CN112939948B - 新型含喹唑啉类化合物及其中间体与应用 - Google Patents

新型含喹唑啉类化合物及其中间体与应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种具有式(IA)、(IB)或(IC)的含喹唑啉类化合物或者其药学上可接受的盐或者其前药分子，所述化合物适合用作极光激酶(Aurora)抑制剂且因此适于治疗以过度或异常细胞增殖为特征的例如治疗由Aurora介导的疾病，例如癌症。

Description

新型含喹唑啉类化合物及其中间体与应用
技术领域
本发明涉及医药技术领域，特别是涉及一种喹唑啉类化合物及其在抑制极光激酶中的 应用。
背景技术
极光激酶(Aurora)是丝氨酸/苏氨酸激酶，在细胞增殖中起重要作用。其功能是作为 有丝分裂和细胞分裂中多方面的调节剂，其中包括中心体、复制、有丝分裂纺锤体形成、染色体排列于主轴、有丝分裂关卡激活和胞质分裂。已经知存在三种相关的哺乳动物极光激酶，被称为Aurora-A、Aurora-B和Aurora-C。它们的蛋白质一级结构均含有一个N端调控区和一个C端催化区，且酶结构域序列相似度达71％，ATP腺嘌呤环结合位点的残基也相同，但在细胞分裂中它们具有完全不同且互不重叠的功能。Aurora A从有丝分裂的S期末至下一个分裂周期的G开始，影响中心体的分离、成熟以及两级纺锤体的形成。Aurora B在有 丝分裂早期位于染色体的着丝粒区域，分裂后期则从着丝粒移动到微管。目前对Aurora C 功能的研究相对较少。
Aurora在静止细胞中的表达较低或不可检测，在细胞周期的G2和有丝分裂阶段出现表 达和活性高峰。在哺乳动物细胞中推测Aurora的基质包括组蛋白H3、参与染色体缩合的蛋 白和CENP-A、肌球蛋白II调节轻链、蛋白磷酸酶1及TPX2。自1997年发现以来，哺乳动物Aurora激酶家族已经被与肿瘤发生密切的联系起来。对于Aurora A的致癌活性研究已较成熟，而对于Aurora B来说，早期的研究表明其致癌活性仅是间接存在。后续研究证实Aurora B在肿瘤发生中的重要性。例如研究发现Aurora B在胚胎仓鼠细胞中过表达及其在异种移植 实验中的应用直接增加肿瘤的发生率、大小和侵袭力。同时，相应的肿瘤显示出染色体的 不稳定性及增加的组蛋白H3 Ser10磷酸化。更为重要的是，抑制肿瘤细胞中的Aurora B不 会引起有丝分裂的停止，而使细胞周期持续进行，不会导致胞质分裂。
由于Aurora激酶独特的药理作用机制，以Aurora激酶为靶点的药物开发已成为抗癌药 物研究的热点之一。目前还没有Aurora激酶抑制剂用于临床治疗，仅有数个Aurora激酶抑 制剂在进行临床实验。尽管药物治疗前景光明，但已报道的小分子都存在不同程度的毒副 作用，或者尚待优化的溶解性和/或膜穿透能力，因此，开发Aurora抑制剂仍具有巨大的市 场潜力。
专利WO 2004/058781公开了一系列带有5元含氮原子的杂芳基的喹唑啉衍生物，它们
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一类对Aurora A和/或Aurora B具有抑制活性的新型 含喹唑啉类化合物。
为解决以上技术问题，本发明采取如下技术方案：
具有式(IA)、(IB)或(IC)所示结构的含喹唑啉类化合物或者其药学上可接受的盐或者其前药，
Figure BDA0002312934370000021
其中：
R1为选自氢，卤素，氰基，硝基，C1-6烷氧基，C1-6烷基，C1-6卤代烷基，-CF2OH 或-CHFOH的基团；
R2为选自氢，卤素或C1-6烷基的基团；
R3为选自氢或卤素中的一个或多个基团；
R6为选自氢，卤素或C1-6烷基的基团；
p选自0、1、2、3、4、5或6；
s选自0、1、2、3、4或5；
n为0、1或2；m为0或1；e、f独立选自0、1或2或3或4或5或6且e+f大于0 而小于7；
w、t独立选自0、1、2、3、4、5或6且w+t大于0而小于7；y选自0、1、2、3、4、 5或6；
L1为被第一取代基取代或未取代的下列基团：亚甲基、亚乙基或亚乙烯基，其中第一 取代基选自卤素、C1-6烷基、C1-6烷氧基；或者L1为亚乙炔基，
L2不存在，或者L2为-NH-或-NHC(O)-或-C(O)NH-；
R4和R5独立地选自氢，被一个、两个、三个或更多个相同或不同的第二取代基取代或 未取代的下列基团：C1-6烷基，C1-6烷氧基，膦酰氧基C1-6烷基，C3-6环烷基，C6-16芳烃基，C4-16杂芳烃基，C2-6链烯基，C2-6炔基，C1-6烷基磺酰基、苯磺酰基以及C3-6环 烷基C1-4烷基；其中所述第二取代基选自卤素，C1-6烷基，C3-6环烷基，C1-6卤代烷基， 羟基，C1-6烷氧基，膦酰氧基，亚磺酰亚胺或S(O)zR8，其中z为0、1或2；或者，
R4与R5结合并与和它们相连的氮原子一起形成被一个、两个、三个或更多个相同或不 同的四取代基取代的或未被取代的3至12元的单环或多环杂环，所述多环杂环为并环、螺 环或桥环，所述第四取代基选自C1-6烷基，C1-6卤代烷基，C2-6烯基，C2-6卤代烯基，C2-6 炔基，C2-6卤代炔基，＝N-OH，＝CRdRd'，卤素，氰基，-OH，膦酰氧基，亚磺酰亚胺，-ORa， -NH2，-NHRa，杂芳基，杂环基，-(CH2)qNH2，-(CH2)qOH，-COORa，-CONHRa，-CONH(CH2)qCOORa， -NHCOORa或＝O，Rd、Rd’独立地为选自氢，烷基或卤素的基团；
R7选自氢，卤素，羟基，氰基，硝基，被一个或多个相同或不同的第三取代基取代或未取代的下列基团：C1-6烷氧基，C1-6烷基，C1-6卤代烷基，-CF2OH或-CHFOH的基团， C3-6环烷基，C6-16芳烃基，C4-16杂芳烃基，C2-6链烯基，C2-6炔基，C1-6烷基磺酰基、 苯磺酰基以及C3-6环烷基C1-4烷基，其中所述第三取代基选自卤素，C1-6烷基，C3-6环 烷基，C1-6卤代烷基，羟基，C1-6烷氧基，膦酰氧基，亚磺酰亚胺或S(O)zR8，其中z为0、 1或2；
所述的Ra选自被一个、两个、三个或更多个相同或不同的五取代基取代的或未被取代 的下列基团：C1-6烷基，C3-6环烷基，C2-6烯基，-(CH2)q芳基，含有1-5个选自N，S，P 或O的杂原子的杂环烷基的基团，含有1-5个选自N，S，P和O的杂原子的杂芳基，所述 第五取代基选自-OH，卤素，硝基，氧代，氰基，膦酰氧基，亚磺酰亚胺，-R8，-OR8，-NR8R9， -SR8，-S(O)2NR8R9，-S(O)2R8，-NR8S(O)2NR8R9，-NR8S(O)2R9，-S(O)NR8R9，-S(O)R8，-NR8S(O)NR8R9， -NR8S(O)R9，-C(O)NR8R9-，-OC(O)R8，-NR8R9C(O)-，C4-10杂环，C6-16芳烃基，C4-16杂芳基， -(CH2)qOH，-C1-6烷基，-CF3，-CHF2或-CH2F；
所述的R8和R9在每次出现时各自独立地为选自氢，C1-6烷基，C2-6烯基，C4-8环烯基， C2-6炔基，C3-8环烷基，3至12元单环或多环杂环，-OR10，-SR10，卤素，-NR10R11，-NO2和-CN和杂环基；
R10和R11在每次出现时独立地为选自氢，膦酰基氧基，被一个、两个、三个或更多个相同或不同的六取代基取代的下列基团：C1-6烷基，C2-6烯基，C4-8环烯基，C2-6炔基， C3-8环烷基，3至12元单环或多环杂环；所述第六取代基选自-OH，-SH，-NH2，-NO2或-CN；
所述的q在每次出现时独立地为0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10；
当所述的p大于等于2时，所述通式(IA)上相应的亚烷基还可选择地被一个或多个相 同或不同的第七取代基取代，所述的第七取代基选自C1-6烷基、C3-8环烷基。
根据本发发明的一个优选方面：所述含喹唑啉类化合物的结构如下式(I-a)所示：
Figure BDA0002312934370000041
其中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、L2、m、 n、p、s的定义同前文。
根据本发发明的另一优选方面：所述含喹唑啉类化合物的结构如下式(I-b)所示：
Figure BDA0002312934370000042
其中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、L2、m、n、 p、s的定义同前文。
根据本发明的一个具体方面，上述的p为1或2或3且n为1或2。
在一些实施方式中，n为1，L2是-NHC(O)-或-C(O)NH-；在另一些实施方式中，n为2，L2是-NH-。
在根据本发明的一些优选实施方式中，在所述通式(IA)或(IB)或(IC)的与L2连接的苯环上与L2相间的位置为F。
在根据本发明的一些实施方式中，R1、R2、R6独立地选自氢、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基、氟、氯。
在根据本发明的一些优选实施方式中，R4和R5独立地选自氢、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、甲氧基、乙氧基、羟基取代甲基、羟基取代乙基、羟基取代异丙基、膦酰氧 基甲基、膦酰氧基乙基、乙烯基、乙炔基、乙烯基甲基、乙炔基甲基、甲氧基乙基、甲氧 基丙基、三氟甲基甲基、三氟甲基乙基、环丙基甲基、环丙基乙基、环丙基、环丁基、环 戊基、环己基、苯基、羟基取代苯基、氯代苯基、甲基取代苯基、甲磺酰基、苯磺酰基、 甲基取代苯磺酰基，且R4和R5不同时为氢或烷基。
在根据本发明的另一些优选实施方式中，R4与R5结合并与和它们相连的氮原子一起形 成被一个或两个被第四取代基取代的或未被取代的杂环结构，该杂环结构是5元单杂环、6 元单杂环或C7-C8螺环或C5-C9桥环，其中该环结构除含有与R4、R5相连的氮外，还可选择性的含有另一个N或含有O。
在根据本发明的一些优选实施方式中，所述第四取代基选自甲基、乙基、丙基、异丙 基、丁基、甲氧基、乙氧基、羟基取代甲基、羟基取代乙基、羟基取代异丙基、膦酰氧基 甲基、膦酰氧基乙基、乙烯基、乙炔基、乙烯基甲基、乙炔基甲基、甲氧基乙基、甲氧基 丙基、三氟甲基甲基、三氟甲基乙基、环丙基甲基、环丙基乙基、＝N-OH、氟、氯、氰基， -OH，膦酰氧基，亚磺酰亚胺。
在根据本发明的另一些优选实施方式中，R4和R5中的一个是氢、甲基、乙基、丙基、异丙基或丁基，另一个是羟基取代甲基、羟基取代乙基、羟基取代异丙基、膦酰氧基甲基、膦酰氧基乙基、膦酰氧基异丙基、羟基取代苯基、苯磺酰基。
在其中一些实施例中，所述化合物选自：
Figure BDA0002312934370000051
Figure BDA0002312934370000061
Figure BDA0002312934370000071
Figure BDA0002312934370000081
Figure BDA0002312934370000091
Figure BDA0002312934370000101
本发明涵盖以上化合物中的任一种的单独的E或Z同分异构体和/或以上化合物中的任 一种的药学上可接受的盐。
本发明同时提供抑制患者体内或生物样本中极光激酶的方法，其包含对所述患者投与 有效抑制量的本发明化合物或使所述生物样本与有效抑制量的本发明化合物接触。
另一方面，本发明提供治疗任何涉及Aurora活性的病症方法，其包含对有需要的个体 与治疗有效量的本发明化合物。
本发明还提供了上述化合物的应用。具体技术方案如下：
上述含喹唑啉类化合物或者其药学上可接受的盐或者其前药分子在制备Aurora抑制剂 中的应用。
上述含喹唑啉类化合物或者其药学上可接受的盐或者其前药分子在制备防治肿瘤的药 物中的应用。
在其中一些实施例中，所述肿瘤为实体肿瘤或者血液肿瘤。
在其中一些实施例中，所述实体肿瘤为乳腺癌、胰腺癌、肺癌、肝癌、胃癌、结肠癌、肾癌、前列腺癌、头颈肿瘤、食道癌、卵巢癌或宫颈癌。
在其中一些实施例中，所述血液肿瘤为淋巴瘤、白血病或骨髓瘤。
本发明还涉及一种药物组合物，其包括一种或多种本发明所述的含喹唑啉类化合物或 者其药学上可接受的盐或者其前药，以及药学可接受的载体。所述药物组合物优选为预防 和/或治疗癌症的组合物。
本发明还提供一种制备含喹唑啉类化合物或者其药学上可接受的盐或者其前药的中间 体，该中间体具有通式(III-a)或(III-b)所示结构：
Figure BDA0002312934370000111
式(III-a)中，R1、R2、R3、R6、L2、m、n、s同前文所述；式(III-b)中，R1、R2、R6、 R4、R5、p同前文所述，X代表氟、氯、溴或碘。
典型的中间体(III-a)或中间体(III-a)例如是下述实施例中被合成的化合物或由他们 可以直接联想到的化合物。
本发明还提供了一种含喹唑啉类化合物或者其药学上可接受的盐或者其前药的制备方 法，其包括使前述所述的具有通式(III-b)的中间体与化合物
Figure BDA0002312934370000112
发生 取代反应生成化合物(I-b)的步骤，
Figure BDA0002312934370000113
式中，其中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、L2、m、n、p、s的定义同前文。
进一步地，所述方法还包括使
Figure BDA0002312934370000114
与
Figure BDA0002312934370000115
反应生成所述具有通式(III-b) 的中间体，其中X代表氟、氯、溴或碘。
本发明还提供又一种含喹唑啉类化合物或者其药学上可接受的盐或者其前药的制备方 法，其包括使权前文所述的具有通式(III-a)的中间体与
Figure BDA0002312934370000121
发生反应生成 化合物(I-a)的步骤，
Figure BDA0002312934370000122
式中，其中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、L2、m、n、p、s的定义同前文所述。
进一步地，所述方法还包括使
Figure BDA0002312934370000123
与
Figure BDA0002312934370000124
反应生成所述具 有通式(III-a)的中间体，其中X代表氟、氯、溴或碘。
由于以上技术方案的实施，本发明与现有技术相比存在如下优势：
本发明的含喹唑啉类化合物或者其药学上可接受的盐或者其前药分子，是一系列新的 化合物，该类化合物具有抑制Aurora活性的作用，通过对肿瘤细胞有丝分裂中G2-M期的 阻滞，使肿瘤细胞株产生抗增殖和诱导凋亡的效应，能够成为治疗恶性肿瘤的有效药物， 有较大的应用价值。
附图说明
图1描绘了组蛋白H3磷酸化抑制实验的结果。与细胞一起培养的本发明具体实施例化 合物呈现组蛋白H3丝氨酸磷酸化的与浓度相关的抑制作用。
图2反映了测试化合物对人正常心肌细胞系Histon磷酸化的影响情况。
图3描绘使用本发明具体实施例化合物的G2/M期细胞生长抑制实验的示范性分布图。
具体实施方式
定义
本发明所述化合物中，当任何变量(例如R1、R2等)在任何组分中出现超过一次，则其每 次出现的定义独立于其它每次出现的定义。同样，允许取代基及变量的组合，只要这种组 合使化合物稳定。自取代基划入环系统的线表示所指的键可连接到任何能取代的环原子上。 在一广泛方面，容许的取代基包括有机化合物的无环和环状、支链和无支链、碳环和杂环、 芳香族和非芳香族碳和杂原子取代基。要理解本领域普通技术人员可选择本发明化合物的 取代基及取代型式而提供化学上稳定的并可通过本领域技术和下列提出的方法自可容易获 得的原料容易合成的化合物。如果取代基自身被超过一个基团取代，应理解这些基团可在 相同碳原子上或不同碳原子上，只要使结构稳定。
本文所用“烷基”意指包括具有特定碳原子数目的支链的和直链的饱和脂肪烃基。例 如“C1-C6烷基”中“C1-C6”的定义包括以直链或支链排列的具有1、2、3、4、5或6个 碳原子的基团。
如本文所用的术语"杂原子"意思是除碳和氢以外任何元素的原子。优选的杂原子是氮、 氧、磷和硫。
本文所用“杂烷基”指包含1至3个杂原子的直链或支链的脂肪烃链，而杂烷基链中可用的各碳和杂原子可各自任选相互独立地被取代，且杂原子相互独立地选自O、N、P、 PO、PO2、S、SO和SO2(例如二甲基氨基甲基、二甲基氨基乙基、二甲基氨基丙基、二乙基 氨基甲基、二乙基氨基乙基、二乙基氨基丙基、2-二异丙基氨基乙基、双-2-甲氧基乙基氨 基、[2-(二甲基氨基-乙基)-乙基-氨基]-甲基、3-[2-(二甲基氨基-乙基)-乙基-氨基]-丙基、羟基甲基、2-羟基乙基、3-羟基丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、甲氧基甲基、2-甲氧基乙基)。
本文所指“卤代烃基”指其中一或多个氢原子被卤素原子取代的烃基。卤代烃基包括 饱和烷基和不饱和烯基以及炔基，例如-CF3、-CHF2、-CH2F、-CF2CF3、-CHFCF3、-CH2CF3、-CF2CH3、 -CHFCH3、-CF2CF2CF3、-CF2CH2CH3、-CF＝CF2、-CCl＝CH2、-CBr＝CH2、-CI＝CH2、-C≡C-CF3、 -CHFCH2CH3及-CHFCH2CF3。
烯基和炔基包括含直链、支链或环状的烯烃和炔烃。
本文所用“环烃基”指具有特定碳原子数目的单或多环脂肪烃基，其中该环体系可为 饱和的环，也可为不饱和的、非芳香环或螺环化合物，可任选包含双键，如，例如环丙基、环丙烯基、环丁基、环丁烯基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环庚基、环庚烯 基、降冰片基、降冰片烯基、茚满基、金刚烷基、螺庚烷基及螺[4.2]庚烷基。本文所述“环 烷基”则指具有特定碳原子数目的单或多环脂肪烷基。环烷基烷基包括非环状的烷基，其 中与碳原子结合的氢原子被环烷基取代。
本文所用“杂环”或“杂环基”是指饱和的或者不饱和的、非芳香的单环、二环或者桥连多环或者螺环化合物，包括3-12个碳原子，还带有选自O、N、P和S的杂原子代替一 或者多个碳原子。“杂环基”进一步的实施例包括但不限于：咪唑基、吲哚基、异噻唑基、 异噁唑基、噁二唑基、噁唑基、氧杂环丁烷基、吡喃基、吡嗪基、吡唑基、哒嗪基、吡啶 基、嘧啶基、吡咯基、喹噁啉基、四唑基、噻二唑基、噻唑基、噻吩基、三唑基、1,4-二噁 烷基、吡咯烷基、二氢咪唑基、二氢异噁唑基、二氢异噻唑基、二氢噁二唑基、二氢噁唑 基、二氢吡嗪基、二氢吡唑基、二氢吡啶基、二氢嘧啶基、二氢吡咯基、二氢四唑基、二 氢噻二唑基、二氢噻吩基、二氢三唑基、二氢氮杂环丁烷基、四氢呋喃基、四氢噻吩基， 吡咯烷基、吡咯啉基、咪唑烷基、吡唑烷基、吡唑啉基、哌啶基、哌嗪基、二氢吲哚基、 异二氢吲哚基、吗啉基、硫吗啉基、高吗啉基、高哌啶基、高哌嗪基、高硫吗啉基、硫吗 啉基-S-氧化物、硫吗啉基-S，S-二氧化物、四氢吡喃基、四氢噻吩基、高硫吗啉基-S，S-二 氧化物、噁唑烷酮基、二氢呋喃基、二氢吡喃基、四氢噻吩基-S-氧化物、四氢噻吩基-S，S- 二氧化物、高硫吗啉1-S-氧化物、2-氧杂-5-氮杂二环[2.2.1]庚烷、8-氧杂-3-氮杂-二环[3.2.1] 辛烷、3，8-二氮杂-二环[3.2.1]辛烷、2，5-二氮杂-二环[2.2.1]庚烷、3，8-二氮杂-二环[3.2.1] 辛烷、3，9-二氮杂-二环[4.2.1]壬烷和2，6-二氮杂-二环[3.2.2]壬烷，及其N-氧化物。杂环 取代基的连接可通过碳原子或通过杂原子实现。杂环烷基烷基指非环状的烷基，其中与碳 原子结合的氢原子被杂环烷基取代。
本文所用“杂芳基”指单或多环的环，包含代替一个或者多个碳原子的一个或者或多 个杂原子，所述的杂原子相同或者不同，并且为如例如N、O、S和P。实例包括呋喃基、 噻吩基、吡咯基、噁唑基、噻唑基、异噁唑基、异噻唑基、吡唑基、咪唑基、三唑基、四 唑基、噁二唑基、噻二唑基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、吡嗪基以及三嗪基。二环杂芳基 的实例为吲哚基、异吲哚基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并噁唑基、苯并噻唑基、苯并 异噁唑基、苯并异噻唑基、苯并咪唑基、吲唑基、异喹啉基、喹啉基、喹喔啉基、肉啉基、 2，3-二氮杂萘基、喹唑啉基和苯并三嗪基、中氮茚基、噁唑并吡啶基、咪唑并吡啶基、1， 5-二氮杂萘基、二氢吲哚基、异苯并二氢吡喃基、苯并二氢吡喃基、四氢异喹啉基、异二氢 吲哚基、异苯并四氢呋喃基、异苯并四氢噻吩基、异苯并噻吩基、苯并噁唑基、吡啶并吡 啶基、苯并四氢呋喃基、苯并四氢噻吩基、嘌呤基、苯并间二氧杂环戊烯基、三嗪基、苯 并嗪基、吩噻嗪基、蝶啶基、苯并噻唑基、咪唑并吡啶基、咪唑并噻唑基、二氢苯并异 噁嗪基、苯并异噁嗪基、苯并噁嗪基、二氢苯并异噻嗪基、苯并吡喃基、苯并噻喃基基、 香豆素基、异香豆素基、苯并二氢吡喃酮基、吡啶基-N-氧化物、四氢喹啉基、二氢喹啉基、 二氢喹啉酮基、二氢异喹啉酮基、二氢香豆素基、二氢异香豆素基、异二氢吲哚酮基、苯 并二氧杂环己烷、苯并噁唑啉酮基、吡咯基-N-氧化物、嘧啶基-N-氧化物、哒嗪基-N-氧化物、 吡嗪基-N-氧化物、喹啉基-N-氧化物、吲哚基-N-氧化物、二氢吲哚基-N-氧化物、异喹啉基-N- 氧化物、喹唑啉基-N-氧化物、喹喔啉基-N-氧化物、2，3-二氮杂萘基-N-氧化物、咪唑基-N- 氧化物、异噁唑基-N-氧化物、噁唑基-N-氧化物、噻唑基-N-氧化物、中氮茚基-N-氧化物、 吲唑基-N-氧化物、苯并噻唑基-N-氧化物、苯并咪唑基-N-氧化物、吡咯基-N-氧化物、噁二 唑基-N-氧化物、噻二唑基-N-氧化物、三唑基-N-氧化物、四唑基-N-氧化物、苯并噻喃基基-S- 氧化物和苯并噻喃基基-S，S-二氧化物。杂芳基烷基包括非环状的烷基，其中结合至碳原子 的氢原子被杂芳基代替。
本文所用“卤素”意指包括氯、氟、溴和碘。
除非另有定义，烷基、环烷基、芳基和杂环基取代基可为未被取代的或取代的。例如， (C1-C6)烷基可被一个、两个或三个选自OH、卤素、烷氧基、二烷基氨基或杂环基例如吗啉基、哌啶基等取代基取代。
术语"经取代"指的是在主链的一个或多个碳上具有取代基取代氢的部分。应了解，"取 代"或"经……取代"包括隐含条件，即所述取代是根据经取代原子和取代基的允许价数，且 取代产生稳定化合物，例如不自发进行诸如由重排、环化、消除等引起的转变。如本文所 用，预期术语"经取代"包括有机化合物所有允许的取代基。在广义方面，允许的取代基包括 有机化合物的非环状和环状、分支和未分支、碳环和杂环、芳族和非芳族取代基。允许的 取代基可以是一个或多个且对于适当的有机化合物而言可相同或不同。对于本发明的目的 而言，诸如氮的杂原子可具有氢取代基和/或满足杂原子价数的本文所述有机化合物的任何 允许的取代基。取代基可包括例如卤素、羟基、羰基(诸如羧基、烷氧基羰基、甲酰基或 酰基)、硫代羰基(诸如硫酯、硫代乙酸酯或硫代甲酸酯)、烷氧基、磷酰基、磷酸酯、膦酸酯、亚膦酸酯、氨基、酰胺基、脒、亚胺、氰基、硝基、叠氮基、巯基、烷硫基、硫 酸酯、磺酸酯、氨磺酰基、磺酰氨基、磺酰基、杂环基、C6-16芳烃基或芳族或杂芳族部分。 本领域技术人员应了解，若适当，烃链上经取代的部分本身可以经取代。
本文包括式I化合物的游离形式，也包括其药学上可接受的盐及其前药分子。本文所用 “游离形式”指非盐形式。本文包括在内的药学上可接受盐不仅包括本文所述特定化合物 的示例性盐，也包括所有式I化合物游离形式的典型的药学上可接受的盐。可使 用本领域已知技术分离所述化合物特定盐的游离形式。例如，可通过用适当的碱稀水溶液 例如氢氧化钠稀水溶液、碳酸钾稀水溶液、稀氨水及碳酸氢钠稀水溶液处理该盐使游离形 式再生。游离形式在某些物理性质例如在极性溶剂中溶解度上与其各自盐形式多少有些区 别，但是为发明的目的这种酸盐及碱盐在其它药学方面与其各自游离形式相当。
本文包括可通过常规化学方法将含有碱性部分或酸性部分的本发明化合物合成本发明 的药学上可接受的盐。通常，通过离子交换色谱或通过游离碱和化学计算量或过量的所需 盐形式的无机或有机酸在适当溶剂或多种溶剂的组合中反应制备碱性化合物的盐。类似的， 通过和适当的无机或有机碱反应形成酸性化合物的盐。
本发明化合物的药学上可接受的盐包括通过碱性本发明化合物和无机或有机酸反应形 成的本发明化合物的常规无毒盐。例如，常规的无毒盐包括得自无机酸例如盐酸、氢溴酸、 硫酸、氨基磺酸、磷酸、硝酸等制备的盐，也包括得自有机酸例如乙酸、丙酸、琥珀酸、 乙醇酸、硬脂酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、扑酸、马来酸、羟基马酸、 苯乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水杨酸、对氨基苯磺酸、2一乙酰氧基一苯甲酸、富马酸、苯磺 酸、甲苯磺酸、甲磺酸、乙烷二磺酸、草酸、羟乙基磺酸、三氟乙酸等制备的盐。
如果本发明化合物为酸性的，则适当的“药学上可接受的盐”指通过药学上可接受的 无毒碱包括无机碱及有机碱制备的盐。得自无机碱的盐包括铝盐、铵盐、钙盐、铜盐、铁盐、亚铁盐、锂盐、镁盐、锰盐、亚锰盐、钾盐、钠盐、锌盐等。特别优选铵盐、钙盐、 镁盐、钾盐和钠盐。得自药学上可接受的有机无毒碱的盐，所述碱包括伯胺、仲胺和叔胺 的盐，取代的胺包括天然存在的取代胺、环状胺及碱性离子交换树脂例如精氨酸、甜菜碱、 咖啡因、胆碱、N,N'－二苄基乙二胺、二乙胺、2一二乙基氨基乙醇、2一二甲基氨基乙醇、 氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N一乙基吗啉、N一乙基哌啶、葡萄糖胺、氨基葡萄糖、组氨 酸、羟钴胺、异丙基胺、赖氨酸、甲基葡萄糖胺、吗啉、哌嗪,哌啶、呱咤、多胺树脂、普 鲁卡因、嘌呤、可可碱、三乙胺、三甲胺、三丙胺、氨基丁三醇等。
显然的，一个分子中任何取代基或特定位置的变量的定义是独立于分子中其他位置的。 很容易理解，本领域普通技术人员可以通过现有技术手段及本发明中所述的方法，选择本 发明中的化合物的取代基或取代形式，以提供化学上稳定且容易合成的化合物。
本发明所述化合物可能含有一个或多个不对称中心，并可能由此产生非对映异构体和 光学异构体。本发明包括所有可能的非对映异构体及其外消旋混合物、其基本上纯的拆分 对映异构体、所有可能的几何异构体及其药学上可接受的盐。
本发明包括式I所示化合物的所有立体异构体及其药学上可接受的盐。进一步地，立体 异构体的混合物及分离出的特定的立体异构体也包括在本发明中。制备此类化合物的合成 过程中，或使用本领域普通技术人员公知的外消旋化或差向异构化方法的过程中，制得的 产品可以是立体异构体的混合物。
当式I所示化合物存在互变异构体时，除非特别声明，本发明包括任何可能的互变异构 体和其药学上可接受的盐，及它们的混合物。
另一方面，本发明所述化合物包括使用各种同位素标记的本发明所定义的化合物，例 如其中存在放射性同位素，如3H，14C和18F的那些化合物，或者其中存在非放射性同位素， 如2H和13C的化合物。
当式I所示化合物及其药学上可接受的盐为溶剂化物或多晶型的形式时，本发明包括任 何可能的溶剂化物和多晶型。形成溶剂化物的溶剂类型没有特别的限定，只要该溶剂是药 理学上可以接受的。例如，水、乙醇、丙醇、丙酮等类似的溶剂都可以采用。
本文所用的术语“由Aurora介导的疾病”或“由Aurora介导的病状”意指已知Aurora 在其中起作用的任何疾病或其他有害病状，也意指那些通过由Aurora抑制剂治疗而得到缓 解的疾病或病状，也意指已知Aurora在其中起作用的任何疾病或其他有害病状或疾病。
本发明化合物适合用作Aurora激酶抑制剂，在不希望受任何特定理论束缚的情况下， 所述化合物尤其适用于治疗其中在疾病、病状或病症中牵涉Aurora激酶活化作用的疾病、 病状或病症或减轻其严重性。当在特定疾病、病状或病症中牵涉Aurora激酶活化作用时， 所述疾病、病状或病症也可被称为“由Aurora介导的疾病”或病症。
所述疾病或病状包括(但不限于)：病毒感染(例如HIV和卡波济(氏) 肉瘤)；炎性以及自体免疫性疾病(例如大肠炎、关节炎、阿尔兹海默病、肾小 球肾炎以及伤口愈合)；细菌、真菌和/或寄生感染；白血病、淋巴瘤以及实体瘤 (例如癌和肉瘤)、皮肤疾病(例如牛皮癣)；特征在于细胞数目增加的增生疾病 (例如成纤维细胞、肝细胞、骨以及骨髓细胞、软骨或者平滑肌细胞或者上皮细 胞(例如子宫内膜增生))；骨疾病以及心血管疾病(例如再狭窄以及肥大)。
下述癌症(但不限于)亦可使用本发明的化合物治疗：脑瘤如例如听神经鞘瘤(神经 瘤)、星形细胞瘤如神经胶质瘤、纤维性星形细胞瘤、原浆性星形细胞瘤、饲肥星形细胞瘤、多形性成胶质细胞瘤和成胶质细胞瘤、脑淋巴瘤、脑转移、垂体瘤如催乳素瘤、HGH (人(垂体)生长激素)产生瘤以及ACTH产生瘤(促贤上腺皮质激素)、颅咽管瘤、成神 经管细胞瘤、脑膜瘤和少突神经胶质瘤；神经瘤(neoplasms)如例如植物神经系统瘤如成 神经细胞瘤、神经节瘤、神经节细胞瘤(嗜铬细胞瘤、副神经节瘤)和劲动脉球瘤、周围 神经系统瘤如截肢性神经瘤、神经纤维瘤、神经鞘瘤(神经鞘瘤、Schwannoma)以及恶性 的神经鞘瘤以及中枢神经系统瘤如脑以及骨髓瘤；肠癌如例如直肠、结肠、肛门、小肠以 及十二指肠癌；眼睑瘤如基底细胞癌或者基底细胞癌；胰腺癌；膀胱癌；肺癌(支气管癌) 如例如小细胞支气管癌(燕麦[形]细胞癌)以及非小细胞支气管癌如plate epithelial癌、腺癌以 及大细胞支气管癌；乳腺癌如例如乳癌如浸润性管癌、粘液癌、小叶浸润性癌、管状癌、 囊性腺样癌以及乳头状癌；非-何杰金氏淋巴瘤(NHL)如例如Burkitt氏淋巴瘤、低恶性非-何 杰金氏淋巴瘤(NHL)以及mucosis fungoides；子宫癌或子宫内膜癌或者子宫体癌；CUP综合 征；卵巢癌如粘蛋白性、子宫内膜性或或者血清性癌；胆囊癌；胆管癌如例如Klatskin瘤； 睾丸癌如例如精原细胞瘤以及非-精原细胞瘤；淋巴瘤(淋巴肉瘤)如例如恶性淋巴瘤、何杰 金氏病、非何杰金氏淋巴瘤(NHL)如慢性淋巴性白血病、白血病网状内皮组织增殖、免疫细 胞瘤、浆细胞瘤(多骨髓瘤)、免疫母细胞瘤、Burkitt氏淋巴瘤、T-zone mycosis fungoides、 大细胞退行发育性成淋巴细胞瘤以及成淋巴细胞瘤；喉部癌如例如声带瘤、声门上瘤、声 门瘤和声门下喉瘤；骨癌如例如骨软骨瘤、软骨瘤、成软骨细胞瘤、软骨粘液样纤维瘤、 骨瘤、骨样骨瘤、成骨细胞瘤、嗜酸细胞肉芽肿、巨细胞瘤、软骨肉瘤、骨肉瘤、尤因肉 瘤、网状细胞肉瘤、浆细胞瘤、巨细胞瘤、纤维性结构不良、少年骨囊肿以及动脉瘤骨囊 肿；头颈癌如例如唇癌、舌癌、口底癌、口腔癌、牙龈癌、上腭癌、唾液腺、咽喉癌、鼻 腔、鼻旁窦癌、喉以及中耳；肝癌如例如肝细胞癌或者肝细胞癌(HCC)；白血病、如例如急 性白血病如急性淋巴性/成淋巴细胞白血病(ALL)、急性髓性白血病(AML)；慢性白血病如慢性 淋巴性白血病(CLL)、慢性髓性白血病(CML)；胃癌或胃癌如例如乳突、管以及粘液腺癌、印 戒细胞癌、腺鳞癌、小细胞癌以及未分化癌；黑素瘤如例如表层蔓延性、结节性、恶性雀 斑样痣和肢端雀斑样痣黑[色]素瘤；肾癌如例如肾细胞癌或格拉维次(氏)瘤或Grawitz氏瘤； 食管癌或食管癌；阴茎癌；前列腺癌；喉癌或者咽癌如例如鼻咽癌、口咽癌以及喉咽癌； 视网膜母细胞瘤如例如阴道癌；plate epithelial癌、腺癌、原位癌、恶性黑素瘤和肉瘤；甲 状腺癌如例如乳头状、滤泡性以及甲状腺髓样癌以及退行发育癌；spinalioma、epidormoid 癌症以及皮肤plateepithelial癌症；胸腺瘤、尿道癌以及阴户癌。
本发明的化合物可用于预防、短期或者长期治疗上述疾病，还任选与放疗或者其他的″ 最新技术发展水平的″化合物联用，如例如细胞抑制或者细胞毒性物质、细胞增殖抑制剂、 抗血管生成物质、甾体类或者抗体。
除在文献中已知的或在实验程序中例证的标准方法外，可采用如下合成方案制备本发 明化合物。结合下述的合成方案，能够对本发明中所述的化合物以及合成方法进行更好的 理解。所述的合成方案描述了可以用于制备本发明中所述的化合物的方法，所述的方法仅 仅是为说明目的的说明性方案描述，并不构成对本发明所具有的范围的限制。
以下结合实施例对本发明做进一步的描述，但该实施例并非用于限制本发明的保护范 围。
以下所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对下述实施例 中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛 盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
以下所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能 因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说， 在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范 围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
中间体I(中间体I-1、I-2、I-3以及I-4)合成路线
Figure BDA0002312934370000191
该路线中，R1、R2和R6的定义同前文所述，中间体I-4中Cl可以替换为氟、溴、碘。
实施例1:合成中间体4-氯-7-碘-6-甲氧基喹唑啉
Figure BDA0002312934370000192
将4-碘-1-甲基-2-硝基苯(20g，0.076mol)加入到100ml叔丁醇和500ml水中，室温下加 入氢氧化钠(20g，0.225mol)和高锰酸钾(24g，0.15mol)，加热至80℃，搅拌过夜。将反应 液冷却至室温，过滤除去黑色固体，滤饼用水(20ml×2)冲洗。滤液用甲基叔丁基醚(200ml×2) 萃取，去除主要杂质。水相用盐酸酸化至pH＝3-4，用200ml乙酸乙酯萃取两次。合并有机 层，用100ml饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得4-碘-2-硝基苯甲酸(I-1,10g, 收率45％)，产品为黄色固体。1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ7.63(d,J＝8.0Hz,1H),8.16(dd, J＝1.6,8.0Hz,1H),8.35(d,J＝1.2Hz,1H)。
将4-碘-2-硝基苯甲酸(8g，27.3mmol)溶于100ml乙酸乙酯中，室温下加入二水合二氯 亚锡(18.4g，81.5mmol)，室温搅拌过夜。反应液用饱和碳酸氢钠溶液碱化至pH＝9。滤除固 体沉淀物，滤饼用20ml水冲洗两次。收集水层，用浓盐酸酸化至pH＝2。过滤，滤饼干燥得2-氨基-4-碘苯甲酸(I-2,6g，收率83％)为黄色固体。
将2-氨基-4-碘苯甲酸(I-2，6g，22.8mmol)和乙酸甲脒(3.5g，34.2mmol)加入30ml2-甲 氧基乙醇中，氮气保护下加热至130℃，搅拌过夜。反应液浓缩除去溶剂，将残渣用20ml乙 酸乙酯稀释，用1.0N碳酸氢钠水溶液碱化。过滤，滤饼用水和乙酸乙酯洗涤，干燥得4- 羟基-7-碘喹唑啉(I-3，5g，粗品)，产品为棕色固体。1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ7.85(s,2H), 8.07(s,1H),8.12(s,1H),12.3(s,1H)。
将4-羟基-7-碘喹唑啉(5g，18.4mmol)加入到30ml三氯氧磷中，在氮气保护下加热至 110℃，反应3小时。将反应混合物冷却至室温，减压蒸馏除去多余的三氯氧磷。将残渣倒入冰水中剧烈搅拌，用2N氢氧化钠水溶液碱化至pH＝9-10，用二氯甲烷萃取。有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得4-氯-7-碘-6-甲氧基喹唑啉(I-4,3.0g，收率73％)，产品为黄色 固体。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.96(d,J＝8.8Hz,1H),8.02(d,J＝8.8Hz,1H),8.52(s,1H), 9.04(s,1H).
中间体II(II-1，II-2，II-3，II-4，II-5)合成路线
Figure BDA0002312934370000201
该路线中，R2和R6的定义同前文所述，中间体II-5中Cl可以替换为氟、溴、碘，甲氧基可 以替换为其他烷氧基例如乙氧基、异丙氧基等。
实施例2:合成中间体4-氯-7-碘-6-甲氧基喹唑啉
Figure BDA0002312934370000202
将3-羟基-4-碘苯甲酸(3g,11.36mmol)溶于11ml N,N-二甲基甲酰胺中，在0℃下先加入 碳酸钾(6.27g,45.45mmol)，再加入碘甲烷(6.45g,45.45mmol)，加料完毕，升至室温搅拌3.5 小时。向反应混合物中加入50ml水和50ml乙酸乙酯，收集有机层，用50ml饱和食盐水冲 洗，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到4-碘-3-甲氧基苯甲酸甲酯(II-1，3.27g，收率98％)， 产品为棕色油状。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ3.92(s,3H),3.94(s,3H),7.37(dd,J＝1.6,8.0Hz, 1H),7.45(s,1H),7.85(d,J＝8.0Hz,1H)。
将4-碘-3-甲氧基苯甲酸甲酯(2.73g,9.35mmol)溶于25ml冰乙酸中，冷却至10℃缓慢加 入3.25ml 70％浓硝酸和12.56ml乙酸酐。反应移至油浴加热至70℃反应2小时。将反应冷 却至室温，用氢氧化钠水溶液碱化至pH＝9后，用100ml乙酸乙酯萃取。有机层用饱和食盐 水冲洗，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗品用硅胶柱层析(含10％乙酸乙酯的正己烷)纯化得到4- 碘-5-甲氧基-2-硝基苯甲酸甲酯((II-2，1.6g，收率50％)，产品为淡黄色固体。1H NMR(400MHz, CDCl3):δ3.94(s,3H),4.00(s,3H),6.95(s,1H),8.46(s,1H)。
将4-碘-5-甲氧基-2-硝基苯甲酸甲酯(1.6g,4.75mmol)、铁粉(2.65g,47.5mmol)和氯化铵 (1.02g,19.0mmol)加入到21ml异丙醇和7ml水中，在氮气保护下加热至88℃搅拌2小时。 过滤除去铁粉，滤饼用50ml热异丙醇洗涤。将滤液浓缩至1/3体积，倒入50ml饱和碳酸 氢钠中，用50ml二氯甲烷萃取。有机相用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到2-氨基-4-碘-5- 甲氧基苯甲酸甲酯((II-3，1.23g,收率84％)，产品为为棕色固体。LC_MS:(ES+):m/z307.9 [M+H]+.tR＝2.732min.1H NMR(400MHz,CDCl3):δ3.82(s,3H),3.88(s,3H),7.21(s,1H),7.24(s, 1H)。
将2-氨基-4-碘-5-甲氧基苯甲酸甲酯(4.4g,14.0mmol)和乙酸甲脒(2.68g,25.2mmol)加入 到2-甲氧基乙醇中，在氮气保护下升温至130℃，搅拌过夜。将反应混合物浓缩，用20ml 乙酸乙酯和(1.0N)碳酸氢钠水溶液稀释。将混合物过滤，滤饼用水和乙酸乙酯洗涤后干燥得 7-碘-6-甲氧基-4-羟基喹唑啉(II-4，3.8g，粗品)，产品为棕色固体。LC_MS:(ES+):m/z 302.9 [M+H]+.tR＝2.073min。
将7-碘-6-甲氧基-4-羟基喹唑啉(3.9g,12.9mmol)加入到三氯氧磷(15ml,161.86mmol) 中，氮气保护下加热至110℃反应3小时。将反应冷却至室温，减压蒸馏除去多余的三氯 氧磷。将残渣倒入冰水中剧烈搅拌，用氢氧化钠水溶液(2N)碱化至pH＝9-10后，用二氯甲烷 萃取。有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到4-氯-7-碘-6-甲氧基喹唑啉(II-5,3.0g，收率 73％)，产品为黄色固体。LC_MS:(ES+):m/z 320.9[M+H]+.tR＝2.827min.1H NMR(400MHz, DMSO-d6):δ4.06(s,3H),7.41(s,1H),8.64(s,1H),8.98(s,1H).
中间体III-b(III-1)合成路线
Figure BDA0002312934370000211
该路线中，R1、R2、R4、R5、R6、p的定义同前文所述，中间体III-1中Cl可以替换为氟、溴、 碘。
实施例3:合成中间体2-((4-(4-氯喹唑啉-7-基)丁-3-炔-1-基)(乙基)氨基)乙醇
Figure BDA0002312934370000221
将4-氯-7-碘喹唑林(I-4，1.2g，4.14mmol)，2-(丁-3-炔-1-基(乙基)氨基)乙醇(VI-1,875mg, 6.21mmol)，和三乙胺(5ml)加入到20ml N,N-二甲基甲酰胺中。在室温加入碘化亚铜(78mg, 0.414mmol)和双三苯基膦二氯化钯(290mg,0.414mmol)，反应液在氮气保护下于20℃反 应过夜。向反应液中加入80ml水和80ml乙酸乙酯。合并有机层，用50ml饱和食盐水洗 涤，用无水硫酸钠干燥，浓缩后用硅胶柱层析(洗脱液是含10％甲醇的二氯甲烷)纯化得 2-((4-(4-氯喹唑啉-7-基)丁-3-炔-1-基)(乙基)氨基)乙醇(III-1，400mg，收率32％)，产品为黄 色固体。LC_MS:(ES+):m/z 304.1[M+H]+.tR＝1.748min.
实施例4:合成中间体2-((4-(4-氯-6-甲氧基喹唑啉-7-基)丁-3-炔-1-基)(乙基)氨基)乙醇
Figure BDA0002312934370000222
目标化合物的制备方法类似于合成中间体2-((4-(4-氯喹唑啉-7-基)丁-3-炔-1-基)(乙基) 氨基)乙醇。以2-(丁-3-炔-1-基(乙基)氨基)乙醇和4-氯-7-碘-6-甲氧基喹唑啉作为起始物料制 备2-((4-(4-氯-6-甲氧基喹唑啉-7-基)丁-3-炔-1-基)(乙基)氨基)乙醇。LC_MS:(ES+):m/z 334.2 [M+H]+.tR＝1.773min.
中间体IV(IV-1，IV-2)合成路线
Figure BDA0002312934370000223
该路线中，R1、R2、R6的定义同前文所述。
实施例5:合成中间体7-碘-3-氰基-4-羟基喹啉
Figure BDA0002312934370000224
将2-氨基-4-碘苯甲酸(1.3g,4.08mmol)溶解在5.2ml N,N-二甲基甲酰胺中，加入5.2ml N,N-二甲基甲酰胺二甲基缩醛，氮气保护下加热至120℃过夜。反应混合物减压浓缩得到 未经纯化的粗产品(IV-1)；在-78℃，氮气条件下，将正丁基锂(5.6ml,10.56mmol)加入到 20ml干燥的四氢呋喃溶液中，然后将溶于5ml干燥四氢呋喃溶液中的乙腈(454mg,11.07 mmol)缓慢滴加到反应液中,随后将(E)-2-(((二甲氨基)亚甲基)氨基)-4-碘苯甲酸(粗品,5.03 mmol)溶解在10ml干燥的四氢呋喃里，在-78℃缓慢滴加到反应中。该反应常温搅拌两小 时后,升温到-10℃,随后慢慢滴加醋酸(1.5g)；反应混合液常温搅拌过夜。将反应液过滤， 滤饼用四氢呋喃、甲基叔丁基醚淋洗，干燥得到7-碘-3-氰基-4-羟基喹啉(IV-2，1.2g,两步 收率99％)，产品为白色固体。LC_MS:(ES+):m/z 297.0[M+H]+.tR＝2.082min.
中间体1(1-1，1-2，1-3)的合成路线：
Figure BDA0002312934370000231
其中，n的定义同前文，为0、1或2。
实施例6：合成中间体2-(3-氨基-1H-吡唑-5-基)-乙酸
Figure BDA0002312934370000232
将丙二腈(30g,0.454mol)与水合肼(3.5ml)在90ml甲醇中加热至回流，以维持反应液回 流的速度滴加水合肼(10.5ml)。将反应液继续回流15分钟，然后冷却至0-5℃，搅拌2小 时。过滤收集固体沉淀物，滤饼分别用水(100ml)和预冷甲醇(20ml)洗涤，减压抽滤，晾干得 到3-氨基-4-氰基-5-(氰乙基)-1H-吡唑(1-1，9.18g，粗品)，产品为黄色固体。LC_MS:(ES+):m/z 148.1[M+H]+.tR＝1.687min；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ3.94(s,2H),6.46(s,2H),11.98(s, 1H)。
将3-氨基-4-氰基-5-(氰乙基)-1H-吡唑(9.15g,0.06mol)溶于氢氧化钠水溶液(12N,92ml) 中，在氮气保护下加热至100℃反应过夜。反应液冷却至0℃，用浓盐酸酸化至pH＝3。所 得固体沉淀物经过滤、水洗、减压干燥，得到3-氨基-4-羧基-5-(羧甲基)-1H-吡唑(1-2，粗品)， 产品为浅灰色固体，粗品不需进行纯化直接用于下一步反应。LC_MS:(ES+):m/z 185.9 [M+H]+.tR＝1.022min；将3-氨基-4-羧基-5-(羧甲基)-1H-吡唑(粗品)加入到50ml水中，在100℃ 下反应过夜。将反应混合物冷却至室温并过滤，滤液通过减压蒸馏浓缩得到粗品。粗品用 乙酸乙酯打浆过滤得到2-(3-氨基-1H-吡唑-5-基)乙酸(1-3，3.75g,两步反应收率42％)，产品 为浅灰色固体。LC_MS:(ES+):m/z 142.0[M+H]+.tR＝0.986min.
中间体2(2-1，2-2，2-3)的合成路线：
Figure BDA0002312934370000241
其中，R3、s、n的定义同前文。
实施例7：合成中间体2-(3-氨基-1H-吡唑-5-基)-N-(2-氟苯基)乙酰胺
Figure BDA0002312934370000242
将2-(3-氨基-1H-吡唑-5-基)乙酸(1g,7.09mmol)和吡啶(1.23g,15.60mmol)溶于10ml N,N- 二甲基甲酰胺中，在0℃下滴加三氟乙酸五氟苯酯(3.97g,14.18mmol)，10分钟加完。将得 到的反应液升温至室温，搅拌1.5小时，然后加入2-氟苯胺(1.57g,14.18mmol)，继续搅拌 2小时。反应液在0℃下用盐酸(1N,25ml)淬灭，用50ml水稀释后，用80ml乙酸乙酯萃取。 收集有机相用30ml饱和食盐水冲洗，用无水硫酸钠干燥后，减压蒸馏浓缩得到2,2,2-三氟- N-(5-(2-((2-氟苯基)氨基)-2-乙氧基)-1H-吡唑-3-基)乙酰胺(2-1,1.12g,收率47％)，产品为白色 固体，产品不需进行纯化直接用于下一步反应。LC_MS:(ES+):m/z331.0[M+H]+.tR＝2.364min； 1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ3.81(s,2H),6.48(s,1H),7.15-7.18(m,2H),7.24-7.29(m,1H), 7.86-7.90(m,1H),10.00(s,1H),11.93(s,1H),12.61(s,1H)。
将2,2,2-三氟-N-(5-(2-((2-氟苯基)氨基)-2-乙氧基)-1H-吡唑-3-基)乙酰胺(1.1g,3.33 mmol)加入到8ml稀盐酸和8ml甲醇中，在氮气保护下加热至50℃搅拌4小时。将反应 液冷却至室温，用饱和碳酸氢钠水溶液碱化至pH＝7-8，用50ml乙酸乙酯萃取。收集有机相 用30ml饱和食盐水冲洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到2-(3-氨基-1H-吡唑-5-基)-N-(2-氟 苯基)乙酰胺(2-2，540mg，收率69％)为白色固体。LC_MS:(ES+):m/z 235.0[M+H]+.tR＝1.680 min；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ3.56-3.61(m,2H),4.44-4.89(m,2H),5.20-5.39(m,1H), 7.14-7.18(m,2H),7.22-7.28(m,1H),7.92(s,1H),9.85(s,1H),11.25(s,1H)。
实施例8:合成中间体2-(3-氨基-1H-吡唑-5-基)-N-(3-氟苯基)乙酰胺
Figure BDA0002312934370000251
目标化合物合成的方式类似于2-(3-氨基-1H-吡唑-5-基)-N-(2-氟苯基)乙酰胺。用3-氟苯胺作 为起始原料来合成2,2,2-三氟-N-(5-(2-((3-氟苯基)氨基)-2-乙氧基)-1H-吡唑-3-基)乙酰胺(2-1, 2.4g,收率72％)为白色固体。LC_MS:(ES+):m/z 331.2[M+H]+.tR＝2.350min.1H NMR(400 MHz,d6-DMSO):δ3.74(s,2H),6.47(s,1H),6.86-6.91(m,1H),7.28-7.32(m,1H),7.33-7.38(m, 1H),7.57(d,J＝11.6Hz,1H),10.4(s,1H),11.91(s,1H),12.6(br,1H)。中间体2-(3-氨基-1H-吡唑 -5-基)-N-(3-氟苯基)乙酰胺(2-2，1.0g,收率58％)，该中间体为黄色固体.LC_MS:(ES+):m/z 235.1[M+H]+.tR＝1.607min.1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ3.48(s,2H),5.30(s,1H), 6.83-6.88(m,1H),7.28-7.36(m,2H),7.57-7.61(m,1H),10.26(s,1H)。
实施例9:合成中间体2-(3-氨基-1H-吡唑-5-基)-N-(4-氟苯基)乙酰胺
Figure BDA0002312934370000252
目标化合物合成的方式类似于2-(3-氨基-1H-吡唑-5-基)-N-(2-氟苯基)乙酰胺。用4-氟苯 胺作为起始原料合成2,2,2-三氟-N-(5-(2-((4-氟苯基)氨基)-2-乙氧基)-1H-吡唑-3-基)乙酰胺 (2-1,1.2g,收率51％)为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ3.72(s,2H),6.47(s,1H), 7.14-7.18(m,2H),7.59-7.63(m,2H),10.27(s,1H),11.94(s,1H),12.63(br,1H)。中间体2-(3-氨 基-1H-吡唑-5-基)-N-(4-氟苯基)乙酰胺(2-2，618mg,收率73％)为黄色固体。LC_MS:(ES+): m/z 235.0[M+H]+.tR＝1.327min。
实施例10：合成中间体2-(3-氨基-1H-吡唑-5-基)-N-(2,3-二氟苯基)乙酰胺
Figure BDA0002312934370000253
目标化合物合成的方式类似于2-(3-氨基-1H-吡唑-5-基)-N-(2-氟苯基)乙酰胺。用2,3-二 氟苯胺作为起始原料来合成N-(5-(2-((2,3-二氟苯基)氨基)-2-乙氧基)-1H-吡唑-3-基)-2,2,2-三氟 乙酰胺(2-1,780mg，收率31％)为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ3.84(s,2H),6.49(s, 1H),7.15-7.24(m,2H),7.67-7.71(m,1H),10.22(s,1H),11.94(s,1H),12.63(s,1H)。中间体2-(3- 氨基-1H-吡唑-5-基)-N-(2,3-二氟苯基)乙酰胺(2-2，300mg，收率53％)为白色固体。
实施例11：合成中间体5-(2-((3-氟苯基)氨基)乙基)-1H-吡唑-3-胺
Figure BDA0002312934370000261
将2-(3-氨基-1H-吡唑-5-基)-N-(3-氟苯基)乙酰胺(2-2,234mg,1.0mmol)加入到10ml干燥 的四氢呋喃溶液中，冷却至0℃，在氮气保护下滴加1ml硼烷二甲硫醚络合物。所得混合物 在加热至70℃，搅拌2小时。反应液冷却至0℃，用盐酸(2N,30ml)淬灭。所得混合物在室 温下搅拌过夜，用氢氧化钠碱化至pH＝9，用40ml乙酸乙酯萃取。收集有机相用20ml饱和 食盐水冲洗后，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗品。粗品用硅胶柱层析(含5％甲醇的二 氯甲烷)纯化得到5-(2-((3-氟苯基)氨基)乙基)-1H-吡唑-3-胺(2-3，150mg,收率68％)，产品为 黄色油状物。LC_MS:(ES+):m/z 221.1[M+H]+.tR＝1.744min.1H NMR(400MHz,CDCl3):δ2.84(t, J＝6.4Hz,2H),3.36(t,J＝6.4Hz,2H),5.5(s,1H),6.27-6.31(m,1H),6.34-6.41(m,2H),7.06-7.12 (m,1H)。
中间体3(3-1、3-2、3-3、3-4)合成路线
Figure BDA0002312934370000262
实施例12:合成中间体5-(氨甲基)-1H-吡唑-3-氨
Figure BDA0002312934370000263
将3-硝基-1H-吡唑-5-甲酸甲酯(5g,29.22mmol)加入到70ml氨水中，常温搅拌过夜。 将反应液倒入稀盐酸(1N,40ml)中,再用30ml稀释。浓缩反应液得到3-硝基-5-甲酰基-1H- 吡唑(3-1,4g,收率88％)，产品为白色固体.LC_MS:(ES+):m/z 156.7[M+H]+.tR＝1.437min；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ7.04(s,2H),7.50(s,1H)。
在溶解有3-硝基-1H-吡唑-5-甲酰胺(2.5g,16.02mmol)的甲醇溶液中加入钯碳(10％, 250mg)，置换氢气，于氢气氛围下(氢气球)常温搅拌4小时。过滤钯碳，用甲醇淋洗2次。将母液减压浓缩得到3-氨基-5-甲酰基-1H-吡唑(3-2,2g,收率99％)，产品为白色固体。LC_MS:(ES+):m/z 126.9[M+H]+.tR＝0.927min；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ4.60-5.01(m,2H),5.60-5.92(m,1H),7.00-7.70(m,2H),11.84-12.03(m,1H)。
将3-氨基-5-甲酰基-1H-吡唑(1.2g,9.51mmol)溶于50ml干燥的四氢呋喃中，冷却至 0℃，在氮气保护下缓慢滴加硼烷二甲硫醚溶液(9.5ml,95.15mmol)。将反应加热至70℃搅 拌18小时。冷却至0℃，加入稀盐酸(2N,50ml)后，在常温下搅拌过夜。用氢氧化钠溶液碱化至pH＝9，用乙酸乙酯(40ml)萃取两次。将水相浓缩到三分之一体积后加入碳酸钾(2.6g, 19.03mmol)和二碳酸二叔丁酯(2.07g,9.51mmol)，常温搅拌过夜。加水稀释，用乙酸乙酯 (50ml)萃取，合并有机相用饱和食盐水(50ml)洗两次,用无水硫酸钠干燥,减压浓缩得到 粗品。粗品通过硅胶柱层析纯化(含20-50％乙酸乙酯的正己烷)得到3-氨基-5-((N,N-双叔丁 氧羰氨基)甲基)-1H-吡唑(3-3,400mg,收率13％)，产品为白色固体。LC_MS:(ES+):m/z 313.0 [M+H]+.tR＝2.617min。
将3-氨基-5-((N,N-双叔丁氧羰氨基)甲基)-1H-吡唑(400mg,1.28mmol)加入到氯化氢的甲 醇溶液(4M,5ml)中，常温搅拌过夜。减压浓缩得到粗产品，用二氯甲烷打浆后过滤得到5-(氨 甲基)-1H-吡唑-3-胺(3-4，200mg,收率>100％)，产品为白色固体。LC_MS:(ES+):m/z 113.0 [M+H]+.tR＝0.848min。
中间体4(4-1)的合成路线
Figure BDA0002312934370000271
该路线中，s、R3的定义同前文。
实施例13:合成中间体2,5-二氧吡咯烷-1-基-3-氟苯甲酸酯
Figure BDA0002312934370000272
将3-氟苯甲酸(1g,7.1mmol)和N-羟基丁二酰亚胺(0.9g,7.8mmol)加入到20ml二氯甲烷和1ml N,N-二甲基甲酰胺的混合溶液中，在0℃缓慢加入二环己基碳二亚胺(1.6g,7.8mmol)的二氯甲烷溶液。氮气保护下常温搅拌过夜。过滤收集滤饼，滤饼用乙酸乙酯重结晶得2,5-二氧吡咯烷-1-基-3-氟苯甲酸酯(4-1，1.2g,收率76％)为白色固体。1H NMR(400 MHz,DMSO-d6):δ2.91(s,4H),7.73-7.76(m,2H),7.87-7.90(m,1H),7.96-7.99(m,1H)。
中间体5(5-1)的合成路线：
Figure BDA0002312934370000281
该路线中，R3的定义同前文。
实施例14:合成中间体N-((3-氨基-1H-吡唑-5-基)甲基)-3-氟苯甲酰胺
Figure BDA0002312934370000282
将3-氨基-5-(甲氨基)-1H-吡唑(3-4,140mg,1.25mmol)，三乙胺(253mg,2.50mmol)和 2,5-二氧吡咯烷-1-基-3-氟苯甲酸酯(4-1,296mg,1.25mmol)加入到5ml N,N-二甲基甲酰胺 溶液中，常温搅拌3小时。向反应液中加入30ml水，用30ml乙酸乙酯萃取。收集有机相， 用30ml饱和食盐水洗两次，用无水硫酸钠干燥，浓缩旋干得到粗产品，并用硅胶柱层析(含 5-10％甲醇和1％氨水的二氯甲烷)纯化得到N-((3-氨基-1H-吡唑-5-基)甲基)-3-氟苯甲酰胺 (5-1，160mg,收率55％)，产品为棕色固体。LC_MS:(ES+):m/z 234.9[M+H]+.tR＝1.213min.
中间体6(6-1，6-2，6-3，6-4)合成路线：
Figure BDA0002312934370000283
该路线中，m的定义同前文，为0或1。
实施例15：合成中间体3-(叠氮甲基)-1H-吡唑-5-羧酸
Figure BDA0002312934370000284
将2-重氮乙酸乙酯(18ml,171mmol)与2-丙炔-1-醇(9.59g,171mmol)加入到180ml甲 苯中，氮气保护下加热至110℃反应过夜。减压浓缩除去溶剂，残渣用40ml乙酸乙酯稀释， 室温搅拌10min。过滤，滤饼用10ml乙酸乙酯洗涤。将滤饼加入到80ml乙酸乙酯中，在80℃下搅拌5min，冷却至室温，过滤，滤饼用20ml乙酸乙酯洗涤，减压干燥后得3-(羟 甲基)-1H-吡唑-5-羧酸乙酯(6-1,7.2g，收率30％)，产品为白色固体。LC_MS:(ES+):m/z170.8 [M+H]+.tR＝1.410min；1H NMR(400MHz,CDCl3):δ1.28(t,J＝7.2Hz,3H),4.24-4.26(m,2H), 4.49-4.50(m,2H),5.38(s,1H),6.58(s,1H),13.38(s,1H)。
将3-(羟甲基)-1H-吡唑-5-羧酸乙酯(5g,29.41mmol)加入到80ml二氯甲烷中。氮气保 护下加入0.1ml N,N-二甲基甲酰胺。冷却至0℃,20分钟内缓慢滴加(10.50g,88.24mmol)氯化 亚砜。滴加完毕，升至室温搅拌半小时。减压浓缩除去溶剂，加入80ml二氯甲烷，用饱和 碳酸氢钠水溶液碱化至pH＝7-8。收集有机层，用50ml饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥， 减压浓缩得3-(氯甲基)-1H-吡唑-5-羧酸乙酯(6-2,5.45g,粗品)为无色油状。LC_MS:(ES+):m/z 188.7[M+H]+.tR＝2.378min。
将3-(氯甲基)-1H-吡唑-5-羧酸乙酯(5.4g,28.72mmol)溶于50ml N,N-二甲基甲酰胺 中，室温加入叠氮化钠(2.24g,34.46mmol)。氮气保护下加热至50℃搅拌1小时。将反应 液冷却至室温，倒入150ml水中，用饱和碳酸氢钠水溶液碱化至pH＝7-8后用200ml乙酸乙 酯萃取。合并有机层，用100ml饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后用硅胶柱层析纯化(含20％乙酸乙酯的正己烷)得3-(叠氮甲基)-1H-吡唑-5-羧酸乙酯(6-3,4.7g,收率 84％)，产品为白色固体.LC_MS:(ES+):m/z 195.7[M+H]+.tR＝2.362min；1H NMR(400MHz, CDCl3):δ1.39(t,J＝7.2Hz,3H),4.38-4.43(q,2H),4.47(s,2H),6.86(s,1H),12.19(br,1H)。
将3-(叠氮甲基)-1H-吡唑-5-羧酸乙酯(1.58g,8.1mmol)和氢氧化锂(1.02g,24.31mmol) 加入到12ml甲醇-6ml四氢呋喃-3ml水中，氮气保护下30℃搅拌过夜。冷却至室温，用 15ml 2N稀盐酸酸化，减压浓缩得3-(叠氮甲基)-1H-吡唑-5-羧酸(6-4，2g,粗品)，产品为黄色 油状，粗品不需纯化直接用于下一步反应。LC_MS:(ES+):m/z 167.7[M+H]+.tR＝1.482min.
合成中间体7(7-1，7-2)
Figure BDA0002312934370000291
该路线中，m、s、R3的定义同前文。
实施例16：合成中间体3-(氨基甲基)-N-(3-氟苯基)-1H-吡唑-5-酰胺
Figure BDA0002312934370000292
将3-(叠氮甲基)-1H-吡唑-5-羧酸(6-4,2g,8.1mmol)，3-氟苯胺(1.08g,9.72mmol),N,N- 二异丙基乙胺(2.09g,16.20mmol)，和2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(4.62g,12.15mmol)加入到10ml N,N-二甲基甲酰胺中，在氮气保护下室温搅拌1小时。反 应液用40ml水和60ml乙酸乙酯萃取，分液，收集有机层并用30ml饱和食盐水洗涤，用无 水硫酸钠干燥，减压浓缩得到的粗品经硅胶柱层析(含20％乙酸乙酯的己烷)纯化得到 3-(叠氮甲基)-N-(3-氟苯基)-1H-吡唑-5-酰胺(7-1,120mg,收率6％)，产品为白色固体。
将3-(叠氮甲基)-N-(3-氟苯基)-1H-吡唑-5-酰胺(120mg,0.46mmol)和三苯基膦(182mg, 0.69mmol)加入到3ml四氢呋喃中，氮气保护下加热至45℃搅拌1小时。加入41mg水， 继续搅拌1小时。反应液冷至室温，用2ml 2N稀释的盐酸酸化，加入10ml水和20ml乙酸乙酯。收集水层，用饱和碳酸钠溶液碱化至pH 10，用二氯甲烷(20ml×3)萃取。合并有机层，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得3-(氨基甲基)-N-(3-氟苯基)-1H-吡唑-5-酰胺(7-2，100mg， 收率93％)，产品为白色固体，粗品无须纯化直接用于下一步反应。LC_MS:(ES+):m/z 234.9 [M+H]+.tR＝1.558min.
化合物I-a(I-a-1，I-a-2)的合成路线
Figure BDA0002312934370000301
该路线中，各取代基的定义同前文，III-1中，Cl可以替换为氟、溴、碘。
实施例17：合成化合物2-(3-((7-(4-(乙基(2-羟基乙基)氨基)丁-1-炔-1-基)喹唑啉-4-基)氨 基)-1H-吡唑-5-基)-N-(2-氟苯基)乙酰胺(化合物5)
Figure BDA0002312934370000302
将2-(3-氨基-1H-吡唑-5-基)-N-(2-氟苯基)乙酰胺(2-2，45.1mg,0.19mmol)和2-((4-(4-氯喹 唑啉-7-基))丁-3-炔-1-基)(乙基)氨基)乙醇(III-1，70.4mg,0.23mmol)加入到2ml异丙醇中，氮 气保护下加热至90℃反应2小时。将反应冷至室温，加入5％氨水甲醇溶液碱化至pH8-9。 将反应液浓缩，用薄层层析硅胶板(含8％甲醇和0.1％氨水的二氯甲烷)纯化得2-(3-((7-(4-(乙 基(2-羟基乙基)氨基)丁-1-炔-1-基)喹唑啉-4-基)氨基)-1H-吡唑-5-基)-N-(2-氟苯基)乙酰胺(化合 物5，15mg,收率15％)，产品黄色固体。LC_MS:(ES+):m/z 502.3[M+H]+.tR＝1.302min；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ1.00(t,J＝7.2Hz,3H),2.56-2.61(m,6H),2.79(t,J＝7.2Hz,2H), 3.46-3.52(m,2H),3.82(s,2H),4.34(s,1H),6.66-6.84(m,1H),7.15-7.19(m,2H),7.24-7.30(m, 1H),7.50-7.52(m,1H),7.71(s,1H),7.90-7.94(m,1H),8.56-8.59(m,2H),10.00(s,1H),10.45(s, 1H),12.40(s,1H).
实施例18：合成化合物2-(3-((7-(4-(乙基(2-羟基乙基)氨基)丁-1-炔-1-基)喹唑啉-4-基)氨 基)-1H-吡唑-5-基)-N-(3-氟苯基)乙酰胺(化合物3)
Figure BDA0002312934370000311
目标化合物3的制备的方式类似于合成2-(3-((7-(4-(乙基(2-羟基乙基)氨基)丁-1-炔-1-基) 喹唑啉-4-基)氨基)-1H-吡唑-5-基)-N-(2-氟苯基)乙酰胺。以2-(3-氨基-1H-吡唑-5-基)-N-(3-氟苯 基)乙酰胺和2-((4-(4-氯喹唑啉-7-基)丁-3-炔-1-基)(乙基)氨基)乙醇(III-1)作为起始原料合成 2-(3-((7-(4-(乙基(2-羟基乙基)氨基)丁-1-炔-1-基)喹唑啉-4-基)氨基)-1H-吡唑-5-基)-N-(3-氟苯基) 乙酰胺(化合物3，24mg,收率26％)，产品黄色固体。LC_MS:(ES+):m/z 502.4[M+H]+.tR＝ 1.680min.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ1.05(t,J＝7.2Hz,3H),2.56-2.64(m,4H),2.72-2.82 (m,2H),3.43-3.52(m,2H),3.75(s,2H),4.28-4.37(m,1H),6.72-6.84(m,1H),6.87-6.91(m,1H), 7.31-7.37(m,2H),7.43-7.56(m,1H),7.62(d,J＝11.6Hz,1H),7.70(s,1H),8.58(s,2H),10.45(s, 2H),12.41(s,1H).
实施例19：合成化合物2-(3-((7-(4-(乙基(2-羟乙基)氨基)丁-1-炔-1-基)-6-甲氧基喹唑啉-4-基) 氨基)-1H-吡唑-5-基)-N-(3-氟苯基)乙酰胺盐酸盐(化合物3的盐酸盐)
Figure BDA0002312934370000312
目标化合物制备的方式类似于合成2-(3-((7-(4-(乙基(2-羟基乙基)氨基)丁-1-炔-1-基)喹唑 啉-4-基)氨基)-1H-吡唑-5-基)-N-(2-氟苯基)乙酰胺。以2-(3-氨基-1H-吡唑-5-基)-N-(3-氟苯基) 乙酰胺和2-((4-(4-氯-6-甲氧基喹唑啉-7-基)丁-3-炔-1-基)(乙基)氨基)乙醇为起始原料合成2-(3-((7-(4-(乙基(2-羟乙基)氨基)丁-1-炔-1-基)-6-甲氧基喹唑啉-4-基)氨基)-1H-吡唑-5- 基)-N-(3-氟苯基)乙酰胺盐酸盐(46mg,收率71％)黄色固体。LC_MS:(ES+):m/z 532.2[M+H]+. tR＝1.771min.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ1.27(t,J＝7.2Hz,3H),3.12(t,J＝7.6Hz,2H), 3.26-3.34(m,4H),3.38-3.46(m,2H),3.79(t,J＝5.2Hz,2H),3.83(s,2H),4.01(s,3H),5.25-5.51(m, 1H),6.84(s,1H),6.88-6.92(m,1H),7.33-7.39(m,2H),7.60-7.69(m,1H),7.93(s,1H),8.31(s,1H), 8.85(s,1H),9.93(s,1H),10.63(s,1H),11.67-11.98(br,1H).
实施例20：合成化合物2-(3-((7-(4-(乙基(2-羟基乙基)氨基)丁-1-炔-1-基)喹唑啉-4-基)-1H-吡 唑-5-基)-N-(4-氟苯基)乙酰胺(化合物6)
Figure BDA0002312934370000321
目标化合物制备的方式类似于合成2-(3-((7-(4-(乙基(2-羟基乙基)氨基)丁-1-炔-1-基)喹唑 啉-4-基)氨基)-1H-吡唑-5-基)-N-(2-氟苯基)乙酰胺。以2-(3-氨基-1H-吡唑-5-基)-N-(4-氟苯基) 乙酰胺和2-((4-(4-氯喹唑啉-7-基)丁-3-炔-1-基)(乙基)氨基)乙醇(III-1)为起始原料合成 2-(3-((7-(4-(乙基(2-羟基乙基)氨基)丁-1-炔-1-基)喹唑啉-4-基)-1H-吡唑-5-基)-N-(4-氟苯基)乙 酰胺(化合物6，52.9mg,收率62％)黄色固体。LC_MS:(ES+):m/z 502.0[M+H]+.tR＝1.488min； 1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ1.10(s,3H),2.64-3.18(m,8H),3.56-3.64(m,2H),3.74-3.83 (m,2H),6.77(s,1H),7.16(t,J＝8.8Hz,2H),7.52-7.54(m,1H),7.63-7.67(m,2H),7.74(s,1H), 8.56-8.63(m,2H),10.39(s,1H),10.48(br,1H),12.47(s,1H).
实施例21:合成化合物N-(2,3-二氟苯基)-2-(3-((7-(4-(乙基(2-羟基乙基)氨基)丁-1-炔-1-基)喹 唑啉-4-基)氨基)-1H-吡唑-5-基)乙酰胺(化合物4)
Figure BDA0002312934370000322
目标化合物制备的方式类似于合成2-(3-((7-(4-(乙基(2-羟基乙基)氨基)丁-1-炔-1-基)喹唑 啉-4-基)氨基)-1H-吡唑-5-基)-N-(2-氟苯基)乙酰胺。以2-(3-氨基-1H-吡唑-5-基)-N-(2,3-二氟苯 基)乙酰胺和2-((4-(4-氯喹唑啉-7-基)丁-3-炔-1-基)(乙基)氨基)乙醇(III-1)为原料合成N-(2,3- 二氟苯基)-2-(3-((7-(4-(乙基(2-羟基乙基)氨基)丁-1-炔-1-基)喹唑啉-4-基)氨基)-1H-吡唑-5-基) 乙酰胺(化合物4，16.5mg，产率11％)黄色固体。LC_MS:(ES+):m/z 520.23[M+H]+.tR＝1.573 min；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ1.00(t,J＝7.2Hz,3H),2.58-2.62(m,6H),2.79(t,J＝7.2 Hz,2H),3.48-3.51(m,2H),3.85(s,2H),4.36(s,1H),6.80(s,1H),7.15-7.24(m,2H),7.51(s,1H), 7.72-7.74(m,2H),8.59(s,2H),10.24(s,1H),10.45(s,1H),12.43(s,1H).
实施例22：合成化合物2-(乙基(4-(4-((5-(2-((3-氟苯基)氨基)乙基)-1H-吡唑-3-基)氨基)喹唑啉 -7-基)丁-3-炔-1-基氨基)乙醇(化合物7)
Figure BDA0002312934370000331
目标化合物制备的方式类似于合成2-(3-((7-(4-(乙基(2-羟基乙基)氨基)丁-1-炔-1-基)喹唑 啉-4-基)氨基)-1H-吡唑-5-基)-N-(2-氟苯基)乙酰胺。以5-(2-((3-氟苯基)氨基)-乙基)-1H-吡唑-3- 胺(2-3)和2-((4-(4-氯喹唑啉-7-基)丁-3-炔-1-基)(乙基)氨基)乙醇(III-1)为起始原料合成2-(乙 基(4-(4-((5-(2-((3-氟苯基)氨基)乙基)-1H-吡唑-3-基)氨基)喹唑啉-7-基)丁-3-炔-1-基-氨基)乙醇 (化合物7，27mg,收率15％)黄色固体。LC_MS:(ES+):m/z 488.1[M+H]+.tR＝1.898min.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ1.00(t,J＝7.2Hz,3H),2.54-2.65(m,6H),2.70-2.82(m,2H),2.87 (t,J＝7.2Hz,2H),3.29-3.33(m,2H),3.44-3.54(m,2H),4.27-4.41(m,1H),6.08-6.13(m,1H), 6.27-6.32(m,1H),6.37-6.45(m,2H),6.62-6.81(m,1H),7.05-7.11(m,1H),7.51(d,J＝8.8Hz,1H), 7.70(s,1H),8.56-8.58(m,2H),10.42(s,1H),12.28(s,1H).
实施例23：合成化合物N-((3-((7-(4-(乙基(2-羟基乙基)氨基)丁-1-炔-1-基)喹唑啉-4-基)氨 基)-1H-吡唑-5-基)甲基)-3-氟苯甲酰胺(化合物9)
Figure BDA0002312934370000332
目标化合物制备的方式类似于合成2-(3-((7-(4-(乙基(2-羟基乙基)氨基)丁-1-炔-1-基)喹唑 啉-4-基)氨基)-1H-吡唑-5-基)-N-(2-氟苯基)乙酰胺。以N-((3-氨基-1H-吡唑-5-基)甲基)-3-氟苯甲 酰胺(5-1)和2-((4-(4-氯喹唑啉-7-基)丁-3-炔-1-基)(乙基)氨基)乙醇(III-1)为原料合成 N-((3-((7-(4-(乙基(2-羟基乙基)氨基)丁-1-炔-1-基)喹唑啉-4-基)氨基)-1H-吡唑-5-基)甲基)-3-氟 苯甲酰胺(化合物9)16.8mg，收率6.5％)黄色固体。LC_MS:(ES+):m/z 502.1[M+H]+.tR＝1.992 min；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ1.00(t,J＝7.0Hz,3H),2.56-2.61(m,6H),2.77-2.80(m, 2H),3.46-3.50(m,2H),4.35(t,J＝5.0Hz,1H),4.53-4.54(m,2H),6.79(br,1H),7.38-7.43(m,1H), 7.50-7.58(m,2H),7.71-7.78(m,3H),8.52-8.58(m,2H),9.15(t,J＝5.2Hz,1H),10.47-10.48(m, 1H),12.47-12.50(m,1H).
实施例24：合成化合物3-(((7-(4-(乙基(2-羟基乙基)氨基)丁-1-炔-1-基)喹唑啉-4-基)氨基)甲 基)-N-(3-氟苯基)-1H-吡唑啉-5-甲酰胺(化合物8)
Figure BDA0002312934370000341
目标化合物制备的方式类似于合成2-(3-((7-(4-(乙基(2-羟基乙基)氨基)丁-1-炔-1-基)喹唑 啉-4-基)氨基)-1H-吡唑-5-基)-N-(2-氟苯基)乙酰胺。以3-(氨基甲基)-N-(3-氟苯基)-1H-吡唑-5- 甲酰胺(7-2)和2-((4-(4-氯喹唑啉-7-基)丁-3-炔-1-基)(乙基)氨基)乙醇(III-1)为起始原料合 成3-(((7-(4-(乙基(2-羟基乙基)氨基)丁-1-炔-1-基)喹唑啉-4-基)氨基)甲基)-N-(3-氟苯基)-1H-吡 唑啉-5-甲酰胺(化合物8，22.5mg，产率13％)浅黄色固体。LC_MS:(ES+):m/z 502.2[M+H]+.tR＝1.835min；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ0.99(t,J＝7.2Hz,3H),2.55-2.60(m,6H),2.78(t, J＝7.2Hz,2H),3.44-3.48(m,2H),4.35(s,1H),4.82(d,J＝5.2Hz,2H),6.70(s,1H),6.89(t,J＝8.8 Hz,1H),7.31-7.37(m,1H),7.49(d,J＝9.2Hz,1H),7.60(s,1H),7.67(s,1H),7.74(d,J＝12Hz,1H), 8.26(d,J＝8.8Hz,1H),8.51(s,1H),8.89(t,J＝5.6Hz,1H),10.24(s,1H),13.45(s,1H).
实施例25：合成化合物2-(乙基(4-(4-((5-(2-((3-氟苯基)氨基)-2-乙氧基)-1H-吡唑-3-基)氨基)喹 唑啉-7-基)丁-3-炔-1-基)氨基)磷酸二氢乙酯(化合物10)
Figure BDA0002312934370000342
将2-(3-((7-(4-(乙基(2-羟基乙基)氨基)丁-1-炔-1-基)喹唑啉-4-基)氨基)-1H-吡唑-5- 基)-N-(3-氟苯基)乙酰胺(化合物3，50mg,0.1mmol)，四氮唑(35mg,0.5mmol)和二叔丁基二 乙基磷酰胺(125mg,0.5mmol)加入到3ml N,N-二甲基乙酰胺中，氮气保护下20℃搅拌过 夜。加入过氧化氢(60mg,0.5mmol)，所得到的混合物在20℃下再搅拌2小时。向反应液中 加入30ml水和30ml乙酸乙酯。收集有机层，用50ml水洗涤，无水硫酸钠干燥,减压浓缩 得粗品，通过硅胶柱层析(含5％甲醇的二氯甲烷)纯化得到二叔丁基(2-(乙基(4-(4-((5-(2-((3- 氟苯基)氨基)-2-乙氧基)-1H-吡唑-3-基)氨基)喹唑啉-7-基)丁-3-炔-1-基)氨基)乙基)磷酸酯(16 mg，收率23％)，产品为淡黄色固体。LC_MS:(ES+):m/z 694.3[M+H]+.tR＝2.189min.
将二叔丁基(2-(乙基(4-(4-((5-(2-((3-氟苯基)氨基)-2-乙氧基)-1H-吡唑-3-基)氨基)喹唑啉-7- 基)丁-3-炔-1-基)氨基)乙基)磷酸酯(16mg,0.023mmol)溶于入3ml二氧六环中，加入0.2ml 4M盐酸二氧六环溶液。氮气保护下20℃搅拌过夜。反应液浓缩，用高效液相色谱法制备 得到目标化合物10(5mg，收率37％)，黄色固体。LC_MS:(ES+):m/z582.3[M+H]+.tR＝1.712 min.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ1.26(t,J＝7.2Hz,3H),3.03(t,J＝7.2Hz,2H),3.27-3.32 (m,2H),3.44-3.47(m,4H),3.78(s,2H),4.15-4.19(m,2H),6.73(s,1H),6.87-6.93(m,1H), 7.30-7.33(m,1H),7.35-7.39(m,1H),7.60-7.66(m,2H),7.81(s,1H),8.68(d,J＝8.8Hz,1H),8.74 (s,1H),10.47(s,1H),11.10(br,1H).
实施例26：合成化合物2-((4-(4-((5-(2-((2,3-二氟苯基)氨基)-2-氧乙基)-1H-吡唑-3-基)氨基)喹 唑啉-7-基)丁-3-炔-1-基)(乙基)氨基)磷酸二氢乙酯(化合物11)
Figure BDA0002312934370000351
目标化合物制备的方式类似于合成2-(乙基(4-(4-((5-(2-((3-氟苯基)氨基)-2-乙氧基)-1H-吡 唑-3-基)氨基)喹唑啉-7-基)丁-3-炔-1-基)氨基)磷酸二氢乙酯。以N-(2,3-二氟苯 基)-2-(3-((7-(4-(乙基(2-羟基乙基)氨基)丁-1-炔-1-基)喹唑啉-4-基)氨基)-1H-吡唑-5-基)乙酰胺 为原料2-((4-(4-((5-(2-((2,3-二氟苯基)氨基)-2-氧乙基)-1H-吡唑-3-基)氨基)喹唑啉-7-基)丁-3-炔 -1-基)(乙基)氨基)磷酸二氢乙酯黄色固体(化合物11，35毫克，收率69％)。LC_MS:(ES+):m/z 600.1[M+H]+.tR＝1.645min.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ1.27(t,J＝7.0Hz,3H),3.06(t,J ＝7.2Hz,2H),3.29-3.34(m,2H),3.44-3.52(m,4H),3.91(s,2H),4.16-4.24(m,2H),6.78(s,1H), 7.17-7.22(m,2H),7.69-7.72(m,1H),7.77(d,J＝8.8Hz,1H),7.85(s,1H),8.78(d,J＝8.4Hz,1H), 8.91(s,1H),10.30(s,1H),11.78(br,1H).
实施例27：合成化合物2-(乙基(4-(4-((5-(2-((2-氟苯基)氨基)-2-乙氧基)-1H-吡唑-3-基)氨基)喹 唑啉-7-基)丁-3-炔-1-基)氨基)磷酸二氢乙酯(化合物12)
Figure BDA0002312934370000361
目标化合物制备的方式类似于合成2-(乙基(4-(4-((5-(2-((3-氟苯基)氨基)-2-乙氧基)-1H-吡 唑-3-基)氨基)喹唑啉-7-基)丁-3-炔-1-基)氨基)磷酸二氢乙酯。以2-(3-((7-(4-(乙基(2-羟基乙基) 氨基)丁-1-炔-1-基)喹唑啉-4-基)氨基)-1H-吡唑-5-基)-N-(2-氟苯基)乙酰胺为原料合成2-(乙基 (4-(4-((5-(2-((2-氟苯基)氨基)-2-乙氧基)-1H-吡唑-3-基)氨基)喹唑啉-7-基)丁-3-炔-1-基)氨基)磷 酸二氢乙酯黄色固体化合物(化合物12，30mg，收率70％)。LC_MS:(ES+):m/z 582.2[M+H]+. tR＝1.318min.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ1.27(t,J＝7.0Hz,3H),3.06(t,J＝7.4Hz,2H), 3.29-3.34(m,2H),3.46-3.50(m,4H),3.89(s,2H),4.17-4.22(m,2H),6.78(s,1H),7.16-7.21(m, 2H),7.25-7.29(m,1H),7.78(d,J＝8.4Hz,1H),7.84(s,1H),7.89-7.93(m,1H),8.78(d,J＝8.8Hz, 1H),8.92(s,1H),10.07(s,1H),11.87(br,1H).
化合物I-a的合成路线
Figure BDA0002312934370000362
该路线中，各取代基的定义同前文。
实施例28：合成化合物2-(3-((7-(4-(乙基(2-羟基乙基)氨基)丁-1-烯-1-基)喹唑啉-4-基) 氨基)-1H-吡唑-5-基)-N-(3-氟苯基)乙酰胺(化合物1)
Figure BDA0002312934370000371
将2-(3-氨基-1H-吡唑-5-基)-N-(3-氟苯基)乙酰胺(2-2，161mg,0.688mmol)和4-氯-7-碘喹 唑啉(1-4，200mg,0.688mmol)加入4ml异丙醇中，氮气保护下加热至90℃搅拌1小时。过 滤收集固体沉淀物，滤饼在10ml含10％氨水的甲醇中搅拌10分钟。过滤，滤饼干燥得N-(3- 氟苯)-2-(3-((7-碘喹唑啉-4-基)氨基)-1H-吡唑-5-基)乙酰胺(III-a,140mg，收率42％)为白色固 体。LC_MS:(ES+):m/z 489.3[M+H]+.tR＝2.270min.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ3.77(s, 2H),6.80(s,1H),6.87-6.91(m,1H),7.31-7.39(m,2H),7.60-7.64(m,1H),7.86-7.88(m,1H),8.16 (s,1H),8.40-8.42(m,1H),8.58(s,1H),10.45(s,1H),10.52(s,1H),12.45(s,1H)。
将N-(3-氟苯)-2-(3-((7-碘喹唑啉-4-基)氨基)-1H-吡唑-5-基)乙酰胺(III-a,70mg,0.14mmol) 和(E)-2-(乙基(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二恶硼烷-2-基)叔-3-烯-1-基)氨基)乙醇(V-2,154mg,0.57 mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(2mL)-水(0.5mL)中，室温加入碳酸钾(76mg,0.358mmol) 和[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(10mg,0.014mmol)，氮气保护下升 至90℃反应4h。反应液冷至室温，加入20ml水和20ml乙酸乙酯，收集有机层，用20mL 盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗残渣，经硅胶柱层析(含10％甲醇的二氯甲烷) 纯化得到杂质较少的产品。采用预薄层色谱法(含10％甲醇和1％氨水的二氯甲烷)对产物进 行进一步纯化，得2-(3-((7-(4-(乙基(2-羟基乙基)氨基)丁-1-烯-1-基)喹唑啉-4-基)氨基)-1H-吡唑 -5-基)-N-(3-氟苯基)乙酰胺(13mg，收率18％)，产品为黄色固体。LC_MS:(ES+):m/z 504.5 [M+H]+.tR＝1.603min.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ1.24-1.27(m,3H),2.67-2.64(m,2H), 3.23-3.33(m,6H),3.69-3.84(m,4H),6.56-6.62(m,1H),6.67-6.83(m,2H),,6.86-6.91(m,1H), 7.32-7.37(m,2H),7.60-7.64(m,1H),7.67-7.77(m,2H),8.57(s,2H),9.51(s,1H),10.39(s,1H), 10.52(s,1H),12.45(s,1H).
实施例29：生物活性测试
一、Aurora酶活性抑制实验
使用Reaction Biology Corporation对Aurora A和B的抑制活性进行测定。将激酶与底物，100μM ATP和从1μM开始的抑制剂化合物的3倍系列稀释液一起孵育。DMSO用作对照。 遵循制造商的建议，使用ADP-GloTM激酶测定系统(Promega，麦迪逊，威斯康星州) 对激酶活性进行定量。使用下述级别：对于IC50而言，I≤10nM,10nM<II≤100nM,100 nM<III<1μM,IV≥1μM,具体结果见表1。
表1：Aurora酶活性抑制结果
化合物编号 AuroraA AuroraB
Barasertib III II
1 II I
2 II I
3 II II
4 II I
5 III II
6 III II
7 IV II
8 III III
9 I II
10 I I
11 II II
12 III III
Barasertib的结构式如下：
Figure BDA0002312934370000381
二、癌细胞组蛋白H3磷酸化抑制实验及对人正常心肌细胞系Histone磷酸化的影响分析实 验
在转移性SW620结肠癌，U87MG胶质瘤，A375皮肤恶性黑色素瘤，SH-SY5Y神经母细胞瘤或AC16人心肌细胞系中测试了根据本发明的一些抑制剂和Barasertib对蛋白质表达的 影响。通过蛋白印迹法(Western blotting)检测反应标记，使用比色检测法测定肿瘤裂解物的 蛋白浓度。使用含100mM PMSF蛋白酶抑制剂(Beyotime，ST506-2)的RIPA缓冲液(Beyotime， P0013)制备总蛋白提取物。在SDS-PAGE凝胶的每条泳道上装载25微克蛋白。通过凝胶电 泳法分离蛋白，印渍于硝基纤维素膜上，并使用抗组蛋白H3和抗磷酸化组蛋白H3抗体(均 来自Cell Signaling Technology)探测。代表性抑制剂对SW620组蛋白H3磷酸化的抑制结果见 图1，代表性抑制剂对AC16人心肌细胞组蛋白Histone磷酸化的影响结果见图2。
三、细胞周期分析实验
碘化丙啶(PI)化学计量地与双链DNA结合，因此基于细胞DNA含量适于测定细胞周期 的G1、S和G2/M期中的细胞比例。G0和G1期中的细胞具有二倍体DNA(2N)含量，而 G2或有丝分裂期中的细胞具有四倍体DNA(4N)含量。
对于PI染色，将3.0×104cells/mL密度的转移性SW620结肠癌，U87MG胶质瘤，A375皮肤恶性黑色素瘤或SH-SY5Y神经母细胞瘤细胞接种，12小时后或将0.1％DMSO加入作为对照或将根据本发明的一些具体抑制剂和对照抑制剂Barasertib以各种浓度(在0.1％DMSO 中)加入。将细胞与抑制剂或与DMSO一起孵育24小时。然后将细胞以胰蛋白酶分离，并离心。细胞沉淀以缓冲盐溶液(PBS)洗涤，缓慢加入70％冰浴预冷无水乙醇，轻轻吹打混匀，4℃固定2小时或-20℃固定1小时。再以PBS洗涤后，与碘化丙啶和RNA酶的9∶1溶 液一起在黑暗中孵育至少20分钟。DNA测定在具有氩激光(500mW，发射波长488nm) 的BectonDickinson FACS Analyzer中完成；得到的数据以FlowJo software(Flowjo,LLC,Ashland,OR)评价。代表性抑制剂对U87-MG细胞多倍性的影响见图2。
以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想。应当指出，对于本 技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干 改进和修饰，这些改进和修饰也落入本发明权利要求的保护范围内。

Claims (6)

1.具有式(I-a)或(I-b)所示结构的含喹唑啉类化合物或者其药学上可接受的盐，
Figure FDA0003555967010000011
其中：
R1为氢；
R2为选自氢，卤素或C1-6烷基的基团；
R3为选自氢或卤素中的一个或多个基团，在所述通式(I-a)或(I-b)的与L2连接的苯环上与L2相间的位置为F；
R6为选自氢，卤素或C1-6烷基的基团；
p选自1、2、3、4、5或6；
s选自0、1、2、3、4或5；
n为1；m为0；
L2为-NHC(O)-或-C(O)NH-；
R4和R5独立地选自氢、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、甲氧基、乙氧基、羟基取代甲基、羟基取代乙基、羟基取代异丙基、膦酰氧基甲基、膦酰氧基乙基、乙烯基、乙炔基、乙烯基甲基、乙炔基甲基、甲氧基乙基、甲氧基丙基、三氟甲基甲基、三氟甲基乙基、环丙基甲基、环丙基乙基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、苯基、羟基取代苯基、氯代苯基、甲基取代苯基，且R4和R5不同时为氢或烷基；
当所述的p大于等于2时，所述通式(I-a)或(I-b)上相应的亚烷基还可选择地被一个或多个相同或不同的第七取代基取代，所述的第七取代基选自C1-6烷基、C3-8环烷基。
2.根据权利要求1所述的含喹唑啉类化合物或者其药学上可接受的盐，其特征在于：R2、R6独立地选自氢、甲基、乙基、氟、氯。
3.根据权利要求1或2所述的所述的含喹唑啉类化合物或者其药学上可接受的盐，其特征在于：R4和R5中的一个是氢、甲基、乙基、丙基、异丙基或丁基，另一个是羟基取代甲基、羟基取代乙基、羟基取代异丙基、膦酰氧基甲基、膦酰氧基乙基、膦酰氧基异丙基、羟基取代苯基。
4.根据权利要求1所述的含喹唑啉类化合物或者其药学上可接受的盐，其特征在于：所述含喹唑啉类化合物为选自如下结构所示化合物：
Figure FDA0003555967010000021
Figure FDA0003555967010000031
Figure FDA0003555967010000041
Figure FDA0003555967010000051
Figure FDA0003555967010000061
5.如权利要求1至4中任一项权利要求所述的含喹唑啉类化合物或者其药学上可接受的盐在制备预防和/或治疗由极光激酶介导的疾病的药物中的应用。
6.一种药物组合物，其特征在于：包括一种或多种如权利要求1至4中任一项权利要求所述的含喹唑啉类化合物或者其药学上可接受的盐，以及药学可接受的载体。
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