CN116355881A - 酸耐受性提高的β-木糖苷酶突变体D395G及其应用 - Google Patents
酸耐受性提高的β-木糖苷酶突变体D395G及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN116355881A CN116355881A CN202310228681.6A CN202310228681A CN116355881A CN 116355881 A CN116355881 A CN 116355881A CN 202310228681 A CN202310228681 A CN 202310228681A CN 116355881 A CN116355881 A CN 116355881A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- mutant
- beta
- enzyme
- xylosidase
- seq
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 108010038658 exo-1,4-beta-D-xylosidase Proteins 0.000 title claims abstract description 32
- 239000002253 acid Substances 0.000 title claims abstract description 16
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 20
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims abstract description 10
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims abstract description 10
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract description 9
- 235000013305 food Nutrition 0.000 claims abstract description 8
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 claims abstract description 8
- 238000011514 vinification Methods 0.000 claims abstract description 3
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 claims description 13
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 5
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000005352 clarification Methods 0.000 claims description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 36
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 abstract description 8
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 abstract description 2
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 abstract description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 79
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 79
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 79
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 8
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 7
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 7
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 150000004823 xylans Chemical class 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 4
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 4
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 4
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 4
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229920001221 xylan Polymers 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 3
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 3
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 3
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 3
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 3
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 3
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 description 3
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 2
