案中，抗体或其抗原结合片段对于VWF的C3和C5结构域内的表位具有免疫特异性(抗体1-D5)。此外，在另一优选的实施方案中，抗体或其抗原结合片段对于VWF的C4和C5结构域内的表位具有免疫特异性(抗体3-H9)。甚至更优选地，抗体或其抗原结合片段对于VWF的C5结构域内的表位具有免疫特异性。其抗原结合片段可包含选自VH、VL、Fd、Fv、Fab、Fab'、scFv、F(ab')2和Fc片段的任何片段或由其组成。
其抗原结合片段可以是单结构域抗体(sdAb)，也称为纳米抗体，本领域技术人员可以理解其是由单个单体可变抗体结构域组成的抗体片段。
其抗原结合片段可包含VL的抗原结合区序列中的任一种、VH的抗原结合区序列中的任一种、或人抗体的VL和VH抗原结合区的组合，或由其组成。VH和VL抗原结合区序列的适当数量和组合可由本领域技术人员根据所需的亲和力和特异性以及抗原结合片段的预期用途来确定。使用本领域技术人员熟知的方法可以容易地生产和分离抗体的功能片段或抗原结合片段。这些方法包括蛋白水解法、重组法和化学合成法等。用于分离功能片段的蛋白水解法包括使用人抗体作为起始材料。适合于人免疫球蛋白的蛋白水解的酶可以包括木瓜蛋白酶和胃蛋白酶等。本领域技术人员可以根据所需的是单价片段还是二价片段等情况，选择合适的酶。例如，木瓜蛋白酶切割产生两个结合抗原的单价Fab'片段和一个Fc片段。例如，胃蛋白酶切割会产生二价F(ab')片段。本发明的F(ab')2片段可以使用例如DTT或2-巯基乙醇进一步还原以产生两个单价Fab'片段。
通过蛋白水解产生的抗体的功能片段或抗原结合片段可以通过亲和层析和柱层析程序来纯化。例如，未消化的抗体和Fc片段可以通过与蛋白A结合而去除。另外，功能片段可以通过离子交换和凝胶过滤色谱等方法，根据其电荷和大小进行纯化。这些方法已为本领域技术人员所熟知。
抗体或其抗原结合片段可以通过重组方法产生。优选地，首先分离编码抗体重链和轻链的所需区域的多核苷酸。这些区域可以包括例如重链和轻链可变区的全部或部分。优选地，这些区域可特别包括重链和轻链的抗原结合区，优选抗原结合位点，最优选CDR。
编码根据本发明的抗体或其抗原结合片段的多核苷酸可以使用本领域技术人员已知的方法制备。编码抗体或其抗原结合片段的多核苷酸可以通过本领域已知的寡核苷酸合成方法直接合成。另外，可以使用本领域已知的重组方法合成较小的片段并连接以形成较大的功能片段。
如本文所用，术语“免疫特异性”可以指抗体或其抗原结合片段的结合区能够与VWF的C1、C2、C3、C4、C5和/或C6结构域中的一个或多个(优选C5)或其变体或片段特异性结合而发生免疫反应。抗体或其抗原结合片段可以优选地选择性地与抗原(VWF的C1、C2、C3、C4、C5和/或C6结构域中的一种或多种——优选C5)相互作用，亲和力常数约为10-5至10-13M-1，优选10-6至10-9M-1，甚至更优选10-10至10-12M-1。
优选地，抗体或其抗原结合片段基本上不结合VWF的A1、A2和/或A3结构域，使得亲和力常数大约为大于10-10M-1、10-9M-1、10-8M-1、10-7M-1或10-6M-1，优选大于10-5M-1、10-4M-1或10-3M-1，更优选10-2M-1、10-1M-1或10-2M-1，最优选10+1M-1、10+2M-1或10+3M-1。
术语“免疫反应”可指结合区在与VWF的C1、C2、C3、C4、C5和/或C6结构域中的一个或多个或其表位结合后能够引发免疫应答。
术语“表位”可以指能够引发抗体或其抗原结合片段的结合区并与其结合的抗原的任何区域。表位可以是线性的。这可以意味着抗体与抗原的多个连续氨基酸相互作用，因此表位可以由这些限定的氨基酸组成。
另外，表位可以是构象的，即非线性或不连续的。这可能意味着抗体与抗原的一级氨基酸序列中的多个不同片段相互作用。
因此，抗体或其抗原结合片段可以包含重链。重链可以选自以下：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM。优选地，重链是IgG。优选地，重链是IgA。
重链可以是IgG1。重链可以是IgG2。重链可以是IgG3。重链可以是IgG4。重链可以是IgA1。重链可以是IgA2。
如实施例中所述以及图3A至图3H和图7A-E中所示，发明人令人惊奇地证明，本文中称为1-A2、4-H3、1-D5、3-H9、1-G5、4-H9、4-B12和4-C6的抗体和抗原结合片段能够显着靶向VWF的一个或多个C1-C6结构域，下文将详细定义这些抗体中的每一种。在图8所示的表中概括了这八种抗体的CDR/FR/VH/VL、HC和LC序列。
1-A2
因此，在一实施方案中，抗体或其抗原结合片段在本文中称为1-A2。抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:9的CDR-H1结构域，如下：
GIDLTSNA
[SEQ ID No:9]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H1结构域，其包含或由基本上如SEQ ID No:9所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:10的CDR-H2结构域，如下：
IYGHDTS
[SEQ ID No:10]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H2结构域，其包含或由基本上如SEQ ID No:10所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:11的CDR-H3结构域，如下：
ARGFIYFDI
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H3结构域，其包含或由基本上如SEQ ID No:11所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:9或由SEQ ID No:9组成的CDR-H1结构域、包含SEQ ID No:10或由SEQ ID No:10组成的CDR-H2结构域和/或包含SEQID No:11或由SEQ ID No:11组成的CDR-H3结构域。然而，优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:9或由SEQ ID No:9组成的CDR-H1结构域、包含SEQ ID No:10或由SEQID No:10组成的CDR-H2结构域和包含SEQ ID No:11或由SEQ ID No:11组成的CDR-H3结构域。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:12的FR-H1结构域，如下：
SQSVEESGGRLVPPGTPLTLTCTVS
[SEQ ID No:12]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含FR-H1结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:12所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:13的FR-H2结构域，如下：
MNWVRQAPGKGLEWIGG
[SEQ ID No:13]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含FR-H2结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:13所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:14的FR-H3结构域，如下：
YYAAWAKGRFTISRTSTTVDLKMTRPTTDDTATYFC
[SEQ ID No:14]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含FR-H3结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:14所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:15的FR-H4结构域，如下：
WGTGTLVTISS
[SEQ ID No:15]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含FR-H4结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:15所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:12或由SEQ ID No:12组成的FR-H1结构域、包含SEQ ID No:13或由SEQ ID No:13组成的FR-H2结构域、包含SEQ IDNo:14或由SEQ ID No:14组成的FR-H3结构域和/或包含SEQ ID No:15或由SEQ ID No:15组成的FR-H4结构域。然而，优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:12或由SEQID No:12组成的FR-H1结构域、包含SEQ ID No:13或由SEQ ID No:13组成的FR-H2结构域、包含SEQ ID No:14或由SEQ ID No:14组成的FR-H3结构域和包含SEQ ID No:15或由SEQ IDNo:15组成的FR-H4结构域。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的如SEQ ID No:16所示的重链可变(VH)序列，如下：
QSVEESGGRLVPPGTPLTLTCTVSGIDLTSNAMNWVRQAPGKGLEWIGGIYGHDTSYYAAWAKGRFTISRTSTTVDLKMTRPTTDDTAT
YFCARGFIYFDIWGTGTLVTISS
[SEQ ID No:16]
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:16所示的序列或其变体或片段组成。
编码重链可变(VH)区的核苷酸序列的一实施方案在本文中称为SEQ ID No:17，如下：CAGTCGGTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCCCGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACAGTCTCTGGAATCGACCTCACTAGCAATGCAATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGAGGCATTTATGGTCATGATACCTCATATTACGCGGCCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAACCTCGACCACAGTGGATCTGAAAATGACCAGGCCGACAACCGACGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGGTTTTATTTATTTTGACATCTGGGGCACAGGCACCCTGGTCACCATCTCTTCA
[SEQ ID No:17]
优选地，抗体或其抗原结合片段包含由基本上如SEQ ID No:17所示的核酸序列或其变体或片段编码的重链可变(VH)区。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:18的CDR-L1结构域，如下：
EDIYSG
[SEQ ID No:18]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L1结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:18所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:19的CDR-L2结构域，如下：
GAS
[SEQ ID No:19]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L2结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:19所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:20的CDR-L3结构域，如下：
LGGHSHSTTDLT
[SEQ ID No:20]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L3结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:20所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:18或由SEQ ID No:18组成的CDR-L1结构域、包含SEQ ID No:19或由SEQ ID No:19组成的CDR-L2结构域和/或包含SEQID No:20或由SEQ ID No:20组成的CDR-L3结构域。然而，优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:18或由SEQ ID No:18组成的CDR-L1结构域、包含SEQ ID No:19或由SEQID No:19组成的CDR-L2结构域和包含SEQ ID No:20或由SEQ ID No:20组成的CDR-L3结构域。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:21的FR-L1结构域，如下：
AIEMTQTPPSLSASVGETVRIRCLAS
[SEQ ID No:21]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含FR-L1结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:21所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:22的FR-L2结构域，如下：
ISWYQQKPGKPPTLLIY
[SEQ ID No:22]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含FR-L2结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:22所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:23的FR-L3结构域，如下：
NLESGVPPRFSGSGSGTDYTLTIGGVQAEDAATYYC
[SEQ ID No:23]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含FR-L3结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:23所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:24的FR-L4结构域，如下：
FGAGTKVEIK
[SEQ ID No:24]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含FR-L4结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:24所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:21或由SEQ ID No:21组成的FR-L1结构域、包含SEQ ID No:22或由SEQ ID No:22组成的FR-L2结构域、包含SEQ IDNo:23或由SEQ ID No:23组成的FR-L3结构域和/或包含SEQ ID No:24或由SEQ ID No:24组成的FR-L4结构域。然而，优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:21或由SEQID No:21组成的FR-L1结构域、包含SEQ ID No:22或由SEQ ID No:22组成的FR-L2结构域、包含SEQ ID No:23或由SEQ ID No:23组成的FR-L3结构域和包含SEQ ID No:24或由SEQ IDNo:24组成的FR-L4结构域。
抗体或其抗原结合片段可以包含如本文提供的SEQ ID No:25所示的轻链可变(VL)序列，如下：
AIEMTQTPPSLSASVGETVRIRCLASEDIYSGISWYQQKPGKPPTLLIYGASNLESGVPPRFSGSGSGTDYTLTIGGVQAEDAATYYCL
GGHSHSTTDLTFGAGTKVEIK
[SEQ ID No:25]
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:25所示的序列或其变体或片段组成。
编码轻链可变(VL)区的核苷酸序列的一实施方案在本文中称为SEQ ID No:26，如下：
GCAATTGAGATGACCCAGACTCCACCCTCCCTGTCTGCATCTGTGGGAGAAACTGTCAGGATTAGGTGCCTGGCCAGTGAGGACATTTACAGTGGTATATCCTGGTATCAACAGAAGCCAGGGAAACCTCCTACACTCCTGATCTATGGTGCATCCAATTTAGAATCTGGGGTCCCACCACGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTACACCCTCACCATTGGCGGCGTGCAGGCTGAAGATGCTGCCACCTACTACTGTCTAGGCGGTCATAGCCACAGTACTACCGATTTGACTTTTGGAGCTGGGACCAAGGTGGAAATCAAA
[SEQ ID No:26]
优选地，抗体或其抗原结合片段包含由基本上如SEQ ID No:26所示的核酸序列或其变体或片段编码的轻链可变(VL)区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含至少一个、至少两个、至少三个、至少四个、至少五个或至少六个CDR。优选地，抗体或其抗原结合片段至少包含CDR-H3。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:9或由SEQ ID No:9组成的CDR-H1结构域、包含SEQ ID No:10或由SEQ ID No:10组成的CDR-H2结构域、包含SEQ IDNo:11或由SEQ ID No:11组成的CDR-H3结构域、包含SEQ ID No:18或由SEQ ID No:18组成的CDR-L1结构域、包含SEQ ID No:19或由SEQ ID No:19组成的CDR-L2结构域和包含SEQ IDNo:20或由SEQ ID No:20组成的CDR-L3结构域。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:16或由SEQ ID No:16组成的重链可变区和包含SEQ ID No:25或由SEQ ID No:25组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：由包含SEQ ID No:17或由SEQ ID No:17组成的核酸序列编码的重链可变区和由包含SEQ ID No:26或由SEQ ID No:26组成的核酸序列编码的轻链可变区。
随后，发明人开始制备1-A2的人源化抗体，人源化抗体的序列如图10所示。除非另有说明，人源化抗体的六个CDR序列与亲本抗体1-A2的六个CDR序列相同。
1-A2_亲本(hIgG1)
在一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为1-A2_亲本(hIgG1)。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:156所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:25所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:156或由SEQ ID No:156组成的重链可变区和包含SEQ ID No:25或由SEQ ID No:25组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQIDNo:157所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:157或由SEQ ID No:157组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
1-A2_亲本(hIgG1-L234A-L235A-P329G)
另外，在另一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为1-A2_亲本(hIgG1-L234A-L235A-P329G)。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:156所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:25所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:156或由SEQ ID No:156组成的重链可变区和包含SEQ ID No:25或由SEQ ID No:25组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:162所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:162或由SEQ ID No:162组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
1-A2_亲本(hIgG1-Fab)
另外，在另一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为1-A2_亲本(hIgG1-Fab)。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:156所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:25所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:156或由SEQ ID No:156组成的重链可变区和包含SEQ ID No:25或由SEQ ID No:25组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:163所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:163或由SEQ ID No:163组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
1-A2_H0(hIgG1)
另外，在另一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为1-A2_H0(hIgG1)。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H1结构域，其包含或者由基本上如SEQID No:164所示的序列或其变体或片段组成。优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H2结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:10所示的序列或其变体或片段组成。优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H3结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:11所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L1结构域，其包含或者由基本上如SEQID No:18所示的序列或其变体或片段组成。优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L2结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:19所示的序列或其变体或片段组成。优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L3结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:20所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:164或由SEQ ID No:164组成的CDR-H1结构域、包含SEQ ID No:10或由SEQ ID No:10组成的CDR-H2结构域、包含SEQID No:11或由SEQ ID No:11组成的CDR-H3结构域、包含SEQ ID No:18或由SEQ ID No:18组成的CDR-L1结构域、包含SEQ ID No:19或由SEQ ID No:19组成的CDR-L2结构域和包含SEQID No:20或由SEQ ID No:20组成的CDR-L3结构域。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:165所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:25所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:165或由SEQ ID No:165组成的重链可变区和包含SEQ ID No:25或由SEQ ID No:25组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:157所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:157或由SEQ ID No:157组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
1-A2_H1(hIgG1)
另外，在另一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为1-A2_H1(hIgG1)。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:194所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:25所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:194或由SEQ ID No:194组成的重链可变区和包含SEQ ID No:25或由SEQ ID No:25组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:157所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:157或由SEQ ID No:157组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
1-A2_H2(hIgG1)
另外，在另一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为1-A2_H2(hIgG1)。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:172所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:25所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:172或由SEQ ID No:172组成的重链可变区和包含SEQ ID No:25或由SEQ ID No:25组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:157所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:157或由SEQ ID No:157组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
1-A2_L0(hIgG1K)
另外，在另一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为1-A2_L0(hIgG1K)。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:156所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:190所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:156或由SEQ ID No:156组成的重链可变区和包含SEQ ID No:190或由SEQ ID No:190组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:157所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:157或由SEQ ID No:157组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
1-A2_L1(hIgG1K)
另外，在另一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为1-A2_L1(hIgG1K)。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:156所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:191所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:156或由SEQ ID No:156组成的重链可变区和包含SEQ ID No:191或由SEQ ID No:191组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:157所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:157或由SEQ ID No:157组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
1-A2_H2_L1
另外，在另一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为1-A2_H2_L1。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:172所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:191所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:172或由SEQ ID No:172组成的重链可变区和包含SEQ ID No:191或由SEQ ID No:191组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:157所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:157或由SEQ ID No:157组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
1-A2_H2_L0
另外，在另一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为1-A2_H2_L0。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:172所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:190所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:172或由SEQ ID No:172组成的重链可变区和包含SEQ ID No:190或由SEQ ID No:190组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:157所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:157或由SEQ ID No:157组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
1-A2_H1_L1
另外，在另一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为1-A2_H1_L1。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:194所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:191所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:194或由SEQ ID No:194组成的重链可变区和包含SEQ ID No:191或由SEQ ID No:191组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:157所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:157或由SEQ ID No:157组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
1-A2_H1_L0
另外，在另一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为1-A2_H1_L0。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:194所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:190所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:194或由SEQ ID No:194组成的重链可变区和包含SEQ ID No:190或由SEQ ID No:190组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:157所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:157或由SEQ ID No:157组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
1-A2_H0_L1
另外，在另一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为1-A2_H0_L1。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H1结构域，其包含或者由基本上如SEQID No:164所示的序列或其变体或片段组成。优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H2结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:10所示的序列或其变体或片段组成。优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H3结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:11所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L1结构域，其包含或者由基本上如SEQID No:18所示的序列或其变体或片段组成。优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L2结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:19所示的序列或其变体或片段组成。优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L3结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:20所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:164或由SEQ ID No:164组成的CDR-H1结构域、包含SEQ ID No:10或由SEQ ID No:10组成的CDR-H2结构域、包含SEQID No:11或由SEQ ID No:11组成的CDR-H3结构域、包含SEQ ID No:18或由SEQ ID No:18组成的CDR-L1结构域、包含SEQ ID No:19或由SEQ ID No:19组成的CDR-L2结构域和包含SEQID No:20或由SEQ ID No:20组成的CDR-L3结构域。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:165所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:191所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:165或由SEQ ID No:165组成的重链可变区和包含SEQ ID No:191或由SEQ ID No:191组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:157所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:157或由SEQ ID No:157组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
1-A2_H0_L0
另外，在另一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为1-A2_H0_L0。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H1结构域，其包含或者由基本上如SEQID No:164所示的序列或其变体或片段组成。优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H2结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:10所示的序列或其变体或片段组成。优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H3结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:11所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L1结构域，其包含或者由基本上如SEQID No:18所示的序列或其变体或片段组成。优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L2结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:19所示的序列或其变体或片段组成。优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L3结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:20所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，所述抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:164或由SEQ ID No:164组成的CDR-H1结构域、包含SEQ ID No:10或由SEQ ID No:10组成的CDR-H2结构域、包含SEQ ID No:11或由SEQ ID No:11组成的CDR-H3结构域、包含SEQ ID No:18或由SEQ ID No:18组成的CDR-L1结构域、包含SEQ ID No:19或由SEQ ID No:19组成的CDR-L2结构域和包含SEQ ID No:20或由SEQ ID No:20组成的CDR-L3结构域。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:165所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:190所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:165或由SEQ ID No:165组成的重链可变区和包含SEQ ID No:190或由SEQ ID No:190组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:157所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:157或由SEQ ID No:157组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
4-H3
在一实施方案中，抗体或其抗原结合片段在本文中称为4-H3。抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:27的CDR-H1结构域，如下：
GIDLTSNA
[SEQ ID No:27]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H1结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:27所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:28的CDR-H2结构域，如下：
IYGHDTS
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H2结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:28所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:29的CDR-H3结构域，如下：
ARGFIYFDI
[SEQ ID No:29]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H3结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:29所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:27或由SEQ ID No:27组成的CDR-H1结构域、包含SEQ ID No:28或由SEQ ID No:28组成的CDR-H2结构域和/或包含SEQID No:29或由SEQ ID No:29组成的CDR-H3结构域。然而，优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:27或由SEQ ID No:27组成的CDR-H1结构域、包含SEQ ID No:28或由SEQID No:28组成的CDR-H2结构域和包含SEQ ID No:29或由SEQ ID No:29组成的CDR-H3结构域。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:30的FR-H1结构域，如下：
SQSLEESGGRLVPPGTPLTLTCTVS
[SEQ ID No:30]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含FR-H1结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:30所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:31的FR-H2结构域，如下：
MNWVRQAPGKGLEWIGG
[SEQ ID No:31]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含FR-H2结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:31所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:32的FR-H3结构域，如下：
YYAAWAKGRFTISRTSTTVDLKMTRPTTDDTATYFC
[SEQ ID No:32]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含FR-H3结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:32所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:33的FR-H4结构域，如下：
WGTGTLVTISS
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含FR-H4结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:33所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:30或由SEQ ID No:30组成的FR-H1结构域、包含SEQ ID No:31或由SEQ ID No:31组成的FR-H2结构域、包含SEQ IDNo:32或由SEQ ID No:32组成的FR-H3结构域和/或包含SEQ ID No:33或由SEQ ID No:33组成的FR-H4结构域。然而，优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:30或由SEQID No:30组成的FR-H1结构域、包含SEQ ID No:31或由SEQ ID No:31组成的FR-H2结构域、包含SEQ ID No:32或由SEQ ID No:32组成的FR-H3结构域和包含SEQ ID No:33或由SEQ IDNo:33组成的FR-H4结构域。
