CN116327630B - 一种大鲵肽复合液晶乳液制备及应用 - Google Patents
一种大鲵肽复合液晶乳液制备及应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种大鲵肽复合液晶乳液，其原料按质量百分比包括：甘油3‑5％，丁二醇3‑5％，依克多因1‑3％，透明质酸钠0.05‑0.15％，卡波姆0.13‑0.23％，尿囊素0.1‑0.3％，乳化剂4‑5％，大鲵油2‑4％，乳木果油4‑6％，聚二甲基硅氧烷0.5‑1.5％、聚二甲基硅氧烷醇1‑1.4％，己二醇0.3‑0.7％，对羟基苯乙酮0.4‑0.6％，大鲵肽0.03‑0.06％，余量为去离子水。本发明公开了上述大鲵肽复合液晶乳液的两种制备方法。本发明公开了上述大鲵肽复合液晶乳液的应用。
Description
技术领域
本发明涉及护肤品技术领域，尤其涉及一种大鲵肽复合液晶乳液及其制备方法和应用。
背景技术
大鲵是我国特有的珍稀特产，属国家二类保护动物，目前主要分布于长江中上游、珠江中上游及汉水上游的溪流中，目前大鲵年繁殖能力已达60万尾。随着养殖规模的发展，大鲵资源的深加工利用成为一个关系大鲵产业持续发展的紧迫课题。
大鲵肽，是大鲵蛋白经蛋白酶水解后获得的低分子量产物。由于大鲵的肌肉中含有丰富的蛋白质、氨基酸及微量元素等，因此对大鲵肌肉蛋白进行深加工，即以大鲵的肌肉、皮肤、血液为原料，通过酶解、分离等技术，制成易于吸收的大鲵生物活性肽，具有抗炎、抗紫外、抗氧化活性，能够改善皮肤光老化情况，而且安全性高，无毒副作用。
依克多因，即2-甲基-1,4,5,6,-四氢嘧啶-4-羧酸，来源于一种极端嗜盐菌体内，是一种小分子氨基酸衍生物，其独特的分子结构使其具有很强的水分子络合能力，能够使细胞内的游离水结构化，增强肌肤的锁水能力；同时能有效提升皮肤细胞的免疫防护功能，增加细胞修复能力，使皮肤能有效对抗微生物和细菌的入侵，有着良好的肌肤屏障修复效果。
透明质酸钠，是一种广泛存在于人体内的生理活性物质，由葡萄糖醛酸和乙酰氨基己糖组成双糖单位聚合而成的一种高分子质量的直链黏多糖。外用透明质酸钠可通过水合作用改变皮肤角质层结构以及细胞表面受体介导的主动运输，达到传导和储留作用，促进表皮细胞增殖，刺激真皮层中的成纤维细胞形成胶原，改善皮肤弹性、减少皱纹，与依克多因联用可达到长效保湿的目的。
尿囊素，是一种天然、安全、无毒的咪唑类杂环化合物，具有保湿、促进伤口愈合、祛斑的作用。
将大鲵肽/依克多因/透明质酸钠/尿囊素作为活性成分组合物添加到化妆品中，为消费者提供一种具有抗炎、保湿、美白抗衰、肌肤屏障修复功能的功效化妆品，满足广大消费者的需求，还未见报道。
发明内容
本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺点，而提出的一种大鲵肽复合液晶乳液及其制备方法和应用。
一种大鲵肽复合液晶乳液，其原料按质量百分比包括：甘油3-5％，丁二醇3-5％，依克多因1-3％，透明质酸钠0.05-0.15％，卡波姆0.13-0.23％，尿囊素0.1-0.3％，乳化剂4-5％，大鲵油2-4％，乳木果油4-6％，聚二甲基硅氧烷0.5-1.5％、聚二甲基硅氧烷醇1-1.4％，己二醇0.3-0.7％，对羟基苯乙酮0.4-0.6％，大鲵肽0.03-0.06％，余量为去离子水。