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-N Pyruvic acid Chemical compound CC(=O)C(O)=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- HEBKCHPVOIAQTA-NGQZWQHPSA-N d-xylitol Chemical compound OC[C@H](O)C(O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-NGQZWQHPSA-N 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 2
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 2
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 2
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 2
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 2
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- RTBHKOWSOJOEPS-YTWAJWBKSA-N (2s,3r,4s,5r)-2-phenoxyoxane-3,4,5-triol Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)CO[C@H]1OC1=CC=CC=C1 RTBHKOWSOJOEPS-YTWAJWBKSA-N 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 108010062877 Bacteriocins Proteins 0.000 description 1
- 108010059892 Cellulase Proteins 0.000 description 1
- 108010001817 Endo-1,4-beta Xylanases Proteins 0.000 description 1
- 101710121765 Endo-1,4-beta-xylanase Proteins 0.000 description 1
- 229920002488 Hemicellulose Polymers 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000003960 Ligases Human genes 0.000 description 1
- 108090000364 Ligases Proteins 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N Xylitol Natural products OCCC(O)C(O)C(O)CCO TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 229940106157 cellulase Drugs 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 1
- 239000000385 dialysis solution Substances 0.000 description 1
- 102000038379 digestive enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108091007734 digestive enzymes Proteins 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000003912 environmental pollution Methods 0.000 description 1
- 238000003028 enzyme activity measurement method Methods 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 235000007983 food acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 125000000291 glutamic acid group Chemical group N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- 235000019674 grape juice Nutrition 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000487 histidyl group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C([H])=N1 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 239000002440 industrial waste Substances 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000002879 macerating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N meso ribitol Natural products OCC(O)C(O)C(O)CO HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 235000013615 non-nutritive sweetener Nutrition 0.000 description 1
- 230000020477 pH reduction Effects 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 150000004804 polysaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 239000012474 protein marker Substances 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 229940107700 pyruvic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 235000021092 sugar substitutes Nutrition 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 1