抗体或其抗原结合片段可以包含如本文提供的SEQ ID No:34所示的重链可变(VH)序列，如下：
QSLEESGGRLVPPGTPLTLTCTVSGIDLTSNAMNWVRQAPGKGLEWIGGIYGHDTSYYAAWAKGRFTISRTSTTVDLKMTRPTTDDTAT
YFCARGFIYFDIWGTGTLVTISS
[SEQ ID No:34]
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:34所示的序列或其变体或片段组成。
编码重链可变(VH)区的核苷酸序列的一实施方案在本文中称为SEQ ID No:35，如下：CAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCCCGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACAGTCTCTGGAATCGACCTCACTAGCAATGCAATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGAGGCATTTATGGTCATGATACCTCATATTACGCGGCCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAACCTCGACCACAGTGGATCTGAAAATGACCAGGCCGACAACCGACGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGGTTTTATTTATTTTGACATCTGGGGCACAGGCACCCTGGTCACCATCTCTTCA
[SEQ ID No:35]
优选地，抗体或其抗原结合片段包含由基本上如SEQ ID No:35所示的核酸序列或其变体或片段编码的重链可变(VH)区。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:36的CDR-L1结构域，如下：
EDIASG
[SEQ ID No:36]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L1结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:36所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:37的CDR-L2结构域，如下：
GAS
[SEQ ID No:37]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L2结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:37所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:38的CDR-L3结构域，如下：
LGGYSFSSNGLT
[SEQ ID No:38]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L3结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:38所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:36或由SEQ ID No:36组成的CDR-L1结构域、包含SEQ ID No:37或由SEQ ID No:37组成的CDR-L2结构域和/或包含SEQID No:38或由SEQ ID No:38组成的CDR-L3结构域。然而，优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:36或由SEQ ID No:36组成的CDR-L1结构域、包含SEQ ID No:37或由SEQID No:37组成的CDR-L2结构域和包含SEQ ID No:38或由SEQ ID No:38组成的CDR-L3结构域。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:39的FR-L1结构域，如下：
AYDMTQTPPSLSASVGETVRIRCLAS
[SEQ ID No:39]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含FR-L1结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:39所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:40的FR-L2结构域，如下：
ISWYQQKPGKPPTLLIY
[SEQ ID No:40]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含FR-L2结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:40所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:41的FR-L3结构域，如下：
NLESGVPPRFSGSGSGTDYTLTIGGVQAEDAATYYC
[SEQ ID No:41]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含FR-L3结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:41所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:42的FR-L4结构域，如下：
FGAGTKVEIK
[SEQ ID No:42]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含FR-L4结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:42所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:39或由SEQ ID No:39组成的FR-L1结构域、包含SEQ ID No:40或由SEQ ID No:40组成的FR-L2结构域、包含SEQ IDNo:41或由SEQ ID No:41组成的FR-L3结构域和/或包含SEQ ID No:42或由SEQ ID No:42组成的FR-L4结构域。然而，优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:39或由SEQID No:39组成的FR-L1结构域、包含SEQ ID No:40或由SEQ ID No:40组成的FR-L2结构域、包含SEQ ID No:41或由SEQ ID No:41组成的FR-L3结构域和包含SEQ ID No:42或由SEQ IDNo:42组成的FR-L4结构域。
抗体或其抗原结合片段可以包含如本文提供的SEQ ID No:43所示的轻链可变(VL)序列，如下：
AYDMTQTPPSLSASVGETVRIRCLASEDIASGISWYQQKPGKPPTLLIYGASNLESGVPPRFSGSGSGTDYTLTIGGVQAEDAATYYCL
GGYSFSSNGLTFGAGTKVEIK
[SEQ ID No:43]
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区，其包含或者由基本上如SEQ IDNo:43所示的序列或其变体或片段组成。
编码轻链可变(VL)区的核苷酸序列的一实施方案在本文中称为SEQ ID No:44，如下：GCTTATGATATGACCCAGACTCCACCCTCCCTGTCTGCATCTGTGGGAGAAACTGTCAGGATTAGGTGCCTGGCCAGTGAGGACATTGCCAGTGGTATATCCTGGTATCAACAGAAGCCAGGGAAACCTCCTACACTCCTGATCTATGGTGCATCCAATTTAGAATCTGGGGTCCCACCACGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTACACCCTCACCATTGGCGGCGTGCAGGCTGAAGATGCTGCCACCTACTACTGTCTAGGCGGTTATAGTTTCAGTAGTAACGGTTTGACTTTTGGAGCTGGCACCAAGGTGGAGATCAAA
[SEQ ID No:44]
优选地，抗体或其抗原结合片段包含由基本上如SEQ ID No:44所示的核酸序列或其变体或片段编码的轻链可变(VL)区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含至少一个、至少两个、至少三个、至少四个、至少五个或至少六个CDR。优选地，抗体或其抗原结合片段至少包含CDR-H3。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:27或由SEQ ID No:27组成的CDR-H1结构域、包含SEQ ID No:28或由SEQ ID No:28组成的CDR-H2结构域；包含SEQ IDNo:29或由SEQ ID No:29组成的CDR-H3结构域，包含SEQ ID No:36或由SEQ ID No:36组成的CDR-L1结构域，包含SEQ ID No:37或由SEQ ID No:37组成的CDR-L2结构域，以及包含或由SEQ ID No:37组成的CDR-L3结构域SEQ ID No:38。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：由包含SEQ ID No:34或由SEQ ID No:34组成的核酸序列编码的重链可变区和由包含SEQ ID No:43或由SEQ ID No:43组成的核酸序列编码的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：由包含SEQ ID No:35或由SEQ ID No:35组成的核酸序列编码的重链可变区和由包含SEQ ID No:44或由SEQ ID No:44组成的核酸序列编码的轻链可变区。
随后，发明人开始制备4-H3的人源化抗体，人源化抗体的序列如图10所示。除非另有说明，人源化抗体的六个CDR序列与亲本抗体4-H3的六个CDR序列相同。
4-H3_亲本(hIgG1)
在一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为4-H3_亲本(hIgG1)。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:159所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:43所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:159或由SEQ ID No:159组成的重链可变区和包含SEQ ID No:43或由SEQ ID No:43组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:157所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:157或由SEQ ID No:157组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
4-H3_亲本(hIgG1-L234A-L235A-P329G)
另外，在另一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为4-H3_亲本(hIgG1-L234A-L235A-P329G)。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:159所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:43所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:159或由SEQ ID No:159组成的重链可变区和包含SEQ ID No:43或由SEQ ID No:43组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:162所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:162或由SEQ ID No:162组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
4-H3_亲本(hIgG1-Fab)
另外，在另一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为4-H3_亲本(hIgG1-Fab)。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:159所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:43所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:159或由SEQ ID No:159组成的重链可变区和包含SEQ ID No:43或由SEQ ID No:43组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:163所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:163或由SEQ ID No:163组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
4-H3_H0(hIgG1)
另外，在另一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为4-H3_H0(hIgG1)。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H1结构域，其包含或者由基本上如SEQID No:164所示的序列或其变体或片段组成。优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H2结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:28所示的序列或其变体或片段组成。优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H3结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:29所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L1结构域，其包含或者由基本上如SEQID No:36所示的序列或其变体或片段组成。优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L2结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:37所示的序列或其变体或片段组成。优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L3结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:38所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:164或由SEQ ID No:164组成的CDR-H1结构域、包含SEQ ID No:28或由SEQ ID No:28组成的CDR-H2结构域、包含SEQID No:29或由SEQ ID No:29组成的CDR-H3结构域、包含SEQ ID No:36或由SEQ ID No:36组成的CDR-L1结构域、包含SEQ ID No:37或由SEQ ID No:37组成的CDR-L2结构域和包含SEQID No:38或由SEQ ID No:38组成的CDR-L3结构域。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:165所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:43所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:165或由SEQ ID No:165组成的重链可变区和包含SEQ ID No:43或由SEQ ID No:43组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:157所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:157或由SEQ ID No:157组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
4-H3_H1(hIgG1)
另外，在另一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为4-H3_H1(hIgG1)。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:194所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:43所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:194或由SEQ ID No:194组成的重链可变区和包含SEQ ID No:43或由SEQ ID No:43组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:157所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:157或由SEQ ID No:157组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
4-H3_H2(hIgG1)
另外，在另一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为4-H3_H2(hIgG1)。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:166所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:43所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:166或由SEQ ID No:166组成的重链可变区和包含SEQ ID No:43或由SEQ ID No:43组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:157所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:157或由SEQ ID No:157组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
4-H3_H3(hIgG1)
另外，在另一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为4-H3_H3(hIgG1)。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:167所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:43所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:167或由SEQ ID No:167组成的重链可变区和包含SEQ ID No:43或由SEQ ID No:43组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:157所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:157或由SEQ ID No:157组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
4-H3_H4(hIgG1)
另外，在另一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为4-H3_H4(hIgG1)。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:168所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:43所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:168或由SEQ ID No:168组成的重链可变区和包含SEQ ID No:43或由SEQ ID No:43组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:157所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:157或由SEQ ID No:157组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
4-H3_H5(hIgG1)
另外，在另一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为4-H3_H5(hIgG1)。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:169所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:43所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:169或由SEQ ID No:169组成的重链可变区和包含SEQ ID No:43或由SEQ ID No:43组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:157所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:157或由SEQ ID No:157组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
4-H3_H6(hIgG1)
另外，在另一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为4-H3_H6(hIgG1)。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:170所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:43所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:170或由SEQ ID No:170组成的重链可变区和包含SEQ ID No:43或由SEQ ID No:43组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:157所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:157或由SEQ ID No:157组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
4-H3_H7(hIgG1)
另外，在另一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为4-H3_H7(hIgG1)。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:171所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:43所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:171或由SEQ ID No:171组成的重链可变区和包含SEQ ID No:43或由SEQ ID No:43组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:157所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:157或由SEQ ID No:157组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
4-H3_H8(hIgG1)
另外，在另一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为4-H3_H8(hIgG1)。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:172所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:43所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:172或由SEQ ID No:172组成的重链可变区和包含SEQ ID No:43或由SEQ ID No:43组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:157所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:157或由SEQ ID No:157组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
4-H3_L0(hIgG1K)
另外，在另一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为4-H3_L0(hIgG1K)。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:159所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:185所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:159或由SEQ ID No:159组成的重链可变区和包含SEQ ID No:185或由SEQ ID No:185组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:157所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:157或由SEQ ID No:157组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
4-H3_L1(hIgG1K)
另外，在另一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为4-H3_L1(hIgG1K)。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:159所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:186所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:159或由SEQ ID No:159组成的重链可变区和包含SEQ ID No:186或由SEQ ID No:186组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:157所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:157或由SEQ ID No:157组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
4-H3_H8_L1
另外，在另一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为4-H3_H8_L1。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:172所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:186所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:172或由SEQ ID No:172组成的重链可变区和包含SEQ ID No:186或由SEQ ID No:186组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:157所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:157或由SEQ ID No:157组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
4-H3_H8_L0
另外，在另一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为4-H3_H8_L0。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:172所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:185所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:172或由SEQ ID No:172组成的重链可变区和包含SEQ ID No:185或由SEQ ID No:185组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:157所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:157或由SEQ ID No:157组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
4-H3_H7_L1
另外，在另一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为4-H3_H7_L1。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:171所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:186所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:171或由SEQ ID No:171组成的重链可变区和包含SEQ ID No:186或由SEQ ID No:186组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:157所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:157或由SEQ ID No:157组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
4-H3_H7_L0 rep
另外，在另一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为4-H3_H7_L0 rep。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:171所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:185所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:171或由SEQ ID No:171组成的重链可变区和包含SEQ ID No:185或由SEQ ID No:185组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:157所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:157或由SEQ ID No:157组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
4-H3_H6_L1
另外，在另一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为4-H3_H6_L1。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:170所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:186所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:170或由SEQ ID No:170组成的重链可变区和包含SEQ ID No:186或由SEQ ID No:186组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:157所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:157或由SEQ ID No:157组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
4-H3_H6_L0
另外，在另一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为4-H3_H6_L0。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:170所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:185所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:170或由SEQ ID No:170组成的重链可变区和包含SEQ ID No:185或由SEQ ID No:185组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:157所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:157或由SEQ ID No:157组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
4-H3_H5_L1
另外，在另一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为4-H3_H5_L1。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:169所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:186所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:169或由SEQ ID No:169组成的重链可变区和包含SEQ ID No:186或由SEQ ID No:186组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:157所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:157或由SEQ ID No:157组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
4-H3_H5_L0
另外，在另一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为4-H3_H5_L0。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:169所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:185所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:169或由SEQ ID No:169组成的重链可变区和包含SEQ ID No:185或由SEQ ID No:185组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:157所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:157或由SEQ ID No:157组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
4-H3_H4_L1
另外，在另一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为4-H3_H4_L1。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:168所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:186所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:168或由SEQ ID No:168组成的重链可变区和包含SEQ ID No:186或由SEQ ID No:186组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:157所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:157或由SEQ ID No:157组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
4-H3_H4_L0
另外，在另一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为4-H3_H4_L0。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:168所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:185所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:168或由SEQ ID No:168组成的重链可变区和包含SEQ ID No:185或由SEQ ID No:185组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:157所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:157或由SEQ ID No:157组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
4-H3_H3_L1
另外，在另一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为4-H3_H3_L1。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:167所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:186所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:167或由SEQ ID No:167组成的重链可变区和包含SEQ ID No:186或由SEQ ID No:186组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:157所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:157或由SEQ ID No:157组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
4-H3_H3_L0
另外，在另一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为4-H3_H3_L0。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:167所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:185所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:167或由SEQ ID No:167组成的重链可变区和包含SEQ ID No:185或由SEQ ID No:185组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:157所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:157或由SEQ ID No:157组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
4-H3_H2_L1
另外，在另一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为4-H3_H2_L1。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:166所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:186所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:166或由SEQ ID No:166组成的重链可变区和包含SEQ ID No:186或由SEQ ID No:186组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:157所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:157或由SEQ ID No:157组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
4-H3_H2_L0
另外，在另一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为4-H3_H2_L0。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:166所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:185所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:166或由SEQ ID No:166组成的重链可变区和包含SEQ ID No:185或由SEQ ID No:185组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:157所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:157或由SEQ ID No:157组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
4-H3_H1_L1
另外，在另一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为4-H3_H1_L1。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:194所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:186所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:194或由SEQ ID No:194组成的重链可变区和包含SEQ ID No:186或由SEQ ID No:186组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:157所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:157或由SEQ ID No:157组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
4-H3_H1_L0
另外，在另一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为4-H3_H1_L0。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:194所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:185所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:194或由SEQ ID No:194组成的重链可变区和包含SEQ ID No:185或由SEQ ID No:185组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:157所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:157或由SEQ ID No:157组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
