CN116286413A - 一株酱油上色和产香的近玫色锁掷孢酵母及其应用 - Google Patents

一株酱油上色和产香的近玫色锁掷孢酵母及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一株酱油上色和产香的近玫色锁掷孢酵母及其应用，近玫色锁掷孢酵母(Sporidioboluspararoseus)GT_A3，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期为2022年12月23日，保藏编号为CCTCCNo:M20222010，保藏地址为中国·武汉·武汉大学，能耐受16％的NaCl，对酱油环境造成的盐胁迫有一定的抵抗能力；能够产生40mg/L类胡萝卜素，制作成发酵剂可以明显提升酱油色泽，使酱油呈现鲜亮的红褐色；并且发酵剂加入提升了酱油的酱香和酯香气，改善了传统酱油发酵风味不足的问题，将其作为发酵菌株应用于酱油发酵生产领域具有广阔前景。

Description

一株酱油上色和产香的近玫色锁掷孢酵母及其应用
技术领域
本发明属于微生物领域，具体涉及到一株酱油上色和产香的近玫色锁掷孢酵母及其应用。
背景技术
酱油是中国传统发酵调味品，由大豆、小麦等原材料蒸煮后经长时间发酵制成。酱油品质与发酵过程中的微生物群落有重要联系。优质酱油能显著提升菜品的色、香、味，增加适口性。
酱油的颜色对菜品成色有显著影响，发酵过程中的酶促褐变、非酶促褐变可以使酱油颜色变深，但是却不能带来红色。
目前，尚无通过产红色素的酿造微生物增加酱油的红色，并在一定程度上提升酱油的风味的报道。
发明内容
本部分的目的在于概述本发明的实施例的一些方面以及简要介绍一些较佳实施例。在本部分以及本申请的说明书摘要和发明名称中可能会做些简化或省略以避免使本部分、说明书摘要和发明名称的目的模糊，而这种简化或省略不能用于限制本发明的范围。
鉴于上述和/或现有技术中存在的问题，提出了本发明。
因此，本发明的目的是，克服现有技术中的不足，提供一株酱油上色和产香的近玫色锁掷孢酵母。
为解决上述技术问题，本发明提供了如下技术方案：一株酱油上色和产香的近玫色锁掷孢酵母：近玫色锁掷孢酵母(Sporidioboluspararoseus)GT_A3，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期为2022年12月23日，保藏编号为CCTCC No:M 20222010，保藏地址为中国·武汉·武汉大学。
作为本发明所述近玫色锁掷孢酵母的一种优选方案，其中：所述近玫色锁掷孢酵母耐16％NaCl。
作为本发明所述近玫色锁掷孢酵母的一种优选方案，其中：所述近玫色锁掷孢酵母在添加4％NaCl溶液的改良YPD培养基培养，产生脂溶性红色素。
作为本发明所述近玫色锁掷孢酵母的一种优选方案，其中：所述改良YPD培养基培养，其成分包括4％葡萄糖、1.5％硫酸铵、0.1％硫酸镁、0.05％酵母抽提物和0.2％磷酸二氢钾，其体系pH＝6.0。
本发明的再一个目的是，克服现有技术中的不足，提供近玫色锁掷孢酵母(Sporidioboluspararoseus)GT_A3在制备深红高鲜发酵酱油中的应用。
作为本发明所述应用的一种优选方案，其中：包括，将所述近玫色锁掷孢酵母制备成着色增香发酵剂；
在酱油发酵过程中添加所述着色增香发酵剂，加深酱油红色及提升风味。
作为本发明所述应用的一种优选方案，其中：所述着色增香发酵剂，其制备方法包括，
将活化的菌株以2％v/v接种量接种到YPD培养基中，30℃有氧培养制成种子液；
将种子液以2％v/v接种量接种到含4％NaCl w/v改良YPD发酵罐中30℃培养120h，通入氧气量30-50m3空气/m3发酵液/h，酵母液泵入真空转鼓过滤器，抽成含水量35-38％的酵母乳，使用超声破碎机破碎，破碎液离心收集沉淀，真空冷冻干燥至全干，制成着色剂；
