CN116323619A - 哌啶二酮衍生物 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及可以增加感兴趣蛋白的降解效果的PROTAC化合物，并且涉及可以用作PROTAC化合物的E3酶配体的新的哌啶二酮化合物。本发明的哌嗪二酮衍生化合物对CRBN起作用并且因此可以用作与CRBN蛋白相关疾病的治疗剂(例如抗癌剂或免疫调节剂)。
Description
技术领域
本发明涉及哌啶二酮衍生物化合物。此外，本发明涉及包含哌啶二酮衍生物化合物的PROTAC化合物。
背景技术
PROTAC是PROtelysis TArgeting Chimera的缩写，是一种诱导靶蛋白(POI：感兴趣的蛋白)降解的技术。
PROTAC具有以下结构，其中POI配体和E3连接酶结合剂通过接头连接。POI配体具有能够结合至与疾病相关的POI的结构，并且E3连接酶结合剂具有能够结合E3连接酶的结构。
E3连接酶(E3酶)可以在POI上标记泛素(ubiquitin)并且这种泛素标记的POI被蛋白酶体降解。
当PROTAC化合物的POI配体与POI结合时，E3连接酶通过PROTAC化合物位于非常靠近POI的位置，因此建立了POI能被蛋白酶体去除的环境。
具体地，如果PROTAC化合物与涉及癌细胞增殖的POI结合，它可以诱导POI的降解并达到癌症治疗的效果。
发明内容
【技术问题】
本发明的目的是提供能够增强对POI的降解效果的PROTAC化合物。此外，本发明的目的是提供可在PROTAC化合物中用作E3连接酶结合剂的新的哌啶二酮化合物。
【技术方案】
本发明涉及式1的化合物或其药学上可接受的盐：
[式1]
其中，
X是氢、卤素、氨基、硝基、羟基、C1至C6直链或支链烷氧基、或包括氧或氮的4至8元杂环基，
Q1至Q4各自独立地是C-F、C-Cl、C-H、C-X或N，条件是Q1至Q4中的至少一个是C-X，
R1是氢、硝基、氨基、羰基、C1至C6直链、支链或环状烷基、或被卤素取代的C1至C6直链、支链或环状烷基。
在根据本发明的式1的化合物中，优选地，X是氢、氟、氯、溴、氨基、硝基、羟基、哌嗪基基团、甲氧基或乙氧基，Q1至Q4各自独立地是C-H或C-X，并且R1是氢、氨基、甲基、乙基、环丙基或CF3。
更优选地，本发明是式1的化合物，所述化合物选自由以下化合物组成的组：
因为根据本发明的式1的化合物本身对CRBN起作用，所以其可有效地用作CRBN蛋白相关疾病(例如，抗肿瘤或免疫调节剂)的治疗。
根据本发明的式1的化合物可在包含POI配体、接头和E3连接酶结合剂的PROTAC化合物中用作E3连接酶结合剂。
因此，本发明涉及PROTAC化合物或其药学上可接受的盐，其中作为E3连接酶结合剂，具有式1的化合物连接至接头：
[式1]
其中，
X是氢、卤素、氨基、硝基、羟基、C1至C6直链或支链烷氧基、或包括氧或氮的4至8元杂环基，
Q1至Q4各自独立地是C-F、C-Cl、C-H、C-X或N，条件是Q1至Q4中的至少一个是C-X，
R1是氢、硝基、氨基、羰基、C1至C6直链、支链或环状烷基、或被卤素取代的C1至C6直链、支链或环状烷基。
在根据本发明的PROTAC化合物中，具有式1的化合物优选地选自由以下化合物组成的组：
在根据本发明的PROTAC化合物中，式1的化合物和接头通过共价键彼此连接。尤其是，接头与式1的化合物的取代基X共价键合，或通过取代取代基X与式1的化合物共价键合。例如，接头可以(i)通过用接头取代式1的化合物的X而连接至式1的化合物，或(ii)通过将接头结合至式1的化合物的X的氮原子或氧原子而连接至式1的化合物。
因此，在根据本发明的PROTAC化合物中，式1的化合物通过X连接至接头。
根据本发明的PROTAC化合物可以被设计为作用于核受体(例如，ER、AR、RAR等)、蛋白激酶(例如，Akt、c-Abl、BTK、间变性淋巴瘤激酶[ALK]、CDK9、c-Met、RIPK2、DAPK1、PSD-95等)、转录调节中的蛋白(例如，BRD4、Sir2、HDAC6、TRIM24、IKZH1/3、Smad3等)、调节蛋白(例如，CRABP-I/II、TACC3、AHR、FKBP12、ERRα、SHP2、X蛋白、PTPN11等)、神经退行性相关蛋白(例如，亨廷顿蛋白、Tau、a-共核蛋白、PSD-95等)、细胞代谢酶(例如，MetAP-2、DHODH)、融合蛋白(例如，Alk-融合蛋白、BCR-Abl，Brd-Nut、Ret-融合蛋白、HaloTags等)、突变蛋白(例如，Braf突变体、EGFR突变体和缺失、Kras突变体、TP53突变体和剪接变体等)、罕见变体蛋白(例如，EGFRdel19、P53剪接变体、融合蛋白等)等作为POI。因此，在根据本发明的PROTAC化合物中，将能够结合这种POI的化合物用作POI配体。因此，根据本发明的PROTAC化合物可以有效地用于治疗或预防与如上所述的POI相关的疾病。
在本发明的PROTAC化合物中，BRD4抑制剂或SHP2抑制剂可以是POI配体。优选地，该POI配体选自由以下化合物组成的组：
在本发明的PROTAC化合物中，任何能够连接POI配体和式1的化合物的接头可以用作接头。优选地，式2至9中的任一种化合物用作接头：
[式2]
[式3]
[式4]
[公式5]
[式7]
-Y-R2-R4-
[式8]
-(C＝O)-R2-(C＝O)-
[式9]
-R4-(C＝O)-R2-
其中，
n是具有0至10中任何一个的值的整数，
R4是4至8元芳基、杂芳基或杂环基团，
R2是-(CH2)m-、-(CH2)m-R4-(CH2)q-、或-(C＝O)-(CH2)m-(CONH)-(CH2)q-，
R3是-(CH2)m-、-(CH2)m-R4-(CH2)q-、-(C＝O)-(CH2)m-(CONH)-(CH2)q-、或直接键，
其中，
m和q各自独立地是0至10的整数，
Y是-NR8-、-N(R8)-C(O)-、-C(O)-N(R8)-、-CHR8-、-O-、-S-、-S(O)-、-S(O)NR8-、-S(O)2-、-S(O)2NR8-、-C(＝CH2)-、-CH＝CH-或-C≡C-，
R8是氢、C1至C6直链、支链或环状烷基、或被卤素取代的C1至C6直链、支链或环状烷基。
例如，在以上式中，R8可以是-CH2-CH2F、-CH2-CHF2或-CH2-CF3。
在由式表示的接头中，结构式的左侧与POI配体共价键合，并且结构式的右侧与式1的化合物的取代基X中的原子如氧或氮键合或与Q1至Q4的任何一个碳原子键合。
更优选地，作为根据本发明的PROTAC化合物中的接头，使用选自由以下化合物组成的组的接头：
此外，作为根据本发明的PROTAC化合物中的接头，使用选自由式10和11的化合物组成的组的接头：
[式10]
[式11]
其中，
b是0至20的整数。
a是2或3。
T1是-CH2-、-O-、或-CHRg-，其中Rg是C1-C4烷基，
R6和R7彼此相同或不同，并且它们的每一个是
x1、x2、x3和x4相同或不同，且它们各自为C-H、C-N或C-Ri，其中Ri为-F、-Cl、-Br，以及
w1和w2彼此相同或不同，并且它们各自是-(CH2)k-，-(CH2)k-1O-，
或-(CH2)kNHRh-，其中k是1至10的整数并且Rh是C1至C4烷基。
优选地，R6和R7各自独立地是下式：
在根据本发明的PROTAC化合物中，该接头通过共价键分别地连接到POI配体和E3连接酶结合剂上，由此连接POI配体和E3连接酶结合剂。本领域的普通技术人员理解，在用于共价键合的反应过程中可以在接头、POI配体和E3连接酶结合剂的共价键位点处消除一些取代基。
因此，本发明涉及包括POI配体、接头和E3连接酶结合剂的PROTAC化合物，其中接头通过共价键分别连接到POI配体和E3连接酶结合剂，并且其中E3连接酶结合剂的部分由式1表示。
因此，本发明的PROTAC化合物由下式6的化合物表示：
[式6]
其中，
Z是POI配体和与其连接的接头，
Q1至Q4各自独立地是C-F、C-Cl、C-H、C-Z、C-O-Z、C-NH-Z、或N，条件是Q1至Q4中的至少一个是C-Z、C-O-Z或C-NH-Z，
R1是氢、硝基、氨基、羰基、C1至C4直链、支链或环状烷基、或被卤素取代的C1至C4直链、支链或环状烷基。
在根据本发明的PROTAC化合物中，该POI配体选自由以下化合物或其衍生物组成的组：
其中，
Z’是式1的化合物和与其连接的接头，其以表示连接至接头的POI配体的部分的意图表示，以便有助于理解本发明中所示的PROTAC化合物的结构。
具体地，当接头被连接到可以在本发明的PROTAC中使用的POI配体或其衍生物中含有的氨基基团上时，为了方便起见，接头(L)将在以下在将该氨基基团看作该接头的一部分的角度进行解释。
在根据本发明的PROTAC化合物中，作为接头L，使用了能够连接POI配体和式1的化合物的任何接头。优选地，式2至9中的任一种化合物被用作接头L：
[式2]
[式3]
[式4]
[式5]
[式7]
-Y-R2-R4-
[式8]
-(C＝O)-R2-(C＝O)-
[式9]
-R4-(C＝O)-R2-
其中，
n是具有0至10中任何一个的值的整数，
R4是4至8元芳基、杂芳基或杂环基团，
R2是-(CH2)m-、-(CH2)m-R4-(CH2)q-、或-(C＝O)-(CH2)m-(CONH)-(CH2)q-，
R3是-(CH2)m-、-(CH2)m-R4-(CH2)q-、-(C＝O)-(CH2)m-(CONH)-(CH2)q-、或直接键，
其中，
m和q各自独立地是0至10的整数，
Y是-NR8-、-N(R8)-C(O)-、-C(O)-N(R8)-、-CHR8-、-O-、-S-、-S(O)-、-S(O)NR8-、-S(O)2-、-S(O)2NR8-、-C(＝CH2)-、-CH＝CH-或-C≡C-，并且
R8是氢、C1至C6直链、支链或环状烷基、或被卤素取代的C1至C6直链、支链或环状烷基。
在由化学式表示的接头L中，化学式的左侧被共价地键合到POI配体上。
更优选地，作为根据本发明的PROTAC化合物中的接头L，使用选自由以下化合物组成的组的接头：
此外，作为根据本发明的PROTAC化合物中的接头，使用了选自由式10和11的化合物组成的组的接头：
[式10]
[式11]
其中，
b是0至20的整数。
a是2或3。
T1是-CH2-、-O-、或-CHRg-，其中Rg是C1-C4烷基，
R6和R7彼此相同或不同，并且它们各自是
其中，e是1至10的整数，
x1、x2、x3和x4相同或不同，且它们各自为C-H、C-N或C-Ri，其中Ri为-F、-Cl、-Br，以及
w1和w2彼此相同或不同，并且它们各自是-(CH2)k-，-(CH3)k-1O-，
或-(CH2)kNHRh-，其中k是1至10的整数并且Rh是C1至C4烷基。
优选地，R6和R7各自独立地是下式：
更优选地，在本发明的PROTAC化合物中，该接头选自由以下化合物组成的组：
此外，根据本发明的PROTAC化合物优选地选自由以下化合物组成的组：
【效果】
本发明的哌嗪二酮衍生物的化合物对CRBN起作用，并且可有效地用作CRBN蛋白相关疾病(例如，抗癌或免疫调节剂)的治疗。
此外，本发明的哌嗪二酮衍生物可有效地用作PROTAC化合物的E3连接酶结合剂。本发明的PROTAC化合物被设计为对以下各项起作用：核受体(例如，ER、AR、RAR等)、蛋白激酶(例如，Akt、c-Abl、BTK、间变性淋巴瘤激酶[ALK]、CDK9、c-Met、RIPK2、DAPK1、PSD-95等)、转录调节中的蛋白(例如，BRD4、Sir2、HDAC6、TRIM24、IKZH1/3、Smad3等)、调节蛋白(例如，CRABP-I/II、TACC3、AHR、FKBP12、ERRα、SHP2、X蛋白、PTPN11等)、神经退行性相关蛋白(例如，亨廷顿蛋白、Tau、a-共核蛋白、PSD-95等)、细胞代谢酶(例如，MetAP-2、DHODH)、融合蛋白(例如，Alk-融合蛋白、BCR-Abl，Brd-Nut、Ret-融合蛋白、HaloTags等)、突变蛋白(例如，Braf突变体、EGFR突变体和缺失、Kras突变体、TP53突变体和剪接变体等)、罕见变体蛋白(例如，EGFRdel19、P53剪接变体、融合蛋白等)等作为POI。因此，在根据本发明的PROTAC化合物中，将能够结合这种POI的化合物用作POI配体。因此，根据本发明的PROTAC化合物可以有效地用于治疗或预防与如上所述的POI相关的疾病。
例如，包含本发明的哌嗪二酮衍生化合物的PROTAC化合物(作为E3连接酶结合剂)具有优异的抗癌效果。此外，根据本发明的PROTAC化合物诱导了在除癌症之外的其他疾病中相关的特定蛋白的降解，从而对相关疾病展现出治疗效果。
在此描述的术语“杂”意指它包括原子如氮、氧或硫而不是碳或氢。
附图说明
图1示意性地说明了由POI配体、接头和E3连接酶结合剂组成的PROTAC化合物。
图2说明了CRBN配体亲和力。
图3示出了应用E3连接酶结合剂的BRD4靶向的PROTAC的蛋白水解效力。
图4显示了抑制应用E3连接酶结合剂的BRD4靶向的PROTAC的癌细胞增殖的作用。
图5示出了应用E3连接酶结合剂的SHP2靶向的PROTAC的蛋白水解效力。
图6示出了抑制应用E3连接酶结合剂的SHP2靶向的PROTAC的癌细胞增殖的作用。
具体实施方式
以下，为了便于理解本发明，根据实施例详细描述本发明。然而，以下实施例仅说明本发明的内容，并且本发明的精神或范围在任何意义上不受以下实施例的限制。提供本发明的实施例以向本领域普通技术人员更全面地解释本发明。
根据本发明的式1的化合物的主体结构(scaffold)通过以下方案1或方案2的反应步骤制备：
[方案1]
[方案2]
在方案1或2中，X是氢、卤素、氨基、硝基或羟基、哌嗪基团或C1至C4烷氧基。然而，为了便于说明，省略可以与式1的化合物的Q1至Q4中的碳键合的取代基的显示，并且在R1取代基中仅代表性地示出了简单的取代基，例如氢或甲基。
在下文中，通过实施例来制备式1的化合物的具体实施方式。
实施例A：哌啶二酮衍生物化合物的合成
实施例1：
1-1)2-甲基-6-硝基苯甲酸甲酯的合成
在室温下，向2-甲基-6-硝基苯甲酸(5g，27.6mmol)在丙酮(100ml)中的溶液里添加K2CO3(19.1g，138mmol)。在搅拌30分钟以后，用碘甲烷(19.6g，138mmol)来处理反应混合物并加热至60℃持续6小时。冷却后，将该反应混合物过滤并且在减压下浓缩。产物(5.45g，98％)不经进一步纯化而用于下一个反应。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[195.2]。
1-2)2-(溴甲基)-6-硝基苯甲酸甲酯的合成
在室温下，向2-甲基-6-硝基苯甲酸甲酯(5.39g，27.6mmol)在ClCH2CH2Cl(100ml)中的溶液里添加1-溴吡咯烷-2,5-二酮(7.39g，41.4mmol)，随后添加过氧苯甲酸苯甲酰酯(benzoyl benzenecarboperoxoate)(0.67g，7.26mmol)。将该反应混合物加热至回流持续3小时。反应完成后，微红色消失。冷却后，将该反应混合物用水洗涤并且经MgSO4干燥并且在减压下浓缩。将粗产物(7.34g，98％)不经进一步纯化而用于下一个反应。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[274.4]。
1-3)2-甲酰基-6-硝基苯甲酸甲酯的合成
在室温下，向2-(溴甲基)-6-硝基苯甲酸甲酯(580mg，2.12mmol)在DCM(30mL)中的溶液里添加NMO(N-甲基吗啉N-氧化物)(561mg，4.87mmol)，随后添加分子筛
将该反应混合物在室温下搅拌2小时。将分子筛滤出并且用DCM(10mL)洗涤。将DCM层用水(50mL)洗涤，经MgSO4干燥，并且然后在减压下浓缩。将残余物通过柱色谱法进行纯化以提供呈白色固体的标题化合物(350mg，79.07％)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[210.0]。
1-4)2-甲酰基-6-硝基苯甲酸的合成
在室温下，向2-甲酰基-6-硝基苯甲酸甲酯(2g，9.56mmol)在THF(10mL)中的溶液里添加氢氧化锂(1+)(1.15g，47.8mmol)在H2O(10mL)中的溶液。搅拌2小时后，减压浓缩反应混合物以干燥THF。在冷却至0℃之后，用1N-HCl酸化反应混合物以调节pH至4。将该反应混合物用乙酸乙酯(50mL x 2)萃取。将合并的乙酸乙酯层经MgSO4干燥并且在减压下浓缩以得到白色晶体(1.50g，80.3％)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[195.2]。
1-5)8-硝基酞嗪-1(2H)-酮的合成
在室温下，向2-甲酰基-6-硝基苯甲酸(1.20g，6.15mmol)在MeOH(10mL)中的溶液中添加NH2NH2一水合物(417mg，8.33mmol)。在搅拌30分钟之后，将反应混合物加热至80℃持续2小时。将反应混合物冷却至室温并在减压下浓缩。将残余物倾倒入水(50ml)中并且用乙酸乙酯(50mL x 2)萃取。将合并的乙酸乙酯层经MgSO4干燥并且在减压下浓缩以得到白色晶体(1.0g，85.07％)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[191.8].。
1-6)3-(8-硝基-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮的合成
向8-硝基-1,2-二氢酞嗪-1-酮(60mg，0.314mmol)在DMF(1mL)中的溶液中添加3-溴哌啶-2,6-二酮(90mg，0.471mmol)，随后添加K2CO3(129mg，0.942mmol)。将反应混合物加热至85℃持续5小时。冷却后，将该反应混合物倾倒入水(5mL)中并且用乙酸乙酯(5mL x2)萃取。将合并的乙酸乙酯经MgSO4干燥并且在减压下浓缩。残余物通过柱色谱法纯化，以提供呈白色晶体的标题化合物(68.0mg，71.7％)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[302.6]。
1-7)3-(8-硝基-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮的合成
向3-(8-硝基-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-2-基)哌啶-2,6-二酮(25mg，0.82mmol)在MeOH(5mL)中的溶液中添加20mg的10％ Pd/C(湿)(5mg)并且在H2下在气囊中搅拌1小时。将固体滤出并且将滤液在减压下浓缩以提供99％的标题化合物。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[272.3]。
[NMR]1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.95(s，1H)，8.10(s，1H)，7.46(t，J＝7.83Hz，1H)，7.22(brs，2H)，6.86(d，J＝7.83Hz，1H)，6.81(d，J＝7.34Hz，1H)，5.61(br dd，J＝5.2，11.92Hz，1H)，2.77-2.89(m，1H)，2.46-2.57(m，2H)，195-2.08(m，1H)
实施例2：
化合物
的合成
2-1)2-甲基-3-硝基苯甲酸甲酯的合成
在室温下，向2-甲基-3-硝基苯甲酸(5g，27.6mmol)在丙酮(100ml)中的溶液里添加K2CO3(19.1g，138mmol)。在搅拌30分钟之后，向反应混合物中添加碘甲烷(19.6g，138mmol)，并且将混合物加热至60℃持续6小时。冷却后，将该反应混合物过滤并且在减压下浓缩。产物(5.45g，98％)不经进一步纯化而用于下一个反应。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[195.3]。
2-2)2-(溴甲基)-3-硝基苯甲酸甲酯的合成
在室温下，向2-甲基-3-硝基苯甲酸甲酯(5.39g，27.6mmol)在1,2-二氯乙烷(100ml)中的溶液里添加1-溴吡咯烷-2,5-二酮(7.39g，41.4mmol)，随后添加过氧苯甲酸苯甲酰酯(benzoyl benzenecarboperoxoate)(0.67g，7.26mmol)。将该反应混合物加热至回流持续3小时。反应完成后，微红色消失。冷却后，将该反应混合物用水洗涤并且经MgSO4干燥并且在减压下浓缩。将粗产物(7.34g，98％)不经进一步纯化而用于下一个反应。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[274.4]。
2-3)2-甲酰基-3-硝基苯甲酸甲酯的合成
在室温下，向2-(溴甲基)-3-硝基苯甲酸甲酯(580mg，2.12mmol)在DCM(30mL)中的溶液里添加NMO(561mg，4.87mmol)，随后添加分子筛
将该反应混合物在室温下搅拌2小时。将分子筛滤出并且用DCM(10mL)洗涤。将DCM层用水(50mL)洗涤，经MgSO4干燥，并且然后在减压下浓缩。将残余物通过柱色谱法进行纯化以提供呈白色固体的标题化合物(350mg，79.07％)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[210.0]。
2-4)2-甲酰基-3-硝基苯甲酸的合成
在室温下，向2-甲酰基-6-硝基苯甲酸甲酯(2g，9.56mmol)在THF(10mL)中的溶液里添加氢氧化锂(1+)(1.15g，47.8mmol)在H2O(10mL)中的溶液。搅拌2小时后，减压浓缩反应混合物以干燥THF。冷却至0℃之后，用1N-HCl酸化反应以将pH调节至4。将该反应混合物用乙酸乙酯(50mL x 2)萃取。将合并的乙酸乙酯层经MgSO4干燥并且在减压下浓缩以得到白色晶体(1.50g，80.3％)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[195.2]。
2-5)5-硝基酞嗪-1(2H)-酮的合成
在室温下，向2-甲酰基-3-硝基苯甲酸(1.20g，6.15mmol)在MeOH(10mL)中的溶液中添加一水合肼(417mg，8.33mmol)。在搅拌30分钟之后，将反应混合物加热至80℃持续2小时。将反应混合物冷却至室温并在减压下浓缩。将残余物倾倒入水(50ml)中并且用乙酸乙酯(50mL x 2)萃取。将合并的乙酸乙酯层经MgSO4干燥并且在减压下浓缩以得到白色晶体(1.0g，85.07％)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[191.8]。
2-6)3-(5-硝基-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮的合成
向5-硝基酞嗪-1(2H)-酮(60mg，0.314mmol)在DMF(1mL)中的溶液中添加3-溴哌啶-2，6-二酮(90mg，0.471mmol)，随后添加K2CO3(129mg，0.942mmol)。将反应混合物加热至85℃持续5小时。冷却后，将该反应混合物倾倒入水(5mL)中并且用乙酸乙酯(5mL x2)萃取。将合并的乙酸乙酯经MgSO4干燥并且在减压下浓缩。将残余物通过柱层析进行纯化以提供呈白色晶体的标题化合物(68.0mg，71.7％)。MS(ESI，m/z)：[M+1]+＝[302.4]。
2-7)3-(5-氨基-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2，6-二酮的合成
向3-(5-硝基-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2，6-二酮(25mg，0.82mmol)在MeOH(5mL)中的溶液中加入20mg的10％Pd/C(湿)(5mg)并且在气囊中在H2下搅拌1小时。将固体滤出并且将滤液在减压下浓缩以提供99％的标题化合物。MS(ESI，m/z)：[M+1]+＝[272.3]。
[NMR]1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.95(s，1H)，8.20-8.41(m，3H)，8.08(s，1H)，7.83(d，J＝8.93Hz，1H)，6.95(d，J＝10.5Hz，1H)，5.64(br dd，J＝4.83，11.31Hz，1H)，2.62-2.89(m，1H)，2.52-2.60(m，2H)，1.86-2.07(m，1H)
实施例3：
化合物
的合成/>
3-1)2-氟-6-甲基苯甲酸甲酯的合成
在室温下，向2-氟-6-甲基苯甲酸(10g，64.9mmol)在丙酮(200ml)中的溶液里添加K2CO3(44.8g，324mmol)。在搅拌30分钟以后，用碘甲烷(46g，324mmol)来处理反应混合物并加热至60℃持续6小时。冷却后，将该反应混合物过滤并且在减压下浓缩。产物(11.2g，103％)不经进一步纯化而用于下一个反应。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[168.3]。
3-2)2-(溴甲基)-6-氟苯甲酸甲酯的合成
在室温下，向2-氟-6-甲基苯甲酸甲酯(21.2g，126mmol)在1,2-二氯乙烷(250ml)中的溶液中添加1-溴吡咯烷-2,5-二酮(24.7g，139mmol)，随后添加过氧苯甲酸苯甲酰酯(1.53g，6.30mmol)。将反应混合物加热至回流16小时。反应完成后，微红色消失。冷却后，将该反应混合物用水洗涤并且经MgSO4干燥并且在减压下浓缩。将粗产物(35g，112％)不经进一步纯化而用于下一个反应。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[245.9]。
3-3)2-氟-6-甲酰基苯甲酸甲酯的合成
在室温下，向2-(溴甲基)-6-氟苯甲酸甲酯(35g，142mmol)在DCM(280mL)中的溶液里添加NMO(24.9g，212mmol)。将该反应混合物在室温下搅拌4小时。将DCM层用水(200mL)洗涤，经MgSO4干燥，并且然后在减压下浓缩。将残余物通过柱层析进行纯化以提供呈白色固体的标题化合物(11.52g，45％)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[183.1]。
3-4)2-氟-6-甲酰基苯甲酸的合成
在室温下，向2-氟-6-甲酰基苯甲酸甲酯(11.5g，63.2mmol)在THF(82mL)中的溶液中添加氢氧化锂(1+)(7.57g，180mmol)在H2O(41mL)中的溶液。搅拌4小时后，将该反应混合物在减压下进行浓缩用于干燥THF。在冷却至0℃之后，用1N-HCl酸化反应混合物以调节pH至4。将该反应混合物用乙酸乙酯(100mL x 2)萃取。经MgSO4干燥合并的乙酸乙酯层并在减压下浓缩以产生白色晶体(10.4g，97.8％)。MS(ESI，m/z)：[M+1]+＝[168.8]。
3-5)8-氟酞嗪-1(2H)-酮的合成
在室温下，向2-氟-6-甲酰基苯甲酸(10.4g，61.9mmol)在MeOH(120mL)中的溶液中添加一水合肼(3.72mg，61.9mmol)并且在室温下搅拌16小时。将白色沉淀过滤并且用MeOH洗涤。将获得的白色固体用100ml的EA(乙酸乙酯)浆化并且过滤以提供白色晶体(3.05g，30％)。MS(ESI，m/z)：[M+1]+＝[164.8]。
3-6)3-(8-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2，6-二酮的合成
在0℃下，向8-氟酞嗪-1(2H)-酮(200mg，1.22mmol)在DMF(5mL)中的溶液中加入NaH(60％，53.6mg，1.34mmol)并搅拌30分钟。向此溶液中添加3-溴哌啶-2，6-二酮(468mg，2.44mmol)并且在rt(室温)下搅拌6小时。将该反应用水淬灭并且用乙酸乙酯(20mL x2)萃取。将合并的乙酸乙酯经MgSO4干燥并且在减压下浓缩。将残余物通过柱层析进行纯化以提供呈白色晶体的标题化合物(70.0mg，20.8％)。MS(ESI，m/z)：[M+1]+＝[276.1]。
[NMR]1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.06(s，1H)，8.48(s，1H)，7.99(ddd，J＝4.6，7.2，8.2Hz，1H)，7.80(d，J＝7.2Hz，1H)，7.67(dd，J＝8.2，11.4Hz，1H)，5.77(dd，J＝5.3，12.0Hz，1H)，2.99-2.77(m，1H)，2.68-2.51(m，2H)，2.23-2.02(m，1H)
实施例4：
化合物
的合成
4-1)5-氟-6-甲基苯甲酸甲酯的合成
在室温下，向3-氟-2-甲基苯甲酸(10g，64.9mmol)在MeOH(60ml)中的溶液中添加硫酸(2ml)。将反应混合物加热至80℃并搅拌过夜。在冷却至室温之后，将该反应混合物蒸发，用NaHCO3和EA(乙酸乙酯)萃取，并且然后经MgSO4干燥。将粗产物(10.1g，产率92％)不经进一步纯化而用于下一个反应。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[168.3]。
4-2)2-(溴甲基)-3-氟苯甲酸甲酯的合成
在室温下，向3-氟-2-甲基苯甲酸甲酯(10.0g，59.5mmol)在1,2-二氯乙烷(250ml)中的溶液中添加1-溴吡咯烷-2,5-二酮(15.9g，89.2mmol)，随后添加过氧苯甲酸苯甲酰酯(0.72g，2.97mmol)。将反应混合物加热至回流16小时。反应完成后，微红色消失。冷却后，将该反应混合物用水洗涤并且经MgSO4干燥并且在减压下浓缩。将粗产物(10.5g，产率71％)不经进一步纯化而用于下一个反应。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[245.9]。
4-3)3-氟-2-甲酰基苯甲酸甲酯的合成
在室温下，向2-(溴甲基)-3-氟苯甲酸甲酯(10g，40.5mmol)在DCM(200mL)中的溶液中添加NMO(10.4g，89.0mmol)，分子筛
将该反应混合物在室温下搅拌4小时。将DCM层用水(200mL)洗涤，经MgSO4干燥，并且然后在减压下浓缩。将残余物通过柱层析纯化，以提供标题化合物(5.5g，75％)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[183.1]。
4-4)3-氟-2-甲酰基苯甲酸的合成
在室温下，向3-氟-2-甲酰基苯甲酸甲酯(2.5g，13.7mmol)在THF(68mL)中的溶液中添加氢氧化锂(1+)一水合物(2.88g，68.6mmol)在H2O(41mL)中的溶液。搅拌4小时后，将该反应混合物在减压下进行浓缩用于干燥THF。在冷却至0℃之后，用1N-HCl酸化反应混合物以调节pH至4。将该反应混合物用乙酸乙酯(100mL x 2)萃取。经MgSO4干燥合并的乙酸乙酯层并在减压下浓缩以产生白色晶体(2.5g，108％)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[168.8]。
4-5)5-氟-1,2-二氢酞嗪-1-酮的合成
在室温下，向3-氟-2-甲酰基苯甲酸(2.5g，14.9mmol)在THF：H2O＝1：1(70mL)中的溶液里添加一水合肼(1.22mg，16.4mmol)并且在室温下搅拌16小时。将该混合物酸化至pH4并且将该固体用己烷过滤并且在真空中干燥。(1.3g，53％)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[165.3]。
4-6)3-(5-氟-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-2-基)哌啶-2,6-二酮的合成
在0℃下，向5-氟-1,2-二氢酞嗪-1-酮(300mg，1.83mmol)在DMF(10mL)中的溶液中添加LDA(二异丙基酰胺锂)(2.2ml，2.19mmol)并搅拌30分钟。向该溶液中添加3-溴哌啶-2,6-二酮(526mg，2.74mmol)，并在80℃下搅拌6小时。在该反应完成时，将该反应混合物冷却至室温并倾倒入水(100ml)中。用6M-HCl将反应混合物的pH调节至3～4。然后，将该反应混合物用乙酸乙酯萃取，经MgSO4干燥并且在减压下浓缩。将产物用己烷重结晶并且在真空下干燥以获得标题化合物。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[276.1]。
[NMR]1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.03(s，1H)，8.53(s，1H)，8.05(d，J＝7.82Hz，1H)，7.76-7.90(m，2H)，5.78(dd，J＝12.23，5.26Hz，1H)2.80-2.93(m，1H)，2.47-2.61(m，2H)，2.01-2.16(m，1H)
实施例5
化合物
的合成
5-1)4-氟-6-甲基苯甲酸甲酯的合成
基于实施例4-1的制备方法，由4-氟-2-甲基苯甲酸合成4-氟-2-甲基苯甲酸甲酯。
5-2)2-(溴甲基)-4-氟苯甲酸甲酯的合成
在室温下，向4-氟-2-甲基苯甲酸甲酯(20.0g，119.0mmol)在1,2-二氯乙烷(100ml)中的溶液中添加1-溴吡咯烷-2,5-二酮(31.8g，178.0mmol)，随后添加过氧苯甲酸苯甲酰酯(1.92g，5.95mmol)。将该反应混合物加热至回流持续3小时。反应完成后，微红色消失。冷却后，将该反应用水洗涤并且经MgSO4干燥并且在减压下浓缩。通过MPLC纯化产物。.(HX/EA EA 0->5％).(22.0g，产率:75％).MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[248.4]。
5-3)3-氟-2-甲酰基苯甲酸甲酯的合成
在室温下，向2-(溴甲基)-4-氟苯甲酸甲酯(22.0g，89mmol)在DCM(100mL)中的溶液中添加NMO(15.6mg，134mmol)，随后添加分子筛
将该反应混合物在室温下搅拌2小时。将分子筛滤出并且用DCM(50mL)洗涤。将DCM层用水(200mL)洗涤，经MgSO4干燥，并且然后在减压下浓缩。将残余物通过柱层析进行纯化以提供呈白色固体的标题化合物(12.0g，73.98％)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[183.2]。
5-4)4-氟-2-甲酰基苯甲酸的合成
在室温下，向4-氟-2-甲酰基苯甲酸甲酯(12.0g，65.9mmol)在THF(50mL)中的溶液中添加氢氧化锂(1+)(13.8g，329mmol)在H2O(50mL)中的溶液。搅拌2小时后，减压浓缩反应混合物以干燥THF。冷却至0℃之后，用1N-HCl酸化反应以将pH调节至4。将该反应混合物用乙酸乙酯(50mL x 2)萃取。经MgSO4干燥合并的乙酸乙酯层并在减压下浓缩，以产生白色晶体(10.0g，90.3％)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[169.2]。
5-5)6-氟-1,2-二氢酞嗪-1-酮的合成
在室温下，向4-氟-2-甲酰基苯甲酸(6.78g，40.3mmol)在MeOH(50mL)中的溶液中添加一水合肼(2.02mg，40.3mmol)。在搅拌30分钟之后，将反应混合物加热至80℃持续2小时。将反应混合物冷却至室温并在减压下浓缩。将残余物倾倒入水(150ml)中并且用乙酸乙酯(150mL x 2)萃取。经MgSO4干燥合并的乙酸乙酯层并在减压下浓缩以产生白色晶体(5.5g，83.07％)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[165.3。
5-6)3-(6-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮的合成
在0℃，向6-氟-1,2-二氢酞嗪-1-酮(100mg，0.609mmol)在DMF(2mL)中的溶液中加入2-甲基丙-2-醇钠(175mg，0.914mmol)。在搅拌30分钟之后，向反应混合物中添加3-溴哌啶-2,6-二酮(90mg，0.471mmol)并且在室温下搅拌6小时。将该反应混合物倾倒入水(20mL)中并且用乙酸乙酯(20mL x2)萃取。将合并的乙酸乙酯经MgSO4干燥并且在减压下浓缩。将残余物通过柱层析进行纯化以提供呈白色晶体的标题化合物(110.0mg，65.6％)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[276.6]。
[NMR]1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.11(s，1H)，8.50(s，1H)，8.38(dd，J＝8.86，544Hz，1H)，7.72-7.89(m，2H)，5.70-5.90(m，11H)，2.56-2.70(m，2H)，2.11-2.25(m，1H)
实施例6
化合物
的合成
6-1)4-氟-6-甲基苯甲酸甲酯的合成
基于实施例4-1的制备方法，从5-氟-2-甲基苯甲酸合成5-氟-2-甲基苯甲酸甲酯。
