CN116333145B - 结合活化凝血因子ix的抗体 - Google Patents

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Abstract

本申请提供了结合活化凝血因子IX的抗体或其抗原结合片段，还公开了包含所述抗体或抗原结合片段的药物组合物，以及使用抗体的治疗方法。

Description

结合活化凝血因子IX的抗体
技术领域
本申请属于生物工程领域，具体涉及结合活化凝血因子IX的抗体。
背景技术
“凝血因子IX”或“FIX”是与凝血因子VII、凝血酶原、凝血因子X和蛋白C具有结构相似性的维生素K依赖性凝血因子。FIX在血浆中作为单链酶原循环。通过在Arg145和Arg180处的有限蛋白水解来释放活化肽，发生FIX的激活，生成活化凝血因子IX(FIXa)。FIXa是一种胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶，其通过在凝血过程中产生支持形成适当凝血酶所必需的大多数因子Xa作为tenase复合物的一部分而在止血中发挥关键作用。已有研究表明，FIX的表达量随着年龄的增加而增加，这可能会导致血液黏稠度增高，堵塞血管，容易形成血栓，影响身体健康。因此，寻找一种FIXa活性的抑制剂可能为血栓的预防和治疗提供新的思路。
发明内容
本申请的目的是提供结合活化凝血因子IX(FIX)的抗体或其抗原结合片段，以及包含该抗体或其抗原结合片段作为活性成分的药物制剂，以及使用此类药物制剂作为抗凝血药物的用途。
在第一方面，本申请提供了结合活化凝血因子IX的抗体或其抗原结合片段，其包含轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)，其中所述VH包含如SEQ ID NO:1所示的重链可变区的氨基酸序列中的HCDR1、HCDR2和HCDR3，并且所述VL包含如SEQ ID NO:2所示的轻链可变区的氨基酸序列中的LCDR1、LCDR2和LCDR3。
在一些实施方案中，本申请的结合活化凝血因子IX的抗体或其抗原结合片段包含根据Kabat编号系统的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中：
所述HCDR1包含如SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列或由其组成，
所述HCDR2包含如SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列或由其组成，
所述HCDR3包含如SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列或由其组成，
所述LCDR1包含如SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列或由其组成，
所述LCDR2包含如SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列或由其组成，并且
所述LCDR3包含如SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列或由其组成。
在一些实施方案中，本申请的结合活化凝血因子IX的抗体或其抗原结合片段根据IMGT编号系统的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中：
所述HCDR1包含如SEQ ID NO:18所示的氨基酸序列或由其组成，
所述HCDR2包含如SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列或由其组成，
所述HCDR3包含如SEQ ID NO:22所示的氨基酸序列或由其组成，
所述LCDR1包含如SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列或由其组成，
所述LCDR2包含如SEQ ID NO:27所示的氨基酸序列或由其组成，并且
所述LCDR3包含如SEQ ID NO:29所示的氨基酸序列或由其组成。
在一些实施方案中，本申请的结合活化凝血因子IX的抗体或其抗原结合片段抗体或其抗原结合片段是鼠抗体或其抗原结合片段、嵌合抗体或其抗原结合片段、人源化抗体或其抗原结合片段，或人抗体或其抗原结合片段。
在一些实施方案中，本申请的结合活化凝血因子IX的抗体或其抗原结合片段是鼠抗体或其抗原结合片段。在一些具体的实施方案中，本申请的结合活化凝血因子IX的抗体或其抗原结合片段是鼠抗体或其抗原结合片段，其包含轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)，其中：所述VL包含与SEQ ID NO:2具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的氨基酸序列，并且所述VH包含与SEQ ID NO:1具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的氨基酸序列。在一些具体的实施方案中，本申请的结合活化凝血因子IX的抗体或其抗原结合片段抗体或其抗原结合片段是鼠抗体或其抗原结合片段，其包含轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)，其中所述VL包含如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，并且所述VH包含如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本申请的结合活化凝血因子IX的抗体或其抗原结合片段是选自IgG、IgA、IgM、IgE和IgD的同种型。在一些实施方案中，本申请的结合活化凝血因子IX的抗体或其抗原结合片段是选自IgG1、IgG2、IgG3和IgG4的亚型。在具体的实施方案中，本申请的结合活化凝血因子IX的抗体或其抗原结合片段是IgG4亚型。
在一些实施方案中，本申请的结合活化凝血因子IX的抗原结合片段选自Fab、Fab'、F(ab')2、Fv、scFv、dAb、纳米抗体、Fd和Fd'。
在一些实施方案中，本申请的结合活化凝血因子IX的抗体或其抗原结合片段包含重链恒定区和轻链恒定区。在一些优选的实施方案中，本申请的结合活化凝血因子IX的抗体或其抗原结合片段包含重链恒定区和轻链恒定区，所述重链恒定区是IgG4恒定区，所述轻链恒定区是人κ轻链恒定区。在一些具体的实施方案中，本申请的结合活化凝血因子IX的抗体或其抗原结合片段包含重链恒定区和轻链恒定区，所述重链恒定区是IgG4恒定区，所述轻链恒定区是人κ轻链恒定区，所述重链恒定区包含与SEQ ID NO:31具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的氨基酸序列，和/或所述轻链恒定区包含与SEQID NO:32具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本申请的结合凝血因子IX的抗体或其抗原结合片段包含重链和轻链，其中，所述重链包含与SEQ ID NO:33具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的氨基酸序列；所述轻链包含与SEQ ID NO:34具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本申请的结合活化凝血因子IX的抗体是单克隆抗体。
在一些实施方案中，本申请的结合活化凝血因子IX的抗体是双特异性抗体或多特异性抗体。
在第二方面，本申请提供了包含编码本申请的抗体或其抗原结合片段的核苷酸序列。
在第三方面，本申请提供了载体，其包含本申请的核酸。
在第四方面，本申请提供了宿主细胞，其包含本申请的核酸或载体。
在第五方面，本申请提供了药物组合物，其包含(i)本申请的抗体或其抗原结合片段；和(ii)药学上可接受的载体或赋形剂。
在第六方面，本申请提供了本申请的抗体或其抗原结合片段以及本申请的药物组合物在制备抗凝血药物中的用途。
本申请提供的结合活化凝血因子IX的抗体，能够与活化的凝血因子IX(FIXa)特异性结合，中和FIXa的活性，从而作为FIXa抑制剂(即阻断型抗体)，进而可用于制备抗凝血药物，减少血栓形成。
具体实施方式
通过结合以下实施方案的详细描述，本申请的上述特征和优点及其附加特征和优点将在下文中得到更清楚的理解。此处的实施方案是解释性的，说明性的，并用于普遍理解本申请。实施方案不应解释为限制本申请的范围。
术语和定义
除非本文另有定义，与本申请结合使用的科学和技术术语应具有本申请所属领域的普通技术人员通常理解的含义。本文使用的术语仅用于描述具体实施方案的目的，并不意图限制本申请的范围。
如本申请所用，单数形式“一个”、“一种”和“该”包含复数对象，除非上下文另有明确说明。因此，例如，提及“一种抗体”包含多种抗体等等。
除非另有说明或定义，否则术语“包含”及其变体诸如“包括”和“含有”应理解为意味着包括所述元素或步骤或者元素或步骤的组，但不排除任何其他元素或步骤或元素或步骤的组。
如本申请所用，术语“抗体”是指免疫球蛋白分子，其具有特异性结合特定抗原的能力。抗体通常在每条重链和轻链中包含可变区和恒定区。抗体重链和轻链的可变区包含与抗原相互作用的结合域。抗体的恒定区可介导免疫球蛋白与宿主组织或因子的结合，所述宿主组织或因子包括免疫系统的各种细胞(如效应细胞)和补体系统的组分，如补体激活经典途径中的第一组分C1q。因此，大多数抗体具有重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，它们共同形成与抗原结合的抗体部分。
“轻链可变区”(VL)或“重链可变区”(VH)由间插三个“互补决定区”或“CDR”的“框架”区组成。框架区用于调整CDR，以用于特异性结合抗原表位。CDR包含抗体中主要负责抗原结合的氨基酸残基。从氨基末端到羧基末端，VL和VH结构域都包含以下框架(FR)区和CDR区：FR1，CDR1，FR2，CDR2，FR3，CDR3和FR4。VL结构域的CDR 1、2和3在本文中也分别称为LCDR1、LCDR2和LCDR3；VH结构域的CDR 1、2和3在本文中也分别称为HCDR1、HCDR2和HCDR3。
每个VL和VH结构域的氨基酸分配按照CDR的任何常规定义。常规定义包括Kabat定义(Kabat,Sequences of Proteins of Immunological Interest(National Institutesof Health,Bethesda,MD,1987和1991))；Chothia定义(Chothia&Lesk,J.Mol.Biol.196：901-917,1987；Chothia等人,Nature 342：878-883,1989)；Chothia Kabat CDR的复合，其中CDR-H1是Chothia和Kabat CDR的复合；Oxford Molecular的抗体建模软件所使用的AbM定义；IMGT(ImMunoGeneTics)定义(Lefranc,M.P.等人,Dev.Comp.Immunol.27:55-77(2003))；以及Martin等人的CONTACT定义(万维网bioinfo.org.uk/abs)。Kabat提供了广泛使用的编号惯例(Kabat编号系统)，其中不同重链之间或不同轻链之间的对应残基被赋予相同的编号本申请可以使用根据这些编号系统中的任一种定义的CDR，但是优选的实施方案使用Kabat或IMGT定义的CDR。
本文中的术语“抗体”以最广义使用，并且涵盖多种抗体结构，包括但不限于单克隆抗体、多克隆抗体、多特异性抗体(例如双特异性抗体)和抗体片段，只要它们显示出期望的抗原结合活性。抗体可含有另外的修饰，例如非天然存在的氨基酸、Fc区中的突变、以及糖基化位点的突变。抗体还包括翻译后修饰的抗体、含有抗体的抗原决定簇的融合蛋白以及含有对抗原识别位点的任何其他修饰的免疫球蛋白分子，只要这些抗体表现出预期的生物活性即可。
如本申请所用，术语抗体的“抗原结合片段”是指保持特异性结合抗原(例如活化凝血因子IX)能力的一种或多种抗体片段。已经表明，抗体的抗原结合功能可以由全长抗体的片段来执行。
包含在术语抗体的“抗原结合部分”内的抗原结合片段的实例包括(i)Fab片段，其为由VL、VH、CL和CH1结构域组成的单价片段；(ii)F(ab')2片段，其为二价片段，包含通过铰链区二硫键连接的两个Fab片段；(iii)Fab'片段，其基本上是Fab，但具有部分铰链区(参见，FUNDAMENTAL IMMUNOLOGY(Paul ed.,3.sup.rd ed.1993)；(iv)Fd片段，其由VH和CH1结构域组成；(v)Fd'片段，其具有VH和CH1结构域以及位于CH1结构域的C端的一个或多个半胱氨酸残基；(vi)Fv片段，其由抗体单臂的VL和VH结构域组成；(vii)dAb片段(Ward等人(1989)Nature 341：544-546)，其由VH结构域组成；(viii)单独的互补决定区(CDR)；和(ix)纳米抗体，其为包含单个可变域和两个恒定域的重链可变区。此外，该术语还包括含有一对串联Fd片段(VH-CH1-VH-CH1)的“线性抗体”，其与互补的轻链多肽以及保留抗原结合活性的任何前述片段的修饰版本共同形成抗原结合区。这些抗原结合片段可以使用本领域技术人员已知的常规技术获得，并且以与完整抗体相同的方式筛选片段的效用。此外，该术语还包含“单链Fv”或“scFv”，其包含抗体的VH和VL域，其中这些结构域存在于单条多肽链中。通常，Fv多肽进一步在VH和VL域之间包含多肽接头，该接头使得scFv能够形成用于抗原结合的所需结构。关于scFv的综述，参见Pluckthun，1994，In：The Pharmacology ofMonoclonalAntibodies，Vol.113，Rosenburg and Moore eds.Springer-Verlag，NewYork，pp.269-315。
如本申请所用，术语“结合”或“特异性结合”是指两种分子之间的非随机结合反应，例如在抗体和其靶抗原之间的非随机结合反应。抗体的结合特异性可以基于亲和力和/或亲合力来确定。亲和力由抗原与抗体解离的平衡常数(KD)表示，是抗原决定簇和抗体的抗原结合位点之间的结合强度的量度：KD值越小，抗原决定簇和抗体之间的结合强度越强。或者，亲和力也可以表示为亲和力常数(KA)，其为1/KD。亲合力是抗体与相关抗原之间的结合强度的量度。亲合力涉及抗原决定簇与抗体的抗原结合位点之间的亲和力以及抗体上存在的相关结合位点的数量。
抗体与抗原或抗原决定簇的特异性结合可以通过本身已知的任何合适的方式测定，包括例如斯卡查德分析和/或竞争性结合测定，如放射免疫测定(RIA)、酶免疫测定(EIA)和三明治竞争测定和本领域中本身已知的不同变型。通常，抗体将以10-5至10-12M或更小的解离常数(KD)结合，优选以10-7至10-12M或更小，更优选以10-8至10-12M的解离常数(KD)结合，和/或以至少107M-1，优选至少108M-1，更优选至少109M-1，例如至少1012M-1的结合亲和力结合。通常认为任何大于10-4M的KD值代表非特异性结合。
术语“表位”是指抗原上抗体结合的位点。表位可以由连续氨基酸或通过一种或多种蛋白质的三级折叠而并置的非连续氨基酸形成。由连续氨基酸形成的表位(也称为线性表位)通常在暴露于变性溶剂后保留，而通过三级折叠形成的表位(也称为构象表位)通常在变性溶剂的处理中丢失。表位通常包含处于独特空间构象的至少3个，更通常地至少5个或8-10个氨基酸。表位限定了抗体的最小结合位点，因此是抗体或其抗原结合片段的特异性靶标。
如本申请所用，术语“序列同一性”是指两条序列(氨基酸)对齐后在相同位置具有相同残基的程度。例如，“氨基酸序列与SEQ ID NO:Y是X％相同的”是指该氨基酸序列与SEQID NO:Y的同一性百分比，并被阐述为该氨基酸序列中X％的残基与SEQ ID NO:Y中公开的序列残基相同。通常使用计算机程序进行此类计算。比较和对齐序列对的示例性程序包括ALIGN(Myers和Miller,1988)、FASTA(Pearson和Lipman,1988；Pearson,1990)以及gappedBLAST(Altschul等人,1997)、BLASTP、BLASTN或者GCG(Devereux等人,1984)。
此外，在确定两条氨基酸序列之间的序列同一性的程度时，技术人员可以考虑所谓的“保守性”氨基酸取代，其通常可以描述为氨基酸残基被替换为具有类似化学结构的另一种氨基酸残基的氨基酸取代，其对多肽的功能、活性或其他生物学性质几乎没有影响或基本上没有影响。这种保守性氨基酸取代在本领域中是众所周知的，例如WO 04/037999，GB-A-2 357 768，WO 98/49185，WO 00/46383和WO 01/09300；并且(优选地)这些取代的类型和/或组合可以根据来自WO 04/037999以及WO 98/49185以及其中引用的另外的参考文献的相关教导来选择。
这种保守性取代优选地是以下组(a)到(e)中的一个氨基酸被同组中的另一个氨基酸残基取代的取代：(a)小的脂肪族、非极性或弱极性残基：Ala、Ser、Thr、Pro和Gly；(b)极性、带负电的残基及其(不带电的)酰胺：Asp、Asn、Glu和Gln；(c)极性、带正电的残基：His、Arg和Lys；(d)大的脂肪族、非极性残基：Met、Leu、He、Val和Cys；以及(e)芳香族残基：Phe、Tyr和Trp。
特别优选的保守性取代如下：Ala到Gly或到Ser；Arg到Lys；Asn到Gln或到His；Asp到Glu；Cys到Ser；Gln到Asn；Glu到Asp；Gly到Ala或到Pro；His到Asn或到Gln；Ile到Leu或到Val；Leu到Ile或到Val；Lys到Arg、到Gln或到Glu；Met到Leu、到Tyr或到Ile；Phe到Met、到Leu或到Tyr；Ser到Thr；Thr到Ser；Trp到Tyr；Tyr到Trp；和/或Phe到Val、到Ile或到Leu。
如本申请所用，术语“单克隆抗体”是指从基本同质的抗体群体中获得的抗体。也就是说，除了可能天然发生的少量突变之外，构成群体的每个抗体是相同的。单克隆抗体具有高度特异性，并且针对单一抗原。本文中的术语“单克隆抗体”并不限于通过杂交瘤技术产生的抗体，也不应被解释为要求通过任何特定的方法产生的抗体。
术语“双特异性抗体”在本申请的语境中应理解为具有由不同的抗体序列限定的两个不同抗原结合区的抗体。这可以理解为与不同的靶标结合，但也包括与一个靶标的不同表位结合。
术语“编码序列”意指编码蛋白质或多肽的氨基酸序列的多核苷酸。编码序列的边界一般由开放读码框决定，该开放读码框从起始密码子(如ATG、GTG或TTG)开始并且以终止密码子(如TAA、TAG或TGA)结束。编码序列可以来自基因组DNA，或是人工合成的DNA，或其组合。
由于遗传密码子的简并，若干核酸可以编码具有同一氨基酸序列的多肽。例如，密码子GCA、GCC、GCG和GCU都编码氨基酸丙氨酸。因此，在每个被密码子确定为丙氨酸的位置，所述密码子可以被替换为编码丙氨酸的任意其它密码子，而不改变编码的多肽。本领域的普通技术人员将认识可以对核酸中的密码子(除了AUG，其通常为甲硫氨酸的仅有密码子，以及TGG，其通常为色氨酸的仅有密码子)进行修改，而不改变其编码的蛋白质或多肽的氨基酸序列。因此，可以使用对于目标宿主细胞适合的密码子偏好表来修饰蛋白质的编码序列中的密码子，来得到在特定宿主细胞(例如原核细胞或真核细胞)中的最优表达。各种宿主中的密码子偏好是本领域已知的。
术语“表达”是指通过酶(如RNA聚合酶)的催化的转录将多核苷酸的遗传信息转化为RNA，并通过对核糖体上的mRNA进行翻译将上述遗传信息转化为蛋白或多肽的步骤。在本文中，术语“表达”包括涉及多肽产生的任何步骤，包括但不限于，转录、转录后修饰、翻译、翻译后修饰、以及分泌。
术语“载体”是指可以在宿主细胞中自主复制的载体，其优选为多拷贝载体。如本文所用的术语“载体”能够运送其所连接的另一种核酸的核酸分子。此外，载体通常具有用于选择转化体的抗生素抗性基因等标志物。此外，载体可以具有用于表达引入的基因的启动子和/或终止子。载体可以是例如源自细菌质粒的载体，病毒载体，源自酵母质粒的载体，源自噬菌体的载体，粘粒，噬菌粒等。
术语“表达载体”是指使得目的基因能够在细胞中表达的载体，并通常为包括编码蛋白质或多肽的多核苷酸并且可操作地连接至表达控制序列的直链或环状DNA分子。
可以通过本领域已知的各种方法将核酸例如载体或表达载体递送到原核和真核细胞中。用于将核酸递送到细胞中的方法包括但不限于各种化学，电化学和生物学方法，例如热休克转化，电穿孔法，转染例如脂质体介导的转染，DEAE-Dextran介导的转染或磷酸钙转染等。此外，可以使用例如用氯化钙处理受体细胞以增加其对DNA的通透性的方法，以及从生长阶段的细胞中制备感受态细胞，随后用DNA转化的方法。还可以使用将DNA受体细胞制成原生质体或原生质球(其可以容易地摄取重组DNA)，然后将重组DNA引入DNA受体细胞中的方法。转化方法没有特别限定，并且本领域技术人员可以根据例如使用的宿主细胞和需要转化的载体或表达载体的类型选择合适的转化方法。
如本申请所用，术语“宿主细胞”是指已引入表达载体的细胞。
术语“药学上可接受”是指载体或佐剂与组合物的其他成分相容并且对其接受者没有大量毒害，和/或这些载体或佐剂被批准或可用于包含在对人类肠胃外给药的药物组合物中。
如本申请所用，术语“治疗”、“处理”等，指施用药剂或进行程序，以便获得效果。这些效果可以就完全或部分地预防疾病或其症状而言是预防性的，和/或可以就影响疾病和/或疾病症状的部分或完全治愈而言是治疗性的。如本申请所用，“治疗”可包括治疗哺乳动物，特别是人类的疾病或病症(例如癌症)，并且包括：(a)在对疾病易感而尚未被诊断为患病的受试者中预防该疾病或疾病症状的发生(例如，包括可能与原代疾病相关或由其引起的疾病)；(b)抑制疾病，即阻止其发展；(c)缓解疾病，即导致疾病的消退。治疗可指在治疗或改善或预防癌症方面取得成功的任何指代，包括任何客观或主观参数，例如消除；缓解；减少症状或使疾病病症对患者而言更容易忍受；减慢恶化或衰退速度；或使恶化的终点衰弱减少。症状的治疗或改善基于一个或多个客观或主观参数；包括医生检查的结果。因此，术语“治疗”包括施用本申请公开的抗体或组合物或缀合物，以预防或延迟、缓解或阻止或抑制与疾病(例如癌症)相关的症状或病症的发展。术语“治疗效果”是指受试者中疾病、疾病症状或疾病副作用的减少、消除或预防。
本申请所用的术语“有效量”是指当施用至受试者以治疗疾病时足以实现这种疾病的治疗的量。
如本文所用，术语“受试者”是指期望诊断、医治或治疗的任何哺乳动物受试者。用于治疗目的的“哺乳动物”是指任何归类为哺乳动物的动物，包括人、家畜、以及实验室动物、动物园动物、运动动物或宠物动物，如狗、马、猫、牛、绵羊、山羊、猪、小鼠、大鼠、兔、豚鼠、猴子等。
“凝血因子IX”或“FIX”是与凝血因子VII、凝血酶原、凝血因子X和蛋白C具有结构相似性的维生素K依赖性凝血因子。循环酶原形式由分为四个不同结构域的415个氨基酸组成，这四个结构域包括N-末端富含γ-羧基谷氨酸(Gla)的结构域、两个EGF结构域和C-末端胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶结构域。FIX在血浆中作为单链酶原(SEQ ID NO:35)循环。通过在Arg145和Arg180处的有限蛋白水解来释放活化肽(SEQ ID NO:35的残基146至180)，发生FIX的激活。因此，活化的FIX(FIXa)由SEQ ID NO:35的残基1-145(轻链)和SEQ ID NO:35的残基181-415(重链)组成。
因此，循环FIX分子包含FIX酶原和FIX的活化形式，它们参考SEQ ID NO:35在本文中通常被称为FIX和FIXa。活化的因子IX被称为因子IXa或FIXa。术语“FIX和/或其活化形式(FIXa)”也可被称为“FIX/FIXa”或“FIX(a)”。
FIXa是一种胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶，其通过在凝血过程中产生支持形成适当凝血酶所必需的大多数因子Xa作为tenase复合物的一部分而在止血中发挥关键作用。
FIX在本文中用SEQ ID NO:35表示，SEQ ID NO:35对应于人FIX的Ala148等位基因形式(Anson等人.EMBO J.19843:1053-1060；McGraw等人,Proc Natl Acad SciUSA.198582:2847-2851；Graham等人.Am.J.Hum.Genet.198842:573-580)。
在本申请中，FIX旨在涵盖FIX的所有天然变体，如T148变体(Uniprot IDP00740)。
凝血因子IX(FIX)的氨基酸序列(SEQ ID NO:35)：
FIX在功能变体的上下文中，插入、缺失和/或取代的氨基酸的数量优选不超过亲本氨基酸序列中氨基酸总数的40％，更优选不超过35％，更优选是1％到33％，更优选是5％到30％，更优选是10％到25％，更优选是15％到20％。例如，插入、缺失和/或取代的氨基酸的数量可以是1到20，优选是1到10，更优选是1到7，还更优选是1到5，最优选是1到2。在优选的实施方案中，插入、缺失和/或取代的氨基酸的数量为1、2、3、4、5、6或7。
在一些实施方案中，插入、缺失和/或取代可以在框架(FR)区，例如FR1、FR2、FR3和/或FR4；和/或恒定区，例如CL、CH1、CH2和/或CH3处进行。
在一些实施方案中，一个或多个氨基酸的取代可以是一个或多个氨基酸的保守性取代。这种保守性取代优选地是以下组(a)到(e)中的一个氨基酸被同组中的另一个氨基酸残基取代的取代：(a)小的脂肪族、非极性或弱极性残基：Ala、Ser、Thr、Pro和Gly；(b)极性、带负电的残基及其(不带电的)酰胺：Asp、Asn、Glu和Gln；(c)极性、带正电的残基：His、Arg和Lys；(d)大的脂肪族、非极性残基：Met、Leu、He、Val和Cys；以及(e)芳香族残基：Phe、Tyr和Trp。
特别优选的保守性取代如下：Ala到Gly或到Ser；Arg到Lys；Asn到Gln或到His；Asp到Glu；Cys到Ser；Gln到Asn；Glu到Asp；Gly到Ala或到Pro；His到Asn或到Gln；Ile到Leu或到Val；Leu到Ile或到Val；Lys到Arg、到Gln或到Glu；Met到Leu、到Tyr或到Ile；Phe到Met、到Leu或到Tyr；Ser到Thr；Thr到Ser；Trp到Tyr；Tyr到Trp；和/或Phe到Val、到Ile或到Leu。
根据抗体重链恒定区的氨基酸序列，免疫球蛋白分子可以分为五类(同种型)：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，并可进一步分为不同的亚型，如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1、IgA2等。根据轻链的氨基酸序列，抗体的轻链可以分为lambda(λ)链和kappa(κ)链。本申请公开的抗体可以是上述任何类别或亚型。
在一些实施方案中，Fc区可以是任何同种型，包括但不限于IgG1、IgG2、IgG3和IgG4，并且可包含一种或多种突变或修饰。在一个实施方案中，Fc区是IgG1同种型或由其衍生的，任选地具有一个或多个突变或修饰。在一个实施方案中，Fc区是人IgG1 Fc。
在一个实施方案中，Fc区是效应功能缺陷的。例如，Fc区可以是IgG1同种型，或非IgG1型，例如IgG2、IgG3或IgG4，其已发生突变，使得其介导例如ADCC的效应功能的能力降低甚至消除。这样的突变在Dall'Acqua WF等人,J Immunol.177(2)：1129-1138(2006)和Hezareh M,J Virol.；75(24)：12161-12168(2001)中已有描述。
在一个实施方案中，Fc区包含去除用于Asn连接的糖基化的受体位点的突变或以其他方式被操纵以改变糖基化特性。例如，在IgG1 Fc区中，可以使用N297Q突变以去除Asn连接的糖基化位点。因此，在一个具体实施方案中，Fc区包含具有N297Q突变的IgG1野生型序列。
在进一步的实施方案中，Fc区被糖工程化以减少岩藻糖并因此增强ADCC，例如通过在抗体产生过程中向培养基中添加化合物，如US2009317869中所述或者如van Berkel等人(2010)Biotechnol.Bioeng.105：350中所述，或者通过使用FUT8敲除细胞,例如Yamane-Ohnuki等人(2004)Biotechnol.Bioeng 87：614中所述。或者，可以使用等人(1999)Nature Biotech 17：176描述的方法来优化ADCC。在另一个实施方案中，Fc区被改造以增强补体激活，例如在Natsume等人(2009)Cancer Sci.100：2411中所述。
在又一方面，本申请提供了核酸，其包含编码本申请公开的抗体或其抗原结合片段的核苷酸序列。
在另一方面，本申请提供了包含本申请公开的核酸的载体。
任何载体都可以适用于本申请。合适的载体包括被设计用于繁殖和扩增或用于表达或两者的载体，例如质粒和病毒。重组表达载体可以是任何合适的重组表达载体。
在一些实施方案中，载体是病毒载体。在一些实施方案中，载体是逆转录病毒载体、DNA载体、鼠白血病病毒载体、SFG载体、质粒、RNA载体、腺病毒载体、杆状病毒载体、Epstein Barr病毒载体、乳多空病毒载体、痘苗病毒载体、单纯疱疹病毒载体、腺病毒相关载体(AAV)、慢病毒载体或其任意组合。合适的示例性载体包括例如pGAR、pBABE-puro、pBABE-neo largeTcDNA、pBABE-hygro-hTERT、pMKO.1GFP、MSCV-IRES-GFP、pMSCV PIG(PuroIRES GFP空质粒)、pMSCV-loxp-dsRed-loxp-eGFP-Puro-WPRE、MSCV IRES萤光素酶、pMIG、MDH1-PGK-GFP_2.0、TtRMPVIR、pMSCV-IRES-mCherry FP、pRetroX GFP T2A Cre、pRXTN、pLncEXP和pLXIN-Luc。
在一些实施方案中，载体是质粒载体。例如，质粒载体可以选自pUC系列(Fermentas Life Sciences,Glen Burnie,Md.)、pBluescript系列(Stratagene,LaJolla,CA)、pET系列(Novagen,Madison,Wis.)、pGEX系列(Pharmacia Biotech，Uppsala，瑞典)和pEX系列(Clontech，Palo Alto，Calif.)。也可以使用噬菌体载体，例如λGT10、λGT11、λZapII(Stratagene)、λEMBL4和λNM1149。
可用于本申请的植物表达载体的实例包括pBI01、pBI101.2、pBI101.3、pBI121和pBIN19(Clontech)。可用于本申请的动物表达载体的实例包括pcDNA、pEUK-Cl、pMAM和pMAMneo(Clontech)。
重组表达载体可以使用标准重组DNA技术制备，例如Sambrook等人,MolecularCloning：A Laboratory Manual,第三版,Cold Spring Harbor Press,Cold SpringHarbor,N.Y.2001；以及Ausubel等人,Current Protocols in Molecular Biology,GreenePublishing Associates and John Wiley&Sons,NY,1994中所述。可以制备环形或线性的表达载体构建体以包含在原核或真核宿主细胞中具有功能的复制系统。复制系统可以衍生自例如COlEl、2μ质粒、λ、SV40、牛乳头瘤病毒等。
在另一方面，本申请提供了包含本申请公开的核酸或本申请公开的载体的宿主细胞。
任何细胞都可以用作本申请的核酸或载体的宿主细胞。在一些实施方案中，细胞可以是原核细胞、真菌细胞、酵母细胞或高等真核细胞如哺乳动物细胞。合适的原核细胞包括但不限于真细菌，例如革兰氏阴性或革兰氏阳性生物体，例如肠杆菌科(Enterobactehaceae)，例如埃希氏杆菌属(Escherichia)，例如大肠杆菌(E.coli)；肠杆菌属(Enterobacter)；欧文氏菌属(Erwinia)；克雷伯氏菌属(Klebsiella)；变形杆菌(Proteus)；沙门氏菌属(Salmonella)，例如鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)；沙雷氏菌属(Serratia)，例如粘质沙雷氏菌(Serratia marcescans)；和志贺氏菌属(Shigella)；芽孢杆菌属(Bacilli)，例如枯草芽孢杆菌(B.subtilis)和地衣芽孢杆菌(B.licheniformis)；假单胞菌(Pseudomonas)，如铜绿假单胞菌(P.aeruginosa)；和链霉菌(Streptomyces)。在一些实施方案中，细胞是人细胞。在一些实施方案中，细胞是免疫细胞。在一些实施方案中，宿主细胞包括例如CHO细胞，例如CHOS细胞和CHO-K1细胞，或HEK293细胞，例如HEK293A、HEK293T和HEK293FS。
在又一方面，本申请提供了药物组合物，其包含(i)本申请公开的抗体或其抗原结合片段；和(ii)药学上可接受的载体或赋形剂。
在一些实施方案中，与本申请公开的组合物一起使用的载体或赋形剂包括但不限于马来酸、酒石酸、乳酸、柠檬酸、乙酸、碳酸氢钠、磷酸钠、组氨酸、甘氨酸、氯化钠、氯化钾、氯化钙、氯化锌、水、右旋糖、N-甲基吡咯烷酮、二甲亚砜、N,N-二甲基乙酰胺、乙醇、丙二醇、聚乙二醇、二甘醇单乙醚和表面活性剂聚氧乙烯-脱水山梨糖醇单油酸酯。
在本申请公开的药物组合物的一些实施方案中，药物组合物进一步包含第二治疗剂。在一些实施方案中，第二治疗剂可以选自抗体、化学治疗剂和小分子药物。
在又一方面，本申请提供了缀合物，其包含本申请公开的抗体或其抗原结合片段，以及与其缀合的化学部分。在本申请公开的缀合物的一些实施方案中，化学部分选自治疗剂和可检测部分。
在一些实施方案中，可检测部分可以选自生物素、链霉抗生物素蛋白、酶或其催化活性片段、放射性核素、纳米颗粒、顺磁性金属离子或荧光、磷光，或化学发光分子。用于诊断目的的可检测部分包括例如荧光标记、放射性标记、酶、核酸探针和造影剂。
在另一方面，本申请提供了预防和/或治疗血栓类疾病的方法，其包括向受试者施用有效量的本文所公开的抗体或其抗原结合片段，或本文所公开的包含或编码本文所公开的抗体或其抗原结合片段的免疫缀合物、药物组合物、核酸、载体或宿主细胞。
在一些实施方案中，所述血栓类疾病包括但不限于手术后(如骨科手术)静脉栓塞(如深静脉血栓形成和肺栓塞)的预防，缺血性脑梗的预防或急性期治疗、慢性动脉闭塞症(如血栓闭塞性脉管炎、闭塞性动脉硬化症等)的治疗等。
在一些实施方案中，本文所公开的抗体或其抗原结合片段，或本文所公开的包含或编码本文所公开的抗体或其抗原结合片段的免疫缀合物、药物组合物、核酸、载体或宿主细胞通过静脉内或皮下施用。
在一些实施方案中，施用于受试者的剂量可随实施方案、所用药物、给药方法以及被治疗的部位和受试者而变化。然而，剂量应足以提供治疗反应。临床医生可以确定给予人或其他受试者以治疗医学病症的有效量。治疗有效所需的精确量可取决于许多因素，例如抗体的活性和给药途径。
本文所述的抗体、组合物或缀合物的剂量可以在合适的时间段内一次性或以一系列亚剂量的形式施用给哺乳动物，例如根据需要，每天、每半周、每周、每两周、每半月、每两月、每半年或每年施用一次。包含有效量的抗体、组合物或缀合物的剂量单位可以以单日剂量给药，或者总日剂量可以根据需要以每日给药的两个、三个、四个或更多个分剂量给药。
合适的给药方式可由医生选择。给药途径可以是肠胃外给药，例如通过注射给药、经鼻给药、经肺给药或经皮给药。可以通过静脉内注射、肌内注射、腹膜内注射、皮下注射进行全身或局部给药。在一些实施方案中，选择抗体、组合物或缀合物用于肠胃外递送、吸入或通过消化道递送，例如口服。给药剂量和方法可以根据受试者的重量、年龄、条件等而变化，并且可以适当地选择。
在一些实施方案中，该方法还包括向受试者施用第二治疗剂。在某些实施方案中，在施用第二治疗剂之前、基本上同时或之后施用结合剂。
在一些实施方案中，第二治疗剂选自抗体、化学治疗剂和小分子药物。
在又一方面，本申请提供了一种药物包装或试剂盒，其包含一个或多个容器，该容器填充有本申请所述的药物组合物的一种或多种成分，例如本申请公开的抗体或抗原结合片段。任选地，与此类容器相关联的可以是由管理药品或生物产品的制造、使用或销售的政府机构规定的形式的通知，该通知反映了由政府机构批准制造、使用或销售以用于人类施用。
在一个具体实施方案中，该试剂盒包含含有本申请公开的抗体或抗原结合片段的第一容器。在一个具体的实施方案中，该试剂盒包含第一容器，该容器是含有在真空下作为冻干无菌粉末的抗体或抗原结合片段的小瓶，并且该试剂盒还包含含有药学上可接受的流体的第二容器。
在一个具体的实施方案中，本申请提供了包含本申请公开的抗体或抗原结合片段的注射装置。在一个具体实施方案中，注射装置包含无菌溶液形式的抗体。在一个具体实施方案中，注射装置是注射器。
在另一方面，本申请提供了本申请公开的抗体或其抗原结合片段、本申请公开的药物组合物或本申请公开的缀合物在制备抗凝血药物中的用途。
在一些实施方案中，本申请提供的抗凝血药物可用于抑制血栓的形成，从而可用于治疗和/或预防血栓类疾病。
在一些实施方案中，所述血栓类疾病包括但不限于手术后(如骨科手术)静脉栓塞(如深静脉血栓形成和肺栓塞)的预防，缺血性脑梗的预防或急性期治疗、慢性动脉闭塞症(如血栓闭塞性脉管炎、闭塞性动脉硬化症等)的治疗等。
以下将结合实施例进一步说明本申请的内容。应当理解以下实施例仅是说明性的，而不应被认为是对本申请范围的限制。
实施例1.FIXa单克隆抗体杂交瘤筛选
小鼠免疫：首次免疫时6周龄雄性Balb/c小鼠，2只/组。首次免疫和第二次免疫：FIXa抗原(HFIXa 1080，Enzyme Research Laboratories)按说明稀释，将稀释好的抗原与混匀后的快速免疫佐剂(QuickAntibody-Mouse5W，KX0210041，北京博奥龙免疫技术)按体积比1:1迅速混匀，免疫剂量为40μg FIX/只，后腿小腿肌肉注射100μl/只。加强免疫：用PBS稀释FIX抗原，免疫剂量为100μg/只，腹腔注射100μl/只。
细胞融合及亚克隆：
获得饲养层细胞：融合前一天取一只健康的未经免疫的ICR小鼠，颈脱臼处死，体表消毒和固定后，从大腿上剪开皮肤，暴露腹膜，酒精棉球消毒腹膜。用5ml注射器，12#针头，注射5ml HAT培养基到腹腔，右手固定注射器，左手持酒精棉球轻轻按摩腹部，抽回腹腔内液体，注入已准备好的容器中。将抽取的细胞悬液加入50ml HAT培养基(含1％双抗、10％FBS)中，铺96孔板，每孔50μl(按10块板计算)，培养至第二天。
饲养层细胞计数：注射5ml HAT培养基到腹腔，吸回约3ml加入到45ml HAT培养基中。
骨髓瘤细胞SP2/0的准备：将骨髓瘤细胞SP2/0接种到含有DMEM+10％胎牛血清的T25方瓶中37℃静置培养用于复苏。状态良好后进行传代扩增。密度至80％左右时进行传代。弃掉大部分原培养上清，加入新鲜培养基，将细胞直接吹下无需消化，进行1次分离2次扩大培养。若生长状态良好，密度长至80％时扩大培养。至细胞融合时扩增至8～10瓶。融合当天，选择生长状态良好的SP2/0细胞，密度长至80％时弃上清，共8小瓶，用30ml不含血清含链霉-青霉素的DMEM培养基将细胞轻轻吹下。
获得脾细胞悬液：取第一步中加强免疫后的小鼠，摘除眼球采血分离血清，并颈脱位将小鼠致死，用75％酒精浸泡，消毒体表5min，随即放入超净台内小鼠解剖板上，用注射针头固定四肢。无菌打开腹腔取出脾脏，放入含有链霉-青霉素的基础培养基的平皿中，用镊子和剪刀仔细去除周围附着的结缔组织。随后将脾脏转移到另一个盛有少量基础培养基的平皿中。以弯头针头压住脾脏，用小针头在脾脏上扎孔，并用弯头针头挤压，使脾细胞充分释放，制成脾细胞悬液。
融合：将上述制备的骨髓瘤细胞与脾细胞(细胞数比例1:5-1:10)混合于一支50ml带盖的离心管中，1000rpm离心10min，倒掉上清并充分弃净，以免影响PEG的作用。将融合管置于手掌中，轻轻振荡底部，使两种细胞充分混匀。用吸管将1ml 37℃预热的PEG在45-60s内匀速滴加到融合管中，边加边轻轻摇匀(每2秒滴一滴)。立即滴加37℃预热的基础培养基，使PEG稀释而失去作用，具体做法是用吸管在第一分钟内加1ml预热的基础培养基(每3秒滴一滴)，第二分钟内加2ml(每3秒滴2滴)，第三分钟内加8ml，37℃静置10min，1000rpm离心10min，弃上清。加入5ml的HAT培养基，轻轻悬浮沉淀细胞，最后补加HAT至200ml左右。分装于已铺巨噬细胞的96孔细胞培养板中，180μl/孔，然后将培养板置37℃，5％CO2培养箱培养。待其细胞培养上清变黄或克隆分布至孔底面积的1/10以上时，吸取适量细胞上清进行抗体滴度检测。筛选出抗体滴度较好的杂交瘤细胞命名为2E11。
实施例2.抗体的中和检测
样品制备：将杂交瘤细胞2E11在DMEM+3％FBS培养基，37℃，5％ CO2下培养细胞4天，收上清，经Protein A纯化后溶于1×PBS，获得待测样品，分光光度计测量浓度(821.6μg/ml)。
将磷脂8μl、人FIXa(HFIXa 1080，稀释不同浓度)20μl、25μl CaCl2，以及待测样品(或其稀释样品)12.5μl，加入到酶标板混匀，37℃反应1h；加入人FX(HFIX1010，EnzymeResearch Laboratories，0.92IU/mL)20μl，FVIII(任捷，惠氏制药有限公司)
12.5μl,凝血酶(sigma)(用稀释液稀释至1IU/100μl)1μl，37℃反应10min，加入FXa底物S-2222(S820316，diapharma)50μl，反应5min，酶标仪检测405nm/490nm处吸光度(OD)值，OD值结果反映FIXa活性。
本实施例中稀释液均采用SP FVIII试剂盒(Chromogenix，货号：82408663)的Buffer working-solution。/>
以稀释液代替待测样品作为阴性对照；以稀释液代替待测样品和FVIII作为空白对照。抗体中和结果如表1所示。
表1.2E11杂交瘤上清的中和检测结果
“-”代表未进行实验
从表1的结果可以看出，在不同FIXa含量、不同FVIII含量的情况下，本申请的抗体均能够有效抑制FIXa的活性，其阻断作用随抗体浓度升高而增加。
实施例3.抗体序列与亚型检测
1.从小鼠杂交瘤细胞中制备编码抗体可变区的DNA片段
采用Trizol法从产生抗FIXa抗体的杂交瘤2E11提取总RNA，30-50μl DEPC处理水溶解RNA。以提取的1-2μg RNA为模板，使用M-MLV逆转录酶(NEB)，逆转录合成单链cDNA。以逆转录获得的单链cDNA为模板，采用5’RACE方法扩增得到的抗体轻、重链可变区基因，并进行测序。
凝血因子IX的单克隆抗体2E11的重链、轻链、重链可变区和轻链可变区的序列如表2所示。
表2.杂交瘤2E11产生的抗FIXa抗体的重链和轻链可变区的氨基酸序列
/>
表3.杂交瘤2E11产生的抗FIX抗体的重链和轻链CDR的氨基酸序列(根据Kabat和IMGT的CDR编号系统)
/>
酶联免疫吸附法测定获得鼠源抗体为IgG2a亚型。
实施例4.亲和常数测定
制备样品：将杂交瘤细胞2E11在DMEM+3％FBS培养基，37℃，5％ CO2下培养细胞4天，收上清，经Protein A纯化后溶于1×PBS，获得待测样品，分光光度计测量浓度。
用非竞争ELISA法测定抗FIXa抗体功能性亲和常数，非竞争ELISA法的步骤如下：1)包被液[Na2CO3 0.795g，NaHCO3 1.465g，KH2PO4 0.125g溶于500mL纯化水中，pH 9.6]稀释FIXa抗原，包被浓度1000、500、250、125ng/mL，空白对照为包被液，4℃包被过夜；2)PBST洗4遍；3)含4％ BSA的PBS每孔250μl，37℃，封闭2h；4)2E11杂交瘤上清稀释从100ng/mL两倍稀释，50μl/孔，37℃，1h；5)PBST洗4遍；6)二抗(羊抗鼠IgG-HRP)用含2％BSA或者1％BSA的PBS稀释10000倍，50μl/孔，37℃，0.5h；7)PBST洗6遍；8)TMB100μl，显色10min，50μl 2M H2SO4终止反应。
亲和结果计算方案：
1)OD100％的计算：OD100％即抗体平台期。单价抗体情况下，抗原和抗体以1:1形式结合。抗体浓度极大时，以致固相载体上的抗原全部与抗体发生结合，即抗体浓度等于包被抗原浓度。代入拟合方程，求得的值为OD100％。
2)OD50％计算及换算单位：OD50％＝OD100％/2；OD50％此时单位是ng/ml，要换算成*10^-6g/L，换算过程如下：杂交瘤上清抗FIXa抗体150KDa，摩尔质量1.5*10^5g/mol，抗体浓度(mol/L)＝(g/L)/(g/mol)。
3)亲和常数计算：代入公式K＝(n-1)/2(nAb’-Ab)，计算亲和常数(L/mol)，式中Ab和Ab’分别表示当抗原浓度为Ag和Ag’时，产生半数吸光值的抗体浓度(moL/L)，n＝Ag/Ag’。然后两两比较，当n＝2时，可得3个K值，n＝4时可得2个K值，n＝8时可得1个K值，求出6个K值的均数作为最终结果，求得杂交瘤2E11的抗体的亲和力常数为3.4×10^9L/mol。

Claims (20)

1.结合活化凝血因子IX的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)，其中：
其中所述VH包含根据Kabat编号系统的HCDR 1、HCDR2和HCDR3，且所述VL包含根据Kabat编号系统的LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中：
所述HCDR1由SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列组成，
所述HCDR2由SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列组成，
所述HCDR3由SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列组成，
所述LCDR1由SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列组成，
所述LCDR2由SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列组成，并且
所述LCDR3由SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列组成；
或者
其中所述VH包含根据IMGT编号系统的HCDR 1、HCDR2和HCDR3，且所述VL包含根据IMGT编号系统的LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中：
所述HCDR1由SEQ ID NO:18所示的氨基酸序列组成，
所述HCDR2由SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列组成，
所述HCDR3由SEQ ID NO:22所示的氨基酸序列组成，
所述LCDR1由SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列组成，
所述LCDR2由SEQ ID NO:27所示的氨基酸序列组成，并且
所述LCDR3由SEQ ID NO:29所示的氨基酸序列组成。
2.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段是鼠抗体或其抗原结合片段、嵌合抗体或其抗原结合片段，或人源化抗体或其抗原结合片段。
3.根据权利要求2所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段是鼠抗体或其抗原结合片段，其中：
所述VL由与SEQ ID NO:2具有至少80％序列同一性的氨基酸序列组成，并且所述VH由与SEQ ID NO:1具有至少80％序列同一性的氨基酸序列组成。
4.根据权利要求3所述的抗体或其抗原结合片段，其中：
所述VL由SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列组成，并且所述VH由SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列组成。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体是选自IgG、IgA、IgM、IgE和IgD的同种型。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体是选自IgG1、IgG2、IgG3和IgG4的亚型。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗原结合片段选自Fab、Fab'、F(ab')2、Fv和scFv。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含重链恒定区和轻链恒定区。
9.根据权利要求8所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链恒定区是IgG4恒定区，和所述轻链恒定区是人κ轻链恒定区。
10.根据权利要求8所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链恒定区由与SEQ IDNO:31具有至少80％序列同一性的氨基酸序列组成，和所述轻链恒定区由与SEQ ID NO:32具有至少80％序列同一性的氨基酸序列组成。
11.根据权利要求10所述的抗体或其抗原结合片段，所述重链恒定区由SEQ ID NO:31所示的氨基酸序列组成，和所述轻链恒定区由SEQ ID NO:32所示的氨基酸序列组成。
12.根据权利要求1至11中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，所述重链由与SEQ IDNO:33具有至少80％序列同一性的氨基酸序列组成，和所述轻链由与SEQ ID NO:34具有至少80％序列同一性的氨基酸序列组成。
13.根据权利要求12所述的抗体或其抗原结合片段，所述重链由SEQ ID NO:33所示的氨基酸序列组成，和所述轻链由SEQ ID NO:34所示的氨基酸序列组成。
14.根据权利要求1至13中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体为单克隆抗体。
15.根据权利要求1至13中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体为双特异性抗体或多特异性抗体。
16.核酸，其包含编码根据权利要求1至15中任一项所述的抗体或其抗原结合片段的核苷酸序列。
17.载体，其包含根据权利要求16所述的核酸。
18.宿主细胞，其包含根据权利要求16所述的核酸或根据权利要求17所述的载体。
19.药物组合物，其包含(i)根据权利要求1至15中任一项所述的抗体或其抗原结合片段；和(ii)药学上可接受的载体或赋形剂。
20.根据权利要求1至15中任一项所述的抗体或其抗原结合片段或根据权利要求19所述的药物组合物在制备抗凝血药物中的用途。
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