将种子液接种到含有4％NaCl w/v的YPD培养基中培养120h，每12h搅动30min，通入氧气量10-20m3空气/m3发酵液/h；酵母液泵入真空转鼓过滤器，抽成含水量35-38％的酵母乳，流加乳化剂与酵母乳混合后通过造粒机，挤压成细长条，干燥得到增香酵母粒；
将得到的着色剂和得到的增香酵母粒混合均匀，使用真空铝箔进行包装，制得着色增香发酵剂。
作为本发明所述应用的一种优选方案，其中：所述着色剂和增香酵母粒的质量比为2～4:6。
作为本发明所述应用的一种优选方案，其中：所述乳化剂包括单、双甘油脂肪酸酯、果胶、卡拉胶、磷脂、柠檬酸脂肪酸甘油酯、乳酸脂肪酸甘油酯、乳糖醇(4-β-D吡喃半乳糖-D-山梨醇)、辛烯基琥珀酸淀粉钠,改性大豆磷脂、甘油(丙三醇)、酶解大豆磷脂、羟丙基淀粉、乙酰化单甘油脂肪酸酯、乙酰化双甘油脂肪酸酯、山梨醇酐单月桂酸酯、山梨醇酐单棕榈酸酯、山梨醇酐单硬脂酸酯、山梨醇酐三硬脂酸酯、山梨醇酐单油酸酯中的一种或组合。
本发明有益效果：
本发明首次提出一种近玫色锁掷孢酵母(Sporidioboluspararoseus)GT_A3，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期为2022年12月23日，保藏编号为CCTCC No:M20222010，保藏地址为中国·武汉·武汉大学，该菌株耐16％NaCl，应用于酱油发酵，能够加深酱油红色及提升风味；
该菌株能耐受16％的NaCl，对酱油环境造成的盐胁迫有一定的抵抗能力；能够产生40mg/L类胡萝卜素，制作成发酵剂可以明显提升酱油色泽，使酱油呈现鲜亮的红褐色；并且发酵剂加入提升了酱油的酱香和酯香气，改善了固态发酵风味不足的问题，将其作为发酵菌株应用于酱油发酵生产领域具有广阔前景。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图。其中：
图1为本发明实施例中近玫色锁掷孢酵母在YPD营养琼脂上的菌落形态图及光学显微镜镜检图。
图2为本发明实施例中近玫色锁掷孢酵母耐盐生长柱状图。
图3为本发明实施例中近玫色锁掷孢酵母盐胁迫下电镜图。
图4为本发明实施例中近玫色锁掷孢酵母盐胁迫下色素差异图。
图5为本发明实施例中酱油发酵感官评价雷达图。
具体实施方式
为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合说明书实施例对本发明的具体实施方式做详细的说明。
在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明，但是本发明还可以采用其他不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似推广，因此本发明不受下面公开的具体实施例的限制。
其次，此处所称的“一个实施例”或“实施例”是指可包含于本发明至少一个实现方式中的特定特征、结构或特性。在本说明书中不同地方出现的“在一个实施例中”并非均指同一个实施例，也不是单独的或选择性的与其他实施例互相排斥的实施例。
本发明的近玫色锁掷孢酵母(Sporidioboluspararoseus)GT_A3，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期为2022年12月23日，保藏编号为CCTCC No:M20222010，保藏地址为中国·武汉·武汉大学。
实施例1：近玫色锁掷孢酵母的分离
所用酱醪来自实验室自酿陈年酱油，采用五点法取样，充分混匀后置于无菌EP管中并存放于-80℃冰箱。
无菌条件下称取-80℃保存的酱油样品5.0g，与45mL无菌生理盐水混合，与摇床中振荡2h，使微生物细胞分散，制成10-1稀释度的稀释液，并进行系列梯度稀释。
分别取0.1mL稀释度为10-3、10-4和10-5的稀释液接种到YPD营养琼脂培养基中，涂布后将平板分别置于30℃培养箱中培养48h，观察并挑取产生色素的菌落，并进行反复划线纯化得到纯种菌株。进行甘油管保存，在无菌环境下将菌液与50％的甘油按照1：1混合均匀，保存于-80℃冰箱中。
保存的菌株活化三次后进行生理生化实验。
观察并记录菌落形态，菌落的大小、颜色、形状，菌落边缘、凸起情况，如图1。
挑取的菌落颜色呈现橘色；外形以圆形为主，表面湿润，粘稠，易挑起，表面光滑，产生掷孢子。筛选出的菌株不能发酵半乳糖、麦芽糖、蔗糖、海藻糖、蜜二糖、乳糖、纤维二糖；可以同化葡萄糖，半乳糖、山梨糖、核糖、木糖、L-阿拉伯糖、D-阿拉伯糖、蔗糖、麦芽糖、海藻糖、纤维二糖。最适生长温度30±2℃，最高温度45℃。
其中，菌株活化步骤：将冻存在-80℃的2mL菌液，倒入100mLYPD营养肉汤中，30℃摇床120rpm培养48h，随后将培养好的菌液按照2％的比例接入到100mL新鲜YPD营养肉汤中，30℃摇床120rpm培养至OD 600＝0.7，视为完成活化。
菌落形态观察：已活化的菌株，在YPD营养琼脂上进行平板划线，30℃恒温培养箱培养48h，观察菌落形态。
实施例2：近玫色锁掷孢酵母的分子生物学鉴定
挑取小米粒大小的菌落(克隆直径为0.1-0.3cm大小)至TE溶液中，尽量避免挑取任何固体培养基。
添加100μL TE溶液，充分重悬沉淀，再添加20μL溶菌酶、10μL RNaseA，充分混匀，37℃孵育2.5小时，每隔30分钟摇匀一次。添加100μL LYS溶液(55℃提前预热)，轻轻吹打混匀。
再添加20μL蛋白酶K溶液，充分混匀。
55℃孵育30分钟。添加220μL EXT溶液。
颠倒数次直至混匀，10,000×g离心5分钟。
转移上清至新的1.5mL EP管中，添加220μL无水乙醇。颠倒数次直至混匀。将DNA离心柱装入2mL收集管中，将样品全部转移到DNA离心柱中，10,000×g离心1分钟。弃离心废液，将DNA离心柱重新装入2mL收集管中。
添加500μLPD溶液，10,000×g离心1分钟，弃废液，将DNA离心柱重新装入2mL收集管中。
添加600μL PW溶液，10,000×g离心1分钟，弃废液。
将DNA离心柱重新装入2mL收集管中，重复这一步骤。
12,000rpm离心2分钟。
将DNA离心柱重新装入干净的1.5mL EP管中，室温晾干5分钟。添加50-100μLElution Buffer或水至DNA离心柱中。室温静置3～5分钟。12,000rpm离心2分钟，收集基因组DNA。
DNA放置-20℃储存。通用引物：ITS1:TCCGTAGGTGAACCTGCGG；ITS4:TCCTCCGCTTATTGATATGC。提取的DNA样品适量稀释后作为PCR模板，以擎科1×TSE101金牌mix进行扩增。用ContigExpress拼接测序结果，并去除两端不准的部分。将拼接好的序列在NCBI数据库(blast.ncbi.nlm.nih.gov)中进行比对，鉴定结果为近玫色锁掷孢酵母。
本发明中近玫色锁掷孢酵母(Sporidioboluspararoseus)GT_A3的核苷酸序列(Seq_1)：
TATGCTTAAGTTCAGCGGGTAATCCTGCCTGATTTGAGATCTAATCAAAAGGTAGACTTTTAAATTAGGAGCTTCCTTAATGAAGTTGGCTCGATGTTTCCACCGAATCCTTAGCGAATAGTCTATTACGCCAAGTCAATCCAAACTTGTATTAGGGATGCTAATGTATTACGAACGAGCTAGGCAAACGCCAGCAACGCTCAGAATCCAAACACCAATCGATTACAAGAAAAGATTGGGTTGAAGAATTCATGACACTCAAACAGACATGCTCTCCGGAATACCAGAGAGCGCAAGATGCGT TCAAAGATTCGATGATTCACTGAATTCTGCAATTCACATTACGTATCGCATTTCGCTGCGTTCTTCATCGATGCGAGAGCCAAGAGATCCGTTGTTGAAAGTTTTTATTTGTTATAAAAATTTTACATTCATAGACTAGTGTTTTGTAAGTGAAGGCTCACAACCGAAGTTGCTCGCCATTAATACAGATGCACAAAGTTAGAATTGAGAAGTTTGGGTTCCAAGTTAAATTGGACACCCTTGTTTTCAATAATGATCCTTCCGCA
实施例3：近玫色锁掷孢酵母耐盐性测定
研究在盐渗透环境中的生长情况。
将活化的菌株以2％接种量接种到含0％、4％、8％、12％、16％、20％NaCl(w/v)的YPD营养肉汤，30℃培养120h，培养液离心收集菌体，55℃烘箱烘干24h至恒重，用干重反映生物量，并对盐胁迫下酵母菌进行扫描电镜观察。
测定结果如图2，非盐胁迫生物量最高达到0.2500g/100mL；盐胁迫下，GT_A3在4％NaCl中生物量最高达到0.1780g/100mL。最高耐受16％NaCl，生物量仅有0.00218g/100mL，20％NaCl生物量近乎为0。电镜结果如图3，4％盐胁迫下酵母菌形态依旧为饱满椭球型，而16％盐胁迫时收集到的酵母表面严重皱缩失水。
其中，菌株活化步骤：将冻存在-80℃的2mL菌液，倒入100mLYPD营养肉汤中，30℃摇床120rpm培养48h，随后将培养好的菌液按照2％的比例接入到100mL新鲜YPD营养肉汤中，30℃摇床120rpm培养至OD 600＝0.7，视为完成活化。
YPD培养基成分为：2％大豆蛋白胨，2％葡萄糖，1％酵母粉。
电镜样品制备：从发酵液吸取体积为2mL的菌液于离心管中并在转速为5000rpm下离心收集菌体，同时用无菌水清洗菌体；之后用2.5％的戊二醛溶液将菌体进行固定(4℃过夜)，随后再用戊二醛清洗2次菌体；
紧接着用梯度浓度(30％，50％，70％，80％，90％，100％体积浓度)的乙醇溶液对菌体进行脱水处理，每次脱水10min，其中100％乙醇进行两次，脱水后进行冷冻干燥。取适量菌体粘于样品台上，使用离子溅射仪为样品镀导电金膜，扫描电子显微镜在3000×和10,000×的放大倍数下进行观察。
实施例4：近玫色锁掷孢酵母产生色素能力比较
研究产生色素能力：
将活化的菌株以2％(v/v)接种量接种到含0％、4％NaCl(w/v)的YPD、改良YPD的营养肉汤中，30℃培养120h，培养液离心收集菌体，加入少量无菌水重悬，使用高压破碎机破碎细胞，收集的破碎液。
准确称取5g～10g(精确至0.001g)，置于250mL锥形瓶中。加入100mL石油醚，轻轻摇动，排气，盖好瓶塞，室温下振荡10min后静置分层，将水相转入另一分液漏斗中按上述方法进行第二次提取。合并有机相。滤液收入500mL蒸发瓶中，于旋转蒸发器上40℃±2℃减压浓缩，近干。
用氮气吹干，用移液管准确加入5.0mL二氯甲烷，盖上瓶塞，充分溶解取物。经0.45μm膜过滤后，弃出初始约1mL滤液后收集至进样瓶中备用。
观察结果如图4，0％、4％NaCl的YPD培养物成橘色，4％颜色最深；0％、4％NaCl的改良YPD培养物成橘红色，且4％红色更加明显。4％NaCl的改良YPD可以产生类胡萝卜素1000.64μg/g。
其中，菌株活化步骤：将冻存在-80℃的2mL菌液，倒入100mLYPD营养肉汤中，30℃摇床120rpm培养48h，随后将培养好的菌液按照2％的比例接入到100mL新鲜YPD营养肉汤中，30℃摇床120rpm培养至OD 600＝0.7，视为完成活化。
YPD培养基成分为：2％大豆蛋白胨，2％葡萄糖，1％酵母粉。
改良YPD的成分为：4％葡萄糖，1.5％硫酸铵，0.1％硫酸镁，0.05％酵母抽提物，0.2％磷酸二氢钾，pH＝6.0。灭菌后与无菌PBS缓冲液(磷酸盐缓冲液)混合使培养基pH＝6.0。
类胡萝卜素使用高效液相色谱进行测定。
色谱柱条件：a)色谱柱：C30柱，柱长150mm，内径4.6mm，粒径5μm，或等效柱；b)流动相：A相：甲醇：乙腈：水＝73.5:24.5:2；B相：甲基叔丁基醚；梯度洗脱；c)流速：1.0mL/min；d)检测波长：450nm；e)柱温：30℃±1℃；f)进样体积：10μL。
实施例5：着色增香发酵剂制备
(1)种子液：将活化的菌株以2％(v/v)接种量接种到YPD中，30℃有氧培养120h制成种子液。
(2)着色剂：将种子液以2％(v/v)接种量接种到含4％NaCl(w/v)改良YPD发酵罐中30℃培养120h，通入氧气量30-50m3空气/m3发酵液/h。
酵母液泵入真空转鼓过滤器，抽成含水量35-38％的酵母乳。使用超声破碎机破碎，破碎液离心收集沉淀，真空冷冻干燥24h至全干，制成着色剂，全程尽可能避光，阴凉干燥备用。
(3)增香酵母粒：将种子液接种到含有4％NaCl(w/v)的YPD肉汤中培养120h，每12h搅动30min，通入氧气量10-20m3空气/m3发酵液/h。酵母液泵入真空转鼓过滤器，抽成含水量35-38％的酵母乳。流加乳化剂(山梨醇酐单硬脂酸酯(司盘60)添加量3.0(g/kg))与酵母乳混合后通过造粒机，挤压成直径0.5mm细长条，进入沸腾干燥床干燥得到增香酵母粒。
(6)着色增香发酵剂：将步骤(2)得到的着色剂和步骤(3)得到的干燥的酵母颗粒按照4:6(M/M)混合均匀，使用真空铝箔进行包装。
购买的拟粉红锁掷孢酵母Sporidioboluspararoseus(CICC 33387)，按照(1)-(6)相同步骤制备成对照着色增香发酵剂。
其中，菌株活化步骤：将冻存在-80℃的2mL菌液，倒入100mLYPD营养肉汤中，30℃摇床120rpm培养48h，随后将培养好的菌液按照2％的比例接入到100mL新鲜YPD营养肉汤中，30℃摇床120rpm培养至OD 600＝0.7，视为完成活化。
改良YPD的成分为：4％葡萄糖，1.5％硫酸铵，0.1％硫酸镁，0.05％酵母抽提物，0.2％磷酸二氢钾，pH＝6.0。灭菌后与无菌PBS缓冲液(磷酸盐缓冲液)混合使培养基pH＝6.0。
实施例6：深红高鲜酱油发酵
将大豆浸泡4h后与炒小麦一起进行高压蒸汽灭菌，连续通蒸汽10min，然后保持高压(0.8MPa)20min。待温度降至37℃后，在原料中添加0.3％的种曲，30℃培养。第8h、12h进行翻曲，36h后制成大曲。将大曲和12％(w：v)NaCl溶液按1：1.1混合，开始盐水发酵。
发酵40天时加入实施例4制备的着色增香发酵剂，添加比例0.3％(按干物质质量计)，再封池发酵30天，作为实验组。
同时设置对照组：按照上述方法发酵40天时添加实施例4所述的对照着色增香发酵剂，再封池发酵30天。
经检测，实验组酱油红色指数为4.85，表明酱油红色比较显著，黄色指数7.68，红色指数与黄色指数间成正相关，比例协调菜品颜色鲜亮不发乌。同时，色深物质低于对照组，含量为10.78，酱油呈明显的红褐色，而对照组褐色更明显。
经检测，与对照组相比，实验组检测出了更多物质，正己醇、正辛醇、橙花醇、2-戊酮、大马酮、2-壬酮、乙酸异戊酯、丁酸丁酯，这些物质为酱油增加了花香、果香。乙酸乙酯、苯乙酸乙酯的增加促使酱油的整体风味更浓郁、柔和。4-酱油酮、乙烯基愈创木酚、4-乙基苯酚的增加，提升了酱油特征性焦糖、香料、烟熏风味。
感官评价结果如图5，实验组红褐色明显，色泽鲜艳，更有光泽，对照组褐色更明显，色泽较暗淡。实验组果香、甜香、烟熏香得到提升，整体表现出更浓郁的酱香，且增加了酯香气。
表1酱油颜色指数
Figure BDA0004095362300000091
表2酱油挥发性风味物质表
Figure BDA0004095362300000092
Figure BDA0004095362300000101
取70天后样品，用8层纱布过滤获得酱油，加入蒸馏水10倍稀释后在不同波长下测定OD值，计算红色指数、黄色指数和色深物质。
利用顶空固相微萃取(Headspace solid phase microextraction,HS-SPME)和气相色谱质谱联用仪(Gas chromatographic mass spectrometry,GC-MS)检测实验组和对照组的挥发性风味物质。取70天后样品，用8层纱布过滤，3mL滤液置于顶空瓶中，并加入20ppm2-辛醇标准品30uL。HS-SPME：密封顶空瓶后在加热磁力搅拌器上，60℃水浴平衡20min。平衡后，取头顶空萃取30min，温度为60℃，GC-MS进样250℃解吸15min。GC条件：起始温度为40℃保持3min，以4℃/min上升到150℃保持1min，再以8℃/min上升到250℃保持6min。以氦气为载气，进样口温度为250℃，进样时间1min。MS条件：离子源温度200℃，接口温度220℃，溶剂延迟时间1.5min，电离方式为EI，70eV扫描质量范围为33～500m/z，扫描速率为3.00scans/s。根据NIST11数据库检索选取相似度≥80％的化合物，并结合离子碎片及保留指数进行定性。以2-辛醇为内标物质,采用内标法进行定量。
参照GB/T 18186-2000，制定了酿造酱油感官评价表。然后选择了10名训练有素的小组成员来评估酱油样本的色泽和风味香气。并且团队成员在正式的感官评估之前接受了多次训练，训练包括定义和描述。取混合均匀的适量试样置于直径60mm～90mm的白色瓷盘中，在自然光线下观察色泽和状态，闻其气味。
应说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。

Claims (9)

1.近玫色锁掷孢酵母(Sporidioboluspararoseus)GT_A3，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期为2022年12月23日，保藏编号为CCTCC No:M20222010，保藏地址为中国·武汉·武汉大学。
2.如权利要求1所述的近玫色锁掷孢酵母，其特征在于：所述近玫色锁掷孢酵母耐16％NaCl。
3.如权利要求1所述的近玫色锁掷孢酵母，其特征在于：所述近玫色锁掷孢酵母在添加4％NaCl溶液的改良YPD培养基培养，产生脂溶性红色素。
4.如权利要求1所述的近玫色锁掷孢酵母，其特征在于：所述改良YPD培养基培养，其成分包括4％葡萄糖、1.5％硫酸铵、0.1％硫酸镁、0.05％酵母抽提物和0.2％磷酸二氢钾，其体系pH＝6.0。
5.权利要求1～4中任一所述的近玫色锁掷孢酵母在制备深红高鲜发酵酱油中的应用。
6.如权利要求5所述的应用，其特征在于：包括，将所述近玫色锁掷孢酵母制备成着色增香发酵剂；
在酱油发酵过程中添加所述着色增香发酵剂，加深酱油红色及提升风味。
7.如权利要求6所述的应用，其特征在于：所述着色增香发酵剂，其制备方法包括，
将活化的菌株以2％v/v接种量接种到YPD培养基中，30℃有氧培养制成种子液；
将种子液以2％v/v接种量接种到含4％NaClw/v改良YPD发酵罐中30℃培养120h，通入氧气量30-50m3空气/m3发酵液/h，酵母液泵入真空转鼓过滤器，抽成含水量35-38％的酵母乳，使用超声破碎机破碎，破碎液离心收集沉淀，真空冷冻干燥至全干，制成着色剂；
将种子液接种到含有4％NaClw/v的YPD培养基中培养120h，每12h搅动30min，通入氧气量10-20m3空气/m3发酵液/h；酵母液泵入真空转鼓过滤器，抽成含水量35-38％的酵母乳，流加乳化剂与酵母乳混合后通过造粒机，挤压成细长条，干燥得到增香酵母粒；
将得到的着色剂和得到的增香酵母粒混合均匀，使用真空铝箔进行包装，制得着色增香发酵剂。
8.如权利要求6所述的应用，其特征在于：所述着色剂和增香酵母粒的质量比为2～4:6。
9.如权利要求6所述的应用，其特征在于：所述乳化剂包括单、双甘油脂肪酸酯、果胶、卡拉胶、磷脂、柠檬酸脂肪酸甘油酯、乳酸脂肪酸甘油酯、乳糖醇(4-β-D吡喃半乳糖-D-山梨醇)、辛烯基琥珀酸淀粉钠,改性大豆磷脂、甘油(丙三醇)、酶解大豆磷脂、羟丙基淀粉、乙酰化单甘油脂肪酸酯、乙酰化双甘油脂肪酸酯、山梨醇酐单月桂酸酯、山梨醇酐单棕榈酸酯、山梨醇酐单硬脂酸酯、山梨醇酐三硬脂酸酯、山梨醇酐单油酸酯中的一种或几种组合。
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