4-H3_H0_L1 rep
另外，在另一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为4-H3_H0_L1 rep。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H1结构域，其包含或者由基本上如SEQID No:164所示的序列或其变体或片段组成。优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H2结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:28所示的序列或其变体或片段组成。优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H3结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:29所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L1结构域，其包含或者由基本上如SEQID No:36所示的序列或其变体或片段组成。优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L2结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:37所示的序列或其变体或片段组成。优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L3结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:38所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，所述抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:164或由SEQ ID No:164组成的CDR-H1结构域、包含SEQ ID No:28或由SEQ ID No:28组成的CDR-H2结构域、包含SEQ ID No:29或由SEQ ID No:29组成的CDR-H3结构域、包含SEQ ID No:36或由SEQ ID No:36组成的CDR-L1结构域、包含SEQ ID No:37或由SEQ ID No:37组成的CDR-L2结构域和包含SEQ ID No:38或由SEQ ID No:38组成的CDR-L3结构域。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:165所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:186所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:165或由SEQ ID No:165组成的重链可变区和包含SEQ ID No:186或由SEQ ID No:186组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:157所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:157或由SEQ ID No:157组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
4-H3_H0_L0
另外，在另一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为4-H3_H0_L0。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H1结构域，其包含或者由基本上如SEQID No:164所示的序列或其变体或片段组成。优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H2结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:28所示的序列或其变体或片段组成。优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H3结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:29所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L1结构域，其包含或者由基本上如SEQID No:36所示的序列或其变体或片段组成。优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L2结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:37所示的序列或其变体或片段组成。优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L3结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:38所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，所述抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:164或由SEQ ID No:164组成的CDR-H1结构域、包含SEQ ID No:28或由SEQ ID No:28组成的CDR-H2结构域、包含SEQ ID No:29或由SEQ ID No:29组成的CDR-H3结构域、包含SEQ ID No:36或由SEQ ID No:36组成的CDR-L1结构域、包含SEQ ID No:37或由SEQ ID No:37组成的CDR-L2结构域和包含SEQ ID No:38或由SEQ ID No:38组成的CDR-L3结构域。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:165所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:185所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:165或由SEQ ID No:165组成的重链可变区和包含SEQ ID No:185或由SEQ ID No:185组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:157所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQIDNo:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:157或由SEQ ID No:157组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
1-D5
在一实施方案中，抗体或其抗原结合片段在本文中称为1-D5。抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:45的CDR-H1结构域，如下：
GFSLNNYI
[SEQ ID No:45]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H1结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:45所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:46的CDR-H2结构域，如下：
ISTGGST
[SEQ ID No:46]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H2结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:46所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:47的CDR-H3结构域，如下：
ARGGSSAGAGFNI
[SEQ ID No:47]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H3结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:47所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:45或由SEQ ID No:45组成的CDR-H1结构域、包含SEQ ID No:46或由SEQ ID No:46组成的CDR-H2结构域和/或包含SEQID No:47或由SEQ ID No:47组成的CDR-H3结构域。然而，优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:45或由SEQ ID No:45组成的CDR-H1结构域、包含SEQ ID No:46或由SEQID No:46组成的CDR-H2结构域和包含SEQ ID No:47或由SEQ ID No:47组成的CDR-H3结构域。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:48的FR-H1结构域，如下：
QQQLVESGGRLVTPGTPLTLTCAVS
[SEQ ID No:48]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含FR-H1结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:48所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:49的FR-H2结构域，如下：
MGWVRQAPGKGLEY IGI
[SEQ ID No:49]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含FR-H2结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:49所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:50的FR-H3结构域，如下：
YYASWAKGRFTISRTSTTMDLKMTSLTTEDTATYFC
[SEQ ID No:5o]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含FR-H3结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:50所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:51的FR-H4结构域，如下：
WGPGTLVTVSS
[SEQ ID No:51]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含FR-H4结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:51所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:48或由SEQ ID No:48组成的FR-H1结构域、包含SEQ ID No:49或由SEQ ID No:49组成的FR-H2结构域、包含SEQ IDNo:50或由SEQ ID No:50组成的FR-H3结构域和/或包含SEQ ID No:51或由SEQ ID No:51组成的FR-H4结构域。然而，优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:48或由SEQID No:48组成的FR-H1结构域、包含SEQ ID No:49或由SEQ ID No:49组成的FR-H2结构域、包含SEQ ID No:50或由SEQ ID No:50组成的FR-H3结构域和包含SEQ ID No:51或由SEQ IDNo:51组成的FR-H4结构域。
抗体或其抗原结合片段可以包含如本文提供的SEQ ID No:52所示的重链可变(VH)序列，如下：
QQQLVESGGRLVTPGTPLTLTCAVSGFSLNNYIMGWVRQAPGKGLEYIGIISTGGSTYYASWAKGRFTISRTSTTMDLKMTSLTTEDTA
TYFCARGGSSAGAGFNIWGPGTLVTVSS
[SEQ ID No:52]
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:52所示的序列或其变体或片段组成。
编码重链可变(VH)区的核苷酸序列的一实施方案在本文中称为SEQ ID No:53，如下：CAGCAGCAGCTGGTGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTAACCTGCGCAGTCTCTGGATTTTCCCTCAATAACTACATCATGGGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATACATCGGAATCATTAGTACTGGTGGTAGCACATACTACGCGAGCTGGGCAAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAACCTCGACCACGATGGATCTGAAAATGACCAGTCTGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGGGGGTAGTAGTGCTGGTGCGGGATTTAATATCTGGGGCCCGGGCACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
[SEQ ID No：53]
优选地，抗体或其抗原结合片段包含由基本上如SEQ ID No:53所示的核酸序列或其变体或片段编码的重链可变(VH)区。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:54的CDR-L1结构域，如下：
QSINSG
[SEQ ID No:54]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L1结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:54所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:55的CDR-L2结构域，如下：
KAS
[SEQ ID No:55]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L2结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:55所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:56的CDR-L3结构域，如下：
QSYHYISANGAT
[SEQ ID No:56]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L3结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:56所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:54或由SEQ ID No:54组成的CDR-L1结构域、包含SEQ ID No:55或由SEQ ID No:55组成的CDR-L2结构域和/或包含SEQID No:56或由SEQ ID No:56组成的CDR-L3结构域。然而，优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:54或由SEQ ID No:54组成的CDR-L1结构域、包含SEQ ID No:55或由SEQID No:55组成的CDR-L2结构域和包含SEQ ID No:56或由SEQ ID No:56组成的CDR-L3结构域。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:57的FR-L1结构域，如下：
DIVMTQTPSSVSAAVGDTVTIQCQAS
[SEQ ID No:57]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含FR-L1结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:57所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:58的FR-L2结构域，如下：
LAWYQQKPGQPPKRLIY
[SEQ ID No:58]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含FR-L2结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:58所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:59的FR-L3结构域，如下：
TLASGVPSRFRGSGSGTDFTLTISDLECADAATYYC
[SEQ ID No:59]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含FR-L3结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:59所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:60的FR-L4结构域，如下：
FGGGTEVVVE
[SEQ ID No:6o]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含FR-L4结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:60所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:57或由SEQ ID No:57组成的FR-L1结构域、包含SEQ ID No:58或由SEQ ID No:58组成的FR-L2结构域、包含SEQ IDNo:59或由SEQ ID No:59组成的FR-L3结构域和/或包含SEQ ID No:60或由SEQ ID No:60组成的FR-L4结构域。然而，优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:57或由SEQID No:57组成的FR-L1结构域、包含SEQ ID No:58或由SEQ ID No:58组成的FR-L2结构域、包含SEQ ID No:59或由SEQ ID No:59组成的FR-L3结构域和包含SEQ ID No:60或由SEQ IDNo:60组成的FR-L4结构域。
抗体或其抗原结合片段可以包含如本文提供的SEQ ID No:61所示的轻链可变(VL)序列，如下：
DIVMTQTPSSVSAAVGDTVTIQCQASQSINSGLAWYQQKPGQPPKRLIYKASTLASGVPSRFRGSGSGTDFTLTISDLECADAATYYCQ
SYHYISANGATFGGGTEVVVE
[SEQ ID No:61]
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区，其包含或者由基本上如SEQ IDNo:61所示的序列或其变体或片段组成。
编码轻链可变(VL)区的核苷酸序列的一实施方案在本文中称为SEQ ID No:62，如下：
GATATTGTTATGACCCAGACTCCCTCCTCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAGACACAGTCACCATCCAGTGCCAGGCCAGTCAGAGCATTAATAGTGGTTTGGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCGCCTGATCTACAAGGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAGAGGCAGTGGATCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCGACCTGGAGTGTGCCGATGCTGCCACTTACTACTGTCAAAGCTATCATTATATTAGTGCTAATGGTGCTACTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTCGTCGAA
[SEQ ID No:62]
优选地，抗体或其抗原结合片段包含由基本上如SEQ ID No:62所示的核酸序列或其变体或片段编码的轻链可变(VL)区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含至少一个、至少两个、至少三个、至少四个、至少五个或至少六个CDR。优选地，抗体或其抗原结合片段至少包含CDR-H3。
优选地，所述抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:45或由SEQ ID No:45组成的CDR-H1结构域、包含SEQ ID No:46或由SEQ ID No:46组成的CDR-H2结构域、包含SEQID No:47或由SEQ ID No:47组成的CDR-H3结构域、包含SEQ ID No:54或由SEQ ID No:54组成的CDR-L1结构域、包含SEQ ID No:55或由SEQ ID No:55组成的CDR-L2结构域和包含SEQID No:56或由SEQ ID No:56组成的CDR-L3结构域。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:52或由SEQ ID No:52组成的重链可变区和包含SEQ ID No:61或由SEQ ID No:61组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：由包含SEQ ID No:53或由SEQ ID No:53组成的核酸序列编码的重链可变区和由包含SEQ ID No:62或由SEQ ID No:62组成的核酸序列编码的轻链可变区。
随后，发明人开始制备1-D5的人源化抗体，人源化抗体的序列如图10所示。除非另有说明，人源化抗体的六个CDR序列与亲本抗体1-D5的六个CDR序列相同。
1-D5_亲本(hIgG1)
在一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为1-D5_亲本(hIgG1)。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:52所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:61所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:52或由SEQ ID No:52组成的重链可变区和包含SEQ ID No:61或由SEQ ID No:61组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:157所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:157或由SEQ ID No:157组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
1-D5_亲本(hIgG1-L234A-L235A-P329G)
另外，在另一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为1-D5_亲本(hIgG1-L234A-L235A-P329G)。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:52所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:61所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:52或由SEQ ID No:52组成的重链可变区和包含SEQ ID No:61或由SEQ ID No:61组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:162所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:162或由SEQ ID No:162组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
1-D5_亲本(hIgG1-Fab)
另外，在另一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为1-D5_亲本(hIgG1-Fab)。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:52所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:61所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:52或由SEQ ID No:52组成的重链可变区和包含SEQ ID No:61或由SEQ ID No:61组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:163所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:163或由SEQ ID No:163组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
1-D5_H0(hIgG1)
另外，在另一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为1-D5_H0(hIgG1)。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H1结构域，其包含或者由基本上如SEQID No:173所示的序列或其变体或片段组成。优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H2结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:46所示的序列或其变体或片段组成。优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H3结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:47所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L1结构域，其包含或者由基本上如SEQID No:54所示的序列或其变体或片段组成。优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L2结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:55所示的序列或其变体或片段组成。优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L3结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:56所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:173或由SEQ ID No:173组成的CDR-H1结构域、包含SEQ ID No:46或由SEQ ID No:46组成的CDR-H2结构域、包含SEQID No:47或由SEQ ID No:47组成的CDR-H3结构域、包含SEQ ID No:54或由SEQ ID No:54组成的CDR-L1结构域、包含SEQ ID No:55或由SEQ ID No:55组成的CDR-L2结构域和包含SEQID No:56或由SEQ ID No:56组成的CDR-L3结构域。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:174所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:61所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:174或由SEQ ID No:174组成的重链可变区和包含SEQ ID No:61或由SEQ ID No:61组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:157所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:157或由SEQ ID No:157组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
1-D5_H1(hIgG1)
另外，在另一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为1-D5_H1(hIgG1)。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:175所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:61所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:175或由SEQ ID No:175组成的重链可变区和包含SEQ ID No:61或由SEQ ID No:61组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:157所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:157或由SEQ ID No:157组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
1-D5_H2(hIgG1)
另外，在另一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为1-D5_H2(hIgG1)。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:176所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:61所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:176或由SEQ ID No:176组成的重链可变区和包含SEQ ID No:61或由SEQ ID No:61组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:157所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:157或由SEQ ID No:157组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
1-D5_L0(hIgG1K)
另外，在另一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为1-D5_L0(hIgG1K)。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:52所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:187所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:52或由SEQ ID No:52组成的重链可变区和包含SEQ ID No:187或由SEQ ID No:187组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:157所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:157或由SEQ ID No:157组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
1-D5_L1(hIgG1K)
另外，在另一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为1-D5_L1(hIgG1K)。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:52所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:188所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:52或由SEQ ID No:52组成的重链可变区和包含SEQ ID No:188或由SEQ ID No:188组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:157所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:157或由SEQ ID No:157组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
1-D5_H2_L1
另外，在另一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为1-D5_H2_L1。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:176所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:188所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:176或由SEQ ID No:176组成的重链可变区和包含SEQ ID No:188或由SEQ ID No:188组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:157所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:157或由SEQ ID No:157组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
1-D5_H2_L0
另外，在另一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为1-D5_H2_L0。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:176所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:187所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:176或由SEQ ID No:176组成的重链可变区和包含SEQ ID No:187或由SEQ ID No:187组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:157所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:157或由SEQ ID No:157组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
1-D5_H1_L1
另外，在另一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为1-D5_H1_L1。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:175所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:188所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:175或由SEQ ID No:175组成的重链可变区和包含SEQ ID No:188或由SEQ ID No:188组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:157所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:157或由SEQ ID No:157组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
1-D5_H1_L0
另外，在另一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为1-D5_H1_L0。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:175所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:187所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:175或由SEQ ID No:175组成的重链可变区和包含SEQ ID No:187或由SEQ ID No:187组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:157所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:157或由SEQ ID No:157组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
1-D5_H0_L1
另外，在另一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为1-D5_H0_L1。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H1结构域，其包含或者由基本上如SEQID No:173所示的序列或其变体或片段组成。优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H2结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:46所示的序列或其变体或片段组成优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H3结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:47所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L1结构域，其包含或者由基本上如SEQID No:54所示的序列或其变体或片段组成。优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L2结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:55所示的序列或其变体或片段组成。优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L3结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:56所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:173或由SEQ ID No:173组成的CDR-H1结构域、包含SEQ ID No:46或由SEQ ID No:46组成的CDR-H2结构域、包含SEQID No:47或由SEQ ID No:47组成的CDR-H3结构域、包含SEQ ID No:54或由SEQ ID No:54组成的CDR-L1结构域、包含SEQ ID No:55或由SEQ ID No:55组成的CDR-L2结构域和包含SEQID No:56或由SEQ ID No:56组成的CDR-L3结构域。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:174所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:188所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:174或由SEQ ID No:174组成的重链可变区和包含SEQ ID No:188或由SEQ ID No:188组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:157所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:157或由SEQ ID No:157组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
1-D5_H0_L0
另外，在另一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为1-D5_H0_L0。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H1结构域，其包含或者由基本上如SEQID No:173所示的序列或其变体或片段组成。优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H2结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:46所示的序列或其变体或片段组成。优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H3结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:47所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L1结构域，其包含或者由基本上如SEQID No:54所示的序列或其变体或片段组成。优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L2结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:55所示的序列或其变体或片段组成。优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L3结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:56所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，所述抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:173或由SEQ ID No:173组成的CDR-H1结构域、包含SEQ ID No:46或由SEQ ID No:46组成的CDR-H2结构域、包含SEQ ID No:47或由SEQ ID No:47组成的CDR-H3结构域、包含SEQ ID No:54或由SEQ ID No:54组成的CDR-L1结构域、包含SEQ ID No:55或由SEQ ID No:55组成的CDR-L2结构域和包含SEQ ID No:56或由SEQ ID No:56组成的CDR-L3结构域。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:174所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:187所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:174或由SEQ ID No:174组成的重链可变区和包含SEQ ID No:187或由SEQ ID No:187组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:157所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:157或由SEQ ID No:157组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
3-H9
在一实施方案中，抗体或其抗原结合片段在本文中称为3-H9。抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:63的CDR-H1结构域，如下：
GFSLSNYD
[SEQ ID No:63]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H1结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:63所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可以包含如本文提供的SEQ ID No:64的CDR-H2结构域，如下：
IHAIGIT
[SEQ ID No:64]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H2结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:64所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可以包含如本文提供的SEQ ID No:65的CDR-H3结构域，如下：
ARGLVDLNM