6-2)2-(溴甲基)-5-氟苯甲酸甲酯的合成
在室温下，向5-氟-2-甲基苯甲酸甲酯(20.0g，119.0mmol)在1,2-二氯乙烷(100m)中的溶液中添加1-溴吡咯烷-2,5-二酮(31.8g，178.0mmol)，随后添加过氧苯甲酸苯甲酰酯(1.92g，5.95mmol)。将该反应混合物加热至回流持续3小时。反应完成后，微红色消失。冷却后，将该反应混合物用水洗涤并且经MgSO4干燥并且在减压下浓缩。通过MPLC纯化产物。(HX/EA EA 0->5％)。(29.0g,产率:98.8％)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[248.4]。
6-3)5-氟-2-甲酰基苯甲酸甲酯的合成
在室温下，向2-(溴甲基)-5-氟苯甲酸甲酯(29.0g，117mmol)在DCM(100mL)中的溶液中添加NMO(20.6mg，176mmol)，随后添加分子筛
将该反应混合物在室温下搅拌2小时。将分子筛滤出并且用DCM(50mL)洗涤。将DCM层用水(200mL)洗涤，经MgSO4干燥，并且然后在减压下浓缩。将该残余物通过柱色谱法进行纯化以得到呈白色固体的标题化合物(15.0g，产率70.16％)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[183.2]。
6-4)5-氟-2-甲酰基苯甲酸的合成
在室温下，向5-氟-2-甲酰基苯甲酸甲酯(15.0g，82.3mmol)在THF(50mL)中的溶液中添加氢氧化锂(1+)(17.3g，412mmol)在H2O(50mL)中的溶液。搅拌2小时后，减压浓缩反应混合物以干燥THF。在冷却至0℃之后，用1M HCl酸化反应混合物以调节pH至4。将该反应混合物用乙酸乙酯(50mL x 2)萃取。经MgSO4干燥合并的乙酸乙酯层并在减压下浓缩，以产生白色晶体(12.0g，86.67％)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[169.2]。
6-5)7-氟-1,2-二氢酞嗪-1-酮的合成
在室温下，向5-氟-2-甲酰基苯甲酸(8.16g，48.5mmol)在MeOH(50mL)中的溶液中添加一水合肼(3.74mg，48.5mmol)。在搅拌30分钟之后，将反应混合物加热至80℃持续2小时。将反应混合物冷却至室温并在减压下浓缩。将残余物倾倒入水(150ml)中并且用乙酸乙酯(150mL x 2)萃取。经MgSO4干燥合并的乙酸乙酯层并在减压下浓缩，以产生白色晶体(6.5g，81.59％)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[165.3]。
6-6)3-(7-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮的合成
在0℃，向7-氟-1,2-二氢酞嗪-1-酮(500mg，3.05mmol)在DMF(5mL)中的溶液中加入2-甲基丙-2-醇钠(586mg，6.09mmol)。在搅拌30分钟之后，将3-溴哌啶-2,6-二酮(1.05mg，5.48mmol)添加到反应混合物中并且在室温下搅拌6小时。将该反应混合物倾倒入水(50mL)中并且用乙酸乙酯(50mL x2)萃取。将合并的乙酸乙酯经MgSO4干燥并且在减压下浓缩。将残余物通过柱层析进行纯化以提供呈白色晶体的标题化合物(300.0mg，35.78％)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[276.6]。
[NHR]1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.09(s，1H)，8.53(s，1H)，8.13(dd，J＝8.74，5.20Hz，1H)，7.87-8.00(m，2H)，5.76-5.88(m，11H)，2.54-2.68(m，2H)，2.10-2.20(m，1H)
实施例7
化合物
(基于方案2制备的)的合成
7-1)2-乙酰基-6-氟苯甲酸甲酯的合成
向2-乙酰基-6-氟苯甲酸甲酯(1.12g，4.81mmol)和三丁基(1-乙氧基乙烯基)锡(1.91g，5.29mmol)在甲苯(20ml)中的溶液添加四(三苯基膦)-钯(0)(557mg，0.48mmol)，并在100℃搅拌16小时。冷却后，添加5ml的1N-HCl并且将该混合物搅拌1小时。将有机层经MgSO4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过二氧化硅柱层析纯化，以提供呈黄色油状物的标题化合物(820mg，产率87.0％)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[196.8]。
7-2)2-乙酰基-6-氟苯甲酸的合成
向2-乙酰基-6-氟苯甲酸甲酯(810mg，4.13mmol)在THF(20ml)和水(10ml)中的溶液中添加LiOH(494mg，20.6mmol)并且在室温下搅拌20小时。将该溶液通过1N-HCl酸化直到pH为约3。添加100ml的EA并将该有机层经MgSO4干燥并在减压下浓缩以获得标题化合物。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[183.1]。
7-3)8-氟-4-甲基酞嗪-1(2H)-酮的合成
向2-乙酰基-6-氟苯甲酸(790mg，4.34mmol)在甲醇(23mL)中的溶液中添加一水合肼(261mg，5.20mmol)并且在室温下搅拌16小时。将沉淀物过滤并且用ACN(乙腈)洗涤以提供呈白色固体的标题化合物(612mg，79.2％)。MS(ESI，m/z)：[M+1]+＝[179.1]。
7-4)3-(8-氟-4-甲基-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2，6-二酮的合成
在0℃，向8-氟-4-甲基酞嗪-1(2H)-酮(534mg，3mmol)在THF(30mL)中的溶液中加入1M的二异丙基酰胺锂(LDA)(3.6ml，3.6mmol)，并搅拌20分钟。向溶液中加入3-溴哌啶-2，6-二酮(863mg，4.5mmol)，并且在80℃下搅拌2小时。将该反应混合物在减压下干燥。添加水(10ml)并且将该混合物搅拌1小时。将该反应混合物用1N-HCl酸化以调节pH至4。将沉淀过滤并且用水洗涤以提供呈白色固体的标题化合物(760mg，产率：86.5％)。MS(ESI，m/z)：[M+1]+＝[289.8]。
[NMR]1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.05(s，1H)，8.04-7.94(m，1H)，7.79(d，J＝7.9Hz，1H)，7.69(dd，J＝7.9，11.3Hz，1H)，5.71(be dd，J＝4.9，12.1Hz，1H)，3.0-2.83(m，1H)，2.64-2.56(m，2H)，2.55(s，3H)，2.17-2.05(m，1H).
实施例8
化合物
的合成
8-1)3-(8-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-4-甲基-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2，6-二酮的合成
将3-(8-氟-4-甲基-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮(0.104mmol)、2,4-二甲氧基苄胺(0.207mmol)和DIPEA(N,N-二异丙基乙胺)(0.312mmol)在NMP(N-甲基-吡咯烷酮)(1mL)中的溶液在微波上在120℃下辐射(irritated)2小时。将该反应混合物通过反向柱色谱法(C18，水(0.1％ FA)/ACN(0.1％ FA)，梯度)进行纯化以得到33mg的白色固体。(33mg，产率＝72％)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[437.0]。
8-2)3-(8-氨基-4-甲基-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮的合成
向3-(8-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-4-甲基-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮(14mg，0.032mmol)在0.7ml甲苯中的溶液中添加0.3ml TFA(三氟乙酸)并在80℃下搅拌1小时。将该反应混合物通过反向柱色谱法(C18，水(0.1％ FA)/ACN(0.1％ FA)，梯度)进行纯化以得到7.5mg的白色固体，产率＝82％。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[287.0]。
[NMR]1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.98(s,1H),7.54(t,J＝8.0Hz,1H),7.37(brs,2H),6.95(d,J＝8.2Hz,1H),6.88(d,J＝7.6Hz,1H),5.62(br dd,J＝5.3,12.0Hz,1H),3.0-2.82(m,1H),2.66-2.52(m,2H),2.39(s,3H),2.11-2.02(m,1H)。
实施例9
化合物
的合成
9-1)4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-6-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯的合成
将6-氟-1,2-二氢酞嗪-1-酮(100mg，0.36mmol)和哌嗪-1-甲酸叔丁酯(81.2mg，0.36mmol)溶解于NMP(1mL)中，在反应混合物中添加DIPEA(5当量)并搅拌120℃过夜。将该反应混合物用水淬灭并且用EA萃取并且用NH4Cl饱和水和盐水洗涤。将有机层经MgSO4干燥。将反应混合物加载到二氧化硅上并通过MPLC分离。(HX/EA 30％->50％持续10min)。获得呈油状的产物(110mg，产率：66％)，
9-2)3-(1-氧代-6-(哌嗪-1-基)酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮的合成
将4-[2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-6-基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯溶解在DCM(1ml)中的20％ TFA中并且在室温下反应2小时。将该反应通过在水中饱和的NaHCO3淬灭并且用EA萃取。将有机层经MgSO4干燥并蒸发。将该反应混合物通过MPLC进行纯化(MC/MEOH,0->10％)。获得呈白色固体的产物(产率：40mg/86％)。
[NMR]1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.24(s,1H)8.02(d,J＝9.05Hz,1H)7.47(dd,J＝8.93,2.57Hz,1H)7.31(s,0.5H)7.23(d,J＝2.45Hz,1H)7.13(s,0.5H)5.34(dd,J＝8.93,4.52Hz,1H)3.28-3.44(m,6H)2.85-2.95(m,4H)2.30-2.40(m,1H)2.16-2.30(m,2H)。
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[342.2
实施例10
化合物
的合成
10-1)4-(3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-6-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯的合成
将3-(7-氟-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-2-基)哌啶-2,6-二酮(100mg，0.36mmol)和哌嗪-1-甲酸叔丁酯(81.2mg，0.44mmol)溶解在NMP(1mL)中，在反应混合物中添加DIPEA(5当量)。并且在120℃下搅拌过夜。将该反应混合物用水淬灭并且用EA萃取并且用NH4Cl饱和水和盐水洗涤。将有机层经MgSO4干燥。将反应混合物加载到二氧化硅上并通过MPLC分离。(HX/EA 30％->50％持续10min)。获得呈油状的产物。(产率：110mg，66％)
10-2)3-(1-氧代-7-(哌嗪-1-基)酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮的合成
将4-[3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-6-基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(60mg，0.14mmol)溶解在DCM(1ml)中的20％ TFA中并且在室温下反应2小时。将该反应通过在水中饱和的NaHCO3淬灭并且用EA萃取。将有机层经MgSO4干燥并蒸发。将该反应混合物通过MPLC进行纯化(MC/MEOH,0->10％)。获得呈白色固体的产物(产率：40mg，86％)。
[NMR]1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.21-8.29(m,1H)7.76(d,J＝8.80Hz,1H)7.58(dd,J＝8.93,2.57Hz,1H)7.47(d,J＝2.45Hz,1H)7.28(s,0.5H)7.13(s,0.5H)5.34-5.44(m,1H)3.26-3.33(m,4H)2.81-2.91(m,3H)2.62-2.69(m,1H)2.55-2.62(m,1H)2.31-2.44(m,1H)2.15-2.31(m,2H)
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[342.2]。
实施例11：3-(8-甲氧基-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮的合成：
化合物
的合成
将3-(6-氟-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-2-基)哌啶-2,6-二酮(100mg，0.36mmol)溶解在DMSO(1ml)中并且在反应混合物中添加NaOMe(19.6mg，0.36mmol)。将反应混合物在室温下反应1小时。将有机溶剂去除并且用EA和H2O萃取。将该混合物通过MPLC进行纯化。获得呈白色固体的产物(产率：80mg，76％)。
[NMR]1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.04(br.s.,1H)8.40(s,1H)8.14-8.25(m,1H)7.42-7.49(m,2H)5.80(dd,J＝12.23,5.38Hz,1H)3.94(s,3H)2.86-2.99(m,1H)2.52-2.67(m,2H)2.07-2.17(m,1H)
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[288.2]。
实施例12：3-(7-甲氧基-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮的合成化合物
的合成
将3-(7-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮(100mg，0.36mmol)溶解在DMSO(1ml)中并且在反应混合物中添加NaOMe(19.6mg，0.36mmol)。将反应混合物在室温下反应1小时。将有机溶剂去除并且用EA和H2O萃取。将该混合物通过MPLC进行纯化。获得呈白色固体的产物(产率：78mg，75％)。
[NMR]1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.01-11.11(m,1H)8.38-8.45(m,1H)7.90-7.96(m,1H)7.65(d,J＝2.69Hz,1H)7.56(dd,J＝8.68,2.57Hz,1H)5.77-5.85(m,1H)3.93-3.98(m,3H)2.87-3.00(m,1H)2.53-2.70(m,2H)2.06-2.18(m,1H)
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[288.2]。
实施例13：3-(6-甲氧基-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮的合成化合物
的合成
将3-(6-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮(100mg，0.36mmol)溶解在DMSO(1ml)中并且在反应混合物中添加NaOMe(19.6mg，0.36mmol)。将反应混合物在室温下反应1小时。将有机溶剂去除并且用EA和H2O萃取。将该混合物通过MPLC进行纯化。获得呈白色固体的产物(产率：80mg，76％)。
[NMR]1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.01(s,1H)8.32(s,1H)7.88(t,J＝8.01Hz,1H)7.40(d,J＝8.31Hz,1H)7.44(d,J＝7.70Hz,1H)5.64(dd,J＝11.49,4.52Hz,1H)3.90(s,3H)2.83-2.96(m,1H)2.52-2.66(m,2H)2.03-2.13(m,1H)
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[288.2]。
实施例14：3-(5-甲氧基-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮的合成化合物
的合成
14-1)2-(溴甲基)-3-甲氧基苯甲酸甲酯的合成
在室温下，向2-甲基-3-甲氧基苯甲酸甲酯(11.7g，64.9mmol)在1,2-二氯乙烷(250ml)中的溶液中添加1-溴吡咯烷-2,5-二酮(11.5g，64.94mmol)，随后添加过氧苯甲酸苯甲酰酯(786mg，3.24mmol)。将该反应混合物加热至回流持续3小时。反应完成后，微红色消失。冷却后，将该反应用水洗涤并且经MgSO4干燥并且在减压下浓缩。将粗产物(16.5g，98.2％)不经进一步纯化而用于下一个反应。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[259.4]。
14-2)2-甲酰基-3-甲氧基苯甲酸甲酯的合成
在室温下，向2-(溴甲基)-3-甲氧基苯甲酸甲酯(14.1g，54.1mmol)在DCM(300mL)中的溶液里添加NMO(12.6g，108.1mmol)，随后添加分子筛
(50g)。将该反应混合物在室温下搅拌2小时。将分子筛滤出并且用DCM(100mL)洗涤。将DCM层用水(250mL)洗涤，经MgSO4干燥，并且然后在减压下浓缩。将残余物通过柱色谱法进行纯化以提供呈白色固体的标题化合物(8.3g，80.01％)。
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[195.0]。
14-3)2-甲酰基-3-甲氧基苯甲酸的合成
在室温下，向2-甲酰基-3-甲氧基苯甲酸甲酯(6.5g，33.6mmol)在THF(100mL)中的溶液里添加氢氧化锂(1+)(2.4g，100.5mmol)在H2O(100mL)中的溶液。搅拌2小时后，减压浓缩反应混合物以干燥THF。在冷却至0℃之后，用1N-HCl酸化反应混合物以调节pH至4。将该反应混合物用乙酸乙酯(250mL x 2)萃取。经MgSO4干燥合并的乙酸乙酯层并在减压下浓缩，以产生白色晶体(11.2g，82.6％)。
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[199.2]。
14-4)5-甲氧基酞嗪-1(2H)-酮的合成
在室温下，向2-甲酰基-3-甲氧基苯甲酸(8.2g，45.5mmol)在MeOH(20mL)中的溶液里添加一水合肼(10.3g，342mmol)。搅拌2小时后，将该反应混合物在减压下浓缩，倾倒入水(50ml)中，并且用乙酸乙酯(150mL x 2)萃取。经MgSO4干燥合并的乙酸乙酯层并在减压下浓缩，以产生白色晶体(9.2g，76.35％)。
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[176.9]。
14-5)3-(5-甲氧基-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮的合成
在0℃，向5-甲氧基酞嗪-1(2H)-酮(5.1g，28.9mmol)在THF(250mL)中的部分悬浮液中滴加1.0MLDA(37.4mL)。在搅拌30分钟之后，将3-溴哌啶-2,6-二酮分逐份添加到该反应中。将反应混合物加热至80℃并搅拌2小时。在反应完成时，将反应混合物冷却至室温并倒入水(100ml)中，用6N-HCl将pH调节至3～4，然后用乙酸乙酯萃取，将其经MgSO4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过MPLC纯化，以提供呈白色晶体的标题化合物(7.2g，86.5％)。
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[288.3]
[NMR]1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.06(s,1H),8.51(s,1H),7.87-7.77(m,2H),7.54-7.51(m,1H),5.85(m,1H),4.0(s,3H),2.98-2.90(m,1H),2.65-2.55(m,2H),2.14-2.09(m,1H)。
实施例15：3-(6-溴-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮的合成
15-1)5-溴-3-羟基异苯并呋喃-1(3H)-酮的合成
向5-溴邻苯二甲酰亚胺(5.2g，24.4mmol)和N-溴琥珀酰亚胺(5.6g，31.7mmol)在200ml 1,2-二氯乙烷中的混合物中加入AIBN(401mg，2.44mmol)，然后回流8小时。该反应随后进行TLC。滤出琥珀酰亚胺并将滤饼用1,2-二氯乙烷(50mL)洗涤。真空除去溶剂，留下残余物5.2g，向其中加入50ml水。在搅拌下回流此混合物4小时，然后冷却混合物，并滤出产物，用水中性洗涤并干燥，以提供灰白色晶体(4.85g，86.7％)。
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[229.6]和[230.5]。
15-2)6-溴酞嗪-1(2H)-酮的合成
在室温下，向5-溴-3-羟基-1，3-二氢-2-苯并呋喃-1-酮(1.5g，6.55mmol)在MeOH(50mL)中的溶液里添加一水合肼(315mg，9.82mmol)并且搅拌30分钟。将该反应回流5小时。将反应混合物冷却至室温并在减压下浓缩。将所得固体在乙酸乙酯中研磨以提供白色晶体(1.31g，5.82mmol)。
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[226.3]。
15-3)3-(6-溴-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮的合成
在0℃下，向THF(150mL)中的6-溴-1,2-二氢酞嗪-1-酮(1.31g，5.82mmol)的悬浮液中滴加1.0M LDA(7.33mL)。搅拌30分钟后，向反应混合物中分批加入3-溴哌啶-2,6-二酮。将反应混合物加热至80℃并搅拌2小时。在反应完成时，将反应混合物冷却至室温并倒入水(100ml)中，用6N-HCl将pH调节至3～4，然后用乙酸乙酯萃取，将其经MgSO4干燥并在减压下浓缩。将所得固体过滤并用乙酸乙酯洗涤，以得到白色晶体(1.73g，5.15mmol)。
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[337.2]。
[NMR]1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.08(s,1H),8.45(s,1H),8.28(s,1H),8.18-8.16(m,1H),8.06-8.04(m,1H),5.84-5.80(m,1H),2.93-2.90(m,1H),2.65-2.54(m,2H),2.15-2.12(m,1H)。
实施例16：3-(1-氧代-8-(哌嗪-1-基)酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮2HCl的合成
16-1)3-(1-氧代-8-(哌嗪-1-基)酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮二盐酸盐的合成
向3-(8-氟-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-2-基)哌啶-2,6-二酮(0.3g，1.09mmol)在DMA(4mL)中的溶液中添加哌嗪-1-甲酸叔丁酯(244mg，1.13mmol)，随后添加乙基双(丙烷-2-基)胺(423mg，3.24mmol)。将该混合物在120℃下搅拌5小时。将反应混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取。将有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，并浓缩。通过柱层析来纯化残留物以提供灰白色油(415mg，86.2％)。
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[442.4]。
16-2)3-(1-氧代-8-(哌嗪-1-基)酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮二盐酸盐的合成
向8-硝基-1,2-二氢酞嗪-1-酮(60mg，0.314mmol)在DMF(1mL)中的溶液中添加3-溴哌啶-2,6-二酮(90mg，0.471mmol)，随后添加K2CO3(129mg，0.942mmol)。将反应混合物加热至85℃持续5小时。冷却后，将该反应混合物倾倒入水(5mL)中并且用乙酸乙酯(5mL x2)萃取。将合并的乙酸乙酯经MgSO4干燥并且在减压下浓缩。将残余物通过柱层析进行纯化以提供呈白色晶体的标题化合物(68.0mg，71.7％)。
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[342.6]。
[NMR]1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.02(s,1H),8.35(s,1H),7.87-7.83(m,1H),7.53-7.51(m,1H),7.39-7.41(m,1H),5.55(m,1H),3.31-3.27(br,8H),2.88-2.80(m,1H),2.64-2.57(m,2H),2.50(br,1H),2.13-2.08(m,1H)。
实施例B：PROTAC合成
实施例21：2-((S)-4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-N-((2-(2-(2-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)甲基)乙酰胺的合成
连接接头和E3连接酶结合剂
步骤1)(2-(2-(2-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯的合成
在120℃下，在微波上，将3-(8-氟-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-2-基)哌啶-2,6-二酮(0.13mmol)、N-{2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙基}氨基甲酸叔丁酯(0.15mmol)、和DIPEA(N,N-二异丙基乙胺)(0.38mmol)在DMF(2mL)中的溶液辐射2小时。将该反应混合物用水稀释并用EtOAc萃取。将有机层用盐水洗涤，经MgSO4干燥，并且浓缩。将残余物通过柱层析进行纯化以得到如以上反应方案的产物。
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[504.0]。
步骤2)3-(8-((2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)乙基)氨基)-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮HCl的合成
将N-{2-[2-(2-{[3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基]氨基}乙氧基)乙氧基]乙基}氨基甲酸叔丁酯(0.1mmol)溶解于乙腈(1mL)中，并且在室温下添加4N-HCl在二噁烷中的溶液。反应在1小时内进行。将该反应混合物在真空中浓缩并且用于下一步骤而无需进一步纯化。
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[404.0]。
连接接头和POI配体
步骤3)2-((S)-4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-N-((2-(2-(2-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)甲基)乙酰胺的合成
向JQ-1羧酸(0.037mmol)、3-[8-({2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙基}氨基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-2-基]哌啶-2,6-二酮盐酸盐(0.041mmol)、EDCl(1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(0.041mmol)和Cl-HOBt(6-氯-1-羟基苯并三唑)(0.041mmol)在DMF(1mL)中的溶液中添加DIPEA(0.13mmol)。将该混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取。将有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，并浓缩。通过柱层析分离标题化合物。
1H NMR(400MHz,CDCl3)d 8.89(br,1H),8.64-8.57(m,1H),7.95(s,1H),7.41-7.39(m,4H),6.88-6.75(m,3H),5.64(m,1H),4.65(m,1H),3.81-3.45(m,14H),2.66(s,3H),2.39(s,3H),1.66(s,3H),
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[786.3]。
实施例22
2-[(9S)-7-(4-氯苯基)-4,5,13-三甲基-3-硫杂-1,8,11,12-四氮杂三环[8.3.0.02,6]十三-2(6),4,7,10,12-五烯-9-基]-N-(3-{2-[2-(2-{[3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢-1,2,3-苯并三嗪-5-基]氨基}乙氧基)乙氧基]乙氧基}苯基)乙酰胺
连接接头和E3连接酶结合剂
步骤1)N-(3-{2-[2-(2-{[3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢-1,2,3-苯并三嗪-5-基]氨基}乙氧基)乙氧基]乙氧基}苯基)氨基甲酸叔丁酯的合成
使3-(5-氟-4-氧代-3,4-二氢-1,2,3-苯并三嗪-3-基)哌啶-2,6-二酮(100mg，0.36mmol)、N-(3-{2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙氧基}苯基)氨基甲酸叔丁酯(136mg，0.40mmol)和DIPEA(N,N-二异丙基乙胺)在DMF(4mL)中的溶液在90℃下反应过夜。将该反应混合物用水稀释并用EtOAc萃取。将有机层用盐水洗涤，经MgSO4干燥，并且浓缩。将残余物通过柱色谱法进行纯化以得到以上反应方案的产物。(产率：69.5％，150mg)
步骤2)3-{5-[(2-{2-[2-(3-氨基苯氧基)乙氧基]乙氧基}乙基)氨基]-4-氧代-3,4-二氢-1,2,3-苯并三嗪-3-基}哌啶-2,6-二酮盐酸盐的合成
将N-(3-{2-[2-(2-{[3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢-1,2,3-苯并三嗪-5-基]氨基}乙氧基)乙氧基]乙氧基}苯基)氨基甲酸叔丁酯(0.10mmol)溶解于DCM(2ml)中，并且将在二噁烷(1ml)中的4N-HCl缓慢逐滴添加到该溶液中。将溶液超声处理10分钟。将溶剂蒸发并且将残余物溶解于MeOH中。将溶剂蒸发并且在真空下干燥以提供以上方案的标题化合物。(产率：75％，100mg)
连接接头和POI配体
步骤3)2-[(9S)-7-(4-氯苯基)-4,5,13-三甲基-3-硫杂-1,8,11,12-四氮杂三环[8.3.0.02,6]十三-2(6),4,7,10,12-五烯-9-基]-N-(3-{2-[2-(2-{[3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢-1,2,3-苯并三嗪-5-基]氨基}乙氧基)乙氧基]乙氧基}苯基)乙酰胺的合成
向2-[(9S)-7-(4-氯苯基)-4,5,13-三甲基-3-硫杂-1,8,11,12-四氮杂三环[8.3.0.02,6]十三-2(6),4,7,10,12-五烯-9-基]乙酸(JQ-1羧酸)(50mg，0.13mmol)、3-{5-[(2-{2-[2-(3-氨基苯氧基)乙氧基]乙氧基}乙基)氨基]-4-氧代-3,4-二氢-1,2,3-苯并三嗪-3-基}哌啶-2,6-二酮盐酸盐(73.1mg，0.14mmol)、EDCl(1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺)(26.3mg，0.14mmol)、以及Cl-HOBt(6-氯-1-羟基苯并三唑)(23.3mg，0.14mmol)在DMF(2ml)中的溶液中添加DIPEA(78.4μL，0.44mmol)。将该混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取。将有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，并浓缩。通过柱色谱法分离所希望的产物。(产率：15.5％，17mg)。
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[881.3]。
[NMR]1H NMR(400MHz,DMSO-d6)d ppm 11.18(s,1H),10.30(s,1H),8.34(t,J＝5.14Hz,1H),7.77(t,J＝8.07Hz,1H),7.39-7.53(m,3H),7.36(s,1H),7.16-7.25(m,2H),7.09-7.16(m,1H),6.94-7.03(m,1H),6.62(dd,J＝8.19,1.59Hz,1H),5.86(dd,J＝11.86,5.01Hz,1H),4.60(t,J＝7.09Hz,1H),3.97-4.08(m,2H),3.64-3.79(m,4H),3.61(s,4H),3.50(d,J＝7.09Hz,2H),3.40(q,J＝5.05Hz,2H),2.83-2.99(m,1H),2.57-2.70(m,5H),2.41(s,3H),2.23(dd,J＝10.15,5.01Hz,1H),1.96(d,J＝13.69Hz,1H),1.62(s,3H)
实施例23：2-((S)-4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-N-(3-(2-(2-(2-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯基)乙酰胺的合成
通过以下类似于实施例22的过程合成标题化合物。
将3-(8-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮(541mg，1.97mmol)、N-(3-{2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙氧基}苯基)氨基甲酸叔丁酯(870mg，2.56mmol)和DIPEA(1ml)在NMP(10mL)中的溶液在100℃下反应6小时。将该反应混合物通过反相柱色谱法(水(0.1％ FA)/ACN(0.1％FA)＝95/1至0/100梯度)进行纯化，并且将相应的部分在减压下去除。获得980mg的淡黄色固体。(产率＝83.6％)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[596.2]。
向(3-(2-(2-(2-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(1.35g，2.27mmol)在27ml DCM中的溶液中加入6.75ml TFA并在室温下搅拌1小时。将溶剂蒸发并且在真空中干燥。(产率＝2.23g，作为约5当量的TFA盐)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[496.0]。
向2-[(9S)-7-(4-氯苯基)-4,5,13-三甲基-3-硫杂-1,8,11,12-四氮杂三环[8.3.0.02,6]十三-2(6),4,7,10,12-五烯-9-基]乙酸(401mg，1mmol)、3-(8-((2-(2-(2-(3-氨基苯氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基)-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮(496mg，1mmol)和DIPEA(539μl，3mmol)在3.3ml DMF中的溶液中在0℃下加入EDCl-HCl(230mg，1.2mmol)和HOBt(187mg，1.1mmol)，并在50℃下搅拌2小时。将该反应混合物通过反向柱层析进行纯化以得到产物。(产率：390mg，44.4％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.03(s,1H),10.30(s,1H),8.83(t,J＝5.14Hz,1H),8.22(s,1H),7.62(t,J＝8.01Hz,1H),7.49(d,J＝8.6Hz,2H),7.43(d,J＝8.6Hz,2H),7.36(s,1H),7.23-7.11(m,2H),6.91(d,J＝7.95Hz,2H),6.62(d,J＝7.49Hz,1H),5.76-5.66(m,1H),4.60(t,J＝7.09Hz,1H),3.76(m,2H),3.67(m,2H),3.60(m,4H),3.50(m,2H),3.38(m 2H),2.93-2.82(m,1H),2.63-2.53(m,5H),2.48-2.38(m,4H),2.10(m,1H),1.63(s,3H).
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[878.4]和[880.4]。
实施例24：
2-[(9S)-7-(4-氯苯基)-4,5,13-三甲基-3-硫杂-1,8,11,12-四氮杂三环[8.3.0.02,6]十三-2(6),4,7,10,12-五烯-9-基]-N-(4-{2-[2-(2-{[3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基]氨基}乙氧基)乙氧基]乙氧基}苯基)乙酰胺
通过以下类似于实施例23的过程合成标题化合物。
在90℃下，使3-(8-氟-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-2-基)哌啶-2,6-二酮(50mg，0.182mmol)、N-(3-{2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙氧基}苯基)氨基甲酸叔丁酯(74.2mg，0.218mmol)和DIPEA(129μL，0.727mmol)在DMF(4mL)中的溶液反应过夜。将该反应混合物用水稀释并用EtOAc萃取。将有机层用盐水洗涤，经MgSO4干燥，并且浓缩。将残余物通过柱层析进行纯化以得到产物。将产物加入到二氯甲烷的溶液中并向其中加入在二噁烷中的4N-HCl。将该反应混合物搅拌1小时并且在真空中干燥(2个步骤，产率：36.2％，35mg)
向JQ-1羧酸(35mg，0.087mmol)、3-{8-[(2-{2-[2-(4-氨基苯氧基)乙氧基]乙氧基}乙基)氨基]-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-2-基}哌啶-2,6-二酮盐酸盐(46.4mg，0.087mmol)、EDCl-HCl(18.4mg，0.096mmol)和HOBt(16.3mg，0.096mmol)在DMF中的溶液中添加DIPEA(54.9μL，0.306mmol)。将该混合物在室温下搅拌4小时。将反应混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取。将有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，并浓缩。通过柱色谱法分离所希望的产物。
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝879.3
[NMR]1H NMR(400MHz,DMSO-d6)d ppm 11.03(s,1H),10.18(s,1H),,8.83(t,J＝5.01Hz,1H),8.22(s,1H),7.77(d,J＝8.31Hz,2H),7.60-7.67(m,1H),7.40-7.56(m,4H),7.35-7.42(m,2H),6.80-6.91(m,4H),4.59(t,J＝7.09Hz,1H),4.06-4.14(m,1H),3.96-4.04(m,2H),3.61-3.73(m,2H),3.51-3.60(m,6H),3.38-3.50(m,5H),2.56-2.65(m,4H),2.42(s,3H),1.63(s,3H)
实施例25：
2-((S)-4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-N-(4-(2-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-6-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯基)乙酰胺的合成
通过以下类似于实施例21的过程合成标题化合物。
在120℃下，在微波上，将3-(6-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮(50.0mg，0.182mmol)、(4-(2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(68.0mg，0.200mmol)和DIPEA(323μL，1.82mmol)在DMF(2mL)中的溶液辐射5小时。将该反应混合物用水稀释并用EtOAc萃取。将有机层用盐水洗涤，经MgSO4干燥，并且浓缩。将残余物通过柱层析进行纯化以得到产物。(产率：20.0mg，18.5％)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[596.8]
在室温下，将(4-(2-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-6-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(15.0mg，0.025mmol)在DCM(1mL)中的20％ TFA中的溶液进行搅拌。将该反应混合物在真空中浓缩并且用于下一步骤而无需进一步纯化。(产率：10.0mg，80.1％)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[496.8]。
将JQ-1羧酸(7.02mg，0.017mmol)、EDCl(3.36mg，0.018mmol)、HOBt(2.97mg，0.018mmol)和DIPEA(0.01ml，0.056mmol)在DMF(1mL)中的溶液在室温下搅拌0.5小时。添加3-(6-((2-(2-(2-(4-氨基苯氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基)-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮(7.89mg，0.016mmol)。将该混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取。将有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，并浓缩。通过柱色谱法分离该混合物。(产率：7.0mg，50.1％)。
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝879.4
[NMR]1H NMR(400MHz,DMSO-d6)d ppm 10.99(s,1H)10.18(s,1H)8.17(s,1H)7.91(d,J＝8.80Hz,1H)7.39-7.56(m,6H)7.12(dd,J＝8.86,2.26Hz,1H)6.94(t,J＝5.44Hz,1H)6.88(d,J＝8.93Hz,2H)6.82(d,J＝2.20Hz,1H)5.68-5.76(m,1H)4.59(t,J＝7.09Hz,1H)3.98-4.07(m,3H)3.69-3.76(m,2H)3.57-3.66(m,7H)3.46(d,J＝7.21Hz,2H)2.84-2.95(m,1H)2.42(s,2H)1.96(d,J＝14.31Hz,3H)1.63(s,3H)1.21-1.27(m,3H)。
实施例26：
2-((S)-4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-N-(4-(2-(2-(2-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-6-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯基)乙酰胺
通过以下类似于实施例21的过程合成标题化合物。
在120℃下，在微波上，将3-(7-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮(50.0mg，0.182mmol)、(4-(2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(68.0mg，0.200mmol)和DIPEA(323μL，1.82mmol)在DMF(2mL)中的溶液辐射5小时。将该反应混合物用水稀释并用EtOAc萃取。将有机层用盐水洗涤，经MgSO4干燥，并且浓缩。将残余物通过柱层析进行纯化以得到产物。(产率：25.0mg，23.1％)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[596.8]。
在室温下搅拌(4-(2-(2-(2-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-6-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(15.0mg，0.025mmol)在DCM(1mL)中的20％ TFA中的溶液。将该反应混合物在真空中浓缩并且用于下一步骤而无需进一步纯化。(产率：18.0mg，86.5％)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[496.8]。
将JQ-1羧酸(16.0mg，0.040mmol)、EDCl(7.66mg，0.040mmol)、HOBt(6.78mg，0.040mmol)和DIPEA(33μl，0.18mmol)在DMF(1mL)中的溶液在室温下搅拌0.5小时。添加3-(7-((2-(2-(2-(4-氨基苯氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基)-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮(18.0mg，0.036mmol)。将该混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取。将有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，并浓缩。通过柱色谱法分离该混合物。
(产率：8.0mg，25.1％)
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝879.4
[NMR]1H NMR(400MHz,DMSO-d6)ppm 11.00(s,1H)10.18(s,1H)8.14(s,1H)7.62(d,J＝9.29Hz,1H)7.39-7.56(m,6H)7.18-7.23(m,2H)6.84-6.97(m,2H)5.70-5.78(m,1H)4.55-4.62(m,1H)3.98-4.08(m,3H)3.69-3.76(m,2H)3.41 -3.66(m,9H)2.55-2.64(m,2H)2.42(s,2H)1.89-2.02(m,3H)1.65(br.s.,3H)1.19-1.28(m,3H)。
实施例27：
2-[(9S)-7-(4-氯苯基)-4,5,13-三甲基-3-硫杂-1,8,11,12-四氮杂三环[8.3.0.02,6]十三-2(6),4,7,10,12-五烯-9-基]-N-[4-(2-{2-[2-(2-{[3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基]氨基}乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)苯基]乙酰胺
通过以下类似于实施例21的过程合成标题化合物。
向2-[(9S)-7-(4-氯苯基)-4,5,13-三甲基-3-硫杂-1,8,11,12-四氮杂三环[8.3.0.02,6]十三-2(6),4,7,10,12-五烯-9-基]乙酸(20mg，0.050mmol)、3-{8-[12-(4-氨基苯氧基)-4,7,10-三氧杂-1-氮杂十二烷-1-基]-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-2-基}哌啶-2,6-二酮盐酸盐(28.7mg，0.050mmol)、EDCl-HCl(10.5mg，0.055mmol)以及HOBt(9.31mg，0.055mmol)在DMF中的溶液里添加DIPEA(31.3μL，0.175mmol)。将该混合物在室温下搅拌4小时。将反应混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取。将有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，并浓缩。通过柱色谱法分离所希望的产物。
(产率：8.7％，4mg)
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝923.5
[NMR]1H NMR(400MHz,DMSO-d6)d ppm 11.03(s,1H),10.18(s,1H),,8.83(t,J＝5.01Hz,1H),8.22(s,1H),7.78(d,J＝8.31Hz,2H),7.60-7.67(m,1H),7.44-7.56(m,4H),7.39-7.44(m,2H),6.83-6.94(m,4H),4.59(t,J＝7.09Hz,1H),4.06-4.14(m,1H),3.98-4.06(m,2H),3.63-3.75(m,4H),3.53-3.62(m,8H),3.40-3.53(m,5H),2.56-2.65(m,4H),2.42(s,3H),1.63(s,3H)。
实施例28：
2-((S)-4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-N-(4-(2-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-6-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯基)乙酰胺
通过以下类似于实施例21的过程合成标题化合物：
将3-(6-氟-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-2-基)哌啶-2,6-二酮(1.05g，3.82mmol)和2-(2-(2-(2-(4-硝基苯氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙-1-胺(1.0g，3.18mmol)溶解在NMP(4ml)中。在反应混合物中添加DIPEA(4.53ml，25.5mmol)，使其在120℃下反应过夜。将该反应混合物用水稀释并用EtOAc萃取。将有机层用盐水洗涤，经MgSO4干燥，并且浓缩。将残余物通过柱层析进行纯化以得到产物。(产率：70.0mg，67.6％)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[570.6]。
将3-(6-((2-(2-(2-(2-(4-硝基苯氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基)-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮(70.0mg，0.123mmol)溶解于MeOH(3ml)中，并向其中加入20mg的10％ Pd/C(湿)。将该溶液在H2下在气囊中搅拌1小时。将Pd/C过滤并且将该混合物在减压下浓缩以提供纯度为99％的标题化合物。(产率：60.0mg，90.4％)。
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝540.6
将JQ-1羧酸(49.0mg，0.12mmol)、EDCl(38.4mg，0.20mmol)、HOBt(33.9mg，0.20mmol)和DIPEA(0.10ml，0.556mmol)在DMF(1mL)中的TA溶液在室温下搅拌0.5小时。添加3-(6-((2-(2-(2-(2-(4-氨基苯氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基)-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮(60.0mg，0.11mmol)。将该混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取。将有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，并浓缩。通过柱色谱法分离该混合物。
(产率：25.0mg，24.4％)
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝923.5
[NMR]1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.99(s,1H),10.19(s,1H),8.15-8.19(m,1H),7.91(d,J＝8.80Hz,1H),7.40-7.56(m,6H),7.12(dd,J＝8.86,2.02Hz,1H),6.86-6.97(m,3H),6.81(d,J＝1.96Hz,1H),5.73(br dd,J＝11.98,4.89Hz,1H),4.59(t,J＝7.03HZ,1H),3.99-4.08(m,2H),3.67-3.76(m,2H),3.52-3.64(m,10H),3.38-3.51(m,3H),3.16(br,1H),2.69-2.95(m,1H),2.55 -2.65(m,5H),2.38-2.47(m,4H),1.98-2.14(m,1H),1.63(s,3H)。
实施例29
2-((S)-4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-N-(4-(2-(2-(2-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-6-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯基)乙酰胺
通过以下类似于实施例21的过程合成标题化合物。
将3-(7-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮(50mg，0.182mmol)和2-(2-(2-(2-(4-硝基苯氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙-1-胺(68.5mg，0.218mmol)溶解在NMP(4ml)中，并且将DIPEA(0.323mL，1.82mmol)添加到反应混合物中，将其在120℃下反应过夜。将该反应混合物用水稀释并用EtOAc萃取。将有机层用盐水洗涤，经MgSO4干燥，并且浓缩。将残余物通过柱层析进行纯化以得到产物。
(产率：70.0mg，67.6％)
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝570.6
将3-(7-((2-(2-(2-(2-(4-硝基苯氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基)-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮(70.0mg，0.123mmol)溶解于MeOH(3ml)中，并向其中加入20mg的10％ Pd/C(湿)。将该溶液在H2下在气囊中搅拌1小时。将Pd/C过滤并且将该混合物在减压下浓缩以提供纯度为99％的标题化合物。
(产率：60.0mg，90.4％)MS(ESI,m/z):[M+1]+＝540.6
将JQ-1羧酸(49.0mg，0.12mmol)、EDCl(38.4mg，0.20mmol)、HOBt(33.9mg，0.20mmol)和DIPEA(0.10ml，0.556mmol)在DMF(1mL)中的溶液在室温下搅拌0.5小时。添加3-(7-((2-(2-(2-(2-(4-氨基苯氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基)-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮(60.0mg，0.11mmol)。将该混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取。将有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，并浓缩。通过柱色谱法分离该混合物。
(产率：25.0mg，20.4％)
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝923.5
[NMR]1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.00(s,1H),10.19(s,1H),8.14(s,1H),7.63(d,J＝8.44Hz,1H),7.38-7.56(m,6H),7.17-7.24(m,2H),6.86-7.11(m,3H),5.75(br dd,J＝12.04,5.07Hz,1H),4.47-4.68(m,1H),3.98-4.24(m,2H),3.66-3.78(m,2H),3.43-3.64(m,11H),3.07-3.29(m,2H),2.84-3.00(m,1H),2.53-2.64(m,6H)2.42(s,3H),1.89-2.15(m,1H),1.63(s,3H)。
实施例30
2-[(9S)-7-(4-氯苯基)-4,5,13-三甲基-3-硫杂-1,8,11,12-四氮杂三环[8.3.0.02,6]十三-2(6),4,7,10,12-五烯-9-基]-N-(3-{2-[2-(2-{[2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-5-基]氨基}乙氧基)乙氧基]乙氧基}苯基)乙酰胺
通过以下类似于实施例20的过程合成标题化合物。
向2-[(9S)-7-(4-氯苯基)-4,5,13-三甲基-3-硫杂-1,8,11,12-四氮杂三环[8.3.0.02,6]十三-2(6),4,7,10,12-五烯-9-基]乙酸(50mg，0.125mmol)、3-{8-[(2-{2-[2-(3-氨基苯氧基)乙氧基]乙氧基}乙基)氨基]-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-2-基}哌啶-2,6-二酮盐酸盐(66.4mg，0.125mmol)、EDCl-HCl(26.3mg，0.137mmol)以及HOBt(23.3mg，0.137mmol)在DMF中的溶液中添加DIPEA(78.4μL，0.437mmol)。将该混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取。将有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，并浓缩。通过柱色谱法分离所希望的产物。
(产率：7.8％，8.61mg)
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝878.4
[NMR]1H NMR(400MHz,DMSO-d6)d 11.03(s,1H),10.30(s,1H),8.65(s,1H),7.52-7.61(m,1H),7.45-7.52(m,2H),7.31-7.45(m,4H),7.09-7.24(m,2H),7.02(d,J＝8.31Hz,1H),6.83(t,J＝5.62Hz,1H),6.62(dd,J＝8.07,1.71Hz,1H),5.75(dd,J＝12.10,5.01Hz,1H),4.60(t,J＝7.09Hz,1H),3.95-4.08(m,2H),3.69-3.76(m,2H),3.55-3.69(m,6H),3.50(d,J＝7.09Hz,2H),3.41(q,J＝5.62Hz,2H),2.83-2.98(m,1H),2.41(s,3H),1.99-2.14(m,1H),1.62(s,3H)。
实施例31：
2-((S)-4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-N-((1-(2-(2-(2-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)乙酰胺
步骤1)(S)-2-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-N-(丙-2-炔-1-基)乙酰胺的合成
向JQ-1羧酸(160mg；0.4mmol)、丙-2-炔-1-胺(26.4mg；0.5mmol)、EDCl-HCl(84.2mg；0.44mmol)和HOBt(74.4mmol，0.44mmol)在DMF(2ml)中的溶液中添加DIPEA(181mg；1.4mmol)。将该混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取。将有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，并浓缩。将所得残余物通过使用DCM：MeOH(0～10％)的柱色谱法纯化，以提供呈灰白色油状物的标题化合物(159mg；87.8％)。
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝439.0
步骤2)3-(8-((2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙基)氨基)-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮的合成
向3-(8-氟-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-2-基)哌啶-2,6-二酮(100mg；0.36mmol)和1-(2-氨基乙氧基)-2-(2-叠氮基乙氧基)乙烷(76mg；0.44mmol)在NMP(3mL)中的溶液中，在室温下，添加乙基双(丙-2-基)胺。将反应混合物在110℃下加热16小时。冷却后，将该反应混合物倾倒入水(10mL)中并且用乙酸乙酯(20mL x2)萃取。将合并的乙酸乙酯经MgSO4干燥并且在减压下浓缩。将残余物通过使用DCM/MeOH(0～10％)的柱层析纯化，以提供标题化合物(89mg，57％)。
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝430.3
步骤3)2-((S)-4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-N-((1-(2-(2-(2-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)乙酰胺
向2-[(9S)-7-(4-氯苯基)-4,5,13-三甲基-3-硫杂-1,8,11,12-四氮杂三环[8.3.0.02,6]十三-2(6),4,7,10,12-五烯-9-基]-N-(丙-2-炔-1-基)乙酰胺(20mg；0.045mmol)和3-(8-((2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙基)氨基)-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮(18.7mg，0.045mmol)在THF/H2O(5mL/5mL)中的溶液中在25℃，加入抗坏血酸钠(1.81mg，0.0091mmol)和硫酸铜(1.46mg，0.0091mmol)。反应在2小时内进行。将反应混合物倒入50mL水中，用EA(50mL x2)萃取，并且经MgSO4干燥。将反应混合物加载到二氧化硅上并通过柱层析分离(DCM/MeOH 0％->10％)以得到呈白色晶体的标题化合物(18.0mg，16.1％)。
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝867.3
实施例32：
2-((S)-4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-N-((1-(2-(2-(2-(2-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)乙酰胺
通过以下类似于实施例31的过程合成标题化合物。
在室温下，向3-(8-氟-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-2-基)哌啶-2,6-二酮(100mg，0.36mmol)和2-(2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙-1-胺(96.3，0.44mmol)在NMP(3mL)中的溶液中添加乙基双(丙烷-2-基)胺(141mg，1.1mmol)。将反应混合物在110℃下加热16小时。冷却后，将该反应混合物倾倒入水(10mL)中并且用乙酸乙酯(20mL x2)萃取。将合并的乙酸乙酯经MgSO4干燥并且在减压下浓缩。将所得残余物通过使用DCM/MeOH(0～10％)的柱色谱法纯化，以提供标题化合物(92mg，54％)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[474.5]。
向2-[(9S)-7-(4-氯苯基)-4,5,13-三甲基-3-硫杂-1,8,11,12-四氮杂三环[8.3.0.02,6]十三-2(6),4,7,10,12-五烯-9-基]-N-(丙-2-炔-1-基)乙酰胺(20mg，0.045mmol)和3-[8-(12-叠氮基-4,7,10-三氧杂-1-氮杂十二烷-1-基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-2-基]哌啶-2,6-二酮(21.6mg，0.045mmol)在THF/H2O(5mL/5mL)中的溶液中在25℃，加入抗坏血酸钠(1.81mg，0.0091mmol)和硫酸铜(1.46mg，0.0091mmol)。反应在2小时内进行。将反应混合物倒入50mL水中，并且用EA(50mL x2)萃取，并且经MgSO4干燥。将反应混合物负载在二氧化硅上并且通过柱层析分离以提供呈白色晶体的标题化合物(18.0mg，43.3％)。
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝912.5。
实施例33
2-[(9S)-7-(4-氯苯基)-4,5,13-三甲基-3-硫杂-1,8,11,12-四氮杂三环[8.3.0.02,6]十三-2(6),4,7,10,12-五烯-9-基]-N-[(1-{2-[2-(2-{[2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-5-基]氨基}乙氧基)乙氧基]乙基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基]乙酰胺
通过以下类似于实施例31的过程合成标题化合物。
在120℃下，将3-(5-氟-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-2-基)哌啶-2,6-二酮(100mg，0.36mmol)、1-(2-氨基乙氧基)-2-(2-叠氮基乙氧基)乙烷(82.3mg，0.47mmol)和DIPEA(259μL，1.45mmol)在NMP(4mL)中的溶液反应过夜。将该反应混合物用水稀释并用EtOAc萃取。将有机层用盐水洗涤，经MgSO4干燥，并且浓缩。将残余物通过柱层析进行纯化以得到产物。(产率：12.8％，20mg)
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝430.8
在THF：H2O(1：1)中添加2-[(9S)-7-(4-氯苯基)-4,5,13-三甲基-3-硫杂-1,8,11,12-四氮杂三环[8.3.0.02,6]十三-2(6),4,7,10,12-五烯-9-基]-N-(丙-2-炔-1-基)乙酰胺和3-[5-({2-[2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基]乙基}氨基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-2-基]哌啶-2,6-二酮。将抗坏血酸钠和硫酸铜加入到混合物中。将反应混合物加热至100℃持续2小时。将该反应混合物冷却至室温并且用EA萃取，并且经MgSO4干燥。通过柱色谱法分离所希望的产物。
(产率：38.4％，15.2mg)。
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝870.4
[NMR]1H NMR(400MHz,DMSO-d6)d ppm 11.02(s,1H),8.76(t,J＝5.87Hz,1H),8.63(s,1H),7.93(s,1H),7.55(t,J＝7.95Hz,1H),7.46(d,J＝8.31Hz,2H),7.38(d,J＝8.07Hz,3H),7.01(d,J＝8.07Hz,1H),6.80(t,J＝5.50Hz,1H),5.69-5.80(m,1H),4.52(t,J＝6.97Hz,1H),4.44-4.49(m,2H),4.36(d,J＝5.38Hz,2H),3.80(t,J＝5.26Hz,2H),3.58(t,J＝5.75Hz,2H),3.53(s,4H),3.37(q,J＝5.79Hz,2H),3.23-3.30(m,2H),2.81-2.99(m,1H),2.60-2.65(m,1H),2.58(s,4H),2.38(s,3H),2.01-2.14(m,1H),1.59(s,3H)。
实施例34：
2-[(9S)-7-(4-氯苯基)-4,5,13-三甲基-3-硫杂-1,8,11,12-四氮杂三环[8.3.0.02,6]十三-2(6),4,7,10,12-五烯-9-基]-N-{[1-(2-{2-[2-(2-{[2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-5-基]氨基}乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙基)-1H-1,2,3-三唑-4-基]甲基}乙酰胺
通过以下类似于实施例31的过程合成标题化合物。
在120℃下，将3-(5-氟-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-2-基)哌啶-2,6-二酮(100mg，0.36mmol)、1-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]-2-(2-叠氮基乙氧基)乙烷(103mg，0.472mmol)和DIPEA(259μL，1.45mmol)在NMP(4mL)中的溶液反应过夜。将该反应混合物用水稀释并用EtOAc萃取。将有机层用盐水洗涤，经MgSO4干燥，并且浓缩。将残余物通过柱层析进行纯化以得到产物。(产率：11.6％，20mg)
在THF：H2O(1：1,2mL)中添加2-[(9S)-7-(4-氯苯基)-4,5,13-三甲基-3-硫杂-1,8,11,12-四氮杂三环[8.3.0.02,6]十三-2(6),4,7,10,12-五烯-9-基]-N-(丙-2-炔-1-基)乙酰胺(20mg，0.046mmol)和3-[5-(12-叠氮基-4,7,10-三氧杂-1-氮杂十二烷-1-基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-2-基]哌啶-2,6-二酮(21.6mg，0.046mmol)。将抗坏血酸钠(1.81mg，0.009mmol)和硫酸铜(1.46mg，0.009mmol)添加到该混合物中。将反应混合物加热至100℃持续2小时。将该反应混合物冷却至室温，用EA萃取，并且然后经MgSO4干燥。通过柱色谱法分离所希望的产物。
(产率：12.6％，5.23mg)。
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝914.4
[NMR]1H NMR(400MHz,DMSO-d6)d ppm 11.02(s,1H),8.74(t,J＝5.87Hz,1H),8.64(s,1H),7.92(s,1H),7.57(t,J＝7.95Hz,1H),7.47(d,J＝8.80Hz,3H),7.38(d,J＝8.31Hz,4H),7.02(d,J＝8.31Hz,1H),6.81(t,J＝5.62Hz,1H),4.52(t,J＝7.21Hz,1H),4.43-4.56(m,2H),4.36(d,J＝5.87Hz,2H),3.78(t,J＝5.26Hz,2H),3.61(t,J＝5.75Hz,2H),3.51-3.56(m,2H),3.48(t,J＝4.52Hz,7H),3.39(d,J＝5.62Hz,2H),3.27(t,J＝6.72Hz,2H),2.59(s,3H),2.36-2.44(m,3H),1.56-1.66(m,3H)。
实施例35：
2-[(9S)-7-(4-氯苯基)-4,5,13-三甲基-3-硫杂-1,8,11,12-四氮杂三环[8.3.0.02,6]十三-2(6),4,7,10,12-五烯-9-基]-N-[2-(2-{2-[4-({[3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基]氨基}甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基]乙氧基}乙氧基)乙基]乙酰胺
通过以下类似于实施例31的过程合成标题化合物：
向2-[(9S)-7-(4-氯苯基)-4,5,13-三甲基-3-硫杂-1,8,11,12-四氮杂三环[8.3.0.02,6]十三-2(6),4,7,10,12-五烯-9-基]乙酸(50mg，0.125mmol)、1-(2-氨基乙氧基)-2-(2-叠氮基乙氧基)乙烷(28.2mg，0.162mmol)、EDCl-HCl(26.3mg，0.137mmol)以及HOBt(23.3mg，0.137mmol)在DMF中的溶液中添加DIPEA(78.4μL，0.437mmol)。将该混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取。将有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，并浓缩。通过柱色谱法分离所希望的产物。(产率：72.0％，50mg)
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝557.5
在THF：H2O(1：1，3mL)中添加N-{2-[2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基]乙基}-2-[(9S)-7-(4-氯苯基)-4,5,13-三甲基-3-硫杂-1,8,11,12-四氮杂三环[8.3.0.02,6]十三-2(6),4,7,10,12-五烯-9-基]乙酰胺(50mg，0.090mmol)和3-{1-氧代-5-[(丙-2-炔-1-基)氨基]-1,2-二氢酞嗪-2-基}哌啶-2,6-二酮(36.2mg，0.117mmol)。将抗坏血酸钠(3.56mmol，0.018mmol)和硫酸铜(2.86mg，0.018mmol)添加到该混合物中。将反应混合物加热至100℃持续2小时。将该反应混合物冷却至室温，用EA萃取，并且然后经MgSO4干燥。通过柱色谱法分离所希望的产物。
(产率：20.4％，15.8mg)。
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝867.4
[NMR]1H NMR(400MHz,DMSO-d6)d ppm 11.02(s,1H),9.07(t,J＝5.26Hz,1H),8.20-8.30(m,2H),8.03(s,1H),7.63(t,J＝7.95Hz,1H),7.38-7.51(m,4H),6.91-7.05(m,2H),4.45-4.55(m,5H),3.80(t,J＝5.14Hz,2H),3.45-3.56(m,5H),3.37-3.44(m,2H),3.15-3.29(m,4H),2.80-2.95(m,1H),2.56-2.65(m,5H),2.36-2.42(m,3H),1.57-1.65(m,4H)。
实施例36：
2-[(9S)-7-(4-氯苯基)-4,5,13-三甲基-3-硫杂-1,8,11,12-四氮杂三环[8.3.0.02,6]十三-2(6),4,7,10,12-五烯-9-基]-N-{2-[2-(2-{2-[4-({[3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基]氨基}甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基]乙氧基}乙氧基)乙氧基]乙基}乙酰胺
通过以下类似于实施例31的过程合成标题化合物。
向2-[(9S)-7-(4-氯苯基)-4,5,13-三甲基-3-硫杂-1,8,11,12-四氮杂三环[8.3.0.02,6]十三-2(6),4,7,10,12-五烯-9-基]乙酸(50mg，0.125mmol)、1-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]-2-(2-叠氮基乙氧基)乙烷(40.8mg，0.187mmol)、EDCl-HCl(26.3mg，0.137mmol)以及HOBt(23.3mg，0.137mmol)在DMF中的溶液中添加DIPEA(78.4μL，0.437mmol)。将该混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取。将有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，并浓缩。通过柱色谱法分离所希望的产物。(产率：66.5％，50mg)
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝601.3
在THF：H2O(1：1，3mL)中添加N-(2-{2-[2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙基)-2-[(9S)-7-(4-氯苯基)-4,5,13-三甲基-3-硫杂-1,8,11,12-四氮杂三环[8.3.0.02,6]十三-2(6),4,7,10,12-五烯-9-基]乙酰胺(50mg，0.083mmol)和3-{1-氧代-8-[(丙-2-炔-1-基)氨基]-1,2-二氢酞嗪-2-基}哌啶-2,6-二酮(33.6mg，0.108mmol)。将抗坏血酸钠(3.3mg，0.0167mmol)和硫酸铜(2.66mg，0.017mmol)添加到该混合物中。将反应混合物加热至100℃持续2小时。将该反应混合物冷却至室温，用EA萃取，并且然后经MgSO4干燥。通过柱色谱法分离所希望的产物。
(产率18.9％，14.3mg)
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝911.4
[NMR]1H NMR(400MHz,DMSO-d6)d ppm 11.02(s,1H),9.07(s,1H),8.20-8.31(m,2H),8.03(s,1H),7.59-7.72(m,1H),7.37-7.52(m,4H),6.91-7.05(m,2H),4.44-4.55(m,5H),3.79(t,J＝5.14Hz,2H),3.38-3.53(m,12H),3.15-3.29(m,4H),2.59(s,4H),2.40(s,3H),1.61(s,3H),1.23(s,1H)。
实施例37：
2-((S)-4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-N-(5-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-6-基)氨基)戊基)乙酰胺的合成
步骤1)(5-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-6-基)氨基)戊基)氨基甲酸叔丁酯的合成
将3-(6-氟-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-2-基)哌啶-2,6-二酮(1g，3.63mmol)和N-(5-氨基戊基)氨基甲酸叔丁酯(0.74g，3.63mmol)溶解在NMP(10mL)中，并且在反应混合物中添加DIPEA(5.17ml，29.04mmol)。将混合物在120℃下搅拌过夜。将该反应用水淬灭并用DCM、NH4Cl和盐水萃取，并且然后经MgSO4干燥。将反应混合物加载到二氧化硅上并通过MPLC分离。获得呈油状的产物。(产率：1.3g，66％)
步骤2)3-(6-((5-氨基戊基)氨基)-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮的合成
将N-(5-{[2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-6-基]氨基}戊基)氨基甲酸叔丁酯(1g，2.19mmol)溶解在DCM(30ml)中的20％ TFA中并且在室温下反应2小时。反应结束后，在高真空下除去溶剂。将该产物不经进一步纯化而用于下一步骤。获得呈纯油状的产物。(产率：0.78g，99％)，
步骤3)2-((S)-4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-N-(5-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-6-基)氨基)戊基)乙酰胺的合成
将JQ-1羧酸(1.05g，2.62mmol)、HATU(1.08g，2.84mmol)和DIPEA(2.74μL，15.3mmol)溶解在DMF(25ml)中并且在室温下搅拌1小时。将3-{6-[(5-氨基戊基)氨基]-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-2-基}哌啶-2,6-二酮(780mg，2.18mmol)添加至反应混合物中。将该混合物在室温下搅拌过夜。将该反应混合物用水稀释并且用EA萃取。将有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，并浓缩。将产物通过MPLC进行纯化。获得呈白色固体的产物(产率：0.66g，41％)。
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝741.3
[NMR]1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 10.98(s,1H)8.24(t,J＝5.56Hz,1H)8.15(d,J＝1.22Hz,1H)7.89(d,J＝8.80Hz,1H)7.39-7.50(m,5H)7.05(dd,J＝8.86,2.26Hz,1H)6.87(t,J＝5.14Hz,1H)6.73(d,J＝2.08Hz,1H)5.72(dd,J＝11.92,5.07Hz,1H)4.53(dd,J＝7.95,6.24Hz,1H)3.17-3.30(m,3H)3.10(d,J＝6.11Hz,3H)2.85-2.96(m,1H)2.59(m,4H)2.37(s,3H)2.02-2.11(m,1H)1.62(d,J＝7.34Hz,2H)1.56(d,J＝1.71Hz,2H)1.39-1.54(m,4H)。
实施例38
2-((S)-4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-N-(3-(4-(3-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基)氨基)丙基)哌嗪-1-基)丙基)乙酰胺的合成
通过以下步骤合成标题化合物。
在微波反应器中，将3-(8-氟-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-2-基)哌啶-2,6-二酮(200mg，0.73mmol)和3-[4-(3-氨基丙基)哌嗪-1-基]丙烷-1-胺(291mg，1.45mmol)在DMF(5mL)中的混合物加热至90℃，持续5小时。将该反应混合物倾倒入水(50mL)中，用乙酸乙酯(50mL x 2)萃取，经MgSO4干燥，并且然后在减压下浓缩。将残余物通过使用DCM/MeOH(0～10％)的柱色谱法纯化，以提供呈油状物的标题化合物(121mg，36.4mmol)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[356.4]。
向JQ-1羧酸(17mg，0.042mmol)和HATU(11mg，0.0046mmol)在DMF(4mL)中的溶液中添加DIPEA(27.4mg，0.21mmol)。将混合物用在DMF(1mL)中的3-[8-({3-[4-(3-氨基丙基)哌嗪-1-基]丙基}氨基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-2-基]哌啶-2,6-二酮(19.3mg，0.042mmol)处理并在室温下搅拌过夜。将反应混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取。将有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，并浓缩。将残余物通过使用DCM/MeOH(0～10％)的柱色谱法纯化，以提供标题化合物。
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝838.4.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 11.03(s,1H)8.75(m,1H)8.23(s,1H)7.65(dd,J＝8.1,2.3Hz,1H)7.42(d,J＝2.1Hz,2H)7.44(d,J＝2.1Hz,2H)6.92(d,J＝2.1Hz,2H),5.20(m,1H),4.51(m,1H),3.75-3.48(m,14H),3.33(m,6H),3.22-3.24(m,2H),2.80(m,2H),2.57(m,2H),2.59(s,3H),2.41(s,3H),2.09(m,1H),1.75(m,1H),1.62(s,3H)。
实施例39：2-((S)-4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-N-(3-(2-(2-(2-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯基)乙酰胺的合成
39-1)(3-(2-(2-(2-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯基)氨基甲酸叔丁酯的合成
在120℃，将3-(8-氟-4-甲基-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮(30.0mg，0.104mmol)、(3-(2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(45.9mg，0.135mmol)和DIPEA(0.067mL，0.407mmol)在NMP(1mL)中的溶液搅拌16小时。将该反应混合物通过反向柱层析进行纯化以得到产物。
(产率：41mg，64.8％)
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝610.2
39-2)3-(8-((2-(2-(2-(3-氨基苯氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基)-4-甲基-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮的合成
在室温下，将(3-(2-(2-(2-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(41mg，0.076mmol)在DCM(0.6mL)中的20％ TFA中的溶液进行搅拌。将该反应混合物在真空中浓缩并且用于下一步骤而无需进一步纯化。(产率：34.3mg，定量)。
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[510.0]
39-3)2-((S)-4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-N-(3-(2-(2-(2-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯基)乙酰胺的合成
在0℃下，向3-(8-((2-(2-(2-(3-氨基苯氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基)-4-甲基-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮(34.3mg，0.067mmol)、JQ-1羧酸(27mg，0.067mmol)、DIPEA(0.073ml，0.404mmol)和HOBT(12.6mg，0.074mmol)在DMF(1mL)中的溶液中添加EDCI(16.8mg，0.088mmol)，并且将混合物在室温下搅拌2小时。将该反应混合物通过反向柱层析进行纯化以得到产物。(产率：20.1mg，33.5％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.00(s,1H),10.30(s,1H),9.05(t,J＝5.2Hz,1H),7.63(t,J＝8.1Hz,1H),7.49(d,J＝8.8Hz,2H),7.42(d,J＝8.8Hz,2H),7.35(s,1H),7.23-7.11(m,2H),6.93(d,J＝9.5Hz,1H),6.90(d,J＝8.6Hz,1H),6.62(d,J＝7.5Hz,1H),5.66(m,1H),4.60(t,J＝7.1Hz,1H),4.02(t,J＝4.1Hz,2H),3.74(t,J＝4.1Hz,2H),3.68(t,J＝5.4Hz,2H),3.61(s,4H),3.50(d,J＝7.0Hz,2H),3.38(m 2H),2.92-2.81(m,1H),2.63-2.53(m,5H),2.41(s,3H),2.40(s,3H),2.06(m,1H),1.62(s,3H).
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝894.4和892.4
实施例40：2-((S)-4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-N-(3-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-6-基)丙-2-炔-1-基)乙酰胺的合成
40-1)3-(6-(3-氨基丙-1-炔-1-基)-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮
向JQ-1羧酸(160mg，0.40mmol)、丙-2-炔-1-胺(26.4mg，0.48mmol)、EDCl-HCl(84.2mg，0.44mmol)在DMF(5mL)中的溶液中添加DIPEA(182.2mg，1.44mmol)。将该混合物在室温下搅拌过夜。将该反应混合物用水(50ml)稀释并用乙酸乙酯(50ml X 2)萃取。将有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，并浓缩。将所得残余物通过使用DCM：MeOH＝10：1的柱色谱法纯化，以提供标题化合物(159mg，87.7％)。
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝438.8。
40-2)2-((S)-4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-N-(3-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-6-基)丙-2-炔-1-基)乙酰胺的合成
向2-[(9S)-7-(4-氯苯基)-4,5,13-三甲基-3-硫杂-1,8,11,12-四氮杂三环[8.3.0.02,6]十三-2(6),4,7,10,12-五烯-9-基]-N-(丙-2-炔-1-基)乙酰胺(50mg，0.11mmol)和3-(6-溴-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-2-基)哌啶-2,6-二酮(38.4mg，0.11mmol)在DMF(2mL)中的溶液中添加CuI(2.19mg，0.011mmol)和Pd(PPh3)2Cl2(8.0mg，0.011mmol)，随后添加TEA(34.7mg，0.34mmol)。将混合物在微波反应器中在80℃下辐射1.5小时。将该反应混合物用水(50ml)稀释并用乙酸乙酯(50ml X 2)萃取。将有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，并在减压下浓缩。将残余物用EA/Hex(20％-80％)通过MPLC纯化，以得到呈灰白色固体的标题化合物。
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝694.8
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 11.09(s,1H)8.92(m,1H)8.47(s,1H)8.25(d.J＝2.5Hz,1H)8.10(s,1H)794(d,J＝2.5Hz,1H)7.32(d,J＝1.8Hz,2H),7.23(d,J＝1.8Hz,2H),5.72(m,1H)4.62(m,2H)4.25(m.,2H)2.50-3.31(m,4H)2.60(s,3H),2.41(s,3H)2.15(m,1H)1.60(s.,3H)。
实施例41：2-((S)-4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-N-(3-(2-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-6-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯基)乙酰胺
通过以下步骤合成标题化合物。
在120℃下，在微波上，将3-(6-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮(80.0mg，0.291mmol)、(3-(2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(109.0mg，0.320mmol)和DIPEA(363μL，2.03mmol)在DMF(2mL)中的溶液辐射5小时。将该反应混合物用水稀释并用EtOAc萃取。将有机层用盐水洗涤，经MgSO4干燥，并且浓缩。将残余物通过柱层析进行纯化以得到产物。(产率：130.0mg，75.1％)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[596.8]。
在室温下，将(3-(2-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-6-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(74.0mg，0.124mmol)在DCM(1mL)中的20％ TFA中的溶液进行搅拌。将该反应混合物在真空中浓缩并且用于下一步骤而无需进一步纯化。(产率：60.0mg，97.5％)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[496.8]。
将JQ-1羧酸(53.4mg，0.133mmol)、HATU(55.2mg，0.145mmol)和DIPEA(0.1ml，0.605mmol)在DMF(2mL)中的溶液在室温下搅拌0.5小时。添加3-(6-((2-(2-(2-(3-氨基苯氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基)-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮(60.0mg，0.121mmol)。将该混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取。将有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，并浓缩。通过柱色谱法分离该混合物。
(产率：45.0mg，42.3％)
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝879.4
[NMR]1H NMR(400MHz,DMSO-d6)d ppm 10.99(s,1H)10.31(s,1H)8.16(s,1H)7.90(d,J＝8.80Hz,1H)7.34-7.52(m,5H)7.17-7.24(m,1H)7.08-7.16(m,2H)6.93(t,J＝5.44Hz,1H)6.80(d,J＝2.08Hz,1H)6.58-6.67(m,1H)5.72(dd,J＝12.04,4.95Hz,1H)4.60(t,J＝7.15Hz,1H)4.00-4.07(m,2H)3.70-3.78(m,2H)3.56 -3.66(m,8H)3.50(d,J＝6.97Hz,2H)2.85-2.96(m,1H)2.55-2.65(m,4H)2.41(s,3H)2.01-2.10(m,1H)1.62(s,3H)。
实施例42：2-((S)-4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-N-(3-(2-(2-(2-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-6-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯基)乙酰胺的合成
通过以下步骤合成标题化合物。
在120℃下，在微波上，将3-(7-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮(80.0mg，0.291mmol)、(3-(2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(109.0mg，0.320mmol)和DIPEA(363μL，2.03mmol)在DMF(2mL)中的溶液辐射5小时。将该反应混合物用水稀释并用EtOAc萃取。将有机层用盐水洗涤，经MgSO4干燥，并且浓缩。将残余物通过柱层析进行纯化以得到产物。(产率：80.0mg，46.21％)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[596.8]。
在室温下，将(3-(2-(2-(2-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-6-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(80.0mg，0.134mmol)在DCM(1mL)中的20％ TFA中的溶液进行搅拌。将该反应混合物在真空中浓缩并且用于下一步骤而无需进一步纯化。(产率：65.0mg，97.5％)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[496.8]。
将JQ-1羧酸(57.8mg，0.144mmol)、HATU(59.9mg，0.157mmol)和DIPEA(0.12ml，0.656mmol)在DMF(2mL)中的溶液在室温下搅拌0.5小时。添加3-(7-((2-(2-(2-(3-氨基苯氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基)-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮(65.0mg，0.131mmol)。将该混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取。将有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，并浓缩。通过柱色谱法分离该混合物。
(产率：54.0mg，46.8％)
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝879.4
[NMR]1H NMR(400MHz,DMSO-d6)d ppm 11.00(s,1H)10.31(s,1H)8.13(s,1H)7.61(d,J＝9.17Hz,1H)7.34-7.52(m,6H)7.10-7.26(m,4H)6.92(t,J＝5.38Hz,1H)6.62(dd,J＝7.89,1.65Hz,1H)5.74(d,J＝7.58Hz,1H)4.56-4.64(m,1H)3.98-4.08(m,2H)3.67-3.78(m,2H)3.54-3.67(m,6H)3.50(d,J＝7.09Hz,2H)2.82-2.97(m,2H)2.54-2.65(m,4H)2.37-2.45(m,3H)2.00-2.13(m,1H)1.52-1.68(m,3H)。
实施例43：2-((S)-4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-N-(2-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基)氨基)乙基)乙酰胺的合成
通过以下步骤合成标题化合物。
将3-(8-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮(56.0mg，0.203mmol)、(2-氨基乙基)氨基甲酸叔丁酯(48.9mg，0.305mmol)和DIPEA(0.134mL，0.814mmol)在NMP(1mL)中的溶液在130℃搅拌3小时。将该反应混合物通过反向柱层析进行纯化以得到产物。(产率：68mg，80.5％)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[416.0]。
在室温下，将(2-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基)氨基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(20.0mg，0.048mmol)在DCM(0.6mL)中的20％ TFA中的溶液搅拌。将该反应混合物在真空中浓缩并且用于下一步骤而无需进一步纯化。(产率：15.2mg，定量)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[316.0]。
在0℃下，向3-(8-((2-氨基乙基)氨基)-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮(15.2mg，0.048mmol)、JQ-1羧酸(19.3mg，0.048mmol)、DIPEA(0.052ml，0.288mmol)在DMF(0.5mL)中的溶液中添加HATU(21.9mg，0.058mmol)，并且将混合物在室温下搅拌16小时。将该反应混合物通过反向柱层析进行纯化以得到产物。(产率：18mg，53.7％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.03(s,1H),8.83(t,J＝5.14Hz,1H),8.51(s,1H),8.24(s,1H),7.66(t,J＝7.90Hz,1H),7.49-7.38(m,4H),7.03(d,J＝8.5Hz,1H),6.94(d,J＝7.6Hz,1H),5.67(m,1H),4.53(m,1H),3.31(m,2H),3.26(m,4H),2.93-2.82(m,1H),2.63-2.53(m,5H),2.41(s,3H),2.05(m,1H),1.61(s,3H).
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝698.2和700.2。
实施例44：2-((S)-4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-N-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-5-基)氨基)乙基)乙酰胺
通过以下步骤合成标题化合物。
将3-(5-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮(56.0mg，0.203mmol)、(2-氨基乙基)氨基甲酸叔丁酯(48.9mg，0.305mmol)和DIPEA(0.134mL，0.814mmol)在NMP(1mL)中的溶液在130℃下搅拌3小时。将该反应混合物通过反向柱层析进行纯化以得到产物。(产率：27.2mg，32.2％)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[416.0]。
向(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-5-基)氨基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(15mg，0.036mmol)在DCM(0.6mL)中的20％ TFA中的溶液，并且在室温下搅拌。将该反应混合物在真空中浓缩并且用于下一步骤而无需进一步纯化。(产率：11.4mg，定量)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[316.0]。
在0℃下，向3-(5-((2-氨基乙基)氨基)-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮(11.4mg，0.036mmol)、JQ-1羧酸(18.8mg，0.044mmol)、DIPEA(0.0378ml，0.217mmol)在DMF(0.5mL)中的溶液中添加HATU(20.6mg，0.054mmol)，并且将混合物在室温下搅拌16小时。将该反应混合物通过反向柱层析进行纯化以得到产物。(产率：14mg，55.5％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.03(s,1H),8.53(m,2H),7.62(t,J＝7.9Hz,1H),7.45-7.38(m,5H),7.08(d,J＝8.3Hz,1H),6.90(m,1H),5.73(m,1H),4.53(m,1H),3.31(m,2H),3.32-3.26(m,4H),2.93-2.82(m,1H),2.63-2.53(m,5H),2.41(s,3H),2.05(m,1H),1.59(s,3H).
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝698.2和700.2。
实施例45：2-((S)-4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-N-(2-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基)氧基)乙基)乙酰胺的合成
通过以下步骤合成标题化合物。
在0℃下，向3-(8-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮(30.0mg，0.109mmol)和(2-羟乙基)氨基甲酸叔丁酯(35.1mg，0.218mmol)在DMSO(1mL)中的溶液中添加LDA(1M溶液，0.218ml，0.218mmol)，并且将混合物在室温下搅拌2小时。将该反应混合物通过反向柱层析进行纯化以得到产物。(产率：29.1mg，64.1％)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[417.0]。
在室温下，将(2-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基)氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(15mg，0.036mmol)在DCM(0.6mL)中的20％ TFA中的溶液进行搅拌。将该反应混合物在真空中浓缩并且用于下一步骤而无需进一步纯化。(产率：11.4mg，定量)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[317.0]。
在0℃下，向3-(8-(2-氨基乙氧基)-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮(11.4mg，0.036mmol)、JQ-1羧酸(18.8mg，0.047mmol)、DIPEA(0.038ml，0.217mmol)在DMF(0.5mL)中的溶液中添加HATU(20.6mg，0.054mmol)，并且将混合物在室温下搅拌1小时。将该反应混合物通过反向柱层析进行纯化以得到产物。(产率：16.7mg，66％)。
11H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.06(d,J＝9.8Hz.1H),8.51(m,1H),8.36(s,1H),7.89(t,J＝8.0Hz,1H),7.51(m,2H),7.39(m,4H),5.67(m,1H),4.52(m,1H),4.20(m,2H),3.57(m,2H),3.33-3.25(m,2H),2.93-2.82(m,1H),2.63-2.53(m,5H),2.41(s,3H),2.05(m,1H),1.60(s,3H).
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝699.2和701.2
实施例46：2-((S)-4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-N-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-5-基)氧基)乙基)乙酰胺的合成
通过以下步骤合成标题化合物。
在0℃，向3-(5-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮(30.0mg，0.109mmol)和(2-羟基乙基)氨基甲酸叔丁酯(35.1mg，0.218mmol)在DMSO(1mL)中的溶液中加入LDA(1M溶液，0.218ml，0.218mmol)，并且将混合物在室温下搅拌2小时。将该反应混合物通过反向柱层析进行纯化以得到产物。(产率：13.1mg，28.9％)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[439.0]。
在室温下，将(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-5-基)氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(13.1mg，0.032mmol)在DCM(0.6mL)中的20％ TFA中的溶液搅拌。将该反应混合物在真空中浓缩并且用于下一步骤而无需进一步纯化。(产率：9.9mg，定量)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[317.0]。
在0℃下，向3-(5-(2-氨基乙氧基)-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮(9.9mg，0.032mmol)、JQ-1羧酸(16.4mg，0.041mmol)、DIPEA(0.033ml，0.189mmol)在DMF(0.5mL)中的溶液中添加HATU(18mg，0.047mmol)，并且将混合物在室温下搅拌16小时。将该反应混合物通过反向柱层析进行纯化以得到产物。(产率：17mg，77％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.06(s,1H),8.62(brs,1H),8.59(m,1H),7.82(m,2H),7.55(m,1H),7.40-7.25(m,4H),5.79(m,1H),4.54(m,1H),4.20(m,2H),3.79-3.50(m,2H),3.35-3.20(m,2H),2.93-2.82(m,1H),2.63-2.53(m,5H),2.40(s,3H),2.07(m,1H),1.57(s,3H).
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝699.2和701.2。
实施例47：N-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-6-基)丁基)-2-((S)-2,3,9-三甲基-4-苯基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)乙酰胺的合成
通过以下步骤合成标题化合物。
H2气囊向2-[(9S)-7-(4-氯苯基)-4,5,13-三甲基-3-硫杂-1,8,11,12-四氮杂三环[8.3.0.02,6]十三-2(6),4,7,10,12-五烯-9-基]-N-{3-[2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-6-基]丙-2-炔-1-基}乙酰胺(11.0mg，0.012mmol)在MeOH(10mL)中的溶液中添加10％ Pd/C(5mg)。将该反应混合物搅拌4小时。过滤固体材料后，在减压下浓缩滤液。残余物通过柱色谱法纯化，以得到标题化合物，为灰白色油状物
(产率8.2mg；78.0％)
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝663.2。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.15(s,1H),8.45(s,1H),8.20(d,J＝2.3Hz,2H),7.80(s,1H),7.75(d,J＝2.3Hz,2H),7.42(m,3H),5.75(br,1H),4.52(m,1H),3.25-3.27(m,2H),3.17(m,2H),2.75-2.80(m,2H),2.50-2.62(m,6H),1.75(m,1H),1.58(m,2H),1.56(s,3H),1.24(s,6H)。
实施例48：2-((S)-4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-N-(2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-6-基)哌嗪-1-基)乙基)乙酰胺的合成
通过以下步骤合成标题化合物。
将3-[1-氧代-6-(哌嗪-1-基)-1,2-二氢酞嗪-2-基]哌啶-2,6-二酮(36mg，0.1mmol)、N-(2-溴乙基)氨基甲酸叔丁酯(35.4mg，0.16mmol)、碘化钠(31.6mg，0.21mmol)、碳酸钠(33.5mg，0.32mmol)溶解在DMAC(1ml)中。将反应混合物在60℃下搅拌3小时。反应结束后，将混合物用EtOAc和水萃取。将有机层在真空下浓缩。将该反应混合物通过MPLC进行纯化。获得呈黄色固体的产物。(产率：8mg，16％)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[485.5]。
将N-(2-{4-[2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-6-基]哌嗪-1-基}乙基)氨基甲酸叔丁酯(8mg，0.017mmol)溶解在DCM(1ml)中的20％ TFA中。将该反应混合物在室温下搅拌1小时。反应结束后，通过在真空下除去溶剂，浓缩生成物。将粗产物不经进一步纯化而用于下一步骤。获得呈油状的产物(产率：6mg，95％)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[385.5]。
将JQ-1羧酸(6.9mg，0.017mmol)、HATU(7.12mg，0.19mmol)和DIPEA(113μL，0.63mmol)溶解在DMF(1.5ml)中并且将该混合物在室温下搅拌1小时。将3-{6-[4-(2-氨基乙基)哌嗪-1-基]-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-2-基}哌啶-2,6-二酮(6mg，0.016mmol)添加至反应混合物中。将该混合物在室温下搅拌过夜。将该反应混合物用水稀释并且用EA萃取。将有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，并浓缩。将产物通过MPLC(MC/Me0->10％)纯化。获得呈白色固体的产物(产率：7mg，59％)。
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝768.3
[NMR]1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 11.01(s,1H)8.18-8.28(m,3H)8.04(d,J＝9.05Hz,1H)7.39-7.53(m,5H)7.25(s,1H)5.75(dd,J＝12.10,5.38Hz,1H)4.51(t,J＝6.91Hz,1H)3.19-3.28(m,8H)2.85-2.98(m,1H)2.54-2.66(m,9H)2.40(s,3H)2.08(d,J＝9.54Hz,1H)1.62(s,3H)。
实施例49：2-((S)-4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-N-(2-(4-(3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-6-基)哌嗪-1-基)乙基)乙酰胺的合成
通过以下步骤合成标题化合物。
将3-(1-氧代-7-(哌嗪-1-基)酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮(41mg，0.12mmol)、N-(2-溴乙基)氨基甲酸叔丁酯(40.4mg，0.18mmol)、碘化钠(36.0mg，0.24mmol)、碳酸钠(38.5mg，0.36mmol)溶解在DMAC(1ml)中。将反应混合物在60℃下搅拌3小时。反应结束后，将混合物用EtOAc和水萃取。将有机层在真空下浓缩。将该反应混合物通过MPLC进行纯化。获得呈黄色固体的产物。(产率：10mg，18％)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[485.5]。
将(2-(4-(3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-6-基)哌嗪-1-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(10mg，0.021mmol)溶解在DCM(1ml)中的20％ TFA中。将该反应混合物在室温下搅拌1小时。反应结束后，通过在真空下除去溶剂，浓缩生成物。将粗产物不经进一步纯化而用于下一步骤。获得呈油状的产物(产率：8mg，100％)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[385.5]。
将JQ-1羧酸(9.2mg，0.023mmol)、HATU(9.5mg，0.25mmol)和DIPEA(0.015mL，0.083mmol)溶解在DMF(1.5ml)中并且在室温下搅拌该混合物1小时。将3-(7-(4-(2-氨基乙基)哌嗪-1-基)-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮(8mg，0.021mmol)添加至反应混合物中。将该混合物在室温下搅拌过夜。将该反应混合物用水稀释并且用EA萃取。将有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，并浓缩。将产物通过MPLC进行纯化。获得呈白色固体的产物(产率：8mg，51％)。
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝768.3
[NMR]1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 11.02(s,1H)8.18-8.30(m,2H)7.79(d,J＝8.93Hz,1H)7.61(d,J＝8.80Hz,1H)7.38-7.53(m,6H)5.77(br.s.,1H)4.51(t,J＝7.09Hz,1H)3.19-3.28(m,8H)2.86-3.00(m,1H)2.54-2.65(m,9H)2.40(s,3H)2.10(br.s.,1H)1.62(s,3H)。
实施例50：2-((S)-4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-N-((1-(3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基)吡咯烷-3-基)甲基)乙酰胺的合成
通过以下步骤合成标题化合物：
50-1)3-((2-((S)-4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)乙酰氨基)甲基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯的合成
在0℃下，向JQ-1羧酸(98.9mg，0.247mmol)、3-(氨基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(38mg，0.190mmol)和DIPEA(0.132ml，0.759mmol)在DMF(1mL)中的溶液中添加HATU(86.6mg，0.228mmol)，并且将混合物在室温下搅拌1小时。将该反应混合物通过反向柱层析进行纯化以得到产物。(产率：105mg，95％)。
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[583.2]和[585.2]
50-2)2-((S)-4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基6H噻吩并[3,2f][1,2,4]三唑并[4,3a][1,4]二氮杂卓-6-基)-N-(吡咯烷-3-基甲基)乙酰胺的合成
将3-((2-((S)-4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)乙酰氨基)甲基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(30mg，0.050mmol)在DCM(0.6mL)中的20％ TFA中的溶液在室温下搅拌。将该反应混合物在真空中浓缩并且用于下一步骤而无需进一步纯化。(产率：24.8mg，定量)。
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[483.0]和[485.0]
50-3)2-((S)-4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-N-((1-(3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基)吡咯烷-3-基)甲基)乙酰胺的合成
将2-((S)-4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-N-(吡咯烷-3-基甲基)乙酰胺(24.8mg，0.051mmol)、3-(8-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮(14.1mg，0.051mmol)和DIPEA(0.089mL，0.513mmol)在NMP(1mL)中的溶液在120℃搅拌16小时。将该反应混合物通过反向柱层析进行纯化以得到产物。
(产率：21mg，55.4％)
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝10.98(s,1H),8.39(m,1H),8.19(t.J＝2.8Hz,1H),7.65(m,1H),7.45-7.35(m,4H),7.17-8.05(m,2H),5.61(brs,1H),4.52(m,1H),3.55-3.40(m,2H),3.35-3.10(m,5H),2.89(m,1H),2.63-2.53(m,5H),2.43(m,1H),2.41(s,3H),2.15-1.95(m,2H),1.66(m,1H),1.60(s,3H)
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝738.2和740.2
实施例51：2-[(9S)-7-(4-氯苯基)-4,5,13-三甲基-3-硫杂-1,8,11,12-四氮杂三环[8.3.0.02,6]十三-2(6),4,7,10,12-五烯-9-基]-N-(5-{[2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-5-基]氨基}戊基)乙酰胺的合成
通过以下步骤合成标题化合物：
将3-(5-氟-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-2-基)哌啶-2,6-二酮(100mg，0.363mmol)和N-(5-氨基戊基)氨基甲酸叔丁酯(110mg，0.545mmol)溶解在NMP(2mL)中，并且在反应混合物中添加DIPEA(517μL，2.91mmol)。将混合物120℃搅拌过夜。将该反应用水淬灭，并且将该混合物用DCM、NH4Cl和盐水萃取，并且然后经MgSO4干燥。将TFA 20％溶液(DCM:TFA＝5:1)添加到该混合物中并且将该混合物搅拌2小时。将溶剂蒸发并且在真空中干燥。(产率：60.4％，100mg)
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝358.5
向3-{5-[(5-氨基戊基)氨基]-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-2-基}哌啶-2,6-二酮三氟乙酸(100mg，0.212mmol)、2-[(9S)-7-(4-氯苯基)-4,5,13-三甲基-3-硫杂-1,8,11,12-四氮杂三环[8.3.0.02,6]十三-2(6),4,7,10,12-五烯-9-基]乙酸(102mg，0.255mmol)、HATU(121mg，0.318mmol)在DMF中的溶液中添加DIPEA(381μL，2.12mmol)。将该混合物在室温下搅拌3小时。将反应混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取。将有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，并浓缩。通过柱色谱法分离所希望的产物。(产率：21.6％，34mg)
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝740.2
[NMR]1H NMR(400MHz,DMSO-d6)d ppm 11.02(br.s.,1H),8.63-8.74(m,1H),8.46(d,J＝8.31Hz,1H),8.20-8.30(m,1H),7.57(t,J＝8.07Hz,1H),7.34-7.52(m,4H),6.93(d,J＝8.31Hz,1H),6.73(d,J＝5.13Hz,1H),4.44-4.56(m,1H),3.22-3.30(m,1H),3.09-3.22(m,3H),2.84-2.98(m,1H),2.55-2.67(m,5H),2.32-2.44(m,3H),2.01-2.13(m,1H),1.60-1.74(m,3H),1.48-1.60(m,5H),1.44(d,J＝7.09Hz,2H),1.19-1.35(m,3H)
实施例52：2-[(9S)-7-(4-氯苯基)-4,5,13-三甲基-3-硫杂-1,8,11,12-四氮杂三环[8.3.0.02,6]十三-2(6),4,7,10,12-五烯-9-基]-N-(5-{[3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基]氨基}戊基)乙酰胺的合成
通过以下步骤合成标题化合物。
将3-(8-氟-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-2-基)哌啶-2,6-二酮(100mg，0.363mmol)和N-(5-氨基戊基)氨基甲酸叔丁酯(110mg，0.545mmol)溶解在NMP(2mL)中，并且在反应混合物中添加DIPEA(517μL，2.91mmol)。将混合物120℃搅拌过夜。将该反应用水淬灭并且将该混合物用DCM、NH4Cl和盐水萃取，并且然后经MgSO4干燥。将TFA 20％溶液(DCM：TFA＝5：1)添加至该混合物中并且搅拌2小时。将溶剂蒸发并且在真空中干燥。(产率：58.4％，100mg)
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝358.5
向3-{8-[(5-氨基戊基)氨基]-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-2-基}哌啶-2,6-二酮三氟乙酸(100mg，0.212mmol)、2-[(9S)-7-(4-氯苯基)-4,5,13-三甲基-3-硫杂-1,8,11,12-四氮杂三环[8.3.0.02,6]十三-2(6),4,7,10,12-五烯-9-基]乙酸(102mg，0.255mmol)、HATU(121mg，0.318mmol)在DMF中的溶液中添加DIPEA(378μL，2.12mmol)。将该混合物在室温下搅拌3小时。将反应混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取。将有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，并浓缩。通过柱色谱法分离所希望的产物。(产率：68.8％，108mg)。
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝741.4
[NMR]1H NMR(400MHz,DMSO-d6)d ppm 11.03(s,1H),8.71(t,J＝5.26Hz,1H),8.17-8.26(m,2H),7.63(t,J＝7.95Hz,1H),7.38-7.50(m,4H),6.79-6.94(m,2H),5.71(d,J＝7.34Hz,1H),4.51(dd,J＝8.07,6.11Hz,1H),3.07-3.29(m,3H),2.81-2.94(m,1H),2.53-2.65(m,5H),2.40(s,3H),2.03-2.15(m,1H),1.59-1.73(m,5H),1.37-1.59(m,4H),1.20-1.31(m,4H)。
实施例53：2-((S)-4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-N-((1-(3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基)哌啶-4-基)甲基)乙酰胺的合成
通过以下步骤合成标题化合物：
将3-(8-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮(56.0mg，0.203mmol)、(哌啶-4-基甲基)氨基甲酸苄酯(178mg，0.305mmol)和DIPEA(0.134mL，0.814mmol)在NMP(1mL)中的溶液在130℃搅拌17小时。将该反应混合物通过反向柱层析进行纯化以得到产物。(产率：73mg，71.3％)。
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝504.2
向((1-(3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基)哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸苄酯(72mg，0.143mmol)在5ml MeOH中的溶液中添加Pd(OH)2(催化量)，并且将该混合物在H2气氛下在室温下搅拌16小时。将该反应混合物在硅藻土上过滤并且浓缩(产率：52mg，98.5％)。
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝370.2
在0℃下，向3-(8-(4-(氨基甲基)哌啶-1-基)-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮(28mg，0.076mmol)、JQ-1羧酸(30.4mg，0.076mmol)、DIPEA(0.040ml，0.227mmol)在DMF(0.5mL)中的溶液中添加HATU(34.6mg，0.097mmol)，并且将混合物在室温下搅拌1小时。将该反应混合物通过反向柱层析进行纯化以得到产物。(产率：24.7mg，43.4％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.03(s,1H),8.33(m,2H),7.85(brs,1H),7.55-7.30(m,6H),5.80(brs,1H),4.53(m,1H),3.50(m,2H),3.30-3.15(m,4H)3.27(m,2H),2.93-2.82(m,2H),2.63-2.53(m,4H),2.41(s,3H),2.30(m,1H),2.09(m,1H),1.91(m,2H)1.61(s,3H).1.52(m,2H)
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝752.2和754.2
实施例54：POI配体的合成(弹头，warhead)
SHP 099衍生物的合成
54-1)3-(2,3-二氯苯基)-6-(4-甲基-4-(丙-2-炔-1-基氨基)哌啶-1-基)吡嗪-2-胺的合成
向6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)吡嗪-2-胺(802mg，2.28mmol)和3-溴丙-1-炔(406mg，3.42mmol)在10ml 1,4-二噁烷中的溶液里添加DIPEA(1.19ml，6.83mmol)，并且在90℃下搅拌混合物4小时。在减压下去除溶剂。将残余物通过硅胶色谱法(DCM/MeOH＝99/1至95/5，梯度)进行纯化以得到呈黄色固体的产物。(产率：314mg，35.3％)。
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[390.0][392.0][394.0]
实施例55
3-(4-((2-(2-(2-(2-(4-(((1-(6-氨基-5-(2,3-二氯苯基)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基)-1,3-二氧-2,3-二氢-1H-茚-2-基)哌啶-2,6-二酮的合成
步骤1)4-((2-(2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮的合成
将2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟-2,3-二氢-1H-异吲哚-1,3-二酮(100mg，0.363mmol)和1-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]-2-(2-叠氮基乙氧基)乙烷(87.2mg，0.4mmol)和DIPEA(0.323mL，1.82mmol)溶解于NMP(1mL)中。将该反应混合物在120℃下搅拌过夜。将该反应用水淬灭并用DCM、NH4Cl和盐水萃取，并且然后经MgSO4干燥。将反应混合物加载到二氧化硅上并通过MPLC分离。获得呈油状的产物。(产率：60mg，35％)。
步骤2)3-(4-((2-(2-(2-(2-(4-(((1-(6-氨基-5-(2,3-二氯苯基)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基)-1,3-二氧-2,3-二氢-1H-茚-2-基)哌啶-2,6-二酮的合成
将4-(12-叠氮基-4,7,10-三氧杂-1-氮杂十二烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-2,3-二氢-1H-异吲哚-1,3-二酮(50mg，0.105mmol)和3-(2,3-二氯苯基)-6-{4-甲基-4-[(丙-2-炔-1-基)氨基]哌啶-1-基}吡嗪-2-胺(41.1mg，0.105mmol)溶解于THF：H2O(1：1)中。在反应混合物中加入抗坏血酸钠(4.17mg，0.021mmol)和硫酸铜(2+)(3.36mg，0.021mmol)。反应混合物在100℃下反应2小时。反应结束后，将反应混合物冷却至室温并用EA和水萃取。将有机层经MgSO4干燥并在真空下去除。通过MPLC纯化产物。获得呈白色固体的产物。
(产率：40mg，44％)
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝864.8
[NMR]1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 10.98(s,1H)8.24(t,J＝5.56Hz,1H)8.15(d,J＝1.22Hz,1H)7.89(d,J＝8.80Hz,1H)7.39-7.50(m,4H)7.05(dd,J＝8.86,2.26Hz,1H)6.87(t,J＝5.14Hz,1H)6.73(d,J＝2.08Hz,1H)5.72(dd,J＝11.92,5.07Hz,1H)4.53(dd,J＝7.95,6.24Hz,1H)3.17-3.30(m,4H)3.10(d,J＝6.11Hz,4H)2.85-2.96(m,1H)2.59(s,5H)2.37(s,3H)2.02-2.11(m,1H)1.62(d,J＝7.34Hz,3H)1.56(d,J＝1.71Hz,5H)1.39-1.54(m,6H)。
实施例56：3-(8-((2-(2-(2-(4-(((1-(6-氨基-5-(2,3-二氯苯基)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基)-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮的合成
56-1)3-(8-((2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙基)氨基)-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮的合成
在110℃，将3-(8-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮(100mg，0.363mmol)、2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙-1-胺(76mg，0.436mmol)和DIPEA(0.19mL，1.09mmol)在NMP(1mL)中的溶液搅拌16小时。将该反应混合物通过反向柱层析进行纯化以得到产物。(产率：89mg，57.4％)。
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[430.0]
56-2)3-(8-((2-(2-(2-(4-(((1-(6-氨基-5-(2,3-二氯苯基)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基)-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮的合成
在0℃下，向3-(8-((2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙基)氨基)-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮(19.2mg，0.0446mmol)、3-(2,3-二氯苯基)-6-(4-甲基-4-(丙-2-炔-1-基氨基)哌啶-1-基)吡嗪-2-胺(17.4mg，0.0446mmol)和抗坏血酸钠(24mg，0.121mmol)在2ml TFA/H2O(1/1，v/v)中的悬浮液中添加CuSO4(9mg，0.0564mmol)，并且将混合物在室温下搅拌1小时。向反应混合物中添加30ml的乙酸乙酯并且萃取生成物。将有机层经MgSO4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过二氧化硅柱层析进行纯化以得到产物。
(产率：19mg，51.9％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.3(s,1H),8.83(t,J＝4.7Hz,1H),8.22(s,1H),7.94(brs,1H),7.64(t,,J＝8.0Hz,1H),7.62(dd,J＝8.0,1.5Hz,1H),7.47(s,1H),7.39(t,J＝7.8Hz,1H),7.30(dd,J＝7.6,1.7Hz,1H),6.92(d,J＝8.4Hz,1H),6.90(d,J＝8.4Hz,1H),5.70(m,1H),5.62(brs,2H),4.49(t,J＝4.9Hz,2H),3.82(t,J＝5.1Hz,2H),3.73(brs,2H),3.63(t,J＝5.1Hz,2H),3.56(brs,7H),3.3(brs,4H),2.89(m,1H),2.63-2.47(m,2H),2.07(m,1H),1.60(brs,2H),1.48(brs,2H),1.14(s,3H).
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[819.4][821.4][823.4]。
实施例57：3-(6-((2-(2-(2-(4-(((1-(6-氨基-5-(2,3-二氯苯基)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基)-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮的合成
通过以下步骤合成标题化合物。
在110℃，将3-(6-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮(100mg，0.363mmol)、2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙-1-胺(76mg，0.436mmol)和DIPEA(0.19mL，1.09mmol)在NMP(1mL)中的溶液搅拌16小时。将该反应混合物通过反向柱层析进行纯化以得到产物。(产率：28mg，18％)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[430.0]。
在0℃下，向3-(6-((2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙基)氨基)-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮(19.2mg，0.0446mmol)、3-(2,3-二氯苯基)-6-(4-甲基-4-(丙-2-炔-1-基氨基)哌啶-1-基)吡嗪-2-胺(17.4mg，0.0446mmol)和抗坏血酸钠(24mg，0.121mmol)在2ml TFA/H2O(1/1，v/v)中的悬浮液中添加CuSO4(9mg，0.0564mmol)，并且将混合物在室温下搅拌1小时。向反应混合物中添加30ml的乙酸乙酯并且萃取生成物。将有机层经MgSO4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过二氧化硅柱层析纯化，以得到产物。
(产率：8.2mg，22.4％)
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝10.99(s,1H),8.17(s,1H),7.95(s,1H),7.92(d,J＝9.0Hz,1H),7.62(d,J＝7.80Hz,1H),7.47(s,1H),7.38(t,J＝7.8Hz,1H),7.30(d,J＝7.6Hz,1H),7.11(d,J＝9.0Hz,1H),6.91(m,1H),6.8(s,1H),5.73(m,1H),5.61(brs,2H),4.48(t,J＝4.9Hz,2H),3.81(t,J＝5.1Hz,2H),3.75(brs,2H),3.56(brs,9H),3.3(brs,4H),2.90(m,1H),2.64-2.43(m,2H),2.07(m,1H),1.62(brs,2H),1.48(brs,2H),1.15(s,3H).
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[819.4][821.4][823.4]。
实施例58：3-(6-((2-(2-(2-(2-(4-(((1-(6-氨基-5-(2,3-二氯苯基)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基)-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮的合成
通过以下步骤合成标题化合物。
将3-(6-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮(100mg，0.363mmol)和1-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]-2-(2-叠氮基乙氧基)乙烷(87.2mg，0.4mmol)和DIPEA(0.323mL，1.82mmol)溶解于NMP(1mL)中。将该反应混合物在120℃下搅拌过夜。将该反应用水淬灭，并且将所得物用DCM、NH4Cl和盐水萃取，并且然后经MgSO4干燥。将反应混合物加载到二氧化硅上并通过MPLC分离。获得呈油状的产物。(产率：65mg，37％)。
将3-(6-((2-(2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基)-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮(54mg，0.114mmol)和3-(2,3-二氯苯基)-6-{4-甲基-4-[(丙-2-炔-1-基)氨基]哌啶-1-基}吡嗪-2-胺(44.6mg，0.144mmol)溶解于THF：H2O(1：1)中。在反应混合物中加入抗坏血酸钠(4.52mg，0.023mmol)和硫酸铜(2+)(3.64mg，0.023mmol)。反应混合物在100℃下反应2小时。反应结束后，将反应混合物冷却至室温并用EA和水萃取。将有机层经MgSO4干燥并在真空下去除。通过MPLC纯化产物。获得呈白色固体的产物。
(产率：15mg，15％)，
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝864.8
[NMR]1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 10.99(s,1H)8.17(s,1H)7.91(d,J＝8.80Hz,1H)7.62(dd,J＝8.01,1.65Hz,1H)7.50(br.s.,1H)7.39(t,J＝7.89Hz,1H)7.29(dd,J＝7.70,1.59Hz,1H)7.11(dd,J＝8.93,2.32Hz,1H)6.89-7.05(m,2H)6.76-6.85(m,1H)5.72(dd,J＝11.80,5.56Hz,1H)5.63(br.s.,1H)5.53(s,1H)4.50(br.s.,2H)3.79(t,J＝5.01Hz,3H)3.55-3.64(m,3H)3.42-3.55(m,8H)2.83-2.99(m,1H)2.53-2.70(m,1H)2.07(dd,J＝10.70,5.07Hz,1H)1.96(d,J＝12.72Hz,1H)1.67(br.s.,3H)1.46(br.s.,2H)1.24(s,3H)1.17(br.s.,3H)。
实施例59：3-(7-((2-(2-(2-(2-(4-(((1-(6-氨基-5-(2,3-二氯苯基)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基)-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮的合成
通过以下步骤合成标题化合物。
将3-(7-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮(100mg，0.363mmol)和1-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]-2-(2-叠氮基乙氧基)乙烷(87.2mg，0.4mmol)和DIPEA(0.323mL，1.82mmol)溶解于NMP(1mL)中。将该反应混合物在120℃下搅拌过夜。将该反应用水淬灭，并且将所得物用DCM、NH4Cl和盐水萃取，并且然后经MgSO4干燥。将反应混合物加载到二氧化硅上并通过MPLC分离。获得呈油状的产物。(产率：65mg，37％)。
将3-[7-(12-叠氮基-4,7,10-三氧杂-1-氮杂十二烷-1-基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-2-基]哌啶-2,6-二酮(42mg，0.088mmol)和3-(2,3-二氯苯基)-6-{4-甲基-4-[(丙-2-炔-1-基)氨基]哌啶-1-基}吡嗪-2-胺(34.6mg，0.088mmol)溶解于THF：H2O(1：1)中。在反应混合物中加入抗坏血酸钠(3.51mg，0.018mmol)和硫酸铜(2+)(2.83mg，0.018mmol)。反应混合物在100℃下反应2小时。反应结束后，将反应混合物冷却至室温并用EA和水萃取。将有机层经MgSO4干燥并在真空下去除。通过MPLC纯化产物。获得呈白色固体的产物。
(产率：16mg，21％)
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝864.8
NMR]1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 11.00(s,1H)8.14(s,1H)7.58-7.66(m,2H)7.50(br.s.,1H)7.39(t,J＝7.83Hz,1H)7.29(dd,J＝7.58,1.59Hz,1H)7.17-7.23(m,2H)6.91(t,J＝5.62Hz,1H)5.71-5.79(m,1H)5.63(br.s.,2H)4.50(br.s.,2H)3.79(t,J＝5.14Hz,3H)3.60(t,J＝5.56Hz,3H)3.41-3.56(m,9H)2.84-2.96(m,1H)2.52-2.70(m,2H)2.02-2.13(m,1H)1.96(d,J＝13.69Hz,1H)1.67(br.s.,3H)1.46(br.s.,2H)1.24(s,5H)
实施例60：3-(8-((14-(4-(((1-(6-氨基-5-(2,3-二氯苯基)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-3,6,9,12-四氧杂十四烷基)氨基)-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮
60-1)3-(2,3-二氯苯基)-6-(4-甲基-4-(丙-2-炔-1-基氨基)哌啶-1-基)吡嗪-2-胺的合成
向6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)吡嗪-2-胺盐酸盐(2.5g，6.43mmol)和3-溴丙-1-炔(918mg，7.72mmol)在DMF(20mL)中的溶液中添加K2CO3(2.22g，16.1mmol)，随后添加NaI(408mg，3.22mmol)。将该混合物在80℃下加热5小时。将该反应混合物用水(150ml)稀释并用乙酸乙酯(150ml X 2)萃取。将有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，并在减压下浓缩。将残余物使用EA/Hex(20％-80％)通过MPLC纯化，以得到呈灰白色固体的标题化合物(1.87g，4.79mmol)。
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝391.3
60-2)3-(8-((14-(4-(((1-(6-氨基-5-(2,3-二氯苯基)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-3,6,9,12-四氧杂十四烷基)氨基)-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮的合成
在25℃下，向3-(2,3-二氯苯基)-6-{4-甲基-4-[(丙-2-炔-1-基)氨基]哌啶-1-基}吡嗪-2-胺(30mg，0.077mmol)和3-[8-(15-叠氮基-4,7,10,13-四氧杂-1-氮杂十五烷-1-基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-2-基]哌啶-2,6-二酮(39.8mg，0.077mmol)在THF/H2O(5mL/5mL)中的溶液中添加抗坏血酸钠(3.04mg，0.0015mmol)和硫酸铜(2.45mg，0.0015mmol)。反应在2小时内进行。将反应混合物倒入50mL水中，并且用EA(50mL x2)萃取，并且经MgSO4干燥。将反应混合物加载到二氧化硅上并通过柱层析分离(DCM/MeOH 0％->10％)以得到呈白色晶体的标题化合物(产率：42mg，60.2％)。
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝908.8
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.04(s,1H),9.12(br,1H),8.23(s,1H),8.12(s,1H),7.65(m,2H),7.30-7.45(m,2H),6.92(m,2H),5.70(br,1H),4.59(m,2H),4.30(m,2H),4.28(s,1H),3.82(m,2H),3.67(m,2H),3.57-3.48(m,17H),3.37(m,2H),2.84-3.10(m,6H),1.86-2.15(m,4H),1.52(s,3H)。
实施例61：3-(8-((17-(4-(((1-(6-氨基-5-(2,3-二氯苯基)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-3,6,9,12,15-五氧杂十七烷基)氨基)-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮的合成
通过以下步骤合成标题化合物。
在室温下，向3-(8-氟-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-2-基)哌啶-2,6-二酮(100mg；0.36mmol)和17-叠氮基-3,6,9,12,15-五氧杂十七烷-1-胺(96.3mg，0.44mmol)在NMP(3mL)中的溶液中添加乙基双(丙烷-2-基)胺(141mg，1.1mmol)。将反应混合物在110℃下加热16小时。冷却后，将该反应混合物倾倒入水(10mL)中并且用乙酸乙酯(20mL x2)萃取。将所得物用合并的乙酸乙酯萃取，经MgSO4干燥并在减压下浓缩。将所得残余物使用DCM/MeOH(0～10％)通过柱色谱法纯化，以提供标题化合物(103mg，55％)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[562.35]。
在25℃下，向3-(2,3-二氯苯基)-6-{4-甲基-4-[(丙-2-炔-1-基)氨基]哌啶-1-基}吡嗪-2-胺(30mg，0.077mmol)和3-[8-(18-叠氮基-4,7,10,13,16-五氧杂-1-氮杂十八烷-1-基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-2-基]哌啶-2,6-二酮(43.2mg，0.077mmol)在THF/H2O(5mL/5mL)中的溶液中添加抗坏血酸钠(3.04mg，0.0015mmol)和硫酸铜(2.45mg，0.0015mmol)。反应在2小时内进行。将反应混合物倒入50mL水中，并且用EA(50mL x2)萃取，并且经MgSO4干燥。将该反应混合物加载到二氧化硅上并且通过柱层析(DCM/MeOH 0％->10％)分离以提供呈白色晶体的标题化合物(56mg，76.9％)。
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝953.6
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.04(s,1H),9.10(br,1H),8.23(s,1H),8.12(s,1H),7.63(m,2H),7.29-7.42(m,2H),6.93(m,2H),5.57-5.64(br,1H),4.38-4.42(m,2H),4.32(m,2H),4.28(s,1H),3.82(m,2H),3.67-3.74(m,4H),3.57-3.48(m,19H),3.37(m,2H),2.84-3.10(m,6H),1.86-2.15(m,4H),1.52(s,3H)。
实施例62：N1-(3-((3-氨基-5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)-N4-(3-(2-(2-(3-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基)氨基)丙氧基)乙氧基)乙氧基)丙基)琥珀酰胺的合成
通过以下步骤合成标题化合物：
在室温下，向4-((3-((3-氨基-5-((3S,4S)-4-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-4-氧代丁酸(15mg，0.024mmol)在DMF(1mL)中的溶液中添加3-[8-(14-氨基-5,8,11-三氧杂-1-氮杂十四烷-1-基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-2-基]哌啶-2,6-二酮盐酸盐(14.9mg，0.029mmol)和HATU(10mg，0.0266mmol)随后为乙基双(丙-2-基)胺(9.38mg，0.073mmol)。在该反应完成之后，将该反应混合物倾倒入水中并且用乙酸乙酯(50mL x 2)萃取。将有机层分离，经MgSO4干燥，过滤，并且浓缩以得到粗产物。将粗产物通过柱层析纯化以提供boc-保护的化合物，将其用在二噁烷(3mL)中的4N-HCl处理。用LCMS监测反应。将所得物在减压下浓缩以提供标题化合物
(13.1mg，51.5％)
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝979.6.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.05(s,1H),9.61(br,1H),8.21(s,1H),8.19(m,1H),7.75(m,3H),6.95(m,3H),3.40-3.65(m,22H),3.21(m,2H),2.90(m,2H),2.72(m,6H),2.43(m,4H),1.75(m,4H),1.52(m,2H),1.23-1.35(m,8H)。
实施例63：N1-(3-((3-氨基-5-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)-N4-(3-(2-(2-(3-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基)氨基)丙氧基)乙氧基)乙氧基)丙基)琥珀酰胺的合成
通过以下步骤合成标题化合物。
在环境温度下，向4-((3-((3-氨基-5-(4-{[(叔-丁氧基羰基)氨基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基]硫代)-2-氯苯基)氨基)-4-氧代丁酸(15mg，0.027mmol)在DMF(5mL)中的溶液中添加3-[8-(14-氨基-5,8,11-三氧杂-1-氮杂十四烷-1-基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-2-基]哌啶-2,6-二酮(12.6mg，0.026mmol)和HATU(12.1mg，0.032mmol)，随后添加乙基双(丙烷-2-基)胺(17.2mg，0.133mmol)。在该反应完成之后，将该反应混合物倾倒入水中并且用乙酸乙酯(50mL x 2)萃取。将有机层分离，经MgSO4干燥，过滤，并且浓缩以得到粗产物。将粗产物通过MPLC纯化以提供boc-保护的化合物，将其用在二噁烷(3mL)中的4N-HCl处理。用LCMS监测反应。将所得物在减压下浓缩以提供标题化合物。
(13.5mg，51.1％)
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝922.6
实施例64：N1-(3-((3-氨基-5-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)-N4-(14-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基)氨基)-3,6,9,12-四氧杂十四烷基)琥珀酰胺的合成
通过以下步骤合成标题化合物。
在环境温度下，向4-((3-((3-氨基-5-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基]硫基)-2-氯苯基)氨基)-4-氧代丁酸(15mg，0.027mmol)在DMF(5mL)中的溶液中添加3-[8-(15-氨基-4,7,10,13-四氧杂-1-氮杂十五烷-1-基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-2-基]哌啶-2,6-二酮(15.7mg，0.032mmol)和HATU(7.51mg，0.032mmol)，随后添加乙基双(丙烷-2-基)胺(17.2mg，0.133mmol)。在该反应完成之后，将该反应混合物倾倒入水中并且用乙酸乙酯(50mL x 2)萃取。将有机层分离，经MgSO4干燥，过滤，并且浓缩以得到粗产物。将粗产物通过MPLC纯化以提供boc-保护的化合物，将其用在二噁烷(3mL)中的4N-HCl处理。用LCMS监测反应。将生成物在减压下进行浓缩以提供标题化合物(产率：16.2mg，60.3％)。
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝938.4.
δppm 11.12(s,1H)9.52(s,1H)8.25(m,2H)7.73-7.78(m,2H)7.30(s,1H)7.12(m,1H)6.87(m,2H)6.42(m,1H)6.09(s,2H)5.74(m,1H)3.75(m,2H)3.50(m,12H)3.39(br.,3H)3.20(m,3H)3.10(m,2H)2.90(m,4H)2.54-2.65(m,4H)2.39(m,2H)2.07(m,1H)1.82(m,2H)1.60(m,3H)1.50(br,5H)1.13(s,3H)。
实施例65：N1-(3-((3-氨基-5-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)-N4-(3-(2-(2-(3-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-6-基)氨基)丙氧基)乙氧基)乙氧基)丙基)琥珀酰胺
通过以下步骤合成标题化合物。
将3-(7-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮(200.0mg，0.727mmol)和N-(3-{2-[2-(3-氨基丙氧基)乙氧基]乙氧基}丙基)氨基甲酸叔丁酯(233.0mg，0.727mmol)和DIPEA(0.633mL，3.63mmol)溶解于NMP(2mL)中。将该反应混合物在120℃下搅拌过夜。将该反应用水淬灭，并且将所得物用DCM、NH4Cl和盐水萃取，并且然后经MgSO4干燥。将反应混合物加载到二氧化硅上并通过MPLC分离。获得呈油状的产物。(产率：120mg，29％)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[576.5]。
将(3-(2-(2-(3-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-6-基)氨基)丙氧基)乙氧基)乙氧基)丙基)氨基甲酸叔丁酯(50mg，0.087mmol)溶解在DCM中的20％TFA中。反应结束后，减压浓缩反应混合物。将产物直接用于下一步骤。(产率：40mg，97％)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[476.5]。
将4-((3-((3-氨基-5-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基]硫代)-2-氯苯基)氨基)-4-氧代丁酸(26.1mg，0.046mmol)、HATU(26.4mg，0.069mmol)、DIPEA(0.04mL，0.231mmol)和3-[7-(14-氨基-5,8,11-三氧杂-1-氮杂十四烷-1-基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-2-基]哌啶-2,6-二酮(22mg，0.046mmol)溶解在DMF中。将该反应混合物在室温下搅拌3小时。反应结束后，将反应混合物用EA和水萃取。将有机层经MgSO4干燥并在真空下去除。通过MPLC纯化产物。获得呈白色固体的产物。(产率：30mg，64％)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[1023.5]。
将(1-(6-氨基-5-((2-氯-3-(1-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-6-基)氨基-15-氧代-4,7,10-三氧杂-14-氮杂十八烷-18-酰胺基)苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(30mg，0.029mmol)溶解于1,4二噁烷中，添加在1.4二噁烷中的4N-HCl，并且将该混合物在室温下搅拌3小时。将该反应混合物在减压下进行浓缩。通过氨基二氧化硅柱MPLC纯化产物。(产率：15mg，55％)。
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝923.5
[NMR]1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.55(s,1H)8.14(s,1H)7.86(t,J＝5.26Hz,1H)7.58-7.66(m,2H)7.45(d,J＝7.95Hz,1H)7.10-7.19(m,3H)6.87(t,J＝5.14Hz,1H)6.41(d,J＝8.07Hz,1H)6.09(s,2H)5.74(d,J＝6.85Hz,1H)3.56-3.70(m,2H)3.42-3.56(m,8H)3.39(br.s.,3H)3.15-3.24(m,3H)3.03-3.12(m,2H)2.83-2.97(m,1H)2.54-2.65(m,4H)2.39(t,J＝7.03Hz,2H)2.07(d,J＝10.64Hz,1H)1.82(t,J＝6.54Hz,2H)1.60(quin,J＝6.57Hz,3H)1.47(br.s.,5H)1.14(s,3H)
实施例66：N1-(3-((3-氨基-5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)-N4-(3-(2-(2-(3-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-6-基)氨基)丙氧基)乙氧基)乙氧基)丙基)琥珀酰胺的合成
通过以下步骤合成标题化合物：
将4-((3-((3-氨基-5-((3S,4S)-4-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-4-氧代丁酸(28.7mg，0.046mmol)、HATU(26.4mg，0.069mmol)、DIPEA(0.04mL，0.231mmol)和3-[7-(14-氨基-5,8,11-三氧杂-1-氮杂十四烷-1-基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-2-基]哌啶-2,6-二酮(22mg，0.046mmol)溶解于DMF中。将该反应混合物在室温下搅拌3小时。反应结束后，将反应混合物用EA和水萃取。将有机层经MgSO4干燥并在真空下去除。通过MPLC纯化产物。获得呈白色固体的产物。(产率：30mg，60％)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[1080.5]。
将((3S,4S)-8-(6-氨基-5-((2-氯-3-(1-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-6-基)氨基)-15-氧代-4,7,10-三氧杂-14-氮杂十八烷-18-酰胺基)苯基)硫代)吡嗪-2-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)氨基甲酸叔丁酯(30mg，0.028mmol)溶解于1,4二噁烷中。添加1.4二噁烷中的4N-HCl，并且将混合物在室温下搅拌3小时。将该反应混合物在减压下进行浓缩。通过氨基二氧化硅柱MPLC纯化产物。(产率：15mg，55％)。
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝980.5
[NMR]1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 11.00(s,1H)9.57(s,1H)8.14(s,1H)8.04(br.s.,2H)7.87(t,J＝5.20Hz,1H)7.60-7.69(m,2H)7.46(d,J＝8.19Hz,1H)7.10-7.20(m,3H)6.42(d,J＝6.72Hz,1H)5.74(d,J＝6.60Hz,1H)4.17-4.25(m,2H)4.12(d,J＝12.84Hz,1H)3.90(d,J＝9.05Hz,1H)3.68(d,J＝9.29Hz,4H)3.30-3.40(m,8H)3.21(t,J＝6.72Hz,3H)2.99-3.13(m,4H)2.84-2.97(m,2H)2.54-2.64(m,3H)2.35-2.44(m,2H)2.07(d,J＝9.78Hz,1H)1.78-1.86(m,2H)1.67-1.77(m,2H)1.53-1.65(m,3H)1.19-1.30(m,3H)。
实施例67：N-[3-({3-氨基-5-[(3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基]吡嗪-2-基}硫烷基)-2-氯苯基]-N”-(17-{[3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基]氨基}-3,6,9,12,15-五氧杂十七烷-1-基)丁二酰胺盐酸盐
通过以下步骤合成标题化合物。
将3-[8-(18-叠氮基-4,7,10,13,16-五氧杂-1-氮杂十八烷-1-基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-2-基]哌啶-2,6-二酮(240mg，0.427mmol)添加至Pd/C(4.5mg，0.0427mmol)在甲醇中的溶液中，并且将该混合物在室温下在氢气氛下搅拌14小时。将该混合物通过硅藻土过滤并且在减压下去除挥发性物以提供粗残余物。(83.0％，190mg)
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝536.3
向3-[8-(18-氨基-4,7,10,13,16-五氧杂-1-氮杂十八烷-1-基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-2-基]哌啶-2,6-二酮(8.64mg，0.016mmol)、3-{[3-({3-氨基-5-[(3S,4S)-4-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基]吡嗪-2-基}硫烷基)-2-氯苯基]氨甲酰基}丙酸(15mg，0.024mmol)、HATU(9.2mg，0.024mmol)在DMF中的溶液里添加DIPEA(8.61uL，0.048mmol)。将该混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取。将有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，并浓缩。通过柱色谱法分离所希望的产物。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[1040.6]。
实施例68：N-(3-{[3-氨基-5-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基]硫烷基}-2-氯苯基)-N’-(17-{[3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基]氨基}-3,6,9,12,15-五氧杂十七烷-1-基)丁二酰胺盐酸盐的合成
通过以下步骤合成标题化合物。
将3-[8-(18-叠氮基-4,7,10,13,16-五氧杂-1-氮杂十八烷-1-基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-2-基]哌啶-2,6-二酮(240mg，0.427mmol)添加至Pd/C(4.55mg，0.0427mmol)在甲醇中的溶液中，并且将该混合物在室温下在氢气氛下搅拌14小时。将该混合物通过硅藻土过滤并且在减压下去除挥发性物以提供粗残余物。(83.01％，190mg)。
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝536.7
向3-[(3-{[3-氨基-5-(4-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基]硫烷基}-2-氯苯基)氨甲酰基]丙酸(15mg，0.0266mmol)、3-[8-(18-氨基-4,7,10,13,16-五氧杂-1-氮杂十八烷-1-基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-2-基]哌啶-2,6-二酮(14.2mg，0.0266mmol)、HATU(9.38mg，0.0399mmol)在DMF中的溶液中添加DIPEA(23.7μL，0.133mmol)。将该混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取。将有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，并浓缩。通过柱色谱法分离所希望的产物。(产率：56.4％，15.3mg)。
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝983.6
实施例69：N-[3-({3-氨基-5-[(3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基]吡嗪-2-基}硫烷基)-2-氯苯基]-N’-(14-{[3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基]氨基}-3,6,9,12-四氧杂十四烷-1-基)丁二酰胺盐酸盐
通过以下步骤合成标题化合物：
向3-[8-(15-氨基-4,7,10,13-四氧杂-1-氮杂十五烷-1-基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-2-基]哌啶-2,6-二酮(7.93mg，0.016mmol)、3-{[3-({3-氨基-5-[(3S,4S)-4-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基]吡嗪-2-基}硫烷基)-2-氯苯基]氨甲酰基}丙酸(15mg，0.024mmol)、HATU(9.2mg，0.024mmol)在DMF中的溶液里添加DIPEA(8.61μL，0.048mmol)。将该混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取。将有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，并浓缩。通过柱色谱法分离所希望的产物。(产率：53.4％，8.89mg)。
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[996.5]
实施例70：N-[3-({3-氨基-5-[(3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基]吡嗪-2-基}硫烷基)-2-氯苯基]-N’-{3-[4-(3-{[3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基]氨基}丙基)哌嗪-1-基]丙基}丁二酰胺三盐酸盐的合成
通过以下步骤合成标题化合物：
向3-[8-({3-[4-(3-氨基丙基)哌嗪-1-基]丙基}氨基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-2-基]哌啶-2,6-二酮二盐酸盐(8.52mg，0.0161mmol)、3-{[3-({3-氨基-5-[(3S,4S)-4-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基]吡嗪-2-基}硫烷基)-2-氯苯基]氨甲酰基}丙酸(15mg，0.0241mmol)、HATU(9.2mg，0.0242mmol)在DMF中的溶液中添加DIPEA(8.61μL，0.0484mmol)。将该混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取。将有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，并浓缩。
将所得化合物溶解于DCM(2ml)中，并且将在二噁烷中的4N HCl缓慢逐滴添加至该溶液中，并且超声处理10分钟。将残余物蒸发并且溶解在MeOH中。将溶剂蒸发并且在真空中干燥。通过柱色谱法分离所希望的产物。(产率：47.5％，8.18mg)。
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝960.0
实施例71：N1-(3-((3-氨基-5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)-N4-(3-(2-(2-(3-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基)氨基)丙氧基)乙氧基)乙氧基)丙基)琥珀酰胺
通过以下步骤合成标题化合物：
将3-(8-氟-4-甲基-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮(150mg，0.519mmol)、(3-(2-(2-(3-氨基丙氧基)乙氧基)乙氧基)丙基)氨基甲酸叔丁酯(199mg，0.622mmol)和DIPEA(0.271mL，1.56mmol)在NMP(1mL)中的溶液在120℃搅拌16小时。将该反应混合物通过反向柱层析进行纯化以得到产物。(产率：236mg，77.2％)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[590.2]。
向(3-(2-(2-(3-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基)氨基)丙氧基)乙氧基)乙氧基)丙基)氨基甲酸叔丁酯(20mg，0.034mmol)在0.3ml DCM中的溶液中添加0.1ml TFA并且将该混合物在室温下搅拌1小时。将该反应混合物在真空中浓缩并且用于下一步骤而无需进一步纯化。(产率：16.6mg，定量)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[490.2]。
向3-(8-((3-(2-(2-(3-氨基丙氧基)乙氧基)乙氧基)丙基)氨基)-4-甲基-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮(16.6mg，0.034mmol)、4-((3-((3-氨基-5-((3S,4S)-4-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-4-氧代丁酸(20mg，0.032mmol)和DIPEA(0.028ml，0.16mmol)在DMF(1mL)中的溶液中在0℃下添加添加HATU(19.3mg，0.051mmol)，并且将混合物在室温下搅拌1小时。将该反应混合物通过反向柱层析进行纯化以得到产物。(产率：31mg，83.7％)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[1092.6]。
向((3S,4S)-8-(6-氨基-5-((2-氯-3-(1-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基)氨基)-15-氧代-4,7,10-三氧杂-14-氮杂十八烷-18-酰胺基)苯基)硫代)吡嗪-2-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)氨基甲酸叔丁酯(31mg，0.028mmol)在0.3ml DCM中的溶液里添加0.1ml TFA并且将该混合物在室温下搅拌1小时。将该反应混合物在真空中浓缩。将该反应混合物通过氨基硅胶柱层析进行纯化以得到产物。(产率：17.5mg，62.2％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝10.99(s,1H),9.55(s,1H),8.96(t,J＝5.3Hz,1H),7.86(t,J＝5.6Hz,1H),7.66(t,J＝8.1Hz,1H),7.63(s,1H),7.45(d,J＝7.6Hz,1H),7.14(t,J＝8.1Hz,1H),6.91(d,J＝8.2Hz,1H),6.91(d,J＝7.6Hz,1H),6.11(s,2H),5.63(m,1H),4.08(m,1H),3.86(m,2H),3.68(d,J＝8.07Hz,1H),3.57-3.47(m,10H),3.47-3.42(m,2H),3.37(m,4H),3.27(m,4H),3.08(q,J＝6.77Hz,2H),2.95(d,J＝4.9Hz,1H),2.91-2.83(m,1H),2.66-2.53(m,4H),2.41(s,3H),2.39(m,2H),2.07(m,1H),1.85(q,J＝6.5Hz,2H),1.72-1.40(m,6H),1.35-1.15(m,2H),1.09(d,J＝6.6Hz,3H)
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[992.6][994.6]
实施例72：N1-(3-((3-氨基-5-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)-N4-(3-(2-(2-(3-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-6-基)氨基)丙氧基)乙氧基)乙氧基)丙基)琥珀酰胺的合成
通过以下步骤合成标题化合物：
将3-(6-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮(200.0mg，0.727mmol)、N-(3-{2-[2-(3-氨基丙氧基)乙氧基]乙氧基}丙基)氨基甲酸叔丁酯(233.0mg，0.727mmol)和DIPEA(0.633mL，3.63mmol)溶解在NMP(2mL)中。将该反应混合物在120℃下搅拌过夜。将该反应用水淬灭，并且将所得物用DCM、NH4Cl和盐水萃取，并且然后经MgSO4干燥。将反应混合物加载到二氧化硅上并通过MPLC分离。获得呈油状的产物。(产率：150mg，38％)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[576.5]。
将N-(3-{2-[2-(3-{[2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-6-基]氨基}丙氧基)乙氧基]乙氧基}丙基)氨基甲酸叔丁酯(31mg，0.054mmol)溶解在DCM中的20％TFA中。反应结束后，减压浓缩反应混合物。将产物直接用于下一步骤。(产率：25mg，97％)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[476.5]。
将4-((3-((3-氨基-5-(4-((叔丁氧基羰基)氨基}-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基-4-氧代丁酸(29.7mg，0.052mmol)、HATU(30.0mg，0.079mmol)、DIPEA(0.05mL，0.263mmol)和3-[6-(14-氨基-5,8,11-三氧杂-1-氮杂十四烷-1-基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-2-基]哌啶-2,6-二酮(25mg，0.052mmol)溶解在DMF中。将该反应混合物在室温下搅拌3小时。反应结束后，将反应混合物用EA和水萃取。将有机层经MgSO4干燥并在真空下去除。通过MPLC纯化产物。获得呈白色固体的产物。(产率：30mg，56％)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[1023.5]。
将(1-(6-氨基-5-((2-氯-3-(1-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-6-基)氨基-15-氧代-4,7,10-三氧杂-氮杂十八烷-19-酰胺基)苯基)硫代)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(30mg，0.029mmol)溶解于1,4二噁烷中。添加1.4二噁烷中的4M HCl，并且将该混合物在室温下搅拌3小时。将该反应混合物在减压下进行浓缩。通过氨基二氧化硅柱MPLC纯化产物。(产率：17mg，35％)。
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝923.5
[NMR]1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.56(s,1H)8.42(s,2H)8.18(s,1H)7.91(d,J＝8.68Hz,1H)7.86(s,1H)7.62(s,1H)7.45(d,J＝8.07Hz,1H)7.14(t,J＝8.07Hz,1H)7.07(d,J＝8.68Hz,1H)6.89(s,1H)6.76(s,1H)6.41(d,J＝7.95Hz,1H)6.10(s,2H)5.73(s,1H)3.63(br.s.,2H)3.43-3.56(m,8H)3.20(d,J＝5.38Hz,3H)3.08(d,J＝5.26Hz,2H)2.89(br.s.,1H)2.67(s,1H)2.54-2.64(m,4H)2.39(t,J＝6.85Hz,2H)2.07(br.s.,1H)1.82(t,J＝6.24Hz,2H)1.60(t,J＝7.03Hz,3H)1.49(br.s.,5H)1.14(s,3H)。
实施例73：N1-(3-((3-氨基-5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)-N4-(3-(2-(2-(3-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-6-基)氨基)丙氧基)乙氧基)乙氧基)丙基)琥珀酰胺
通过以下步骤合成标题化合物：
将4-((3-((3-氨基-5-((3S,4S)-4-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-4-氧代丁酸(32.7mg，0.053mmol)、HATU(30.0mg，0.079mmol)、DIPEA(0.05mL，0.263mmol)和3-[6-(14-氨基-5,8,11-三氧杂-1-氮杂十四烷-1-基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-2-基]哌啶-2,6-二酮(25mg，0.053mmol)溶解于DMF中。将该反应混合物在室温下搅拌3小时。反应结束后，将反应混合物用EA和水萃取。将有机层经MgSO4干燥并在真空下去除。通过MPLC纯化产物。获得呈白色固体的产物。(产率：40mg，71％)。MS(ESI，m/z)：[M+1]+＝[1080.5]。
将((3S,4S)-8-(6-氨基-5-((2-氯-3-(1-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-6-基)氨基)-15-氧代-4,7,10-三氧杂-14-氮杂十八烷-18-酰胺基)苯基)硫代)吡嗪-2-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)氨基甲酸叔丁酯(30mg，0.028mmol)溶解于1,4二噁烷中。添加1.4二噁烷中的4M-HCl并且将该混合物在室温下搅拌3小时。将该反应混合物在减压下进行浓缩。通过氨基硅胶柱MPLC纯化该产物。(产率：17mg，35％)。
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝980.5
[NMR]1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 10.99(br.s.,1H)7.03-7.19(m,2H)9.55(s,1H)8.18(s,1H)7.81-7.95(m,2H)7.62(s,1H)7.45(d,J＝7.95Hz,1H)6.88(t,J＝5.26Hz,1H)6.76(d,J＝2.08Hz,1H)6.42(d,J＝7.95Hz,1H)6.10(s,2H)5.72(dd,J＝12.10,5.14Hz,1H)4.07(quin,J＝6.05Hz,1H)3.86(br.s.,2H)3.68(d,J＝8.56Hz,1H)3.44-3.58(m,10H)3.15-3.24(m,4H)3.08(q,J＝6.52Hz,3H)2.84-2.96(m,2H)2.53-2.66(m,4H)2.35-2.43(m,2H)2.02-2.11(m,1H)1.77 -1.87(m,2H)1.72(t,J＝9.72Hz,1H)1.60(quin,J＝6.57Hz,4H)1.54(br.s.,1H)1.48(br.s.,1H)1.09(d,J＝6.48Hz,3H)。
实施例74：N1-(3-((3-氨基-5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)-N4-(12-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基)氨基)-12-氧代十二烷基)琥珀酰胺
通过以下步骤合成标题化合物。
在0℃下，向3-(8-氨基-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮(14mg，0.051mmol)、12-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}十二烷酸(40.6mg，0.129mmol)和DIPEA(40mg，0.0309mmol)在0.3ml DMAC中的溶液中添加SOCl2(16.5mg，0.139mmol)，并且将该混合物在50℃下搅拌16小时。将该反应混合物通过反相柱色谱法(水(0.1％ FA)/ACN(0.1％ FA)＝95/1至0/100梯度)进行纯化以得到产物。(产率：9.1mg，31.6％)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[568.2]。
向(12-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基)氨基)-12-氧代十二烷基)氨基甲酸叔丁酯(9.1mg，0.016mmol)在0.5ml DCM中的溶液中添加0.1ml TFA，并且将混合物在室温下搅拌1小时。将该反应混合物在真空中浓缩并且用于下一步骤而无需进一步纯化。(产率：7.5mg，定量)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[470.2]。
向12-氨基-N-(3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基)十二烷酰胺(7.5mg，0.016mmol)、4-((3-((3-氨基-5-((3S,4S)-4-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-4-氧代丁酸(9.92mg，0.016mmol)和DIPEA(0.014ml,0.08mmol)在DMF(0.4mL)中的溶液中在0℃下添加HATU(9.1mg，0.024mmol)，并且将混合物在室温下搅拌1小时。将该反应混合物通过反向柱层析进行纯化以得到产物。(产率：10mg，58.4％)。L MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[1072.2]和[1074.2]。
向((3S,4S)-8-(6-氨基-5-((2-氯-3-(4-((12-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基)氨基)-12-氧代十二烷基)氨基)-4-氧代丁酰氨基)苯基)硫代)吡嗪-2-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)氨基甲酸叔丁酯(10mg，0.093mmol)在0.3ml DCM中的溶液里添加0.1ml TFA并且将混合物在室温下搅拌1小时。将该反应混合物在真空中浓缩。将该反应混合物通过氨基硅胶柱层析进行纯化以得到产物。(产率：5.4mg，34.8％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝12.25(s,1H),9.55(s,1H),8.92(d,J＝8.3Hz,1H),8.51(s,1H),7.94(t,J＝8.1Hz,1H),7.84(t,J＝5.5Hz,1H),7.62(s,1H),7.61(d,J＝8.1Hz,1H),7.45(d,J＝7.1Hz,1H),7.14(t,J＝8.1Hz,1H),6.42(dd,J＝7.9,1.3Hz,1H),6.10(s,2H),5.85(m,1H),4.05(m,1H),3.82(m,2H),3.57(dd,J＝74.09,8.07Hz,2H),3.26(m,2H),3.07(q,J＝6.09Hz,2H),2.93(m,1H),2.90(d,J＝9.05Hz,1H),2.69-2.55(m,4H),2.43(t,J＝7.2Hz,2H),2.39(t,J＝7.2Hz,2H),2.15(m,1H),1.72-1.56(m,4H),1.55-1.40(m,2H),1.4-1.15(m,19H),1.08(d,J＝6.4Hz,3H).
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[972.6][974.6]。
实施例75：N-(3-((3-氨基-5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)-4-(4-(3-(2-(2-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基)氨基)乙氧基)乙氧基)丙酰基)哌嗪-1-基)-4-氧代丁酰胺
通过以下步骤合成标题化合物。
将3-(8-氨基-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮(200mg，0.727mmol)、3-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)丙酸叔丁酯(203mg，0.872mmol)和DIPEA(0.38ml，2.18mmol)在1.5ml NMP中的溶液在125℃下搅拌20小时。将该反应混合物通过反相柱色谱法(水(0.1％FA)/ACN(0.1％FA)＝95/1至0/100梯度)进行纯化以得到产物。(产率：320mg，90.14％)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[489.0]。
向3-(2-(2-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基)氨基)乙氧基)乙氧基)丙酸叔丁酯(320mg，0.655mmol)在5ml DCM中的溶液中添加1ml TFA并且将该混合物在室温下搅拌1小时。将该反应混合物在真空中浓缩并且用于下一步骤而无需进一步纯化。(产率：325mg，0.43TFA盐，定量)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[433.0]。
在0℃下，向3-(2-(2-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基)氨基)乙氧基)乙氧基)丙酸(15mg，0.0347mmol)、哌嗪-1-甲酸叔丁酯(11.6mg，0.052mmol)和DIPEA(0.018ml，0.104mmol)在DMF(0.4mL)中的溶液中添加HATU(19.8mg，0.052mmol)，并且将混合物在室温下搅拌1小时。将该反应混合物通过反向柱层析进行纯化以得到产物。(产率：20mg，96％)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[601.2]。
向4-(3-(2-(2-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基)氨基)乙氧基)乙氧基)丙酰基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(20mg，0.033mmol)在0.5ml DCM中的溶液中添加0.1ml TFA并且在室温下搅拌1小时。将该反应混合物在真空中浓缩并且用于下一步骤而无需进一步纯化。(产率：16.7mg，定量)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[501.2]。
在0℃下向3-(1-氧代-8-((2-(2-(3-氧代-3-(哌嗪-1-基)丙氧基)乙氧基)乙基)氨基)酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮(16.7mg，0.033mmol)、4-((3-((3-氨基-5-((3S,4S)-4-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-4-氧代丁酸(18.6mg，0.030mmol)和DIPEA(0.035ml，0.2mmol)在DMF(0.4mL)中的溶液中添加HATU(15.2mg，0.040mmol)，并且将混合物在室温下搅拌1小时。将该反应混合物通过反向柱层析进行纯化以得到产物。(产率：16.3mg，44.3％)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[1103.8]和[1105.6]。
向((3S,4S)-8-(6-氨基-5-((2-氯-3-(4-(4-(3-(2-(2-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基)氨基)乙氧基)乙氧基)丙酰基)哌嗪-1-基)-4-氧代丁酰氨基)苯基)硫代)吡嗪-2-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)氨基甲酸酯(16.3mg，0.0148mmol)在0.3ml DCM中的溶液里添加0.1ml TFA并且将混合物在室温下搅拌1小时。将该反应混合物在真空中浓缩。将该反应混合物通过氨基硅胶柱色谱法进行纯化以得到产物。
(产率：12mg，81％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.03(s,1H),9.54(s,1H),8.83(s,1H),8.22(s,1H),7.65(t,J＝7.8Hz,1H),7.63(s,1H),7.48(d,J＝7.3Hz,1H),7.14(t,J＝8.1Hz,1H),6.92(d,J＝8.1Hz,1H),6.91(d,J＝8.1Hz,1H),6.42(dd,J＝8.1,1.5Hz,1H),6.10(s,2H),5.72(m,1H),4.08(m,1H),3.87(m,2H),3.72-3.6(m,5H),3.6-3.5(m,4H),3.5-3.35(m,11H),3.26(m,2H),2.95(d,J＝5.1Hz,1H),2.89(m,1H),2.64(s,4H),2,58 -2.5(m,4H),2.10(m,1H),1.76-1.40(m,4H),1.09(d,J＝6.6Hz,3H).
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[1003.6][1005.6]。
实施例76：N-(3-((3-氨基-5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)-4-(4-(3-(2-(2-(2-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)丙酰基)哌嗪-1-基)-4-氧代丁酰胺
通过以下步骤合成标题化合物。
将3-(8-氨基-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮(200mg，0.727mmol)、3-(2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)乙氧基)丙酸叔丁酯(242mg，0.872mmol)和DIPEA(0.38ml，2.18mmol)在1.5ml NMP中的溶液在125℃下搅拌20小时。将该反应混合物通过反相柱色谱法(水(0.1％ FA)/ACN(0.1％ FA)＝95/1至0/100梯度)进行纯化以得到产物。(产率：360mg，93％)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[533.2]。
向3-(2-(2-(2-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)丙酸叔丁酯(360mg，0.676mmol)在5ml DCM中溶液中添加1ml TFA并且将该混合物在室温下搅拌1小时。将该反应混合物在真空中浓缩并且用于下一步骤而无需进一步纯化。(产率：479mg，1.37TFA盐，定量)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[477.0]。
在0℃下，向3-(2-(2-(2-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)丙酸(17mg，0.0357mmol)、哌嗪-1-甲酸叔丁酯(11.9mg，0.0535mmol)和DIPEA(0.0186ml，0.107mmol)在DMF(0.4mL)中的溶液中添加HATU(20.3mg，0.054mmol)，并且将混合物在室温下搅拌1小时。将该反应混合物通过反向柱层析进行纯化以得到产物。(产率：22mg，95.6％)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[645.2]。
向4-(3-(2-(2-(2-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)丙酰基)哌嗪-1-甲酸酯(22mg，0.034mmol)在0.5ml DCM中的溶液中添加0.1ml TFA并且将该混合物在室温下搅拌1小时。将该反应混合物在真空中浓缩并且用于下一步骤而无需进一步纯化。(产率：19.4mg，定量)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[545.2]。
在0℃下，向3-(1-氧代-8-((2-(2-(2-(3-氧代-3-(哌嗪-1-基)丙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基)酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮(19.4mg，0.035mmol)、4-((3-((3-氨基-5-((3S,4S)-4-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-4-氧代丁酸(17.7mg，0.028mmol)和DIPEA(0.037ml，0.214mmol)中在DMF(0.4mL)中的溶液中添加HATU(17.6mg，0.046mmol)，并且将混合物在室温下搅拌1小时。将该反应混合物通过反向柱层析进行纯化以得到产物。(产率：22mg，53.7％)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[1147.6]和[1149.6]。
向((3S,4S)-8-(6-氨基-5-((2-氯-3-(4-(4-(3-(2-(2-(2-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)丙酰基)哌嗪-1-基)-4-氧代丁酰氨基)苯基)硫代)吡嗪-2-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)氨基甲酸叔丁酯(22mg，0.019mmol)在0.3ml DCM中的溶液里添加0.1ml TFA并且将该混合物在室温下搅拌1小时。将该反应混合物在真空中浓缩。将该反应混合物通过氨基硅胶柱色谱法进行纯化以得到产物。(产率：15.5mg，77.2％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.03(s,1H),9.55(s,1H),8.82(s,1H),8.23(s,1H),7.66(s,1H),7.64(t,J＝7.8Hz,1H),7.48(d,J＝7.3Hz,1H),7.14(t,J＝8.1Hz,1H),6.92(d,J＝8.1Hz,1H),6.91(d,J＝8.1Hz,1H),6.42(dd,J＝8.1,1.5Hz,1H),6.15(s,2H),5.71(m,1H),4.18(m,1H),4.12(m,2H),3.86(m,1H),3.72-3.6(m,5H),3.6-3.5(m,4H),3.52-3.45(m,4H),3.45-3.35(m,11H),3.12(m,1H),3.04(m,3H),2.90(m,1H),2.65(s,4H),2,58 -2.5(m,3H),2.09(m,1H),1.76-1.40(m,4H),1.23-1.1(m,3H).
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[1047.6][1049.6]。
实施例77：N-(3-((3-氨基-5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)-4-(4-(1-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基)氨基)-3,6,9,12-四氧杂十五-15-酰基)哌嗪-1-基)-4-氧代丁酰胺
通过以下步骤合成标题化合物。
将3-(8-氨基-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮(200mg，0.727mmol)、1-氨基-3,6,9,12-四氧杂十五-15-酸叔丁酯(280mg，0.872mmol)和DIPEA(0.38ml，2.18mmol)在1.5ml NMP中的溶液在125℃下搅拌20小时。将该反应混合物通过反相柱色谱法(水(0.1％FA)/ACN(0.1％FA)＝95/1至0/100梯度)进行纯化以得到产物。(产率：360mg，85.9％)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[577.2]。
向1-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基)氨基)-3,6,9,12-四氧杂十五-15-酸叔丁酯(360mg，0.624mmol)在5ml DCM中的溶液中添加1ml TFA并且将该混合物在室温下搅拌1小时。将该反应混合物在真空中浓缩并且用于下一步骤而无需进一步纯化。(产率：564mg，1.92TFA盐，定量)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[521.0]。
在0℃下，向1-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基)氨基)-3,6,9,12-四氧杂十五-15-酸(18.6mg，0.0357mmol)、哌嗪-1-甲酸叔丁酯(11.9mg，0.0535mmol)和DIPEA(0.0186ml，0.107mmol)在DMF(0.4mL)中的溶液中添加HATU(20.3mg，0.054mmol)，并且将混合物在室温下搅拌1小时。将该反应混合物通过反向柱层析进行纯化以得到产物。(产率：24mg，99％)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[689.4]。
向4-(1-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基)氨基)-3,6,9,12-四氧杂十五-15-酰基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(24mg，0.035mmol)在0.5ml DCM中的溶液中添加0.1ml TFA并且将该混合物在室温下搅拌1小时。将该反应混合物在真空中浓缩并且用于下一步骤而无需进一步纯化。(产率：21mg，定量)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[589.2]。
在0℃下，向3-(1-氧代-8-((15-氧代-15-(哌嗪-1-基)-3,6,9,12-四氧杂十五烷基)氨基)酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮(21mg，0.035mmol)、4-((3-((3-氨基-5-((3S,4S)-4-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-4-氧代丁酸(17.7mg，0.028mmol)和DIPEA(0.037ml，0.214mmol)在DMF(0.4mL)中的溶液中添加HATU(17.6mg，0.046mmol)，并且将混合物在室温下搅拌1小时。将该反应混合物通过反向柱层析进行纯化以得到产物。(产率：19.2mg，45％)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[1191.8]和[1193.6]。
向((3S,4S)-8-(6-氨基-5-((2-氯-3-(4-(4-(1-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基)氨基)-3,6,9,12-四氧杂十五-15-酰基)哌嗪-1-基)-4-氧代丁酰氨基)苯基)硫代)吡嗪-2-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)氨基甲酸叔丁酯(19.2mg，0.016mmol)在0.3ml DCM中的溶液里添加0.1ml TFA并且将该混合物在室温下搅拌1小时。将该反应混合物在真空中浓缩。将该反应混合物通过氨基硅胶柱层析进行纯化以得到产物。(产率：17.2mg，97％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.03(s,1H),9.55(s,1H),8.84(s,1H),8.23(s,1H),7.67(s,1H),7.65(t,J＝7.8Hz,1H),7.49(d,J＝7.3Hz,1H),7.14(t,J＝8.1Hz,1H),6.92(d,J＝8.2Hz,1H),6.91(d,J＝8.1Hz,1H),6.42(dd,J＝8.1,1.5Hz,1H),6.16(s,2H),5.71(m,1H),4.20(m,2H),4.15(m,1H),3.89(m,1H),3.72-3.6(m,5H),3.6-3.5(m,5H),3.52-3.45(m,4H),3.45-3.35(m,13H),3.1(m,3H),3.04(m,1H),2.90(m,1H),2.65(s,4H),2,58 -2.5(m,3H),2.09(m,1H),1.76-1.40(m,4H),1.23-1.1(m,3H).
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[1091.6][1093.6]。
实施例78：N-(3-((3-氨基-5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)-4-(4-(1-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基)氨基)-3,6,9,12,15-五氧杂十八-18-酰基)哌嗪-1-基)-4-氧代丁酰胺
通过以下步骤合成标题化合物。
将3-(8-氨基-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮(200mg，0.727mmol)、1-氨基-3,6,9,12,15-五氧杂十八-18-酸叔丁酯(319mg，0.872mmol)和DIPEA(0.38ml，2.18mmol)在1.5ml NMP中的溶液在125℃下搅拌20小时。将该反应混合物通过反相柱色谱法(水(0.1％ FA)/ACN(0.1％FA)＝95/1至0/100梯度)进行纯化以得到产物。(产率：416mg，92.3％)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[621.2]。
向1-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基)氨基)-3,6,9,12,15-五氧杂十八-18-酸叔丁酯(416mg，0.670mmol)在5ml DCM中的溶液中加入1ml TFA并且将该混合物在室温下搅拌1小时。将该反应混合物在真空中浓缩并且用于下一步骤而无需进一步纯化。(产率：652mg，2.8TFA盐，定量)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[565.2]。
在0℃下，向1-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基)氨基)-3,6,9,12,15-五氧杂十八-18-酸(20.1mg，0.0357mmol)、哌嗪-1-甲酸叔丁酯(11.9mg，0.0535mmol)和DIPEA(0.0186ml，0.107mmol)在DMF(0.4mL)中的溶液中添加HATU(20.3mg，0.054mmol)，并且将混合物在室温下搅拌1小时。将该反应混合物通过反向柱层析进行纯化以得到产物。(产率：26mg，99％)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[733.4]。
向4-(1-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基)氨基)-3,6,9,12,15-五氧杂十八-18-酰基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(26mg，0.035mmol)在0.5ml DCM中的溶液中添加0.1ml TFA并且将该混合物在室温下搅拌1小时。将该反应混合物在真空中浓缩并且用于下一步骤而无需进一步纯化。(产率：22.6mg，定量)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[633.2]。
在0℃下，向3-(1-氧代-8-((18-氧代-18-(哌嗪-1-基)-3,6,9,12,15-五氧杂十八烷基)氨基)酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮(26mg，0.035mmol)、4-((3-((3-氨基-5-((3S,4S)-4-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-4-氧代丁酸(17.7mg，0.028mmol)和DIPEA(0.037ml，0.214mmol)在DMF(0.4mL)中的溶液中添加HATU(17.6mg，0.046mmol)，并且将混合物在室温下搅拌1小时。将该反应混合物通过反向柱层析进行纯化以得到产物。(产率：22mg，48％)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[1235.8]和[1237.8]。
向((3S,4S)-8-(6-氨基-5-((2-氯-3-(4-(4-(1-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基)氨基)-3,6,9,12,15-五氧杂十八-18-酰基)哌嗪-1-基)-4-氧代丁酰氨基)苯基)硫代)吡嗪-2-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)氨基甲酸叔丁酯(22mg，0.018mmol)在0.3ml DCM中的溶液里添加0.1ml TFA并且在室温下搅拌1小时。将该反应混合物在真空中浓缩。将该反应混合物通过氨基硅胶柱层析进行纯化以得到产物。(产率：16mg，79％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.05(s,1H),9.54(s,1H),8.83(t,J＝5.3Hz,1H),8.22(s,1H),7.64(t,J＝7.8Hz,1H),7.62(s,1H),7.48(d,J＝7.3Hz,1H),7.14(t,J＝8.1Hz,1H),6.92(d,J＝8.2Hz,1H),6.91(d,J＝8.1Hz,1H),6.42(dd,J＝8.1,1.5Hz,1H),6.10(s,2H),5.71(m,1H),4.06(m,2H),3.84(m,2H),3.72-3.6(m,5H),3.6-3.5(m,5H),3.52-3.45(m,4H),3.45-3.35(m,15H),3.3-3.1(m,5H),3.04(m,1H),2.90(m,1H),2.65(s,4H),2,58 -2.5(m,3H),2.09(m,1H),1.76-1.40(m,4H),1.08(d,J＝6.4Hz,3H).
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[1135.8][1137.8]。
实施例79：N-(3-((3-氨基-5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)-4-(4-(1-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基)氨基)-3,6,9,12,15,18-六氧杂二十一烷-21-酰基)哌嗪-1-基)-4-氧代丁酰胺
通过以下步骤合成标题化合物：
将3-(8-氨基-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮(200mg，0.727mmol)、1-氨基-3,6,9,12,15,18-六氧杂二十一-21-酸叔丁酯(357mg，0.872mmol)和DIPEA(0.38ml，2.18mmol)在1.5ml NMP中的溶液在125℃下搅拌20小时。将该反应混合物通过反相柱色谱法(水(0.1％ FA)/ACN(0.1％ FA)＝95/1至0/100梯度)进行纯化以得到产物。(产率：439mg，90.9％)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[665.4]。
向1-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基)氨基)-3,6,9,12,15,18-六氧杂二十一-21-酸叔丁酯(439mg，0.660mmol)在5ml DCM中的溶液中添加1mlTFA并且将该混合物在室温下搅拌1小时。将该反应混合物在真空中浓缩并且用于下一步骤而无需进一步纯化。(产率：659mg，2.2TFA盐，定量)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[609.2]。
在0℃下，向1-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基)氨基)-3,6,9,12,15,18-六氧杂二十一烷-21-酸(21.7mg，0.0357mmol)、哌嗪-1-甲酸叔丁酯(11.9mg，0.0535mmol)和DIPEA(0.0186ml，0.107mmol)在DMF(0.4mL)中的溶液中添加HATU(20.3mg，0.054mmol)，并且将混合物在室温下搅拌1小时。将该反应混合物通过反向柱层析进行纯化以得到产物。(产率：28mg，定量)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[777.4]。
向4-(1-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基)氨基)-3,6,9,12,15,18-六氧杂二十一烷-21-酰基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(28mg，0.035mmol)在0.5mlDCM中的溶液中添加0.1ml TFA并且将该混合物在室温下搅拌1小时。将该反应混合物在真空中浓缩并且用于下一步骤而无需进一步纯化。(产率：24mg，定量)。MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[677.4]。
在0℃下，向3-(1-氧代-8-((21-氧代-21-(哌嗪-1-基)-3,6,9,12,15,18-六氧杂二十一烷基)氨基)酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮(24mg，0.035mmol)、4-((3-((3-氨基-5-((3S,4S)-4-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)氨基)-4-氧代丁酸(17.5mg，.028mmol)和DIPEA(0.037ml，0.214mmol)在DMF(0.4mL)中的溶液中添加HATU(17.6mg，0.046mmol)，并且将混合物在室温下搅拌1小时。将该反应混合物通过反向柱层析进行纯化以得到产物。
(产率：23mg，50.6％)
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[1279.6][1281.6]
向((3S,4S)-8-(6-氨基-5-((2-氯-3-(4-(4-(1-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基)氨基)-3,6,9,12,15,18-六氧杂二十一-21-酰基)哌嗪-1-基)-4-氧代丁酰氨基)苯基)硫代)吡嗪-2-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)氨基甲酸叔丁酯(23mg，0.018mmol)在0.3ml DCM中的溶液里添加0.1ml TFA并且将该混合物在室温下搅拌1小时。将该反应混合物在真空中浓缩。将该反应混合物通过氨基硅胶柱色谱法进行纯化以得到产物。(产率：11.4mg，53.77％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.01(s,1H),9.54(s,1H),8.83(t,J＝5.3Hz,1H),8.22(s,1H),7.64(t,J＝7.8Hz,1H),7.62(s,1H),7.48(d,J＝7.3Hz,1H),7.14(t,J＝8.1Hz,1H),6.92(d,J＝8.2Hz,1H),6.92(d,J＝8.1Hz,1H),6.42(dd,J＝8.1,1.5Hz,1H),6.10(s,2H),5.71(m,1H),4.06(m,1H),3.82(m,2H),3.72-3.6(m,5H),3.6-3.5(m,5H),3.52-3.45(m,4H),3.45-3.35(m,17H),3.3-3.1(m,5H),3.04(m,2H),2.90(m,2H),2.65(s,4H),2,58 -2.5(m,3H),2.09(m,1H),1.76-1.40(m,4H),1.08(d,J-6.5Hz,3H).