- 235000010447 xylitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000000811 xylitol Substances 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N xylitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N 0.000 description 1
- 229960002675 xylitol Drugs 0.000 description 1
- 125000000969 xylosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO1)* 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L29/00—Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof
- A23L29/06—Enzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K10/00—Animal feeding-stuffs
- A23K10/10—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes
- A23K10/14—Pretreatment of feeding-stuffs with enzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
- A23K20/10—Organic substances
- A23K20/189—Enzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L2/00—Non-alcoholic beverages; Dry compositions or concentrates therefor; Their preparation
- A23L2/70—Clarifying or fining of non-alcoholic beverages; Removing unwanted matter
- A23L2/84—Clarifying or fining of non-alcoholic beverages; Removing unwanted matter using microorganisms or biological material, e.g. enzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12G—WINE; PREPARATION THEREOF; ALCOHOLIC BEVERAGES; PREPARATION OF ALCOHOLIC BEVERAGES NOT PROVIDED FOR IN SUBCLASSES C12C OR C12H
- C12G3/00—Preparation of other alcoholic beverages
- C12G3/02—Preparation of other alcoholic beverages by fermentation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/70—Vectors or expression systems specially adapted for E. coli
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
- C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
- C12N9/2405—Glucanases
- C12N9/2434—Glucanases acting on beta-1,4-glucosidic bonds
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
- C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
- C12Y302/01037—Xylan 1,4-beta-xylosidase (3.2.1.37)
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02E—REDUCTION OF GREENHOUSE GAS [GHG] EMISSIONS, RELATED TO ENERGY GENERATION, TRANSMISSION OR DISTRIBUTION
- Y02E50/00—Technologies for the production of fuel of non-fossil origin
- Y02E50/10—Biofuels, e.g. bio-diesel
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
本发明公开了一种酸耐受性提高的β‑木糖苷酶突变体D395G及其应用，涉及基因工程技术领域。该突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，编码该突变体的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。该突变体D395G的最适pH为4.5，最适温度为50℃，与氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示的重组野生β‑木糖苷酶JB13GH39P28相比，该突变体在酸性条件下的稳定性提高，其在pH＝3.0‑6.0下处理60min仍能具备95％以上的活性，有利于在较低pH值要求下的生物技术领域中的应用。本发明提供的β‑木糖苷酶突变体D395G在食品、酿酒、果汁澄清、饲料等行业中具有潜在的应用价值。
Description
技术领域
本发明涉及基因工程技术领域，具体涉及一种酸耐受性提高的β-木糖苷酶突变体D395G及其应用。
背景技术