[SEQ ID No:65]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H3结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:65所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:63或由SEQ ID No:63组成的CDR-H1结构域、包含SEQ ID No:64或由SEQ ID No:64组成的CDR-H2结构域和/或包含SEQID No:65或由SEQ ID No:65组成的CDR-H3结构域。然而，优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:63或由SEQ ID No:63组成的CDR-H1结构域、包含SEQ ID No:64或由SEQID No:64组成的CDR-H2结构域和包含SEQ ID No:65或由SEQ ID No:65组成的CDR-H3结构域。
抗体或其抗原结合片段可以包含如本文提供的SEQ ID No:66的FR-H1结构域，如下：
SQSLEESGGRLVTPGTPLTLTCSVS
[SEQ ID No:66]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含FR-H1结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:66所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:67的FR-H2结构域，如下：
MSWVRQAPGKGLEWIGS
[SEQ ID No:67]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含FR-H2结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:67所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:68的FR-H3结构域，如下：
YYANWAEGRFTISKTSTTVDLKMTSLTTEDTATYFC
[SEQ ID No:68]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含FR-H3结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:68所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:69的FR-H4结构域，如下：
WGPGTLVTVSS
[SEQ ID No:69]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含FR-H4结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:69所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:66或由SEQ ID No:66组成的FR-H1结构域、包含SEQ ID No:67或由SEQ ID No:67组成的FR-H2结构域、包含SEQ IDNo:68或由SEQ ID No:68组成的FR-H3结构域和/或包含SEQ ID No:69或由SEQ ID No:69组成的FR-H4结构域。然而，优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:66或由SEQID No:66组成的FR-H1结构域、包含SEQ ID No:67或由SEQ ID No:67组成的FR-H2结构域、包含SEQ ID No:68或由SEQ ID No:68组成的FR-H3结构域和包含SEQ ID No:69或由SEQ IDNo:69组成的FR-H4结构域。
抗体或其抗原结合片段可包含如本文提供的SEQ ID No:70所示的重链可变(VH)序列，如下：
QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCSVSGFSLSNYDMSWVRQAPGKGLEWIGSIHAIGITYYANWAEGRFTISKTSTTVDLKMTSLTTEDTAT
YFCARGLVDLNMWGPGTLVTVSS
[SEQ ID No:70]
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:70所示的序列或其变体或片段组成。
编码重链可变(VH)区的核苷酸序列的一实施方案在本文中称为SEQ ID No:71，如下：
CAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCTTGACACTCACCTGTTCAGTCTCTGGATTCTCCCTCAGCAACTACGACATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGACTGGAATGGATCGGGTCCATACATGCTATTGGTATCACATACTACGCGAACTGGGCGGAAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCTGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGGGCTGGTAGATTTGAACATGTGGGGCCCGGGCACCCTCGTCACTGTCTCTTCA
[SEQ ID No:71]
优选地，抗体或其抗原结合片段包含由基本上如SEQ ID No:71所示的核酸序列或其变体或片段编码的重链可变(VH)区。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:72的CDR-L1结构域，如下：
QSVYSNNL
[SEQ ID No:72]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L1结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:72所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:73的CDR-L2结构域，如下：
DAS
[SEQ ID No:73]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L2结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:73所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:74的CDR-L3结构域，如下：
QGSYYSSGWYNT
[SEQ ID No:74]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L3结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:74所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:72或由SEQ ID No:72组成的CDR-L1结构域、包含SEQ ID No:73或由SEQ ID No:73组成的CDR-L2结构域和/或包含SEQID No:74或由SEQ ID No:74组成的CDR-L3结构域。然而，优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:72或由SEQ ID No:72组成的CDR-L1结构域、包含SEQ ID No:73或由SEQID No:73组成的CDR-L2结构域和包含SEQ ID No:74或由SEQ ID No:74组成的CDR-L3结构域。
抗体或其抗原结合片段可以包含SEQ ID No:75的FR-L1结构域，其在本文中提供，如下：
AIKMTQTPSSVSVAVGGTVTINCQSS
[SEQ ID No:75]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含FR-L1结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:75所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:76的FR-L2结构域，如下：
LSWYQQKPGQPPKLLIY
[SEQ ID No:76]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含FR-L2结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:76所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:77的FR-L3结构域，如下：
TLESGVPSRFKGSGSGTQFTLTISGVQCEDAATYYC
[SEQ ID No:77]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含FR-L3结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:77所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:78的FR-L4结构域，如下：
FGGGTEVVVE
[SEQ ID No:78]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含FR-L4结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:78所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:75或由SEQ ID No:75组成的FR-L1结构域、包含SEQ ID No:76或由SEQ ID No:76组成的FR-L2结构域、包含SEQ IDNo:77或由SEQ ID No:77组成的FR-L3结构域和/或包含SEQ ID No:78或由SEQ ID No:78组成的FR-L4结构域。然而，优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:75或由SEQID No:75组成的FR-L1结构域、包含SEQ ID No:76或由SEQ ID No:76组成的FR-L2结构域、包含SEQ ID No:77或由SEQ ID No:77组成的FR-L3结构域和包含SEQ ID No:78或由SEQ IDNo:78组成的FR-L4结构域。
抗体或其抗原结合片段可包含如本文提供的SEQ ID No:79所示的轻链可变(VL)序列，如下：
AIKMTQTPSSVSVAVGGTVTINCQSSQSVYSNNLLSWYQQKPGQPPKLLIYDASTLESGVPSRFKGSGSGTQFTLTISGVQCEDAATYY
CQGSYYSSGWYNTFGGGTEVVVE
[SEQ ID No:79]
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区，其包含或者由基本上如SEQ IDNo:79所示的序列或其变体或片段组成。
编码轻链可变(VL)区的核苷酸序列的一实施方案在本文中称为SEQ ID No:80，如下：
GCTATTAAAATGACCCAGACTCCATCGTCCGTGTCTGTAGCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAATTGCCAGTCCAGTCAGAGTGTTTATAGTAACAACCTCTTATCTTGGTACCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCTTGATCTACGATGCATCCACTCTGGAATCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGGCGTGCAGTGTGAGGATGCTGCCACTTACTACTGTCAAGGCAGTTATTATAGTAGTGGTTGGTACAATACTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTCGTCGAA
[SEQ ID No:80]
优选地，抗体或其抗原结合片段包含由基本上如SEQ ID No:80所示的核酸序列或其变体或片段编码的轻链可变(VL)区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含至少一个、至少两个、至少三个、至少四个、至少五个或至少六个CDR。优选地，抗体或其抗原结合片段至少包含CDR-H3。
优选地，所述抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:63或由SEQ ID No:63组成的CDR-H1结构域、包含SEQ ID No:64或由SEQ ID No:64组成的CDR-H2结构域、包含SEQID No:65或由SEQ ID No:65组成的CDR-H3结构域、包含SEQ ID No:72或由SEQ ID No:72组成的CDR-L1结构域、包含SEQ ID No:73或由SEQ ID No:73组成的CDR-L2结构域和包含SEQID No:74或由SEQ ID No:74组成的CDR-L3结构域。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：由包含SEQ ID No:70或由SEQ ID No:70组成的核酸序列编码的重链可变区和由包含SEQ ID No:79或由SEQ ID No:79组成的核酸序列编码的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：由包含SEQ ID No:71或由SEQ ID No:71组成的核酸序列编码的重链可变区和由包含SEQ ID No:80或由SEQ ID No:80组成的核酸序列编码的轻链可变区。
随后，发明人开始制备3-H9的人源化抗体，人源化抗体的序列如图10所示。除非另有说明，人源化抗体的六个CDR序列与亲本抗体3-H9的六个CDR序列相同。
3-H9_亲本(hIgG1)
在一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为3-H9_亲本(hIgG1)。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:160所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:79所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:160或由SEQ ID No:160组成的重链可变区和包含SEQ ID No:79或由SEQ ID No:79组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:157所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:157或由SEQ ID No:157组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
3-H9_亲本(hIgG1-L234A-L235A-P329G)
另外，在另一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为3-H9_亲本(hIgG1-L234A-L235A-P329G)。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:160所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:79所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:160或由SEQ ID No:160组成的重链可变区和包含SEQ ID No:79或由SEQ ID No:79组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:162所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:162或由SEQ ID No:162组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
3-H9_亲本(hIgG1-Fab)
另外，在另一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为3-H9_亲本(hIgG1-Fab)。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:160所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:79所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:160或由SEQ ID No:160组成的重链可变区和包含SEQ ID No:79或由SEQ ID No:79组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:163所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:163或由SEQ ID No:163组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
3-H9_H0(hIgG1)
另外，在另一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为3-H9_H0(hIgG1)。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H1结构域，其包含或者由基本上如SEQID No:177所示的序列或其变体或片段组成。优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H2结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:64所示的序列或其变体或片段组成。优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H3结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:65所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L1结构域，其包含或者由基本上如SEQID No:72所示的序列或其变体或片段组成。优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L2结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:73所示的序列或其变体或片段组成。优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L3结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:74所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，所述抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:177或由SEQ ID No:177组成的CDR-H1结构域、包含SEQ ID No:64或由SEQ ID No:64组成的CDR-H2结构域、包含SEQ ID No:65或由SEQ ID No:65组成的CDR-H3结构域、包含SEQ ID No:72或由SEQ ID No:72组成的CDR-L1结构域、包含SEQ ID No:73或由SEQ ID No:73组成的CDR-L2结构域和包含SEQ ID No:74或由SEQ ID No:74组成的CDR-L3结构域。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:178所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:79所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:178或由SEQ ID No:178组成的重链可变区和包含SEQ ID No:79或由SEQ ID No:79组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:157所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:157或由SEQ ID No:157组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
3-H9_H1(hIgG1)
另外，在另一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为3-H9_H1(hIgG1)。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:179所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:79所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:179或由SEQ ID No:179组成的重链可变区和包含SEQ ID No:79或由SEQ ID No:79组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:157所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:157或由SEQ ID No:157组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
3-H9_H2(hIgG1)
另外，在另一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为3-H9_H2(hIgG1)。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:180所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:79所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:180或由SEQ ID No:180组成的重链可变区和包含SEQ ID No:79或由SEQ ID No:79组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:157所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:157或由SEQ ID No:157组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
3-H9_L0(hIgG1K)
另外，在另一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为3-H9_L0(hIgG1K)。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:160所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:189所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:160或由SEQ ID No:160组成的重链可变区和包含SEQ ID No:189或由SEQ ID No:189组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:157所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:157或由SEQ ID No:157组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
3-H9_H2_L0
另外，在另一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为3-H9_H2_L0。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:180所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:189所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:180或由SEQ ID No:180组成的重链可变区和包含SEQ ID No:189或由SEQ ID No:189组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:157所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:157或由SEQ ID No:157组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
3-H9_H1_L0
另外，在另一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为3-H9_H1_L0。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:179所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:189所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:179或由SEQ ID No:179组成的重链可变区和包含SEQ ID No:189或由SEQ ID No:189组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:157所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:157或由SEQ ID No:157组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
3-H9_H0_L0
另外，在另一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为3-H9_H0_L0。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H1结构域，其包含或者由基本上如SEQID No:177所示的序列或其变体或片段组成。优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H2结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:64所示的序列或其变体或片段组成。优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H3结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:65所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L1结构域，其包含或者由基本上如SEQID No:72所示的序列或其变体或片段组成。优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L2结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:73所示的序列或其变体或片段组成。优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L3结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:74所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:177或由SEQ ID No:177组成的CDR-H1结构域、包含SEQ ID No:64或由SEQ ID No:64组成的CDR-H2结构域、包含SEQID No:65或由SEQ ID No:65组成的CDR-H3结构域、包含SEQ ID No:72或由SEQ ID No:72组成的CDR-L1结构域、包含SEQ ID No:73或由SEQ ID No:73组成的CDR-L2结构域和包含SEQID No:74或由SEQ ID No:74组成的CDR-L3结构域。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:178所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:189所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:178或由SEQ ID No:178组成的重链可变区和包含SEQ ID No:189或由SEQ ID No:189组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:157所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:157或由SEQ ID No:157组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
1-G5
在一实施方案中，抗体或其抗原结合片段在本文中称为1-G5。抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:81的CDR-H1结构域，如下：
GFSLSSYD
[SEQ ID No:81]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H1结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:81所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可以包含本文提供的SEQ ID No:82的CDR-H2结构域，如下：
IHATGIT
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H2结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:82所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可以包含本文提供的SEQ ID No:83的CDR-H3结构域，如下：
ARGLVDLNM
[SEQ ID No:83]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H3结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:83所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:81或由SEQ ID No:81组成的CDR-H1结构域、包含SEQ ID No:82或由SEQ ID No:82组成的CDR-H2结构域和/或包含SEQID No:83或由SEQ ID No:83组成的CDR-H3结构域。然而，优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:81或由SEQ ID No:81组成的CDR-H1结构域、包含SEQ ID No:82或由SEQID No:82组成的CDR-H2结构域和包含SEQ ID No:83或由SEQ ID No:83组成的CDR-H3结构域。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:84的FR-H1结构域，如下：
SQSLEESGGRLVTPGTPLTLTCSVS
[SEQ ID No:84]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含FR-H1结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:83所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可以包含本文提供的SEQ ID No:85的FR-H2结构域，如下：
MTWVRQAPGKGLEWIGS
[SEQ ID No:85]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含FR-H2结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:85所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:86的FR-H3结构域，如下：
FYANWAKGRFTTSKTSTTVDLKMTSLTTEDTATYFC
[SEQ ID No:86]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含FR-H3结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:86所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可以包含本文提供的SEQ ID No:87的FR-H4结构域，如下：
WGPGTLVTVSS
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含FR-H4结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:87所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:84或由SEQ ID No:84组成的FR-H1结构域、包含SEQ ID No:85或由SEQ ID No:85组成的FR-H2结构域、包含SEQ IDNo:86或由SEQ ID No:86组成的FR-H3结构域和/或包含SEQ ID No:87或由SEQ ID No:87组成的FR-H4结构域。然而，优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:84或由SEQID No:84组成的FR-H1结构域、包含SEQ ID No:85或由SEQ ID No:85组成的FR-H2结构域、包含SEQ ID No:86或由SEQ ID No:86组成的FR-H3结构域和包含SEQ ID No:87或由SEQ IDNo:87组成的FR-H4结构域。
抗体或其抗原结合片段可包含如本文提供的SEQ ID No:88所示的重链可变(VH)序列，如下：
QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCSVSGFSLSSYDMTWVRQAPGKGLEWIGSIHATGITFYANWAKGRFTTSKTSTTVDLKMTSLTTEDTAT
YFCARGLVDLNMWGPGTLVTVSS
[SEQ ID No:88]
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:88所示的序列或其变体或片段组成。
编码重链可变(VH)区的核苷酸序列的一实施方案在本文中称为SEQ ID No:89，如下：
CAGTCGTTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCTTGACACTCACCTGTTCAGTCTCTGGATTCTCCCTCAGCAGCTACGACATGACCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGGTCCATACATGCTACTGGTATCACATTCTACGCGAACTGGGCGAAAGGCCGATTCACCACCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCTGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGGGCTGGTAGATTTGAACATGTGGGGCCCGGGCACCCTCGTCACCGTCTCTTCA
[SEQ ID No:89]
优选地，抗体或其抗原结合片段包含由基本上如SEQ ID No:89所示的核酸序列或其变体或片段编码的重链可变(VH)区。
抗体或其抗原结合片段可以包含本文提供的SEQ ID No:90的CDR-L1结构域，如下：
QSVYNNNY
[SEQ ID No:90]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L1结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:90所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可以包含本文提供的SEQ ID No:91的CDR-L2结构域，如下：
DAS
[SEQ ID No:91]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L2结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:91所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可以包含本文提供的SEQ ID No:92的CDR-L3结构域，如下：
QGSYYSGGWDTA
[SEQ ID No:92]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L3结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:92所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:90或由SEQ ID No:90组成的CDR-L1结构域、包含SEQ ID No:91或由SEQ ID No:91组成的CDR-L2结构域和/或包含SEQID No:92或由SEQ ID No:92组成的CDR-L3结构域。然而，优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:90或由SEQ ID No:90组成的CDR-L1结构域、包含SEQ ID No:91或由SEQID No:91组成的CDR-L2结构域和包含SEQ ID No:92或由SEQ ID No:92组成的CDR-L3结构域。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:93的FR-L1结构域，如下：
DPVMTQTASSVSAAVGGTVTINCQAS
[SEQ ID No:93]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含FR-L1结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:93所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:94的FR-L2结构域，如下：
LSWYQQKPGQPPKLLIY
[SEQ ID No:94]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含FR-L2结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:94所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:95的FR-L3结构域，如下：
TLASGVPSRFSGNGSGTQFTLTISGVQCDDAATYYC
[SEQ ID No:95]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含FR-L3结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:95所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:96的FR-L4结构域，如下：
FGGGTKVVVK
[SEQ ID No:96]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含FR-L4结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:96所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:93或由SEQ ID No:93组成的FR-L1结构域、包含SEQ ID No:94或由SEQ ID No:94组成的FR-L2结构域、包含SEQ IDNo:95或由SEQ ID No:95组成的FR-L3结构域和/或包含SEQ ID No:96或由SEQ ID No:96组成的FR-L4结构域。然而，优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:93或由SEQID No:93组成的FR-L1结构域、包含SEQ ID No:94或由SEQ ID No:94组成的FR-L2结构域、包含SEQ ID No:95或由SEQ ID No:95组成的FR-L3结构域和包含SEQ ID No:96或由SEQ IDNo:96组成的FR-L4结构域。
抗体或其抗原结合片段可包含如本文提供的SEQ ID No:97所示的轻链可变(VL)序列，如下：
DPVMTQTASSVSAAVGGTVTINCQASQSVYNNNYLSWYQQKPGQPPKLLIYDASTLASGVPSRFSGNGSGTQFTLTISGVQCDDAATYY
CQGSYYSGGWDTAFGGGTKVVVK
[SEQ ID No:97]
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区，其包含或者由基本上如SEQ IDNo:97所示的序列或其变体或片段组成。
编码轻链可变(VL)区的核苷酸序列的一实施方案在本文中称为SEQ ID No:98，如下：
GATCCCGTGATGACCCAGACTGCGTCCTCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATAATAACAACTACTTATCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCTTGATCTACGATGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCCCGGTTCAGCGGCAATGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGGCGTACAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCAAGGCAGTTATTATAGTGGTGGTTGGGACACTGCTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGTCGTCAAA
[SEQ ID No:98]
优选地，抗体或其抗原结合片段包含由基本上如SEQ ID No:98所示的核酸序列或其变体或片段编码的轻链可变(VL)区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含至少一个、至少两个、至少三个、至少四个、至少五个或至少六个CDR。优选地，抗体或其抗原结合片段至少包含CDR-H3。
优选地，所述抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:81或由SEQ ID No:81组成的CDR-H1结构域、包含SEQ ID No:82或由SEQ ID No:82组成的CDR-H2结构域、包含SEQID No:83或由SEQ ID No:83组成的CDR-H3结构域、包含SEQ ID No:90或由SEQ ID No:90组成的CDR-L1结构域、包含SEQ ID No:91或由SEQ ID No:91组成的CDR-L2结构域和包含SEQID No:92或由SEQ ID No:92组成的CDR-L3结构域。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：由包含SEQ ID No:88或由SEQ ID No:88组成的核酸序列编码的重链可变区和由包含SEQ ID No:97或由SEQ ID No:97组成的核酸序列编码的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：由包含SEQ ID No:89或由SEQ ID No:89组成的核酸序列编码的重链可变区和由包含SEQ ID No:98或由SEQ ID No:98组成的核酸序列编码的轻链可变区。
随后，发明人开始制备1-G5的人源化抗体，人源化抗体的序列如图10所示。除非另有说明，人源化抗体的六个CDR序列与亲本抗体1-G5的六个CDR序列相同。
1-G5_亲本(hIgG1)
在一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为1-G5_亲本(hIgG1)。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:161所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:97所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:161或由SEQ ID No:161组成的重链可变区和包含SEQ ID No:97或由SEQ ID No:97组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:157所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:157或由SEQ ID No:157组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