优选地，乳化剂包括：液晶乳化剂，所述液晶乳化剂包含卵磷脂类液晶乳化剂、蔗糖酯类乳化剂、糖苷类乳化剂、橄榄酯类乳化剂和高级脂肪醇类乳化剂中的一种或几种。
优选地，乳化剂还包括：月桂基缩水甘油醚，月桂基缩水甘油醚与液晶乳化剂的质量比为0.35-0.65：3.35-4.65。
上述大鲵肽复合液晶乳液的制备方法，包括以下步骤：
(1)将甘油、丁二醇、依克多因、透明质酸钠、尿囊素、卡波姆加入去离子水中，加热溶解均匀得到A相物料；
(2)将乳化剂、大鲵油、乳木果油升温加热搅拌至全部溶解得到B相物料；
(3)搅拌下将B相物料加入A相物料，均质；再加入聚二甲基硅氧烷和聚二甲基硅氧烷醇的混合物，均质得到混合物料；
(4)将混合物料搅拌降温，向其中加入大鲵肽、己二醇和对羟基苯乙酮，搅拌至常温，补足水分。
优选地，步骤(1)中，加热至75-80℃。
另一种大鲵肽复合液晶乳液的制备方法，包括以下步骤：
I、将大鲵肽加入溶剂中，调节体系pH值为7.2-8，40-50℃搅拌5-15min，滴加月桂基缩水甘油醚，搅拌1-2h，加入依克多因，旋转蒸发除去溶剂，加入油脂中搅拌，再加入去离子水搅拌10-20min，调节体系pH呈中性，得到大鲵肽复配依克多因；
所用油脂为饱和肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸异辛酯、辛酸/癸酸甘油三酯、角鲨烷、蓖麻油中至少一种；油脂与依克多因的质量比为2.5-3.5：1-3；
II、将甘油、丁二醇、透明质酸钠、尿囊素、卡波姆加入去离子水中，加热溶解均匀得到A相物料；
III、将液晶乳化剂、大鲵油、乳木果油升温加热搅拌至全部溶解得到B相物料；
IV、搅拌下将B相物料加入A相物料，均质；再加入聚二甲基硅氧烷和聚二甲基硅氧烷醇的混合物，均质得到混合物料；
V、将混合物料搅拌降温，向其中加入大鲵肽复配依克多因、己二醇和对羟基苯乙酮，搅拌至常温，补足水分。
步骤I中，月桂基缩水甘油醚的环氧基与大鲵肽的端氨基在碱性环境中结合，从而将月桂基缩水甘油醚引入至大鲵肽中，不仅保留了大鲵肽的分子特征，而且与依克多因间互溶性好亲和性极高；而依克多因分子上的活性羧基可与上述产物静电结合并包覆在大鲵肽周围，更易于渗透到真皮中，达到协同增效的效果，利用其结合水分子特性，促进代谢物和色素排出，大大延长保湿时限，达到改善皮肤质地的效果。同时申请人通过多次试验发现，所得大鲵肽复配依克多因可进一步增强对黑色素的抑制率，促使HaCaT细胞快速生长，而这种增强程度是简单添加大鲵肽与依克多因所不具有的。
优选地，步骤I中，溶剂为质量分数为40-60％的丙二醇溶液。
优选地，步骤I中，旋转蒸发温度为58-62℃。
优选地，步骤I中，加入去离子水搅拌后采用质量分数为2-4％的三乙醇胺溶液调节体系pH呈中性。
上述大鲵肽复合液晶乳液作为化妆品或者护肤品的应用。
本发明的技术效果如下所示：
(1)本发明不仅肤感清爽不油腻，易吸收；有良好的抗炎、保湿和屏障修复作用；而且可有效缩小毛孔，使用后肌肤亮度提升，美白效果好，同时对黑色素抑制率好，美白祛斑效果显著。
(2)本发明采用大鲵肽与依克多因复配，不仅可围绕着细胞、酶、蛋白质和其他生物分子形成滋养性保护层，并能够有效清除自由基，因此可应用到食品、药品和化妆品领域中。
(3)本发明将大鲵肽与依克多因、透明质酸钠、尿囊素复配作为活性成分，对HaCaT细胞增殖均没有不良影响，并可促使成纤维细胞和胶原纤维的形成，真皮下可见新生毛细血管生成，多量毛囊数量减少，有效减轻皮肤炎症、痤疮、皮肤敏感等。