木聚糖是半纤维素的主要成分，是自然界中储量第二大的自然多糖。木聚糖的完全降解需要一系列酶协同作用，其中，在β-1,4-内切木聚糖酶水解木聚糖主链后，β-木糖苷酶通过水解低聚木糖的末端释放木糖残基，不仅在木聚糖的彻底降解过程中起着重要作用，而且可以缓解木寡糖对木聚糖酶和纤维素酶的抑制作用，因此，β-木糖苷酶在诸多领域都有较为广泛的应用。例如，食品工业中，β-木糖苷酶和内切木聚糖酶协同作用水解木聚糖后可产生大量木糖，木糖是生产木糖醇的原料，此外，作为无热量甜味剂，木糖可作为糖尿病人的食糖替代品；在酿造工业中，β-木糖苷酶可以降低葡萄汁的粘稠度和浑浊度，提高过滤的澄清度，提升酒的稳定性；此外，酵母工程中可以利用木糖发酵产生生物乙醇、乳酸和其它化学品(NaiduDSetal.Carbohydratepolymers,2018,179:28-41)。
然而，大多数工业过程的实现都伴随着极端pH，如生产乳制品、食用酸、细菌素的过程中，常伴有乳酸、醋酸、丙酮酸等酸性代谢产物的形成，这些酸性物质的积累降低了发酵环境的pH。发酵环境的酸化，严重限制了中性酶的活性。耐酸的酶能在酸性条件下保持相对较高的酶活性，在较低的pH值下能够稳定的发挥作用，例如，β-木糖苷酶一般用作浸渍酶，主要用于萃取和澄清果汁，提高果汁品质，但是，果汁的pH值通常较低，介于2.0至4.5之间，耐酸的β-木糖苷酶才能在这样低pH值的环境中发挥作用。而现有的β-木糖苷酶在酸性条件下的耐受性较差，活性较低，极大的限制了其在酸性较低环境中的应用。此外，耐酸的β-木糖苷酶还可用于饲料、工业废料处理等多个领域，能有效减少加工工艺中化学试剂的消耗，降低副产物的形成，减少环境污染，具有重大经济社会效益(YeginS.Foodchemistry,2017,221:67-75.)。
发明内容
本发明的目的是提供一种酸耐受性提高的β-木糖苷酶突变体D395G及其应用，该突变体D395G的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，与氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示的重组野生酶JB13GH39P28相比，该突变体在酸性条件下的稳定性提高，其在pH为3.0-6.0条件下处理60min仍能保持95％以上的活性，在较低pH值要求下的生物技术领域中具有潜在的应用价值。
为了达到上述目的，本发明提供了一种酸耐受性提高的β-木糖苷酶突变体D395G，该突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，该突变体D395G在pH＝3.0下处理60min后仍具有95.57％的酶活。
本发明还提供了β-木糖苷酶突变体D395G的编码基因，该编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
本发明还提供了一种包含上述编码基因的重组质粒。
优选地，上述重组质粒选自pET-28a(+)。
本发明还提供了一种包含上述编码基因的重组菌。
优选地，上述重组菌选自大肠杆菌BL21(DE3)。
本发明提供的β-木糖苷酶突变体D395G可被用于有较低pH值要求的行业中，包括食品行业和饲料行业。
优选地，本发明提供的突变体D395G可被用于酿酒或果汁澄清，还可用于饲料的生产等。
本发明的一种酸耐受性提高的β-木糖苷酶突变体D395G，解决了野生型β-木糖苷酶酸耐受性差，应用范围较窄等问题，具有以下优点：
与重组野生酶JB13GH39P28相比，突变体D395G的最适温度和最适pH不变，在酸性条件下的稳定性显著提高。重组野生酶JB13GH39P28的最适温度为50℃，在10℃、20℃、30℃、40℃、60℃和70℃时分别具有10.67％、23.94％、43.61％、69.58％、77.97％和19.49％的酶活；突变体D395G的最适温度也为50℃，在10℃、20℃、30℃、40℃、60℃和70℃时分别具有10.18％、22.98％、47.89％、67.64％、15.93％和23.46％的酶活。重组野生酶JB13GH39P28和突变体D395G的最适pH为4.5。在pH＝3.0下处理60min，重组野生酶JB13GH39P28只有3％的酶活，而突变体D395G仍保持95.57％的酶活；在pH＝4.0-6.0下处理60min，重组野生酶JB13GH39P28的酶活提高到97.79％，而突变体D395G一直保持98％以上的酶活。本发明的耐酸的β-木糖苷酶突变体D395G可应用于食品、酿酒、果汁澄清、饲料等行业。
附图说明
图1为本发明中重组野生酶JB13GH39P28和突变体D395G的SDS-PAGE分析结果。
图2为本发明中重组野生酶JB13GH39P28和突变体D395G的pH活性对比结果。
图3为本发明中重组野生酶JB13GH39P28和突变体D395G在不同pH中稳定性对比结果。
图4位本发明中重组野生酶JB13GH39P28和突变体D395G的热活性对比结果。
图5本发明中重组野生酶JB13GH39P28和突变体D395G在50℃的热稳定性对比结果。
图6位本发明中重组野生酶JB13GH39P28和突变体D395G在60℃的热稳定性对比结果。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明中所用到的部分实验材料和试剂：
1)菌株及载体：大肠杆菌EscherchiacoliBL21(DE3)购于北京博迈德基因技术有限公司；pET-28a(+)表达载体来源于江苏苏州泓迅生物科技有限公司。
2)酶类及其它生化试剂：pNPX购自Sigma公司；Nickel-NTA蛋白纯化树脂购自QIAGEN公司；QuickMutationTM基因定点突变试剂盒购自碧云天生物技术公司；Dpn1消化酶购自Takara生物技术公司；其他都为国产试剂(均可从普通生化试剂公司购买得到)。
3)培养基：LB培养基：Peptone10g，Yeastextract5g。NaCll0g，加蒸馏水至1000mL，pH自然(约为7)。固体培养基在此基础上加2.0％(w/v)琼脂。
说明：以下实施例中未作具体说明的分子生物学实验方法，均参照《分子克隆实验指南》(第三版)J.萨姆布鲁克一书中所列的具体方法进行，或者按照试剂盒和产品说明书进行。
实验例1重组野生β-木糖苷酶JB13GH39P28表达载体的构建和转化
1)从GenBank中下载氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示的β-木糖苷酶JB13GH39(编号为AZC12019.1)及其核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示的编码基因jb13gh39(编号为MG838204.1)，去除jb13gh39编码信号肽的序列(第1-57位核苷酸)后，委托苏州泓迅生物科技股份有限公司对jb13gh39编码成熟肽的序列(第58-1614位核苷酸)进行密码子优化，结果序列的GC含量由60％降低至48％，将密码子优化后所获得的目的片段命名为jb13gh39p28，其核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，其长度为1557bp，也可以通过基因合成得到jb13gh39p28。
