CN116350664A - 包含植物乳杆菌cb102与燕窝酸的组合在制备用来改善皮肤病况的组合物中的用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种包含植物乳杆菌CB102与燕窝酸的组合在制备用来改善皮肤病况的组合物中的用途。本发明揭示一种包含有植物乳杆菌CB102(DSM33894)与燕窝酸的组合可被用来改善皮肤病况。

Description

包含植物乳杆菌CB102与燕窝酸的组合在制备用来改善皮肤 病况的组合物中的用途
技术领域
本发明是有关于使用一包含有植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CB102(DSM 33894)与燕窝酸(Sialic acid)的组合来改善皮肤病况(improving skincondition)。
背景技术
皮肤是保护人类个体的最大屏障，它具有对抗病原菌以及各种环境损害的功能。当皮肤随着年龄增长以及受到环境因素[诸如紫外线(ultraviolet,UV)]或生理因素[诸如疲劳(fatigue)、压力(stress)、慢性发炎(chronic inflammation)]的影响下，可能会导致皮肤老化(skin aging)、皮肤松弛(sagging skin)、皮肤暗沉(dull skin tone)、皮肤萎缩(skin atrophy)、皮肤保水力(skin water-holding capacity)变差、皮肤质地(skintexture)变粗糙、皮肤弹性(skin elasticity)变差、皮肤毛孔粗大(rough skin pores)以及皮肤皱纹(skin wrinkles)与皮肤斑点(skin spots)的生成等皮肤病况(skincondition)。
目前用于改善皮肤病况的方法包括皮肤外科手术(skin surgery)[例如激光(laser)与化学换肤(chemical peeling)]、药物治疗以及化妆品的施用等。然而，这些方法仍存在有疗效不佳以及容易导致皮肤创伤、皮肤发炎或色素沉着等副作用(side effect)。因此，本领域的相关研究人员皆致力于发展出可以有效地改善皮肤病况并且不会产生非所欲的副作用的药物。
燕窝酸(Sialic acid)(又被称为唾液酸)是一种少量地存在于燕窝中的神经氨酸(neuraminic acid)的衍生物，已被发现具有抗老化 (antiaging)、抑制黑色素生成(inhibition of melanogenesis)以及减少皮肤皱纹等效用。由于经纯化的燕窝酸售价较为昂贵，较难广泛地应用于各种不同消费层级的护肤产品。
乳杆菌(Lactobacillus)是一群革兰氏阳性的兼性厌氧菌 (gram-positivefacultative anaerobes)，它们普遍存在于人类的胃肠道与阴道(vagina)内。
已有研究尝试使用乳杆菌来改善皮肤病况。例如，在M.Ogawa et al.(2016),Exp.Ther.Med.12:3863-3872中，M.Ogawa等人对受试者给药以短乳杆菌(Lactobacillusbrevis)SBC8803，并经由对他们的前臂、颈部以及下眼区的皮肤进行经皮水分散失(Trans-epidermal Water Loss,TEWL)的测定而发现到，短乳杆菌SBC8803仅能够降低受试者的颈部以及下眼区的TEWL。此外，M.Ogawa等人也有针对受试者进行关于皮肤病况的问卷调查(questionnaire)，而此调查结果显示：无论是在脸部或身体，皆没有观察到有改善的情形。
在D.E.Lee et al.(2015),J.Microbiol.Biotechnol.,25(12), 2160-2168中，D.E.Lee等人对受试者给药以植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)HY7714，并经由实验而发现到，植物乳杆菌HY7714具有增加皮肤水分含量以及减少皮肤皱纹的效用。
虽然已存在有上述文献报导，本领域中仍然存在有一需要去开发出可以同时改善多种皮肤病况且可广泛用于不同消费层级的产品。
发明内容
于本发明中，申请人发现组合使用植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CB102(DSM 33894)与燕窝酸(Sialic acid)能够有效地降低经皮水分散失(Trans-epidermalWater Loss,TEWL)、淡化皮肤细纹、抚平毛孔以及降低黑色素含量，因此植物乳杆菌CB102被认为可用来替代部分的燕窝酸，而所得到的组合被预期能够应用于改善皮肤病况(improving skin condition)。