(4)本发明可用于具有抗炎、保湿、美白抗衰、肌肤屏障修复功能的功效化妆品，满足广大消费者的需求。
附图说明
图1为实施例3所得大鲵肽复合液晶乳液的偏光显微镜照片。
图2为实施例3所得大鲵肽复合液晶乳液的偏光显微镜照片。
图3为空白组、模型组、阳性对照组和实施例3组裸鼠皮肤的HE染色切片照片；其中，a为空白组，b为模型组，c为阳性对照组，d为实施例3组。
图4为模型组、阳性对照组和实施例3组裸鼠皮肤在涂抹后不同时间点的照片，A组比例尺为500μm，B组比例尺为100μm；其中，a为模型组，b为阳性对照组，c为实施例3组。
图5为志愿者使用实施例3所得大鲵肽复合液晶乳液4周前后VISIA图像对比图；其中，a为使用前VISIA图像，b为使用4周后VISIA图像。
图6为志愿者使用实施例3所得大鲵肽复合液晶乳液4周前后毛孔分析对比图；其中，a为使用前照片，b为使用4周后照片，c和d依次为a、b选中区域的局部放大图。
图7为采用实施例3、实施例6、对比例1和对比例2所得复合液晶乳液涂抹后不同时间皮肤角质层含水量的变化曲线。
图8为采用实施例3、实施例6、对比例1和对比例2所得复合液晶乳液涂抹后不同时间经皮水分散失量的变化曲线。
图9为实施例3、实施例6、对比例1和对比例2所得复合液晶乳液和阳性对照对黑色素抑制率对比图。
图10为实施例3、实施例6、对比例1和对比例2所得复合液晶乳液对HaCaT细胞增殖的影响对比图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步解说。
实施例1
一种大鲵肽复合液晶乳液，其原料按质量百分比包括：甘油3％，丁二醇5％，依克多因1％，透明质酸钠0.15％，卡波姆0.13％，尿囊素0.3％，卵磷脂类液晶乳化剂4％，大鲵油4％，乳木果油4％，聚二甲基硅氧烷(100cs)1.5％，聚二甲基硅氧烷醇(PMX-1501)1％，己二醇0.7％，对羟基苯乙酮0.4％，大鲵肽0.06％，余量为去离子水。
上述大鲵肽复合液晶乳液的制备方法，包括以下步骤：
(1)将甘油、丁二醇、依克多因、透明质酸钠、尿囊素、卡波姆加入去离子水中，加热至80℃溶解均匀得到A相物料；
(2)将卵磷脂类液晶乳化剂、大鲵油、乳木果油升温加热搅拌至全部溶解得到B相物料；
(3)搅拌下将B相物料加入A相物料，均质；再加入聚二甲基硅氧烷和聚二甲基硅氧烷醇的混合物，均质得到混合物料；
(4)将混合物料搅拌降温，向其中加入大鲵肽、己二醇和对羟基苯乙酮，搅拌至常温，补足水分。
实施例2
一种大鲵肽复合液晶乳液，其原料按质量百分比包括：甘油5％，丁二醇3％，依克多因3％，透明质酸钠0.05％，卡波姆0.23％，尿囊素0.1％，橄榄酯类乳化剂5％，大鲵油2％，乳木果油6％，聚二甲基硅氧烷(100cs)0.5％，聚二甲基硅氧烷醇(PMX-1501)1.4％，己二醇0.3％，对羟基苯乙酮0.6％，大鲵肽0.03％，余量为去离子水。
上述大鲵肽复合液晶乳液的制备方法，包括以下步骤：
(1)将甘油、丁二醇、依克多因、透明质酸钠、尿囊素、卡波姆加入去离子水中，加热至75℃溶解均匀得到A相物料；
(2)将橄榄酯类乳化剂、大鲵油、乳木果油升温加热搅拌至全部溶解得到B相物料；
(3)搅拌下将B相物料加入A相物料，均质；再加入聚二甲基硅氧烷和聚二甲基硅氧烷醇的混合物，均质得到混合物料；