2)通过PCR的方式在jb13gh39p28的5’和3’端分别引入限制性酶切位点NcoⅠ(5’CCATGG3’)和XhoⅠ(5’CTCGAG3’)，得到序列nxjb13gh39p28，其核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示，通过限制性酶酶切上述产物和表达载体pET-28a(+)，将nxjb13gh39p28和pET-28a(+)的酶切产物通过连接酶连接，获得包含nxjb13gh39p28的重组质粒nxjb13gh39p28-pET-28a(+)。
3)以nxjb13gh39p28-pET-28a(+)为模板，设计2条突变引物(F1和R1)，具体序列如下所示。通过PCR去除重组时在C端组氨酸标签前引入的1个亮氨酸和1个谷氨酸序列，PCR反应参数为：95℃变性30sec；然后95℃变性15sec，70℃退火15sec，72℃延伸3min30sec，30个循环；72℃保温5min。最终获得包含jb13gh39p28的重组质粒jb13gh39p28-pET-28a(+)，重组后的jb13gh39p28形成的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示，编码重组野生酶JB13GH39P28的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示。
突变引物序列如下(5’→3’):
F1(SEQ ID NO.9)：
GAACGTAAACACCACCACCACCACCACTGAGAT
R1(SEQ ID NO.10)：
GTGGTGGTGTTTACGTTCTTTCGGTGCAATACT
4)将重组质粒jb13gh39p28-pET-28a(+)通过热激方式转化到大肠杆菌BL21(DE3)中，获得包含jb13gh39p28的重组菌株BL21(DE3)/jb13gh39p28。
实验例2突变体D395G表达载体的构建和转化
1)将实验例1中所得包含重组质粒jb13gh39p28-pET-28a(+)的重组菌株以0.1％含量接种于LB培养基中(含50μg/mL卡那霉素)，37℃下过夜培养，通过试剂盒提取质粒。
2)以重组质粒jb13gh39p28-pET-28a(+)为模板，设计2条突变引物(F2和R2)，具体序列如下所示。利用QuickMutationTM基因定点突变试剂盒进行突变，PCR反应参数为：95℃变性30sec；然后95℃变性15sec，70℃退火15sec，72℃延伸3min30sec，30个循环；72℃保温5min。PCR扩增得到包含核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的编码基因d395g的线性化重组质粒d395g-pET-28a(+)，该编码基因编码的突变体D395G，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。d395g和d395g-pET-28a(+)也可以通过基因合成得到。
突变引物序列如下(5’→3’):
F2(SEQ ID NO.11)：
TGTGGGGTGGCAACAACCGAAACAACCGGTT
R2(SEQ ID NO.12)：
TTGTTGCCAACCCCACAGCAGAACTTCGGTACTAGA
3)对PCR产物进行Dpn1酶消化，于37℃消化3h。
4)将消化产物通过热激方式转入大肠杆菌BL21(DE3)中，得到包含D395G编码基因d395g的重组菌株BL21(DE3)/d395g。
实验例3重组野生β-木糖苷酶JB13GH39P28和突变体D395G的制备
1)将实验例2中所得的重组菌株BL21(DE3)/jb13gh39p28和BL21(DE3)/d395g以0.1％的接种量分别接种于LB(含50μg/mL卡那霉素)培养液中，37℃、180rpm/min摇床中振荡16h进行活化。
2)将1)中活化的菌液以1％接种量分别接种到新鲜的LB(含50μg/mL卡那霉素)培养液中，于37℃、180rpm/min摇床中振荡培养约2-3h(OD600达到0.6-1.0)后，加入终浓度0.7mM的IPTG进行诱导，于20℃、160rpm/min摇床中继续振荡培养约20h诱导重组蛋白产生。
3)于4℃、6000rpm/min离心8min，收集菌体。用适量的pH＝7.0McIlvaine buffer悬浮菌体后，于低温水浴下超声波破碎菌体。以上胞内浓缩的粗酶液经12000rpm/min离心l0min后，吸取上清并用Nickel-NTAAgarose和0-500mM的咪唑分别亲和和纯化目的蛋白。两个纯化所得的蛋白SDS-PAGE结果如图1所示，其中M为蛋白质Marker，W为野生酶，D395G为突变体。结果表明，重组野生酶JB13GH39P28和突变体D395G得到了表达和纯化，产物为单一条带。
4)把样品体积量100倍的透析液(pH＝7.0McIlvainebuffer)加入透析装置。将透析袋(mw:14000)剪成适当长度(10-20cm)的小段，在沸水中煮沸30min后，用蒸馏水彻底清洗透析袋，将3)中得到的纯化的重组野生酶JB13GH39P28和突变体D395G分别装入透析袋，透析袋两端预留3-5cm的长度用透析夹夹住。将透析样品放在透析缓冲液中，置于4℃透析，每隔2小时更换透析液，更换3次。
实验例4重组野生β-木糖苷酶JB13GH39P28及突变体D395G的性质测定
1)重组野生酶JB13GH39P28和突变体D395G的活性分析
活性测定方法采用PNP法，以对硝基苯基-β-D-吡喃木糖苷(pNPX)为底物测定纯化的重组野生酶JB13GH39P28及突变体D395G的活性。将pNPX溶于缓冲液中，使其终浓度为2mM；反应体系含50μL酶液，450μL的含底物的缓冲液；底物在反应温度下预热5min后，加入酶液后再反应10min，然后加2mL1MNa2CO3终止反应，冷却至室温后在405nm波长下测定释放出的pNP的量；1个酶活单位(U)定义为每分钟分解底物产生1μmolpNP所需的酶量。
2)重组野生酶JB13GH39P28及突变体D395G在不同pH中的活性测定
将实验例3中纯化的酶置于pH＝3.0-8.0(3.0、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、7.0、8.0)McIlvainebuffer中，于37℃的条件下进行酶促反应，测定纯化的重组野生酶JB13GH39P28及突变体D395G的酶活。
重组野生酶JB13GH39P28和突变体D395G的pH活性对比结果如图2所示，结果表明，纯化的重组野生酶JB13GH39P28及突变体D395G的最适pH为4.5。