1-G5_亲本(hIgG1-L234A-L235A-P329G)
另外，在另一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为1-G5_亲本(hIgG1-L234A-L235A-P329G)。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:161所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:97所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:161或由SEQ ID No:161组成的重链可变区和包含SEQ ID No:97或由SEQ ID No:97组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:162所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:162或由SEQ ID No:162组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
1-G5_亲本(hIgG1-Fab)
另外，在另一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为1-G5_亲本(hIgG1-Fab)。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:161所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:97所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:161或由SEQ ID No:161组成的重链可变区和包含SEQ ID No:97或由SEQ ID No:97组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:163所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:163或由SEQ ID No:163组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
1-G5_H0(hIgG1)
另外，在另一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为1-G5_H0(hIgG1)。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H1结构域，其包含或者由基本上如SEQID No:181所示的序列或其变体或片段组成。优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H2结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:82所示的序列或其变体或片段组成。优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H3结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:83所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L1结构域，其包含或者由基本上如SEQID No:90所示的序列或其变体或片段组成。优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L2结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:91所示的序列或其变体或片段组成。优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L3结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:92所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:181或由SEQ ID No:181组成的CDR-H1结构域、包含SEQ ID No:82或由SEQ ID No:82组成的CDR-H2结构域、包含SEQID No:83或由SEQ ID No:83组成的CDR-H3结构域、包含SEQ ID No:90或由SEQ ID No:90组成的CDR-L1结构域、包含SEQ ID No:91或由SEQ ID No:91组成的CDR-L2结构域和包含SEQID No:92或由SEQ ID No:92组成的CDR-L3结构域。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:182所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:97所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:182或由SEQ ID No:182组成的重链可变区和包含SEQ ID No:97或由SEQ ID No:97组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:157所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:157或由SEQ ID No:157组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
1-G5_H1(hIgG1)
另外，在另一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为1-G5_H1(hIgG1)。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:183所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:97所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:183或由SEQ ID No:183组成的重链可变区和包含SEQ ID No:97或由SEQ ID No:97组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:157所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:157或由SEQ ID No:157组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
1-G5_H2(hIgG1)
另外，在另一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为1-G5_H2(hIgG1)。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:184所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:97所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:184或由SEQ ID No:184组成的重链可变区和包含SEQ ID No:97或由SEQ ID No:97组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:157所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:157或由SEQ ID No:157组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
1-G5_L0(hIgG1K)
另外，在另一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为1-G5_L0(hIgG1K)。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:161所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:192所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:161或由SEQ ID No:161组成的重链可变区和包含SEQ ID No:192或由SEQ ID No:192组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:157所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:157或由SEQ ID No:157组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
1-G5_L1(hIgG1K)
另外，在另一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为1-G5_L1(hIgG1K)。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:161所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:193所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:161或由SEQ ID No:161组成的重链可变区和包含SEQ ID No:193或由SEQ ID No:193组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:157所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:157或由SEQ ID No:157组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
1-G5_H2_L1
另外，在另一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为1-G5_H2_L1。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:184所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:193所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:184或由SEQ ID No:184组成的重链可变区和包含SEQ ID No:193或由SEQ ID No:193组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:157所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:157或由SEQ ID No:157组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
1-G5_H2_L0
另外，在另一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为1-G5_H2_L0。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:184所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:192所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:184或由SEQ ID No:184组成的重链可变区和包含SEQ ID No:192或由SEQ ID No:192组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:157所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:157或由SEQ ID No:157组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
1-G5_H1_L1
另外，在另一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为1-G5_H1_L1。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:183所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:193所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:183或由SEQ ID No:183组成的重链可变区和包含SEQ ID No:193或由SEQ ID No:193组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:157所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:157或由SEQ ID No:157组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
1-G5_H1_L0
另外，在另一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为1-G5_H1_L1。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:183所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:192所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:183或由SEQ ID No:183组成的重链可变区和包含SEQ ID No:192或由SEQ ID No:192组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:157所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:157或由SEQ ID No:157组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
1-G5_H0_L1
另外，在另一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为1-G5_H0_L1。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H1结构域，其包含或者由基本上如SEQID No:181所示的序列或其变体或片段组成。优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H2结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:82所示的序列或其变体或片段组成。优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H3结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:83所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L1结构域，其包含或者由基本上如SEQID No:90所示的序列或其变体或片段组成。优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L2结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:91所示的序列或其变体或片段组成。优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L3结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:92所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:181或由SEQ ID No:181组成的CDR-H1结构域、包含SEQ ID No:82或由SEQ ID No:82组成的CDR-H2结构域、包含SEQID No:83或由SEQ ID No:83组成的CDR-H3结构域、包含SEQ ID No:90或由SEQ ID No:90组成的CDR-L1结构域、包含SEQ ID No:91或由SEQ ID No:91组成的CDR-L2结构域和包含SEQID No:92或由SEQ ID No:92组成的CDR-L3结构域。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:182所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:193所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:182或由SEQ ID No:182组成的重链可变区和包含SEQ ID No:193或由SEQ ID No:193组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:157所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:157或由SEQ ID No:157组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
1-G5_H0_L0
另外，在另一实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段在本文中称为1-G5_H0_L0。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H1结构域，其包含或者由基本上如SEQID No:181所示的序列或其变体或片段组成。优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H2结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:82所示的序列或其变体或片段组成。优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H3结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:83所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L1结构域，其包含或者由基本上如SEQID No:90所示的序列或其变体或片段组成。优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L2结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:91所示的序列或其变体或片段组成。优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L3结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:92所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:181或由SEQ ID No:181组成的CDR-H1结构域、包含SEQ ID No:82或由SEQ ID No:82组成的CDR-H2结构域、包含SEQID No:83或由SEQ ID No:83组成的CDR-H3结构域、包含SEQ ID No:90或由SEQ ID No:90组成的CDR-L1结构域、包含SEQ ID No:91或由SEQ ID No:91组成的CDR-L2结构域和包含SEQID No:92或由SEQ ID No:92组成的CDR-L3结构域。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:182所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含或者由基本上如SEQID No:192所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:182或由SEQ ID No:182组成的重链可变区和包含SEQ ID No:192或由SEQ ID No:192组成的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链恒定(HC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:157所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定(LC)区，其包含或者由基本上如SEQID No:158所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:157或由SEQ ID No:157组成的重链恒定区和包含SEQ ID No:158或由SEQ ID No:158组成的轻链恒定区。
4-H9
在一实施方案中，抗体或其抗原结合片段在本文中称为4-H9。抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:99的CDR-H1结构域，如下：
GFSLNSFA
[SEQ ID No:99]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H1结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:99所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可以包含本文提供的SEQ ID No:100的CDR-H2结构域，如下：
ITVDGHT
[SEQ ID No:100]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H2结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:100所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可以包含本文提供的SEQ ID No:101的CDR-H3结构域，如下：
AREDAGDAGYIYATYNI
[SEQ ID No:101]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H3结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:101所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:99或由SEQ ID No:99组成的CDR-H1结构域、包含SEQ ID No:100或由SEQ ID No:100组成的CDR-H2结构域和/或包含SEQ ID No:101或由SEQ ID No:101组成的CDR-H3结构域。然而，优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:99或由SEQ ID No:99组成的CDR-H1结构域、包含SEQ ID No:100或由SEQ ID No:100组成的CDR-H2结构域和包含SEQ ID No:101或由SEQ ID No:101组成的CDR-H3结构域。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:102的FR-H1结构域，如下：
SQSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTAS
[SEQ ID No:102]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含FR-H1结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:102所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可以包含本文提供的SEQ ID No:103的FR-H2结构域，如下：
MSWVRQAPGKGLEWIGI
[SEQ ID No:103]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含FR-H2结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:103所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可以包含本文提供的SEQ ID No:104的FR-H3结构域，如下：
YYASWAKGRFTISKASTTVDLKITSPTTEDTATYFC
[SEQ ID No:104]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含FR-H3结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:104所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可以包含本文提供的SEQ ID No:105的FR-H4结构域，如下：
WGPGTLVTVSS
[SEQ ID No:105]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含FR-H4结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:105所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:102或由SEQ ID No:102组成的FR-H1结构域、包含SEQ ID No:103或由SEQ ID No:103组成的FR-H2结构域、包含SEQID No:104或由SEQ ID No:104组成的FR-H3结构域和/或包含SEQ ID No:105或由SEQ IDNo:105组成的FR-H4结构域。然而，优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:102或由SEQ ID No:102组成的FR-H1结构域、包含SEQ ID No:103或由SEQ ID No:103组成的FR-H2结构域、包含SEQ ID No:104或由SEQ ID No:104组成的FR-H3结构域和包含SEQ IDNo:105或由SEQ ID No:105组成的FR-H4结构域。
抗体或其抗原结合片段可以包含本文提供的如SEQ ID No:106所示的重链可变(VH)序列，如下：
QSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTASGFSLNSFAMSWVRQAPGKGLEWIGIITVDGHTYYASWAKGRFTISKASTTVDLKITSPTTEDTAT
YFCAREDAGDAGYIYATYNIWGPGTLVTVSS
[SEQ ID No:106]
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:106所示的序列或其变体或片段组成。
编码重链可变(VH)区的核苷酸序列的一实施方案在本文中称为SEQ ID No:107，如下：CAATCGGTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACAGCCTCTGGATTCTCCCTCAATAGCTTTGCGATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGAATCATTACTGTTGATGGTCACACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAAGCCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATCACCAGTCCGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGAGGATGCTGGTGATGCTGGTTATATTTATGCTACCTATAACATCTGGGGCCCAGGGACCCTCGTCACCGTCTCTTCA
[SEQ ID No:107]
优选地，抗体或其抗原结合片段包含由基本上如SEQ ID No:107所示的核酸序列或其变体或片段编码的重链可变(VH)区。
抗体或其抗原结合片段可以包含本文提供的SEQ ID No:108的CDR-L1结构域，如下：
EDIGYG
[SEQ ID No:108]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L1结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:108所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:109的CDR-L2结构域，如下：
GAN
[SEQ ID No:109]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L2结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:109所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:110的CDR-L3结构域，如下：
QQGYSTPPT
[SEQ ID No:110]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L3结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:110所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:108或由SEQ ID No:108组成的CDR-L1结构域、包含SEQ ID No:109或由SEQ ID No:109组成的CDR-L2结构域和/或包含SEQ ID No:110或由SEQ ID No:110组成的CDR-L3结构域。然而，优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:108或由SEQ ID No:108组成的CDR-L1结构域、包含SEQ IDNo:109或由SEQ ID No:109组成的CDR-L2结构域和包含SEQ ID No:110或由SEQ ID No:110组成的CDR-L3结构域。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:111的FR-L1结构域，如下：
AIEMTQTPSSLAASVGDTVTITCKAS
[SEQ ID No:111]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含FR-L1结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:111所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可以包含本文提供的SEQ ID No:112的FR-L2结构域，如下：
LAWYQQKLGIAPKLLIY
[SEQ ID No:112]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含FR-L2结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:112所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:113的FR-L3结构域，如下：
TLESGVPSRFSGSGSETDYTLTISSVQAEDAGIYYC
[SEQ ID No:113]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含FR-L3结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:113所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可以包含本文提供的SEQ ID No:114的FR-L4结构域，如下：
FGAGTMVEIQ
[SEQ ID No:114]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含FR-L4结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:114所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:111或由SEQ ID No:111组成的FR-L1结构域、包含SEQ ID No:112或由SEQ ID No:112组成的FR-L2结构域、包含SEQID No:113或由SEQ ID No:113组成的FR-L3结构域和/或包含SEQ ID No:114或由SEQ IDNo:114组成的FR-L4结构域。然而，优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:111或由SEQ ID No:111组成的FR-L1结构域、包含SEQ ID No:112或由SEQ ID No:112组成的FR-L2结构域、包含SEQ ID No:113或由SEQ ID No:113组成的FR-L3结构域和包含SEQ IDNo:114或由SEQ ID No:114组成的FR-L4结构域。
抗体或其抗原结合片段可以包含本文提供的如SEQ ID No:115所示的轻链可变(VL)序列，如下：
AIEMTQTPSSLAASVGDTVTITCKASEDIGYGLAWYQQKLGIAPKLLIYGANTLESGVPSRFSGSGSETDYTLTISSVQAEDAGIYYCQ
QGYSTPPTFGAGTMVEIQ
[SEQ ID No:115]
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区，其包含或者由基本上如SEQ IDNo:115所示的序列或其变体或片段组成。
编码轻链可变(VL)区的核苷酸序列的一实施方案在本文中称为SEQ ID No:116，如下：
GCGATTGAAATGACCCAGACTCCATCCTCCCTGGCTGCATCTGTGGGAGACACAGTCACCATCACTTGTAAGGCCAGTGAGGACATTGGTTATGGGTTAGCCTGGTATCAGCAGAAACTGGGGATAGCTCCTAAGCTCCTGATCTATGGGGCAAACACTTTAGAATCTGGGGTCCCATCGAGGTTCAGTGGCAGCGGATCAGAGACCGATTACACCCTCACCATCAGCAGCGTGCAGGCTGAAGATGCAGGAATTTATTACTGTCAGCAAGGATATAGTACCCCTCCTACTTTCGGTGCGGGGACCATGGTGGAGATCCAA
[SEQ ID No:116]
优选地，抗体或其抗原结合片段包含由基本上如SEQ ID No:116所示的核酸序列或其变体或片段编码的轻链可变(VL)区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含至少一个、至少两个、至少三个、至少四个、至少五个或至少六个CDR。优选地，抗体或其抗原结合片段至少包含CDR-H3。
优选地，所述抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:99或由SEQ ID No:99组成的CDR-H1结构域、包含SEQ ID No:100或由SEQ ID No:100组成的CDR-H2结构域、包含SEQ ID No:101或由SEQ ID No:101组成的CDR-H3结构域、包含SEQ ID No:108或由SEQ IDNo:108组成的CDR-L1结构域、包含SEQ ID No:109或由SEQ ID No:109组成的CDR-L2结构域和包含SEQ ID No:110或由SEQ ID No:110组成的CDR-L3结构域。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：由包含SEQ ID No:106或由SEQ ID No:106组成的核酸序列编码的重链可变区和由包含SEQ ID No:115或由SEQ ID No:115组成的核酸序列编码的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：由包含SEQ ID No:107或由SEQ ID No:107组成的核酸序列编码的重链可变区和由包含SEQ ID No:116或由SEQ ID No:116组成的核酸序列编码的轻链可变区。
4-B12
在一实施方案中，抗体或其抗原结合片段在本文中称为4-B12。抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:117的CDR-H1结构域，如下：
GFSLNSFA
[SEQ ID No:117]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H1结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:117所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可以包含本文提供的SEQ ID No:118的CDR-H2结构域，如下：
ITVDGHT
[SEQ ID No:118]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H2结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:118所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:119的CDR-H3结构域，如下：
AREDAGDAGYIYATYNI
[SEQ ID No:119]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H3结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:119所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:117或由SEQ ID No:117组成的CDR-H1结构域、包含SEQ ID No:118或由SEQ ID No:118组成的CDR-H2结构域和/或包含SEQ ID No:119或由SEQ ID No:119组成的CDR-H3结构域。然而，优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:117或由SEQ ID No:117组成的CDR-H1结构域、包含SEQ IDNo:118或由SEQ ID No:118组成的CDR-H2结构域和包含SEQ ID No:119或由SEQ ID No:119组成的CDR-H3结构域。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:120的FR-H1结构域，如下：
SQSVKESEGRLVTPGTPLTLTCTVS
[SEQ ID No:120]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含FR-H1结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:120所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可以包含本文提供的SEQ ID No:121的FR-H2结构域，如下：
MSWVRQAPGKGLEWIGI
[SEQ ID No:121]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含FR-H2结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:121所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:122的FR-H3结构域，如下：
YYANWAKDRFTISKASTTVDLKITSPTTEDTATYFC
[SEQ ID No:122]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含FR-H3结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:122所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可以包含本文提供的SEQ ID No:123的FR-H4结构域，如下：
WGPGTLVTVSS
[SEQ ID No:123]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含FR-H4结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:123所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:120或由SEQ ID No:120组成的FR-H1结构域、包含SEQ ID No:121或由SEQ ID No:121组成的FR-H2结构域、包含SEQID No:122或由SEQ ID No:122组成的FR-H3结构域和/或包含SEQ ID No:123或由SEQ IDNo:123组成的FR-H4结构域。然而，优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:120或由SEQ ID No:120组成的FR-H1结构域、包含SEQ ID No:121或由SEQ ID No:121组成的FR-H2结构域、包含SEQ ID No:122或由SEQ ID No:122组成的FR-H3结构域和包含SEQ IDNo:123或由SEQ ID No:123组成的FR-H4结构域。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的如SEQ ID No:124所示的重链可变(VH)序列，如下：
QSVKESEGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLNSFAMSWVRQAPGKGLEWIGIITVDGHTYYANWAKDRFTISKASTTVDLKITSPTTEDTAT
YFCAREDAGDAGYIYATYNIWGPGTLVTVSS
[SEQ ID No:124]
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:124所示的序列或其变体或片段组成。
编码重链可变(VH)区的核苷酸序列的一实施方案在本文中称为SEQ ID No:125，如下：CAGTCGGTGAAGGAGTCCGAGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACAGTCTCTGGATTCTCCCTCAATAGCTTTGCGATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGAATCATAACTGTTGATGGTCACACATACTACGCGAACTGGGCGAAAGACCGATTCACCATCTCCAAAGCCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATCACCAGTCCGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGAGGATGCTGGTGATGCTGGTTATATTTATGCTACCTATAACATCTGGGGCCCGGGCACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
[SEQ ID No:125]
优选地，抗体或其抗原结合片段包含由基本上如SEQ ID No:125所示的核酸序列或其变体或片段编码的重链可变(VH)区。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:126的CDR-L1结构域，如下：
EDIGYG
[SEQ ID No:126]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L1结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:126所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:127的CDR-L2结构域，如下：
GAN
[SEQ ID No:127]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L2结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:127所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:128的CDR-L3结构域，如下：
QQGYSTPPT
[SEQ ID No:128]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L3结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:128所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:126或由SEQ ID No:126组成的CDR-L1结构域、包含SEQ ID No:127或由SEQ ID No:127组成的CDR-L2结构域和/或包含SEQ ID No:128或由SEQ ID No:128组成的CDR-L3结构域。然而，优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:126或由SEQ ID No:126组成的CDR-L1结构域、包含SEQ IDNo:127或由SEQ ID No:127组成的CDR-L2结构域和包含SEQ ID No:128或由SEQ ID No:128组成的CDR-L3结构域。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:129的FR-Ll结构域，如下：