于是，在第一个方面，本发明提供一种包含有植物乳杆菌CB102 与燕窝酸的组合供应用于制备一用来改善皮肤病况的组合物的用途。
较佳地，植物乳杆菌CB102与燕窝酸的重量比是落在1：0.1 至1：10的范围内。
较佳地，植物乳杆菌CB102是一经热致死(heat-killed)的菌株。
较佳地，该皮肤病况是选自于由下列所构成的群组：皮肤老化、皮肤皱纹、皮肤斑点、皮肤弹性差、皮肤暗沉、皮肤干燥、皮肤毛孔粗大，以及它们的组合。
较佳地，该组合物是一食品组合物。
较佳地，该组合物是一药学组合物。
更佳地，该药学组合物是呈一供口服给药的剂型。
较佳地，该组合物是一药妆品组合物。
在第二个方面，本发明提供一种用于改善皮肤病况的方法，其包括对一有此需要的个体投予一如上所述的的组合。
生物材料保藏信息说明
保藏编号：DSM 33894
分类命名：植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CB102
保藏日期：2021年6月9日
保藏单位：德国微生物保藏中心
保藏单位地址：德国银浩芬斯彻7B D-38124布劳恩斯魏克
附图说明
本发明的上述以及其它目的、特征与优点，在参照以下的详细说明与较佳实施例和随文检附的图式后，将变得明显，其中：
图1显示各组受试者在给药前后所测得的经皮水分散失(TEWL)，其中“**”表示当与对照组作比较，p＜0.01；
图2显示各组受试者在给药前后所测得的皮肤细纹深度，其中“**”表示当与对照组作比较，p＜0.01；
图3显示各组受试者在给药前后所测得的毛孔深度，其中“*”表示当与对照组作比较，p＜0.05；以及
图4显示各组受试者在给药前后所测得的黑色素的相对含量，其中“**”与“***”分别表示当与对照组作比较，p＜0.01与p＜0.001。
具体实施方式
为了这本说明书的目的，将被清楚地了解的是：文字“包含有 (comprising)”意指“包含但不限于”，以及文字“包括(comprises)”具有一对应的意义。
除非另外有所定义，在本文中所使用的所有技术性与科学术语具有本领域技术人员所共同了解的意义。一本领域技术人员会认知到许多与那些被描述于本文中者相似或等效的方法和材料，它们可被用于实施本发明。当然，本发明绝不受到所描述的方法和材料的限制。
本发明提供一种包含有植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum) CB102(DSM33894)与燕窝酸(Sialic acid)的组合供应用于制备一用来改善皮肤病况(improvingskin condition)的组合物的用途。
较佳地，植物乳杆菌CB102与燕窝酸的重量比可落在1：0.1至 1：10的范围内。在本发明的一个较佳具体例中，植物乳杆菌CB102 与燕窝酸的重量比为1：1。
依据本发明，植物乳杆菌CB102可以是活菌或死菌、经浓缩的 (concentrated)或未经浓缩的(non-concentrated)、液态(liquid)、糊状 (paste)、半固态(semi-solid)，或固态(solid)[例如，丸(pellet)、细颗粒 (granule)或粉末(powder)]，并且可以是经热致死的(heat-killed)、经冷冻的(frozen)、经干燥的(dried)，或经冷冻-干燥的(freeze-dried)[例如，可呈冷冻干燥形式或喷雾/流化床干燥(spray/fluid bed dried)形式]。在本发明的一个较佳具体例中，该植物乳杆菌CB102是经热致死并呈经喷雾干燥的粉末形式。
如本文中所使用的，术语“热致死(heat-killing)”与“热去活(heatinactivation)”可被交换地使用，并且意指通过历时一预定的时间的热处理(heattreatment)来杀死益生菌。
依据本发明，该经热致死的植物乳杆菌CB102可以采用本领域技术人员所详知且惯用的技术而被制得。在此方面，可以参考，例如， S.Murosaki,et al.(1998)J.AllergyClin.Immunol.102(1):57-64、S. Segawa,et al.(2008)Int.J.Food Microbiol.128(2):371-377，以及C. Liu,et al.(2010)World J.Gastroenterol.16(18):2283-2290。
依据本发明，该热致死可以通过在60℃至140℃下加热历时1秒钟至30分钟来进行。在本发明的一个较佳具体例中，该热致死是在 73±2℃下加热历时15秒来进行。
依据本发明，燕窝酸可以是商业上可购得的产品，也可以是通过本领域技术人员所详知且惯用的技术而被制得的产物，例如，从可食性材料(edible material)中所分离出或经由微生物发酵所得到的产物。依据本发明，该可食性材料可包括，但不限于：米、米糠、小麦、蒟蒻、奶类、水果(诸如苹果、香蕉、枇杷以及橘子)，以及蔬菜(诸如葱、竹笋、红萝卜、水芹、玉米以及青椒)。
依据本发明，该皮肤病况的实例包括，但不限于：皮肤老化(skin aging)、皮肤皱纹(skin wrinkles)、皮肤斑点(skin spots)、皮肤弹性差 (loss of skin elasticity)、皮肤暗沉(dull skin tone)、皮肤干燥(dry skin)、皮肤毛孔粗大(rough skin pores)，以及它们的组合。
依据本发明，该组合物可以是一食品组合物(food composition)，例如，呈一食品添加物(food additive)的形式，其可以被添加至一可食性材料中以制备一供人类或动物食用的食品产品。依据本发明，该食物产品的种类可包括，但不限于：奶粉(milk powder)、发酵乳(fermented milk)、优格(yogurt)、奶酪(butter)、饮料(beverages)(例如，茶、咖啡)、机能性饮料(functional beverages)、面制品(flour product)、烘焙食品 (bakedfoods)、甜点(confectionery)、糖果(candies)、发酵食品(fermented foods)、动物饲料(animal feeds)、保健食品(health foods)，以及膳食补充品(dietary supplements)。
依据本发明，该食品产品可进一步包含有一被广泛地使用于食品制造技术的食品添加物，这包括，但不限于：淀粉(starch)、糊精(dextrin)、乳糖(lactose)、玉米粉(maizeflour)、米面粉(rice flour)、磷酸三钙 (tricalcium phosphate)、二氧化硅(silicondioxide)、硬脂酸镁 (magnesium stearate)、碳酸钙(calcium carbonate)、葡萄糖、蔗糖(sucrose)、果糖(fructose)、糖醇(sugar alcohol)、寡醣(oligosaccharide)、代糖(sugarsubstitute)、果汁粉(fruit juice powder)、酵母粉(yeast powder)、脱脂乳粉(nonfatdry milk)、酪蛋白(casein)、乳清蛋白(whey protein)、氨基酸(amino acid)、柠檬酸(citric acid)、柠檬酸盐(citrate)、乳酸(lactic acid)、乳酸盐(lactate)以及核苷酸(nucleotide)。
依据本发明，该组合物可以是一药学组合物(pharmaceutical composition)。
依据本发明，该药学组合物可进一步包含有一被广泛地使用于药物制造技术的药学上可接受的载剂(pharmaceutically acceptable carrier)。例如，该药学上可接受的载剂可包含一或多种选自于下列的试剂：溶剂(solvent)、缓冲液(buffer)、乳化剂(emulsifier)、悬浮剂 (suspending agent)、分解剂(decomposer)、崩解剂(disintegrating agent)、分散剂(dispersing agent)、黏结剂(binding agent)、赋形剂(excipient)、稳定剂(stabilizing agent)、螯合剂(chelating agent)、稀释剂(diluent)、胶凝剂(gelling agent)、防腐剂(preservative)、润湿剂(wetting agent)、润滑剂(lubricant)、吸收延迟剂(absorption delaying agent)、脂质体 (liposome)以及类似物。有关这些试剂的选用与数量是落在本领域技术人员的专业素养与例行技术范畴内。
依据本发明，该药学组合物可利用本领域技术人员所详知的技术而被制造成一适合于口服给药的剂型，这包括，但不限于：无菌的粉末、锭剂(tablet)、片剂(troche)、口含锭(lozenge)、丸剂(pellet)、胶囊 (capsule)、分散性粉末(dispersible powder)或细颗粒(granule)、溶液、悬浮液(suspension)、乳剂(emulsion)、糖浆(syrup)、酏剂(elixir)、浓浆(slurry)以及类似物。在本发明的一个较佳具体例中，该药学组合物被制造成适于以胶囊而被给药的剂型。
本发明也提供一种用于改善皮肤病况的方法，其包括对一有此需要的个体投予(administering)一如上所述的包含有植物乳杆菌CB102 与燕窝酸的组合。
如本文中所使用的，术语“投予”以及“给药(administration)”可被交换地使用，并且意指通过任何合适的途径来对一个体导入 (introducing)、提供(providing)或递送(delivering)一预定的活性成分以执行其预期的效用。
如本文中所使用的，术语“个体(subject)”意指任何感兴趣的哺乳类动物，诸如人(humans)、猴子(monkeys)、牛(cows)、绵羊(sheep)、马(horses)、猪(pigs)、山羊(goats)、狗(dogs)、猫(cats)、小鼠(mice) 以及大鼠(rats)。
依据本发明，该包含有植物乳杆菌CB102与燕窝酸的组合的给药剂量与给药次数会视下列因素而变化：要被改善的病况的严重性，给药途径，以及要被改善的个体的年龄、身体状况与反应。一般而言，该包含有植物乳杆菌CB102与燕窝酸的组合可呈单一剂量或是分成数个剂量的形式而被口服地给药。
依据本发明，该组合物可以是一药妆品组合物(cosmeceutical composition)。
依据本发明，该药妆品组合物可进一步包含有一如上所述的药学上可接受的载剂和/或一被广泛地使用于化妆品制造技术的化妆品上可接受的佐剂(cosmeticallyacceptable adjuvant)。例如，该化妆品上可接受的佐剂可包含有一或多种选自于下列的试剂：溶剂、胶凝剂、活性剂、防腐剂(preservative)、抗氧化剂、遮蔽剂(screeningagent)、螯合剂、界面活性剂、染色试剂(coloring agent)、增稠剂(thickening agent)、填料(filler)、香料以及气味吸收剂。有关这些试剂的选用与数量是落在本领域技术人员的专业素养与例行技术范畴内。
依据本发明，该药妆品组合物可利用本领域技术人员所详知的技术而被制造成一适合于护肤(skincare)或化妆(makeup)的形式，这包括，但不限于：水性溶液(aqueoussolution)、水-醇溶液(aqueous-alcohol solution)或油性溶液(oily solution)、呈水包油型(oil-in-water type)、油包水型(water-in-oil type)或复合型的乳剂(emulsion)、凝胶(gel)、软膏 (ointment)、乳霜(cream)、面膜(mask)、贴片(patch)、贴布(pack)、擦剂(liniment)、粉末(powder)、气溶胶(aerosol)、喷雾(spray)、乳液(lotion)、乳浆(serum)、糊剂(paste)、泡沫(foam)、分散液(dispersion)、滴剂(drop)、悬浮液(suspension)、油膏(salve)、绷带(bandage)、慕斯(mousse)、防晒油(sunblock)、化妆水(tonic water)、粉底(foundation)、眼影 (eyeshadow)、卸妆产品(makeup remover products)、肥皂(soap)以及其他身体清洁产品(body cleansing products)等。
本发明将就下面的实施例来做进一步说明，但应了解的是，所述实施例仅是供例示说明用，而不应被解释为本发明的实施上的限制。
＜实施例＞
一般实验材料：
1.植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CB102：
在下面实施例中所使用的植物乳杆菌CB102是得自于中兴大学食品暨应用生物科技学系(Department of Food Science and Biotechnology at Chung HsingUniversity)的微生物研究室，它已被公开于TW I733446B中，并且已于公元2019年5月8日以保藏编号BCRC 910893被保藏于中国台湾的食品工业发展研究所 (Food IndustryResearch and Development Institute,FIRDI)的生物资源保存及研究中心(BioresourceCollection and Research Center, BCRC)(300新竹市食品路331号，中国台湾)。另外，也有依据布达佩斯条约(the Budapest Treaty)的规定，于公元2021年6月9日以保藏编号DSM33894被保藏于德国微生物保藏中心(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen undZellkulturen GmbH,DSMZ)。
2.植物乳杆菌CB102的热致死菌粉(heat-killed bacterial powder)的制备：
首先，将上面第1项当中所述的植物乳杆菌CB102接种至MRS 肉汤培养基(商品名为BD Difco Lactobacilli MRS Broth，货号为 DF0881-17-5)中，并于37℃下进行培养历时16小时，借此而得到植物乳杆菌CB102的菌液。在以平板计数培养基来进行菌数计数后，使用高温短时间杀菌法[high temperature short time,(HTST)process] 在73±2℃下对所得到的植物乳杆菌CB102的菌液进行热致死 (heat-killing)历时15秒，接着在25℃下以10,000rpm来进行离心历时15分钟。在倒除上清液后，将所得到的沉淀物(pellets)拿来进行喷雾干燥处理(spray-drying treatment)，借此而得到植物乳杆菌 CB102的热致死菌粉(具有5×109CFU/g的细菌浓度)。
3.燕窝酸(Sialic acid)：
在下面的实施例中所使用的燕窝酸是购自于创百股份有限公司(Chambio Co.,Ltd.)。
一般实验方法：
1.统计学分析(statistical analysis)：
在下面的实施例中，各组的实验被重复3次，而实验数据是以“平均值(mean)±平均值的标准误差(standard error ofthe mean,SEM)”来表示。所有的数据是通过独立样本t检定(independent sample t-test) 来作分析，俾以评估各组间的差异性。若所得到的统计分析结果是 p<0.05，这表示有统计学显著性(statistical significance)。
实施例1.制备含有植物乳杆菌CB102的热致死菌粉与燕窝酸的组合物
首先，将上面“一般实验材料”的第2项当中的植物乳杆菌 CB102的热致死菌粉与燕窝酸以一为1：1的重量比进行混合，借此而得到含有植物乳杆菌CB102的热致死菌粉与燕窝酸的组合物。接着，将所得到的组合物与玉米淀粉(corn starch)[它是非活性成分，并且被使用作为一种稀释剂(diluent)]以一为1：4的重量比来进行混合并以250mg为单位来制成胶囊(下称胶囊1)。
另外，为供比较，将燕窝酸与玉米淀粉以一为1：4的重量比来进行混合并以250mg为单位来制成胶囊(下称胶囊2)，以及使用玉米淀粉并以250mg为单位来制成胶囊(下称胶囊3)。
实施例2.本发明的组合物在改善皮肤病况(improving skin condition)上的效用评估
实验个体：
参与本试验的实验对象是使用由成功大学医学院附设医院的研究伦理委员会(Research Ethics Committee of National Cheng Kung University Hospital)所认可的操作过程并依据赫尔辛基宣言 (Declaration of Helsinki)的现行修订版的规范来进行。在向所有参与试验的受试者进行完整的实验说明后，有取得他们的告知同意书(informed consent form)。
在以下面表1中所示的纳入标准(inclusion criteria)与排除标准 (exclusioncriteria)予以筛选后，本试验共计有38位年龄介于22岁至65岁的受试者参加，其中包括9位男性与29位女性。
表1.用以筛选实验个体的纳入标准以及排除标准
Figure BDA0003933938910000091
实验方法：
A、本发明的组合物的给药：
首先，将所有的受试者随机地分成1个实验组(n＝12)、1个比较组(n＝12)以及1个对照组(n＝14)，其中实验组的受试者被口服给药以胶囊1，比较组的受试者被口服给药以胶囊2，而对照组的受试者则被口服给药以胶囊3。各组受试者每天被给药一颗，给药时间总共历时14天。在给药开始前(也就是，第0天)以及给药开始后的第7天以及第14天，对所有受试者进行下面第B至C项的测定。
B、经皮水分散失(Transepidermal Water Loss,TEWL)的测定：
使用VapoMeter经皮水分散失测量仪(厂牌为Delfin Technologies Ltd.)来对各组受试者的皮肤进行经皮水分散失 (TEWL)(g/m2/h)的测定。TEWL数值愈高表示皮肤水分蒸散流失的量愈多。
之后，依照上面“一般实验方法”的第1项当中所述的方法来分析所得到的实验数据。
C、皮肤细纹深度(depth of fine lines)、毛孔深度(depth of pores)以及黑色素含量(melanin content)的测定：
使用Antera
Figure BDA0003933938910000101
CS智能肌肤检测仪(厂牌为Miravex Limited) 来对各组受试者的皮肤进行细纹深度(mm)、毛孔深度(mm)以及黑色素含量的测定。而有关黑色素的相对含量是通过将各组在给药开始前(也就是，第0天)以及给药开始后的第7天或第14天所测得的黑色素含量代入下列公式(1)而被计算出：
公式(1)：A＝B/C
其中：A＝黑色素的相对含量
B＝各组在给药开始后的第7天或第14天所测得的黑色素含量
C＝各组在给药开始前所测得的黑色素含量
之后，依照上面“一般实验方法”的第1项当中所述的方法来分析所得到的实验数据。
结果：
A、经皮水分散失的测定：
图1显示各组受试者的皮肤在给药前后所测得的经皮水分散失 (TEWL)。由图1可见，在给药开始后的第7天以及第14天，与对照组相较下，实验组的TEWL有显著地降低，且其降低幅度是高于比较组所具者。这个实验结果显示：本发明的组合物在改善TEWL 的效用上是优于燕窝酸。
B、皮肤细纹深度、毛孔深度以及黑色素含量的测定：
图2显示各组受试者的皮肤在给药前后所测得的皮肤细纹深度。由图2可见，在给药开始后的第7天以及第14天，与对照组相较下，实验组的皮肤细纹深度有显著地降低，且其降低幅度是高于比较组所具者。这个实验结果显示：本发明的组合物在淡化皮肤细纹的效用上是优于燕窝酸。
图3显示各组受试者的皮肤在给药前后所测得的毛孔深度。由图3可见，在给药开始后的第7天以及第14天，与对照组相较下，实验组的毛孔深度有显著地降低，且其降低幅度是高于比较组所具者。这个实验结果显示：本发明的组合物在抚平毛孔的效用上是优于燕窝酸。
图4显示各组受试者的皮肤在给药前后所测得的黑色素的相对含量。由图4可见，在给药开始后的第7天以及第14天，与对照组相较下，实验组的黑色素的相对含量有显著地降低(特别是在给药开始后的第14天)。这个实验结果显示：本发明的组合物在降低黑色素含量的效用上是显著优于燕窝酸。
综合以上的实验结果可知，与单独使用燕窝酸相较下，本发明的含有植物乳杆菌CB102的热致死菌粉与燕窝酸的组合物能够更有效地改善经皮水分散失、淡化皮肤细纹以及抚平毛孔，并且还可以有效地降低黑色素含量，进而达到皮肤美白(skin whitening)的效用。因此，申请人认为：依据本发明的含有植物乳杆菌CB102的热致死菌粉与燕窝酸的组合物具有发展成为改善皮肤病况的产品的高潜力。
于本说明书中被引述的所有专利和文献以其整体被并入本案作为参考资料。若有所冲突时，本案详细说明(包含界定在内)将占上风。
虽然本发明已参考上述特定的具体例被描述，明显地在不背离本发明的范围和精神下可作出很多的修改和变化。因此意欲的是，本发明仅受如随文检附的权利要求书所示者的限制。

Claims (8)

1.一种包含有植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CB102(DSM 33894)与燕窝酸的组合供应用于制备一用来改善皮肤病况的组合物的用途。
2.如权利要求1所述的用途，其特征在于：该植物乳杆菌CB102与燕窝酸的重量比是落在1：0.1至1：10的范围内。
3.如权利要求1所述的用途，其特征在于：该植物乳杆菌CB102是一经热致死的菌株。
4.如权利要求1所述的用途，其特征在于：该皮肤病况是选自于由下列所构成的群组：皮肤老化、皮肤皱纹、皮肤斑点、皮肤弹性差、皮肤暗沉、皮肤干燥、皮肤毛孔粗大，以及它们的组合。
5.如权利要求1所述的用途，其特征在于：该组合物是一食品组合物。
6.如权利要求1所述的用途，其特征在于：该组合物是一药学组合物。
7.如权利要求6所述的用途，其特征在于：该药学组合物是呈一供口服给药的剂型。
8.如权利要求1所述的用途，其特征在于：该组合物是一药妆品组合物。
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