3)重组野生酶JB13GH39P28及突变体D395G在不同pH中的稳定性测定
将实验例3中纯化的酶置于pH＝3.0-10.0缓冲液中(pH＝3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0：McIlvainebuffer，pH＝9.0、10.0：1mol/LGlycine-NaOHBuffer)，在37℃下处理60min。按照酶活力测定方法，在pH＝4.5及37℃条件下进行酶促反应，以pNPX为底物，反应10min，测定纯化的重组野生酶JB13GH39P28及突变体D395G的酶活。
重组野生酶JB13GH39P28和突变体D395G在不同pH中稳定性对比结果如图3所示，结果表明，与重组野生酶JB13GH39P28相比，突变体D395G在酸性条件下的稳定性提高，在pH＝3.0下处理60min，野生酶JB13GH39P28有3％的酶活，而突变体D395G保持有95.57％的酶活；在pH＝4.0-6.0下处理60min，野生酶JB13GH39P28的酶活提高到97.79％，而突变体D395G一直保持98％以上的酶活。
4)重组野生酶JB13GH39P28及突变体D395G的热活性测定
在pH＝4.5的缓冲液中，于0-70℃下进行酶促反应。以pNPX为底物，反应10min，测定纯化的重组野生酶JB13GH39P28及突变体D395G的酶学性质。
重组野生酶JB13GH39P28和突变体D395G的热活性对比结果如图4所示，结果表明，纯化的重组野生酶JB13GH39P28和突变体D395G的最适温度为50℃。野生酶JB13GH39P28在10℃、20℃、30℃、40℃、60℃和70℃时分别具有10.66％、23.94％、43.61％、69.58％、77.97％和19.49％的酶活；突变体D395G在10℃、20℃、30℃、40℃、60℃和70℃时分别具有17.67％、34.91％、62.69％、94.92％、63.36％和23.46％的酶活。
5)重组野生酶JB13GH39P28及突变体D395G的热稳定性测定
将同样酶量的酶液置于50℃、60℃处理60min，每10min测一次酶活，在pH＝4.5及37℃条件下进行酶促反应，以未处理的酶液作为对照。以pNPX为底物，反应l0min，测定纯化的重组野生酶JB13GH39P28和突变体D395G的酶活。
重组野生酶JB13GH39P28和突变体D395G在50℃的热稳定性对比结果如图5所示，其在60℃的热稳定性对比结果如图6所示，结果表明，50℃处理60min后，野生酶JB13GH39P28的酶活下降至83.17％，而突变体D395G的酶活下降至62.89％；野生酶JB13GH39P28在60℃时的半衰期约为10min，而突变体D395G在60℃下处理10min酶活下降至33.46％，野生酶JB13GH39P28和突变体D395G在60℃下处理60min几乎没有酶活。
综上可知，本发明提供的β-木糖苷酶突变体D395G与重组野生酶JB13GH39P28相比，该突变体在酸性条件下的稳定性提高，其在pH为3.0-6.0条件下处理60min仍能保持95％以上的活性，有利于较低pH值要求下的生物技术领域中的应用。本发明提供的β-木糖苷酶突变体D395G在食品行业和饲料行业等需要较低pH值的行业中具有潜在的应用价值，包括酿酒、果汁澄清等，还可用于饲料的生产等。
尽管本发明的内容已经通过上述优选实施例作了详细介绍，但应当认识到上述的描述不应被认为是对本发明的限制。在本领域技术人员阅读了上述内容后，对于本发明的多种修改和替代都将是显而易见的。因此，本发明的保护范围应由所附的权利要求来限定。
Claims (9)
1.一种酸耐受性提高的β-木糖苷酶突变体D395G，其特征在于，该突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，该突变体D395G在pH＝3.0下处理60min后仍具有95.57％的酶活。
2.如权利要求1所述酸耐受性提高的β-木糖苷酶突变体D395G的编码基因，其特征在于，所述编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
3.包含如权利要求2所述编码基因的重组质粒。
4.根据权利要求3所述的重组质粒，其特征在于，所述的质粒选自pET-28a(+)。
5.包含如权利要求2所述编码基因的重组菌。
6.根据权利要求5所述的重组菌，其特征在于，所述的菌选自BL21(DE3)。
7.如权利要求1所述酸耐受性提高的β-木糖苷酶突变体D395G在食品行业中的应用。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述的食品行业包括酿酒或果汁澄清。
9.如权利要求1所述酸耐受性提高的β-木糖苷酶突变体D395G在饲料行业中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202310228681.6A CN116355881B (zh) | 2023-03-10 | 2023-03-10 | 酸耐受性提高的β-木糖苷酶突变体D395G及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202310228681.6A CN116355881B (zh) | 2023-03-10 | 2023-03-10 | 酸耐受性提高的β-木糖苷酶突变体D395G及其应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN116355881A true CN116355881A (zh) | 2023-06-30 |
| CN116355881B CN116355881B (zh) | 2024-02-23 |
Family
ID=86934645
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202310228681.6A Active CN116355881B (zh) | 2023-03-10 | 2023-03-10 | 酸耐受性提高的β-木糖苷酶突变体D395G及其应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN116355881B (zh) |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN116179516A (zh) * | 2022-12-29 | 2023-05-30 | 云南师范大学 | 一种α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶及其应用 |
| CN116376875A (zh) * | 2023-03-03 | 2023-07-04 | 云南师范大学 | 耐热性提高的n-乙酰氨基葡萄糖苷酶突变体及其应用 |