DPVLTQTASSLAASVGDTVTITCKAS
[SEQ ID No:129]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含FR-Ll结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:129所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可以包含本文提供的SEQ ID No:130的FR-L2结构域，如下：
LAWYQQKPGQPPKLLIY
[SEQ ID No:130]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含FR-L2结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:130所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:131的FR-L3结构域，如下：
TLESGVPSRFTGSGSETDYTLTISSVQAEDAGIYYC
[SEQ ID No:131]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含FR-L3结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:131所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:132的FR-L4结构域，如下：
FGAGTKVEIK
[SEQ ID No:132]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含FR-L4结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:132所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:129或由SEQ ID No:129组成的FR-L1结构域、包含SEQ ID No:130或由SEQ ID No:130组成的FR-L2结构域、包含SEQID No:131或由SEQ ID No:131组成的FR-L3结构域和/或包含SEQ ID No:132或由SEQ IDNo:132组成的FR-L4结构域。然而，优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:129或由SEQ ID No:129组成的FR-L1结构域、包含SEQ ID No:130或由SEQ ID No:130组成的FR-L2结构域、包含SEQ ID No:131或由SEQ ID No:131组成的FR-L3结构域和包含SEQ IDNo:132或由SEQ ID No:132组成的FR-L4结构域。
抗体或其抗原结合片段可以包含本文提供的如SEQ ID No:133所示的轻链可变(VL)序列，如下：
DPVLTQTASSLAASVGDTVTITCKASEDIGYGLAWYQQKPGQPPKLLIYGANTLESGVPSRFTGSGSETDYTLTISSVQAEDAGIYYCQ
QGYSTPPTFGAGTKVEIK
[SEQ ID No:133]
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区，其包含或者由基本上如SEQ IDNo:133所示的序列或其变体或片段组成。
编码轻链可变(VL)区的核苷酸序列的一实施方案在本文中称为SEQ ID No:134，如下：
GATCCTGTGCTGACCCAGACTGCGTCCTCCCTGGCTGCATCTGTGGGAGACACAGTCACCATCACTTGTAAGGCCAGTGAGGACATTGG
TTATGGGTTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTATGGGGCAAACACTTTAGAATCTGGGGTCCCAT
CGAGGTTCACTGGCAGCGGATCAGAGACCGATTACACCCTCACCATCAGCAGCGTGCAGGCTGAAGATGCAGGAATTTATTACTGTCAG
CAAGGATATAGTACCCCTCCTACTTTCGGTGCGGGCACCAAGGTAGAAATCAAA
[SEQ ID No:134]
优选地，抗体或其抗原结合片段包含由基本上如SEQ ID No:134所示的核酸序列或其变体或片段编码的轻链可变(VL)区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含至少一个、至少两个、至少三个、至少四个、至少五个或至少六个CDR。优选地，抗体或其抗原结合片段至少包含CDR-H3。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:117或由SEQ ID No:117组成的CDR-H1结构域、包含SEQ ID No:118或由SEQ ID No:118组成的CDR-H2结构域、包含SEQID No:119或由SEQ ID No:119组成的CDR-H3结构域、包含SEQ ID No:126或由SEQ ID No:126组成的CDR-L1结构域、包含SEQ ID No:127或由SEQ ID No:127组成的CDR-L2结构域和包含SEQ ID No:128或由SEQ ID No:128组成的CDR-L3结构域。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：由包含SEQ ID No:124或由SEQ ID No:124组成的核酸序列编码的重链可变区和由包含SEQ ID No:133或由SEQ ID No:133组成的核酸序列编码的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：由包含SEQ ID No:125或由SEQ ID No:125组成的核酸序列编码的重链可变区和由包含SEQ ID No:134或由SEQ ID No:134组成的核酸序列编码的轻链可变区。
4-C6
在一实施方案中，抗体或其抗原结合片段在本文中称为4-C6。抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:135的CDR-H1结构域，如下：
GFSLNTYV
[SEQ ID No:135]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H1结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:135所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可以包含本文提供的SEQ ID No:136的CDR-H2结构域，如下：
INGDSNT
[SEQ ID No:136]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H2结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:136所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可以包含本文提供的SEQ ID No:137的CDR-H3结构域，如下：
AREDAADAGYVYATYNI
[SEQ ID No:137]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-H3结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:137所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:135或由SEQ ID No:135组成的CDR-H1结构域、包含SEQ ID No:136或由SEQ ID No:136组成的CDR-H2结构域和/或包含SEQ ID No:137或由SEQ ID No:137组成的CDR-H3结构域。然而，优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:135或由SEQ ID No:135组成的CDR-H1结构域、包含SEQ IDNo:136或由SEQ ID No:136组成的CDR-H2结构域和包含SEQ ID No:137或由SEQ ID No:137组成的CDR-H3结构域。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:138的FR-H1结构域，如下：
SQSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTAS
[SEQ ID No:138]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含FR-H1结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:138所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可以包含SEQ ID No:139的FR-H2结构域，其在本文中提供如下：
MTWVRQAPGKGLEWIGF
[SEQ ID No:139]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含FR-H2结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:139所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可以包含本文提供的SEQ ID No:140的FR-H3结构域，如下：
YYANWAKGRFTISKTSTTVDLKITSPTTEDTATYFC
[SEQ ID No:140]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含FR-H3结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:140所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:141的FR-H4结构域，如下：
WGTGTLVTISS
[SEQ ID No:141]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含FR-H4结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:141所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:138或由SEQ ID No:138组成的FR-H1结构域、包含SEQ ID No:139或由SEQ ID No:139组成的FR-H2结构域、包含SEQID No:140或由SEQ ID No:140组成的FR-H3结构域和/或包含SEQ ID No:141或由SEQ IDNo:141组成的FR-H4结构域。然而，优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:138或由SEQ ID No:138组成的FR-H1结构域、包含SEQ ID No:139或由SEQ ID No:139组成的FR-H2结构域、包含SEQ ID No:140或由SEQ ID No:140组成的FR-H3结构域和包含SEQ IDNo:141或由SEQ ID No:141组成的FR-H4结构域。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的如SEQ ID No:142所示的重链可变(VH)序列，如下：
QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTASGFSLNTYVMTWVRQAPGKGLEWIGFINGDSNTYYANWAKGRFTISKTSTTVDLKITSPTTEDTAT
YFCAREDAADAGYVYATYNIWGTGTLVTISS
[SEQ ID No:142]
优选地，抗体或其抗原结合片段包含重链可变(VH)区，其包含或者由基本上如SEQID No:142所示的序列或其变体或片段组成。
编码重链可变(VH)区的核苷酸序列的一实施方案在本文中称为SEQ ID No:143，如下：CAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACAGCCTCTGGATTCTCCCTCAATACCTATGTAATGACCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGATTCATTAATGGTGATAGTAACACATACTACGCGAACTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATCACCAGTCCGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGAGGATGCTGCTGATGCTGGTTATGTTTATGCTACCTATAACATCTGGGGCACAGGCACCCTGGTCACCATCTCTTCA
[SEQ ID No:143]
优选地，抗体或其抗原结合片段包含由基本上如SEQ ID No:143所示的核酸序列或其变体或片段编码的重链可变(VH)区。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:144的CDR-L1结构域，如下：
EDIGYG
[SEQ ID No:144]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L1结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:144所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:145的CDR-L2结构域，如下：
GAN
[SEQ ID No:145]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L2结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:145所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:146的CDR-L3结构域，如下：
QQGYSTPPT
[SEQ ID No:146]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含CDR-L3结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:146所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:144或由SEQ ID No:144组成的CDR-L1结构域、包含SEQ ID No:145或由SEQ ID No:145组成的CDR-L2结构域和/或包含SEQ ID No:146或由SEQ ID No:146组成的CDR-L3结构域。然而，优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:144或由SEQ ID No:144组成的CDR-Ll结构域、包含SEQ IDNo:145或由SEQ ID No:145组成的CDR-L2结构域和包含SEQ ID No:146或由SEQ ID No:146组成的CDR-L3结构域。
抗体或其抗原结合片段可包含本文提供的SEQ ID No:147的FR-L1结构域，如下：
AYDMTQTPSSLAASVGDTVTITCKAS
[SEQ ID No:147]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含FR-L1结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:147所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可以包含本文提供的SEQ ID No:148的FR-L2结构域，如下：
LNWYQQKLGIAPKLLIY
[SEQ ID No:148]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含FR-L2结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:148所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可以包含本文提供的SEQ ID No:149的FR-L3结构域，如下：
TLESGVPSRFSGSGSETDYTLTISSVQAEDAGIYYC
[SEQ ID No:149]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含FR-L3结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:149所示的序列或其变体或片段组成。
抗体或其抗原结合片段可以包含本文提供的SEQ ID No:150的FR-L4结构域，如下：
FGAGTMVEIK
[SEQ ID No:150]
因此，优选地，抗体或其抗原结合片段包含FR-L4结构域，其包含或者由基本上如SEQ ID No:150所示的序列或其变体或片段组成。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:147或由SEQ ID No:147组成的FR-L1结构域、包含SEQ ID No:148或由SEQ ID No:148组成的FR-L2结构域、包含SEQID No:149或由SEQ ID No:149组成的FR-L3结构域和/或包含SEQ ID No:150或由SEQ IDNo:150组成的FR-L4结构域。然而，优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:147或由SEQ ID No:147组成的FR-L1结构域、包含SEQ ID No:148或由SEQ ID No:148组成的FR-L2结构域、包含SEQ ID No:149或由SEQ ID No:149组成的FR-L3结构域和包含SEQ IDNo:150或由SEQ ID No:150组成的FR-L4结构域。
抗体或其抗原结合片段可以包含本文提供的如SEQ ID No:151所示的轻链可变(VL)序列，如下：
AYDMTQTPSSLAASVGDTVTITCKASEDIGYGLNWYQQKLGIAPKLLIYGANTLESGVPSRFSGSGSETDYTLTISSVQAEDAGIYYCQ
QGYSTPPTFGAGTMVEIK
[SEQ ID No:151]
优选地，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区，其包含或者由基本上如SEQ IDNo:151所示的序列或其变体或片段组成。
编码轻链可变(VL)区的核苷酸序列的一实施方案在本文中称为SEQ ID No:152，如下：
GCATATGATATGACCCAGACTCCATCCTCCCTGGCTGCATCTGTGGGAGACACAGTCACCATCACTTGTAAGGCCAGTGAGGACATTGG
TTATGGGTTGAACTGGTATCAGCAGAAACTAGGGATAGCTCCTAAGCTCCTCATCTATGGGGCAAACACTTTAGAATCCGGGGTCCCAT
CGAGGTTCAGTGGCAGCGGATCAGAGACCGATTACACCCTCACCATCAGCAGCGTGCAGGCTGAAGATGCAGGAATTTATTACTGTCAG
CAAGGATATAGTACCCCTCCTACTTTCGGTGCGGGGACCATGGTGGAGATCAAA
[SEQ ID No:152]
优选地，抗体或其抗原结合片段包含由基本上如SEQ ID No:152所示的核酸序列或其变体或片段编码的轻链可变(VL)区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含至少一个、至少两个、至少三个、至少四个、至少五个或至少六个CDR。优选地，抗体或其抗原结合片段至少包含CDR-H3。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID No:135或由SEQ ID No:135组成的CDR-H1结构域、包含SEQ ID No:136或由SEQ ID No:136组成的CDR-H2结构域、包含SEQID No:137或由SEQ ID No:137组成的CDR-H3结构域、包含SEQ ID No:144或由SEQ ID No:144组成的CDR-L1结构域、包含SEQ ID No:145或由SEQ ID No:145组成的CDR-L2结构域和包含SEQ ID No:146或由SEQ ID No:146组成的CDR-L3结构域。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：由包含SEQ ID No:142或由SEQ ID No:142组成的核酸序列编码的重链可变区和由包含SEQ ID No:151或由SEQ ID No:151组成的核酸序列编码的轻链可变区。
优选地，抗体或其抗原结合片段包含：由包含SEQ ID No:143或由SEQ ID No:143组成的核酸序列编码的重链可变区和由包含SEQ ID No:152或由SEQ ID No:152组成的核酸序列编码的轻链可变区。
如图7A至图7E所示，发明人令人惊奇地证明，本文称为1-A2、4-H3、1-D5、3-H9和1-G5的抗体及其抗原结合片段包含失能的Fc片段，能够结合VWF的C1-C6结构域。Fc片段参与血小板聚集，因此与血液凝固和血栓形成的风险增加相关。因此，当治疗患有由血小板介导的聚集引起的病症的患者时，使抗体的Fc片段失能并降低血液凝固的风险是特别有利的。
因此，在一实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段包含失能的Fc片段。优选地，失能的Fc片段包含一或多个氨基酸取代，其能抑制或降低抗体或其抗原结合片段的效应子功能。优选地，失能的Fc片段包含选自由以下一个或多个氨基酸取代：L234A、L235A和P329G。优选地，失能的Fc片段包含氨基酸取代L234A、L235A和P329G。
因此，最优选地，本文称为1-A2、4-H3、1-D5、3-H9或1-G5的抗体或其抗原结合片段包含失能的Fc片段，该片段包含氨基酸取代L234A、L235A和P329G。
另外，还如图7A至图7E所示，发明人已经证明抗体克隆1-A2、4-H3、1-D5、3-H9和1-G5的Fab片段令人惊讶地能够结合VWF的C1-C6结构域。因此，在另一实施方案中，其抗原结合片段包含Fab片段或由Fab片段组成。优选地，其抗原结合片段(本文称为1-A2、4-H3、1-D5、3-H9和1-G5)包含Fab片段或由Fab片段组成。
在另一实施方案中，抑制剂可以是干扰核酸分子，包括：反义寡核苷酸、siRNA或dsRNA，其特异性靶向编码VWF的C1、C2、C3、C4、C5和/或C6结构域中的一个或多个的mRNA的一部分。功能性干扰核酸分子，包括反义寡核苷酸、siRNA分子或dsRNA分子，能够特异性下调靶基因，优选其一个或多个外显子。
在另一实施方案中，抑制剂可以是生物制剂、小分子药物、蛋白质、核酸或药剂。
因此，有利地，根据本发明第一方面的抑制剂的抗C1-C6-VWF活性意味着其本身具有作为治疗剂的显着效用，并且可以用于治疗、改善或预防由血小板介导的聚集引起的病症，例如血栓相关病症。
因此，本发明的第二方面提供了根据第一方面的抑制剂用于治疗。
在本发明的第三方面提供了根据第一方面的抑制剂用于治疗、预防或改善由血小板介导的聚集引起的病症。
根据本发明的第四方面提供了治疗、预防或改善受试者中由血小板介导的聚集引起的病症的方法，该方法包括：向需要这种治疗的患者施用或已经施用治疗有效量的根据第一方面的抑制剂。
由血小板介导的聚集引起的病症可以选自以下：血栓形成相关病症、血栓性血小板减少性紫癜(TTP)(也称为获得性血栓性血小板减少性紫癜(aTTP))、急性冠状动脉综合征(ACS)、动脉粥样硬化、缺血性中风、心房颤动(AF)、急性心肌梗死(AMI)、心血管疾病(CVD)、血栓形成、不稳定型心绞痛、稳定型心绞痛、心绞痛、栓子形成、深静脉血栓形成、溶血性尿毒症综合征、溶血性贫血、急性肾功能衰竭、溶栓并发症、弥散性血管内凝血、冠心病、血栓栓塞并发症、再狭窄、慢性不稳定型心绞痛、周围血管疾病、动脉血栓形成、先兆子痫、栓塞、再狭窄、败血症、血管炎症、肾小球肾炎和冠状病毒感染引起的血栓形成疾病。
优选地，治疗、预防或改善由血小板介导的聚集引起的病症的用途或方法包括：在高剪切速率条件(即病理条件)下抑制血小板结合。
层流层中的血流速度梯度(速度分布的斜率)在血管壁处最高。该剪切速率称为血管壁剪切速率。在正常的生理流动条件下，血管壁剪切率从静脉中的约10s-1增加到最小动脉中的约15000s-1，而对于严重动脉粥样硬化的动脉，血管壁剪切率最高可达40000s-1。Brands等人进一步讨论了一种测量体内剪切率的可能方法(Brands et al.,1999,“Anintegrated system for the non-invasive assessment of vessel wall andhemodynamic properties of large arteries by means of ultrasound”)。具体来说，称为动脉实验室(ART-lab)的系统通过测量射频超声信号以确定动脉的血液动力学特性。从回波扫描仪接收到的射频信号通过数据采集系统采集，然后存储在硬盘上。对血流速度的评估基于给定估计窗口中的时间和空间平均频率的估计，其中包括由杂波滤波器过滤的射频样本，以区分反射和散射。通过多普勒方程，时间和空间平均频率与速度直接相关。根据该速度分布，可根据观察到的空间速度分布相对于半径的导数的最大值计算血管壁剪切速率。
优选地，抑制剂是抗体或其抗原结合片段。最优选地，抑制剂是图8的抗体之一或其抗原结合片段。
应当理解，根据本发明的抑制剂(在此称为“制剂”)可以用于单一疗法(例如单独使用抑制剂，更优选本文描述的抗体之一)，用于治疗、改善或预防由血小板介导的聚集引起的病症。另外，根据本发明的药剂可用作已知疗法的辅助手段或与已知疗法组合使用，以治疗、改善或预防由血小板介导的聚集引起的病症，例如阿司匹林、氯吡格雷、阿昔单抗、肝素、华法林和直接口服抗凝剂(DOAC)，包括达比加群(Pradaxa)、利伐沙班(Xarelto)、阿哌沙班(Eliquis)、依度沙班(Savaysa)和贝曲沙班(Bevyxxa)。
本发明的制剂可以组合成具有多种不同形式的组合物中，具体取决于组合物的使用方式。因此，例如，组合物可以是粉末、片剂、胶囊、液体、软膏、霜剂、凝胶、水凝胶、气雾剂、喷雾剂、胶束溶液、透皮贴剂、脂质体悬浮液的形式或任何其他可用于需要治疗的人或动物的适当形式。应当理解，根据本发明的药物载体应该是被施用的受试者良好耐受的药物载体。
包含本发明制剂的药物可以多种方式使用。例如，可能需要口服施用，在这种情况下，制剂可以包含在组合物内，例如可以以片剂、胶囊或液体的形式口服摄入。包含本发明的制剂和药物的组合物可以通过吸入(例如鼻内)施用。组合物也可配制用于局部使用。例如，可以将霜剂或软膏施用于皮肤。
根据本发明的制剂和药物还可以并入缓释或延迟释放装置中。此类装置可以例如插入皮肤上或皮肤下，并且药物可以在数周甚至数月内释放。该装置可以位于至少邻近治疗部位的位置。当需要用根据本发明使用的制剂进行长期治疗并且通常需要频繁施用(例如至少每天注射)时，此类装置可能特别有利。
在一优选的实施方案中，根据本发明的制剂和药物可以通过注射到血流中或直接注射到需要治疗的部位来施用于受试者。注射可以是静脉内(推注或输注)或皮下(推注或输注)或皮内(推注或输注)注射。
应当理解，所需的抑制剂(即制剂)的量由其生物活性和生物利用度决定，而生物活性和生物利用度又取决于给药方式、制剂的理化性质以及是否用作单一疗法或联合疗法。施用频率也将受到所治疗受试者体内药剂的半衰期的影响。待施用的最佳剂量可由本领域技术人员确定，并且将随着使用的具体药剂、药物组合物的强度、施用方式和血栓相关病症的进展而变化。取决于所治疗的特定受试者的其他因素将导致需要调整剂量，包括受试者年龄、体重、性别、饮食和施用时间。
一般而言，根据本发明的制剂，日剂量在0.01μg/kg体重至100mg/kg体重之间，可用于治疗、改善或预防血栓形成相关病症，具体取决于施用哪种药剂。更优选地，制剂的日剂量为1μg/kg体重至100mg/kg体重，更优选为10μg/kg至10mg/kg体重，最优选为约100μg/kg至10mg/kg体重之间。
该制剂可以在血栓相关病症发作之前、期间或之后施用。每日剂量可以一次性给药(例如每日单次注射)。或者，该制剂可能需要在一天内施用两次或更多次。例如，制剂可以每日两次(或更多次，取决于所治疗的血栓相关病症的严重程度)的剂量施用，剂量为0.07μg至700mg(即假设体重为70kg)。接受治疗的患者可以在醒来时服用第一剂，然后在晚上服用第二剂(如果采用两次剂量方案)，或在此后每隔3或4小时服用。另外，也可以使用缓释装置向患者提供根据本发明的制剂的最佳剂量，而不需要重复给药。已知的程序，例如制药工业常规采用的程序(例如体内实验、临床试验等)，可用于形成根据本发明的制剂的特定配方和精确的治疗方案(例如该制剂的每日剂量和给药频率)。
本发明的第五方面提供了药物组合物，其包含根据第一方面的抑制剂和任选的药学上可接受的载体。
药物组合物优选是抗血栓的，即用于治疗性改善、预防或治疗由血小板介导的聚集引起的病症的药物制剂。
本发明在第六方面还提供了一种制备根据第五方面的药物组合物的方法，该方法包括将治疗有效量的如第一方面中定义的抑制剂与药学上可接受的载体组合。
抑制剂可以如第一方面所定义。优选地，抑制剂是抗体或其抗原结合片段。最优选地，抑制剂是图8的抗体之一或其抗原结合片段。
“受试者”可以是脊椎动物、哺乳动物或家畜。因此，根据本发明的药物可以用于治疗任何哺乳动物，例如家畜(例如马)、宠物，或者可以用于其他兽医用途。最优选地，受试者是人类。
抑制剂的“治疗有效量”是指当施用于受试者时，治疗血栓相关病症或产生期望效果所需的制剂的量。
例如，所用抑制剂的治疗有效量可以是约0.1ng/kg至约100mg/kg，优选约1ng/kg至约10mg/kg。优选抑制剂的量为约10ng/kg至约10mg/kg，最优选约50ng/kg至约5mg/kg。
本文提及的“药学上可接受的载体”是本领域技术人员已知可用于配制药物组合物的任何已知化合物或已知化合物的组合。
在一实施方案中，药学上可接受的载体可以是固体，组合物可以是粉末或片剂的形式。固体药学上可接受的载体可以包括一种或多种物质，这些物质也可以充当矫味剂、润滑剂、增溶剂、悬浮剂、染料、填充剂、助流剂、压缩助剂、惰性粘合剂、甜味剂、防腐剂、染料、包衣或片剂崩解剂。载体还可以是封装材料。在粉末中，载体是与根据本发明的细分活性剂混合的细分固体。在片剂中，活性剂可以与具有必要的压缩特性的载体以合适的比例混合并压制成所需的形状和尺寸。粉末和片剂优选含有高达99％的活性剂。合适的固体载体包括例如磷酸钙、硬脂酸镁、滑石、糖、乳糖、糊精、淀粉、明胶、纤维素、聚乙烯吡咯烷、低熔点蜡和离子交换树脂。在另一实施方案中，药物载体可以是凝胶并且组合物可以是乳膏等形式。
然而，药物载体可以是液体，药物组合物是溶液的形式。液体载体可用于制备溶液、悬浮液、乳液、糖浆、酏剂和加压组合物。本发明的活性剂可以溶解或悬浮在药学上可接受的液体载体中，例如水、有机溶剂、两者的混合物或药学上可接受的油或脂肪。液体载体可以含有其他合适的药物添加剂，例如增溶剂、乳化剂、缓冲剂、防腐剂、甜味剂、矫味剂、悬浮剂、增稠剂、着色剂、粘度调节剂、稳定剂或渗透压调节剂。用于口服和肠胃外施用的液体载体的合适实例包括水(部分含有如上所述的添加剂，例如纤维素衍生物，优选羧甲基纤维素钠溶液)、醇(包括一元醇和多元醇，例如乙二醇)及其衍生物，以及油(例如分馏椰子油和花生油)。对于肠胃外给药，载体还可以是油酯，例如油酸乙酯和肉豆蔻酸异丙酯。无菌液体载体可用于用于肠胃外施用的无菌液体形式组合物。用于加压组合物的液体载体可以是卤代烃或其他药学上可接受的推进剂。
液体药物组合物为无菌溶液或悬浮液，可通过肌内注射、鞘内注射、硬膜外注射、腹膜内注射、静脉内注射且特别是皮下注射等方式使用。制剂可以配置为无菌固体组合物，其可以在施用时使用无菌水、盐水或其他合适的无菌可注射介质溶解或悬浮。
本发明的制剂和组合物可以以无菌溶液或混悬液的形式口服施用，其中含有其他溶质或混悬剂(例如，足够的盐水或葡萄糖以使溶液具有等渗性)、胆汁盐、阿拉伯胶、明胶、失水山梨糖醇单油酸酯、聚山梨醇酯80(山梨醇及其酸酐与环氧乙烷共聚的油酸酯)等。根据本发明使用的制剂还可以以液体或固体组合物形式口服施用。适合口服施用的组合物包括固体形式，例如丸剂、胶囊、颗粒剂、片剂和粉末，以及液体形式，例如溶液剂、糖浆剂、酏剂和混悬剂。可用于肠胃外施用的形式包括无菌溶液、乳液和悬浮液。
本发明还涵盖用于产生第一方面的抗体或抗原结合片段的方法，以及由此产生的抗体或抗原结合片段。
本文在第七方面提供了通过以下方法获得的抗体或其抗原结合片段，该方法包括：
(i)用血管性血友病因子(VWF)的C1、C2、C3、C4、C5和/或C6结构域中的一个或多个对宿主生物体进行免疫；
(ii)从所述宿主收集抗体或其抗原结合片段。
宿主可以是哺乳动物，并且可以是人、兔、小鼠或鸡。优选地，宿主是兔。更优选地，宿主是新西兰白(NZW)兔。
该方法可以包括用人C1-C6-Fc融合蛋白免疫宿主。优选地，该方法包括用VWF的C5结构域免疫宿主。
该方法可以包括用至少50μg、75μg或100μg免疫原对宿主进行免疫。优选地，该方法包括随后用至少25μg、35μg或50μg免疫原对宿主进行第一次加强免疫。优选地，第一次加强免疫在第一次免疫后至少20、30或40天进行。甚至更优选地，该方法包括随后用至少25μg、35μg或50μg免疫原对宿主进行第二次加强免疫。
优选地，该方法包括对宿主动物放血，然后优选从血液(最优选血清)中收集抗体或其抗原结合片段。优选地，该方法包括在第一次免疫后至少30、40或50天对宿主动物放血。
优选地，使血清通过具有共价结合的肽支持物的重力柱。洗涤后，优选在缓冲液中洗脱抗体或其抗原结合片段，所述缓冲液优选为酸性缓冲液，然后可以中和溶液。该方法还可以包括在合适的缓冲液(例如PBS)中进行透析，并且任选地，冻干。
在第八方面，本文提供了一种抗体或其抗原结合片段，该抗体或其抗原结合片段的获得方法包括：使用噬菌体文库选择特异性结合血管性血友病因子(VWF)的C1、C2、C3、C4、C5和/或C6结构域中的一个或多个的抗体或其抗原结合片段。
优选地，抗体或其抗原结合片段的获得方法包括使用噬菌体文库选择特异性结合VWF的C5结构域的抗体或其抗原结合片段。噬菌体展示是本领域技术人员已知的，并且在实施例中详细描述。
在本发明的第九方面，本文提供了编码如第一方面中所定义的抗体或抗原结合片段的多核苷酸序列。
在本发明的第十方面，本文提供了包含根据第九方面的多核苷酸序列的表达盒。
编码本发明的抗体或其抗原结合片段的多核苷酸序列优选地包含在重组载体中，例如用于递送至感兴趣的宿主细胞中以能够产生抗体或其抗原结合片段的重组载体。
因此，在本发明的第十一方面，本文提供了包含根据第十方面的表达盒的重组载体。
编码抗体或抗原结合片段的载体可以是例如质粒、粘粒或噬菌体和/或病毒载体。此类重组载体在本发明的用于用核苷酸序列转化细胞的递送系统中非常有用。核苷酸序列可以优选是DNA序列，并且正是该DNA序列编码抗体或抗原结合片段。
编码抗体或抗原结合片段的重组载体还可以包括其他功能元件。例如，它们还可以包含多种其他功能元件，包括用于在将载体引入宿主细胞后启动转基因表达的合适的启动子。例如，载体优选能够在宿主细胞的细胞核中自主复制。在这种情况下，重组载体中可能需要诱导或调节DNA复制的元件。另外，重组载体也可以设计成能整合到宿主细胞的基因组中。在这种情况下，可以考虑使用有利于靶向整合(例如通过同源重组)的DNA序列。合适的启动子可包括SV40启动子、CMV、EF1a、PGK、病毒长末端重复序列，以及诱导型启动子，例如四环素诱导系统。盒或载体还可以包含终止子，例如β球蛋白、SV40聚腺苷酸化序列或合成的聚腺苷酸化序列。重组载体还可以包含启动子或调节子或增强子以根据需要控制核酸的表达。
载体还可以包含编码基因的DNA，该基因可以在克隆过程中用作选择标记，即能够选择已经转染或转化的细胞，并且能够选择含有掺入异源DNA的载体的细胞。例如，氨苄西林、新霉素、嘌呤霉素或氯霉素抗性。另外，可选择性标记基因可以位于不同载体中，与含有转基因的载体同时使用。盒或载体还可以包含涉及调节核苷酸序列的表达或用于将表达的多肽靶向宿主细胞的特定部分的DNA。
纯化的载体可以通过合适的方法直接插入宿主细胞，例如直接内吞摄取。可以将载体通过转染、感染、电穿孔、显微注射、细胞融合、原生质体融合、磷酸钙、基于阳离子脂质的脂转染、基于聚合物或树状聚合物的方法或弹道轰击法直接引入宿主细胞(例如真核或原核细胞)中。另外，可以使用基因枪将本发明的载体直接引入宿主细胞。
另外，递送系统可以向宿主细胞提供多核苷酸，而不将其掺入载体中。例如，核酸分子可以掺入脂质体或病毒颗粒内。另外，“裸露”多核苷酸可以通过合适的方法(例如直接内吞摄取)插入宿主细胞中。
在本发明的第十二方面，本文提供了一种宿主细胞，其包含根据第九方面的多核苷酸序列、根据第十方面的表达盒或根据第十一方面的载体。
宿主细胞可以是真核或原核宿主细胞。优选地，宿主细胞是真核宿主细胞。更优选地，宿主细胞是哺乳动物宿主细胞，例如NS0鼠骨髓瘤细胞、人细胞、人胚肾293细胞或中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。最优选地，宿主细胞是CHO细胞。
在第十三方面，本文提供了制备根据第一方面的抗体或抗原结合片段的方法，该方法包括：
a)将第十一方面的载体导入宿主细胞；和
b)在产生根据第一方面的抗体或抗原结合片段的条件下培养所述宿主细胞。
步骤a)的宿主细胞可以是真核或原核宿主细胞。优选地，宿主细胞是真核宿主细胞。更优选地，宿主细胞是哺乳动物宿主细胞，例如NS0鼠骨髓瘤细胞、人细胞、人胚肾293细胞或中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。最优选地，宿主细胞是CHO细胞。
该方法还可包括(c)收获、离心和/或过滤细胞培养基以获得包含抗体或其抗原结合片段的细胞培养物上清液。
该方法还可包括(d)从细胞培养物上清液中分离和纯化抗体或其抗原结合片段。优选地，通过至少一个色谱层析步骤进行纯化。
合适的色谱层析步骤包括亲和色谱层析和/或离子交换色谱层析。优选地，亲和色谱层析是蛋白A色谱层析。离子交换色谱层析可以是阴离子交换色谱层析和/或阳离子交换色谱层析。
优选地，步骤(d)包括通过以下方法从细胞培养物上清液中分离和纯化抗体或其抗原结合片段：
i)蛋白A色谱层析；
ii)阴离子交换色谱层析；和/或
iii)阳离子交换色谱层析。
该方法还可包括(e)过滤由步骤(d)产生的纯化的抗体或其抗原结合片段。优选地，步骤(e)包括病毒过滤。因此，优选地使用病毒过滤膜过滤由步骤(d)产生的纯化的抗体或其抗原结合片段。对于本领域的技术人员来说，合适的滤膜是众所周知的。
如本文所述，VWF表达在由血小板介导的聚集引起的多种病症中增加，包括缺血性中风、心脏病发作、获得性血栓性血小板减少性紫癜和心房颤动。因此，鉴于本发明的抗体能够结合VWF的C1、C2、C3、C4、C5和/或C6结构域中的一个或多个，则抗体或其抗原结合片段可通过检测VWF的存在并确定其浓度而用作可靠的诊断工具。
因此，在第十四方面，本文提供了根据第一方面的抗体或其抗体结合片段用于诊断或预后。
根据本发明的第十五方面，本文提供了根据第一方面的抗体或其抗体结合片段用于诊断或预测由血小板介导的聚集引起的病症。
根据第十六方面，本文提供了诊断或预测受试者中由血小板介导的聚集引起的病症的方法，该方法包括用根据第一方面所述的抗体或其抗体结合片段检测从受试者获得的生物样品中的VWF。
由血小板介导的聚集引起的病症可以选自以下：血栓形成相关病症、血栓性血小板减少性紫癜(TTP)(也称为获得性血栓性血小板减少性紫癜(aTTP))、急性冠状动脉综合征(ACS)、动脉粥样硬化、缺血性中风、心房颤动(AF)、急性心肌梗死(AMI)、心血管疾病(CVD)、血栓形成、不稳定型心绞痛、稳定型心绞痛、心绞痛、栓子形成、深静脉血栓形成、溶血性尿毒症综合征、溶血性贫血、急性肾功能衰竭、溶栓并发症、弥散性血管内凝血、冠心病、血栓栓塞并发症、再狭窄、慢性不稳定型心绞痛、周围血管疾病、动脉血栓形成、先兆子痫、栓塞、再狭窄、败血症、血管炎症、肾小球肾炎和冠状病毒感染引起的血栓形成疾病(例如COVID-19)。
该方法可以是体外或离体方法。优选地，该方法是体外方法。
该用途或方法可以包括测定受试者中VWF的表达水平，优选地其中当与来自健康对照群体的参考浓度相比时，生物样品中VWF浓度的增加表明由血小板介导的聚集引起了病症或预后不良。
在一实施方案中，当与来自健康对照群体的参考相比时，VWF增加1倍，表明由血小板介导的聚集引起了病症或不良预后。在一实施方案中，当与来自健康对照群体的参考相比时，VWF增加2倍、3倍、4倍或5倍，则表明由血小板介导的聚集引起了病症或不良预后。在一实施方案中，当与来自健康对照群体的参考相比时，VWF增加10倍、50倍或100倍，则表明由血小板介导的聚集引起了病症或不良预后。
根据本发明的第十七方面，本文提供了一种试剂盒，用于诊断患有由血小板介导的聚集引起的病症的受试者，或用于提供所述受试者病症的预后，所述试剂盒包含根据第一方面的抗体或其抗原结合片段用于检测在测试对象的样本中的VWF。
该试剂盒还可以包括使用说明书和/或用于从受试者获得生物样品的容器。
优选地，由血小板介导的聚集引起的病症如上文所定义。
预后可涉及确定已诊断患有由血小板介导的聚集引起的病症的受试者的治疗结果。预后可涉及预测受试者中由血小板介导的聚集引起的病症的进展或改善的速度和/或持续时间、存活概率和/或各种治疗方案的功效。因此，不良预后可能表明由血小板介导的聚集引起的病症的进展、存活概率低以及治疗方案的功效降低。良好的预后可能表明由血小板介导的聚集引起的病症得到解决、存活率高以及治疗方案的功效增加。
优选地，样品包括生物样品。样品可以是从可从受试者获得蛋白质的受试者获得的任何材料。
生物样品可以是组织或生物流体。生物样品可以是可从受试者获得血浆、内皮细胞、巨核细胞和血小板的任何材料。此外，样品可以是血液、血浆、血清、脊髓液、尿液、汗液、唾液、眼泪、乳房抽吸物、母乳、前列腺液、精液、阴道液、粪便、宫颈刮片、细胞、羊水、眼内液、粘液、呼吸水分、动物组织、细胞裂解物、肿瘤组织、毛发、皮肤、颊刮屑、淋巴液、间质液、指甲、骨髓、软骨、朊病毒、骨粉、耳垢、淋巴液、肉芽肿、癌症活检或其组合。
样品可以是液体抽吸物。例如，样品可以是支气管肺泡灌洗液(BAL)、腹水、胸膜灌洗液或心包灌洗液。
样品可以包括血液、尿液、组织等。在一优选的实施方案中，生物样品包括血液样品。血液可以是静脉血或动脉血。血样可以立即进行化验。另外，血液样本可以在低温下储存，例如在冰箱中或者甚至在进行该方法之前冷冻。另外，在进行该方法之前，也可以将血液样本储存在室温下，例如18至22摄氏度之间。血液样品可包含血清。血液样品可以包含血浆。然而，优选地，检测在全血上进行，并且最优选地，血液样品是外周血。
在进行第一方面的使用之前，可以进一步处理血液。例如，可以添加抗凝剂，例如柠檬酸盐(例如柠檬酸钠)、水蛭素、肝素、PPACK或氟化钠。因此，样品收集容器可以含有抗凝剂以防止血液样品凝结。
优选地，样品可包含血浆、内皮细胞、巨核细胞和/或血小板。
应当理解，本发明延伸至任何核酸或肽或其变体、衍生物或类似物，其基本上包含本文提及的任何序列的氨基酸或核酸序列，包括其变体或片段。术语“基本上氨基酸/核苷酸/肽序列”、“变体”和“片段”可以是与本文中所提及的任一序列的氨基酸/核苷酸/肽序列具有至少40％序列同一性的序列。例如与SEQ ID No:1至SEQ ID No:194等所标识的序列有40％的同一性。
氨基酸/多核苷酸/多肽序列与上述任何序列的序列同一性大于65％，更优选大于70％，甚至更优选大于75％，更优选大于80％，也是可以考虑的。优选地，氨基酸/多核苷酸/多肽序列与本文所提及的任何序列具有至少85％同一性，更优选至少90％同一性，甚至更优选至少92％同一性，甚至更优选至少95％同一性，甚至更优选至少97％同一性，甚至更优选至少98％同一性，最优选至少99％同一性。
技术人员将理解如何计算两个氨基酸/多核苷酸/多肽序列之间的同一性百分比。为了计算两个氨基酸/多核苷酸/多肽序列之间的同一性百分比，必须首先对两个序列进行比对，然后计算序列同一性值。两个序列的百分比同一性可能取不同的值，具体取决于：(i)用于比对序列的方法，例如ClustalW、BLAST、FASTA、Smith-Waterman(在不同程序中实现)或来自3D比较的结构比对；(ii)比对方法使用的参数，例如局部与全局比对、使用的配对分数矩阵(例如BLOSUM62、PAM250、Gonnet等)，以及间隙罚分，例如函数形式和常数。
进行比对后，有许多不同的方法来计算两个序列之间的同一性百分比。例如，可以将同一性的数量除以：(i)最短序列的长度；(ii)对齐长度；(iii)序列的平均长度；(iv)无间隙位置的数量；或(v)除悬垂外的等效位置的数量。此外，应当理解，同一性百分比也与长度密切相关。因此，一对序列越短，偶然出现的序列同一性就越高。
因此，应当理解，蛋白质或DNA序列的精确比对是一个复杂的过程。流行的多重比对程序ClustalW(Thompson et al.,1994,Nucleic Acids Research,22,4673-468o；Thompson et al.,1997,Nucleic Acids Research,24,4876-4882)是根据本发明生成蛋白质或DNA的多重比对的首选方法。ClustalW的合适参数如下：对于DNA比对：空位开放罚分＝15.0，空位延伸罚分＝6.66，矩阵＝同一性。对于蛋白质比对：空位开放罚分＝10.0，空位延伸罚分＝0.2，矩阵＝Gonnet。对于DNA和蛋白质比对：ENDGAP＝-1，GAPDIST＝4。本领域技术人员将意识到，可能有必要改变这些参数和其他参数，以实现最佳序列比对。
优选地，两个氨基酸/多核苷酸/多肽序列之间同一性百分比的计算可以通过这样的比对计算出来，即(N/T)*100，其中N是序列共享相同残基的位置数，T是比对的位置总数，包括空位以及包括或不包括悬垂部分。优选地，计算中包括悬垂部分。因此，用于计算两个序列之间的百分比同一性的最优选方法包括(i)使用ClustalW程序使用一组合适的参数来准备序列比对，例如如上所述的参数；(ii)将N和T的值代入以下公式：-序列同一性＝(N/T)*100。
本领域技术人员都知晓用于鉴定相似序列的其他方法。例如，基本相似的核苷酸序列将由在严格条件下与DNA序列或其互补序列杂交的序列编码。所谓严格条件，发明人是指在大约45℃下在3x氯化钠/柠檬酸钠(SSC)中核苷酸与滤膜结合的DNA或RNA杂交，然后在大约20-65℃下在0.2xSSC/0.1％SDS中洗涤至少一次。另外，基本上相似的多肽可以与例如SEQ ID No:1至SEQ ID No:194中所示的氨基酸序列有至少1个、但少于5、10、20、50或100个氨基酸的差异。
由于遗传密码的简并性，显然本文所述的任何核酸序列都可以在不对其编码的蛋白质序列产生实质性影响的情况下进行变化或改变，以提供其功能变体。合适的核苷酸变体是那些具有通过替换序列内编码相同氨基酸的不同密码子而改变的序列的核苷酸变体，从而产生沉默(同义)改变。其他合适的变体是具有同源核苷酸序列但包含全部或部分序列的变体，其通过不同密码子的取代而改变，这些密码子编码具有与其取代的氨基酸具有相似生物物理特性的侧链的氨基酸，以产生保守的改变。例如，小的非极性疏水氨基酸包括甘氨酸、丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、脯氨酸和甲硫氨酸。大的非极性疏水氨基酸包括苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸。极性中性氨基酸包括丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、天冬酰胺和谷氨酰胺。带正电荷的(碱性)氨基酸包括赖氨酸、精氨酸和组氨酸。带负电(酸性)氨基酸包括天冬氨酸和谷氨酸。因此，应当理解哪些氨基酸可以用具有类似生物物理特性的氨基酸取代是显而易见的，熟练的技术人员也知道编码这些氨基酸的核苷酸序列。
本文描述的所有特征(包括任何所附权利要求、摘要和附图)和/或公开的任何方法或过程的所有步骤可以与上述任何方面任意组合，但至少其中某些特征和/或步骤相互排斥的组合除外。
为了更好地理解本发明，并且为了说明如何实施本发明的实施例，现在将通过举例的方式参考附图，其中：
图1是VWF肽结构的示意图，示出了前肽和成熟VWF区域。血小板主要通过A1和A3结构域结合，目前的疗法(包括卡帕珠单抗)都以这两个结构域为靶点。本发明的抑制剂以C1至C6结构域中的一个或多个为靶点。
图2示出了用人C1-C6-Fc蛋白免疫的NZW-1兔血浆对重组VWF蛋白的基于ELISA的反应性筛选，说明血浆对人天然VWF和C1-C6-Fc重组蛋白显示出良好的反应性。
图3A至图3H示出了8种独特的抗VWF抗体与天然VWF蛋白和重组C1-C6蛋白的ELISA结合，证明许多抗体与一个或多个C1-C6结构域特异性结合。
图4示出了5种选定的抗VWF单克隆抗体与人天然VWF的表面等离子共振(SPR)亲和力测定结果。
图5示出了高剪切速率(10000s-1)下血小板流动测定的结果，证明了抗体在病理条件下减少血小板聚集的能力。
图6A至图6C示出了4-H3、1-A2和1-G5抗体在正常剪切速率(1500s-1)和高剪切速率(5000s-1)下的全血流测定结果，证明了它们能够在病理条件下抑制血小板捕获，同时维持VWF的正常止血功能。
图7A至图7E示出了针对C1-C6-Fc的5种单克隆抗体(Fc失能的L234A、L235A-P329G无效效应子主链和Fab片段抗体)的基于ELISA的反应性筛选。
图8的表格示出了本发明的抗VWF抗体的八个实施方案的各种序列。FR＝框架区；CDR＝互补决定区；VH＝可变重链序列；VL＝可变轻链序列；HC＝恒定重链序列；LC＝恒定轻链序列。
图9的表格示出了五种所选单克隆抗体对人VWF各个C-结构域的SPR亲和力测定结果。选择五种兔源性单克隆抗体进行亲和力测定(KD)以及与人单个VWF的C结构域结合的结合率(Ka)和解离率(kd)测定。所有五种单克隆抗体均显示出以亚nM亲和力与C5结构域结合。还观察到与C4(3-H9)和C3(1-D5)的结合较弱。
图10的表格示出了人源化mAb序列。
图11的表格示出了人源化单克隆抗体对人全长VWF的SPR亲和力测定结果。选择所有人源化单克隆抗体进行亲和力测定(KD)以及与人全长VWF结合的结合率(Ka)和解离率(kd)测定。所有克隆均显示出长解离率和亚nM亲和力。
图12示出了在正常剪切速率和高剪切速率下全血流测定中选定的人源化抗VWF抗体的测试结果。在全血流测试中，人源化抗体在高剪切速率(5000s-1)下比在正常剪切速率条件(1500s-1)下更大程度地抑制血小板捕获，表明这些抗体可以阻断VWF的促血栓形成功能，同时保持其止血功能正常。
实施例
VWF的积累与血小板介导的聚集引起的多种疾病的风险增加有关，包括各种心血管疾病和血栓相关疾病。然而，目前的治疗方法针对VWF必需的A1结构域，抑制止血所需的血小板结合，导致患者出血风险增加。因此，发明人开始抑制VWF先前未靶向的区域，即C1-C6结构域。发明人开发了能够特异性结合C1-C6区域(即如图1所示的一个或多个C1-C6结构域)的抗体，从而改善了对多种血栓相关疾病的治疗。如下所述，已经生产了几种新型C5靶向抗体(以及人源化抗体)，它们表现出所需的效果(即能够在高剪切速率下抑制血小板捕获，表明这些抗体具有功能活性)，因此可以将其用于治疗和诊断。
实施例1–抗VWF抗体的产生
用100μg重组产生的人C1-C6-Fc蛋白对新西兰白(NZW)兔进行免疫。21天后，兔子接受了50μg人C1-C6-Fc的第一次加强注射，42天后，接受了50μg C1-C6-Fc的第二次加强注射。第一次免疫后52天抽取血液进行分析。
将目标蛋白(C1-C6-Fc、VWFΔD4-C6和BSA：100ng/孔；VWF-His：500ng/孔和天然VWF：20ng/孔)固定在ELISA板上过夜，并用半对数稀释系列的NZW-1兔血浆样本(起始稀释度1:100)进行封闭和孵育。用抗兔-HRP和TMB检测抗体结合。
图2展示了兔血浆对重组VWF蛋白的反应性。NZW-1兔的血浆对人天然VWF和C1-C6-Fc重组产生的蛋白质表现出良好的反应性。血浆显示出对重组产生的VWF-His标记蛋白的反应性较低。对BSA和删除了C1-C6结构域的VWF重组片段(VWFΔD4-C6)的背景反应性极小。选择NZW-1兔进行收获前加强注射和随后的文库生成。
实施例2–噬菌体文库生成和筛选
从C1-C6-Fc免疫的NZW-1兔脾细胞和骨髓中分离出基于TRIzol的RNA后，S28和S18rRNA条带的清晰存在证明了RNA样品的完整性。使用SuperScript III将RNA逆转录为cDNA，并通过GAPDH的PCR扩增和随后的琼脂糖凝胶电泳确认cDNA质量。
对脾细胞衍生的cDNA和骨髓衍生的cDNA上的VK和VH进行PCR扩增。使用含有SfiI限制性位点的恒定区FR1正向引物和FR4反向引物扩增VK和VH片段。扩增产物的预期大小约为400bp。为了扩增VK和VH基因，使用了多种正向和反向引物。将每个来源(脾脏或骨髓)的PCR产物汇集起来，凝胶纯化正确大小的片段，用于scFv重叠组装PCR。随后，对凝胶纯化的正确大小的组装产物进行SfiI消化，并用于生成两个scFv噬菌体文库，即一个由脾脏来源的V基因生成的文库和一个由骨髓来源的V基因生成的文库。
在专有噬菌粒载体中大规模连接scFv库并随后在大肠杆菌TG-1细菌中进行转化后，获得了总数8.9x 107个转化体。180个随机挑选的菌落(来自每个脾和骨髓的90个克隆)通过PCR分析全长scFv插入片段的存在。随后对90个选定的包含全长插入片段的克隆(来自每个脾脏和骨髓文库的45个克隆)中的86个进行了正确测序(基于质量追踪数据)，其中60个被证明包含正确的完整scFv插入，得到5.9x 107个正确的完整包含scFv转化体的最终文库。
最终的噬菌体文库针对人C1-C6-Fc和人天然VWF蛋白进行了4轮筛选。对4轮筛选的结果进行了筛选，以确定它们是否与C1-C6-Fc、VWF-His、VWF-ΔD4-C6、hIgG、BSA和链霉亲和素结合。筛选出一些有反应的克隆进行测序。
总体而言，从组合的初始和附加测序程序获得的scFv序列可分为5个VH-CDR3家族。从8个独特的scFv序列中共鉴定出8个独特的VH序列和8个独特的VL序列。这些序列被克隆到人IgG1表达载体中，并被瞬时表达和纯化。使用蛋白A对重组抗体进行纯化。
实施例3–ELISA实验显示抗VWF抗体与天然VWF蛋白和重组C1-C6蛋白结合情况
测试了最初源自选自兔免疫文库的scFv的纯化单克隆抗体与C1-C6-Fc、VWFΔD4-C6、BSA(100ng/孔)和人类天然VWF(帝国理工学院，20ng/孔)的结合情况。8个独特序列被克隆到IgG1人表达载体中并表达为单克隆抗体。将蛋白质靶标固定在ELISA板上过夜，封闭并用纯化重组单克隆抗体的半对数稀释系列(起始浓度10μg/ml)孵育，显示重复值的平均值。用抗人IgG-HRP或抗人IgG-HRP和TMB染色检测抗体与人天然VWF、VWFΔD4-C6和BSA的结合情况。针对C1-C6-Fc的ELISA反应性在单独的ELISA实验中进行，并通过抗人IgGκ-HRP和TMB染色进行检测。结果如图3A至图3H所示。
克隆4-H9(图3E)、4-C6(图3F)和4-B12(图3H)仅显示对C1-C6结构域的反应性。克隆1-G5(图3G)、3-H9(图3D)、4-H3(图3C)、1-D5(图3B)和1-A2(图3A)均对天然VWF和C1-C6蛋白都显示出阳性反应。所有克隆均显示出与不含C1-C6结构域的VWF(VWFΔC1-C6)的结合极少。
实施例4–通过SPR测定抗VWF抗体与人天然VWF的结合情况
使用配备有研究级蛋白质A系列S传感器芯片的Biacore 8K(Cytiva)进行表面等离子体共振(SPR)实验。将浓度为0.156μg/ml或0.312μg/ml的抗体溶解在含有300mM NaCl、3mM EDTA和0.05％ P20缓冲液的10mM Hepes pH 7.4中，固定在蛋白质A系列S传感器芯片上，流动密度约为12RU流通池2。流通池1留空以用作参考表面。为了收集单循环动力学结合，首先以50μl/min的速度用10mM甘氨酸-HCl pH 1.5在芯片表面浸泡30秒，然后以30μl/min的速度运行缓冲液(10mM Hepes pH7.4，含有300mM NaCl、3mM EDTA和0.05％ P20)60秒。然后将天然VWF(305kDa)注入两个流通池中，含10mM Hepes pH 7.4(含有300mM NaCl、3mM EDTA和0.05％ P20)，浓度为4.4、6.6、9.9、14.8、22、33和50nM，流速为30μl/min，隔室温度为100℃，流通池温度为250℃。复合物的结合和解离时间分别为120秒和7200秒。30秒后注入pH1.5的10mM甘氨酸-HCl使表面再生。
数据采集频率为10Hz。使用Biacore Insight评估软件3.0.12.15655版中提供的全局数据分析选项将数据拟合为简单的1:1交互模型。结果如图4所示。
筛选出五个克隆进行亲和力测定(KD)以及结合率(Ka)和解离率(kd)，测定与天然VWF的结合情况。所有5个克隆都显示出可重复的动力学，具有长解离率和亚nM亲和力。
实施例5–血小板流动测定
流式载玻片涂有纯化的VWF，并以高剪切率(10000s-1)灌注无血浆血液。无血浆血是除去血浆部分的全血，仅保留红细胞和血小板。在缺乏可溶性VWF的情况下，血小板附着在VWF表面，但不会形成血小板和VWF的聚集体。当添加可溶性VWF时，会形成血小板和VWF的聚集体。剪切力非常高，以至于可溶性VWF可以在溶液中展开并捕获血小板(参见同种型对照图像)。添加抗体(10ug/ml)可在不同程度上防止这种情况的发生。
图5示出了这种无血浆血流检测生成的图像，其中血小板捕获显示为白色(白色“团块”表示正常聚集)。同种型对照显示了在不存在抗VWF的C1-C6抗体的情况下血小板捕获的水平。当克隆1-A2和4-H3存在时，血小板捕获被消除。克隆1-D5、3-H9和1-G5也在病理条件下减少血小板和血栓形成。因此，结果表明，在高剪切“病理”速率(10000s-1)下，5种不同的C1-C6 mAbs可减少血小板聚集，证实了所有5种抗体均具有功能活性。这也是与天然VWF和C1-C6结合力最强的5个克隆(见实施例3)。
实施例6–全血流分析
载玻片涂上胶原蛋白，用全血灌注测试抗体，浓度如图6所示。根据流动5分钟后的图像计算平均荧光强度(MFI)，并与同种型对照(MFI％)进行归一化。每种流速使用相同的供血者。
如图6A至图6C所示，在全血流试验中，4-H3、1-A2和1-G5抗体在高剪切速率(5000s-1)下比在正常剪切速率条件(1500s-1)下能更大程度地抑制血小板捕获。这表明这些抗体可以阻断VWF的促血栓形成功能，同时维持其正常的止血功能。
实施例7–ELISA实验显示Fc失能的抗VWF抗体和抗VWFFab片段与C1-C6-Fc的结合
情况
对以下进行基于ELISA的反应性筛选：(i)包含Fc失能的L234AL235A-P329G无效效应子骨架的纯化的单克隆vWF抗体，以及(ii)VWFFab片段，以测试它们与C1-C6-Fc的结合(100ng/孔)。将蛋白质靶标固定在ELISA板上过夜，封闭并用纯化重组单克隆抗体或Fab片段的半对数稀释系列(起始浓度10μg/ml，11次稀释)孵育，显示重复值的平均值。使用抗人IgGK-HRP和TMB染色检测抗体或Fab片段与C1-C6-Fc的结合情况。
如图7A至图7E所示，克隆1-A2(图7A)、4-H3(图7B)、1-D5(图7C)、3-H9(图7D)和1-G5(图7E)的Fab片段和Fc失能抗体都与C1-C6-Fc呈阳性反应和结合。
实施例8–五种mAbs对各个C-结构域的SPR分析
在蛋白A传感器芯片上捕获抗体。使用运行缓冲液(10mM HEPES pH 7.4、300mMNaCl、3mM EDTA、0.05％ P20)净化系统，并将S系列蛋白A芯片对接到Biacore T200中。用10mM甘氨酸-HCl pH 1.5再生溶液调节表面(3次进样)。将每种抗体在运行缓冲液中稀释至约0.8μg/ml，以在流通池2、3和4上捕获约350RU(流通池1用作在线参考池)。使用以下参数对每个C结构域与抗体的结合进行单循环动力学分析：
在每次循环后，使用10mM甘氨酸-HCl pH 1.5以50μl/min的速度再生芯片表面30秒。图9报告了针对人类每个C结构域测试的每种抗体的亲和力和动力学情况。
如图9所示，所有五种单克隆抗体都与C5结构域结合，亲和力低于nM。与C4(3-H9)和C3(1-D5)的结合较弱。
实施例9–人源化变体的克隆和表达
通过构建重叠寡核苷酸重新制备编码人源化抗体变体的DNA表达构建体，所述重叠寡核苷酸包括用于克隆到哺乳动物表达载体中的限制性位点以及人信号序列。引入HindIII和SpeI限制性位点以构建包含信号序列的VH结构域，用于克隆到包含人γ1恒定区的哺乳动物表达载体中。引入HindIII和BsiWI限制性位点以构建包含信号序列的VL结构域，用于克隆到包含人κ恒定区的哺乳动物表达载体中。将分别编码重链和轻链的表达质粒瞬时共转染至HEK 293 6E细胞中并表达以产生抗体。使用蛋白A纯化制剂并使用Nanodrop(Thermo Scientific)测量浓度。
实施例10–针对人全长VWF的人源化mAb的SPR分析
在蛋白A传感器芯片上捕获抗体。使用运行缓冲液(10mM HEPES pH 7.4、300mMNaCl、3mM EDTA、0.05％ P20)净化系统，并将S系列蛋白A芯片对接到Biacore T200中。用10mM甘氨酸-HCl pH 1.5再生溶液调节表面(3次进样)。将每种抗体在运行缓冲液中稀释至约0.8μg/ml，以在流通池2、3和4上捕获约350RU(流通池1用作在线参考池)。使用以下参数对人全长VWF与抗体的结合进行单循环动力学分析：
在每次循环后，使用10mM甘氨酸-HCl pH 1.5以50μl/min的速度再生芯片表面30秒。报告了针对人全长VWF测试的每种抗体的亲和力和动力学情况。如图11所示，所有人源化单克隆抗体克隆都显示出对人全长VWF的长解离率和亚nM亲和力。
实施例11–人源化抗VWF抗体在正常剪切速率和高剪切速率下的全血流试验中抑
制血小板捕获
载玻片涂上胶原蛋白，用全血灌注测试抗体，浓度如图所示。根据流动5分钟后的图像计算平均荧光强度(MFI)，并与同种型对照(MFI％)进行归一化。每种流速使用相同的供血者。
如图12所示，在全血流测定中，所有五种人源化抗体在高剪切速率(5000s-1)下比在正常剪切速率条件(1500s-1)下能更大程度地抑制血小板捕获，这表明这些抗体可以阻断VWF的促血栓形成功能，同时维持其正常的止血功能。因此，这些结果证实人源化单克隆抗体具有功能活性。
讨论和结论
发明人已确定VWF蛋白的C1-C6结构域在促血栓形成的病理条件下对VWF功能很重要，因此开发了能够结合并抑制C1-C6 VWF功能的抗体。例如，如图3A至图3H和图7A至图7E所示，发明人已经开发了许多抗体及其抗原结合片段，已证明它们能够特异性靶向VWF的C1-C6结构域。具体地，如图9所示，发明人已经证明本发明的单克隆抗体能与VWF的C5结构域结合。此外，如图5和图6所示，发明人已经证明，通过靶向C1-C6结构域，抗体可以在高剪切病理速率下减少血小板聚集，但在正常条件下，血小板捕获得以维持。
另外，发明人已经生成了根据本发明的抗体的人源化版本，并且已经证明人源化抗体可以以高亲和力结合人全长VWF。发明人还证明了人源化抗体能够在高剪切速率下抑制血小板捕获，表明这些人源化单克隆抗体具有功能活性。
目前的抗VWF疗法靶向并抑制VWF的A1结构域，因此在低剪切速率条件下抑制血小板结合。这会阻止正常的止血过程，导致患者面临严重的出血风险。发明人已经证明，通过靶向VWF的C1-C6结构域，可以仅在高剪切病理速率下抑制血小板结合，而不是在与正常止血相关的低剪切速率下抑制血小板结合。因此，发明人已经确定了一种用于预防或治疗血栓相关病症而不增加严重出血风险的新策略。
SEQUENCE LISTING
<110> IP2IPO Innovations Ltd
<120> Von Willebrand Factor (VWF) Inhibitors
<130> 102109PCT1
<150> 2105625.4
<151> 2021-04-20
<160> 194
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 2813
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 1
Met Ile Pro Ala Arg Phe Ala Gly Val Leu Leu Ala Leu Ala Leu Ile
1 5 10 15
Leu Pro Gly Thr Leu Cys Ala Glu Gly Thr Arg Gly Arg Ser Ser Thr
20 25 30
Ala Arg Cys Ser Leu Phe Gly Ser Asp Phe Val Asn Thr Phe Asp Gly
35 40 45
Ser Met Tyr Ser Phe Ala Gly Tyr Cys Ser Tyr Leu Leu Ala Gly Gly
50 55 60
Cys Gln Lys Arg Ser Phe Ser Ile Ile Gly Asp Phe Gln Asn Gly Lys
65 70 75 80
Arg Val Ser Leu Ser Val Tyr Leu Gly Glu Phe Phe Asp Ile His Leu
85 90 95
Phe Val Asn Gly Thr Val Thr Gln Gly Asp Gln Arg Val Ser Met Pro
100 105 110
Tyr Ala Ser Lys Gly Leu Tyr Leu Glu Thr Glu Ala Gly Tyr Tyr Lys
115 120 125
Leu Ser Gly Glu Ala Tyr Gly Phe Val Ala Arg Ile Asp Gly Ser Gly
130 135 140
Asn Phe Gln Val Leu Leu Ser Asp Arg Tyr Phe Asn Lys Thr Cys Gly
145 150 155 160
Leu Cys Gly Asn Phe Asn Ile Phe Ala Glu Asp Asp Phe Met Thr Gln
165 170 175
Glu Gly Thr Leu Thr Ser Asp Pro Tyr Asp Phe Ala Asn Ser Trp Ala
180 185 190
Leu Ser Ser Gly Glu Gln Trp Cys Glu Arg Ala Ser Pro Pro Ser Ser
195 200 205
Ser Cys Asn Ile Ser Ser Gly Glu Met Gln Lys Gly Leu Trp Glu Gln
210 215 220
Cys Gln Leu Leu Lys Ser Thr Ser Val Phe Ala Arg Cys His Pro Leu
225 230 235 240
Val Asp Pro Glu Pro Phe Val Ala Leu Cys Glu Lys Thr Leu Cys Glu
245 250 255
Cys Ala Gly Gly Leu Glu Cys Ala Cys Pro Ala Leu Leu Glu Tyr Ala
260 265 270
Arg Thr Cys Ala Gln Glu Gly Met Val Leu Tyr Gly Trp Thr Asp His
275 280 285
Ser Ala Cys Ser Pro Val Cys Pro Ala Gly Met Glu Tyr Arg Gln Cys
290 295 300
Val Ser Pro Cys Ala Arg Thr Cys Gln Ser Leu His Ile Asn Glu Met
305 310 315 320
Cys Gln Glu Arg Cys Val Asp Gly Cys Ser Cys Pro Glu Gly Gln Leu
325 330 335
Leu Asp Glu Gly Leu Cys Val Glu Ser Thr Glu Cys Pro Cys Val His
340 345 350
Ser Gly Lys Arg Tyr Pro Pro Gly Thr Ser Leu Ser Arg Asp Cys Asn
355 360 365
Thr Cys Ile Cys Arg Asn Ser Gln Trp Ile Cys Ser Asn Glu Glu Cys
370 375 380
Pro Gly Glu Cys Leu Val Thr Gly Gln Ser His Phe Lys Ser Phe Asp
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Asn Arg Tyr Phe Thr Phe Ser Gly Ile Cys Gln Tyr Leu Leu Ala Arg
405 410 415
Asp Cys Gln Asp His Ser Phe Ser Ile Val Ile Glu Thr Val Gln Cys
420 425 430
Ala Asp Asp Arg Asp Ala Val Cys Thr Arg Ser Val Thr Val Arg Leu
435 440 445
Pro Gly Leu His Asn Ser Leu Val Lys Leu Lys His Gly Ala Gly Val
450 455 460
Ala Met Asp Gly Gln Asp Val Gln Leu Pro Leu Leu Lys Gly Asp Leu
465 470 475 480
Arg Ile Gln His Thr Val Thr Ala Ser Val Arg Leu Ser Tyr Gly Glu
485 490 495
Asp Leu Gln Met Asp Trp Asp Gly Arg Gly Arg Leu Leu Val Lys Leu
500 505 510
Ser Pro Val Tyr Ala Gly Lys Thr Cys Gly Leu Cys Gly Asn Tyr Asn
515 520 525
Gly Asn Gln Gly Asp Asp Phe Leu Thr Pro Ser Gly Leu Ala Glu Pro
530 535 540
Arg Val Glu Asp Phe Gly Asn Ala Trp Lys Leu His Gly Asp Cys Gln
545 550 555 560
Asp Leu Gln Lys Gln His Ser Asp Pro Cys Ala Leu Asn Pro Arg Met
565 570 575
Thr Arg Phe Ser Glu Glu Ala Cys Ala Val Leu Thr Ser Pro Thr Phe
580 585 590
Glu Ala Cys His Arg Ala Val Ser Pro Leu Pro Tyr Leu Arg Asn Cys
595 600 605
Arg Tyr Asp Val Cys Ser Cys Ser Asp Gly Arg Glu Cys Leu Cys Gly
610 615 620
Ala Leu Ala Ser Tyr Ala Ala Ala Cys Ala Gly Arg Gly Val Arg Val
625 630 635 640
Ala Trp Arg Glu Pro Gly Arg Cys Glu Leu Asn Cys Pro Lys Gly Gln
645 650 655
Val Tyr Leu Gln Cys Gly Thr Pro Cys Asn Leu Thr Cys Arg Ser Leu
660 665 670
Ser Tyr Pro Asp Glu Glu Cys Asn Glu Ala Cys Leu Glu Gly Cys Phe
675 680 685
Cys Pro Pro Gly Leu Tyr Met Asp Glu Arg Gly Asp Cys Val Pro Lys
690 695 700
Ala Gln Cys Pro Cys Tyr Tyr Asp Gly Glu Ile Phe Gln Pro Glu Asp
705 710 715 720
Ile Phe Ser Asp His His Thr Met Cys Tyr Cys Glu Asp Gly Phe Met
725 730 735
His Cys Thr Met Ser Gly Val Pro Gly Ser Leu Leu Pro Asp Ala Val
740 745 750
Leu Ser Ser Pro Leu Ser His Arg Ser Lys Arg Ser Leu Ser Cys Arg
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Pro Pro Met Val Lys Leu Val Cys Pro Ala Asp Asn Leu Arg Ala Glu
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Gly Leu Glu Cys Thr Lys Thr Cys Gln Asn Tyr Asp Leu Glu Cys Met
785 790 795 800
Ser Met Gly Cys Val Ser Gly Cys Leu Cys Pro Pro Gly Met Val Arg
805 810 815
His Glu Asn Arg Cys Val Ala Leu Glu Arg Cys Pro Cys Phe His Gln
820 825 830
Gly Lys Glu Tyr Ala Pro Gly Glu Thr Val Lys Ile Gly Cys Asn Thr
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Cys Val Cys Gln Asp Arg Lys Trp Asn Cys Thr Asp His Val Cys Asp
850 855 860
Ala Thr Cys Ser Thr Ile Gly Met Ala His Tyr Leu Thr Phe Asp Gly
865 870 875 880
Leu Lys Tyr Leu Phe Pro Gly Glu Cys Gln Tyr Val Leu Val Gln Asp
885 890 895
Tyr Cys Gly Ser Asn Pro Gly Thr Phe Arg Ile Leu Val Gly Asn Lys
900 905 910
Gly Cys Ser His Pro Ser Val Lys Cys Lys Lys Arg Val Thr Ile Leu
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Val Glu Gly Gly Glu Ile Glu Leu Phe Asp Gly Glu Val Asn Val Lys
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Arg Pro Met Lys Asp Glu Thr His Phe Glu Val Val Glu Ser Gly Arg
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Tyr Ile Ile Leu Leu Leu Gly Lys Ala Leu Ser Val Val Trp Asp Arg
965 970 975
His Leu Ser Ile Ser Val Val Leu Lys Gln Thr Tyr Gln Glu Lys Val
980 985 990
Cys Gly Leu Cys Gly Asn Phe Asp Gly Ile Gln Asn Asn Asp Leu Thr
995 1000 1005
Ser Ser Asn Leu Gln Val Glu Glu Asp Pro Val Asp Phe Gly Asn
1010 1015 1020
Ser Trp Lys Val Ser Ser Gln Cys Ala Asp Thr Arg Lys Val Pro
1025 1030 1035
Leu Asp Ser Ser Pro Ala Thr Cys His Asn Asn Ile Met Lys Gln
1040 1045 1050
Thr Met Val Asp Ser Ser Cys Arg Ile Leu Thr Ser Asp Val Phe
1055 1060 1065
Gln Asp Cys Asn Lys Leu Val Asp Pro Glu Pro Tyr Leu Asp Val
1070 1075 1080
Cys Ile Tyr Asp Thr Cys Ser Cys Glu Ser Ile Gly Asp Cys Ala
1085 1090 1095
Cys Phe Cys Asp Thr Ile Ala Ala Tyr Ala His Val Cys Ala Gln
1100 1105 1110
His Gly Lys Val Val Thr Trp Arg Thr Ala Thr Leu Cys Pro Gln
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Ser Cys Glu Glu Arg Asn Leu Arg Glu Asn Gly Tyr Glu Cys Glu
1130 1135 1140
Trp Arg Tyr Asn Ser Cys Ala Pro Ala Cys Gln Val Thr Cys Gln
1145 1150 1155
His Pro Glu Pro Leu Ala Cys Pro Val Gln Cys Val Glu Gly Cys
1160 1165 1170
His Ala His Cys Pro Pro Gly Lys Ile Leu Asp Glu Leu Leu Gln
1175 1180 1185
Thr Cys Val Asp Pro Glu Asp Cys Pro Val Cys Glu Val Ala Gly
1190 1195 1200
Arg Arg Phe Ala Ser Gly Lys Lys Val Thr Leu Asn Pro Ser Asp
1205 1210 1215
Pro Glu His Cys Gln Ile Cys His Cys Asp Val Val Asn Leu Thr
1220 1225 1230
Cys Glu Ala Cys Gln Glu Pro Gly Gly Leu Val Val Pro Pro Thr
1235 1240 1245
Asp Ala Pro Val Ser Pro Thr Thr Leu Tyr Val Glu Asp Ile Ser
1250 1255 1260
Glu Pro Pro Leu His Asp Phe Tyr Cys Ser Arg Leu Leu Asp Leu
1265 1270 1275
Val Phe Leu Leu Asp Gly Ser Ser Arg Leu Ser Glu Ala Glu Phe
1280 1285 1290
Glu Val Leu Lys Ala Phe Val Val Asp Met Met Glu Arg Leu Arg
1295 1300 1305
Ile Ser Gln Lys Trp Val Arg Val Ala Val Val Glu Tyr His Asp
1310 1315 1320
Gly Ser His Ala Tyr Ile Gly Leu Lys Asp Arg Lys Arg Pro Ser
1325 1330 1335
Glu Leu Arg Arg Ile Ala Ser Gln Val Lys Tyr Ala Gly Ser Gln
1340 1345 1350
Val Ala Ser Thr Ser Glu Val Leu Lys Tyr Thr Leu Phe Gln Ile
1355 1360 1365
Phe Ser Lys Ile Asp Arg Pro Glu Ala Ser Arg Ile Thr Leu Leu
1370 1375 1380
Leu Met Ala Ser Gln Glu Pro Gln Arg Met Ser Arg Asn Phe Val
1385 1390 1395
Arg Tyr Val Gln Gly Leu Lys Lys Lys Lys Val Ile Val Ile Pro
1400 1405 1410
Val Gly Ile Gly Pro His Ala Asn Leu Lys Gln Ile Arg Leu Ile
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Glu Lys Gln Ala Pro Glu Asn Lys Ala Phe Val Leu Ser Ser Val
1430 1435 1440
Asp Glu Leu Glu Gln Gln Arg Asp Glu Ile Val Ser Tyr Leu Cys
1445 1450 1455
Asp Leu Ala Pro Glu Ala Pro Pro Pro Thr Leu Pro Pro Asp Met
1460 1465 1470
Ala Gln Val Thr Val Gly Pro Gly Leu Leu Gly Val Ser Thr Leu
1475 1480 1485
Gly Pro Lys Arg Asn Ser Met Val Leu Asp Val Ala Phe Val Leu
1490 1495 1500
Glu Gly Ser Asp Lys Ile Gly Glu Ala Asp Phe Asn Arg Ser Lys
1505 1510 1515
Glu Phe Met Glu Glu Val Ile Gln Arg Met Asp Val Gly Gln Asp
1520 1525 1530
Ser Ile His Val Thr Val Leu Gln Tyr Ser Tyr Met Val Thr Val
1535 1540 1545
Glu Tyr Pro Phe Ser Glu Ala Gln Ser Lys Gly Asp Ile Leu Gln
1550 1555 1560
Arg Val Arg Glu Ile Arg Tyr Gln Gly Gly Asn Arg Thr Asn Thr
1565 1570 1575
Gly Leu Ala Leu Arg Tyr Leu Ser Asp His Ser Phe Leu Val Ser
1580 1585 1590
Gln Gly Asp Arg Glu Gln Ala Pro Asn Leu Val Tyr Met Val Thr
1595 1600 1605
Gly Asn Pro Ala Ser Asp Glu Ile Lys Arg Leu Pro Gly Asp Ile
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Gln Val Val Pro Ile Gly Val Gly Pro Asn Ala Asn Val Gln Glu
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Leu Glu Arg Ile Gly Trp Pro Asn Ala Pro Ile Leu Ile Gln Asp
1640 1645 1650
Phe Glu Thr Leu Pro Arg Glu Ala Pro Asp Leu Val Leu Gln Arg
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Cys Cys Ser Gly Glu Gly Leu Gln Ile Pro Thr Leu Ser Pro Ala
1670 1675 1680
Pro Asp Cys Ser Gln Pro Leu Asp Val Ile Leu Leu Leu Asp Gly
1685 1690 1695
Ser Ser Ser Phe Pro Ala Ser Tyr Phe Asp Glu Met Lys Ser Phe
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Ala Lys Ala Phe Ile Ser Lys Ala Asn Ile Gly Pro Arg Leu Thr
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Gln Val Ser Val Leu Gln Tyr Gly Ser Ile Thr Thr Ile Asp Val
1730 1735 1740
Pro Trp Asn Val Val Pro Glu Lys Ala His Leu Leu Ser Leu Val
1745 1750 1755
Asp Val Met Gln Arg Glu Gly Gly Pro Ser Gln Ile Gly Asp Ala
1760 1765 1770
Leu Gly Phe Ala Val Arg Tyr Leu Thr Ser Glu Met His Gly Ala
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Arg Pro Gly Ala Ser Lys Ala Val Val Ile Leu Val Thr Asp Val
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Ser Val Asp Ser Val Asp Ala Ala Ala Asp Ala Ala Arg Ser Asn
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Arg Val Thr Val Phe Pro Ile Gly Ile Gly Asp Arg Tyr Asp Ala
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Ala Gln Leu Arg Ile Leu Ala Gly Pro Ala Gly Asp Ser Asn Val
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Gly Asn Ser Phe Leu His Lys Leu Cys Ser Gly Phe Val Arg Ile
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Cys Met Asp Glu Asp Gly Asn Glu Lys Arg Pro Gly Asp Val Trp
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Thr Leu Pro Asp Gln Cys His Thr Val Thr Cys Gln Pro Asp Gly
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Arg Pro Ser Cys Pro Asn Ser Gln Ser Pro Val Lys Val Glu Glu
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Thr Cys Gly Cys Arg Trp Thr Cys Pro Cys Val Cys Thr Gly Ser
1940 1945 1950
Ser Thr Arg His Ile Val Thr Phe Asp Gly Gln Asn Phe Lys Leu
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Gly Ala Ile Met His Glu Val Arg Phe Asn His Leu Gly His Ile
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Phe Thr Phe Thr Pro Gln Asn Asn Glu Phe Gln Leu Gln Leu Ser
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Pro Lys Thr Phe Ala Ser Lys Thr Tyr Gly Leu Cys Gly Ile Cys
2075 2080 2085
Asp Glu Asn Gly Ala Asn Asp Phe Met Leu Arg Asp Gly Thr Val
2090 2095 2100
Thr Thr Asp Trp Lys Thr Leu Val Gln Glu Trp Thr Val Gln Arg
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Pro Gly Gln Thr Cys Gln Pro Ile Leu Glu Glu Gln Cys Leu Val
2120 2125 2130
Pro Asp Ser Ser His Cys Gln Val Leu Leu Leu Pro Leu Phe Ala
2135 2140 2145
Glu Cys His Lys Val Leu Ala Pro Ala Thr Phe Tyr Ala Ile Cys
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Gln Gln Asp Ser Cys His Gln Glu Gln Val Cys Glu Val Ile Ala
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Arg Thr Pro Asp Phe Cys Ala Met Ser Cys Pro Pro Ser Leu Val
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Pro Asp Lys Val Met Leu Glu Gly Ser Cys Val Pro Glu Glu Ala
2240 2245 2250
Cys Thr Gln Cys Ile Gly Glu Asp Gly Val Gln His Gln Phe Leu
2255 2260 2265
Glu Ala Trp Val Pro Asp His Gln Pro Cys Gln Ile Cys Thr Cys
2270 2275 2280
Leu Ser Gly Arg Lys Val Asn Cys Thr Thr Gln Pro Cys Pro Thr
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Ala Lys Ala Pro Thr Cys Gly Leu Cys Glu Val Ala Arg Leu Arg
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Gln Asn Ala Asp Gln Cys Cys Pro Glu Tyr Glu Cys Val Cys Asp
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Pro Val Ser Cys Asp Leu Pro Pro Val Pro His Cys Glu Arg Gly
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Leu Gln Pro Thr Leu Thr Asn Pro Gly Glu Cys Arg Pro Asn Phe
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Thr Cys Ala Cys Arg Lys Glu Glu Cys Lys Arg Val Ser Pro Pro
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Ser Cys Pro Pro His Arg Leu Pro Thr Leu Arg Lys Thr Gln Cys
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2450 2455 2460
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<213> Homo sapiens
<400> 3
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35 40 45