MS(ESI,m/z):[M+1]+＝[1179.4][1181.4]
实施例C
CRBN结合亲和力评估。
1.CRBN结合亲和力测量[NanoBRET测定]
[1]评价方法
使用Promega NanoBRETTM Intracellular E3连接酶测定法(CRBN[cat#N2910])测量合成的化合物与CRBN E3连接酶的结合亲和力。生物发光共振能量转移(BRET)测定法是测量POI的发光能量转移到结合的荧光示踪剂中的方法。当合成的化合物与POI结合时，荧光示踪剂与POI的结合降低，因此测量降低的发光能量转移。因此，可以测量化合物与POI的亲和性。
[2]细胞系的培养和NanoLuc-CRBN融合载体的表达
将购自Korean Cell Line Bank的HEK 293T细胞在具有10％胎牛血清、青霉素[100U/ml]和链霉素[100mg/ml]的DMEM(Welgene)培养基中培养。使用胰蛋白酶-EDTA(Gibco)将培养的细胞系从培养皿上分离，并且以2×105个细胞/ml的浓度贴壁到培养皿上。使用lipofectamine 3000转染9.0mg/ml的DDB1表达载体和1.0mg/ml的NanoLuc-CRBN融合载体。
[3]用化合物处理和CRBN结合亲和力的测量
在转染后24小时，使用胰蛋白酶-EDTA(Gibco)将细胞系从培养皿上分离，以2×105个细胞/ml的浓度等分到384-白色孔板中，用nanoBRET示踪剂处理，并且混合15秒。然后，用各种浓度制备的化合物处理细胞系，然后混合15秒。然后，通过使用洋地黄皂苷(digitonin)破坏细胞壁，并且使混合物反应25分钟。然后，用荧光素酶底物处理该混合物。在供体发射波长(450nm)和受体发射波长(610nm)下测量发光强度和荧光强度，并且然后计算BRET比率并且将其归一化。BRET比率通过以下公式计算：
BRET比率：受体/供体×1000
[4]化合物的CRBN结合亲和力
使用BRET测定法测量合成的化合物与CRBN的结合亲和力。如表2和图2的结果所示，大部分化合物表现出与泊马度胺(pomalidomide)相当的结合亲和力，特别地，实施例7、8和11的化合物表现出优异的CRBN结合亲和力。
[表1]BRET比率IC50
实施例D
BRD4靶向PROTAC的评估
[1]细胞系的培养并用化合物处理
在具有10％胎牛血清(petal bovine serum)、青霉素[100U/ml]和链霉素[100mg/ml]的RPMI培养基中培养人乳腺癌细胞系[MDA-MB-231]。将合成的化合物制备为溶解在DMSO[二甲亚砜]中的10mM或50mM的储备溶液，并且将其顺序地稀释以处理该细胞系。
[2]BRD4靶向的PROTAC对BRD4蛋白降解能力的评估
为了评估PROTAC对在细胞中表达的BRD4的降解能力，将细胞以5×105个细胞/ml的浓度等分到6孔板中，并且然后将样品处理24小时。为了进行蛋白质印迹测定以证实蛋白质表达，将用该化合物处理的细胞用70μL RIPA缓冲液(其中添加蛋白酶抑制剂)处理30分钟。然后，使用刮刀在冰上收集细胞裂解物并在4℃ 15，000rpm离心30分钟以获得包含蛋白质的上清液。然后，对每个样品10ug蛋白进行SDS-PAGE，并将蛋白转移至膜上。该蛋白与抗BRD4、抗微管蛋白和抗GAPDH的抗体在4℃反应16小时，然后与二抗在室温反应1小时。使用SuperSignalTM West Pico PLUS化学发光底物和图像分析仪证实蛋白质表达。基于β-微管蛋白或GAPDH的表达值对蛋白质表达进行标准化。基于用被设置为100％的0.1％DMSO载体处理的样品，以％测量每个样品中的蛋白质表达的量。使用Image J程序量化蛋白质表达的量。使用GraphicPad Prism 8.0软件计算由于化合物的处理(DC50：其中实现了蛋白表达的50％抑制的化合物浓度)引起的蛋白表达量的变化。如表3和图3的结果所示，实施例23、实施例28、实施例29、实施例37、实施例39、实施例40、实施例41、实施例42、实施例48和实施例49的化合物有效地降解BRD4。
[3]BRD4靶向PROTAC对癌细胞的抗增殖活性的评价
为了观察细胞生长的抑制，在96孔板将细胞等分成5,000个细胞/孔的浓度，并且然后用在不同浓度下制备的样品处理72小时。细胞存活率通过以下步骤计算：向每个孔中添加10ml水溶性四唑盐(WST-8)，该水溶性四唑盐响应于存在于线粒体中的电子传递链中存在的脱氢酶产生甲福平(formazon)，孵育2小时，测量在450nm处的吸光度，并且通过GraphicPad Prism 8.0软件计算。IC50值(实现细胞增殖的50％抑制的化合物浓度)是三个独立测量结果的平均值。结果示于下表中。如表3和图4的结果所示，有效降解BRD4的实施例23、实施例28、实施例29、实施例37、实施例39、实施例40、实施例41、实施例42、实施例48和实施例49的化合物在250nM的浓度以下有效抑制癌细胞增殖。
[表2]具有新的E3连接酶结合剂的BRD4靶向PROTAC的DC50和IC50
实施例E
SHP2靶向PROTAC的评估
[1]细胞系的培养和用化合物处理
在具有10％胎牛血清、青霉素[100U/ml]和链霉素[100mg/ml]的IMDM培养基中培养人血液癌细胞系[MV-4-11]。用溶解在DMSO[二甲亚砜]中的10mM或50mM的储备溶液制备合成的化合物，并且将其顺序地稀释以处理细胞系。
[2]SHP2靶向PROTAC对SHP2蛋白降解能力的评估
为了观察PROTAC对在细胞中表达的SHP2的降解能力，将细胞以3×105个细胞/孔的浓度等分到12孔板中，并且然后将样品处理24小时。为了进行蛋白质印迹测定以证实蛋白质表达，将用该化合物处理的细胞用70μL RIPA缓冲液(其中添加蛋白酶抑制剂)处理30分钟。然后，使用刮刀在冰上收集细胞裂解物并且在4℃ 15,000rpm下离心30分钟以获得包含蛋白质的上清液。然后，进行SDS-PAGE，每个样品10μg的蛋白质，并且将蛋白质转移至膜上。使蛋白质与抗SHP2和抗GAPDH的抗体在4℃下反应16小时，然后与第二抗体在室温下反应1小时。使用SuperSignalTM West Pico PLUS化学发光底物和图像分析仪证实蛋白质表达。基于GAPDH的表达值对蛋白表达抑制进行标准化。基于用被设置为100％的0.1％ DMSO载体处理的样品测量每个样品中的蛋白质表达的量。使用Image J程序量化蛋白质表达的量。使用GraphicPad Prism 8.0软件计算由于化合物的处理(DC50：其中实现了蛋白表达的50％抑制的化合物浓度)引起的蛋白表达量的变化。如表4和图5的结果所示，实施例73、实施例77、实施例78和实施例79的化合物有效降解SHP2。
[3]通过SHP2靶向PROTAC评估针对癌细胞的抗增殖活性
为了观察细胞生长的抑制，将细胞以7,000个细胞/孔的浓度等分到96孔板中，并且然后用在不同浓度下制备的样品处理72小时。细胞存活率通过以下步骤计算：向每个孔中添加10ml水溶性四唑鎓盐(WST-8)，该水溶性四唑鎓盐响应于存在于线粒体中的电子传递链中的脱氢酶产生甲福平(formazon)，孵育3小时，测量在450nm下的吸光度，并且计算(GraphicPad Prism 8.0软件)。结果示于下表中。如表3和图5的结果所示，有效降解SHP2的实施例73、实施例77、实施例78和实施例79的化合物有效抑制癌细胞增殖。
[表3]具有新E3连接酶结合剂的SHP2靶向PROTAC的DC50和IC50
实施例F
实验材料和方法
1.A549细胞系的培养
人肺癌细胞系A549购自Korean Cell Line Bank。
RPMI(Gibco)、FBS(Gibco)、青霉素/链霉素(PS)(Gibco)、100mm2细胞培养皿(SPL)、6孔培养板(NEST)、PBS pH 7.4(Gibco)、胰蛋白酶-EDTA(Gibco)、计数室(Hematocytometer)(INCYTO)和0.4％台盼蓝(trypan blue)溶液(SIGMA)用于细胞培养。
2.用本发明的PROTAC化合物处理
对于6孔板(SPL公司)的每个孔接种5×105个细胞，并用总共1.5mL的培养基体积培养细胞。用不同浓度(0nM、0.1nM、0.3nM、1nM、3nM、10nM、30nM、100nM、300nM、1000nM、3000nM、10000nM)的根据本发明的PROTAC化合物处理培养的细胞并且培养24小时。
3.蛋白质印迹(Western Blotting)
对于SDS-PAGE和蛋白质印迹法，使用1X RIPA裂解缓冲液(Rockland)、100X蛋白酶抑制剂混合物(CST)、BCA蛋白测定试剂盒(ThermoScientific)、牛血清白蛋白(GenDEPOT)、4％-15％Mini-PROTEAN TGX无染色凝胶(Bio-rad)，10X tris/甘氨酸/SDS缓冲液(Bio-rad)、Trans-blot turbo 5x转移缓冲液(Bio-rad)、10X TBS(Bio-rad)、10％ Tween 20(Bio-rad)、颜色蛋白标准宽范围(Bio-rad)，非还原泳道标记样品缓冲液(Non-ReducingLane Marker Sample buffer)(ThermoScientific)、印迹级阻断剂(Blotting-GradeBlocker)(Bio-rad)、BRD4(E2A7X)兔mAb(CST)、β-微管蛋白兔Ab(CST)、山羊pAb至Rb IgG(HRP)(abcam)、SuperSignalTM West Pico PLUS化学发光底物(ThermoScientific)。
对于细胞溶解，添加溶解缓冲液并且使用细胞刮刀获得细胞溶解产物。具体地说，将细胞用70ul的包含蛋白酶抑制剂的1X RIPA缓冲液处理。使用刮刀在冰上收集细胞裂解物并且孵育30分钟。然后，将细胞在4℃，15,000rpm下离心30分钟以获得细胞裂解物。
使用BCA测定法获得标准曲线，并且通过替换标准曲线定量裂解物中的蛋白质质量。使用1ul的样品溶液和200ul的BCA溶液在37℃下将该混合物孵育30分钟。在562nm下测量吸光度。通过添加样品缓冲液以达到每孔10ug来制备样品。
通过在4-15％ Mini-PROTEAN TGX无染色凝胶(15个孔)中在110V下设定70分钟的运行时间进行SDS-PAGE。使用trans-blot turbo转移系统(trans-blot turbo transfersystem)(Bio-rad)进行转移。使用封闭级封闭剂(Bio-rad)进行封闭1小时。然后，将其用包含0.1％tween 20的1X TBS洗涤，并且与牛血清白蛋白中的抗-BRD4抗体(1：3000)或抗-β-微管蛋白抗体(1：3000)(作为第一抗体)在4℃下反应16小时。用含有0.1％tween20的1XTBS洗涤三次10分钟后，将它与作为第二抗体的印迹级阻断剂中的抗兔抗体(1：10000)在室温下反应1小时。然后，在用包含0.1％吐温20的1X TBS洗涤三次持续10分钟之后，用SuperSignalTM West Pico PLUS化学发光底物进行检测。
对于结果分析，使用图像分析仪(GE)获得最终印迹数据。
表4示出了根据本发明的PROTAC化合物的BRR4的每个DC50(50％降解浓度)：
[表4]
| PROTAC化合物 | DC501) | DC502) |
| Ex.21 | 1600nM | 242nM |
| Ex.23 | 11.3nM | 10.9nM |
| Ex.25 | 56.86nM | 49.63nM |
| Ex.26 | 22.02nM | 567.9nM |
| Ex.27 | 9.21nM | 11.87nM |
| Ex.28 | 25.26nM | 298.8nM |
DC501)：通过与未用PROTAC化合物处理的样品(作为对照组)比较带强度，计算DC50值。DC502)：通过相对于β-微管蛋白与对照组比较带强度来计算DC50值。作为实验的结果，可以看出根据本发明的含有哌啶二酮衍生物的PROTAC化合物对BRD4具有非常优异的降解作用(其被称为用于治疗癌症的POI)。
[工业实用性]
根据本发明的哌啶二酮衍生物和含有其的PROTAC化合物可有效地用作抗癌剂。
Claims (20)
1.一种式1的化合物或其药用盐：
[式1]
其中，
X是氢、卤素、氨基、硝基、羟基、C1至C6直链或支链烷氧基、或包括氧或氮的4至8元杂环基，
Q1至Q4各自独立地是C-F、C-Cl、C-H、C-X或N，条件是Q1至Q4中的至少一个是C-X，
R1是氢，硝基，氨基，羰基，C1至C6直链、支链或环状烷基，或被卤素取代的C1至C6直链、支链或环状烷基。
2.根据权利要求1所述的式1的化合物，其中
X是氢、氟、氯、溴、氨基、硝基、羟基、哌嗪基基团、甲氧基或乙氧基，
Q1至Q4各自独立地是C-H或C-X，并且
R1是氢、氨基、甲基、乙基、环丙基或CF3。
3.根据权利要求1所述的式1的化合物，其中所述式1的化合物选自由以下化合物组成的组：
4.一种PROTAC化合物或其药用盐，包含感兴趣蛋白(POI)配体、接头和E3连接酶结合剂，其中式1的化合物作为所述E3连接酶结合剂连接至所述接头：
[式1]
其中，
X是氢、卤素、氨基、硝基、羟基、C1至C6直链或支链烷氧基、或包括氧或氮的4至8元杂环基，
Q1至Q4各自独立地是C-F、C-Cl、C-H、C-X或N，条件是Q1至Q4中的至少一个是C-X，
R1是氢，硝基，氨基，羰基，C1至C6直链、支链或环状烷基，或被卤素取代的C1至C6直链、支链或环状烷基。
5.根据权利要求4所述的PROTAC化合物，其中所述式1的化合物选自由以下化合物组成的组：
6.根据权利要求4所述的PROTAC化合物，其中所述接头：
(i)通过替换所述式1的化合物的X连接至所述式1的化合物，或
(ii)通过键合至所述式1的化合物的X的氮原子或氧原子连接至所述式1的化合物。
7.根据权利要求4所述的PROTAC化合物，其中所述POI配体是BRD4抑制剂或SHP2抑制剂。
8.根据权利要求4所述的PROTAC化合物，其中所述POI配体选自由以下化合物组成的组：
9.根据权利要求4所述的PROTAC化合物，其中所述接头是式2至式9中的化合物：
[式2]
[式3]
[式4]
[式5]
[式7]
-Y-R2-R4-
[式8]
--(C＝O)-R2-(C＝O)-
[式9]
-(C＝O)-R2-(C＝O)-
其中，
n是0至10的整数，
R4是4至8元芳基、杂芳基或杂环基团，
R2是-(CH2)m-、-(CH2)m-R4-(CH2)q-、或-(C＝O)-(CH2)m-(CONH)-(CH2)q-，
R3是-(CH2)m-、-(CH2)m-R4-(CH2)q-、-(C＝O)-(CH2)m-(CONH)-(CH2)q-、或直接键，
其中，
m和q各自独立地是0至10的整数，
Y是-NR8-、-N(R8)-C(O)-、-C(O)-N(R8)-、-CHR8-、-O-、-S-、-S(O)-、-S(O)NR8-、-S(O)2-、-S(O)2NR8-、-C(＝CH2)-、-CH＝CH-或-C≡C-，
R8是氢、C1至C6直链、支链或环状烷基、或被卤素取代的C1至C6直链、支链或环状烷基。
10.根据权利要求8所述的PROTAC化合物，其中R4是吡咯烷或三唑。
11.根据权利要求4所述的PROTAC化合物，其中所述接头是式10或式11的化合物：
[式10]
[式11]
其中，
b是0至20的整数，
a是2或3，
T1是-CH2-、-O-、或-CHRg-，其中Rg是C1-C4烷基，
R6和R7彼此相同或不同，并且它们各自是
联芳基、双杂环、杂环、双杂环或螺双杂环，
其中，e是1至10的整数，
x1、x2、x3和x4相同或不同，并且它们各自为C-H、C-N或C-Ri，其中Ri为-F、-Cl、-Br，以及
w1和w2彼此相同或不同，并且它们各自是-(CH2)k-，-(CH2)k-1O-，
或-(CH2)kNHRh-，其中k是1至10的整数并且Rh是C1至C4烷基。
12.根据权利要求11所述的PROTAC化合物，其中R6和R7各自独立地是下式的：
13.根据权利要求9所述的PROTAC化合物，其中所述接头选自由以下化合物组成的组：
14.一种式6的PROTAC化合物，包含感兴趣蛋白(POI)配体、接头和E3连接酶结合剂，其中所述接头通过共价键分别连接至所述POI配体和所述E3连接酶结合剂：
[式6]
其中，
Z是连接至POI配体的接头，
Q1至Q4各自独立地是C-F、C-Cl、C-H、C-Z、C-O-Z、C-NH-Z、或N，条件是Q1至Q4中的至少一个是C-Z、C-O-Z或C-NH-Z，
R1是氢，硝基，氨基，羰基，C1至C4直链、支链或环状烷基，或被卤素取代的C1至C4直链、支链或环状烷基。
15.根据权利要求14所述的PROTAC化合物，其中所述POI配体选自由以下化合物组成的组：
其中Z是接头。
16.根据权利要求14或15所述的PROTAC化合物，其中所述接头是式2至式9中的化合物：
[式2]
[式3]
[式4]
[式5]
[式7]
-Y-R2-R4-
[式8]
-(C＝O)-R2-(C＝O)-
[式9]
-R4-(C＝O)-R2-
其中，
n是0至10的整数，
R4是4至8元芳基、杂芳基或杂环基团，
R2是-(CH2)m-、-(CH2)m-R4-(CH2)q-、或-(C＝O)-(CH2)m-(CONH)-(CH2)q-，
R3是-(CH2)m-、-(CH2)m-R4-(CH2)q-、-(C＝O)-(CH2)m-(CONH)-(CH2)q-、或直接键，
其中，
m和q各自独立地是0至10的整数，
Y是-NR8-、-N(R8)-C(O)-、-C(O)-N(R8)-、-CHR8-、-O-、-S-、-S(O)-、-S(O)NR8-、-S(O)2-、-S(O)2NR8-、-C(＝CH2)-、-CH＝CH-或-C≡C-，并且
R8是氢，C1至C6直链、支链或环状烷基，或被卤素取代的C1至C6直链、支链或环状烷基。
17.根据权利要求16所述的PROTAC化合物，其中所述接头选自由以下化合物组成的组：
18.根据权利要求15所述的PROTAC化合物，其中所述PROTAC化合物选自由以下化合物组成的组：
19.一种选自由以下化合物组成的组的化合物：
3-(8-硝基-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮；
3-(8-硝基-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮；
3-(5-硝基-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮；
3-(5-氨基-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮；
3-(8-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮；
3-(5-氟-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-2-基)哌啶-2,6-二酮；
3-(6-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮；
3-(7-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮；
3-(8-氟-4-甲基-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮；
3-(8-氨基-4-甲基-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮；
3-(1-氧代-6-(哌嗪-1-基)酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮；
3-(1-氧代-7-(哌嗪-1-基)酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮；
3-(8-甲氧基-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮；
3-(7-甲氧基-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮；
3-(6-甲氧基-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮；
3-(5-甲氧基-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮；
3-(6-溴-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮；和
3-(1-氧代-8-(哌嗪-1-基)酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮2HCl。
20.一种选自由以下化合物组成的组的化合物：
2-((S)-4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-N-((2-(2-(2-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)甲基)乙酰胺；
2-[(9S)-7-(4-氯苯基)-4,5,13-三甲基-3-硫杂-1,8,11,12-四氮杂三环[8.3.0.02,6]十三-2(6),4,7,10,12-五烯-9-基]-N-(3-{2-[2-(2-{[3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢-1,2,3-苯并三嗪-5-基]氨基}乙氧基)乙氧基]乙氧基}苯基)乙酰胺；
2-((S)-4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-N-(3-(2-(2-(2-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯基)乙酰胺；
2-[(9S)-7-(4-氯苯基)-4,5,13-三甲基-3-硫杂-1,8,11,12-四氮杂三环[8.3.0.02,6]十三-2(6),4,7,10,12-五烯-9-基]-N-(4-{2-[2-(2-{[3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基]氨基}乙氧基)乙氧基]乙氧基}苯基)乙酰胺；
2-((S)-4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-N-(4-(2-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-6-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯基)乙酰胺；
2-((S)-4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-N-(4-(2-(2-(2-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-6-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯基)乙酰胺；
2-[(9S)-7-(4-氯苯基)-4,5,13-三甲基-3-硫杂-1,8,11,12-四氮杂三环[8.3.0.02,6]十三-2(6),4,7,10,12-五烯-9-基]-N-[4-(2-{2-[2-(2-{[3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基]氨基}乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)苯基]乙酰胺；
2-((S)-4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-N-(4-(2-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-6-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯基)乙酰胺；
2-((S)-4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-N-(4-(2-(2-(2-(2-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-6-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯基)乙酰胺；
2-[(9S)-7-(4-氯苯基)-4,5,13-三甲基-3-硫杂-1,8,11,12-四氮杂三环[8.3.0.02,6]十三-2(6),4,7,10,12-五烯-9-基]-N-(3-{2-[2-(2-{[2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-5-基]氨基}乙氧基)乙氧基]乙氧基}苯基)乙酰胺；
2-((S)-4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-N-((1-(2-(2-(2-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)乙酰胺；
2-((S)-4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-N-((1-(2-(2-(2-(2-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)乙酰胺；
2-[(9S)-7-(4-氯苯基)-4,5,13-三甲基-3-硫杂-1,8,11,12-四氮杂三环[8.3.0.02,6]十三-2(6),4,7,10,12-五烯-9-基]-N-[(1-{2-[2-(2-{[2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-5-基]氨基}乙氧基)乙氧基]乙基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基]乙酰胺；
2-[(9S)-7-(4-氯苯基)-4,5,13-三甲基-3-硫杂-1,8,11,12-四氮杂三环[8.3.0.02,6]十三-2(6),4,7,10,12-五烯-9-基]-N-{[1-(2-{2-[2-(2-{[2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-5-基]氨基}乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙基)-1H-1,2,3-三唑-4-基]甲基}乙酰胺；
2-[(9S)-7-(4-氯苯基)-4,5,13-三甲基-3-硫杂-1,8,11,12-四氮杂三环[8.3.0.02,6]十三-2(6),4,7,10,12-五烯-9-基]-N-[2-(2-{2-[4-({[3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基]氨基}甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基]乙氧基}乙氧基)乙基]乙酰胺；
2-[(9S)-7-(4-氯苯基)-4,5,13-三甲基-3-硫杂-1,8,11,12-四氮杂三环[8.3.0.02,6]十三-2(6),4,7,10,12-五烯-9-基]-N-{2-[2-(2-{2-[4-({[3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基]氨基}甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基]乙氧基}乙氧基)乙氧基]乙基}乙酰胺；
2-((S)-4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-N-(5-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-6-基)氨基)戊基)乙酰胺；
2-((S)-4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-N-(3-(4-(3-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基)氨基)丙基)哌嗪-1-基)丙基)乙酰胺；
2-((S)-4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-N-(3-(2-(2-(2-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯基)乙酰胺；
2-((S)-4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-N-(3-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-6-基)丙-2-炔-1-基)乙酰胺；
2-((S)-4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-N-(3-(2-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-6-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯基)乙酰胺；
2-((S)-4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-N-(3-(2-(2-(2-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-6-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯基)乙酰胺；
2-((S)-4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-N-(2-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基)氨基)乙基)乙酰胺；
2-((S)-4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-N-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-5-基)氨基)乙基)乙酰胺；
2-((S)-4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-N-(2-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基)氧基)乙基)乙酰胺；
2-((S)-4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-N-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-5-基)氧基)乙基)乙酰胺；
N-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-6-基)丁基)-2-((S)-2,3,9-三甲基-4-苯基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)乙酰胺；
2-((S)-4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-N-(2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-6-基)哌嗪-1-基)乙基)乙酰胺；
2-((S)-4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-N-(2-(4-(3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-6-基)哌嗪-1-基)乙基)乙酰胺；
2-((S)-4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-N-((1-(3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基)吡咯烷-3-基)甲基)乙酰胺；
2-[(9S)-7-(4-氯苯基)-4,5,13-三甲基-3-硫杂-1,8,11,12-四氮杂三环[8.3.0.02,6]十三-2(6),4,7,10,12-五烯-9-基]-N-(5-{[2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-5-基]氨基}戊基)乙酰胺；
2-[(9S)-7-(4-氯苯基)-4,5,13-三甲基-3-硫杂-1,8,11,12-四氮杂三环[8.3.0.02,6]十三-2(6),4,7,10,12-五烯-9-基]-N-(5-{[3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基]氨基}戊基)乙酰胺；
2-((S)-4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-N-((1-(3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基)哌啶-4-基)甲基)乙酰胺；
3-(4-((2-(2-(2-(2-(4-(((1-(6-氨基-5-(2,3-二氯苯基)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基)-1,3-二氧代-2,3-二氢-1H-茚-2-基)哌啶-2,6-二酮；
3-(8-((2-(2-(2-(4-(((1-(6-氨基-5-(2,3-二氯苯基)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基)-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮；
3-(6-((2-(2-(2-(4-(((1-(6-氨基-5-(2,3-二氯苯基)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基)-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮；
3-(6-((2-(2-(2-(2-(4-(((1-(6-氨基-5-(2,3-二氯苯基)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基)-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮；
3-(7-((2-(2-(2-(2-(4-(((1-(6-氨基-5-(2,3-二氯苯基)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基)-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮；
3-(8-((14-(4-(((1-(6-氨基-5-(2,3-二氯苯基)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-3,6,9,12-四氧杂十四基)氨基)-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮；
3-(8-((17-(4-(((1-(6-氨基-5-(2,3-二氯苯基)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-3,6,9,12,15-五氧杂十七基)氨基)-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮；
N1-(3-((3-氨基-5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)-N4-(3-(2-(2-(3-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基)氨基)丙氧基)乙氧基)乙氧基)丙基)琥珀酰胺；
N1-(3-((3-氨基-5-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)-N4-(3-(2-(2-(3-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基)氨基)丙氧基)乙氧基)乙氧基)丙基)琥珀酰胺；
N1-(3-((3-氨基-5-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)-N4-(14-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基)氨基)-3,6,9,12-四氧代十四基)琥珀酰胺；
N1-(3-((3-氨基-5-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)-N4-(3-(2-(2-(3-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-6-基)氨基)丙氧基)乙氧基)乙氧基)丙基)琥珀酰胺；
N1-(3-((3-氨基-5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)-N4-(3-(2-(2-(3-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-6-基)氨基)丙氧基)乙氧基)乙氧基)丙基)琥珀酰胺；
N-[3-({3-氨基-5-[(3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基]吡嗪-2-基}硫烷基)-2-氯苯基]-N”-(17-{[3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基]氨基}-3,6,9,12,15-五氧杂十七烷-1-基)丁二酰胺盐酸盐；
N-(3-{[3-氨基-5-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基]硫烷基}-2-氯苯基)-N’-(17-{[3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基]氨基}-3,6,9,12,15-五氧杂十七烷-1-基)丁二酰胺盐酸盐；
N-[3-({3-氨基-5-[(3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基]吡嗪-2-基}硫烷基)-2-氯苯基]-N’-(14-{[3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基]氨基}-3,6,9,12-四氧杂十四烷-1-基)丁二酰胺盐酸盐；
N-[3-({3-氨基-5-[(3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基]吡嗪-2-基}硫烷基)-2-氯苯基]-N’-{3-[4-(3-{[3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基]氨基}丙基)哌嗪-1-基]丙基}丁二酰胺三盐酸盐；
N1-(3-((3-氨基-5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)-N4-(3-(2-(2-(3-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基)氨基)丙氧基)乙氧基)乙氧基)丙基)琥珀酰胺；
N1-(3-((3-氨基-5-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)-N4-(3-(2-(2-(3-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-6-基)氨基)丙氧基)乙氧基)乙氧基)丙基)琥珀酰胺；
N1-(3-((3-氨基-5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)-N4-(3-(2-(2-(3-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-1,2-二氢酞嗪-6-基)氨基)丙氧基)乙氧基)乙氧基)丙基)琥珀酰胺；
N1-(3-((3-氨基-5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)-N4-(12-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基)氨基)-12-氧代十二基)琥珀酰胺；
N-(3-((3-氨基-5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)-4-(4-(3-(2-(2-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基)氨基)乙氧基)乙氧基)丙酰基)哌嗪-1-基)-4-氧代丁酰胺；
N-(3-((3-氨基-5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)-4-(4-(3-(2-(2-(2-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)丙酰基)哌嗪-1-基)-4-氧代丁酰胺；
N-(3-((3-氨基-5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)-4-(4-(1-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基)氨基)-3,6,9,12-四氧杂十五-15-酰基)哌嗪-1-基)-4-氧代丁酰胺；
N-(3-((3-氨基-5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)-4-(4-(1-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基)氨基)-3,6,9,12,15-五氧杂十八-18-酰基)哌嗪-1-基)-4-氧代丁酰胺；以及
N-(3-((3-氨基-5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫代)-2-氯苯基)-4-(4-(1-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-基)氨基)-3,6,9,12,15,18-六氧杂二十一-21-酰基)哌嗪-1-基)-4-氧代丁酰胺。
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