CN1163399A

CN1163399A - 一种生物技术用于物品防伪的方法

Info

Publication number: CN1163399A
Application number: CN 97103930
Authority: CN
Inventors: 郭兴华
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 1997-04-16
Filing date: 1997-04-16
Publication date: 1997-10-29

Abstract

本发明涉及生物防伪技术领域，尤其涉及将固相抗原-抗体反应和非竞争性检测技术用于固相物品或流体和半流体物品防伪的方法。抗原为天然存在或人工合成的，具有免疫原性和/或反应原性的蛋白质或多肽、核酸或核苷酸、多糖或寡糖以及类脂。抗体由单克隆或多克隆技术制备。标记方法采用的是金标、硒标和酶标等技术。由于抗原-抗体反应所具有的特异性和难仿性，故难以模仿和假冒。该法主要用于任何形状物品的外部标识，也可用于物品之中。

Description

一种生物技术用于物品防伪的方法

本发明涉及生物防伪技术领域，尤其涉及抗原-抗体反应用于物品防伪的方法。

目前，假冒伪造已成世界范围内的一大公害。随之而来，防伪制品也成为保证真品，维护消费者利益必不可少的重要措施。传统的防伪标识大多是物理或化学性质的制品，如：激光全息、光学变色膜、图象扰频、热变油墨、磁条、智能卡、软件锁等等。但由于受其本身物理或化学特性的限制，这些防伪标识都有一定的局限性、易仿性和非特异性的缺点，而利用现代分子生物学所具有的特异性、难仿性和难破译性的特点研制的防伪制品，可弥补物理方法或化学方法的不足。

众所周知，抗原-抗体反应是生物界广泛存在的现象，在医学、生物学领域里已研究多年，使用广泛。近代示踪，标记技术也已趋成熟并广为使用。自然界存在无法计数的抗原物质，抗原与抗体之间呈现高度的专一性反应，即特异性反应。采用自然界的天然抗原和人工制备的抗原，可以很容易地在动物体内或体外培养细胞中制造出抗体，纯化的抗原或抗体均可加以标记，以识别相应的抗体或抗原，用肉眼可见或用仪器检测，就像钥匙识别锁一样。将这种生物物质(抗原或抗体)加于防伪物品之中或附于其表面，就可以像用已知的钥匙去识别加密的锁，以辩真伪。这种技术的特点是高度专一、准确、应用广泛、可选性强，使用方法或简或繁，依加密目的级别而可调整。既可加于被防伪物品之中，又可附于其外，是一种不可破译的现代生物隐形防伪技术。

在新型的生物防伪技术方面，已有EP O 327 163 A2。该专利以m-苯氧基苯甲酸(半抗原)为防伪标识物质，和蛋白质连接做成完全抗原而制成单克隆抗体。此种抗体可以加入水溶性或油溶性液体之中，即用于液相物品(标记物和被检物均混于液相)，检测方法是用试剂盒。检测原理为六十年代发展起来的竞争性酶联免疫法。本发明人等在这方面已进行了长时间的研究，并于1996年申请了“核酸密码分析技术应用于防伪的方法”的专利(申请号96109232.7，申请日960802)，现在为了完善和进一步发展生物防伪技术，特提出“一种生物技术用于物品防伪的方法”。本发明的方法与上述欧洲专利不同之处是采用固相物品，标记于被检物的一定位置，检测方法是采用八十年代发展起来的非竞争性快速斑点免疫结合反应技术(包括斑点免疫渗滤法、滴金免疫测定法、斑点免疫层析法)、致敏乳胶凝集技术、荧光素标记技术和化学荧光技术等。

本发明的目的在于，提供一种辨别真伪高度准确、灵敏、保密性强、难破译和伪造、用途广泛、技术性强和使用方便的防伪方法。

为了达到上述目的，本发明的特征在于：

利用抗原-抗体反应技术鉴别物品的真伪，将抗原或抗体及其标识物固定于固相物品上，检测方法采用非竞争性免疫技术；

使用的抗原-抗体为天然存在的或人工合成的，具有免疫原性和反应原性的蛋白质或多肽、核酸或多核苷酸、多糖或寡糖、类固醇以及类脂；

抗体制备是采用单克隆抗体技术或多克隆抗体技术；

所使用的非竞争性免疫技术的测定方法为：免疫斑点结合测定；免疫金属离子(金、银)及硒的标记测定；致敏微球(人工、天然)测定；荧光素标记测定；化学发光标记测定；

本防伪方法可用于下列固相物品的防伪，如：文物、衣物、皮革制品、中药、西药、食品、保健品、香烟、化肥、农药、种子、工艺品、汽车、摩托车、建筑材料、电器、磁盘、光盘、计算机、录像机、摄像机、照相机、通讯器材、音响、电视机、手机、仪表、珠宝首饰、医疗器械，以及纸张、塑料和尼龙制造的文件、证件、证券、信用卡、发票、纸币、商标、海关申报单、字画、古董、图书。

本防伪方法也可用于下列流体和半流体物品的防伪，如：酒类、饮料、化学试剂、印泥、油墨、墨水、油类、润滑油、化妆品、有机溶剂、保健食品、发酵食品、化肥、农药、石油制品、生物制品、药物制品。

本防伪方法还可用于所述固相物品、流体和半流体物品的包装、商标、容器、瓶盖或任何的其他附属物。

下面，结合实施例进一步说明本发明的内容。

实施例1

制备作为防伪标识的抗原。用人胎盘丙种球蛋白作防伪标识抗原，其提纯方法如下：

取健康产妇胎盘一个，绞成肉糜，加750mL蒸馏水，悬浮组织，再加NaCl至4％，加苯酚至0.3％防腐，搅匀。浸泡过夜。在10000rpm离心30分钟，吸出上清，弃沉淀。加等体积饱和硫酸铵，搅匀，放置1小时，离心，收集沉淀。沉淀悬于500mL蒸馏水，加明矾至10％，pH4.2，离心弃沉淀。用1N NaOH调pH 7.7-7.9。此时产生AL(OH)₃胶体，过滤。澄清之滤液含丙种球蛋白，加等量饱和硫酸铵，即产生丙种球蛋白沉淀，离心，用0.01mol/L磷酸缓冲液pH7.4透析。

DEAE纤维素离子交换层析：用0.01mol/L磷酸缓冲液，pH 7.4，平衡柱体，将上述粗丙种球蛋白上样过柱，杂质吸附在柱上，丙种球蛋白不吸附，被洗脱下来，然后冻干保存。其纯度可达95％以上，足以作为防伪标识用。

将蛋白质抗原稀释后吸附在固相物体上，干燥后用物理方法(如塑料薄膜、金属薄膜等)或化学方法(如海藻糖、明胶等)进行密封，其用量极微。每个防伪标识用0.1微克抗原足够做检测。

小分子半抗原：本例采用半抗原皮质素-21-半琥珀酸偶联甲状腺球蛋白制备抗体，其方法如下：

取700mg皮质素-21-半琥珀酸酯，加15mL二氧六环使之溶解，然后冷却至10℃，再加0.35mL三正丁胺和0.91mL氯甲酸异丁酯，生成混合酐，待用。另取130mL二氧六环/水(1∶1)混合液，加甲状腺球蛋白2.5g和2.5mL 1N NaOH，在充分搅拌和冷却下将混合酐溶液加入其中。1小时后加1mL NaOH使pH升至8.5。继续搅拌和冷却3小时，流水透析过夜。再用1N HCl调pH 4.5，冷却过夜。离心，沉淀物用NaHCO₃调至pH5.5，以溶解沉淀。流水透析4小时，冻干，得1.6g皮质素-21-半琥珀酸-甲状腺球蛋白。该复合物具有很强的免疫原性，而防伪标识抗原则仅用皮质素即可。

实施例2

制备防伪标识抗原的特异抗体。

将防伪标识抗原蛋白(或半抗原-大分子蛋白偶合物)5mg/mL与等体积的福氏佐剂混匀加5mg/mL卡介苗充分乳化后，注射雄性绵羊，在二侧颌下淋巴结和二侧腹股沟淋巴结各注射1mL。每隔10天注射一次共二次。以后每周一次，连续三次。在最后一次注射后一周，采少量血，制成血清，以测定抗体效价。

抗体效价测定方法用双向免疫扩散法，具体操作如下。用0.5μ巴比妥缓冲液(pH8.6)配制1％琼脂糖凝胶，在微波炉中令其融化。当融化的琼脂糖凝胶温度降至50-55℃时，倾倒在水平放置的载玻片上，室温放置15分钟，4℃放置10分钟。用直径3mm的打孔器在玻片中央打一孔。围绕中心孔周围5mm距离延圆周方向打5-6个孔。将作为防伪标识的抗原配制100μg/mL浓度的水溶液，取10μL加在中心孔中，羊抗血清成倍稀释，如1∶2，1∶4，1∶16，1∶32，1∶64，各取10μL加在周围的孔中。加样后在湿润的环境中37℃保温过夜。检查抗原孔与抗体孔之间出现的白色沉淀线。如能在1∶32和1∶64孔出现沉淀线，该抗体作为防伪标识的鉴定效果极佳。

当抗体滴度超过1∶32时，可以从免疫效价高的羊进行抗血清制取，方法是从颈动脉抽血。血液先置室温凝固30分钟，再放37℃温箱1小时，最后放4℃冰箱以使血块收缩凝固。用玻棒将血块轻轻剥离，收集血清并在5000g4℃离心20分钟。剥离的血块搅碎，再置4℃过夜，再次离心，吸取血清。抗血清制成后加0.02％N_aN₃，在-20℃冻存，供进一步纯化IgG及标化用。

实施例3

抗体致敏乳胶凝集法检测防伪标识。

制备作为防伪标识的抗原蛋白或多肽的抗体γ-球蛋白(主要含IgG)或F(ab)₂片段。将抗血清与等体积的饱和硫酸铵滴加混合，冰箱过夜。次日在1000rpm冷冻离心，沉淀为γ-球蛋白，溶于生理盐水，透析后进行DEAE-52离子交换层析，用0.01M磷酸缓冲液(pH＝7.4)洗脱IgG，即可得到其纯品。

制备F(ab)₂：将纯化的IgG用胃蛋白酶水解，然后通过Sephadex G-75柱，用0.1mol/LpH8.0硼酸缓冲液洗脱，收集第一峰，得F(ab)₂。

制备致敏乳胶：取聚苯乙烯乳胶(直径0.8μm)，用缓冲液洗涤后加提纯的IgG或F(ab)₂，置37℃反应1小时。离心充分洗涤致敏乳胶，最后悬浮于含1％牛血清白蛋白的0.01mol/L甘氨酸氯化钠缓冲液(GBS)中(pH＝9.2)。每毫升乳胶致敏后悬于30mL GBS，置4℃备用。

将含有某种特定抗原的隐形防伪标识取下，用几滴生理盐水浸泡数分钟，将防伪标识中的抗原溶解下来，然后取一滴，点在黑色玻璃板小凹槽内(直径30mm)，加一滴60％聚乙二醇6000-GBS，最后加一滴致敏乳胶，混匀。同时做一份标准的特定抗原作阳性对照，15分钟后可用肉眼观察到在黑色玻璃板背景下，出现清晰的白色凝集颗粒，与标准抗原凝集现象相似。即可判定在防伪标识中存在某种抗原，能与该抗原的抗体所致敏的乳胶反应，形成凝集作用。如防伪标识不存在该种抗原，则不出现白色凝集颗粒，反应液体呈清凉透明既可判定检测样属伪品。如果将上述防伪标识抗原与致敏乳胶的凝集反应置于96孔板中进行，则可以通过自动比浊分析仪进行快速分析记录。与本法所述化学乳胶凝集技术原理类似，也可用抗体致敏的脂质体、红血球或明胶颗粒进行凝集试验检定防伪标识中的特定抗原，达到辨伪识真的目的。在实用上，化学乳胶颗粒可以吸附在滤纸或薄膜上，进行固相检测，更为方便。

实施例4

快速斑点免疫结合法检测防伪标识。

NC膜预包被：将硝酸纤维素膜(NC，0.22μm至0.45μm)用铅笔划出3mm×3mm小格，再浸于0.01mol/L磷酸缓冲液-生理盐水(PBS)pH＝7.4中30分钟。然后取出NC膜，用滤纸吸干，在每一小格中加稀释液的特定的多克隆抗体(或单克隆抗体)2微升，室温干燥后浸入含15％小牛血清-0.05％吐温-20的PBS中，43℃作用1.5小时，再用PBS洗3次，自然干燥后密封于塑料袋中，4℃保存备用。

将防伪标识上的特定抗原用一滴生理盐水浸泡数分钟，以洗脱防伪标识上的抗原。

取2μL已洗脱的防伪标识抗原，和2μL已知标准抗原分别加于有抗体的NC膜不同小格中央，37℃反应10分钟，PBS洗3次，再将NC膜浸于稀释的辣根过氧化物酶标记的第二抗体溶液中，37℃反应10分钟，再用前述含小牛血清和吐温的PBS充分洗涤。

将上述洗涤的NC膜浸入3，3-二氨基联苯胺底物溶液中再用流水冲洗NC膜。即可根据NC膜小格中央的颜色判定检测结果：与标准抗原相似有深棕色斑块的为阳性，表明隐性防伪标识中存在待测的特异抗原物质，所标识的物件为真品。若在小格中央仍为白色而无颜色出现，即可鉴别被检物为赝品。

与本法相关或相似以免疫斑点检定技术均可包括在本实施例子。如用碱性磷酸酶代替辣根过氧化物酶进行显色呈现黄色斑点，也可用β-半乳糖苷酶和脲酶代替进行显色反应；斑点酶联免疫吸附测定，先将待测防伪抗原点在NC膜上，经BSA封闭，洗净后，加酶标单克隆抗体反应，再用底物显色；所用NC膜也可用尼龙膜代替。

本法也可采用近年来发展的“斑点免疫渗滤法＂或称＂免疫浓缩法＂进行，其本质均是以微孔薄膜作为载体，利用微孔膜的过滤作用和毛细管作用，使抗体，抗原溶液在渗滤过程中吸附在膜上，多余的水分被膜下吸水垫料吸走，故可在几分钟内即可用肉眼观察结果。

实施例5

快速金银标记免疫斑点技术检测防伪标识。

制备特定防伪抗原的相应抗体：抗血清产生参见实施例1。所得抗血清经50％饱和硫酸铵盐析，透析等步骤，获得纯净的γ-球蛋白。

胶体金溶液的制备(柠檬酸还原法)：取0.01％氯金酸(HAuCl₄.H₂O，光谱纯，上海试剂一厂)水溶液100mL，加热至沸腾，在磁力搅拌下迅速加入1％柠檬酸三钠水溶液1mL，约2分钟后呈蓝紫色，继续加热至变为橙红色为止，冷却后恢复到原体积，可获φ＝30nm颗粒的胶体金溶液。以0.1M K₂CO₃调pH至5.8。

金标记抗体复合物的制备：将所需量的纯化抗体γ-球蛋白及胶体金(pH调至5.8)在室温下磁力搅拌混合5分钟，后加入1％PEG(MW＝20000)使最终浓度为0.05％，即成粗制胶体金结合物。在12000rpm，4℃离心45-60’，沉淀用50mMPBS(pH7.4)洗3次，最后沉淀用含0.1％NaN₃和BSA及PEG的PBS(pH7.4)悬浮至A_520nm值约2.5的浓度，最后用Sephacryl-S-300柱层析获纯化的金标抗体。

将硝酸纤维素微孔滤膜用铅笔划出小方格，然后浸入0.01mol/L的PBS(pH7.4)溶液中，30分钟后取出，用滤纸吸干多余水分，在小方格中央点4μL按1∶5稀释的步骤1所纯化的γ-球蛋白，干燥后用1％的BSA在37℃封闭两小时，Tris缓冲液(pH8.0，含0.05％吐温-20)洗3次，每次10分钟。滤纸吸干后，将防伪标识抗原样品用1滴生理盐水溶解后取25μL点于滤膜小方格中央，待完全吸干后，静置10分钟，再在样品的同一位置点上25μL金标试剂，37℃反应10分钟，最后用0.05mol/LPBS(pH7.4，含0.35％吐温-20)洗涤2次，每次2分钟。含防伪标识抗原的真品显出粉红色，不含防伪标识抗原的样品仍为白色，是为赝品。

实施例6

免疫荧光染色技术用于防伪标识检定。

许多荧光素都可用来标记抗体或蛋白A(或蛋白G)检测防伪标识中的抗原。这些荧光物质包括异硫氰酸荧光素(FITC，绿色荧光)；异硫氰酸四乙荃罗丹明(RBITC，桔红色荧光)；藻红素(红色荧光)和香豆素(蓝色荧光)。本例提供RBITC的标记抗体和检测防伪抗原的方法如下。①.取纯化的γ-球蛋白，用0.005mol/L PBS配制成2％浓度。加入0.2mol/LNa₂HCO₃溶液，使pH至8.0。称γ-球蛋白总量1/40的RFITC，总蛋白1/20体积的二甲醛甲酰胺，搅拌下逐滴加入球蛋白溶液中，同时用0.1N NaOH调pH使其维持在9.0-9.5之间。室温搅拌1-2小时。用SephadexG 50层析柱去除游离的RBITC。第一峰为RBITC结合的抗体，收集。分装，-70℃冻存。将防伪标识抗原用数滴生理盐水浸洗下来，然后取10微升点于硝酸纤维素膜上，待充分干燥后，用实施例4中的封闭液封闭，再将滤纸浸入RBITC标记γ-球蛋白的溶液(10μg/mL)中，37℃保温1小时，用PBS充分洗涤后用X底片曝光。含防伪抗原的样品应有感光斑点。

实施例7

免疫化学发光检测防伪标识。

用生理盐水50微升从防伪标识上洗脱防伪抗原蛋白。取上述样品10微升(含至少10微微克抗原)点在NC膜上，令其自然干燥。用缓冲液A(含0.1mol/L Tris，pH7.5和0.1mol/L NaCl)配制2％脱脂奶粉，取5ml在室温处理NC膜60分钟，以封闭NC膜上非特异的结合位点。加新配制的1∶1000稀释的防伪抗原的抗血清1ml，在室温轻摇保温和60分钟，再用缓冲液A漂洗三次，每次5ml及15分钟。倾去抗血清溶液，加新稀释(1∶5000)的第二抗体-碱性磷酸酶偶合物1ml，室温轻摇30分钟。倾去第二抗体溶液，用上述缓冲液A漂洗NC膜三次，每次15分钟。用5ml缓冲液B(含0.1mol/L Tris，pH9.5，0.1mol/L NaCl和50mmol/L MgCl₂)平衡NC膜2分钟。将NC膜置于疏水的塑料硬透明膜上，加0.5ml发光试剂CSPD溶液(以能复盖整个膜为准)，再小心复盖另一张塑料硬透明膜，室温放2分钟。然后从膜上压挤出多余的发光试剂，揭去透明膜，用保鲜膜复盖NC膜，在暗室中压X光片，曝光20～30分钟。冲片后，在含防伪标识的样品上可以观察到曝光的黑斑信号。伪品无曝光的黑斑信号。

实施例8

抗原-抗体反应用于服装刷品和标签作为防伪标识物。

例(1)、将抗原装入一软聚酯囊中。此包囊造形及外表面颜色精美。内装抗原无毒、无害、耐温变、无污迹、易清洗、耐磨损。将抗体及其标记物印制在服装品牌标签上。外装以透明聚酯小袋，标牌缝于衣裤上。检验时撕去品牌的聚酯小袋。将装有抗原的小囊自衣服的饰链取下，拧开上口，滴于标牌指定位置上。标牌显示图案或数字，消费者自辨真伪。

例(2)、将抗体装入另一饰物。将装抗原的小囊液体滴于装抗体的饰物指定位置，饰物显示图案。

方法：制备抗原。制备软囊。制备含有抗原的软囊饰物。将软囊饰物挂于适当部位如拉链的持手。制备印有抗体及其标记物的品牌。将(4)缝于衣服上。将软囊取下，拧开上盖，将含有抗原的液体滴加在涂有抗体的品牌饰物的适当位置，饰物显示图案。抗原、抗体及标记物显示的图案、编号；显示的颜色、品牌及装抗原的软囊，随产品批号多变。抗原、抗体、饰品及其标记物，由国家有关监督部门用仪器实行高级技术监督，抽样追踪商品及其防伪标识是否被仿造。

图1A为牛仔裤，后兜盖上有拉链的示意图，其中装有抗原的软囊1；图1B为装有抗原的软囊(放大)的示意图，其中有拉链1、螺口栓2、抗原3；图1C为品牌示意图，其中有聚酯套1、空圈2；图1D为翻折开的品牌的示意图，其中有印有抗体及标记物图案1；图1E为放大的图案示意图，其中有滴加抗原后显示数字及字母随批号可变，滴加抗原后显示2：正品、中国制造；图2A为塑料制的、有夹层的头型饰品标牌的示意图，其中有钩环1、显色2、试验3、夹层4、抗原滴加孔红色5、外层图案6、对照7、上层8；图2B为下层的示意图，其中有印涂抗体及标记物部分1、硝酸纤维膜(Y型)2；图2C为下层贴面，贴有硝酸纤维膜部分(虚线部分)的示意图，其中有硝酸纤维膜1、滤纸层2、厚纸层3。

实施例9

激光、抗原-抗体反应在商标防伪中的应用。

设计一种商标，由三层薄膜构成。第一层为激光防伪薄膜，带有多种激光加密特征。第二层为涂有抗原的硝酸纤维薄膜，表面印刷有文字或符号，但抗原隐蔽。检验时揭去第一层，暴露印有文字符号的第二层。在第二层上滴加抗原洗脱液，将抗原洗脱下来，并渗入第三层，第三层上印有标记抗体。当第三层的标记抗体与第二层抗原反应时，经免疫化学发色反应，显示图案。各层图案按商品批号多变。

制备方法：

制备粘合剂。制备激光印刷、防伪标签(第一层)。制备浸有抗原的硝酸纤维薄膜，表面印刷文字符号，符号含有加密内涵。制备与3条中的抗原呈特异性反应的抗体及其标记物。标记物质在抗原抗体反应时显色。抗体及其标记物印迹时按加密要求成特殊图案或编号。将上述三层用粘合剂粘合。

应用方法如下：

在特殊波长下识别第一层激光防伪图案，为第一步防伪。揭去第一层，在第二层上显示特殊加密符号，为第二步防伪。在第二层上滴加抗原洗脱液或将此薄膜(含有第二、第三层)浸入抗原洗脱液中，经过一定时间。揭去第二层，在第三层上显有特殊图案及符号。为第三步防伪。上述全部材料及文字符号、编码图案，均需在制造者及监督部门登记保存，以备追踪。第二层与第三层的抗原、抗体及标记物均应受技术监督部门管理，并用特殊仪器如酶标仪等，抽样监测。以保证商品及防伪标记不受伪造。

图3A为商标标签，由三层薄膜粘合而成的商标标签示意图；图3B为第一层有激光图象的示意图；图3C为印刷符号(肉眼可见)的示意图，其中有第一层背面1、第二层正面2、第二层硝酸纤维膜3，印迹有抗原，肉眼不可见；图3D为浸入抗原洗脱液的示意图，其中有第一层背面1；图3E为滴加抗原洗脱液于第二层正面的示意图；图3F为揭去第二层显示图案的示意图，其中有第一层1、第二层2。

实施例10

抗原-抗体反应用于密封签的方法。

除无第一层激光防伪薄膜外，其余均与实施例8相同。

实施例11

抗原-抗体反应在珍贵字画、重要印刷品、有价证券、单据、货币中防伪的应用。

珍贵字画、重要印刷品，有价证券、货币、报单等，可利用抗原-抗体反应的高度特异性和多样性加密防伪。将特制的抗原加于油墨、颜料、墨汁中。在上述需防伪的物品印刷或绘制、书写过程中，标识在一定部位上。需要检查时，可用一种薄膜盖在采样部位上，用抗原洗脱剂浸润此种薄膜，将抗原转印在取样薄膜上，以保存被检商品的完整性。将取样薄膜剪碎，再浸于抗原洗脱液，必要时予以浓缩。利用固相标记的抗体检测卡，浸于被检抗原洗脱液中，抗原与标记抗体相反应，则可显色或呈现图案。

也可以用其它免疫化学技术标记抗体，用酶标仪、生物发光计检测。

为提高检测灵敏度，还可以用生物扩大反应的方法，如生物素标记，地高辛标记、葡萄球菌蛋白A等，提高检出率。或用免疫组织学方法，用免疫光镜或电镜检查。

方法如下：

制备抗原，掺入印刷油墨，染料或专用墨汁之中。制备抗体检测卡，由抗体及其标记物组成。将含有抗原的染料书写或绘画到需加密的文物或印刷品上。取样时用印迹转移法将抗原转到另一载体上。进一步溶解抗原检测抗原：用检测卡法、特殊仪器法或免疫组化形态学(光学或电子显微镜法)依检测级别和需要而定。上述制备的抗原、抗体及其标记物混有特殊抗原的油墨、印泥、颜料、墨汁及所书写、绘制的文件。画面与印刷品均需编号备案，并保存使用的材料，以备生产者、技术监督部门核查、追踪。根据需要和检测级别，可用仪器检查。

图4A为图章的示意图；图4B为在印泥中沾涂的示意图；图4C为加盖于书画的示意图；图4D为印迹(抗原)转移的示意图，其中有浸有抗原洗脱液的薄膜1；图4E为印迹转移后的示意图；图4F为破碎的示意图；图4G为装入抗原洗脱液洗脱的示意图；图4H为离心，上层液转至另一管的示意图；图4I为用镊子夹持检测卡浸入抗原液检测卡印有抗体及标记物的示意图；图4J为检测卡显示线条，证明抗原真伪的示意图，其中有对照抗原线1、被测抗原线2；图4K为伪品，不含有抗原或含有抗体无特异反应的抗原不显色的示意图，其中有对照抗原线(+)1、被测抗原线(-)2。

实施例12

酒类及饮品的抗原-抗体防伪。

将按食品法规规定的食品添加剂，如：寡糖、核酸、核苷酸、多肽等，按允许浓度加入酒类或其它饮品。添加后质量稳定。不影响抗原的反应原性。制备出相应的抗体及其标记物。在包装物(如瓶盖垫纸)上涂布抗体及其标记物。饮用该饮品前从瓶或罐中滴加一滴被检品于仰置的瓶盖中。饮液中的抗原与盖中垫纸上的抗体立即发生反应，显示颜色和图案，消费者迅速自行辨别真伪。

方法如下：

选择适用添加剂，如：寡糖、核酸、核苷酸、多肽、肽糖，作为加密物。免疫动物制备抗体，纯化抗体。制备抗体标记物，如胶体金、胶体硒、乳胶颗粒、包被第一抗体。将标记物及抗体固相化印迹于硝酸纤维膜，并印成一定图案。印迹的图案、形状、颜色随产品批号多变。所添加的抗原样品、抗体及标记物样品均由生产者质量监督部门及各级技术监督部门登记、留存。所使用的抗原(添加剂)、抗体及其标记物由国家有关监督部门用仪器(酶标仪、实行高级技术检测，抽样追踪商品及其防伪标记是否被伪造。

图5A为瓶盖示意图；图5B倒置的盖的示意图；图5C为放大倒置盖的剖面图，其中有硝酸纤维膜2、防水纸层3、厚纸或软木层4、滤纸层；图5D为现色图案之一的俯视图，其中有红1、兰2、红3、兰4；图5E为现色图案之二的俯视图，其中有红1、绿2、兰3；图5F为现色图案之三的俯视图。

用法如下：

打开瓶盖，滴加一滴瓶中液体，静置。然后观察。

综上所述，本发明效果如下：

依据的原理充实、可信，沿用年久，使用广泛；辨别真伪高度准确，灵敏，保密性极强，难破译和伪造；适用的商品广泛；应用的是最先进的免疫学技术，方法成熟，使用方便。

Claims

1.一种生物防伪技术用于物品防伪的方法，其特征在于，利用抗原-抗体反应技术鉴别物品的真伪，将抗原或抗体及其标识物固定于固相物品或流体和半流体物品上，检测方法采用非竞争性免疫技术。

2.根据权利要求1所述的防伪方法，其特征在于所使用的抗原为天然存在或人工合成的，具有免疫原性的蛋白质或多肽、核酸或核苷酸、多糖或寡糖以及类脂。

3.根据权利要求1所述的防伪方法，其特征在于抗体制备是采用单克隆抗体技术或多克隆抗体技术。

4.根据权利要求1所述的防伪方法，其特征在于所使用的非竞争性免疫技术的检测方法为：免疫斑点结合测定；免疫金属离子(金、银)及硒的标记测定；致敏微球(人工、天然)测定；荧光素标记测定；化学发光标记测定。

5.根据权利要求1、2、3或4所述的防伪方法，其特征在于所述的固相物品为：文物、珠宝、首饰、衣物、皮革制品、药品、食品、保健品、香烟、化肥、农药、种子、工艺品、汽车、摩托车、建筑材料、光盘、磁盘、计算机、录像机、摄像机、录音机、照相机、音响、电视机、通讯器材、仪表、医疗器械以及各种纸张、塑料或尼龙制造的文件、证件、证券、信用卡、发票、纸币、商标、海关申报单、字画、古董、图书。

6.如权利要求1所述的防伪方法，其特征在于所述的流体和半流体物品为：酒类饮料、化学试剂、印泥、油墨、墨水、油类、润滑油、化妆品、有机溶剂、保健食品、发酵制品、化肥、农药、石油制品、生物制剂、药物制剂。

7.如权利要求5或6所述的防伪方法，其特征在于所述的固相物品或流体和半流体物品还包括物品的包装、商标、容器、瓶盖或任何形式的其他附属物。