Thr Cys Gly Leu Cys Glu Val Ala Arg Leu Arg Gln Asn Ala Asp Gln
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<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 4
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<213> Homo sapiens
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Cys Leu Pro
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Glu
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65
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<213> Homo sapiens
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<213> Artificial Sequence
<220>
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Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Ala Ser
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Thr Tyr Phe Cys
35
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Thr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Glu
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 4-B12 VL
<400> 133
Asp Pro Val Leu Thr Gln Thr Ala Ser Ser Leu Ala Ala Ser Val Gly
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20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Asn Thr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Glu Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala
65 70 75 80
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1 5 10 15
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Thr Tyr Phe Cys
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<213> Artificial Sequence
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Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Leu Asn Thr Tyr Val
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Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Phe Ile Asn Gly Asp Ser Asn Thr Tyr Tyr Ala Asn Trp Ala Lys Gly
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Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Ile Thr
65 70 75 80
Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Glu Asp
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1
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<220>
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<400> 147
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<400> 148
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Leu Gly Ile Ala Pro Lys Leu Leu Ile
1 5 10 15
Tyr
<210> 149
<211> 36
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 4-C6 FR-L3
<400> 149
Thr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Glu
1 5 10 15
Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Ala Gly
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Ile Tyr Tyr Cys
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 4-C6 FR-L4
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Phe Gly Ala Gly Thr Met Val Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 151
<211> 107
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<213> Artificial Sequence
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<400> 151
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1 5 10 15
Asp Thr Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Glu Asp Ile Gly Tyr Gly
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100 105
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<220>
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<213> Homo sapiens
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<210> 154
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<213> Homo sapiens
<400> 154
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65 70 75 80
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<213> Homo sapiens
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Ala Ser Ile His Ala Thr Gly Ile Thr Phe Tyr Ala Asn Trp Ala Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Leu Val Asp Leu Asn Met Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 184
<211> 112
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 1-G5 VH
<400> 184
Gln Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg Ser
1 5 10 15
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Asp
20 25 30
Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Ser Ile His Ala Thr Gly Ile Thr Phe Tyr Ala Asn Trp Ala Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Thr Ser Lys Asp Ser Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn
65 70 75 80
Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Gly Leu
85 90 95
Val Asp Leu Asn Met Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
100 105 110
<210> 185
<211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 4-H3 VL
<400> 185
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Leu Ala Ser Glu Asp Ile Ala Ser Gly
20 25 30
Ile Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Gly Tyr Ser Phe Ser Ser
85 90 95
Asn Gly Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 186
<211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 4-H3 VL
<400> 186
Asp Tyr Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Leu Ala Ser Glu Asp Ile Ala Ser Gly
20 25 30
Ile Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Gly Tyr Ser Phe Ser Ser
85 90 95
Asn Gly Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 187
<211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 1-D5 VL
<400> 187
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Asn Ser Gly
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr His Tyr Ile Ser Ala
85 90 95
Asn Gly Ala Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 188
<211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 1-D5 VL
<400> 188
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Asn Ser Gly
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr His Tyr Ile Ser Ala
85 90 95
Asn Gly Ala Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 189
<211> 112
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 3-H9 VL
<400> 189
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ser Ser Gln Ser Val Tyr Ser Asn
20 25 30
Asn Leu Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Thr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu
65 70 75 80
Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Ser Tyr Tyr Ser
85 90 95
Ser Gly Trp Tyr Asn Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 190
<211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 1-A2 VL
<400> 190
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Leu Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Gly
20 25 30
Ile Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Gly His Ser His Ser Thr
85 90 95
Thr Asp Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 191
<211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 1-A2 VL
<400> 191
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Leu Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Gly
20 25 30
Ile Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Gly His Ser His Ser Thr
85 90 95
Thr Asp Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 192
<211> 112
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 1-G5 VL
<400> 192
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Asn Asn
20 25 30
Asn Tyr Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu
65 70 75 80
Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Ser Tyr Tyr Ser
85 90 95
Gly Gly Trp Asp Thr Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 193
<211> 112
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 1-G5 VL
<400> 193
Asp Pro Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Asn Asn
20 25 30
Asn Tyr Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu
65 70 75 80
Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Ser Tyr Tyr Ser
85 90 95
Gly Gly Trp Asp Thr Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 194
<211> 115
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 4-H3 and 1-A2 VH
<400> 194
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ile Asp Leu Thr Ser Asn
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Gly Ile Tyr Gly His Asp Thr Ser Tyr Tyr Ala Ala Trp Ala Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Phe Ile Tyr Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
Claims (41)
1.一种特异性结合血管性血友病因子(VWF)的C1、C2、C3、C4、C5和/或C6结构域中的一个或多个的抑制剂。
2.根据权利要求1所述的抑制剂，其中所述抑制剂与VWF的C5结构域特异性结合。
3.根据权利要求1或权利要求2所述的抑制剂，其中所述抑制剂基本上不与VWF的A1、A2和/或A3结构域结合。
4.根据前述权利要求中任一项所述的抑制剂，其中所述抑制剂结合VWF的氨基酸位置2255和2722之间的区域，基本上如SEQ ID No:1所示。
5.根据前述权利要求中任一项所述的抑制剂，其中所述抑制剂结合SEQ ID No:2中的一个或多个氨基酸或其变体或片段。
6.根据前述权利要求中任一项所述的抑制剂，其中所述抑制剂结合SEQ ID No:3、SEQIDNo:4、SEQ ID No:5、SEQ ID No:6、SEQ ID No:7和/或SEQ ID No:8中的一个或多个氨基酸或其变体或片段。
7.根据前述权利要求中任一项所述的抑制剂，其中所述抑制剂是生物制剂、小分子药物、蛋白质、核酸或药剂。
8.根据权利要求7所述的抑制剂，其中所述抑制剂是反义寡核苷酸、siRNA或dsRNA，其特异性靶向编码VWF的C1、C2、C3、C4、C5和/或C6结构域中的一个或多个的mRNA的一部分。
9.根据权利要求1至6中任一项所述的抑制剂，其中所述抑制剂是抗体或其抗原结合片段。
10.根据权利要求9所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段是单克隆抗体或其抗原结合片段，任选地，所述抗体或其抗原结合片段包含失能的Fc片段，任选地所述失能的Fc片段包含选自以下一个或多个氨基酸取代：L234A、L235A和P329G。
11.根据权利要求9或权利要求10所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
(i)包含SEQ ID No:9的CDR-H1结构域、包含SEQ ID No:10的CDR-H2结构域、包含SEQID No:11的CDR-H3结构域、包含SEQ ID No:18的CDR-L1结构域、包含SEQ ID No:19的CDR-L2结构域和/或包含SEQ ID No:20的CDR-L3结构域；或
(ii)包含SEQ ID No:164的CDR-H1结构域、包含SEQ ID No:10的CDR-H2结构域、包含SEQ ID No:11的CDR-H3结构域、包含SEQ ID No:18的CDR-L1结构域、包含SEQ IDNo:19的CDR-L2结构域和/或包含SEQ ID No:20的CDR-L3结构域，
任选地，其中所述抗体或其抗原结合片段包含至少一个、至少两个、至少三个、至少四个、至少五个或至少六个CDR。
12.根据权利要求9至11中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
(i)包含SEQ ID No:16或由SEQ ID No:16组成的重链可变区和包含SEQ ID No:25或由SEQ ID No:25组成的轻链可变区；
(ii)包含SEQ ID No:156或由SEQ ID No:156组成的重链可变区和包含SEQ ID No:25或由SEQ ID No:25组成的轻链可变区；
(iii)包含SEQ ID No:165或由SEQ ID No:165组成的重链可变区和包含SEQ ID No:25或由SEQ ID No:25组成的轻链可变区；
(iv)包含SEQ ID No:172或由SEQ ID No:172组成的重链可变区和包含SEQ ID No:25或由SEQ ID No:25组成的轻链可变区；
(v)包含SEQ ID No:156或由SEQ ID No:156组成的重链可变区和包含SEQ ID No:190或由SEQ ID No:190组成的轻链可变区；
(vi)包含SEQ ID No:156或由SEQ ID No:156组成的重链可变区和包含SEQ ID No:191或由SEQ ID No:191组成的轻链可变区；
(vii)包含SEQ ID No:194或由SEQ ID No:194组成的重链可变区和包含SEQ ID No:25或由SEQ ID No:25组成的轻链可变区；
(viii)包含SEQ ID No:172或由SEQ ID No:172组成的重链可变区和包含SEQ ID No:191或由SEQ ID No:191组成的轻链可变区；
(ix)包含SEQ ID No:172或由SEQ ID No:172组成的重链可变区和包含SEQ ID No:190或由SEQ ID No:190组成的轻链可变区；
(x)包含SEQ ID No:194或由SEQ ID No:194组成的重链可变区和包含SEQ ID No:191或由SEQ ID No:191组成的轻链可变区；
(xi)包含SEQ ID No:194或由SEQ ID No:194组成的重链可变区和包含SEQ ID No:190或由SEQ ID No:190组成的轻链可变区；
(xii)包含SEQ ID No:165或由SEQ ID No:165组成的重链可变区和包含SEQ ID No:191或由SEQ ID No:191组成的轻链可变区；或
(xiii)包含SEQ ID No:165或由SEQ ID No:165组成的重链可变区和包含SEQ ID No:190或由SEQ ID No:190组成的轻链可变区。
13.根据权利要求9或权利要求10所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
(i)包含SEQ ID No:27的CDR-H1结构域、包含SEQ ID No:28的CDR-H2结构域、包含SEQID No:29的CDR-H3结构域、包含SEQ ID No:36的CDR-L1结构域、包含SEQ ID No:37的CDR-L2结构域和/或包含SEQ ID No:38的CDR-L3结构域；或
(ii)包含SEQ ID No:164的CDR-H1结构域、包含SEQ ID No:28的CDR-H2结构域、包含SEQ ID No:29的CDR-H3结构域、包含SEQ ID No:36的CDR-L1结构域、包含SEQ IDNo:37的CDR-L2结构域和/或包含SEQ ID No:38的CDR-L3结构域，
任选地，其中所述抗体或其抗原结合片段包含至少一个、至少两个、至少三个、至少四个、至少五个或至少六个CDR。
14.根据权利要求9或权利要求10或权利要求13所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
(i)包含SEQ ID No:34或由SEQ ID No:34组成的重链可变区和包含SEQ ID No:43或由SEQ ID No:43组成的轻链可变区；
(ii)包含SEQ ID No:159或由SEQ ID No:159组成的重链可变区和包含SEQ ID No:43或由SEQ ID No:43组成的轻链可变区；
(iii)包含SEQ ID No:165或由SEQ ID No:165组成的重链可变区和包含SEQ ID No:43或由SEQ ID No:43组成的轻链可变区；
(iv)包含SEQ ID No:166或由SEQ ID No:166组成的重链可变区和包含SEQ ID No:43或由SEQ ID No:43组成的轻链可变区；
(v)包含SEQ ID No:167或由SEQ ID No:167组成的重链可变区和包含SEQ ID No:43或由SEQ ID No:43组成的轻链可变区；
(vi)包含SEQ ID No:168或由SEQ ID No:168组成的重链可变区和包含SEQ ID No:43或由SEQ ID No:43组成的轻链可变区；
(vii)包含SEQ ID No:169或由SEQ ID No:169组成的重链可变区和包含SEQ ID No:43或由SEQ ID No:43组成的轻链可变区；
(viii)包含SEQ ID No:170或由SEQ ID No:170组成的重链可变区和包含SEQ ID No:43或由SEQ ID No:43组成的轻链可变区；
(ix)包含SEQ ID No:171或由SEQ ID No:171组成的重链可变区和包含SEQ ID No:43或由SEQ ID No:43组成的轻链可变区；
(x)包含SEQ ID No:172或由SEQ ID No:172组成的重链可变区和包含SEQ ID No:43或由SEQ ID No:43组成的轻链可变区；
(xi)包含SEQ ID No:159或由SEQ ID No:159组成的重链可变区和包含SEQ ID No:185或由SEQ ID No:185组成的轻链可变区；
(xii)包含SEQ ID No:159或由SEQ ID No:159组成的重链可变区和包含SEQ ID No:186或由SEQ ID No:186组成的轻链可变区；
(xiii)包含SEQ ID No:194或由SEQ ID No:194组成的重链可变区和包含SEQ ID No:43或由SEQ ID No:43组成的轻链可变区；
(xiv)包含SEQ ID No:172或由SEQ ID No:172组成的重链可变区和包含SEQ ID No:186或由SEQ ID No:186组成的轻链可变区；
(xv)包含SEQ ID No:172或由SEQ ID No:172组成的重链可变区和包含SEQ ID No:185或由SEQ ID No:185组成的轻链可变区；
(xvi)包含SEQ ID No:171或由SEQ ID No:171组成的重链可变区和包含SEQ ID No:186或由SEQ ID No:186组成的轻链可变区；
(xvii)包含SEQ ID No:171或由SEQ ID No:171组成的重链可变区和包含SEQ ID No:185或由SEQ ID No:185组成的轻链可变区；
(xviii)包含SEQ ID No:170或由SEQ ID No:170组成的重链可变区和包含SEQ IDNo:186或由SEQ ID No:186组成的轻链可变区；
(xix)包含SEQ ID No:170或由SEQ ID No:170组成的重链可变区和包含SEQ ID No:185或由SEQ ID No:185组成的轻链可变区；
(xx)包含SEQ ID No:169或由SEQ ID No:169组成的重链可变区和包含SEQ ID No:186或由SEQ ID No:186组成的轻链可变区；
(xxi)包含SEQ ID No:169或由SEQ ID No:169组成的重链可变区和包含SEQ ID No:185或由SEQ ID No:185组成的轻链可变区；
(xxii)包含SEQ ID No:168或由SEQ ID No:168组成的重链可变区和包含SEQ ID No:186或由SEQ ID No:186组成的轻链可变区；
(xxiii)包含SEQ ID No:168或由SEQ ID No:168组成的重链可变区和包含SEQ IDNo:185或由SEQ ID No:185组成的轻链可变区；
(xxiv)包含SEQ ID No:167或由SEQ ID No:167组成的重链可变区和包含SEQ IDNo:186或由SEQ ID No:186组成的轻链可变区；
(xxv)包含SEQ ID No:167或由SEQ ID No:167组成的重链可变区和包含SEQ ID No:185或由SEQ ID No:185组成的轻链可变区；
(xxvi)包含SEQ ID No:166或由SEQ ID No:166组成的重链可变区和包含SEQ IDNo:186或由SEQ ID No:186组成的轻链可变区；
(xxvii)包含SEQ ID No:166或由SEQ ID No:166组成的重链可变区和包含SEQ IDNo:185或由SEQ ID No:185组成的轻链可变区；
(xxviii)包含SEQ ID No:194或由SEQ ID No:194组成的重链可变区和包含SEQ IDNo:186或由SEQ ID No:186组成的轻链可变区；
(xxix)包含SEQ ID No:194或由SEQ ID No:194组成的重链可变区和包含SEQ IDNo:185或由SEQ ID No:185组成的轻链可变区；
(xxx)包含SEQ ID No:165或由SEQ ID No:165组成的重链可变区和包含SEQ ID No:186或由SEQ ID No:186组成的轻链可变区；或
(xxxi)包含SEQ ID No:168或由SEQ ID No:168组成的重链可变区和包含SEQ IDNo:185或由SEQ ID No:185组成的轻链可变区。
15.根据权利要求9或权利要求10所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
(i)包含SEQ ID No:45的CDR-H1结构域、包含SEQ ID No:46的CDR-H2结构域、包含SEQID No:47的CDR-H3结构域、包含SEQ ID No:54的CDR-L1结构域、包含SEQ ID No:55的CDR-L2结构域和/或包含SEQ ID No:56的CDR-L3结构域；或
(ii)包含SEQ ID No:173的CDR-H1结构域、包含SEQ ID No:46的CDR-H2结构域、包含SEQ ID No:47的CDR-H3结构域、包含SEQ ID No:54的CDR-L1结构域、包含SEQ IDNo:55的CDR-L2结构域和/或包含SEQ ID No:56的CDR-L3结构域，
任选地，其中所述抗体或其抗原结合片段包含至少一个、至少两个、至少三个、至少四个、至少五个或至少六个CDR。
16.根据权利要求9或权利要求10或权利要求15所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
(i)包含SEQ ID No:52或由SEQ ID No:52组成的重链可变区和包含SEQ ID No:61或由SEQ ID No:61组成的轻链可变区；
(ii)包含SEQ ID No:174或由SEQ ID No:174组成的重链可变区和包含SEQ ID No:61或由SEQ ID No:61组成的轻链可变区；
(iii)包含SEQ ID No:175或由SEQ ID No:175组成的重链可变区和包含SEQ ID No:61或由SEQ ID No:61组成的轻链可变区；
(iv)包含SEQ ID No:176或由SEQ ID No:176组成的重链可变区和包含SEQ ID No:61或由SEQ ID No:61组成的轻链可变区；
(v)包含SEQ ID No:52或由SEQ ID No:52组成的重链可变区和包含SEQ ID No:187或由SEQ ID No:187组成的轻链可变区；
(vi)包含SEQ ID No:52或由SEQ ID No:52组成的重链可变区和包含SEQ ID No:188或由SEQ ID No:188组成的轻链可变区；
(vii)包含SEQ ID No:176或由SEQ ID No:176组成的重链可变区和包含SEQ ID No:188或由SEQ ID No:188组成的轻链可变区；
(viii)包含SEQ ID No:176或由SEQ ID No:176组成的重链可变区和包含SEQ ID No:187或由SEQ ID No:187组成的轻链可变区；
(ix)包含SEQ ID No:175或由SEQ ID No:175组成的重链可变区和包含SEQ ID No:188或由SEQ ID No:188组成的轻链可变区；
(x)包含SEQ ID No:175或由SEQ ID No:175组成的重链可变区和包含SEQ ID No:187或由SEQ ID No:187组成的轻链可变区；
(xi)包含SEQ ID No:174或由SEQ ID No:174组成的重链可变区和包含SEQ ID No:188或由SEQ ID No:188组成的轻链可变区；或
(xii)包含SEQ ID No:174或由SEQ ID No:174组成的重链可变区和包含SEQ ID No:187或由SEQ ID No:187组成的轻链可变区。
17.根据权利要求9或权利要求10所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
(i)包含SEQ ID No:63的CDR-H1结构域、包含SEQ ID No:64的CDR-H2结构域、包含SEQID No:65的CDR-H3结构域、包含SEQ ID No:72的CDR-L1结构域、包含SEQ ID No:73的CDR-L2结构域和/或包含SEQ ID No:74的CDR-L3结构域；或
(ii)包含SEQ ID No:177的CDR-H1结构域、包含SEQ ID No:64的CDR-H2结构域、包含SEQ ID No:65的CDR-H3结构域、包含SEQ ID No:72的CDR-L1结构域、包含SEQ IDNo:73的CDR-L2结构域和/或包含SEQ ID No:74的CDR-L3结构域，
任选地，其中所述抗体或其抗原结合片段包含至少一个、至少两个、至少三个、至少四个、至少五个或至少六个CDR。
18.根据权利要求9或权利要求10或权利要求17所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
(i)包含SEQ ID No:70或由SEQ ID No:70组成的重链可变区和包含SEQ ID No:79或由SEQ ID No:79组成的轻链可变区；
(ii)包含SEQ ID No:160或由SEQ ID No:160组成的重链可变区和包含SEQ ID No:79或由SEQ ID No:79组成的轻链可变区；
(iii)包含SEQ ID No:178或由SEQ ID No:178组成的重链可变区和包含SEQ ID No:79或由SEQ ID No:79组成的轻链可变区；
(iv)包含SEQ ID No:179或由SEQ ID No:179组成的重链可变区和包含SEQ ID No:79或由SEQ ID No:79组成的轻链可变区；
(v)包含SEQ ID No:180或由SEQ ID No:180组成的重链可变区和包含SEQ ID No:79或由SEQ ID No:79组成的轻链可变区；
(vi)包含SEQ ID No:160或由SEQ ID No:160组成的重链可变区和包含SEQ ID No:189或由SEQ ID No:189组成的轻链可变区；
(vii)包含SEQ ID No:180或由SEQ ID No:180组成的重链可变区和包含SEQ ID No:189或由SEQ ID No:189组成的轻链可变区；
(viii)包含SEQ ID No:179或由SEQ ID No:179组成的重链可变区和包含SEQ ID No:189或由SEQ ID No:189组成的轻链可变区；或
(ix)包含SEQ ID No:178或由SEQ ID No:178组成的重链可变区和包含SEQ ID No:189或由SEQ ID No:189组成的轻链可变区。
19.根据权利要求9或权利要求10所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
(i)包含SEQ ID No:81的CDR-H1结构域、包含SEQ ID No:82的CDR-H2结构域、包含SEQID No:83的CDR-H3结构域、包含SEQ ID No:90的CDR-L1结构域、包含SEQ ID No:91的CDR-L2结构域和/或包含SEQ ID No:92的CDR-L3结构域；或
(ii)包含SEQ ID No:181的CDR-H1结构域、包含SEQ ID No:82的CDR-H2结构域、包含SEQ ID No:83的CDR-H3结构域、包含SEQ ID No:90的CDR-L1结构域、包含SEQ IDNo:91的CDR-L2结构域和/或包含SEQ ID No:92的CDR-L3结构域，
任选地，其中所述抗体或其抗原结合片段包含至少一个、至少两个、至少三个、至少四个、至少五个或至少六个CDR。
20.根据权利要求9或权利要求10或权利要求19所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
(i)包含SEQ ID No:88或由SEQ ID No:88组成的重链可变区和包含SEQ ID No:97或由SEQ ID No:97组成的轻链可变区；
(ii)包含SEQ ID No:161或由SEQ ID No:161组成的重链可变区和包含SEQ ID No:97或由SEQ ID No:97组成的轻链可变区；
(iii)包含SEQ ID No:182或由SEQ ID No:182组成的重链可变区和包含SEQ ID No:97或由SEQ ID No:97组成的轻链可变区；
(iv)包含SEQ ID No:183或由SEQ ID No:183组成的重链可变区和包含SEQ ID No:97或由SEQ ID No:97组成的轻链可变区；
(v)包含SEQ ID No:184或由SEQ ID No:184组成的重链可变区和包含SEQ ID No:97或由SEQ ID No:97组成的轻链可变区；
(vi)包含SEQ ID No:161或由SEQ ID No:161组成的重链可变区和包含SEQ ID No:192或由SEQ ID No:192组成的轻链可变区；
(vii)包含SEQ ID No:161或由SEQ ID No:161组成的重链可变区和包含SEQ ID No:193或由SEQ ID No:193组成的轻链可变区；
(viii)包含SEQ ID No:184或由SEQ ID No:184组成的重链可变区和包含SEQ ID No:193或由SEQ ID No:193组成的轻链可变区；
(ix)包含SEQ ID No:184或由SEQ ID No:184组成的重链可变区，以及包含SEQ IDNo:192或由SEQ ID No:192组成的轻链可变区；
(x)包含SEQ ID No:183或由SEQ ID No:183组成的重链可变区和包含SEQ ID No:193或由SEQ ID No:193组成的轻链可变区；
(xi)包含SEQ ID No:183或由SEQ ID No:183组成的重链可变区和包含SEQ ID No:192或由SEQ ID No:192组成的轻链可变区；
(xii)包含SEQ ID No:182或由SEQ ID No:182组成的重链可变区和包含SEQ ID No:193或由SEQ ID No:193组成的轻链可变区；或
(xiii)包含SEQ ID No:182或由SEQ ID No:182组成的重链可变区和包含SEQ ID No:192或由SEQ ID No:192组成的轻链可变区。
21.根据权利要求9或权利要求10所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
包含SEQ ID No:99的CDR-H1结构域、包含SEQ ID No:100的CDR-H2结构域、包含SEQ IDNo:101的CDR-H3结构域、包含SEQ ID No:108的CDR-L1结构域、包含SEQ IDNo:109的CDR-L2结构域和/或包含SEQ ID No:110的CDR-L3结构域，
任选地，其中所述抗体或其抗原结合片段包含至少一个、至少两个、至少三个、至少四个、至少五个或至少六个CDR。
22.根据权利要求9或权利要求10或权利要求21所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
包含SEQ ID No:106或由SEQ ID No:106组成的重链可变区和包含SEQ ID No:115或由SEQ ID No:115组成的轻链可变区。
23.根据权利要求9或权利要求10所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
包含SEQ ID No:117的CDR-H1结构域、包含SEQ ID No:118的CDR-H2结构域、包含SEQID No:119的CDR-H3结构域、包含SEQ ID No:126的CDR-L1结构域、包含SEQ IDNo:127的CDR-L2结构域和/或包含SEQ ID No:128的CDR-L3结构域，
任选地，其中所述抗体或其抗原结合片段包含至少一个、至少两个、至少三个、至少四个、至少五个或至少六个CDR。
24.根据权利要求9或权利要求10或权利要求23所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
包含SEQ ID No:124或由SEQ ID No:124组成的重链可变区和包含SEQ ID No:133或由SEQ ID No:133组成的轻链可变区。
25.根据权利要求9或权利要求10所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
包含SEQ ID No:135的CDR-H1结构域、包含SEQ ID No:136的CDR-H2结构域、包含SEQID No:137的CDR-H3结构域、包含SEQ ID No:144的CDR-L1结构域、包含SEQ IDNo:145的CDR-L2结构域和/或包含SEQ ID No:146的CDR-L3结构域，
任选地，其中所述抗体或其抗原结合片段包含至少一个、至少两个、至少三个、至少四个、至少五个或至少六个CDR。
26.根据权利要求9或权利要求10或权利要求25所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
包含SEQ ID No:142或由SEQ ID No:142组成的重链可变区和包含SEQ ID No:151或由SEQ ID No:151组成的轻链可变区。
27.根据权利要求1至8中任一项所述的抑制剂或根据权利要求9至26中任一项所述的抗体或其抗原结合片段用于治疗。
28.根据权利要求1至8中任一项所述的抑制剂或根据权利要求9至26中任一项所述的抗体或其抗原结合片段用于治疗、预防或改善由血小板介导的聚集引起的病症。
29.根据权利要求28所述的抑制剂、或抗体或其抗原结合片段的用途，其中由血小板介导的聚集引起的病症可以选自以下：血栓形成相关病症、血栓性血小板减少性紫癜(TTP)、获得性血栓性血小板减少性紫癜(aTTP)、急性冠状动脉综合征(ACS)、动脉粥样硬化、缺血性中风、心房颤动(AF)、急性心肌梗死(AMI)、心血管疾病(CVD)、血栓形成、不稳定型心绞痛、稳定型心绞痛、心绞痛、栓子形成、深静脉血栓形成、溶血性尿毒症综合征、溶血性贫血、急性肾功能衰竭、溶栓并发症、弥散性血管内凝血、冠心病、血栓栓塞并发症、再狭窄、慢性不稳定型心绞痛、周围血管疾病、动脉血栓形成、先兆子痫、栓塞、再狭窄、败血症、血管炎症、肾小球肾炎和冠状病毒感染引起的血栓形成疾病。
30.一种药物组合物，其包含根据权利要求1至8中任一项所述的抑制剂或根据权利要求9至26中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，以及任选的药学上可接受的载体。
31.一种抗体或其抗原结合片段，其通过方法获得，所述方法包括：
(i)用血管性血友病因子(VWF)的C1、C2、C3、C4、C5和/或C6结构域中的一个或多个对宿主生物体进行免疫；
(ii)从所述宿主收集抗体或其抗原结合片段。
32.一种多核苷酸序列，其编码权利要求9至26中任一项所定义的抗体或其抗原结合片段。
33.一种表达盒，其包含根据权利要求32所述的多核苷酸序列。
34.一种重组载体，其包含根据权利要求33所述的表达盒。
35.一种宿主细胞，其包含根据权利要求32所述的多核苷酸序列、根据权利要求33所述的表达盒或根据权利要求34所述的载体。
36.一种制备根据权利要求9至26中任一项所述的抗体或抗原结合片段的方法，所述方法包括：
a)将权利要求34所述的载体导入宿主细胞；
b)在产生根据权利要求9至26中任一项所述的抗体或抗原结合片段的条件下培养所述宿主细胞。
37.根据权利要求9至26中任一项所述的抗体或其抗体结合片段用于诊断或预后。
38.根据权利要求9至26中任一项所述的抗体或其抗体结合片段用于诊断或预测由血小板介导的聚集引起的病症。
39.一种诊断或预测受试者中由血小板介导的聚集引起的病症的方法，所述方法包括用根据权利要求9至26中任一项所述的抗体或其抗体结合片段检测从受试者处获得的生物样本中的VWF。
40.一种试剂盒，用于诊断患有由血小板介导的聚集引起的病症的受试者，或用于提供所述受试者病症的预后，所述试剂盒包含根据权利要求9至26中任一项所述的抗体或其抗原结合片段用于检测在测试对象的样本中的VWF。
41.根据权利要求38所述的用途、根据权利要求39所述的方法或根据权利要求40所述的试剂盒，其中由血小板介导的聚集引起的病症可以选自以下：血栓形成相关病症、血栓性血小板减少性紫癜(TTP)、获得性血栓性血小板减少性紫癜(aTTP)、急性冠状动脉综合征(ACS)、动脉粥样硬化、缺血性中风、心房颤动(AF)、急性心肌梗死(AMI)、心血管疾病(CVD)、血栓形成、不稳定型心绞痛、稳定型心绞痛、心绞痛、栓子形成、深静脉血栓形成、溶血性尿毒症综合征、溶血性贫血、急性肾功能衰竭、溶栓并发症、弥散性血管内凝血、冠心病、血栓栓塞并发症、再狭窄、慢性不稳定型心绞痛、周围血管疾病、动脉血栓形成、先兆子痫、栓塞、再狭窄、败血症、血管炎症、肾小球肾炎和冠状病毒感染引起的血栓形成疾病。
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