CN116338214A - 一种检测血脂的试纸条及检测方法 - Google Patents
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Abstract
本申请提供一种检测血脂的试纸条，包括固定有摩尔比为1:1的胆固醇酯酶和胆固醇氧化酶的第一反应点位，第一反应点位还包括长链烷基季铵盐，还包括固定有甘油激酶、抗干扰剂的第二反应点位，用于测量血液中血糖含量的第三反应点位以及用于检测血液中的高密度脂蛋白胆固醇的第四反应点位。本申请的试纸条，一条多用，能够提高血脂检测特别是总胆固醇、甘油三酯的灵敏度，具有较高的稳定性。
Description
技术领域
本申请属于生物化学技术领域，具体涉及一种检测血脂的试纸条及检测方法。
背景技术
在医学检验技术发展日新月异的今天，电化学测试条已经在血糖、尿酸、胆固醇等各种检测中普遍使用，在生化指标检测中，电化学的测定方法是酶进行生物化学反应之后产生的电子传递，依检体中待测物质浓度成正比的电流流量，再经导电电极检测，其快速反应及电子快速传递至电极而测定的特性，使电化学测定方法成为迅速而可靠的检测法。
现代社会，糖尿病已经成为全球人民的一大健康杀手，糖尿病患者中，由于胰岛素的生物调节作用发生障碍，常出现脂质代谢异常，俗称“高血脂”。所以对于糖尿病人来说，除了对血糖的监测以外，血脂的监测也是至关重要的。
血脂是血浆中的中性脂肪(甘油三酯和胆固醇)和类脂(磷脂、糖脂、固醇、类固醇)的总称。血脂异常是一类较常见的疾病，是人体内脂蛋白的代谢异常，主要包括总胆固醇(TC)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、甘油三酯(TG)升高和/或高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)降低等。临床上常用的化验项目主要有：总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇。通过测定血清中的总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇和高密度脂蛋白胆固醇的水平，不仅对于高脂血症的诊断及冠心病的危险评估和防治具有重要意义，而且已经应用于其他临床相关疾病的研究。
目前大部分检测血脂的方法都是通过酶法测定TC和HDL后，利用Friedewald公式进行计算得出LDL的浓度。但是由于不同患者、同一患者不同时间的TC、HDL均有波动，而试纸条在大批量制作时往往酶的种类、浓度比较固定，导致对于有些患者很难通过测试给出准确结果；并且试纸条在保存过程中也会经过氧化还原反应，导致在一定时间后的试纸条测量精度也较差。因此，需要在试纸条制作时，充分考虑酶的种类从而提高测量的准确性。
发明内容
本申请提供一种检测血脂的试纸条，一条多用，能够提高血脂特别是总胆固醇、甘油三酯检测的灵敏度，具有较高的稳定性。
本申请提供一种检测血脂的试纸条，包括：第一反应点位，所述第一反应点位固定有胆固醇酯酶和胆固醇氧化酶，其中，胆固醇酯酶和胆固醇氧化酶的摩尔比为1:1。
优选地，所述胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶和长链烷基季铵盐的摩尔比满足：2:2:3-5。
在一些实施方式中，所述第一反应点位还固定有长链烷基季铵盐。
优选地，所述长链烷基季铵盐为长链烷基二甲基苄基季铵盐。
优选地，所述长链烷基的碳原子个数介于8-15之间。
在一些实施方式中，所述试纸条还包括第二反应点位，所述第二反应点位固定有甘油激酶、抗干扰剂，其中，抗干扰剂包括碱金属盐、碱土金属盐中的至少一种。
优选地，所述碱金属盐包括NaCl、KCl；所述碱土金属盐包括MgCl2、CaCl2。
在一些实施方式中，所述试纸条还包括第三反应点位，所述第三反应点位用于测量血液中血糖含量。
优选地，所述第三反应点位固定有过氧化氢酶、过氧化物酶、葡萄糖氧化酶中的至少一种，
在一些实施方式中，所述试纸条还包括第四反应点位，所述第四反应点位用于测量血液中的高密度脂蛋白胆固醇。