(4)将混合物料搅拌降温，向其中加入大鲵肽、己二醇和对羟基苯乙酮，搅拌至常温，补足水分。
实施例3
一种大鲵肽复合液晶乳液，其原料按质量百分比包括：甘油4％，丁二醇4％，依克多因2％，透明质酸钠0.1％，卡波姆0.18％，尿囊素0.2％，糖苷类乳化剂4％，大鲵油3％，乳木果油5％，聚二甲基硅氧烷(100cs)1％，聚二甲基硅氧烷醇(PMX-1501)1.2％，己二醇0.5％，对羟基苯乙酮0.5％，大鲵肽0.04％，余量为去离子水。
上述大鲵肽复合液晶乳液的制备方法，包括以下步骤：
(1)将甘油、丁二醇、依克多因、透明质酸钠、尿囊素、卡波姆加入去离子水中，加热至77℃溶解均匀得到A相物料；
(2)将糖苷类乳化剂、大鲵油、乳木果油升温加热搅拌至全部溶解得到B相物料；
(3)搅拌下将B相物料加入A相物料，均质；再加入聚二甲基硅氧烷和聚二甲基硅氧烷醇的混合物，均质得到混合物料；
(4)将混合物料搅拌降温，向其中加入大鲵肽、己二醇和对羟基苯乙酮，搅拌至常温，补足水分。
将所得大鲵肽复合液晶乳液置于偏光显微镜下，如图1和图2所示。
选取3-4周龄BALB/c裸鼠20只，随机分为4组，依次为空白组、模型组、阳性对照组和实施例3组，每组5只。在模型组、阳性对照组和实施例3组裸鼠的相同皮肤位置，采用胶带法破坏其表皮屏障，然后在模型组裸鼠每日涂抹1次生理盐水，阳性对照组每日涂抹1次康芙美甘草原液，实施例3组每日涂抹1次实施例3所得大鲵肽复合液晶乳液。
其中涂抹48h后，取4组裸鼠皮肤做HE染色切片，如图3所示。同时在涂抹0h、24h、48h、72h后，对模型组、阳性对照组和实施例3组裸鼠皮肤予以拍照进行对比，如图4所示。
通过图3和图4可以看出：
i、模型组48h后，仍见有中度炎症反应，未见有角质层修复；
ii、阳性对照组48h后，表皮下可见排列稀疏的成纤维细胞和胶原纤维，多量毛囊数量减少，炎症反应减轻，但仍伴有多量炎性细胞浸润；
iii、实施例3组48h后，表面可见干燥的坏死组织残留，形成痂皮，修复的表皮完整，可见轻至中度角质层修复，表皮下可见排列整齐的成纤维细胞和胶原纤维，真皮下可见新生毛细血管生成，实施例3组表现明显优于阳性对照组。
采用实施例3所得大鲵肽复合液晶乳液用于志愿者面部护理，于每晚洁面后涂抹一次实施例3所得大鲵肽复合液晶乳液。
在使用前后采用VISIA图像对比，如图5所示，其中VISIA红色区域代表和血管有关的一些皮肤问题，比如皮肤炎症、痤疮、皮肤敏感等。图5显示志愿者使用4周后，VISIA图像红区有明显减弱，说明实施例3所得大鲵肽复合液晶乳液可能具有抗炎效果。
在使用前后进行毛孔分析，如图6所示。图6显示使志愿者用4周后，毛孔区域由6.74％减少至6.68％，说明实施例3所得大鲵肽复合液晶乳液可能具有缩小毛孔的作用。
并对使用前后的L、a、b值进行比较，可分析其美白效果。如下表所示：
| 使用前 | 使用4周后 | |
| L | 71.52766 | 74.36398 |
| a | -9224.432 | -9648.085 |
| b | 52.578 | 52.48928 |
使用实施例3所得大鲵肽复合液晶乳液4周后，L值明显提高，a值明显降低，b值无明显变化，说明使用后肌肤亮度提升，产品具有美白效果。
实施例4
一种大鲵肽复合液晶乳液，其原料按质量百分比包括：甘油3.5％，丁二醇4.5％，依克多因1.5％，透明质酸钠0.12％，卡波姆0.15％，尿囊素0.25％，橄榄酯类乳化剂3.65％，月桂基缩水甘油醚0.55％，大鲵油2.5％，乳木果油5.5％，聚二甲基硅氧烷(100cs)0.8％，聚二甲基硅氧烷醇(PMX-1501)1.3％，己二醇0.4％，对羟基苯乙酮0.55％，大鲵肽0.04％，蓖麻油2.5％，余量为去离子水。
上述大鲵肽复合液晶乳液的制备方法，包括以下步骤：
I、将大鲵肽加入质量分数为40％的丙二醇溶液中，调节体系pH值为7.2-8，50℃搅拌5min，滴加月桂基缩水甘油醚，搅拌2h，加入依克多因，58℃旋转蒸发除去丙二醇，加入蓖麻油中搅拌，再加入去离子水搅拌20min，采用质量分数为2％的三乙醇胺溶液调节体系pH呈中性，得到大鲵肽复配依克多因；
II、将甘油、丁二醇、透明质酸钠、尿囊素、卡波姆加入去离子水中，加热至80℃溶解均匀得到A相物料；
III、将橄榄酯类乳化剂、大鲵油、乳木果油升温加热搅拌至全部溶解得到B相物料；
IV、搅拌下将B相物料加入A相物料，均质；再加入聚二甲基硅氧烷和聚二甲基硅氧烷醇的混合物，均质得到混合物料；
V、将混合物料搅拌降温，向其中加入大鲵肽复配依克多因、己二醇和对羟基苯乙酮，搅拌至常温，补足水分。
实施例5
一种大鲵肽复合液晶乳液，其原料按质量百分比包括：甘油4.5％，丁二醇3.5％，依克多因2.5％，透明质酸钠0.08％，卡波姆0.21％，尿囊素0.15％，卵磷脂类液晶乳化剂4.35％，月桂基缩水甘油醚0.45％，大鲵油3.5％，乳木果油4.5％，聚二甲基硅氧烷(100cs)1.2％，聚二甲基硅氧烷醇(PMX-1501)1.1％，己二醇0.6％，对羟基苯乙酮0.45％，大鲵肽0.05％，蓖麻油3.5％，余量为去离子水。
上述大鲵肽复合液晶乳液的制备方法，包括以下步骤：
I、将大鲵肽加入质量分数为60％的丙二醇溶液中，调节体系pH值为7.2-8，40℃搅拌15min，滴加月桂基缩水甘油醚，搅拌1h，加入依克多因，62℃旋转蒸发除去丙二醇，加入蓖麻油中搅拌，再加入去离子水搅拌10min，采用质量分数为4％的三乙醇胺溶液调节体系pH呈中性，得到大鲵肽复配依克多因；
II、将甘油、丁二醇、透明质酸钠、尿囊素、卡波姆加入去离子水中，加热至78℃溶解均匀得到A相物料；
III、将卵磷脂类液晶乳化剂、大鲵油、乳木果油升温加热搅拌至全部溶解得到B相物料；
IV、搅拌下将B相物料加入A相物料，均质；再加入聚二甲基硅氧烷和聚二甲基硅氧烷醇的混合物，均质得到混合物料；
V、将混合物料搅拌降温，向其中加入大鲵肽复配依克多因、己二醇和对羟基苯乙酮，搅拌至常温，补足水分。
实施例6
一种大鲵肽复合液晶乳液，其原料按质量百分比包括：甘油4％，丁二醇4％，依克多因2％，透明质酸钠0.1％，卡波姆0.18％，尿囊素0.2％，卵磷脂类液晶乳化剂4％，月桂基缩水甘油醚0.5％，大鲵油3％，乳木果油5％，聚二甲基硅氧烷(100cs)1％，聚二甲基硅氧烷醇(PMX-1501)1.2％，己二醇0.5％，对羟基苯乙酮0.5％，大鲵肽0.045％，蓖麻油3％，余量为去离子水。
上述大鲵肽复合液晶乳液的制备方法，包括以下步骤：
I、将大鲵肽加入质量分数为50％的丙二醇溶液中，调节体系pH值为7.2-8，45℃搅拌10min，滴加月桂基缩水甘油醚，搅拌1.5h，加入依克多因，60℃旋转蒸发除去丙二醇，加入蓖麻油中搅拌，再加入去离子水搅拌15min，采用质量分数为3％的三乙醇胺溶液调节体系pH呈中性，得到大鲵肽复配依克多因；
II、将甘油、丁二醇、透明质酸钠、尿囊素、卡波姆加入去离子水中，加热至80℃溶解均匀得到A相物料；
III、将卵磷脂类液晶乳化剂、大鲵油、乳木果油升温加热搅拌至全部溶解得到B相物料；
IV、搅拌下将B相物料加入A相物料，均质；再加入聚二甲基硅氧烷和聚二甲基硅氧烷醇的混合物，均质得到混合物料；
V、将混合物料搅拌降温，向其中加入大鲵肽复配依克多因、己二醇和对羟基苯乙酮，搅拌至常温，补足水分。
采用实施例6所得大鲵肽复合液晶乳液用于志愿者面部护理，于每晚洁面后涂抹一次实施例6所得大鲵肽复合液晶乳液。在使用前后进行毛孔分析，结果显示使志愿者用4周后，毛孔区域由6.79％减少至6.31％，说明实施例6所得大鲵肽复合液晶乳液可能也具有缩小毛孔的作用，而且效果由于实施例3。
对比例1
一种大鲵肽复合液晶乳液，其原料按质量百分比包括：甘油4％，丁二醇4％，透明质酸钠0.1％，卡波姆0.18％，尿囊素0.2％，卵磷脂类液晶乳化剂4％，月桂基缩水甘油醚0.5％，大鲵油3％，乳木果油5％，聚二甲基硅氧烷(100cs)1％，聚二甲基硅氧烷醇(PMX-1501)1.2％，己二醇0.5％，对羟基苯乙酮0.5％，大鲵肽0.045％，蓖麻油3％，余量为去离子水。
上述大鲵肽复合液晶乳液的制备方法，包括以下步骤：
a、将大鲵肽加入质量分数为50％的丙二醇溶液中，调节体系pH值为7.2-8，45℃搅拌10min，滴加月桂基缩水甘油醚，搅拌1.5h，60℃旋转蒸发除去丙二醇，加入蓖麻油中搅拌，再加入去离子水搅拌15min，采用质量分数为3％的三乙醇胺溶液调节体系pH呈中性，得到预制大鲵肽；
b、将甘油、丁二醇、透明质酸钠、尿囊素、卡波姆加入去离子水中，加热至80℃溶解均匀得到A相物料；
c、将卵磷脂类液晶乳化剂、大鲵油、乳木果油升温加热搅拌至全部溶解得到B相物料；
d、搅拌下将B相物料加入A相物料，均质；再加入聚二甲基硅氧烷和聚二甲基硅氧烷醇的混合物，均质得到混合物料；
e、将混合物料搅拌降温，向其中加入预制大鲵肽、己二醇和对羟基苯乙酮，搅拌至常温，补足水分。
对比例2
一种复合液晶乳液，其原料按质量百分比包括：甘油4％，丁二醇4％，依克多因2％，透明质酸钠0.1％，卡波姆0.18％，尿囊素0.2％，卵磷脂类液晶乳化剂4％，月桂基缩水甘油醚0.5％，大鲵油3％，乳木果油5％，聚二甲基硅氧烷(100cs)1％，聚二甲基硅氧烷醇(PMX-1501)1.2％，己二醇0.5％，对羟基苯乙酮0.5％，蓖麻油3％，余量为去离子水。
上述复合液晶乳液的制备方法，包括以下步骤：
a、将月桂基缩水甘油醚加入依克多因中，再加入蓖麻油中搅拌，再加入去离子水搅拌15min，采用质量分数为3％的三乙醇胺溶液调节体系pH呈中性，得到预制依克多因；
b、将甘油、丁二醇、透明质酸钠、尿囊素、卡波姆加入去离子水中，加热至80℃溶解均匀得到A相物料；
c、将卵磷脂类液晶乳化剂、大鲵油、乳木果油升温加热搅拌至全部溶解得到B相物料；
d、搅拌下将B相物料加入A相物料，均质；再加入聚二甲基硅氧烷和聚二甲基硅氧烷醇的混合物，均质得到混合物料；
e、将混合物料搅拌降温，向其中加入预制依克多因、己二醇和对羟基苯乙酮，搅拌至常温，补足水分。
采用实施例3、实施例6、对比例1和对比例2所得复合液晶乳液进行保湿效果测试，具体如下：
选取28名18-25岁女性作为受试者(排除条件符合《化妆品接触性皮炎诊断标准即处理原则》纳入、排除标准)，随机分为4组，每组平均年龄接近，每组7人。实施例3组、实施例6组、对比例1组和对比例2组在洁面后依次采用实施例3、实施例6、对比例1和对比例2所得复合液晶乳液涂抹面部，采用皮肤角质层含水量测试仪CorneometerCM825和经皮水分散失测试仪Tewameter TM300进行测试，其结果如图7和图8所示。
通过图7和图8可以看出：使用实施例3和实施例6所得复合液晶乳液涂抹面部后，角质层含水量明显增多，而经皮水分散失明显减少，证实本发明所得复合液晶乳液具有优秀的保水功效。
使用实施例3、实施例6、对比例1和对比例2所得复合液晶乳液进行黑色素抑制试验，具体如下：
培养B16黑素瘤细胞，弃去培养液，用PBS液清洗2次，加入培养液，调节细胞浓度为1×105个/孔，加入6孔板中，每孔加入2mL。培养48h后，取出培养基，使用含试样的培养基加入，并设置对照组(细胞+培养基)和空白对照组(培养基)以及阳性对照(0.5mg/mL熊果苷水溶液)，每个浓度组设置2个复孔，培养基中均含10％胎牛血清，于37℃恒温CO2培养箱中培养48h后，吸去培养液用250μL0.25％胰酶消化直至细胞漂浮起来，加1mLPBS终止消化，适度吹打，细胞悬液吸入到EP管，以8000r/min离心5min弃上清液，每个处理因素下的细胞(沉淀)加入100-200μL含10％二甲基亚砜(DMSO)的NaOH(1mol/L)溶液，于80℃水浴1h，使细胞内黑素颗粒完全溶解在溶液中，取100μL于酶标板使用分光光度计测量475nm处吸光度A值。计算细胞内的黑色素含量。
黑色素相对含量＝(实验组OD值-空白组OD值)/(阴性对照组OD值-空白组OD值)
如图9所示，阳性对照熊果苷水溶液对小鼠B16黑素瘤细胞内黑色素生成的抑制率仅为37.64％，实施例3所得复合液晶乳液达到60％以上，而实施例6所得复合液晶乳液则高达78.49％，说明本发明所得复合液晶乳液具有更好的美白祛斑效果。
使用实施例3、实施例6、对比例1和对比例2所得复合液晶乳液进行HaCaT细胞增殖试验，具体如下：
取对数生长期的HaCaT细胞用胰酶消化，吹打成单个细胞悬液，吸入50ml塑料离心管中，1000rpm×10min，离心，弃上清，重悬细胞，调细胞浓度为2×107/L。将细胞悬液接种于96孔细胞培养板中，100μL/孔，将96孔板置37℃、体积分数为5％CO2培养箱中孵育过夜，使其贴壁，24h加药100μL/孔，并设置空白对照组，各组试样均为6复孔，培养24h后加5g/LMTT 20μL/孔，37℃继续培养4h，吸弃上清100μL/孔，加入DMSO 100μL/孔，振荡10-15min，使MTT的还原产物甲臜充分溶解，采用酶联免疫检测仪测定各孔490nm处的OD值，按下列公式计算细胞的增殖率：
增殖率＝处理组OD值均数/空白对照组OD值均数×100％
如图10所示，各组试样均不会对HaCaT细胞增殖产生不良影响，但实施例6所得复合液晶乳液对HaCaT细胞增殖的促进效果最佳，证实本发明所得复合液晶乳液能促使角质形成细胞增殖，加速肌肤屏障的修复。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (6)
1.一种大鲵肽复合液晶乳液，其特征在于，其原料按质量百分比包括：甘油3-5%，丁二醇3-5%，依克多因1-3%，透明质酸钠0.05-0.15%，卡波姆0.13-0.23%，尿囊素0.1-0.3%，乳化剂4-5%，大鲵油2-4%，乳木果油4-6%，聚二甲基硅氧烷0.5-1.5%、聚二甲基硅氧烷醇1-1.4%，己二醇0.3-0.7%，对羟基苯乙酮0.4-0.6%，大鲵肽0.03-0.06%，余量为去离子水；
乳化剂包括：液晶乳化剂、月桂基缩水甘油醚，所述液晶乳化剂包含卵磷脂类液晶乳化剂、蔗糖酯类乳化剂、糖苷类乳化剂、橄榄酯类乳化剂和高级脂肪醇类乳化剂中的一种或几种；月桂基缩水甘油醚与液晶乳化剂的质量比为0.35-0.65：3.35-4.65；
上述复合液晶乳液的制备方法，包括如下步骤：
I、将大鲵肽加入溶剂中，调节体系pH值为7.2-8，40-50℃搅拌5-15min，滴加月桂基缩水甘油醚，搅拌1-2h，加入依克多因，旋转蒸发除去溶剂，加入油脂中搅拌，再加入去离子水搅拌10-20min，调节体系pH呈中性，得到大鲵肽复配依克多因；
所用油脂为饱和肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸异辛酯、辛酸/癸酸甘油三酯、角鲨烷、蓖麻油中至少一种；
油脂与依克多因的质量比为2.5-3.5：1-3；
II、将甘油、丁二醇、透明质酸钠、尿囊素、卡波姆加入去离子水中，加热溶解均匀得到A相物料；
III、将液晶乳化剂、大鲵油、乳木果油升温加热搅拌至全部溶解得到B相物料；
IV、搅拌下将B相物料加入A相物料，均质；再加入聚二甲基硅氧烷和聚二甲基硅氧烷醇的混合物，均质得到混合物料；
V、将混合物料搅拌降温，向其中加入大鲵肽复配依克多因、己二醇和对羟基苯乙酮，搅拌至常温，补足水分。
2.一种如权利要求1所述大鲵肽复合液晶乳液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
I、将大鲵肽加入溶剂中，调节体系pH值为7.2-8，40-50℃搅拌5-15min，滴加月桂基缩水甘油醚，搅拌1-2h，加入依克多因，旋转蒸发除去溶剂，加入油脂中搅拌，再加入去离子水搅拌10-20min，调节体系pH呈中性，得到大鲵肽复配依克多因；
所用油脂为饱和肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸异辛酯、辛酸/癸酸甘油三酯、角鲨烷、蓖麻油中至少一种；
油脂与依克多因的质量比为2.5-3.5：1-3；
II、将甘油、丁二醇、透明质酸钠、尿囊素、卡波姆加入去离子水中，加热溶解均匀得到A相物料；
III、将液晶乳化剂、大鲵油、乳木果油升温加热搅拌至全部溶解得到B相物料；
IV、搅拌下将B相物料加入A相物料，均质；再加入聚二甲基硅氧烷和聚二甲基硅氧烷醇的混合物，均质得到混合物料；
V、将混合物料搅拌降温，向其中加入大鲵肽复配依克多因、己二醇和对羟基苯乙酮，搅拌至常温，补足水分。
3.根据权利要求1所述大鲵肽复合液晶乳液，其特征在于，步骤I中，溶剂为质量分数为40-60%的丙二醇溶液。
4.根据权利要求1所述大鲵肽复合液晶乳液，其特征在于，步骤I中，旋转蒸发温度为58-62℃。
5.根据权利要求1所述大鲵肽复合液晶乳液，其特征在于，步骤I中，加入去离子水搅拌后采用质量分数为2-4%的三乙醇胺溶液调节体系pH呈中性。
6.一种如权利要求1所述大鲵肽复合液晶乳液在制备护肤品中的应用。
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