| CN116410960A (zh) * | 2023-03-10 | 2023-07-11 | 云南师范大学 | 嗜盐适冷及pH适应性改良的β-木糖苷酶突变体D41G及其应用 |
| CN116497005A (zh) * | 2023-03-10 | 2023-07-28 | 云南师范大学 | 热耐受性降低的β-木糖苷酶突变体K130GK137G及其应用 |
| CN116555233A (zh) * | 2023-03-10 | 2023-08-08 | 云南师范大学 | 热不稳定的β-木糖苷酶突变体E179GD182G及其应用 |
| CN116497005B (zh) * | 2023-03-10 | 2024-06-04 | 云南师范大学 | 热耐受性降低的β-木糖苷酶突变体K130GK137G及其应用 |
Citations (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1207128A (zh) * | 1995-06-23 | 1999-02-03 | 丹尼斯科成分公司(丹尼斯科公司) | 分离突变体及克隆互补基因的新方法 |
| WO2006098485A1 (ja) * | 2005-03-15 | 2006-09-21 | Tokyo University Of Science | グルタミン酸脱炭酸酵素変異体 |
| CN102112603A (zh) * | 2008-07-29 | 2011-06-29 | 诺维信公司 | 具有α-葡糖醛酸糖苷酶活性的多肽和编码该多肽的多核苷酸 |
| CN102549162A (zh) * | 2008-12-02 | 2012-07-04 | 丹尼斯科公司 | 用于改善反刍动物健康和/或性能的菌株和方法 |
| CN105950592A (zh) * | 2016-07-15 | 2016-09-21 | 云南师范大学 | 耐盐耐乙醇耐胰蛋白酶的木糖苷酶jb13gh39及其制备方法 |
| US20180179507A1 (en) * | 2015-06-26 | 2018-06-28 | Kao Corporation | Novel xylanase |
| CN109593745A (zh) * | 2019-01-22 | 2019-04-09 | 云南师范大学 | 一种能将三七皂苷R1转化为人参皂苷Rg1的木糖苷酶突变体 |
| CN109628432A (zh) * | 2019-01-22 | 2019-04-16 | 云南师范大学 | 一种能将三七皂苷R1和R2分别转化为人参皂苷Rg1和Rh1的热适应性改良木糖苷酶 |
| CN116426506A (zh) * | 2023-03-10 | 2023-07-14 | 云南师范大学 | 低温活性提高的β-木糖苷酶突变体D259G及其应用 |
| CN116497005A (zh) * | 2023-03-10 | 2023-07-28 | 云南师范大学 | 热耐受性降低的β-木糖苷酶突变体K130GK137G及其应用 |
| CN116555233A (zh) * | 2023-03-10 | 2023-08-08 | 云南师范大学 | 热不稳定的β-木糖苷酶突变体E179GD182G及其应用 |
| CN117070500A (zh) * | 2023-03-10 | 2023-11-17 | 云南师范大学 | 热稳定性提高的β-木糖苷酶突变体D485G及其应用 |
-
2023
- 2023-03-10 CN CN202310228681.6A patent/CN116355881B/zh active Active
Patent Citations (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1207128A (zh) * | 1995-06-23 | 1999-02-03 | 丹尼斯科成分公司(丹尼斯科公司) | 分离突变体及克隆互补基因的新方法 |
| WO2006098485A1 (ja) * | 2005-03-15 | 2006-09-21 | Tokyo University Of Science | グルタミン酸脱炭酸酵素変異体 |
| CN102112603A (zh) * | 2008-07-29 | 2011-06-29 | 诺维信公司 | 具有α-葡糖醛酸糖苷酶活性的多肽和编码该多肽的多核苷酸 |
| CN102549162A (zh) * | 2008-12-02 | 2012-07-04 | 丹尼斯科公司 | 用于改善反刍动物健康和/或性能的菌株和方法 |
| US20180179507A1 (en) * | 2015-06-26 | 2018-06-28 | Kao Corporation | Novel xylanase |
| CN105950592A (zh) * | 2016-07-15 | 2016-09-21 | 云南师范大学 | 耐盐耐乙醇耐胰蛋白酶的木糖苷酶jb13gh39及其制备方法 |
| CN109593745A (zh) * | 2019-01-22 | 2019-04-09 | 云南师范大学 | 一种能将三七皂苷R1转化为人参皂苷Rg1的木糖苷酶突变体 |
| CN109628432A (zh) * | 2019-01-22 | 2019-04-16 | 云南师范大学 | 一种能将三七皂苷R1和R2分别转化为人参皂苷Rg1和Rh1的热适应性改良木糖苷酶 |
| CN116426506A (zh) * | 2023-03-10 | 2023-07-14 | 云南师范大学 | 低温活性提高的β-木糖苷酶突变体D259G及其应用 |
| CN116497005A (zh) * | 2023-03-10 | 2023-07-28 | 云南师范大学 | 热耐受性降低的β-木糖苷酶突变体K130GK137G及其应用 |
| CN116555233A (zh) * | 2023-03-10 | 2023-08-08 | 云南师范大学 | 热不稳定的β-木糖苷酶突变体E179GD182G及其应用 |
| CN117070500A (zh) * | 2023-03-10 | 2023-11-17 | 云南师范大学 | 热稳定性提高的β-木糖苷酶突变体D485G及其应用 |
Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| CAO, H.等: "Flavobacterium johnsoniae strain G16 chromosome, complete genome", GENBANK DATABASE, pages 103794 * |