一种检测血脂的试纸条的检测方法，采用该试纸条，将液体试样加入，液体试样与检测血糖的胆固醇酯酶和胆固醇氧化酶反应，产生电流，根据电流大小，分别得出液体试样中血糖和血脂的含量。
有益效果
本申请提供的检测血脂的试纸条，包括固定有摩尔比为1:1的胆固醇酯酶和胆固醇氧化酶的第一反应点位，第一反应点位还包括长链烷基季铵盐，还包括固定有甘油激酶、抗干扰剂的第二反应点位，用于测量血液中血糖含量的第三反应点位以及用于检测血液中的高密度脂蛋白胆固醇的第四反应点位。本申请的试纸条，一条多用，能够提高血脂检测特别是总胆固醇、甘油三酯的灵敏度，具有较高的稳定性。
具体实施方式
下面将结合本申请的具体实施例，对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本申请一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本申请保护的范围。
在本申请使用的术语是仅仅出于描述特定实施例的目的，而非旨在限制本申请。在本申请和所附权利要求书中所使用的单数形式的“一种”、“所述”和“该”也旨在包括多数形式，除非上下文清楚地表示其他含义。还应当理解，本文中使用的术语“和/或”是指并包含一个或多个相关联的列出项目的任何或所有可能组合。
相关技术中公开了众多检测血脂的酶，用于检测血脂的酶来检测血脂中TC(总胆固醇)、HDL(高密度脂蛋白)、TG(甘油三脂)、LDL(低密度脂蛋白)、VLDL(极低密度脂蛋白)中的任意一种或几种成份。用于检测血脂的酶包括了胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、过氧化物酶、过氧化氢酶、脂蛋白酯酶、甘油激酶、磷酸甘油氧化酶中的至少一种，所述用于检测血糖的酶为过氧化氢酶、过氧化物酶、葡萄糖氧化酶中的至少一种。
试纸条制备：
实施例1
制备测试试纸条，试纸条的制备方法参照公开专利CN104749228A进行制备。其中，反应垫设置为2个，两个反应垫均不添加任何反应酶。
实施例2
与实施例1不同的是，其中，反应垫设置为2个，其中一个反应垫的反应酶为胆固醇酯酶，另外一个反应垫中的反应酶为胆固醇氧化酶，两者摩尔比1:1。
实施例3
与实施例2不同的是，其中，反应垫设置为2个，其中一个反应垫的反应酶为胆固醇酯酶，另外一个反应垫中不固定反应酶，其中胆固醇酯酶为实施例2中胆固醇酯酶的摩尔数的2倍。
实施例4
与实施例2不同的是，其中，反应垫设置为2个，其中一个反应垫的反应酶为胆固醇氧化酶，另外一个反应垫中不固定反应酶，其中胆固氧化酶为实施例2中胆固氧化酶的摩尔数的2倍。
实施例5
与实施例2不同的是，其中，反应垫设置为2个，其中一个反应垫的反应酶为胆固醇酯酶和胆固醇氧化酶，两者摩尔比1:1，另外一个反应垫中不固定反应酶。
实施例6
与实施例2不同的是，其中，反应垫设置为2个，其中一个反应垫的反应酶为胆固醇酯酶和胆固醇氧化酶，两者摩尔比1:1，另外一个反应垫中固定有十二烷基二甲基苄基氯化铵。
实施例7
与实施例6不同的是，其中，反应垫设置为2个，其中一个反应垫中固定胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、十二烷基二甲基苄基氯化铵，三者摩尔比为1:1:2。另外一个反应垫中不固定反应酶。
实施例8
与实施例1不同的是，其中，反应垫设置为2个，其中一个反应垫的反应酶为甘油激酶，另外一个反应垫中为氯化钙。
实施例9
与实施例1不同的是，其中，反应垫设置为2个，其中一个反应垫的反应酶为甘油激酶，另外一个反应垫中为甘油激酶和氯化钙，两者摩尔比2:1。
实施例10
与实施例9不同的是，其中，反应垫设置为2个，其中一个反应垫的反应酶为甘油激酶，另外一个反应垫中的反应酶为甘油激酶和氯化钾，两者摩尔比3:1。
实施例11
与实施例1不同的是，其中，反应垫设置为3个，其中第一反应位点固定胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、十二烷基二甲基苄基氯化铵，三者摩尔比为1:1:2；第二反应位点固定有甘油激酶和氯化钙，两者摩尔比2:1；第三反应位点固定有葡萄糖氧化酶。
实施例12
与实施例11不同的是，其中，反应垫设置为4个，其中第一反应位点固定胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、十二烷基二甲基苄基氯化铵，三者摩尔比为1:1:2；第二反应位点固定有甘油激酶和氯化钙，两者摩尔比2:1；第三反应位点固定有葡萄糖氧化酶；第四反应位点固定有胆固醇酯酶。
测试准备：
本申请所采用的试剂均通过市售获得。
待测血样进行如下处理：采集糖尿病患者的血样10mL，取20.0mL的丙酮和20.0mL无水乙醇混合生成丙酮-乙醇提取液备用，在血样中，加入1.0mL丙酮-乙醇处理液，搅拌3-4min，摇匀制得；
以下采用CHI660C电化学工作站开展血样检测实验，具体测试流程包括：将实施例1-12的试纸条，分别置于待测同一血样中，通过虹吸效应吸入待测血样后，将用试纸条的电极接口插入电极板的接口中，连接化学工作站进行测定。
实验结果分析：
1、空白试纸条稳定性分析
以5.0mmol/L铁氰化钾作为测量探针，差分脉冲伏安法作为测量方法，扫描电位为-0.2～0.6V，扫速为100mV，对实施例1制备的空白试纸条进行电流数据测试，结果如下表1：
表1空白试纸条稳定性分析
从表1可以看出，通过12组实施例1制备的空白试纸条进行测试，所测氧化峰电流值相对偏差为0.56％，表明试纸条本身具有较好的稳定性。
2、含有反应酶的试纸条灵敏度、稳定性分析
对实施例2-12中制备的含有反应酶的试纸条进行稳定性研究，其中，每个实施例选取10个试纸条作为测试样本。以5mmol/L铁氰化钾作为测量探针，差分脉冲伏安法作为测量方法，扫描电位为-0.2～0.6V，扫速为100mV，结果如下表2所示：
| 序号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 平均值 | 标准差 | 相对标准差 |
| 实施例2 | 8.63 | 8.62 | 8.63 | 8.61 | 8.62 | 8.66 | 8.64 | 8.59 | 8.63 | 0.019 | 0.22％ |
| 实施例3 | 10.61 | 10.64 | 10.62 | 10.67 | 10.63 | 10.64 | 10.68 | 10.64 | 10.64 | 0.022 | 0.21％ |
| 实施例4 | 11.21 | 11.22 | 11.22 | 11.24 | 11.19 | 11.21 | 11.25 | 11.21 | 11.22 | 0.018 | 0.16％ |
| 实施例5 | 18.31 | 18.35 | 18.35 | 18.36 | 18.34 | 18.38 | 18.28 | 18.33 | 18.34 | 0.029 | 0.16％ |
| 实施例6 | 18.24 | 18.43 | 18.26 | 18.34 | 18.36 | 18.4 | 18.28 | 18.32 | 18.33 | 0.063 | 0.34％ |
| 实施例7 | 18.42 | 18.48 | 18.43 | 18.54 | 18.52 | 18.56 | 18.5 | 18.48 | 18.49 | 0.046 | 0.25％ |
| 实施例8 | 6.92 | 7.44 | 7.38 | 6.62 | 7.42 | 6.13 | 7.12 | 6.81 | 6.98 | 0.429 | 6.14％ |
| 实施例9 | 6.24 | 6.42 | 6.34 | 6.32 | 6.38 | 6.2 | 6.3 | 6.47 | 6.33 | 0.084 | 1.32％ |
| 实施例10 | 6.62 | 6.68 | 6.57 | 6.49 | 6.71 | 6.62 | 6.66 | 6.7 | 6.63 | 0.069 | 1.04％ |
| 实施例11 | 12.15 | 12.28 | 12.42 | 12.52 | 12.32 | 12.4 | 12.13 | 12.47 | 12.34 | 0.134 | 1.09％ |
| 实施例12 | 12.7 | 12.5 | 12.78 | 12.63 | 12.92 | 12.76 | 12.82 | 12.58 | 12.71 | 0.128 | 1.01％ |
通过表2可以看出，
对比实施例2-5，当胆固醇酯酶和胆固醇氧化酶在一个反应点位时，试纸条的峰值电流明显较大，对于测试而言，具有更高的灵敏度，并且试纸条具有的稳定性并没有明显波动。
对比实施例8-10，氯化钙、氯化钾均能够增加甘油激酶的反应点位的灵敏度，同时也改善了试纸条的稳定性。
对比实施例9-11，表明设置具有葡萄糖氧化酶的第三反应点位对试纸条的稳定性影响不大。
对比实施例11-12，表明设置具有胆固醇酯酶的第四反应点位对试纸条的稳定性影响不大。
3、含有反应酶的试纸条耐温性研究
将实施例1、实施例5-7制备的试纸条分别进行老温老化试验。具体地，将试纸条置于50℃烘箱中进行老化，分别测试老化24h后试纸条的稳定性，老化72h后试纸条的稳定性，测试结果如下表3所示。
表3含有反应酶的试纸条耐温性分析
通过表3可以看出，
当十二烷基二甲基苄基氯化铵与胆固醇酯酶和胆固醇氧化酶在一个反应点位时，试纸条在老化24h、72h的稳定性明显更好，而仅有胆固醇酯酶和胆固醇氧化酶在一个反应点位的试纸条，在老化72h后电流值出现明显波动，已经无法满足测试要求。表明，十二烷基二甲基苄基氯化铵能够明显改善胆固醇酯酶和胆固醇氧化酶组合的耐温性，更利于试纸条在较高温度下的使用和稳定。
一种检测血脂的试纸条的检测方法，采用该试纸条，将液体试样加入，液体试样与检测血糖的胆固醇酯酶和胆固醇氧化酶反应，产生电流，根据电流大小，分别得出液体试样中血糖和血脂的含量。
需要说明的是，在本文中，诸如“第一”和“第二”等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。在没有更多限制的情况下，由语句“包括一个……”限定的要素，并不排除在包括所述要素的过程、方法、物品或者设备中还存在另外的相同要素。
以上所述仅是本申请的较佳实施例而已，并非对本申请做任何形式上的限制，任何熟悉本专业的技术人员，在不脱离本申请技术方案的范围内，当可利用上述揭示的技术内容做出些许更动或修饰为等同变化的等效实施例，但凡是未脱离本申请技术方案的内容，依据本申请的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本申请技术方案的范围内。
Claims (10)
1.一种检测血脂的试纸条，其特征在于，包括：第一反应点位，所述第一反应点位固定有胆固醇酯酶和胆固醇氧化酶，其中，胆固醇酯酶和胆固醇氧化酶的摩尔比为1:1。
2.根据权利要求1所述的检测血脂的试纸条，其特征在于，所述第一反应点位还固定有长链烷基季铵盐。
3.根据权利要求2所述的检测血脂的试纸条，其特征在于，所述胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶和长链烷基季铵盐的摩尔比满足：2:2:3-5。
4.根据权利要求2所述的检测血脂的试纸条，其特征在于，所述长链烷基季铵盐为长链烷基二甲基苄基季铵盐。
5.根据权利要求4所述的检测血脂的试纸条，其特征在于，所述长链烷基的碳原子个数介于8-15之间。
6.根据权利要求1所述的检测血脂的试纸条，其特征在于，所述试纸条还包括第二反应点位，所述第二反应点位固定有甘油激酶、抗干扰剂，其中，抗干扰剂包括碱金属盐、碱土金属盐中的至少一种。
7.根据权利要求6所述的检测血脂的试纸条，其特征在于，所述碱金属盐包括NaCl、KCl；所述碱土金属盐包括MgCl2、CaCl2。
8.根据权利要求3所述的检测血脂的试纸条，其特征在于，所述试纸条还包括第三反应点位，所述第三反应点位用于测量血液中血糖含量。
9.根据权利要求8所述的检测血脂的试纸条，其特征在于，所述第三反应点位固定有过氧化氢酶、过氧化物酶、葡萄糖氧化酶中的至少一种，和/或，
所述试纸条还包括第四反应点位，所述第四反应点位用于测量血液中的高密度脂蛋白胆固醇。
10.一种检测血脂的试纸条的检测方法，其特征在于，采用权利要求1所述的试纸条，将液体试样加入，液体试样与检测血糖的胆固醇酯酶和胆固醇氧化酶反应，产生电流，根据电流大小，分别得出液体试样中血糖和血脂的含量。
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