| QI LI 等: "Characterization of a novel thermostable and xylose-tolerant GH 39 β-xylosidase from Dictyoglomus thermophilum", BMC BIOTECHNOL., pages 1 - 11 * |
| ZHOU, J.P.等: "glycoside hydrolase family 39 beta-xylosidase [Sphingomonas sp.]", GENBANK DATABSE, pages 12019 * |
| 张志来;陈建华;: "定向进化技术在蛋白质开发中的应用进展", 中国医药生物技术, no. 06, pages 60 - 62 * |
| 李娜: "糖苷酶JB13GH39的功能和分子特性研究", 中国优秀硕士学位论文全文数据库基础科学辑, pages 006 - 618 * |
Cited By (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN116179516A (zh) * | 2022-12-29 | 2023-05-30 | 云南师范大学 | 一种α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶及其应用 |
| CN116179516B (zh) * | 2022-12-29 | 2024-01-26 | 云南师范大学 | 一种α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶及其应用 |
| CN116376875A (zh) * | 2023-03-03 | 2023-07-04 | 云南师范大学 | 耐热性提高的n-乙酰氨基葡萄糖苷酶突变体及其应用 |
| CN116376875B (zh) * | 2023-03-03 | 2024-02-23 | 云南师范大学 | 耐热性提高的n-乙酰氨基葡萄糖苷酶突变体及其应用 |
| CN116410960A (zh) * | 2023-03-10 | 2023-07-11 | 云南师范大学 | 嗜盐适冷及pH适应性改良的β-木糖苷酶突变体D41G及其应用 |
| CN116497005A (zh) * | 2023-03-10 | 2023-07-28 | 云南师范大学 | 热耐受性降低的β-木糖苷酶突变体K130GK137G及其应用 |
| CN116555233A (zh) * | 2023-03-10 | 2023-08-08 | 云南师范大学 | 热不稳定的β-木糖苷酶突变体E179GD182G及其应用 |
| CN116410960B (zh) * | 2023-03-10 | 2024-02-23 | 云南师范大学 | 嗜盐适冷及pH适应性改良的β-木糖苷酶突变体D41G及其应用 |
| CN116497005B (zh) * | 2023-03-10 | 2024-06-04 | 云南师范大学 | 热耐受性降低的β-木糖苷酶突变体K130GK137G及其应用 |
| CN116555233B (zh) * | 2023-03-10 | 2024-06-04 | 云南师范大学 | 热不稳定的β-木糖苷酶突变体E179GD182G及其应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN116355881B (zh) | 2024-02-23 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN116355881B (zh) | 酸耐受性提高的β-木糖苷酶突变体D395G及其应用 | |
| CN112813052B (zh) | 一种低温活性提高的外切菊粉酶突变体MutDP121ET6 | |
| CN112646794B (zh) | 低温活性提高的外切菊粉酶突变体MutY119V | |
| CN112831485B (zh) | 一种低温活性改良的外切菊粉酶突变体MutDR121EH9 | |
| CN112852782B (zh) | 一种低温适应性改良的低温外切菊粉酶突变体MutDL121EK5及应用 | |
| CN108588061B (zh) | 一种比酶活及热稳定性提高的低温碱性果胶酶突变体 | |
| CN116426506B (zh) | 低温活性提高的β-木糖苷酶突变体D259G及其应用 | |
| CN111647579A (zh) | 一种不耐热的外切菊粉酶突变体MutQ23Δ9及其制备和应用 | |
| CN112813051A (zh) | 热适应性改良的低温外切菊粉酶突变体MutP124G及应用 | |
| CN116376875B (zh) | 耐热性提高的n-乙酰氨基葡萄糖苷酶突变体及其应用 | |
| CN112725307A (zh) | 一种耐热性降低的低温外切菊粉酶突变体MutG169Δ4及应用 | |
| CN117070500A (zh) | 热稳定性提高的β-木糖苷酶突变体D485G及其应用 | |
| CN112980814A (zh) | 低温适应性提高的外切菊粉酶突变体MutV268Δ13 | |
| CN111500555A (zh) | 壳聚糖酶OUC-CsnCA及其应用 | |
| US8778649B2 (en) | Use of acidothermus cellulolyticus xylanase for hydrolyzing lignocellulose | |
| CN109456954B (zh) | 热稳定性提高的β-葡萄糖苷酶突变体及其应用 | |
| CN115029335B (zh) | 一种耐高温木聚糖酶突变体及其应用 | |
| JP2017086073A (ja) | アガラーゼ、前記を含む組成物、及びそれらの適用 | |
| CN110904075A (zh) | 盐耐受的木糖苷酶突变体k321d及其制备方法和用途 | |
| CN116497005B (zh) | 热耐受性降低的β-木糖苷酶突变体K130GK137G及其应用 | |
| CN116410960B (zh) | 嗜盐适冷及pH适应性改良的β-木糖苷酶突变体D41G及其应用 | |
| CN109402089B (zh) | 一种热稳定型阿拉伯呋喃糖苷酶及其应用 | |
| CN105176950B (zh) | 一种酸性嗜热木聚糖酶TLXyn10A及其基因和应用 | |
| CN116555233B (zh) | 热不稳定的β-木糖苷酶突变体E179GD182G及其应用 | |
| CN114438057B (zh) | 一种耐热耐碱木聚糖酶及应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |