CN116284394A - 分离的抗原结合蛋白及其应用 - Google Patents
分离的抗原结合蛋白及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN116284394A CN116284394A CN202211581265.6A CN202211581265A CN116284394A CN 116284394 A CN116284394 A CN 116284394A CN 202211581265 A CN202211581265 A CN 202211581265A CN 116284394 A CN116284394 A CN 116284394A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- seq
- amino acid
- acid sequence
- sequence shown
- antibody
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 102000025171 antigen binding proteins Human genes 0.000 title claims abstract description 263
- 108091000831 antigen binding proteins Proteins 0.000 title claims abstract description 263
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims abstract description 96
- 102100029756 Cadherin-6 Human genes 0.000 claims abstract description 74
- 101000794604 Homo sapiens Cadherin-6 Proteins 0.000 claims abstract description 68
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 39
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 39
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 30
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 25
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 1032
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 85
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 84
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 84
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims description 83
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 48
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 45
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 43
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 42
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 42
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 41
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 40
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 40
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 36
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 34
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 27
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 claims description 16
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 claims description 14
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 12
- 208000006265 Renal cell carcinoma Diseases 0.000 claims description 10
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 9
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 8
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 8
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 claims description 7
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 claims description 7
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 claims description 7
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 6
- 208000006990 cholangiocarcinoma Diseases 0.000 claims description 5
- 208000030808 Clear cell renal carcinoma Diseases 0.000 claims description 4
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 claims description 4
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 claims description 4
- 206010027406 Mesothelioma Diseases 0.000 claims description 4
- 206010029260 Neuroblastoma Diseases 0.000 claims description 4
- 208000033781 Thyroid carcinoma Diseases 0.000 claims description 4
- 208000024770 Thyroid neoplasm Diseases 0.000 claims description 4
- 208000008383 Wilms tumor Diseases 0.000 claims description 4
- 206010073251 clear cell renal cell carcinoma Diseases 0.000 claims description 4
- 208000005017 glioblastoma Diseases 0.000 claims description 4
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 claims description 4
- 208000012988 ovarian serous adenocarcinoma Diseases 0.000 claims description 4
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 claims description 4
- 201000010279 papillary renal cell carcinoma Diseases 0.000 claims description 4
- 208000000587 small cell lung carcinoma Diseases 0.000 claims description 4
- 201000002510 thyroid cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 208000013077 thyroid gland carcinoma Diseases 0.000 claims description 4
- 206010046766 uterine cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 208000010667 Carcinoma of liver and intrahepatic biliary tract Diseases 0.000 claims description 3
- 206010073069 Hepatic cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 208000021045 exocrine pancreatic carcinoma Diseases 0.000 claims description 3
- 201000002250 liver carcinoma Diseases 0.000 claims description 3
- 201000005296 lung carcinoma Diseases 0.000 claims description 3
- 208000012991 uterine carcinoma Diseases 0.000 claims description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 162
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 52
- 101100450694 Arabidopsis thaliana HFR1 gene Proteins 0.000 description 33
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 33
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 26
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 22
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 22
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 19
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 19
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 19
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 18
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 17
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 16
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 16
- 102000000905 Cadherin Human genes 0.000 description 15
- 108050007957 Cadherin Proteins 0.000 description 15
- 101710181272 Choline dehydrogenase, mitochondrial Proteins 0.000 description 14
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 14
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 14
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 13
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 13
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 13
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 13
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 12
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 12
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 12
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 11
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 10
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 9
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 9
- 108010056045 K cadherin Proteins 0.000 description 9
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 9
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 9
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 9
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 9
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 9
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 9
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 9
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 9
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 9
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 8
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 8
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 8
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 8
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 8
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 8
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 7
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 7
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 7
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 7
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 7
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 7
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 6
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 6
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 6
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 6
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 6
- 230000006870 function Effects 0.000 description 6
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 6
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 6
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 6
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 5
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 5
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 5
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 5
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 5
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 5
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 5
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 5
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 5
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 5
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 5
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 5
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 5
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 5
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 5
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 5
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 5
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 4
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 4
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 4
- 239000012830 cancer therapeutic Substances 0.000 description 4
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 4
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 4
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 4
- 102000054078 gamma Catenin Human genes 0.000 description 4
- 108010084448 gamma Catenin Proteins 0.000 description 4
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 4
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 4
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 4
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- 241000894007 species Species 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 4
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 3
- 102000015735 Beta-catenin Human genes 0.000 description 3
- 108060000903 Beta-catenin Proteins 0.000 description 3
- 102100024158 Cadherin-10 Human genes 0.000 description 3
- 102100025332 Cadherin-9 Human genes 0.000 description 3
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Natural products NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101000762229 Homo sapiens Cadherin-10 Proteins 0.000 description 3
- 101000935098 Homo sapiens Cadherin-9 Proteins 0.000 description 3
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 3
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 3
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000005888 antibody-dependent cellular phagocytosis Effects 0.000 description 3
- 210000000628 antibody-producing cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 3
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 3
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 3
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 3
- 230000004540 complement-dependent cytotoxicity Effects 0.000 description 3
- UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L di(octadecanoyloxy)lead Chemical compound [Pb+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 3
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 3
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000004554 glutamine Nutrition 0.000 description 3
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 3
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 3
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 3
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 3
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- 108090000020 Alpha-catenin Proteins 0.000 description 2
- 102000003730 Alpha-catenin Human genes 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 2
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 2
- 241000282836 Camelus dromedarius Species 0.000 description 2
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100028906 Catenin delta-1 Human genes 0.000 description 2
- 101100007328 Cocos nucifera COS-1 gene Proteins 0.000 description 2
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 2
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 2
- GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N Fluorouracil Chemical compound FC1=CNC(=O)NC1=O GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- 241000282575 Gorilla Species 0.000 description 2
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 2
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 239000005411 L01XE02 - Gefitinib Substances 0.000 description 2
- 239000005551 L01XE03 - Erlotinib Substances 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- 101100438153 Mus musculus Cdh6 gene Proteins 0.000 description 2
- NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N Mytomycin Chemical compound C1N2C(C(C(C)=C(N)C3=O)=O)=C3[C@@H](COC(N)=O)[C@@]2(OC)[C@@H]2[C@H]1N2 NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 101100438155 Rattus norvegicus Cdh6 gene Proteins 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- NKANXQFJJICGDU-QPLCGJKRSA-N Tamoxifen Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(/CC)=C(C=1C=CC(OCCN(C)C)=CC=1)/C1=CC=CC=C1 NKANXQFJJICGDU-QPLCGJKRSA-N 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 2
- 101000980463 Treponema pallidum (strain Nichols) Chaperonin GroEL Proteins 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 238000011226 adjuvant chemotherapy Methods 0.000 description 2
- 238000009098 adjuvant therapy Methods 0.000 description 2
- 229960001686 afatinib Drugs 0.000 description 2
- ULXXDDBFHOBEHA-CWDCEQMOSA-N afatinib Chemical compound N1=CN=C2C=C(O[C@@H]3COCC3)C(NC(=O)/C=C/CN(C)C)=CC2=C1NC1=CC=C(F)C(Cl)=C1 ULXXDDBFHOBEHA-CWDCEQMOSA-N 0.000 description 2
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 2
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 2
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 2
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960000397 bevacizumab Drugs 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 229960005395 cetuximab Drugs 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000000749 co-immunoprecipitation Methods 0.000 description 2
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 2
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 2
- 229960001433 erlotinib Drugs 0.000 description 2
- AAKJLRGGTJKAMG-UHFFFAOYSA-N erlotinib Chemical compound C=12C=C(OCCOC)C(OCCOC)=CC2=NC=NC=1NC1=CC=CC(C#C)=C1 AAKJLRGGTJKAMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 238000002866 fluorescence resonance energy transfer Methods 0.000 description 2
- 229960002949 fluorouracil Drugs 0.000 description 2
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 2
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 2
- 229960002584 gefitinib Drugs 0.000 description 2
- XGALLCVXEZPNRQ-UHFFFAOYSA-N gefitinib Chemical compound C=12C=C(OCCCN3CCOCC3)C(OC)=CC2=NC=NC=1NC1=CC=C(F)C(Cl)=C1 XGALLCVXEZPNRQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229950009822 gimeracil Drugs 0.000 description 2
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 2
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 2
- 230000002637 immunotoxin Effects 0.000 description 2
- 239000002596 immunotoxin Substances 0.000 description 2
- 229940051026 immunotoxin Drugs 0.000 description 2
- 231100000608 immunotoxin Toxicity 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 2
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 2
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 2
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 2
- UWKQSNNFCGGAFS-XIFFEERXSA-N irinotecan Chemical compound C1=C2C(CC)=C3CN(C(C4=C([C@@](C(=O)OC4)(O)CC)C=4)=O)C=4C3=NC2=CC=C1OC(=O)N(CC1)CCC1N1CCCCC1 UWKQSNNFCGGAFS-XIFFEERXSA-N 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 2
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 2
- 238000002493 microarray Methods 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 description 2
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 2
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 2
- 229960001972 panitumumab Drugs 0.000 description 2
- 229960005079 pemetrexed Drugs 0.000 description 2
- QOFFJEBXNKRSPX-ZDUSSCGKSA-N pemetrexed Chemical compound C1=N[C]2NC(N)=NC(=O)C2=C1CCC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 QOFFJEBXNKRSPX-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 2
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 2
- 125000001500 prolyl group Chemical group [H]N1C([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 2
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 2
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 2
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 2
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 2
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 2
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 2
- 235000004400 serine Nutrition 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- 239000012089 stop solution Substances 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 235000008521 threonine Nutrition 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 2
- 235000002374 tyrosine Nutrition 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 2
- GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 2-amino-4,6-dichloropyrimidine-5-carbaldehyde Chemical group NC1=NC(Cl)=C(C=O)C(Cl)=N1 GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine Chemical compound CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1 UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AOJJSUZBOXZQNB-VTZDEGQISA-N 4'-epidoxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-VTZDEGQISA-N 0.000 description 1
- RYYCJUAHISIHTL-UHFFFAOYSA-N 5-azaorotic acid Chemical compound OC(=O)C1=NC(=O)NC(=O)N1 RYYCJUAHISIHTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ODHCTXKNWHHXJC-VKHMYHEASA-N 5-oxo-L-proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 1
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 1
- 208000031873 Animal Disease Models Diseases 0.000 description 1
- 244000303258 Annona diversifolia Species 0.000 description 1
- 235000002198 Annona diversifolia Nutrition 0.000 description 1
- 241000272517 Anseriformes Species 0.000 description 1
- 108010032595 Antibody Binding Sites Proteins 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 241000282832 Camelidae Species 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- GAGWJHPBXLXJQN-UORFTKCHSA-N Capecitabine Chemical compound C1=C(F)C(NC(=O)OCCCCC)=NC(=O)N1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](C)O1 GAGWJHPBXLXJQN-UORFTKCHSA-N 0.000 description 1
- GAGWJHPBXLXJQN-UHFFFAOYSA-N Capecitabine Natural products C1=C(F)C(NC(=O)OCCCCC)=NC(=O)N1C1C(O)C(O)C(C)O1 GAGWJHPBXLXJQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 108050004754 Catenin delta-1 Proteins 0.000 description 1
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 1
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 102000016607 Diphtheria Toxin Human genes 0.000 description 1
- 108010053187 Diphtheria Toxin Proteins 0.000 description 1
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 1
- 206010061819 Disease recurrence Diseases 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- HTIJFSOGRVMCQR-UHFFFAOYSA-N Epirubicin Natural products COc1cccc2C(=O)c3c(O)c4CC(O)(CC(OC5CC(N)C(=O)C(C)O5)c4c(O)c3C(=O)c12)C(=O)CO HTIJFSOGRVMCQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 108091008794 FGF receptors Proteins 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 102000044168 Fibroblast Growth Factor Receptor Human genes 0.000 description 1
- 108091006027 G proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000030782 GTP binding Human genes 0.000 description 1
- 108091000058 GTP-Binding Proteins 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- ZPLQIPFOCGIIHV-UHFFFAOYSA-N Gimeracil Chemical compound OC1=CC(=O)C(Cl)=CN1 ZPLQIPFOCGIIHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001272567 Hominoidea Species 0.000 description 1
- 101100326598 Homo sapiens CDH6 gene Proteins 0.000 description 1
- 101000943088 Homo sapiens Choline dehydrogenase, mitochondrial Proteins 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 241000282596 Hylobatidae Species 0.000 description 1
- 102000009786 Immunoglobulin Constant Regions Human genes 0.000 description 1
- 108010009817 Immunoglobulin Constant Regions Proteins 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- 101710173431 L-carnitine dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- 239000002138 L01XE21 - Regorafenib Substances 0.000 description 1
- WMFYOYKPJLRMJI-UHFFFAOYSA-N Lercanidipine hydrochloride Chemical compound Cl.COC(=O)C1=C(C)NC(C)=C(C(=O)OC(C)(C)CN(C)CCC(C=2C=CC=CC=2)C=2C=CC=CC=2)C1C1=CC=CC([N+]([O-])=O)=C1 WMFYOYKPJLRMJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282553 Macaca Species 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 102100030412 Matrix metalloproteinase-9 Human genes 0.000 description 1
- 108010015302 Matrix metalloproteinase-9 Proteins 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- 240000002769 Morchella esculenta Species 0.000 description 1
- 235000002779 Morchella esculenta Nutrition 0.000 description 1
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 1
- 108050000637 N-cadherin Proteins 0.000 description 1
- 230000004988 N-glycosylation Effects 0.000 description 1
- 108091061960 Naked DNA Proteins 0.000 description 1
- 230000004989 O-glycosylation Effects 0.000 description 1
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 1
- 101710105116 Oxygen-dependent choline dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 241000282579 Pan Species 0.000 description 1
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010033701 Papillary thyroid cancer Diseases 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 235000019483 Peanut oil Nutrition 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 108091093037 Peptide nucleic acid Proteins 0.000 description 1
- 241000276498 Pollachius virens Species 0.000 description 1
- 108010039918 Polylysine Proteins 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005822 Propiconazole Substances 0.000 description 1
- ODHCTXKNWHHXJC-GSVOUGTGSA-N Pyroglutamic acid Natural products OC(=O)[C@H]1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 1
- 102100028255 Renin Human genes 0.000 description 1
- 108090000783 Renin Proteins 0.000 description 1
- 206010041067 Small cell lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 108010022394 Threonine synthase Proteins 0.000 description 1
- 102100023935 Transmembrane glycoprotein NMB Human genes 0.000 description 1
- 208000002495 Uterine Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 102000008790 VE-cadherin Human genes 0.000 description 1
- 241001416177 Vicugna pacos Species 0.000 description 1
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 1
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 1
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 1
- ODHCTXKNWHHXJC-UHFFFAOYSA-N acide pyroglutamique Natural products OC(=O)C1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002862 amidating effect Effects 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 238000011558 animal model by disease Methods 0.000 description 1
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 238000011091 antibody purification Methods 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- 230000004900 autophagic degradation Effects 0.000 description 1
- VSRXQHXAPYXROS-UHFFFAOYSA-N azanide;cyclobutane-1,1-dicarboxylic acid;platinum(2+) Chemical compound [NH2-].[NH2-].[Pt+2].OC(=O)C1(C(O)=O)CCC1 VSRXQHXAPYXROS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010009 beating Methods 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 108010018828 cadherin 5 Proteins 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 230000017484 calcium-dependent cell-cell adhesion Effects 0.000 description 1
- 230000005907 cancer growth Effects 0.000 description 1
- 230000009400 cancer invasion Effects 0.000 description 1
- 229960004117 capecitabine Drugs 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical group 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960004562 carboplatin Drugs 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 1
- 230000004709 cell invasion Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 210000003850 cellular structure Anatomy 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 229960004316 cisplatin Drugs 0.000 description 1
- DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L cisplatin Chemical compound N[Pt](N)(Cl)Cl DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000005757 colony formation Effects 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000012875 competitive assay Methods 0.000 description 1
- 230000006957 competitive inhibition Effects 0.000 description 1
- 230000024203 complement activation Effects 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 230000004154 complement system Effects 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 229960004397 cyclophosphamide Drugs 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 230000000445 cytocidal effect Effects 0.000 description 1
- 210000004292 cytoskeleton Anatomy 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006240 deamidation Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 229960005156 digoxin Drugs 0.000 description 1
- 102000004419 dihydrofolate reductase Human genes 0.000 description 1
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 1
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 229960001904 epirubicin Drugs 0.000 description 1
- 230000007705 epithelial mesenchymal transition Effects 0.000 description 1
- 230000008029 eradication Effects 0.000 description 1
- 230000005713 exacerbation Effects 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 1
- 229960005277 gemcitabine Drugs 0.000 description 1
- SDUQYLNIPVEERB-QPPQHZFASA-N gemcitabine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1C(F)(F)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 SDUQYLNIPVEERB-QPPQHZFASA-N 0.000 description 1
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 125000000291 glutamic acid group Chemical group N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- 125000000404 glutamine group Chemical group N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003917 human chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 239000000568 immunological adjuvant Substances 0.000 description 1
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 230000002601 intratumoral effect Effects 0.000 description 1
- 229960004768 irinotecan Drugs 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 238000006317 isomerization reaction Methods 0.000 description 1
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000001638 lipofection Methods 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- 230000008883 metastatic behaviour Effects 0.000 description 1
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 description 1
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 229960004857 mitomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000003607 modifier Substances 0.000 description 1
- 238000004264 monolayer culture Methods 0.000 description 1
- 229940126619 mouse monoclonal antibody Drugs 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 238000011580 nude mouse model Methods 0.000 description 1
- 229960002700 octreotide Drugs 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 229950000193 oteracil Drugs 0.000 description 1
- 229940043515 other immunoglobulins in atc Drugs 0.000 description 1
- 230000002611 ovarian Effects 0.000 description 1
- 229960001756 oxaliplatin Drugs 0.000 description 1
- DWAFYCQODLXJNR-BNTLRKBRSA-L oxaliplatin Chemical compound O1C(=O)C(=O)O[Pt]11N[C@@H]2CCCC[C@H]2N1 DWAFYCQODLXJNR-BNTLRKBRSA-L 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000006179 pH buffering agent Substances 0.000 description 1
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 239000000312 peanut oil Substances 0.000 description 1
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000007694 polyacrylamide gel isoelectric focusing Methods 0.000 description 1
- 229920000656 polylysine Polymers 0.000 description 1
- 238000010837 poor prognosis Methods 0.000 description 1
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 1
- 230000002980 postoperative effect Effects 0.000 description 1
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 1
- 235000013594 poultry meat Nutrition 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- STJLVHWMYQXCPB-UHFFFAOYSA-N propiconazole Chemical compound O1C(CCC)COC1(C=1C(=CC(Cl)=CC=1)Cl)CN1N=CN=C1 STJLVHWMYQXCPB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012514 protein characterization Methods 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 230000004850 protein–protein interaction Effects 0.000 description 1
- 229960002633 ramucirumab Drugs 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 229960004836 regorafenib Drugs 0.000 description 1
- FNHKPVJBJVTLMP-UHFFFAOYSA-N regorafenib Chemical compound C1=NC(C(=O)NC)=CC(OC=2C=C(F)C(NC(=O)NC=3C=C(C(Cl)=CC=3)C(F)(F)F)=CC=2)=C1 FNHKPVJBJVTLMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000002702 ribosome display Methods 0.000 description 1
- 238000005185 salting out Methods 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 239000008159 sesame oil Substances 0.000 description 1
- 235000011803 sesame oil Nutrition 0.000 description 1
- 238000007086 side reaction Methods 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000003549 soybean oil Substances 0.000 description 1
- 235000012424 soybean oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 229960001603 tamoxifen Drugs 0.000 description 1
- 238000002626 targeted therapy Methods 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 208000030045 thyroid gland papillary carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000025366 tissue development Effects 0.000 description 1
- 229960005026 toremifene Drugs 0.000 description 1
- XFCLJVABOIYOMF-QPLCGJKRSA-N toremifene Chemical compound C1=CC(OCCN(C)C)=CC=C1C(\C=1C=CC=CC=1)=C(\CCCl)C1=CC=CC=C1 XFCLJVABOIYOMF-QPLCGJKRSA-N 0.000 description 1
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 1
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 1
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 1
- 108091007466 transmembrane glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000035160 transmembrane proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091005703 transmembrane proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 230000005747 tumor angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 230000008728 vascular permeability Effects 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 1
- 238000009736 wetting Methods 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2896—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against molecules with a "CD"-designation, not provided for elsewhere
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/51—Complete heavy chain or Fd fragment, i.e. VH + CH1
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/515—Complete light chain, i.e. VL + CL
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本申请涉及一种分离的抗原结合蛋白，其具有以下特性：(a)特异性结合CDH6，和(b)具有通过与CDH6结合而内化至表达CDH6的细胞中的活性。本申请还提供了包含所述抗原结合蛋白的药物以及使用其治疗肿瘤的方法。
Description
技术领域
本申请涉及生物医药领域，具体的涉及一种结合Cadherin-6(CDH6)蛋白的抗体及其应用。
背景技术
钙黏着蛋白是在其胞外结构域中含有大约100个残基的钙黏着蛋白重复序列的跨膜糖蛋白超家族。钙黏着蛋白介导钙依赖性细胞-细胞黏附，并在正常组织发育中发挥至关重要的作用(1)。经典的钙黏着蛋白亚家族包括N-、P-、R-、B-和E-钙黏着蛋白，以及约十个在黏附连接中存在的其他成员，黏附连接是一种在极化上皮细胞顶面的细胞结构。经典钙黏着蛋白的胞质结构域可与β-联蛋白、γ-联蛋白(也称作斑珠蛋白)和p120联蛋白相互作用。β-联蛋白和γ-联蛋白与α-联蛋白结合，并且α-联蛋白将钙黏着蛋白-联蛋白复合体连接至肌动蛋白细胞骨架(1,2)。β-和γ-联蛋白在连接复合体中发挥结构性作用，而p120可调节钙黏着蛋白黏附活性和转运(1-4)。研究者认为E-钙黏着蛋白是许多上皮癌侵润和生长的活性抑制蛋白(1-3)。研究表明，除了上皮钙粘素丢失外，癌细胞的神经钙粘素表达上调。钙粘素表达的这种变化被称作“钙粘素转换”。N-钙黏着蛋白与FGF受体协作，导致MMP-9过表达和细胞侵袭(3)。研究表明，在内皮细胞中，VE-钙黏着蛋白信号转导、表达和定位与血管通透性和肿瘤血管生成相关(5,6)。研究者还已经证实，正常情况下在上皮细胞中的存在的P-钙黏着蛋白，其表达在卵巢和其他人类癌症中也发生改变(7,8)。钙粘素-6也称肾钙粘素(K-钙粘素，CDH6)，它是一种II型典型钙粘素。
据报道，CDH6在胆管癌细胞中有抑癌基因功能(9)，钙粘素-6表达经证实是上皮-间质细胞转换的一个标记物，与乳头状甲状腺癌的阶段和转移呈正相关(10,11)。在有关研究中，钙粘素-6经证实会与GABARAP和相关蛋白相互作用来抑制自噬，从而促进转移性行为(12)。CDH6在一些癌症中过表达，尤其是肾细胞癌和卵巢癌。CDH6过表达与肿瘤的生长和增殖有关，并且与肾细胞癌的不良预后有关，因此是癌症靶向性治疗的理想靶点。
发明内容
本申请的目的之一在于提供一种结合CDH6蛋白的抗原结合蛋白及其应用。本申请所述的抗原结合蛋白具有下列性质中的一种或多种：1)以较高的亲和力特异性与CDH6蛋白相结合；2)特异性识别在细胞表面表达的CDH6蛋白；3)能够被细胞内化，尤其是肿瘤细胞的内化；4)可以抑制肿瘤或肿瘤细胞的生长和/或增殖。本申请还提供了所述抗体的制备方法和应用。
一方面，本申请提供一种分离的抗原结合蛋白，其具有下述性质中的一种或多种：
1)在ELISA试验中，能够以低于12.5ng/mL的灵敏度与CDH6蛋白相结合；
2)通过与CDH6结合而内化至表达CDH6的细胞中的活性。
在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白具备选自下组的一种或多种性质：1)能够以1.8×10-9M或更低的KD值结合CDH6蛋白；2)能够特异性识别在细胞表面表达的CDH6蛋白；3)能够被细胞内化；4)抑制肿瘤和/或肿瘤细胞增殖。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白与参比抗体竞争结合CDH6蛋白，其中所述参比抗体包含轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)；其中：
所述VH包含SEQ ID NO:18所示的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列；或
所述VH包含SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:46所示的氨基酸序列；或
所述VH包含SEQ ID NO:95所示的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:96所示的氨基酸序列；或
所述VH包含SEQ ID NO:103所示的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:104所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包括抗体或其抗原结合片段。
在某些实施方式中，所述抗体包括单克隆抗体、多克隆抗体、二聚体、多聚体、多特异性抗体、完整抗体、抗体片段、人抗体、人源化抗体或嵌合抗体。
在某些实施方式中，其中所述抗原结合片段包括Fab，Fab’，Fv片段，F(ab’)2，scFv，di-scFv和/或dAb。
在某些实施方式中，其中所述抗体包括嵌合抗体或人源化抗体。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含VH中的至少一个CDR，所述VH包含SEQ ID NO:18，SEQ ID NO:66，SEQ ID NO:41，SEQ ID NO:67，SEQ ID NO:95或SEQ IDNO:103所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含VL中的至少一个CDR，所述VL包含SEQ ID NO:23，SEQ ID NO:68，SEQ ID NO:46，SEQ ID NO:69，SEQ ID NO:96或SEQ IDNO:104所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含VH，其中所述VH包含HCDR1、HCDR2、HCDR3，所述HCDR1包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含VH，其中所述VH包含HCDR1、HCDR2、HCDR3，所述HCDR1包含SEQ ID NO:2，SEQ ID NO:8，SEQ ID NO:89或SEQ ID NO:97所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含VH，其中所述VH包含HCDR1、HCDR2、HCDR3，所述HCDR2包含SEQ ID NO:3，SEQ ID NO:9，SEQ ID NO:90或SEQ ID NO:98所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含VH，其中所述VH包含HCDR1、HCDR2、HCDR3，所述HCDR3包含SEQ ID NO:4，SEQ ID NO:10，SEQ ID NO:91或SEQ ID NO:99所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含VH，其中所述VH包含HCDR1，HCDR2和HCDR3，其中所述HCDR1包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ IDNO:3所示的氨基酸序列，所述HCDR3包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列；或
所述HCDR1包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列，所述HCDR3包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含VH，其中所述VH包含HCDR1，HCDR2和HCDR3，其中所述HCDR1包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ IDNO:3所示的氨基酸序列，所述HCDR3包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列；或
所述HCDR1包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列，所述HCDR3包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列；或
所述HCDR1包含SEQ ID NO:89所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:90所示的氨基酸序列，所述HCDR3包含SEQ ID NO:91所示的氨基酸序列；或
所述HCDR1包含SEQ ID NO:97所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:98所示的氨基酸序列，所述HCDR3包含SEQ ID NO:99所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含VH，其中所述VH包括框架区HFR1，所述HFR1的C末端与所述HCDR1的N末端直接或间接相连，且所述HFR1包含SEQ IDNO:14、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:47或SEQ ID NO:52所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含VH，其中所述VH包括框架区HFR2，所述HFR2位于所述HCDR1与所述HCDR2之间，且所述HFR2包含SEQ ID NO:15、SEQ IDNO:28、SEQ ID NO:38或SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含VH，其中所述VH包括框架区HFR3，所述HFR3位于所述HCDR2与所述HCDR3之间，且所述HFR3包含SEQ ID NO:16、SEQ IDNO:25、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:49或SEQ ID NO:53所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含VH，其中所述VH包括框架区HFR4，所述HFR4的N末端与所述HCDR3的C末端直接或间接相连，且所述HFR4包含SEQ IDNO:17、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:40或SEQ ID NO:50所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含VH，其中所述VH包括框架区HFR1，HFR2，HFR3和HFR4，所述HFR1的C末端与所述HCDR1的N末端直接或间接相连，所述HFR2位于所述HCDR1与所述HCDR2之间，所述HFR3位于所述HCDR2与所述HCDR3之间，所述HFR4的N末端与所述HCDR3的C末端直接或间接相连；其中，所述HFR1包含SEQ ID NO:14所示的氨基酸序列，所述HFR2包含SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列，所述HFR3包含SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列，HFR4包含SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列；或
所述HFR1包含SEQ ID NO:24所示的氨基酸序列，所述HFR2包含SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列，所述HFR3包含SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列，HFR4包含SEQ ID NO:26所示的氨基酸序列；或
所述HFR1包含SEQ ID NO:24所示的氨基酸序列，所述HFR2包含SEQ ID NO:28所示的氨基酸序列，所述HFR3包含SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列，HFR4包含SEQ ID NO:26所示的氨基酸序列；或
所述HFR1包含SEQ ID NO:37所示的氨基酸序列，所述HFR2包含SEQ ID NO:38所示的氨基酸序列，所述HFR3包含SEQ ID NO:39所示的氨基酸序列，HFR4包含SEQ ID NO:40所示的氨基酸序列；或
所述HFR1包含SEQ ID NO:47所示的氨基酸序列，所述HFR2包含SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列，所述HFR3包含SEQ ID NO:49所示的氨基酸序列，HFR4包含SEQ ID NO:50所示的氨基酸序列；或
所述HFR1包含SEQ ID NO:52所示的氨基酸序列，所述HFR2包含SEQ ID NO:38所示的氨基酸序列，所述HFR3包含SEQ ID NO:53所示的氨基酸序列，HFR4包含SEQ ID NO:26所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含VH，其中所述VH包含SEQ IDNO:18，SEQ ID NO:66，SEQ ID NO:41，SEQ ID NO:67，SEQ ID NO:95或SEQ ID NO:103所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含VH，其中所述VH包含SEQ IDNO:27，SEQ ID NO:29，SEQ ID NO:51或SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包括抗体重链恒定区。
在某些实施方式中，其中所述抗体重链恒定区包括源自人IgG的恒定区。
在某些实施方式中，其中所述抗体重链恒定区包括源自人IgG1，IgG2，IgG3或IgG4的恒定区。
在某些实施方式中，其中所述抗体重链恒定区包含SEQ ID NO:70所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含抗体重链，其中所述抗体重链包含SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:85或SEQ ID NO:87所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含VL，其中所述VL包含LCDR1、LCDR2、LCDR3，所述LCDR1包含SEQ ID NO:5，SEQ ID NO:11，SEQ ID NO:92或SEQ ID NO:100所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含VL，其中所述VL包含LCDR1、LCDR2、LCDR3，所述LCDR2包含SEQ ID NO:6，SEQ ID NO:12，SEQ ID NO:93或SEQ ID NO:101所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含VL，其中所述VL包含LCDR1、LCDR2、LCDR3，所述LCDR3包含SEQ ID NO:7，SEQ ID NO:13，SEQ ID NO:94或SEQ ID NO:102所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含VL，其中所述VL包含LCDR1，LCDR2和LCDR3，所述LCDR1包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列，所述LCDR2包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列，所述LCDR3包含SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列；或
所述LCDR1包含SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列，所述LCDR2包含SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列，所述LCDR3包含SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列；或
所述LCDR1包含SEQ ID NO:92所示的氨基酸序列，所述LCDR2包含SEQ ID NO:93所示的氨基酸序列，所述LCDR3包含SEQ ID NO:94所示的氨基酸序列；或
所述LCDR1包含SEQ ID NO:100所示的氨基酸序列，所述LCDR2包含SEQ ID NO:101所示的氨基酸序列，所述LCDR3包含SEQ ID NO:102所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含VH和VL，其中所述VH包含HCDR1，HCDR2和HCDR3，所述VL包含LCDR1，LCDR2和LCDR3；其中所述HCDR1包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列，所述HCDR3包含SEQ IDNO:4所示的氨基酸序列，所述LCDR1包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列，所述LCDR2包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列，所述LCDR3包含SEQ IDNO:7所示的氨基酸序列；或
所述HCDR1包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列，所述HCDR3包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列，所述LCDR1包含SEQ IDNO:11所示的氨基酸序列，所述LCDR2包含SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列，所述LCDR3包含SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含VH和VL，其中所述VH包含HCDR1，HCDR2和HCDR3，所述VL包含LCDR1，LCDR2和LCDR3；其中所述HCDR1包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列，所述HCDR3包含SEQ IDNO:4所示的氨基酸序列，所述LCDR1包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列，所述LCDR2包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列，所述LCDR3包含SEQ IDNO:7所示的氨基酸序列；或
所述HCDR1包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列，所述HCDR3包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列，所述LCDR1包含SEQ IDNO:11所示的氨基酸序列，所述LCDR2包含SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列，所述LCDR3包含SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列；或
所述HCDR1包含SEQ ID NO:89所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:90所示的氨基酸序列，所述HCDR3包含SEQ ID NO:91所示的氨基酸序列，所述LCDR1包含SEQ IDNO:92所示的氨基酸序列，所述LCDR2包含SEQ ID NO:93所示的氨基酸序列，所述LCDR3包含SEQ ID NO:94所示的氨基酸序列；或
所述HCDR1包含SEQ ID NO:97所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:98所示的氨基酸序列，所述HCDR3包含SEQ ID NO:99所示的氨基酸序列，所述LCDR1包含SEQ IDNO:100所示的氨基酸序列，所述LCDR2包含SEQ ID NO:101所示的氨基酸序列，所述LCDR3包含SEQ ID NO:102所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含VL，其中所述VL包括框架区LFR1，所述LFR1的C末端与所述LCDR1的N末端直接或间接相连，且所述LFR1包含SEQ IDNO:19、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:59或SEQ ID NO:64所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含VL，其中所述VL包括框架区LFR2，所述LFR2位于所述LCDR1与所述LCDR2之间，且所述LFR2包含SEQ ID NO:20、SEQ IDNO:31、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:56或SEQ ID NO:60所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含VL，其中所述VL包括框架区LFR3，所述LFR3位于所述LCDR2与所述LCDR3之间，且所述LFR3包含SEQ ID NO:21、SEQ IDNO:32、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:57或SEQ ID NO:61所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含VL，其中所述VL包括框架区LFR4，所述LFR4的N末端与所述LCDR3的C末端直接或间接相连，且所述LFR4包含S SEQIDNO:22、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:45或SEQ ID NO:62所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含VL，其中所述VL包括框架区LFR1，LFR2，LFR3和LFR4，其中所述LFR1的C末端与所述LCDR1的N末端直接或间接相连，所述LFR2位于所述LCDR1与所述LCDR2之间，所述LFR3位于所述LCDR2与所述LCDR3之间，所述LFR4的N末端与所述LCDR3的C末端直接或间接相连；其中所述LFR1包含SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列，所述LFR2包含SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列，所述LFR3包含SEQ ID NO:21所示的氨基酸序列，所述LFR4包含SEQ ID NO:22所示的氨基酸序列；或
所述LFR1包含SEQ ID NO:30所示的氨基酸序列，所述LFR2包含SEQ ID NO:31所示的氨基酸序列，所述LFR3包含SEQ ID NO:32所示的氨基酸序列，所述LFR4包含SEQ IDNO:33所示的氨基酸序列；或
所述LFR1包含SEQ ID NO:30所示的氨基酸序列，所述LFR2包含SEQ ID NO:31所示的氨基酸序列，所述LFR3包含SEQ ID NO:35所示的氨基酸序列，所述LFR4包含SEQ IDNO:33所示的氨基酸序列；或
所述LFR1包含SEQ ID NO:42所示的氨基酸序列，所述LFR2包含SEQ ID NO:43所示的氨基酸序列，所述LFR3包含SEQ ID NO:44所示的氨基酸序列，所述LFR4包含SEQ IDNO:45所示的氨基酸序列；或
所述LFR1包含SEQ ID NO:55所示的氨基酸序列，所述LFR2包含SEQ ID NO:56所示的氨基酸序列，所述LFR3包含SEQ ID NO:57所示的氨基酸序列，所述LFR4包含SEQ IDNO:45所示的氨基酸序列；或
所述LFR1包含SEQ ID NO:59所示的氨基酸序列，所述LFR2包含SEQ ID NO:60所示的氨基酸序列，所述LFR3包含SEQ ID NO:61所示的氨基酸序列，所述LFR4包含SEQ IDNO:62所示的氨基酸序列；或
所述LFR1包含SEQ ID NO:64所示的氨基酸序列，所述LFR2包含SEQ ID NO:60所示的氨基酸序列，所述LFR3包含SEQ ID NO:61所示的氨基酸序列，所述LFR4包含SEQ IDNO:62所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含VL，其中所述VL包含SEQ IDNO:23、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:96或SEQ ID NO:104所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含VL，其中所述VL包含SEQ IDNO:34，SEQ ID NO:36，SEQ ID NO:58，SEQ ID NO:63或SEQ ID NO:65所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含VH和VL，其中所述VH包含SEQID NO:18所示的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列；或
所述VH包含SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:46所示的氨基酸序列；或
所述VH包含SEQ ID NO:66所示的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:68所示的氨基酸序列；或
所述VH包含SEQ ID NO:67所示的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:69所示的氨基酸序列；或
所述VH包含SEQ ID NO:95所示的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:96所示的氨基酸序列；或
所述VH包含SEQ ID NO:103所示的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:104所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含VH和VL，其中所述VH包含SEQID NO:27所示的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:34所示的氨基酸序列；或
所述VH包含SEQ ID NO:27所示的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:36所示的氨基酸序列；或
所述VH包含SEQ ID NO:29所示的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:34所示的氨基酸序列；或
所述VH包含SEQ ID NO:29所示的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:36所示的氨基酸序列；或
所述VH包含SEQ ID NO:51所示的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:58所示的氨基酸序列；或
所述VH包含SEQ ID NO:51所示的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:63所示的氨基酸序列；或
所述VH包含SEQ ID NO:51所示的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:65所示的氨基酸序列；或
所述VH包含SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:58所示的氨基酸序列；或
所述VH包含SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:63所示的氨基酸序列；或
所述VH包含SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:65所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含抗体轻链恒定区。
在某些实施方式中，其中所述抗体轻链恒定区包括人Igκ恒定区或人Igλ恒定区。
在某些实施方式中，其中所述抗体轻链恒定区包含SEQ ID NO:71所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含抗体轻链，所述抗体轻链包含SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:86或SEQ ID NO:88所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含抗体轻链，所述抗体轻链包含SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:83或SEQ ID NO:84所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含抗体重链和抗体轻链，其中所述抗体重链包含SEQ ID NO:72所示的氨基酸序列，且所述抗体轻链包含SEQ ID NO:73所示的氨基酸序列；或
所述抗体重链包含SEQ ID NO:80所示的氨基酸序列，且所述抗体轻链包含SEQ IDNO:81所示的氨基酸序列；或
所述抗体重链包含SEQ ID NO:85所示的氨基酸序列，且所述抗体轻链包含SEQ IDNO:86所示的氨基酸序列；或
所述抗体重链包含SEQ ID NO:87所示的氨基酸序列，且所述抗体轻链包含SEQ IDNO:88所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含抗体重链和抗体轻链，其中所述抗体重链包含SEQ ID NO:74所示的氨基酸序列，且所述抗体轻链包含SEQ ID NO:76所示的氨基酸序列；或
其中所述抗体重链包含SEQ ID NO:74所示的氨基酸序列，且所述抗体轻链包含SEQ IDNO:77所示的氨基酸序列；或
其中所述抗体重链包含SEQ ID NO:75所示的氨基酸序列，且所述抗体轻链包含SEQ IDNO:76所示的氨基酸序列；或
其中所述抗体重链包含SEQ ID NO:75所示的氨基酸序列，且所述抗体轻链包含SEQ IDNO:77所示的氨基酸序列；或
其中所述抗体重链包含SEQ ID NO:78所示的氨基酸序列，且所述抗体轻链包含SEQ IDNO:82所示的氨基酸序列；或
其中所述抗体重链包含SEQ ID NO:78所示的氨基酸序列，且所述抗体轻链包含SEQ IDNO:83所示的氨基酸序列；或
其中所述抗体重链包含SEQ ID NO:78所示的氨基酸序列，且所述抗体轻链包含SEQ IDNO:84所示的氨基酸序列；或
其中所述抗体重链包含SEQ ID NO:79所示的氨基酸序列，且所述抗体轻链包含SEQ IDNO:82所示的氨基酸序列；或
其中所述抗体重链包含SEQ ID NO:79所示的氨基酸序列，且所述抗体轻链包含SEQ IDNO:83所示的氨基酸序列；或
其中所述抗体重链包含SEQ ID NO:79所示的氨基酸序列，且所述抗体轻链包含SEQ IDNO:84所示的氨基酸序列。
另一方面，本申请提供一种分离的多肽，其包含前述的分离的抗原结合蛋白。
另一方面，本申请提供分离的一种或多种核酸分子，其编码前述的分离的抗原结合蛋白或前述的多肽。
另一方面，本申请提供一种载体，其包含前述的核酸分子。
另一方面，本申请提供一种细胞，所述细胞包含前述的核酸分子或前述的载体，或所述细胞表达前述的抗原结合蛋白或前述的多肽。
另一方面，本申请提供一种制备前述的分离的抗原结合蛋白的方法，所述方法包括在使得前述的分离的抗原结合蛋白表达的条件下，培养前述的细胞。
另一方面，本申请提供一种药物组合物，其包含前述的分离的抗原结合蛋白、前述的多肽、前述的核酸分子、前述的载体和/或前述的细胞，以及任选地药学上可接受的载体。
另一方面，本申请提供一种试剂盒，其包含前述的分离的抗原结合蛋白、前述的多肽或前述的药物组合物。
另一方面，本申请提供前述的分离的抗原结合蛋白、前述的多肽、前述的核酸分子、前述的载体和/或前述的细胞和/或前述的药物组合物在制备药物中的用途，所述药物用于预防和/或治疗CDH6相关的疾病或病症。
在某些实施方式中，其中所述CDH6相关的疾病或病症包括肿瘤。
在某些实施方式中，其中所述肿瘤包括表达CDH6的肿瘤。
在某些实施方式中，其中所述肿瘤包括肾细胞癌、肾透明细胞癌、乳头状肾细胞癌、卵巢癌、卵巢浆液性腺癌、甲状腺癌、胆管癌、肺癌、小细胞肺癌、肝癌、胶质母细胞瘤、间皮瘤、子宫癌、胰腺癌、威尔姆氏瘤或神经母细胞瘤。
在某些实施方式中，其中所述药物还包括其他治疗剂。
本领域技术人员能够从下文的详细描述中容易地洞察到本申请的其它方面和优势。下文的详细描述中仅显示和描述了本申请的示例性实施方式。如本领域技术人员将认识到的，本申请的内容使得本领域技术人员能够对所公开的具体实施方式进行改动而不脱离本申请所涉及发明的精神和范围。相应地，本申请的附图和说明书中的描述仅仅是示例性的，而非为限制性的。
附图说明
本申请所涉及的发明的具体特征如所附权利要求书所显示。通过参考下文中详细描述的示例性实施方式和附图能够更好地理解本申请所涉及发明的特点和优势。对附图简要说明如下：
图1显示的是本申请所述抗体与CDH6抗原结合的检测灵敏度。
图2显示的是本申请所述抗体特异性识别细胞表面表达的CDH6抗原的情况。
图3显示的是抗CDH6嵌合抗体(Ch069707)及其人源化变体(CL069707-H1L1，CL069707-H1L2，CL069707-H2L1，CL069707-H2L2)与卵巢癌细胞系OVCAR-3结合的流式细胞术检测结果。
图4显示的是抗CDH6嵌合抗体(Ch069463)及其人源化变体(CL069463-H1L1，CL069463-H2L2，CL069463-H2L3)与卵巢癌细胞株OVCAR-3结合的流式细胞术检测结果。
图5显示的是CL069707-H1L1与人CDH6-ECD-His、CDH9-ECD-His和CDH10-ECD-His重组蛋白结合的ELISA检测结果。
图6显示的是CL069707-H1L1与人、猴、小鼠和大鼠CDH6-ECD-His重组蛋白合的ELISA检测结果。
具体实施方式
以下由特定的具体实施例说明本申请发明的实施方式，熟悉此技术的人士可由本说明书所公开的内容容易地了解本申请发明的其他优点及效果。
术语定义
在本申请中，术语“CDH6”(钙黏着蛋白6)是由790个氨基酸构成的单次跨膜蛋白，其被分类为II型钙黏着蛋白家族，并且该蛋白具有N-末端细胞外和C-末端细胞内结构域。人CDH6基因是1995年首次克隆的，并且其序列可以在例如登录号NM_004932和NP_004923(NCBI)下参考。在本文中，可以使用术语“CDH6”具有与CDH6蛋白的含义相同的含义，人CDH6也称为“hCDH6”。术语“CDH6”中还包括如下的蛋白，其由包含在上述CDH6的氨基酸序列中的一个或多个氨基酸的取代、缺失和/或添加的氨基酸序列组成，并且具有与CDH6蛋白等同的生物活性。
在本申请中，术语“分离的抗原结合蛋白”通常是指已经从其产生环境(例如，天然的或重组的)的组分中识别，分离和/或回收的抗原结合蛋白。术语“抗原结合蛋白”通常是指包含结合抗原的部分的蛋白质，以及任选地允许结合抗原的部分采用促进抗原结合蛋白与抗原结合的构象的支架或骨架部分。抗原结合蛋白的实例包括但不限于抗体、抗原结合片段(例如，Fab，Fab’，Fv片段，F(ab’)2，scFv，di-scFv和/或dAb片段)、多特异性抗体(例如双特异性抗体)、抗体衍生物、抗体类似物或融合蛋白等，只要它们显示出所需的抗原结合活性即可。
在本申请中，术语“抗体”通常是在最广泛的意义上加以使用，并且具体地涵盖单克隆抗体、多克隆抗体、二聚体、多聚体、多特异性抗体(例如，双特异性抗体)、和抗体片段，只要它们显示所期望的生物活性(Milleretal(2003)Jour.ofImmunology170:4854-4861)。抗体可以是鼠、人、人源化、嵌合抗体，或源于其它物种。非限制性的，“抗体”典型地可以包含通过二硫键互相连接的至少两条重链(HC)和两条轻链(LC)的蛋白，或其抗原结合片段。每条重链包含重链可变区(VH)和重链恒定区。在某些天然存在的IgG、IgD和IgA抗体中，重链恒定区包含三个结构域，CH1、CH2和CH3。在某些天然存在的抗体中，各轻链包含轻链可变区(VL)和轻链恒定区。轻链恒定区包含一个结构域CL。VH和VL区可进一步细分为超变性的区域，称为互补决定区(CDR)，其与称为框架区(FR)的较保守的区域交替。各VH和VL包含三个CDR和四个框架区(FR)，从氨基端至羧基端按以下顺序排列：FR1，CDR1，FR2，CDR2，FR3，CDR3和FR4。天然重链和轻链的可变结构域各自包含四个FR区(HFR1，HFR2，HFR3，HFR4，LFR1，LFR2，LFR3，LFR4)，大部分采用β-折叠构型，通过三个CDRs连接，形成环连接，并且在一些情况下形成β-折叠结构的一部分。每条链中的CDRs通过FR区紧密靠近在一起，并与来自另一条链的CDR一起形成抗体的抗原结合位点。抗体的恒定区可介导免疫球蛋白与宿主组织或因子，包括免疫系统的各种细胞(例如，效应细胞)和经典补体系统的第一组分(Clq)结合。
在描述抗体序列中氨基酸片段的位置关系时，术语“位于……之间”通常是指某种氨基酸片段的C端与第一氨基酸片段的N端直接或间接连接，并且其N端与第二氨基酸片段的C端直接或间接连接。在轻链中，例如，LFR2的N末端与LCDR1的C末端直接或间接相连，且LFR2的C末端与LCDR2的N末端直接或间接相连。又例如，LFR3的N末端与LCDR2的C末端直接或间接相连，且LFR3的C末端与LCDR3的N末端直接或间接相连。在重链中，例如，HFR2的N末端与HCDR1的C末端直接或间接相连，且HFR2的C末端与HCDR2的N末端直接或间接相连。又例如，HFR3的N末端与HCDR2的C末端直接或间接相连，且HFR3的C末端与HCDR3的N末端直接或间接相连。
在本申请中，术语“抗原结合片段”或“抗体的功能片段”(在本文中也被称作“靶向部分”或“抗原结合部分”)通常是指抗体分子的一部分，其包含负责抗体与抗原之间的特异性结合的氨基酸。抗原中由抗体特异性地识别和结合的部分是称作如上文所述的“表位”。抗原结合片段可典型地包含抗体轻链可变区(VL)和抗体重链可变区(VH)；然而，其并非必须包含两者。抗体的抗原结合片段的实例包括：(1)Fab片段，具有VL、VH、恒定轻链(CL)和CH1结构域的单价片段；(2)F(ab’)2片段，具有由铰链区的二硫桥连接的两个Fab片段的二价片段；(3)具有两个VH和CH1结构域的Fd片段；(4)具有抗体单臂的VL和VH结构域的Fv片段，(5)dAb片段(Ward等人,“Binding Activities of a Repertoire of SingleImmunoglobulin Variable Domains Secreted From Escherichia coli,”Nature 341:544-546(1989)，其以引用的方式整体并入本申请)，其具有VH结构域；(6)分离的互补决定区(CDR)；(7)单链Fv(scFv)，例如源于scFV-文库。尽管Fv片段的两个结构域VL和VH是由独立基因编码，但其可通过合成连接子使用重组方法接合，合成连接子使得其被制备为其中VL和VH区配对以形成单价分子的单一蛋白链(称为单链Fv(scFv))(可参见例如Huston等人,“Protein Engineering of Antibody Binding Sites:Recovery of SpecificActivity in an Anti-Digoxin Single-Chain Fv Analogue Produced in Escherichiacoli,”Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85:5879-5883(1988))；术语“di-scFv”通常是指串联scFv，例如可以是两个scFv分子通过短接头缀合的分子；和(8)VHH，“VHH”涉及来自骆驼科(骆驼、单峰骆驼、美洲驼、羊驼等)重链抗体的可变抗原结合结构域(参见Nguyen V.K.等人，2000，The EMBO Journal，19，921-930；Muyldermans S.，2001，J Biotechnol.，74，277-302以及综述Vanlandschoot P.等人，2011，Antiviral Research 92，389-407)。这些抗体片段使用所属领域的技术人员已知的常规技术获得，且能够以与完整抗体相同的方式评估所述片段的功能。
在本申请中，术语“可变”通常是指这样的事实，即抗体的可变结构域的序列的某些部分变化强烈，它形成各种特定抗体对其特定抗原的结合和特异性。然而，变异性并非均匀地分布在抗体的整个可变区中。它集中在轻链和重链可变区中的三个区段，被称为互补决定区(CDR)或高变区(HVR)。可变域中更高度保守的部分被称为框架区(FR)。在本领域中，可以通过多种方法来定义抗体的CDR，例如基于序列可变性的Kabat定义规则(参见，Kabat等人，免疫学的蛋白质序列，第五版，美国国立卫生研究院，贝塞斯达，马里兰州(1991))、基于结构环区域位置的Chothia定义规则(参见，A1-Lazikani等人，JMol Biol 273:927-48,1997)和基于IMGT本体论(IMGT-ONTOLOGY)的概念和IMGT Scientific图表规则的KABAT定义规则。在某些实施方式中，本申请采用IMGT规则定义抗体的CDR。本申请还包括Martin、PyIgClassify的定义规则和Kabat、Chothia、IMGT、Martin和PyIgClassify的联合定义规则。(见Mark L.Chiu等人，Antibodies 8(4),55,2019)。
表A.对每个区域的氨基酸的编号系统(用Chothia编号)
| CDR | Kabat | Chothia | IMGT | Martin | PyIgClassify | Combined |
| LCDR1 | L24-L34 | L24-L34 | L27–L32 | L24–L34 | L24–L34 | L24-L34 |
| LCDR2 | L50-L56 | L50-L56 | L50–L52 | L50–L56 | L49–L56 | L49-L56 |
| LCDR3 | L89-L97 | L89-L97 | L89–L97 | L89–L97 | L89–L97 | L89-L97 |
| HCDR1 | H31-H35 | H26-H32 | H26–H33 | H26–H35 | H23–H35 | H23-H35 |
| HCDR2 | H50-H65 | H52-H56 | H51–H57 | H50–H58 | H50–H58 | H50-H65 |
| HCDR3 | H95-H102 | H95-H102 | H93–H102 | H95–H102 | H93–H102 | H93-H102 |
其中，Laa-Lbb或Haa-Hbb可分别指从N端开始的轻链或重链的NO.aa至NO.bb的氨基酸序列。例如，L24-L34指的是轻链中从NO.24到NO.34的氨基酸序列。
在本申请中，术语“单克隆抗体”通常是指从一群基本上同质的抗体获得的抗体，即集群中的个别抗体是相同的，除了可能存在的少量的自然突变。单克隆抗体通常针对单个抗原位点具有高度特异性。而且，与常规多克隆抗体制剂(通常具有针对不同决定簇的不同抗体)不同，各单克隆抗体是针对抗原上的单个决定簇。除了它们的特异性之外，单克隆抗体的优点在于它们可以通过杂交瘤培养合成，不受其他免疫球蛋白污染。修饰语“单克隆”表示从基本上同质的抗体群体获得的抗体的特征，并且不被解释为需要通过任何特定方法产生抗体。例如，本申请使用的单克隆抗体可以在杂交瘤细胞中制备，或者可以通过重组DNA方法制备。
在本申请中，术语“人源化抗体”通常是指非人抗体(例如小鼠抗体)的CDR区以外的部分或全部有的氨基酸被源自人免疫球蛋白的相应的氨基酸置换的抗体。在CDR区中，氨基酸的小的添加、缺失、插入、置换或修饰也可以是允许的，只要它们仍保留抗体结合特定抗原的能力。人源化抗体可任选地包含人类免疫球蛋白恒定区的至少一部分。“人源化抗体”保留类似于原始抗体的抗原特异性。非人(例如鼠)抗体的“人源化”形式可以最低限度地包含衍生自非人免疫球蛋白的序列的嵌合抗体。在某些情形中，可以将人免疫球蛋白(受体抗体)中的CDR区残基用具有所期望性质、亲和力和/或能力的非人物种(供体抗体)(诸如小鼠，大鼠，家兔或非人灵长类动物)的CDR区残基替换。在某些情形中，可以将人免疫球蛋白的FR区残基用相应的非人残基替换。此外，人源化抗体可包含在受体抗体中或在供体抗体中没有的氨基酸修饰。进行这些修饰可以是为了进一步改进抗体的性能，诸如结合亲和力。
在本申请中，术语“全人源抗体”通常是指将人类编码抗体的基因转移至基因工程改造的抗体基因缺失动物中，使动物表达的抗体。抗体所有部分(包括抗体的可变区和恒定区)均由人类来源的基因所编码。全人源抗体可以大大减少异源抗体对人体造成的免疫副反应。本领域获得全人源抗体的方法可以有噬菌体展示技术、转基因小鼠技术、核糖体展示技术和RNA-多肽技术等。
在本申请中，术语“特异性结合”在提及结合分子(例如抗体)与其结合配偶体(例如抗原)的相互作用时，通常是指该相互作用取决于结合配偶体上特定结构(例如抗原决定簇或表位)的存在。换言之，即使在结合配偶体存在于其他分子或有机体的混合物中时，抗体仍会优先结合或识别结合配偶体。结合可通过共价或非共价相互作用或二者的组合介导。换言之，术语“特异性结合”通常是指免疫特异性结合抗原决定簇或表位且不免疫特异性结合其他抗原决定簇或表位。免疫特异性结合抗原的结合分子可以较低亲和力结合其他肽或多肽，如通过(例如)放射免疫分析(RIA)、酶联免疫吸附分析(ELISA)、BIACORE或本领域中已知的其他分析所测定。免疫特异性结合抗原的结合分子或其片段可与带有相同表位的相关抗原交叉反应。在某些情形中，免疫特异性结合抗原的结合分子或其片段不与其他抗原交叉反应。
在本申请中，术语“亲和力”通常是指分子(例如，多肽或抗体)的单个结合位点与其结合配体(例如，靶标或抗原)之间的非共价相互作用的总和的强度。除非另外指明，当用在本文中时，“结合亲和力”是指反映结合对的成员之间(例如，或在多肽与其靶标之间，或在抗体与其抗原之间)的1∶1相互作用的内在结合亲和力。分子X对其配体Y的亲和力通常可以由解离常数(Kd)表示。分子X对其结合配体Y的较高的亲和力可见于较低的Kd和/或EC50值。
在本申请中，术语“KD”、“KD”可互换地使用，通常是指平衡解离常数，“KD”是解离速率常数(kdis，也称为“解离率(off-rate)(koff)”或“kd”)与结合速率常数(kon，也称为“结合率(kon)”或“ka”)的比值。可使用结合速率常数(kon)、解离速率常数(kdis)和平衡解离常数(KD)表示抗原结合蛋白(例如抗体)对抗原的结合亲和力。确定结合和解离速率常数的方法为本领域熟知，包括但不限于生物膜干涉技术(BLI)、放射免疫法(RIA)、平衡透析法、表面等离子共振(SPR)、荧光共振能量迁移(FRET)、免疫共沉淀(Co-IP)以及蛋白质芯片技术。如果在不同的条件(例如盐浓度、pH)下测量，则所测得的某种特定蛋白-蛋白相互作用的亲和力可不同。
在本申请中，术语“参比抗体”通常是指本申请所述抗原结合蛋白与之竞争结合抗原(例如CDH6蛋白)的抗体。在本申请中，所述参比抗体可以包括重链可变区VH和轻链可变区VL。例如，所述参比抗体的VH可以包括HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述参比抗体的VL可以包括LCDR1、LCDR2和LCDR3。又例如，所述的参比抗体的CDRs序列可以与所述分离的抗原结合蛋白的CDRs序列一致。
当在竞争相同表位的抗原结合蛋白上下文中使用的术语“竞争”通常表示抗原结合蛋白之间的竞争，如通过其中被测试的抗原结合蛋白(例如，抗体或其功能片段)预防或抑制(例如，减少)参比抗原结合蛋白(例如参比抗体)与共同抗原(例如，CDH6蛋白或其片段)特异性结合的测定所确定的。许多类型的竞争性结合测定可用于确定一个抗原结合蛋白是否与另一个竞争，例如：固相直接或间接放射性免疫测定(RIA)、固相直接或间接酶免疫测定(EIA)、夹心竞争测定(参见例如，Stahli等人，1983，Methods in Enzymology 9：242-253)；固相直接生物素-亲和素EIA(参见例如，Kirkland等人，1986，J.Immunol.137：3614-3619)；固相直接标记测定、固相直接标记夹心测定(参见例如，Harlow和Lane，1988，Antibodies，ALaboratory Manual，Cold Spring Harbor Press)；使用I-125标记的固相直接标记RIA(参见例如，Morel等人，1988，Molec.Immunol.25：7-15)；固相直接生物素-亲和素EIA(参见例如，Cheung等人，1990，Virology176：546-552)；和直接标记RIA(Moldenhauer等人，1990，Scand.J.Immunol.32：77-82)。通常，这种测定涉及与固体表面结合的纯化抗原或者携带这些任何一个的单元、未标记的测试抗原结合蛋白和标记的参比抗原结合蛋白的使用。竞争性抑制通过测定在测试抗原结合蛋白存在下于固体表面或单元结合的标记的量来测量。通常，当竞争抗原结合蛋白过量存在时，它使参比抗原结合蛋白与共同抗原的特异性结合抑制(例如，减少)至少约40-45％、约45-50％、约50-55％、约55-60％、约60-65％、约65-70％、约70-75％或约75％或更多。在一些情况下，结合被抑制至少约80-85％、约85-90％、约90-95％、约95-97％或约97％或更多。
在本申请中，术语“百分比同一性”或“同一性”通常指两条或多条核酸或多肽序列相同的程度。在氨基酸序列的上下文中，术语“百分比同一性”或“同一性”通常描述了两个或更多个经比对的氨基酸序列与组成这些氨基酸序列的总长度的氨基酸残基数相比而言一致的氨基酸的匹配(“命中”)数。换言之，使用比对，对于两个或更多个序列，当将这些序列针对最大对应(如使用本领域已知的序列比较算法测量的)进行比较和比对时，或者当手动比对和视觉检查时，可以确定相同的氨基酸残基的百分比(例如65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％同一性)。因此，进行比较以确定序列一致性的序列可以通过一个或多个氨基酸取代、添加或缺失来区分。用于比对蛋白序列的适合程序是本领域技术人员已知的。蛋白序列的百分比序列一致性可以例如用程序如CLUSTALW、Clustal Omega、FASTA或BLAST来确定，例如使用NCBI BLAST算法(AltschulSF等人(1997),Nucleic Acids Res.[核酸研究]25:3389-3402)。
在本申请中，术语“分离的核酸分子”或“分离的多核苷酸”通常是指基因组、mRNA、cDNA或合成来源的DNA或RNA或其一定组合，其不与在自然界中发现的多核苷酸的全部或一部分缔合，或连接至其在自然界中不连接的多核苷酸。
在本申请中，术语“载体”通常是指能够在合适的宿主中自我复制的核酸分子，其将插入的核酸分子转移到宿主细胞中和/或宿主细胞之间。所述载体可包括主要用于将DNA或RNA插入细胞中的载体、主要用于复制DNA或RNA的载体，以及主要用于DNA或RNA的转录和/或翻译的表达的载体。所述载体还包括具有多种上述功能的载体。所述载体可以是当引入合适的宿主细胞时能够转录并翻译成多肽的多核苷酸。通常，通过培养包含所述载体的合适的宿主细胞，所述载体可以产生期望的表达产物。
在本申请中，术语“细胞”和“宿主细胞”可以互换使用，通常是指可以或已经含有包括本申请所述的核酸分子的质粒或载体，或者能够表达本申请所述的抗体或其抗原结合片段、或多肽的个体细胞、细胞系或细胞培养物。所述细胞可以包括单个宿主细胞的子代。由于天然的、意外的或故意的突变，子代细胞与原始亲本细胞在形态上或在基因组上可能不一定完全相同，但能够表达本申请所述的抗体或其抗原结合片段即可。所述细胞可以通过使用本申请所述的载体体外转染细胞而得到。所述细胞可以是原核细胞(例如大肠杆菌)，也可以是真核细胞(例如酵母细胞，例如COS细胞，中国仓鼠卵巢(CHO)细胞，HeLa细胞，HEK293细胞，COS-1细胞，NS0细胞或骨髓瘤细胞)。在某些情形中，所述细胞可以是哺乳动物细胞。例如，所述哺乳动物细胞可以是CHO-K1细胞。在本申请中，术语“重组细胞”通常是指在其中引入了重组表达载体的细胞。所述重组宿主细胞不仅包括某种特定的细胞，还包括这些细胞的后代。
在本申请中，术语“药学上可接受的载体”通常是指不干扰活性成分生物学活性的有效性的一种或多种无毒物质。这类制剂通常可含有盐、缓冲剂、防腐剂、相容性载体、佐剂和任选的其它治疗剂。这类药学上可接受的制剂通常也可包含适合给予人的相容性固体或液体填料、稀释剂或包囊材料。非限制性的，药学上可接受的载体可包括液体，例如水、盐水、甘油和乙醇。这些载体中也可存在辅助物质，例如润湿剂或乳化剂、pH缓冲物质等。术语“佐剂”通常是指辅助或调节药物作用的任何物质，包括但不仅限于免疫学佐剂，它使对抗原的免疫反应增强或免疫反应多样化。
在本申请中，术语“预防和/或治疗”不仅包括预防和/或治疗疾病，还通常包括预防疾病的发作，减缓或逆转疾病的进展，预防或减缓与疾病相关的一种或多种症状的发作，减少和/或减轻与疾病相关的一种或多种症状，降低疾病和/或与其相关的任何症状的严重程度和/或持续时间和/或预防疾病和/或与其相关的任何症状的严重程度的进一步增加，预防、减少或逆转由疾病引起的任何生理损伤，以及通常对正在治疗的患者有益的任何药理学作用。本申请的组合物形成可行的治疗剂不需要实现完全治愈或根除疾病的任何症状或表现。如在相关领域中所认识到的，用作治疗剂的药物可降低给定疾病状态的严重程度，但不需要消除疾病的每种表现才能被认为是有用治疗剂。类似地，预防性施用的治疗构成可行的预防剂不需要完全有效地预防病症的发作。简单地在受试者中减少疾病的影响(例如，通过减少其症状的数量或严重程度，或通过提高另一种治疗的有效性，或通过产生另一种有益效果)，或减少疾病发生或恶化的可能性就足够了。
在本申请中，术语“施用”通常是指通过本领域已知的任意途径，将蛋白(包括免疫球蛋白)递送给有此需要的人或动物。药用载体和制剂或组合物也是本领域众所周知的。给药途径可以包括：静脉内的、肌肉内的、真皮内的、皮下的、透皮的、粘膜的、瘤内的或粘膜的。或者，这些术语可以表示，将用于重组蛋白表达的载体递送给细胞或培养的细胞和/或受试者的细胞或器官。这样的施用或导入可以在体内、在体外或先体外后体内地发生。通过下述方式，可以将用于重组蛋白或多肽表达的载体导入细胞中：转染，其通常是指，通过物理方式(例如，磷酸钙转染、电穿孔、显微注射或脂转染)将异源DNA插入细胞中；感染，其通常是指，借助于传染性病原体(即病毒)的导入；或转导，其通常是指，病毒对细胞的稳定感染，或遗传物质通过病毒剂(例如，噬菌体)从一种微生物向另一种微生物的转移。
在本申请中，术语“接触”通常是指两种两个或更多个不同类型的物质以任何顺序、任何方式以及任何时长接触在一起。当应用于细胞时，术语“接触”通常指借以将本申请的抗原结合蛋白、多肽、核酸、载体、细胞和/或药物组合物递送到靶细胞或与靶细胞直接靠近放置的方法，该递送可以是体外的或体内的并且可以涉及使用重组载体系统。“接触”可以发生在体内(in vivo)、间接体内(ex vivo)或体外(in vitro)。例如，“接触”可以包括将多核苷酸置于含有核酸分子的烧杯、微量滴定板、细胞培养瓶或微阵列等中。又例如，接触可以包括将抗体置于含有多肽的烧杯、微量滴定板、细胞培养瓶或微阵列等中。
在本申请中，术语“有效量”或“有效剂量”通常是指足以实现或至少部分实现所需效果的量。药物或治疗剂的“治疗有效量”或“治疗有效剂量”通常是当单独使用或与另一种治疗剂组合使用时促进疾病消退(这通过疾病症状严重程度的降低、疾病无症状期的频度和持续时间的增加、或者由于罹患疾病而引起的损害或残疾的预防来证明)的任何药物量。药物的“预防有效量”或“预防有效剂量”通常是指当单独或与另一种治疗剂组合给有疾病发展或疾病复发的风险的受试者施用时抑制疾病的发展或复发的药物量。可以使用本领域技术人员已知的多种方法对治疗剂或预防剂促进疾病消退或抑制疾病发展或复发的能力进行评估，比如在处于临床试验期间的人类受试者中、在动物模型系统中预测对人类的功效、或者通过在体外测定中测定药剂的活性。
在本申请中，术语“肿瘤”通常是指所有赘生性(neoplastic)细胞生长和增殖，无论是恶性的还是良性的，及所有癌前(pre-cancerous)和癌性细胞和组织。术语“癌症”,“癌”,“细胞增殖性病症”,“增殖性病症”和“肿瘤”在本文中提到时并不互相排斥。在本申请中，肿瘤可以是实体瘤或非实体瘤。
在本申请中，术语“受试者”通常是指需要诊断、预后、改善、预防和/或治疗疾病的人或非人动物(包括哺乳动物)，诸如人、非人灵长类动物(猿、长臂猿、大猩猩、黑猩猩、猩猩、猕猴)、家畜(狗和猫)、农场动物(家禽如鸡和鸭、马、牛、山羊、绵羊、猪)和实验动物(小鼠、大鼠、兔、豚鼠)。人受试者包括胎儿、新生儿、婴儿、青少年和成人受试者。受试者可以包括动物疾病模型。
在本申请中，术语“包括”、“包含”、“具有”、“可以”、“含有”及其变体通常旨在是开放式过渡性短语、术语或词语，其不排除额外行为或结构的可能性。术语“由……组成”通常表示不能存在别的组分(或同样地，特征、整数、步骤、等)。除非上下文另有明确规定，单数形式如英文的“a”，“an”，“the”，中文的“一个”、“一种”和“所述/该”一般包括所指代事物的复数形式。
在本申请中，术语“约”通常意指大约(approximately)、在......的附近(in theregion of)、粗略地(roughly)、或左右(around)。当术语“约”当用于指涉数值范围时，截值或特定数值用于指示所载明的数值可与该列举数值有多达10％的差异。因此，术语“约”可用于涵盖自特定值±10％或更少的变异、±5％或更少的变异、±1％或更少的变异、±0.5％或更少的变异、或±0.1％或更少的变异。
发明详述
分离的抗原结合蛋白
本申请的抗原结合蛋白(如抗CDH6抗体或其抗原结合片段)可以具有以下特性中的至少一种：(a)特异性结合CDH6，例如在ELISA试验中，能够以低于12.5ng/mL的灵敏度与CDH6蛋白相结合，和/或能够以1.8×10-9M或更低的KD值结合CDH6蛋白；(b)具有通过与CDH6结合而内化至表达CDH6的细胞中的活性；和(c)抑制肿瘤和/或肿瘤细胞增殖。
抗原结合蛋白的生物学活性的实例通常可以包括抗原结合活性，通过与抗原结合而内化至表达抗原的细胞中的活性，中和抗原活性的活性，增强抗原活性的活性，抗体依赖性细胞细胞毒性(ADCC)活性，补体依赖性细胞毒性(CDC)活性和抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)。
在某些实施方式中，所述抗原结合蛋白的功能是对CDH6的结合活性，通过与CDH6结合而内化至表达CDH6的细胞中的活性。此外，本申请的抗原结合蛋白可具有ADCC活性、CDC活性和/或ADCP活性，以及细胞内化活性。例如，本申请所述的抗原结合蛋白(如抗CDH6抗体或其抗原结合片段)可以是具有能够识别肿瘤细胞的性质、能够结合肿瘤细胞的性质、在肿瘤细胞中被内化的性质和/或对肿瘤细胞的杀细胞活性的抗体，其中所述肿瘤细胞表面表达CDH6。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白与参比抗体竞争结合CDH6蛋白，其中所述参比抗体包含轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)；其中：
所述VH包含SEQ ID NO:18所示的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列(该参比抗体命名为Ch069707)；或
所述VH包含SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:46所示的氨基酸序列(该参比抗体命名为Ch069463)。
在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白包括抗体或其抗原结合片段。
在某些实施方式中，所述抗体包括单克隆抗体、多克隆抗体、二聚体、多聚体、多特异性抗体、完整抗体、抗体片段、人抗体、人源化抗体或嵌合抗体。
在某些实施方式中，其中所述抗原结合片段包括Fab，Fab’，Fv片段，F(ab’)2，scFv，di-scFv和/或dAb。
本申请的抗CDH6抗体可以衍生自任何物种，例如，所述物种的实例可包括人、猴、大鼠、小鼠和兔。本申请的抗体还包括为了降低对人的异源抗原性的目的而人工修饰的遗传重组抗体，例如嵌合抗体、人源化抗体和人抗体，以及上述针对CDH6的单克隆抗体。这些抗体可以通过已知方法来产生。
嵌合抗体可以是这样的抗体，其中抗体可变区和恒定区衍生自不同物种，例如，嵌合抗体，其中小鼠或大鼠衍生的抗体可变区与人衍生的抗体恒定区连接(Proc.Natl.Acad.Sci.USA,81,6851-6855,(1984))。
人源化抗体可以是这样的抗体，通过仅将异源抗体的互补性决定区(CDR)整合到人衍生的抗体中而获得的抗体(Nature(1986)321,第522-525页)，通过CDR嫁接方法将一部分异源抗体构架的氨基酸残基以及所述异源抗体的CDR序列嫁接到人抗体而获得的抗体(WO90/07861)，和使用基因转变诱变策略人源化的抗体(美国专利No.5821337)。
人抗体可以是这样的抗体，通过使用具有人染色体片段的人抗体产生性小鼠产生的抗体，所述人染色体片段包括人抗体的重链和轻链的基因(参见Tomizuka,K.等人,NatureGenetics(1997)16,第133-143页；Kuroiwa,Y.等人,Nucl.Acids Res.(1998)26,第3447-3448页；Yoshida,H.等人,Animal Cell Technology:Basic and AppliedAspectsvol.10,第69-73页(Kitagawa,Y.,Matsuda,T.和Iijima,S.编),KluwerAcademicPublishers,1999；Tomizuka,K.等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA(2000)97,第722-727页等)。作为备择方案，可以例示通过噬菌体展示获得的抗体，所述抗体选自人抗体文库(参见Wormstone,I.M.等人,Investigative Ophthalmology&VisualScience.(2002)43(7),第2301-2308页；Carmen,S.等人,Briefings inFunctional Genomics and Proteomics(2002),1(2),第189-203页；Siriwardena,D.等人,Ophthalmology(2002)109(3),第427-431页等)。
在本申请中，抗体类型可以采用以下命名规则(以069707为例)：“CL069707”为鼠抗，“Ch069707为嵌合抗体”，“CL069707-H(m)L(n)”为人源化抗体的不同组合(m或n为1或2)。关于序列：三种抗体的CDR均相同；鼠抗和嵌合抗体的可变区序列相同；嵌合抗体和人源化抗体的恒定区序列相同。
在本申请中，衍生自鼠抗-人CDH6抗体的嵌合抗体的实例可以包括由以下组成的抗体：包含本申请中描述的每种鼠抗-人CDH6抗体(例如，CL069707抗体、CL069463抗体、CL069066抗体、CL069439抗体)的轻链可变区和人衍生的恒定区的轻链，以及包含其重链可变区和人衍生的恒定区的重链。
例如，衍生自鼠抗-人CDH6抗体的嵌合抗体的其他实例可以包括由以下组成的抗体：包含用其他氨基酸残基取代本申请中描述的每种鼠抗-人CDH6抗体(例如，CL069707抗体、CL069463抗体、CL069066抗体、CL069439抗体)的轻链可变区中的氨基酸的一个至几个残基、1至3个残基、1或2个残基、优选1个残基的轻链可变区的轻链，以及包含用其他氨基酸残基取代其重链可变区中的氨基酸的一个至几个残基、1至3个残基、1或2个残基、优选1个残基的重链可变区的重链。该抗体可以具有任何给定的人衍生的恒定区。
又例如，衍生自鼠抗-人CDH6抗体的嵌合抗体的其他实例可以包括由以下组成的抗体：Ch069707抗体和Ch069463抗体。
在本申请中，衍生自CL069707抗体(编号23)、CL069463抗体(编号13)、CL069066抗体(编号4)、CL069439抗体(编号16)的人源化抗体不限于特定的人源化抗体，只要人源化抗体保留CL069707抗体、CL069463抗体、CL069066抗体、CL069439抗体的所有6个CDR序列并且具有内化活性。可以进一步修饰该人源化抗体的一些CDR的氨基酸序列，只要其具有内化活性。
例如，CL069707抗体的人源化抗体的具体实例可以包括以下的任何给定组合：轻链，其包含由选自以下的任何一种氨基酸序列组成的轻链可变区：(1)SEQ ID NO:23中显示的氨基酸序列，(2)与上述氨基酸序列(1)具有至少95％或更高的同一性的氨基酸序列(优选与除了每个CDR序列以外的框架区的序列具有至少95％或更高的序列同一性的氨基酸序列)，和(3)包含上述氨基酸序列(1)中的一个或几个氨基酸的缺失、取代或添加的氨基酸序列；和重链，其包含由选自以下的任何一种氨基酸序列组成的重链可变区：(4)SEQ ID NO:18中显示的氨基酸序列，(5)与上述氨基酸序列(4)具有至少95％或更高的同一性的氨基酸序列(优选与除了每个CDR序列以外的框架区的序列具有至少95％或更高的序列同一性的氨基酸序列)，和(6)包含上述氨基酸序列(4)中的一个或几个氨基酸的缺失、取代或添加的氨基酸序列。
例如，CL069463抗体的人源化抗体的具体实例可以包括以下的任何给定组合：轻链，其包含由选自以下的任何一种氨基酸序列组成的轻链可变区：(1)SEQ ID NO:46中显示的氨基酸序列，(2)与上述氨基酸序列(1)具有至少95％或更高的同一性的氨基酸序列(优选与除了每个CDR序列以外的框架区的序列具有至少95％或更高的序列同一性的氨基酸序列)，和(3)包含上述氨基酸序列(1)中的一个或几个氨基酸的缺失、取代或添加的氨基酸序列；和重链，其包含由选自以下的任何一种氨基酸序列组成的重链可变区：(4)SEQ ID NO:41中显示的氨基酸序列，(5)与上述氨基酸序列(4)具有至少95％或更高的同一性的氨基酸序列(优选与除了每个CDR序列以外的框架区的序列具有至少95％或更高的序列同一性的氨基酸序列)，和(6)包含上述氨基酸序列(4)中的一个或几个氨基酸的缺失、取代或添加的氨基酸序列。
例如，CL069066抗体的人源化抗体的具体实例可以包括以下的任何给定组合：轻链，其包含由选自以下的任何一种氨基酸序列组成的轻链可变区：(1)SEQ ID NO:96中显示的氨基酸序列，(2)与上述氨基酸序列(1)具有至少95％或更高的同一性的氨基酸序列(优选与除了每个CDR序列以外的框架区的序列具有至少95％或更高的序列同一性的氨基酸序列)，和(3)包含上述氨基酸序列(1)中的一个或几个氨基酸的缺失、取代或添加的氨基酸序列；和重链，其包含由选自以下的任何一种氨基酸序列组成的重链可变区：(4)SEQ ID NO:95中显示的氨基酸序列，(5)与上述氨基酸序列(4)具有至少95％或更高的同一性的氨基酸序列(优选与除了每个CDR序列以外的框架区的序列具有至少95％或更高的序列同一性的氨基酸序列)，和(6)包含上述氨基酸序列(4)中的一个或几个氨基酸的缺失、取代或添加的氨基酸序列。
例如，CL069439抗体的人源化抗体的具体实例可以包括以下的任何给定组合：轻链，其包含由选自以下的任何一种氨基酸序列组成的轻链可变区：(1)SEQ ID NO:104中显示的氨基酸序列，(2)与上述氨基酸序列(1)具有至少95％或更高的同一性的氨基酸序列(优选与除了每个CDR序列以外的框架区的序列具有至少95％或更高的序列同一性的氨基酸序列)，和(3)包含上述氨基酸序列(1)中的一个或几个氨基酸的缺失、取代或添加的氨基酸序列；和重链，其包含由选自以下的任何一种氨基酸序列组成的重链可变区：(4)SEQ IDNO:103中显示的氨基酸序列，(5)与上述氨基酸序列(4)具有至少95％或更高的同一性的氨基酸序列(优选与除了每个CDR序列以外的框架区的序列具有至少95％或更高的序列同一性的氨基酸序列)，和(6)包含上述氨基酸序列(4)中的一个或几个氨基酸的缺失、取代或添加的氨基酸序列。
示例性的，CL069707抗体的人源化抗体可以包括以下组合：轻链，其包含SEQ IDNO:34或SEQ ID NO:36所示氨基酸序列组成的轻链可变区；和重链，其包含SEQ ID NO:27或SEQ ID NO:29所示氨基酸序列组成的重链可变区。
示例性的，CL069463抗体的人源化抗体可以包括以下组合：轻链，其包含SEQ IDNO:58、SEQ ID NO:63或SEQ ID NO:65所示氨基酸序列组成的轻链可变区；和重链，其包含SEQ ID NO:51或SEQ ID NO:54所示氨基酸序列组成的重链可变区。
本申请中的氨基酸取代优选为保守氨基酸取代。保守氨基酸取代是在与某些氨基酸侧链相关的氨基酸组内发生的取代。优选的氨基酸基团如下：酸性基团＝天冬氨酸和谷氨酸；碱性基团＝赖氨酸、精氨酸和组氨酸；非极性基团＝丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸和色氨酸；和不带电极性家族＝甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、半胱氨酸、丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸。其他优选的氨基酸基团如下：脂肪族羟基基团＝丝氨酸和苏氨酸；含酰胺基团＝天冬酰胺和谷氨酰胺；脂肪族基团＝丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸；和芳香族基团＝苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸。优选进行这种氨基酸取代而不损害具有原始氨基酸序列的物质的特性。
本申请的抗体还包括抗体的修饰。所述修饰用于表示本申请的抗体，其是化学或生物学修饰的。这种化学修饰的实例包括化学部分与氨基酸骨架的结合，以及N-连接或O-连接的碳水化合物链的化学修饰。这种生物学修饰的实例包括已经历翻译后修饰的抗体(例如，N-连接或O-连接的糖基化、N-末端或C-末端加工、脱酰胺作用、天冬氨酸的异构化、甲硫氨酸的氧化和N-末端谷氨酰胺或N-末端谷氨酸转化为焦谷氨酸)，和由于允许使用原核生物宿主细胞表达而向其N-末端添加甲硫氨酸残基的抗体。另外，这种修饰意味着还包括能够检测或分离本申请的抗体或抗原的标记抗体，例如酶标记抗体，荧光标记抗体和亲和标记抗体。本申请的抗体的这种修饰可用于改善抗体的血液中的稳定性和保留、降低抗原性、检测或分离抗体或抗原等。
此外，通过调节与本申请的抗体结合的糖链修饰(糖基化、去岩藻糖基化等)，可以增强抗体依赖性细胞细胞毒性活性。作为调节抗体的糖链修饰的技术，国际公开号WO1999/54342、WO2000/61739和WO2002/31140等中描述的那些是已知的，但是技术不限于此。本申请的抗体还包括其中已经调节上述糖链修饰的抗体。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含VH中的至少一个CDR，所述VH包含SEQ ID NO:18或SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含VL中的至少一个CDR，所述VL包含SEQ ID NO:23或SEQ ID NO:46所示的氨基酸序列。
例如，所述的分离的抗原结合蛋白可以包含VH中的至少一个CDR，所述VH包含SEQID NO:18所示的氨基酸序列，且所述的分离的抗原结合蛋白包含VL中的至少一个CDR，所述VL包含SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列。
例如，所述的分离的抗原结合蛋白可以包含VH中的至少一个CDR，所述VH包含SEQID NO:41所示的氨基酸序列，且所述的分离的抗原结合蛋白包含VL中的至少一个CDR，所述VL包含SEQ ID NO:46所示的氨基酸序列。
例如，所述的分离的抗原结合蛋白可以包含VH中的至少一个CDR，所述VH包含SEQID NO:95所示的氨基酸序列，且所述的分离的抗原结合蛋白包含VL中的至少一个CDR，所述VL包含SEQ ID NO:96所示的氨基酸序列。
例如，所述的分离的抗原结合蛋白可以包含VH中的至少一个CDR，所述VH包含SEQID NO:103所示的氨基酸序列，且所述的分离的抗原结合蛋白包含VL中的至少一个CDR，所述VL包含SEQ ID NO:104所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含VH，其中所述VH包含HCDR1、HCDR2、HCDR3，所述HCDR1包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。例如，所述HCDR1可以包含SEQ ID NO:2，SEQ ID NO:8，SEQ ID NO:89或SEQ ID NO:97所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含VH，其中所述VH包含HCDR1、HCDR2、HCDR3，所述HCDR2包含SEQ ID NO:3，SEQ ID NO:9，SEQ ID NO:90或SEQ ID NO:98所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含VH，其中所述VH包含HCDR1、HCDR2、HCDR3，所述HCDR3包含SEQ ID NO:4，SEQ ID NO:10，SEQ ID NO:91或SEQ ID NO:99所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含VH，其中所述VH包含HCDR1，HCDR2和HCDR3，所述HCDR1包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列，所述HCDR3包含SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列。
例如，所述的分离的抗原结合蛋白包含VH，其中所述VH包含HCDR1，HCDR2和HCDR3，其中所述HCDR1可以包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，所述HCDR2可以包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列，所述HCDR3可以包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列；或
所述HCDR1可以包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列，所述HCDR2可以包含SEQIDNO:9所示的氨基酸序列，所述HCDR3可以包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列；或
所述HCDR1包含SEQ ID NO:89所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:90所示的氨基酸序列，所述HCDR3包含SEQ ID NO:91所示的氨基酸序列；或
所述HCDR1包含SEQ ID NO:97所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:98所示的氨基酸序列，所述HCDR3包含SEQ ID NO:99所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含VH，其中所述VH包括框架区HFR1，所述HFR1的C末端与所述HCDR1的N末端直接或间接相连，且所述HFR1包含SEQ IDNO:14、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:47或SEQ ID NO:52所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含VH，其中所述VH包括框架区HFR2，所述HFR2位于所述HCDR1与所述HCDR2之间，且所述HFR2包含SEQ ID NO:15、SEQ IDNO:28、SEQ ID NO:38或SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含VH，其中所述VH包括框架区HFR3，所述HFR3位于所述HCDR2与所述HCDR3之间，且所述HFR3包含SEQ ID NO:16、SEQ IDNO:25、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:49或SEQ ID NO:53所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含VH，其中所述VH包括框架区HFR4，所述HFR4的N末端与所述HCDR3的C末端直接或间接相连，且所述HFR4包含SEQ IDNO:17、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:40或SEQ ID NO:50所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含VH，其中所述VH包括框架区HFR1，HFR2，HFR3和HFR4，所述HFR1的C末端与所述HCDR1的N末端直接或间接相连，所述HFR2位于所述HCDR1与所述HCDR2之间，所述HFR3位于所述HCDR2与所述HCDR3之间，所述HFR4的N末端与所述HCDR3的C末端直接或间接相连；其中，所述HFR1包含SEQ ID NO:14所示的氨基酸序列，所述HFR2包含SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列，所述HFR3包含SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列，HFR4包含SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列；或
所述HFR1包含SEQ ID NO:24所示的氨基酸序列，所述HFR2包含SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列，所述HFR3包含SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列，HFR4包含SEQ ID NO:26所示的氨基酸序列；或
所述HFR1包含SEQ ID NO:24所示的氨基酸序列，所述HFR2包含SEQ ID NO:28所示的氨基酸序列，所述HFR3包含SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列，HFR4包含SEQ ID NO:26所示的氨基酸序列；或
所述HFR1包含SEQ ID NO:37所示的氨基酸序列，所述HFR2包含SEQ ID NO:38所示的氨基酸序列，所述HFR3包含SEQ ID NO:39所示的氨基酸序列，HFR4包含SEQ ID NO:40所示的氨基酸序列；或
所述HFR1包含SEQ ID NO:47所示的氨基酸序列，所述HFR2包含SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列，所述HFR3包含SEQ ID NO:49所示的氨基酸序列，HFR4包含SEQ ID NO:50所示的氨基酸序列；或
所述HFR1包含SEQ ID NO:52所示的氨基酸序列，所述HFR2包含SEQ ID NO:38所示的氨基酸序列，所述HFR3包含SEQ ID NO:53所示的氨基酸序列，HFR4包含SEQ ID NO:26所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含VH，其中所述VH包含SEQ IDNO:18、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:95或SEQ ID NO:103所示的氨基酸序列或包含与SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:67、SEQID NO:95或SEQ ID NO:103所示的氨基酸序列具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或99.5％同一性的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含VH，其中所述VH包含SEQ IDNO:27，SEQ ID NO:29，SEQ ID NO:51或SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列或包含与SEQIDNO:27，SEQ ID NO:29，SEQ ID NO:51或SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或99.5％同一性的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含抗体重链恒定区。
在某些实施方式中，其中所述抗体重链恒定区包括源自人IgG的恒定区。例如，源自人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的恒定区。
又例如，所述抗体重链恒定区可以包括IgG1的恒定区，可以包含SEQ ID NO:70所示的氨基酸序列。
例如，所述分离的抗原结合蛋白可以包含VH，其中所述VH包含SEQ ID NO:18、SEQID NO:41、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:95或SEQ ID NO:103所示的氨基酸序列，且还包含源自人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的恒定区。
又例如，所述分离的抗原结合蛋白可以包含VH，其中所述VH包含SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:51或SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列，且还包含源自人IgG1的恒定区。
又例如，所述分离的抗原结合蛋白可以包含抗体重链，所述抗体重链包含SEQ IDNO:72、SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:85或SEQ ID NO:87所示的氨基酸序列或包含与SEQ IDNO:72、SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:85或SEQ ID NO:87所示的氨基酸序列具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或99.5％同一性的氨基酸序列。
又例如，所述分离的抗原结合蛋白可以包含抗体重链，所述抗体重链包含SEQ IDNO:74、SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:78或SEQ ID NO:79所示的氨基酸序列或包含与SEQ IDNO:74、SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:78或SEQ ID NO:79所示的氨基酸序列具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或99.5％同一性的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含VL，其中所述VL包含LCDR1、LCDR2、LCDR3，所述LCDR1包含SEQ ID NO:5，SEQ ID NO:11，SEQ ID NO:92或SEQ ID NO:100所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含VL，其中所述VL包含LCDR1、LCDR2、LCDR3，所述LCDR2包含SEQ ID NO:6，SEQ ID NO:12，SEQ ID NO:93或SEQ ID NO:101所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含VL，其中所述VL包含LCDR1、LCDR2、LCDR3，所述LCDR3包含SEQ ID NO:7，SEQ ID NO:13，SEQ ID NO:94或SEQ ID NO:102所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含VL，其中所述VL包含LCDR1，LCDR2和LCDR3，所述LCDR1包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列，所述LCDR2包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列，所述LCDR3包含SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列；或
所述LCDR1包含SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列，所述LCDR2包含SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列，所述LCDR3包含SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列；或
所述LCDR1包含SEQ ID NO:92所示的氨基酸序列，所述LCDR2包含SEQ ID NO:93所示的氨基酸序列，所述LCDR3包含SEQ ID NO:94所示的氨基酸序列；或
所述LCDR1包含SEQ ID NO:100所示的氨基酸序列，所述LCDR2包含SEQ ID NO:101所示的氨基酸序列，所述LCDR3包含SEQ ID NO:102所示的氨基酸序列。
例如，所述的分离的抗原结合蛋白可以包含VH和VL，其中所述VH可以包含HCDR1，HCDR2和HCDR3，所述VL可以包含LCDR1，LCDR2和LCDR3；其中所述HCDR1包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列，所述HCDR3包含SEQ IDNO:4所示的氨基酸序列，所述LCDR1包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列，所述LCDR2包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列，所述LCDR3包含SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列；或
所述HCDR1包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列，所述HCDR3包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列，所述LCDR1包含SEQ IDNO:11所示的氨基酸序列，所述LCDR2包含SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列，所述LCDR3包含SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列。
又例如，所述的分离的抗原结合蛋白可以包含VH和VL，其中所述VH可以包含HCDR1，HCDR2和HCDR3，所述VL可以包含LCDR1，LCDR2和LCDR3；其中所述HCDR1包含SEQ IDNO:2所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列，所述HCDR3包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列，所述LCDR1包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列，所述LCDR2包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列，所述LCDR3包含SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列；或
所述HCDR1包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列，所述HCDR3包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列，所述LCDR1包含SEQ IDNO:11所示的氨基酸序列，所述LCDR2包含SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列，所述LCDR3包含SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列；或
所述HCDR1包含SEQ ID NO:89所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:90所示的氨基酸序列，所述HCDR3包含SEQ ID NO:91所示的氨基酸序列，所述LCDR1包含SEQ IDNO:92所示的氨基酸序列，所述LCDR2包含SEQ ID NO:93所示的氨基酸序列，所述LCDR3包含SEQ ID NO:94所示的氨基酸序列；或
所述HCDR1包含SEQ ID NO:97所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:98所示的氨基酸序列，所述HCDR3包含SEQ ID NO:99所示的氨基酸序列，所述LCDR1包含SEQ IDNO:100所示的氨基酸序列，所述LCDR2包含SEQ ID NO:101所示的氨基酸序列，所述LCDR3包含SEQ ID NO:102所示的氨基酸序列。
本申请的分离的抗原结合蛋白还可以包括以下抗原结合蛋白：所述抗原结合蛋白包含抗体重链可变区和轻链可变区，其中所述抗体抗体重链可变区和/或轻链可变区种的任何1至3个CDR发生一个或多个氨基酸的取代、缺失和/或添加，且所述抗原结合蛋白仍具有与本申请中描述的每种抗CDH6抗体(如CL069707抗体，CL069463抗体，Ch069707抗体，Ch069463抗体，CL069066抗体，CL069439抗体)等同的生物活性。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含VL，其中所述VL包括框架区LFR1，所述LFR1的C末端与所述LCDR1的N末端直接或间接相连，且所述LFR1包含SEQ IDNO:19、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:59或SEQ ID NO:64所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含VL，其中所述VL包括框架区LFR2，所述LFR2位于所述LCDR1与所述LCDR2之间，且所述LFR2包含SEQ ID NO:20、SEQ IDNO:31、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:56或SEQ ID NO:60所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含VL，其中所述VL包括框架区LFR3，所述LFR3位于所述LCDR2与所述LCDR3之间，且所述LFR3包含SEQ ID NO:21、SEQ IDNO:32、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:57或SEQ ID NO:61所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含VL，其中所述VL包括框架区LFR4，所述LFR4的N末端与所述LCDR3的C末端直接或间接相连，且所述LFR4包含S SEQIDNO:22、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:45或SEQ ID NO:62所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含VL，其中所述VL包括框架区LFR1，LFR2，LFR3和LFR4，其中所述LFR1的C末端与所述LCDR1的N末端直接或间接相连，所述LFR2位于所述LCDR1与所述LCDR2之间，所述LFR3位于所述LCDR2与所述LCDR3之间，所述LFR4的N末端与所述LCDR3的C末端直接或间接相连；其中所述LFR1包含SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列，所述LFR2包含SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列，所述LFR3包含SEQ ID NO:21所示的氨基酸序列，所述LFR4包含SEQ ID NO:22所示的氨基酸序列；或
所述LFR1包含SEQ ID NO:30所示的氨基酸序列，所述LFR2包含SEQ ID NO:31所示的氨基酸序列，所述LFR3包含SEQ ID NO:32所示的氨基酸序列，所述LFR4包含SEQ IDNO:33所示的氨基酸序列；或
所述LFR1包含SEQ ID NO:30所示的氨基酸序列，所述LFR2包含SEQ ID NO:31所示的氨基酸序列，所述LFR3包含SEQ ID NO:35所示的氨基酸序列，所述LFR4包含SEQ IDNO:33所示的氨基酸序列；或
所述LFR1包含SEQ ID NO:42所示的氨基酸序列，所述LFR2包含SEQ ID NO:43所示的氨基酸序列，所述LFR3包含SEQ ID NO:44所示的氨基酸序列，所述LFR4包含SEQ IDNO:45所示的氨基酸序列；或
所述LFR1包含SEQ ID NO:55所示的氨基酸序列，所述LFR2包含SEQ ID NO:56所示的氨基酸序列，所述LFR3包含SEQ ID NO:57所示的氨基酸序列，所述LFR4包含SEQ IDNO:45所示的氨基酸序列；或
所述LFR1包含SEQ ID NO:59所示的氨基酸序列，所述LFR2包含SEQ ID NO:60所示的氨基酸序列，所述LFR3包含SEQ ID NO:61所示的氨基酸序列，所述LFR4包含SEQ IDNO:62所示的氨基酸序列；或
所述LFR1包含SEQ ID NO:64所示的氨基酸序列，所述LFR2包含SEQ ID NO:60所示的氨基酸序列，所述LFR3包含SEQ ID NO:61所示的氨基酸序列，所述LFR4包含SEQ IDNO:62所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含VL，其中所述VL包含SEQ IDNO:23、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:96或SEQ ID NO:104所示的氨基酸序列或包含与SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:69、SEQID NO:96或SEQ ID NO:104所示的氨基酸序列具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或99.5％同一性的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包含VL，其中所述VL包含SEQ IDNO:34，SEQ ID NO:36，SEQ ID NO:58，SEQ ID NO:63或SEQ ID NO:65所示的氨基酸序列或包含与SEQ ID NO:34，SEQ ID NO:36，SEQ ID NO:58，SEQ ID NO:63或SEQ ID NO:65所示的氨基酸序列具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或99.5％同一性的氨基酸序列。
例如，所述的分离的抗原结合蛋白可以包含VH和VL，其中所述VH包含SEQ ID NO:18所示的氨基酸序列或包含与SEQ ID NO:18所示的氨基酸序列具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或99.5％同一性的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列或包含与SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或99.5％同一性的氨基酸序列；或
所述VH包含SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列或包含与SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或99.5％同一性的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:46所示的氨基酸序列或包含与SEQ IDNO:46所示的氨基酸序列具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或99.5％同一性的氨基酸序列；或
所述VH包含SEQ ID NO:66所示的氨基酸序列或包含与SEQ ID NO:66所示的氨基酸序列具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或99.5％同一性的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:68所示的氨基酸序列或包含与SEQ IDNO:68所示的氨基酸序列具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或99.5％同一性的氨基酸序列；或
所述VH包含SEQ ID NO:67所示的氨基酸序列或包含与SEQ ID NO:67所示的氨基酸序列具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或99.5％同一性的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:69所示的氨基酸序列或包含与SEQ IDNO:69所示的氨基酸序列具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或99.5％同一性的氨基酸序列。
又例如，所述的分离的抗原结合蛋白可以包含VH和VL，其中所述VH包含SEQ IDNO:27所示的氨基酸序列或包含与SEQ ID NO:27所示的氨基酸序列具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或99.5％同一性的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:34所示的氨基酸序列或包含与SEQ ID NO:34所示的氨基酸序列具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或99.5％同一性的氨基酸序列；或
所述VH包含SEQ ID NO:27所示的氨基酸序列或包含与SEQ ID NO:27所示的氨基酸序列具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或99.5％同一性的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:36所示的氨基酸序列或包含与SEQ IDNO:36所示的氨基酸序列具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或99.5％同一性的氨基酸序列；或
所述VH包含SEQ ID NO:29所示的氨基酸序列或包含与SEQ ID NO:29所示的氨基酸序列具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或99.5％同一性的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:34所示的氨基酸序列或包含与SEQ IDNO:34所示的氨基酸序列具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或99.5％同一性的氨基酸序列；或
所述VH包含SEQ ID NO:29所示的氨基酸序列或包含与SEQ ID NO:29所示的氨基酸序列具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或99.5％同一性的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:36所示的氨基酸序列或包含与SEQ IDNO:36所示的氨基酸序列具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或99.5％同一性的氨基酸序列。
又例如，所述的分离的抗原结合蛋白可以包含VH和VL，其中所述VH包含SEQ IDNO:51所示的氨基酸序列或包含与SEQ ID NO:51所示的氨基酸序列具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或99.5％同一性的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:58所示的氨基酸序列或包含与SEQ ID NO:58所示的氨基酸序列具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或99.5％同一性的氨基酸序列；或
所述VH包含SEQ ID NO:51所示的氨基酸序列或包含与SEQ ID NO:51所示的氨基酸序列具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或99.5％同一性的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:63所示的氨基酸序列或包含与SEQ IDNO:63所示的氨基酸序列具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或99.5％同一性的氨基酸序列；或
所述VH包含SEQ ID NO:51所示的氨基酸序列或包含与SEQ ID NO:51所示的氨基酸序列具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或99.5％同一性的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:65所示的氨基酸序列或包含与SEQ IDNO:65所示的氨基酸序列具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或99.5％同一性的氨基酸序列；或
所述VH包含SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列或包含与SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或99.5％同一性的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:58所示的氨基酸序列或包含与SEQ IDNO:58所示的氨基酸序列具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或99.5％同一性的氨基酸序列；或
所述VH包含SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列或包含与SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或99.5％同一性的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:63所示的氨基酸序列或包含与SEQ IDNO:63所示的氨基酸序列具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或99.5％同一性的氨基酸序列；或
所述VH包含SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列或包含与SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或99.5％同一性的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:65所示的氨基酸序列或包含与SEQ IDNO:65所示的氨基酸序列具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或99.5％同一性的氨基酸序列。
另一方面，本申请提供一种所述的分离的抗原结合蛋白，其包括：i)包含V的LCDR1、LCDR2和LCDR3和ii)包含VH的HCDR1、HCDR2和HCDR3；
其中所述VH包含SEQ ID NO:18所示的氨基酸序列或包含与SEQ ID NO:18所示的氨基酸序列具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或99.5％同一性的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列或包含与SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或99.5％同一性的氨基酸序列；或
所述VH包含SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列或包含与SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或99.5％同一性的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:46所示的氨基酸序列或包含与SEQ IDNO:46所示的氨基酸序列具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或99.5％同一性的氨基酸序列；或
所述VH包含SEQ ID NO:66所示的氨基酸序列或包含与SEQ ID NO:66所示的氨基酸序列具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或99.5％同一性的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:68所示的氨基酸序列或包含与SEQ IDNO:68所示的氨基酸序列具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或99.5％同一性的氨基酸序列；或
所述VH包含SEQ ID NO:67所示的氨基酸序列或包含与SEQ ID NO:67所示的氨基酸序列具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或99.5％同一性的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:69所示的氨基酸序列或包含与SEQ IDNO:69所示的氨基酸序列具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或99.5％同一性的氨基酸序列。
又例如，所述的分离的抗原结合蛋白可以包含VH和VL，其中所述VH包含SEQ IDNO:27所示的氨基酸序列或包含与SEQ ID NO:27所示的氨基酸序列具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或99.5％同一性的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:34所示的氨基酸序列或包含与SEQ ID NO:34所示的氨基酸序列具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或99.5％同一性的氨基酸序列；或
所述VH包含SEQ ID NO:27所示的氨基酸序列或包含与SEQ ID NO:27所示的氨基酸序列具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或99.5％同一性的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:36所示的氨基酸序列或包含与SEQ IDNO:36所示的氨基酸序列具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或99.5％同一性的氨基酸序列；或
所述VH包含SEQ ID NO:29所示的氨基酸序列或包含与SEQ ID NO:29所示的氨基酸序列具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或99.5％同一性的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:34所示的氨基酸序列或包含与SEQ IDNO:34所示的氨基酸序列具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或99.5％同一性的氨基酸序列；或
所述VH包含SEQ ID NO:29所示的氨基酸序列或包含与SEQ ID NO:29所示的氨基酸序列具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或99.5％同一性的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:36所示的氨基酸序列或包含与SEQ IDNO:36所示的氨基酸序列具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或99.5％同一性的氨基酸序列；或
所述VH包含SEQ ID NO:51所示的氨基酸序列或包含与SEQ ID NO:51所示的氨基酸序列具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或99.5％同一性的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:58所示的氨基酸序列或包含与SEQ IDNO:58所示的氨基酸序列具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或99.5％同一性的氨基酸序列；或
所述VH包含SEQ ID NO:51所示的氨基酸序列或包含与SEQ ID NO:51所示的氨基酸序列具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或99.5％同一性的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:63所示的氨基酸序列或包含与SEQ IDNO:63所示的氨基酸序列具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或99.5％同一性的氨基酸序列；或
所述VH包含SEQ ID NO:51所示的氨基酸序列或包含与SEQ ID NO:51所示的氨基酸序列具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或99.5％同一性的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:65所示的氨基酸序列或包含与SEQ IDNO:65所示的氨基酸序列具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或99.5％同一性的氨基酸序列；或
所述VH包含SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列或包含与SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或99.5％同一性的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:58所示的氨基酸序列或包含与SEQ IDNO:58所示的氨基酸序列具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或99.5％同一性的氨基酸序列；或
所述VH包含SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列或包含与SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或99.5％同一性的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:63所示的氨基酸序列或包含与SEQ IDNO:63所示的氨基酸序列具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或99.5％同一性的氨基酸序列；或
所述VH包含SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列或包含与SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或99.5％同一性的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:65所示的氨基酸序列或包含与SEQ IDNO:65所示的氨基酸序列具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或99.5％同一性的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的分离的抗原结合蛋白包括抗体轻链恒定区。例如，所述抗体轻链恒定区可以包括人Igκ恒定区或人Igλ恒定区。
又例如，所述抗体轻链恒定区可以包括Igκ的恒定区，可以包含SEQ ID NO:71所示的氨基酸序列。
又例如，所述的分离的抗原结合蛋白包含VL，其中所述VL可以包含SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:96或SEQ ID NO:104所示的氨基酸序列，且所述的分离的抗原结合蛋白还可以包括人Igκ恒定区或人Igλ恒定区。
又例如，所述的分离的抗原结合蛋白包含VL，其中所述VL可以包含SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:63或SEQ ID NO:65所示的氨基酸序列，且所述的分离的抗原结合蛋白还可以包括人Igκ恒定区。
又例如，所述分离的抗原结合蛋白可以包含抗体轻链，所述抗体轻链包含SEQ IDNO:73、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:86或SEQ ID NO:88所示的氨基酸序列或包含与SEQ IDNO:73、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:86或SEQ ID NO:88所示的氨基酸序列具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或99.5％同一性的氨基酸序列。
又例如，所述分离的抗原结合蛋白可以包含抗体轻链，所述抗体轻链包含SEQ IDNO:76、SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:83或SEQ ID NO:84所示的氨基酸序列或包含与SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:83或SEQ ID NO:84所示的氨基酸序列具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或99.5％同一性的氨基酸序列。
又例如，所述的分离抗原结合蛋白包括抗体重链和轻链，所述抗体重链可以包含SEQ IDNO:72所示的氨基酸序列，且所述抗体轻链可以包含SEQ ID NO:73所示的氨基酸序列，该抗体命名为Ch069707抗体。
又例如，所述的分离抗原结合蛋白包括抗体重链和轻链，所述抗体重链可以包含SEQ IDNO:80所示的氨基酸序列，且所述抗体轻链可以包含SEQ ID NO:81所示的氨基酸序列，该抗体命名为Ch069463抗体。
又例如，所述的分离抗原结合蛋白包括抗体重链和轻链，所述抗体重链可以包含SEQ IDNO:85所示的氨基酸序列，且所述抗体轻链可以包含SEQ ID NO:86所示的氨基酸序列，该抗体命名为CL069707-H(m)L(n)抗体，其中m为1或2，n为1或2。
又例如，所述的分离抗原结合蛋白包括抗体重链和轻链，所述抗体重链可以包含SEQ IDNO:74所示的氨基酸序列，且所述抗体轻链可以包含SEQ ID NO:76所示的氨基酸序列，该抗体命名为CL069707-H1L1抗体。
又例如，所述的分离抗原结合蛋白包括抗体重链和轻链，所述抗体重链可以包含SEQ IDNO:74所示的氨基酸序列，且所述抗体轻链可以包含SEQ ID NO:77所示的氨基酸序列，该抗体命名为CL069707-H1L2抗体。
又例如，所述的分离抗原结合蛋白包括抗体重链和轻链，所述抗体重链可以包含SEQ IDNO:75所示的氨基酸序列，且所述抗体轻链可以包含SEQ ID NO:76所示的氨基酸序列，该抗体命名为CL069707-H2L1抗体。
又例如，所述的分离抗原结合蛋白包括抗体重链和轻链，所述抗体重链可以包含SEQ IDNO:75所示的氨基酸序列，且所述抗体轻链可以包含SEQ ID NO:77所示的氨基酸序列，该抗体命名为CL069707-H2L2抗体。
又例如，所述的分离抗原结合蛋白包括抗体重链和轻链，所述抗体重链可以包含SEQ IDNO:87所示的氨基酸序列，且所述抗体轻链可以包含SEQ ID NO:88所示的氨基酸序列，该抗体命名为CL069463-H(m)L(n)抗体，其中m为1或2，n为1，2或3。
又例如，所述的分离抗原结合蛋白包括抗体重链和轻链，所述抗体重链可以包含SEQ IDNO:78所示的氨基酸序列，且所述抗体轻链可以包含SEQ ID NO:82所示的氨基酸序列，该抗体命名为CL069463-H1L1抗体。
又例如，所述的分离抗原结合蛋白包括抗体重链和轻链，所述抗体重链可以包含SEQ IDNO:78所示的氨基酸序列，且所述抗体轻链可以包含SEQ ID NO:83所示的氨基酸序列，该抗体命名为CL069463-H1L2抗体。
又例如，所述的分离抗原结合蛋白包括抗体重链和轻链，所述抗体重链可以包含SEQ IDNO:78所示的氨基酸序列，且所述抗体轻链可以包含SEQ ID NO:84所示的氨基酸序列，该抗体命名为CL069463-H1L3抗体。
又例如，所述的分离抗原结合蛋白包括抗体重链和轻链，所述抗体重链可以包含SEQ IDNO:79所示的氨基酸序列，且所述抗体轻链可以包含SEQ ID NO:82所示的氨基酸序列，该抗体命名为CL069707-H2L1抗体。
又例如，所述的分离抗原结合蛋白包括抗体重链和轻链，所述抗体重链可以包含SEQ IDNO:79所示的氨基酸序列，且所述抗体轻链可以包含SEQ ID NO:83所示的氨基酸序列，该抗体命名为CL069707-H2L2抗体。
又例如，所述的分离抗原结合蛋白包括抗体重链和轻链，所述抗体重链可以包含SEQ IDNO:79所示的氨基酸序列，且所述抗体轻链可以包含SEQ ID NO:84所示的氨基酸序列，该抗体命名为CL069707-H2L3抗体。
另一方面，本申请提供了一种抗原结合蛋白，其与前述的分离的抗原结合蛋白竞争性结合CDH6(例如人CDH6)。
另一方面，本申请提供一种分离的多肽，其包含前述的分离的抗原结合蛋白。
分离的核酸分子、载体和细胞
另一方面，本申请提供分离的一种或多种核酸分子，其编码前述的分离的抗原结合蛋白或前述多肽。
在本申请中，术语“核酸分子”通常是指包括DNA分子和RNA分子及其人工变体(例如，肽核酸)，不管是单链还是双链的。这些核酸可以编码本申请抗体的一条或两条链，或其片段或衍生物。本申请的核酸分子还包括足以用作杂交探针的多核苷酸；用于对编码多肽的多核苷酸进行鉴别、分析、突变或扩增的PCR引物或测序引物；用于抑制多核苷酸的表达的反义核酸；以及互补序列。这些核酸可以是任何长度。它们可以为例如5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、75、100、125、150、175、200、250、300、350、400、450、500、750、1,000、1,500、3,000、5,000或更多个核苷酸长度，和/或可以包含一个或多个另外的序列，例如调控序列，和/或作为一个更大核酸(例如载体)的一部分。应理解的是，这些核酸序列可以进行进一步操作以产生调节剂，包括嵌合、人源化或完全人类抗体。更明确地说，可以使用分离的核酸分子(它可以是经过修饰的)来克隆这些制造抗体的恒定区和可变区序列，如U.S.P.N.7,709,611中所描述。
另一方面，本申请提供一种载体，其包含前述的核酸分子。
在本申请中，术语“载体”通常是指能够转运与它连接的另一核酸的核酸分子。一类载体是“质粒”，其指其他DNA区段可以连接入其中的环状双链DNA环。另一类载体是病毒载体，其中其他DNA区段可以连接入病毒基因组。某些载体能够在它们所引入的宿主细胞中自主复制(例如，具有细菌复制起点的细菌载体和附加型哺乳动物载体)。其他载体(例如非附加型哺乳动物载体)可以在引入宿主细胞时整合入宿主细胞的基因组，从而与宿主基因组一起复制，如不能自主复制的裸RNA多核苷酸、裸DNA多核苷酸、在同一链中由DNA和RNA构成的多核苷酸、聚-赖氨酸-偶联的DNA或RNA、肽-偶联的DNA或RNA、脂质体-偶联的DNA等。此外，某些载体能够指导与它们有效连接的基因的表达。这类载体在本文中称为“重组表达载体”(或简称“表达载体”)。一般而言，用于重组DNA技术中的表达载体通常是质粒的形式。
另一方面，本申请提供一种细胞，所述细胞包含前述的核酸分子或前述的载体，或所述细胞表达根据前述的抗原结合蛋白或前述的多肽。
在本申请中，术语“细胞”通常是指可以或已经含有包括本申请所述的核酸分子的质粒或载体，或者能够表达本申请所述的抗原结合蛋白或其抗原结合片段的个体细胞，细胞系或细胞培养物。所述细胞可以包括单个细胞的子代。由于天然的，意外的或故意的突变，子代细胞与原始亲本细胞在形态上或在基因组上可能不一定完全相同，但能够表达本申请所述的融合蛋白或其抗原结合片段即可。所述细胞可以通过使用本申请所述的载体体外转染细胞而得到。所述细胞可以是原核细胞(例如大肠杆菌)，也可以是真核细胞(例如酵母细胞，例如COS细胞，中国仓鼠卵巢(CHO)细胞，HeLa细胞，HEK293细胞，COS-1细胞，NS0细胞或骨髓瘤细胞)。
抗体的制备方法
另一方面，本申请还提供了制备前述的分离的抗原结合蛋白的方法，所述方法包括在使得前述的分离的抗原结合蛋白表达的条件下，培养前述的细胞。
在某些实施方式中，还包括从上述细胞的培养物中收集抗体或其抗原结合片段。
在某些实施方式中，可以将获得的抗体纯化至同质状态。为了分离和纯化抗体，可以使用用于普通蛋白的分离和纯化方法。例如，适当选择柱色谱、过滤、超滤、盐析、透析、制备型聚丙烯酰胺凝胶电泳和等电聚焦，并且使之彼此组合，以便可以分离和纯化抗体(Strategies for Protein Purification and Characterization:ALaboratory CourseManual,Daniel R.Marshak等人编,Cold Spring Harbor Laboratory Press(1996)；和Antibodies:A Laboratory Manual.Ed Harlow和David Lane，Cold Spring HarborLaboratory(1988))，但分离和纯化方法的实例不限于此。
一旦分离出抗体基因，可以使用宿主细胞和表达载体的适当组合将基因导入适当的宿主细胞以产生抗体。抗体基因的具体实例可以是编码本申请中描述的抗体的重链序列的基因和编码其中描述的抗体的轻链序列的基因的组合。在转化宿主细胞后，可以将这种重链序列基因和轻链序列基因插入单个表达载体中，或者可以将这些基因各自插入不同的表达载体中。
当真核细胞用作宿主细胞时，可以使用动物细胞、植物细胞或真核微生物。具体地，动物细胞的实例可包括哺乳动物细胞，例如作为猴细胞的COS细胞(Gluzman，Y.，Cell(1981)23，p.175-182，ATCC CRL-1650)、小鼠成纤维细胞NIH3T3(ATCC No.CRL-1658)、中国仓鼠卵巢细胞的二氢叶酸还原酶缺陷型细胞系(CHO细胞，ATCC CCL-61)(Urlaub，G.和Chasin，LA Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.(1980)77,p.4126-4220)，和FreeStyle 293F细胞(Invitrogen Corp.)。
当原核细胞用作宿主细胞时，例如可以使用大肠杆菌(Escherichia coli)或枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。
将目标抗体基因引入这些细胞中进行转化，并且随后在体外培养转化的细胞以获得抗体。在上述培养中，存在产率取决于抗体的序列而不同的情况，且因此可以使用产率作为指标，从具有等同结合活性的抗体选择容易作为药物产生的抗体。因此，本申请的抗体还包括通过上述抗体产生方法获得的抗体，其包括培养转化的宿主细胞的步骤和从上述步骤获得的培养物中收集目标抗体或抗体的功能片段的步骤。
已知将在培养的哺乳动物细胞中产生的抗体的重链的羧基末端的赖氨酸残基缺失(Journal of Chromatography A,705:129-134(1995))，并且此外，已知将在重链羧基末端的两个氨基酸残基甘氨酸和赖氨酸缺失，并且位于羧基末端的脯氨酸残基被酰胺化(Analytical Biochemistry,360:75-83(2007))。然而，这些重链序列的缺失和修饰对抗体的抗原-结合活性和效应子功能(补体的活化、抗体依赖性细胞细胞毒性等)没有影响。因此，根据本申请的抗体也包括已经历上述修饰的抗体，和所述抗体的功能片段，并且此类抗体的特定实例包括包含在重链羧基端的1或2个氨基酸缺失的缺失突变体，和通过酰胺化上述缺失突变体(例如其中在羧基末端的脯氨酸残基被酰胺化的重链)形成的缺失突变体。然而，涉及根据本申请的抗体重链的羧基末端缺失的缺失突变体不限于上述缺失突变体，只要它们保留抗原结合活性和效应子功能即可。构成根据本申请的抗体的两条重链可以是选自全长抗体和上述缺失突变体的组的任一类型的重链，或者可以是选自上述组的任意两种类型的组合。各个缺失突变体的比例可受产生本申请抗体的培养的哺乳动物细胞的类型和培养条件的影响。根据本申请的抗体的主要成分的实例可包括其中在两条重链的每个羧基末端缺失一个氨基酸残基的抗体。
抗CDH6抗体还可以通过如下获得：
按本领域通常实施的方法，使用充当抗原的多肽免疫动物，并且随后收集和纯化在其活体中产生的抗体。优选使用保留三维结构的CDH6作为抗原。
抗原的来源不限于人，并且因此也可以使用来源于非人动物如小鼠或大鼠的抗原免疫动物。在此方面，可以通过检验所获得的结合异源抗原的抗体与人抗原的交叉反应性来选择适用于人类疾病的抗体。
此外，可以根据已知方法，将产生针对抗原的抗体的抗体产生细胞与骨髓瘤细胞融合(例如，Kohler和Milstein,Nature(1975)256,495-497；和Kennet,R.编辑,MonoclonalAntibodies,365-367,Plenum Press,N.Y.(1980))以建立杂交瘤，从而获得单克隆抗体。
获得单克隆抗体的具体实例可包括以下程序：
(a)通过将抗原直接施用(如皮下注射、腹腔或静脉注射等)至待免疫的动物(例如，大鼠或小鼠)，诱导免疫应答。如果需要增加抗体滴度，可以再进行一次或多次免疫；
(b)从已诱导免疫应答的上述动物收集含有产生抗体的细胞的组织(例如，脾或淋巴结)；
(c)制备骨髓瘤细胞(下文称为“骨髓瘤”)(例如，小鼠骨髓瘤SP2/0-ag14细胞)；
(d)产生抗体的细胞和骨髓瘤之间的细胞融合；
(e)选择产生目标抗体的杂交瘤组；
(f)分成单细胞克隆(克隆)；
(g)任选地，培养杂交瘤用于单克隆抗体的大量生产，或培育其中接种杂交瘤的动物；和/或
(h)研究由此产生的单克隆抗体的生理活性(内化活性)和结合特异性，或检测抗体作为标记试剂的特性。
用于测量本文中使用的抗体滴度的方法的实例可包括但不限于流式细胞术和细胞ELISA。
抗体对癌细胞的结合活性可以使用流式细胞术来证实。可以通过使用下述来证实抗体到肿瘤细胞中的内在化：(1)使用与治疗用抗体结合的第二抗体(荧光标记的)在荧光显微镜下显示并入细胞中的抗体的测定(Cell Death and Differentiation(2008)15,751-761)，(2)使用与治疗用抗体结合的第二抗体(荧光标记的)测量并入细胞中的荧光强度的测定(Molecular Biology of the Cell,Vol.15,5268-5282,2004年12月)，或(3)使用与治疗用抗体结合的免疫毒素的Mab-ZAP测定，其中毒素在并入细胞时释放以抑制细胞生长(Bio Techniques 28:162-165,2000年1月)。作为免疫毒素，可以使用白喉毒素催化结构域和G蛋白的重组复合蛋白。
抗体的抗肿瘤活性可以通过确定对细胞生长的抑制活性来在体外证实。例如，培养超表达抗体的靶蛋白的癌细胞系，并将所述抗体以不同的浓度添加到培养系统中以确定对病灶形成、集落形成和球状体生长的抑制活性。可以例如通过向具有高度表达靶蛋白的移植的癌细胞系的裸鼠施用抗体并确定癌细胞的变化来在体内证实抗肿瘤活性。
药物组合物
另一方面，本申请还提供了一种药物组合物，其包含前述的分离的抗原结合蛋白、前述的多肽、前述的核酸分子、前述的载体和/或前述的细胞，以及任选地药学上可接受的载体。
本申请的抗CDH6抗体可以作为包含一种或多种药学上相容的组分的药物组合物施用。例如，药物组合物通常包含一种或多种药物载体(例如，无菌液体(例如，水和油(包括石油和动物来源、植物来源或合成来源的油(例如，花生油，大豆油，矿物油和芝麻油)))。当静脉内施用药物组合物时，水是更典型的载体。盐水溶液、葡萄糖水溶液和甘油水溶液也可用作液体载体，特别是用于注射溶液。合适的药物媒介物是本领域已知的。如果期望，组合物还可包含痕量的保湿剂、乳化剂或pH缓冲剂。合适的药物载体的实例公开在E.W.Martin的Remington’s Pharmaceutical Sciences中。处方与施用模式对应。
各种递送系统是已知的，并且它们可用于施用本申请的抗原结合蛋白(如抗CDH6抗体)。施用途径的实例可包括但不限于皮内、肌内、腹膜内、静脉内和皮下途径。例如，可以通过注射或推注进行施用。例如，可以通过注射进行上述抗原结合蛋白的施用。肠胃外施用是优选的施用途径。
在用于本申请的含有抗原结合蛋白的药物组合物是水性注射液的情况下，其可以用合适的稀释剂稀释，且然后作为静脉内输注来给予。非限制性的，稀释剂可以包括葡萄糖溶液、生理盐水等。
在用于本申请的含有抗原结合蛋白的药物组合物是冻干注射液的情况下，可以将其溶解在注射用水中，接着可以将所需量用合适的稀释剂稀释，且然后作为静脉内输注来给予。对于稀释剂，可以例示葡萄糖溶液、生理盐水等。
用途
另一方面，本申请还提供一种试剂盒，其包含前述的分离的抗原结合蛋白、前述的多肽或前述的药物组合物。
另一方面，本申请提供前述的分离的抗原结合蛋白、前述的多肽、前述的核酸分子、前述的载体和/或前述的细胞和/或前述的药物组合物在制备药物中的用途，所述药物用于预防和/或治疗CDH6相关的疾病或病症。
在某些实施方式中，其中所述CDH6相关的疾病或病症包括肿瘤。
在某些实施方式中，其中所述药物还包括其他治疗剂。
另一方面，本申请还提供了一种抑制肿瘤细胞生长和/或增值的方法，包括使肿瘤细胞与有效量的前述的分离的抗原结合蛋白、前述的多肽或前述的药物组合物接触。
在某些实施方式中所述肿瘤细胞表达CDH6。
例如，所述肿瘤细胞可以位于体内或是离体的。
另一方面，本申请还提供了一种预防和/或治疗疾病或病症的方法，包括向有需要的受试者施用有效量的前述的分离的抗原结合蛋白、前述的多肽、前述的核酸分子、前述的载体、前述的细胞和/或前述的药物组合物。
在某些实施方式中，所述疾病或病症包括CDH6相关的疾病或病症。
在某些实施方式中，其中所述CDH6相关的疾病或病症包括肿瘤。
在某些实施方式中，其中还包括向受试者施用其他治疗剂。
应用本申请的抗原结合蛋白的肿瘤的类型没有特别限制，只要肿瘤在待治疗的肿瘤细胞中表达CDH6即可。例如，所述肿瘤可以包括肾细胞癌、肾透明细胞癌、乳头状肾细胞癌、卵巢癌、卵巢浆液性腺癌、甲状腺癌、胆管癌、肺癌、小细胞肺癌、肝癌、胶质母细胞瘤、间皮瘤、子宫癌、胰腺癌、威尔姆氏瘤或神经母细胞瘤。
本申请的药物和治疗方法可以进一步含有除根据本申请的抗原结合蛋白以外的癌症治疗剂。本申请的药物组合物和治疗方法也可以与另一种癌症治疗剂组合施用，从而增强抗肿瘤作用。可以将用于这种目的的其他癌症治疗剂与本申请的药物组合物同时地、独立地或序贯地施用于主体，或者可以在改变各自的剂量间隔的情况下施用。这种癌症治疗剂不受限制，只要它们是具有抗肿瘤活性的试剂，并且可以通过选自下述的至少一种来例示：伊立替康(CPT-11)、顺铂、卡铂、奥沙利铂、氟尿嘧啶(5-FU)、吉西他滨、卡培他滨、阿霉素、表柔比星、环磷酰胺、丝裂霉素C、替加氟-吉美嘧啶(gimeracil)-奥替拉西(oteracil)组合、西妥昔单抗(cetuximab)、帕尼单抗(panitumumab)、贝伐珠单抗(bevacizumab)、雷莫芦单抗(ramucirumab)、瑞格非尼(regorafenib)、三氟尿苷-替吡嘧啶(tipiracil)组合、吉非替尼(gefitinib)、厄洛替尼(erlotinib)、阿法替尼(afatinib)、甲氨蝶呤、培美曲塞(pemetrexed)、他莫昔芬、托瑞米芬、氟维司群(fulvestrant)、亮丙瑞林、性瑞林、来曲唑、阿那曲唑、孕酮制剂、曲妥珠单抗、帕妥珠单抗和拉帕替尼(lapatinib)。
本申请的药物组合物和治疗方法也可以与放射治疗组合使用。例如，癌症患者可以在接受用本申请的药物组合物进行的疗法之前和/或之后或同时接受放射治疗。
本申请的药物组合物和治疗方法还可以用作与外科手术程序组合的辅助化学疗法。本申请的药物组合物可以在外科手术程序前为了减小肿瘤大小起见进行施用(称为手术前辅助化学疗法或肿瘤辅助疗法)，或可以在外科手术程序后为了预防肿瘤复发起见进行施用(称为手术后辅助化学疗法或辅助疗法)。
本申请还公开了以下具体实施方式：
1.分离的抗原结合蛋白，其具有下述性质中的一种或多种：
1)在ELISA试验中，能够以低于12.5ng/mL的灵敏度与CDH6蛋白相结合；
2)通过与CDH6结合而内化至表达CDH6的细胞中的活性。
2.根据实施方式1所述的分离的抗原结合蛋白，其与参比抗体竞争结合CDH6蛋白，其中所述参比抗体包含轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)；其中：
所述VH包含SEQ ID NO:18所示的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列；或
所述VH包含SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:46所示的氨基酸序列；或
所述VH包含SEQ ID NO:95所示的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:96所示的氨基酸序列；或
所述VH包含SEQ ID NO:103所示的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:104所示的氨基酸序列。
3.根据实施方式1-2中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包括抗体或其抗原结合片段。
4.根据实施方式1-3中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，所述抗体包括单克隆抗体、多克隆抗体、二聚体、多聚体、多特异性抗体、完整抗体、抗体片段、人抗体、人源化抗体或嵌合抗体。
5.根据实施方式1-4中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述抗原结合片段包括Fab，Fab’，Fv片段，F(ab’)2，scFv，di-scFv和/或dAb。
6.根据实施方式1-5中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述抗体包括嵌合抗体或人源化抗体。
7.根据实施方式1-6中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含VH中的至少一个CDR，所述VH包含SEQ ID NO:18，SEQ ID NO:66，SEQ ID NO:41，SEQ ID NO:67，SEQ IDNO:95或SEQ ID NO:103所示的氨基酸序列。
8.根据实施方式1-7中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含VL中的至少一个CDR，所述VL包含SEQ ID NO:23，SEQ ID NO:68，SEQ ID NO:46，SEQ ID NO:69，
SEQ ID NO:96或SEQ ID NO:104所示的氨基酸序列。
9.根据实施方式1-8中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含VH，其中所述VH包含HCDR1、HCDR2、HCDR3，所述HCDR1包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。
10.根据实施方式1-9中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含VH，其中所述VH包含HCDR1、HCDR2、HCDR3，所述HCDR1包含SEQ ID NO:2，SEQ ID NO:8，SEQ IDNO:89或SEQID NO:97所示的氨基酸序列。
11.根据实施方式1-10中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含VH，其中所述VH包含HCDR1、HCDR2、HCDR3，所述HCDR2包含SEQ ID NO:3，SEQ ID NO:9，SEQ IDNO:90或SEQID NO:98所示的氨基酸序列。
12.根据实施方式1-11中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含VH，其中所述VH包含HCDR1、HCDR2、HCDR3，所述HCDR3包含SEQ ID NO:4，SEQ ID NO:10，SEQ IDNO:91或SEQ ID NO:99所示的氨基酸序列。
13.根据实施方式1-12中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含VH，其中所述VH包含HCDR1，HCDR2和HCDR3，其中所述HCDR1包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列，所述HCDR3包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列；或
所述HCDR1包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列，所述HCDR3包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列。
14.根据实施方式1-13中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含VH，其中所述VH包含HCDR1，HCDR2和HCDR3，其中所述HCDR1包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列，所述HCDR3包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列；
所述HCDR1包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列，所述HCDR3包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列；
所述HCDR1包含SEQ ID NO:89所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:90所示的氨基酸序列，所述HCDR3包含SEQ ID NO:91所示的氨基酸序列；或
所述HCDR1包含SEQ ID NO:97所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:98所示的氨基酸序列，所述HCDR3包含SEQ ID NO:99所示的氨基酸序列。
15.根据实施方式1-14中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含VH，其中所述VH包括框架区HFR1，所述HFR1的C末端与所述HCDR1的N末端直接或间接相连，且所述HFR1包含SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:47或SEQ ID NO:52所示的氨基酸序列。
16.根据实施方式1-15中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含VH，其中所述VH包括框架区HFR2，所述HFR2位于所述HCDR1与所述HCDR2之间，且所述HFR2包含SEQ IDNO:15、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:38或SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列。
17.根据实施方式1-16中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含VH，其中所述VH包括框架区HFR3，所述HFR3位于所述HCDR2与所述HCDR3之间，且所述HFR3包含SEQ IDNO:16、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:49或SEQ ID NO:53所示的氨基酸序列。
18.根据实施方式1-17中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含VH，其中所述VH包括框架区HFR4，所述HFR4的N末端与所述HCDR3的C末端直接或间接相连，且所述HFR4包含SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:40或SEQ ID NO:50所示的氨基酸序列。
19.根据实施方式1-18所述的分离的抗原结合蛋白，其包含VH，其中所述VH包括框架区HFR1，HFR2，HFR3和HFR4，所述HFR1的C末端与所述HCDR1的N末端直接或间接相连，所述HFR2位于所述HCDR1与所述HCDR2之间，所述HFR3位于所述HCDR2与所述HCDR3之间，所述HFR4的N末端与所述HCDR3的C末端直接或间接相连；其中，所述HFR1包含SEQ ID NO:14所示的氨基酸序列，所述HFR2包含SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列，所述HFR3包含SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列，HFR4包含SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列；或
所述HFR1包含SEQ ID NO:24所示的氨基酸序列，所述HFR2包含SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列，所述HFR3包含SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列，HFR4包含SEQ ID NO:26所示的氨基酸序列；或
所述HFR1包含SEQ ID NO:24所示的氨基酸序列，所述HFR2包含SEQ ID NO:28所示的氨基酸序列，所述HFR3包含SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列，HFR4包含SEQ ID NO:26所示的氨基酸序列；或
所述HFR1包含SEQ ID NO:37所示的氨基酸序列，所述HFR2包含SEQ ID NO:38所示的氨基酸序列，所述HFR3包含SEQ ID NO:39所示的氨基酸序列，HFR4包含SEQ ID NO:40所示的氨基酸序列；或
所述HFR1包含SEQ ID NO:47所示的氨基酸序列，所述HFR2包含SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列，所述HFR3包含SEQ ID NO:49所示的氨基酸序列，HFR4包含SEQ ID NO:50所示的氨基酸序列；或
所述HFR1包含SEQ ID NO:52所示的氨基酸序列，所述HFR2包含SEQ ID NO:38所示的氨基酸序列，所述HFR3包含SEQ ID NO:53所示的氨基酸序列，HFR4包含SEQ ID NO:26所示的氨基酸序列。
20.根据实施方式1-19中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含VH，其中所述VH包含SEQ ID NO:18，SEQ ID NO:66，SEQ ID NO:41，SEQ ID NO:67，SEQ ID NO:95或SEQID NO:103所示的氨基酸序列。
21.根据实施方式1-20中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含VH，其中所述VH包含SEQ ID NO:27，SEQ ID NO:29，SEQ ID NO:51或SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列
22.根据实施方式1-21中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包括抗体重链恒定区。
23.根据实施方式22所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述抗体重链恒定区包括源自人IgG的恒定区。
24.根据实施方式22所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述抗体重链恒定区包括源自人IgG1，IgG2，IgG3或IgG4的恒定区。
25.根据实施方式22所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述抗体重链恒定区包含SEQ IDNO:70所示的氨基酸序列。
26.根据实施方式1-25中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含抗体重链，其中所述抗体重链包含SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:85或SEQ ID NO:87所示的氨基酸序列。
27.根据实施方式1-26中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含抗体重链，其中所述抗体重链包含SEQ ID NO:74、SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:78或SEQ ID NO:79所示的氨基酸序列。
28.根据实施方式1-27中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含VL，其中所述VL包含LCDR1、LCDR2、LCDR3，所述LCDR1包含SEQ ID NO:5，SEQ ID NO:11，SEQ IDNO:92或SEQ ID NO:100所示的氨基酸序列。
29.根据实施方式1-28中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含VL，其中所述VL包含LCDR1、LCDR2、LCDR3，所述LCDR2包含SEQ ID NO:6，SEQ ID NO:12，SEQ IDNO:93或SEQ ID NO:101所示的氨基酸序列。
30.根据实施方式1-29中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包括VL，其中所述VL包含LCDR1、LCDR2、LCDR3，所述LCDR3包含SEQ ID NO:7，SEQ ID NO:13，SEQ IDNO:94或SEQ ID NO:102所示的氨基酸序列。
31.根据实施方式1-30中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含VL，其中所述VL包含LCDR1，LCDR2和LCDR3，所述LCDR1包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列，所述LCDR2包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列，所述LCDR3包含SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列；
所述LCDR1包含SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列，所述LCDR2包含SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列，所述LCDR3包含SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列；
所述LCDR1包含SEQ ID NO:92所示的氨基酸序列，所述LCDR2包含SEQ ID NO:93所示的氨基酸序列，所述LCDR3包含SEQ ID NO:94所示的氨基酸序列；或
所述LCDR1包含SEQ ID NO:100所示的氨基酸序列，所述LCDR2包含SEQ ID NO:101所示的氨基酸序列，所述LCDR3包含SEQ ID NO:102所示的氨基酸序列。
32.根据实施方式1-31中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含VH和VL，其中所述VH包含HCDR1，HCDR2和HCDR3，所述VL包含LCDR1，LCDR2和LCDR3；其中所述HCDR1包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列，所述HCDR3包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列，所述LCDR1包含SEQ IDNO:5所示的氨基酸序列，所述LCDR2包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列，所述LCDR3包含SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列；或
所述HCDR1包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列，所述HCDR3包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列，所述LCDR1包含SEQ IDNO:11所示的氨基酸序列，所述LCDR2包含SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列，所述LCDR3包含SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列。
33.根据实施方式1-32中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含VH和VL，其中所述VH包含HCDR1，HCDR2和HCDR3，所述VL包含LCDR1，LCDR2和LCDR3；其中所述HCDR1包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列，所述HCDR3包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列，所述LCDR1包含SEQ IDNO:5所示的氨基酸序列，所述LCDR2包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列，所述LCDR3包含SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列；或
所述HCDR1包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列，所述HCDR3包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列，所述LCDR1包含SEQ IDNO:11所示的氨基酸序列，所述LCDR2包含SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列，所述LCDR3包含SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列；
所述HCDR1包含SEQ ID NO:89所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:90所示的氨基酸序列，所述HCDR3包含SEQ ID NO:91所示的氨基酸序列，所述LCDR1包含SEQ IDNO:92所示的氨基酸序列，所述LCDR2包含SEQ ID NO:93所示的氨基酸序列，所述LCDR3包含SEQ ID NO:94所示的氨基酸序列；或
所述HCDR1包含SEQ ID NO:97所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:98所示的氨基酸序列，所述HCDR3包含SEQ ID NO:99所示的氨基酸序列，所述LCDR1包含SEQ IDNO:100所示的氨基酸序列，所述LCDR2包含SEQ ID NO:101所示的氨基酸序列，所述LCDR3包含SEQ ID NO:102所示的氨基酸序列。
34.根据实施方式1-33中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含VL，其中所述VL包括框架区LFR1，所述LFR1的C末端与所述LCDR1的N末端直接或间接相连，且所述LFR1包含SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:59或SEQ IDNO:64所示的氨基酸序列。
35.根据实施方式1-34中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含VL，其中所述VL包括框架区LFR2，所述LFR2位于所述LCDR1与所述LCDR2之间，且所述LFR2包含SEQ IDNO:20、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:56或SEQ ID NO:60所示的氨基酸序列。
36.根据实施方式1-35中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含VL，其中所述VL包括框架区LFR3，所述LFR3位于所述LCDR2与所述LCDR3之间，且所述LFR3包含SEQ IDNO:21、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:57或SEQ ID NO:61所示的氨基酸序列。
37.根据实施方式1-36中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含VL，其中所述VL包括框架区LFR4，所述LFR4的N末端与所述LCDR3的C末端直接或间接相连，且所述LFR4包含SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:45或SEQ ID NO:62所示的氨基酸序列。
38.根据实施方式1-37中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含VL，其中所述VL包括框架区LFR1，LFR2，LFR3和LFR4，其中所述LFR1的C末端与所述LCDR1的N末端直接或间接相连，所述LFR2位于所述LCDR1与所述LCDR2之间，所述LFR3位于所述LCDR2与所述LCDR3之间，所述LFR4的N末端与所述LCDR3的C末端直接或间接相连；其中所述LFR1包含SEQID NO:19所示的氨基酸序列，所述LFR2包含SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列，所述LFR3包含SEQ ID NO:21所示的氨基酸序列，所述LFR4包含SEQ IDNO:22所示的氨基酸序列；或
所述LFR1包含SEQ ID NO:30所示的氨基酸序列，所述LFR2包含SEQ ID NO:31所示的氨基酸序列，所述LFR3包含SEQ ID NO:32所示的氨基酸序列，所述LFR4包含SEQ IDNO:33所示的氨基酸序列；或
所述LFR1包含SEQ ID NO:30所示的氨基酸序列，所述LFR2包含SEQ ID NO:31所示的氨基酸序列，所述LFR3包含SEQ ID NO:35所示的氨基酸序列，所述LFR4包含SEQ IDNO:33所示的氨基酸序列；或
所述LFR1包含SEQ ID NO:42所示的氨基酸序列，所述LFR2包含SEQ ID NO:43所示的氨基酸序列，所述LFR3包含SEQ ID NO:44所示的氨基酸序列，所述LFR4包含SEQ IDNO:45所示的氨基酸序列；或
所述LFR1包含SEQ ID NO:55所示的氨基酸序列，所述LFR2包含SEQ ID NO:56所示的氨基酸序列，所述LFR3包含SEQ ID NO:57所示的氨基酸序列，所述LFR4包含SEQ IDNO:45所示的氨基酸序列；或
所述LFR1包含SEQ ID NO:59所示的氨基酸序列，所述LFR2包含SEQ ID NO:60所示的氨基酸序列，所述LFR3包含SEQ ID NO:61所示的氨基酸序列，所述LFR4包含SEQ IDNO:62所示的氨基酸序列；或
所述LFR1包含SEQ ID NO:64所示的氨基酸序列，所述LFR2包含SEQ ID NO:60所示的氨基酸序列，所述LFR3包含SEQ ID NO:61所示的氨基酸序列，所述LFR4包含SEQ IDNO:62所示的氨基酸序列。
39.根据实施方式1-38中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含VL，其中所述VL包含SEQ ID NO:23，SEQ ID NO:68，SEQ ID NO:46，SEQ ID NO:69，SEQ ID NO:96或SEQID NO:104所示的氨基酸序列。
40.根据实施方式1-39中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含VL，其中所述VL包含SEQ ID NO:34，SEQ ID NO:36，SEQ ID NO:58，SEQ ID NO:63或SEQ ID NO:65所示的氨基酸序列。
41.根据实施方式1-40中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含VH和VL，其中所述VH包含SEQ ID NO:18所示的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列；或
所述VH包含SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:46所示的氨基酸序列；或
所述VH包含SEQ ID NO:66所示的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:68所示的氨基酸序列；或
所述VH包含SEQ ID NO:67所示的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:69所示的氨基酸序列；或
所述VH包含SEQ ID NO:95所示的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:96所示的氨基酸序列；或
所述VH包含SEQ ID NO:103所示的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:104所示的氨基酸序列。
42.根据实施方式1-41中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含VH和VL，其中所述VH包含SEQ ID NO:27所示的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:34所示的氨基酸序列；或
所述VH包含SEQ ID NO:27所示的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:36所示的氨基酸序列；或
所述VH包含SEQ ID NO:29所示的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:34所示的氨基酸序列；或
所述VH包含SEQ ID NO:29所示的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:36所示的氨基酸序列；或
所述VH包含SEQ ID NO:51所示的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:58所示的氨基酸序列；或
所述VH包含SEQ ID NO:51所示的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:63所示的氨基酸序列；或
所述VH包含SEQ ID NO:51所示的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:65所示的氨基酸序列；或
所述VH包含SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:58所示的氨基酸序列；或
所述VH包含SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:63所示的氨基酸序列；或
所述VH包含SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:65所示的氨基酸序列。
43.根据实施方式1-42中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包括抗体轻链恒定区。
44.根据实施方式1-43中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述抗体轻链恒定区包括人Igκ恒定区或人Igλ恒定区。
45.根据实施方式43-44中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述抗体轻链恒定区包含SEQ ID NO:71所示的氨基酸序列。
46.根据实施方式1-45中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含抗体轻链，所述抗体轻链包含SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:86或SEQ ID NO:88所示的氨基酸序列。
47.根据实施方式1-46中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含抗体轻链，所述抗体轻链包含SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:83或SEQ ID NO:84所示的氨基酸序列。
48.根据实施方式1-47中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含抗体重链和抗体轻链，其中所述抗体重链包含SEQ ID NO:72所示的氨基酸序列，且所述抗体轻链包含SEQ IDNO:73所示的氨基酸序列；或
所述抗体重链包含SEQ ID NO:80所示的氨基酸序列，且所述抗体轻链包含SEQ IDNO:81所示的氨基酸序列；或
所述抗体重链包含SEQ ID NO:85所示的氨基酸序列，且所述抗体轻链包含SEQ IDNO:86所示的氨基酸序列；或
所述抗体重链包含SEQ ID NO:87所示的氨基酸序列，且所述抗体轻链包含SEQ IDNO:88所示的氨基酸序列。
49.根据实施方式1-48中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含抗体重链和抗体轻链，其中所述抗体重链包含SEQ ID NO:74所示的氨基酸序列，且所述抗体轻链包含SEQ IDNO:76所示的氨基酸序列；或
其中所述抗体重链包含SEQ ID NO:74所示的氨基酸序列，且所述抗体轻链包含SEQ IDNO:77所示的氨基酸序列；或
其中所述抗体重链包含SEQ ID NO:75所示的氨基酸序列，且所述抗体轻链包含SEQ IDNO:76所示的氨基酸序列；或
其中所述抗体重链包含SEQ ID NO:75所示的氨基酸序列，且所述抗体轻链包含SEQ IDNO:77所示的氨基酸序列；或
其中所述抗体重链包含SEQ ID NO:78所示的氨基酸序列，且所述抗体轻链包含SEQ IDNO:82所示的氨基酸序列；或
其中所述抗体重链包含SEQ ID NO:78所示的氨基酸序列，且所述抗体轻链包含SEQ IDNO:83所示的氨基酸序列；或
其中所述抗体重链包含SEQ ID NO:78所示的氨基酸序列，且所述抗体轻链包含SEQ IDNO:84所示的氨基酸序列；或
其中所述抗体重链包含SEQ ID NO:79所示的氨基酸序列，且所述抗体轻链包含SEQ IDNO:82所示的氨基酸序列；或
其中所述抗体重链包含SEQ ID NO:79所示的氨基酸序列，且所述抗体轻链包含SEQ IDNO:83所示的氨基酸序列；或
其中所述抗体重链包含SEQ ID NO:79所示的氨基酸序列，且所述抗体轻链包含SEQ IDNO:84所示的氨基酸序列。
50.分离的多肽，其包含实施方式1-49中任一项所述的分离的抗原结合蛋白。
51.分离的一种或多种核酸分子，其编码实施方式1-49中任一项所述的分离的抗原结合蛋白或实施方式50所述的多肽。
52.载体，其包含根据实施方式51所述的核酸分子。
53.细胞，所述细胞包含根据实施方式51所述的核酸分子或根据实施方式52所述的载体，或所述细胞表达根据实施方式1-49所述的抗原结合蛋白或实施方式50所述的多肽。
54.制备实施方式1-49中任一项所述的分离的抗原结合蛋白的方法，所述方法包括在使得实施方式1-49中任一项所述的分离的抗原结合蛋白表达的条件下，培养根据实施方式53所述的细胞。
55.药物组合物，其包含实施方式1-49中任一项所述的分离的抗原结合蛋白、实施方式50所述的多肽、实施方式51所述的核酸分子、实施方式52所述的载体和/或实施方式53所述的细胞，以及任选地药学上可接受的载体。
56.试剂盒，其包含实施方式1-49中任一项所述的分离的抗原结合蛋白、实施方式50所述的多肽、或实施方式55所述的药物组合物。
57.实施方式1-49中任一项所述的分离的抗原结合蛋白、实施方式50所述的多肽、实施方式51所述的核酸分子、实施方式52所述的载体、实施方式53所述的细胞和/或实施方式55所述的药物组合物在制备药物中的用途，所述药物用于预防和/或治疗CDH6相关的疾病或病症。
58.根据实施方式57所述的用途，其中所述CDH6相关的疾病或病症包括肿瘤。
59.根据实施方式58所述的用途，其中所述肿瘤包括表达CDH6的肿瘤。
60.根据实施方式58-59中任一项所述的用途，其中所述肿瘤包括肾细胞癌、肾透明细胞癌、乳头状肾细胞癌、卵巢癌、卵巢浆液性腺癌、甲状腺癌、胆管癌、肺癌、小细胞肺癌、肝癌、胶质母细胞瘤、间皮瘤、子宫癌、胰腺癌、威尔姆氏瘤或神经母细胞瘤。
61.根据实施方式57-60中任一项所述的用途，其中所述药物还包括其他治疗剂。
本申请还公开了以下抗体CDRs，可变区及轻重链序列：
不欲被任何理论所限，下文中的实施例仅仅是为了阐释本申请的抗原结合蛋白、制备方法和用途等，而不用于限制本申请发明的范围。
实施例
实施例1CDH6蛋白的小鼠单克隆抗体杂交瘤细胞的制备
1.1抗原的制备
使用CDH6胞外区(Ser 54-Ala 615)作为免疫原，该抗原购于ACRO Biosystems，货号CA6-H5229。
1.2免疫小鼠
每组抗原将用来免疫12只Balb/c小鼠(8-12周龄)，并监测其血清效价以决定最优的免疫次数。优化了的佐剂和免疫方法能产生针对大多数抗原多肽的高亲和力的抗体(IgG亚型)。初次免疫后会经过3到4次的加强，加强后将取小鼠血清检测滴度(重组蛋白作为抗抗原包被)。滴度合格的小鼠将冲击一次并用于融合，不合格的小鼠将继续一到两次加强，至滴度最高后融合。
1.3血清检测和筛选
免疫小鼠眼眶取血，并用ELISA检测血清滴度(重组蛋白作为抗原包被)。血清效价需大于10K，否则继续加强免疫。
1.4融合及筛选
取全脾和1/2的淋巴结，与骨髓瘤SP2/0细胞系融合。工艺为优化过的PEG融合。融合细胞铺到4块384孔板上(每孔细胞102到104)，进行培养。收集所有孔的上清，通过ELISA方法检测细胞上清针对CDH6重组蛋白的反应来筛选阳性细胞株，镜检有细胞的阳性孔转到96孔板继续培养。生长几天后，收集所有孔的上清用ELISA检测细胞上清与CDH6重组蛋白的反应性。阳性孔进一步检测不同稀释度的细胞上清与CDH6重组蛋白的结合能力，以进行亲和力排序，挑选亲和力最高的120个亲代克隆进入亚克隆。
1.5亚克隆及筛选
通过有限稀释法和ELISA筛选进行亚克隆，得到单克隆杂交瘤细胞。细胞铺96孔板，并培养至覆盖约1/6的底部。ELISA检测每个孔上清针对CDH6重组蛋白的反应，取OD值高且细胞状态良好的两个孔进入下轮亚克隆。重复上述步骤直到孔中细胞株阳性率100％。此时我们得到单克隆细胞株。经过最后一轮亚克隆后，所有阳性细胞立即扩大培养，一部分冻存供以后使用，另一部分腹水制备。
1.6腹水制备和抗体纯化
最终我们获得13株单克隆细胞株，并通过腹部注射到F1小鼠用于抗体生产。产生的腹水用Protein A/G纯化，并用于后续检测。
实施例2抗体与抗原的结合活性
将重组蛋白CDH6包被ELISA板条，1μg/ml，4℃过夜；PBST洗涤后，加入10％的胎牛血清，37℃封闭1小时；分别加入不同稀释度(0.1ng/mL至100ng/mL)的13个CDH6的单克隆抗体，37℃反应1小时；PBST洗涤后，加入辣根过氧化物酶标记的羊抗人IgG二抗(Goat antiMouse(HRP)，Thermo Fisher Scientific)，37℃反应30分钟；PBST重复洗板5遍，在吸水纸上尽量拍干残留液滴；每孔加入100μl TMB(eBioscience)，室温(20±5℃)避光放置1.5min；每孔加入100μl 2N H2SO4终止液终止底物反应，酶标仪450nm处读取OD值，分析抗体与靶抗原CDH6结合能力。结果如表1、图1所示，本申请的抗CDH6抗体与CDH6重组蛋白的灵敏度均不超过12.5ng/mL，其中#13(CL069463抗体)不超过3.125ng/mL，#23(CL069707抗体)不超过1.56ng/mL，#4(CL069066抗体)不超过6.3ng/mL，#16(CL069439抗体)不超过1.0ng/mL。
表1.ELISA检测抗体与CDH6抗原的结合活性
实施例3抗体特异性识别细胞表面表达的CDH6抗原
以OVCAR-3细胞(人卵巢癌细胞)作为阳性细胞，以HepG2细胞(人肝癌细胞)作为阴性细胞，流式分析细胞表面CDH6与13种CDH6单克隆抗体的结合。收集对数生长期细胞，调整细胞密度到5×106细胞/mL，冰上预冷。含2％FBS预冷的生理盐水稀释23种CDH6单克隆抗体至20μg/ml。取100μl细胞，加入等体积前述稀释23种CDH6单克隆抗体，4℃避光反应30min。结束后，用含2％FBS预冷的生理盐水洗两次(6000rpm，45s)。用含2％FBS预冷的生理盐水按1:5稀释二抗PE小鼠抗人IgG(BD Pharmingen)，取100μL重悬细胞，4℃避光反应30min。反应结束后，用含2％FBS预冷的生理盐水洗两次(6000rpm，45s)。用400μl 1％多聚甲醛重悬细胞。流式细胞仪(BD Calibur)分析抗体与细胞表面抗原的结合能力。
结果如图2所示。结果显示，包括CL069463、CL069707、CL069439、CL069066等一共11个抗体均能特异性识别OVCAR-3细胞(人卵巢癌细胞)(图2)，而在阴性细胞HepG2细胞(人肝癌细胞)中没有结合。
实施例4人源化抗CDH6抗体的制备
通过将小鼠抗CDH6抗体CL069707的重链可变区与人IgG1的恒定区连接，CL069707的轻链可变区与人Igκ恒定区连接获得嵌合抗体，将嵌合抗体命名为Ch069707(重链：SEQID NO:72，轻链：SEQ ID NO:73)。
小鼠抗CDH6抗体CL069707通过CDR嫁接进行了人源化处理(Proc.Nal.Acad.Sci.USA86,10029-10033(1989)。CL069707的CDR区域被嫁接到最相似的人类种系序列。一些重要的关键残基被反向变异，例如根据Queen等人给出的标准(Proc.Nal.Acad.Sci.USA 86,10029-10033(1989).
两个人源化重链变体被命名为CL069707-H1,CL069707-H2。CL069707-H1重链的氨基酸序列显示在SEQ ID NO:74中。CL069707-H2重链的氨基酸序列显示在SEQ ID NO:75中。两个人源化轻链变体被命名为CL069707-L1，CL069707-L2。CL069707-L1轻链的氨基酸序列显示在SEQ ID NO:76中。CL069707-L2轻链的氨基酸序列显示在SEQ ID NO:77中。
编码全长CL069707-H1、CL069707-H2、CL069707-L1、CL069707-L2氨基酸序列的DNA序列被合成并构建到pCDNA3.1表达载体。通过重链和轻链的组合，在293细胞中产生了抗体CL069707-H11、CL069707-H1L2、CL069707-H2L1和CL069707-H2L2。
人源化抗体对肿瘤细胞的结合EC50测试如下。OVCAR-3细胞培养作为独立的单层培养物，在37℃、5％的二氧化碳气氛中维持。使用胰蛋白酶-EDTA部分消化法收获细胞，然后以1000rpm离心5分钟。将细胞重悬于冷的PBS中，加入连续稀释的Ch069707和CL069707-H1L1、CL069707-H1L2、CL069707-H2L1和CL069707-H2L2抗体。将细胞溶液混合，在4℃下孵化，并在加入第二抗体结合物(用于检测)之前用冷PBS清洗。4℃孵育后，用PBS清洗细胞，然后进行流式细胞仪(FACS)分析。结果显示在图3中。CL069707-H1L1、CL069707-H1L2、CL069707-H2L1和CL069707-H2L2对OVCAR-3细胞的EC50与Ch069707相似。
采用相同方法，利用小鼠抗CDH6抗体CL069463获得嵌合抗体和人源化抗体。
嵌合抗体被命名为Ch069463(重链：SEQ ID NO:80，轻链：SEQ ID NO:81)。两个人源化重链变体被命名为CL069463-H1,CL069463-H2。CL069463-H1重链的氨基酸序列显示在SEQ ID NO:78。CL069463-H2重链的氨基酸序列显示在SEQ ID NO:79中。三个人源化轻链变体被命名为CL069463-L1，CL069463-L2，CL069463-L3。CL069463-L1轻链的氨基酸序列显示在SEQ ID NO：82中。CL069463-L2轻链的氨基酸序列显示在SEQ ID NO:83中。CL069463-L3轻链的氨基酸序列显示在SEQ ID NO:84中。
编码全长CL069463-H1、CL069463-H2、CL069463-L1、CL069463-L2、CL069463-L3氨基酸序列的DNA序列被合成并构建到pCDNA3.1表达载体。通过重链和轻链的组合，在293细胞中产生了抗体CL069463-H1L1，CL069463-H2L2和CL069463-H2L3。
结果显示在图4中，CL069463-H1L1，CL069463-H2L2，CL069463-H2L3在OVCAR-3细胞上具有与Ch069463相似的EC50。
实施例5人源化抗CDH6抗体的体外评估
5.1CL069707-H1L1与人CDH6、CDH9和CDH10的结合分析
CDH9和CDH10是与CDH6关系最密切的家族成员。通过ELISA结合试验分析CL069707-H1L1在人CDH6、CDH9和CDH10 ECD结构域上的结合。人CDH6-ECD-His、CDH9-ECD-His和CDH10-ECD-His抗原从Acro Biosystems公司获得。将100μL在PBS中稀释的1μg/mL抗原加入96孔板，并在4℃下孵育过夜。用300μL的洗涤缓冲液清洗平板3次。然后将100μL/孔的1％BSA阻断试剂加入板中，并在37℃下孵育1小时，然后丢弃阻断试剂。将CL069707-H1L1的3倍连续稀释液加入板中，然后在37℃下孵育1小时。然后用300μL的洗涤缓冲液清洗平板3次。将100μL/孔的HRP结合的抗人类抗体稀释在1％的BSA中加入到板中，然后在37℃下孵育1小时。用300μL的洗涤缓冲液清洗平板3次。将100μL/孔的TMB底物加入板中，在室温下孵育约10分钟。然后用100μL/孔的终止液停止反应。用平板阅读器读取OD450，并处理数据。结果显示在图5中。CL069707-H1L1与人CDH6-ECD-His结合，EC50为0.1nM，CL069707-H1L1与CDH9-ECD-His或CDH10-ECD-His蛋白不结合。
5.2CL069707-H1L1对人、猴、小鼠和大鼠CDH6抗原的ELISA结合EC50的评估
通过ELISA分析CL069707-H1L1与人、猴、小鼠或大鼠CDH6抗原的结合情况。人、猴、小鼠和大鼠CDH6-ECD-His抗原均来自Acro Biosystems公司。用与例3.1中相同的方法进行ELISA。结果显示在图6中。CL069707-H1L1与人、猴、小鼠和大鼠CDH6-ECD-His抗原结合，EC50相似。
5.3评价CL069707-H1L1和Ch069707对人和猴CDH6抗原的结合常数
CL069707-H1L1和Ch069707的结合亲和力是使用基于生物层干涉仪(BLI)技术的
系统测量的。抗体以100nM的浓度被加载到AHC(抗hIgG Fc捕获)。然后将3.13nM、6.25nM、12.5nM、25nM、50nM和100nM的人CDH6-ECD-His或猴CDH6-ECD-His抗原与抗体结合的生物传感器尖端孵化，测量抗原和抗体之间的结合。从每种抗原浓度得到的六条不同的结合曲线中，根据1:1的结合模型计算出结合常数(KD)。结果显示在表2中。CL069707-H1L1和Ch069707与人CDH6-ECD-His抗原结合的亲和力相似。CL069707-H1L1与人CDH6-ECD-His和猴CDH6-ECD-His抗原结合的亲和力相似。
表2 CL069707-H1L1和Ch069707亲和力检测
引文列表
(1)Wheelock,M.J.and Johnson,K.R.(2003)Annu Rev Cell Dev Biol 19,207-35.
(2)Christofori,G.(2003)EMBO J 22,2318-23.
(3)Hazan,R.B.et al.(2004)Ann N Y Acad Sci 1014,155-63.
(4)Bryant,D.M.and Stow,J.L.(2004)Trends Cell Biol 14,427-34.
(5)Rabascio,C.et al.(2004)Cancer Res 64,4373-7.
(6)Yamaoka-Tojo,M.et al.(2006)Arterioscler Thromb Vasc Biol 26,1991-7.
(7)Patel,I.S.et al.(2003)Int J Cancer 106,172-7.
(8)Sanders,D.S.et al.(2000)J Pathol 190,526-30.
(9)Goeppert,B.et al.(2016)Epigenetics 11,780-790.
(10)Zhao,L.et al.(2016)Clin Endocrinol(Oxf)84,748-55.
(11)Sancisi,V.et al.(2013)PLoS One 8,e75489.
(12)Gugnoni,M.et al.(2017)Oncogene 36,667-677.
(13)Bialucha,C.U.et al.(2017)Cancer Discov 7,1030-1045.
Claims (39)
1.分离的抗原结合蛋白，其具有下述性质中的一种或多种：
1)在ELISA试验中，能够以低于12.5ng/mL的灵敏度与CDH6蛋白相结合；
2)通过与CDH6结合而内化至表达CDH6的细胞中的活性；
3)其与参比抗体竞争结合CDH6蛋白，其中所述参比抗体包含轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)；其中：
所述VH包含SEQ ID NO:18所示的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列；或
所述VH包含SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:46所示的氨基酸序列；或
所述VH包含SEQ ID NO:95所示的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:96所示的氨基酸序列；或
所述VH包含SEQ ID NO:103所示的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:104所示的氨基酸序列。
2.根据权利要求1所述的分离的抗原结合蛋白，其包括抗体或其抗原结合片段。
3.根据权利要求1-2中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述抗原结合片段包括Fab，Fab’，Fv片段，F(ab’)2，scFv，di-scFv和/或dAb。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含VH，其中所述VH包含HCDR1，HCDR2和HCDR3，其中所述HCDR1包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列，所述HCDR3包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列；或
所述HCDR1包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列，所述HCDR3包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含VH，其中所述VH包含HCDR1，HCDR2和HCDR3，其中所述HCDR1包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列，所述HCDR3包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列；
所述HCDR1包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列，所述HCDR3包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列；
所述HCDR1包含SEQ ID NO:89所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:90所示的氨基酸序列，所述HCDR3包含SEQ ID NO:91所示的氨基酸序列；或
所述HCDR1包含SEQ ID NO:97所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:98所示的氨基酸序列，所述HCDR3包含SEQ ID NO:99所示的氨基酸序列。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含VH，其中所述VH包含SEQ ID NO:18，SEQ ID NO:66，SEQ ID NO:41，SEQ ID NO:67，SEQ ID NO:95或SEQ ID NO:103所示的氨基酸序列。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含VH，其中所述VH包含SEQ ID NO:27，SEQ ID NO:29，SEQ ID NO:51或SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包括抗体重链恒定区。
9.根据权利要求8所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述抗体重链恒定区包括源自人IgG的恒定区。
10.根据权利要求8所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述抗体重链恒定区包括源自人IgG1，
IgG2，IgG3或IgG4的恒定区。
11.根据权利要求8所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述抗体重链恒定区包含SEQ IDNO:70所示的氨基酸序列。
12.根据权利要求1-11中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含抗体重链，其中所述抗体重链包含SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:85或SEQ ID NO:87所示的氨基酸序列。
13.根据权利要求1-12中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含抗体重链，其中所述抗体重链包含SEQ ID NO:74、SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:78或SEQ ID NO:79所示的氨基酸序列。
14.根据权利要求1-13中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含VL，其中所述VL包含LCDR1，LCDR2和LCDR3，所述LCDR1包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列，所述LCDR2包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列，所述LCDR3包含SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列；
所述LCDR1包含SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列，所述LCDR2包含SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列，所述LCDR3包含SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列；
所述LCDR1包含SEQ ID NO:92所示的氨基酸序列，所述LCDR2包含SEQ ID NO:93所示的氨基酸序列，所述LCDR3包含SEQ ID NO:94所示的氨基酸序列；或
所述LCDR1包含SEQ ID NO:100所示的氨基酸序列，所述LCDR2包含SEQ ID NO:101所示的氨基酸序列，所述LCDR3包含SEQ ID NO:102所示的氨基酸序列。
15.根据权利要求1-14中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含VH和VL，其中所述VH包含HCDR1，HCDR2和HCDR3，所述VL包含LCDR1，LCDR2和LCDR3；其中
所述HCDR1包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列，所述HCDR3包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列，所述LCDR1包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列，所述LCDR2包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列，所述LCDR3包含SEQ IDNO:7所示的氨基酸序列；或
所述HCDR1包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列，所述HCDR3包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列，所述LCDR1包含SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列，所述LCDR2包含SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列，所述LCDR3包含SEQID NO:13所示的氨基酸序列。
16.根据权利要求1-15中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含VH和VL，其中所述VH包含HCDR1，HCDR2和HCDR3，所述VL包含LCDR1，LCDR2和LCDR3；其中
所述HCDR1包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列，所述HCDR3包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列，所述LCDR1包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列，所述LCDR2包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列，所述LCDR3包含SEQ IDNO:7所示的氨基酸序列；或
所述HCDR1包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列，所述HCDR3包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列，所述LCDR1包含SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列，所述LCDR2包含SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列，所述LCDR3包含SEQID NO:13所示的氨基酸序列；
所述HCDR1包含SEQ ID NO:89所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:90所示的氨基酸序列，所述HCDR3包含SEQ ID NO:91所示的氨基酸序列，所述LCDR1包含SEQ ID NO:92所示的氨基酸序列，所述LCDR2包含SEQ ID NO:93所示的氨基酸序列，所述LCDR3包含SEQID NO:94所示的氨基酸序列；或
所述HCDR1包含SEQ ID NO:97所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:98所示的氨基酸序列，所述HCDR3包含SEQ ID NO:99所示的氨基酸序列，所述LCDR1包含SEQ ID NO:100所示的氨基酸序列，所述LCDR2包含SEQ ID NO:101所示的氨基酸序列，所述LCDR3包含SEQ ID NO:102所示的氨基酸序列。
17.根据权利要求1-16中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含VL，其中所述VL包含SEQ ID NO:23，SEQ ID NO:68，SEQ ID NO:46，SEQ ID NO:69，SEQ ID NO:96或SEQ IDNO:104所示的氨基酸序列。
18.根据权利要求1-17中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含VL，其中所述VL包含SEQ ID NO:34，SEQ ID NO:36，SEQ ID NO:58，SEQ ID NO:63或SEQ ID NO:65所示的氨基酸序列。
19.根据权利要求1-18中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含VH和VL，其中所述VH包含SEQ ID NO:18所示的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列；或
所述VH包含SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:46所示的氨基酸序列；或
所述VH包含SEQ ID NO:66所示的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:68所示的氨基酸序列；或
所述VH包含SEQ ID NO:67所示的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:69所示的氨基酸序列；或
所述VH包含SEQ ID NO:95所示的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:96所示的氨基酸序列；或
所述VH包含SEQ ID NO:103所示的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:104所示的氨基酸序列。
20.根据权利要求1-19中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含VH和VL，其中所述VH包含SEQ ID NO:27所示的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:34所示的氨基酸序列；或
所述VH包含SEQ ID NO:27所示的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:36所示的氨基酸序列；或
所述VH包含SEQ ID NO:29所示的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:34所示的氨基酸序列；或
所述VH包含SEQ ID NO:29所示的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:36所示的氨基酸序列；或
所述VH包含SEQ ID NO:51所示的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:58所示的氨基酸序列；或
所述VH包含SEQ ID NO:51所示的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:63所示的氨基酸序列；或
所述VH包含SEQ ID NO:51所示的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:65所示的氨基酸序列；或
所述VH包含SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:58所示的氨基酸序列；或
所述VH包含SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:63所示的氨基酸序列；或
所述VH包含SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列，所述VL包含SEQ ID NO:65所示的氨基酸序列。
21.根据权利要求1-20中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包括抗体轻链恒定区。
22.根据权利要求1-21中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述抗体轻链恒定区包括人Igκ恒定区或人Igλ恒定区。
23.根据权利要求1-22中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述抗体轻链恒定区包含SEQ ID NO:71所示的氨基酸序列。
24.根据权利要求1-23中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含抗体轻链，所述抗体轻链包含SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:86或SEQ ID NO:88所示的氨基酸序列。
25.根据权利要求1-24中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含抗体轻链，所述抗体轻链包含SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:83或SEQ ID NO:84所示的氨基酸序列。
26.根据权利要求1-25中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含抗体重链和抗体轻链，其中所述抗体重链包含SEQ ID NO:72所示的氨基酸序列，且所述抗体轻链包含SEQID NO:73所示的氨基酸序列；或
所述抗体重链包含SEQ ID NO:80所示的氨基酸序列，且所述抗体轻链包含SEQ ID NO:81所示的氨基酸序列；或
所述抗体重链包含SEQ ID NO:85所示的氨基酸序列，且所述抗体轻链包含SEQ ID NO:86所示的氨基酸序列；或
所述抗体重链包含SEQ ID NO:87所示的氨基酸序列，且所述抗体轻链包含SEQ ID NO:88所示的氨基酸序列。
27.根据权利要求1-26中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含抗体重链和抗体轻链，其中所述抗体重链包含SEQ ID NO:74所示的氨基酸序列，且所述抗体轻链包含SEQID NO:76所示的氨基酸序列；或
其中所述抗体重链包含SEQ ID NO:74所示的氨基酸序列，且所述抗体轻链包含SEQ IDNO:77所示的氨基酸序列；或
其中所述抗体重链包含SEQ ID NO:75所示的氨基酸序列，且所述抗体轻链包含SEQ IDNO:76所示的氨基酸序列；或
其中所述抗体重链包含SEQ ID NO:75所示的氨基酸序列，且所述抗体轻链包含SEQ IDNO:77所示的氨基酸序列；或
其中所述抗体重链包含SEQ ID NO:78所示的氨基酸序列，且所述抗体轻链包含SEQ IDNO:82所示的氨基酸序列；或
其中所述抗体重链包含SEQ ID NO:78所示的氨基酸序列，且所述抗体轻链包含SEQ IDNO:83所示的氨基酸序列；或
其中所述抗体重链包含SEQ ID NO:78所示的氨基酸序列，且所述抗体轻链包含SEQ IDNO:84所示的氨基酸序列；或
其中所述抗体重链包含SEQ ID NO:79所示的氨基酸序列，且所述抗体轻链包含SEQ IDNO:82所示的氨基酸序列；或
其中所述抗体重链包含SEQ ID NO:79所示的氨基酸序列，且所述抗体轻链包含SEQ IDNO:83所示的氨基酸序列；或
其中所述抗体重链包含SEQ ID NO:79所示的氨基酸序列，且所述抗体轻链包含SEQ IDNO:84所示的氨基酸序列。
28.分离的多肽，其包含权利要求1-27中任一项所述的分离的抗原结合蛋白。
29.分离的一种或多种核酸分子，其编码权利要求1-27中任一项所述的分离的抗原结合蛋白或权利要求28所述的多肽。
30.载体，其包含根据权利要求29所述的核酸分子。
31.细胞，所述细胞包含根据权利要求29所述的核酸分子或根据权利要求30所述的载体，或所述细胞表达根据权利要求1-27所述的抗原结合蛋白或权利要求28所述的多肽。
32.制备权利要求1-27中任一项所述的分离的抗原结合蛋白的方法，所述方法包括在使得权利要求1-27中任一项所述的分离的抗原结合蛋白表达的条件下，培养根据权利要求31所述的细胞。
33.药物组合物，其包含权利要求1-27中任一项所述的分离的抗原结合蛋白、权利要求28所述的多肽、权利要求29所述的核酸分子、权利要求30所述的载体和/或权利要求31所述的细胞，以及任选地药学上可接受的载体。
34.试剂盒，其包含权利要求1-27中任一项所述的分离的抗原结合蛋白、权利要求28所述的多肽、或权利要求33所述的药物组合物。
35.权利要求1-27中任一项所述的分离的抗原结合蛋白、权利要求28所述的多肽、权利要求29所述的核酸分子、权利要求30所述的载体、权利要求31所述的细胞和/或权利要求33所述的药物组合物在制备药物中的用途，所述药物用于预防和/或治疗CDH6相关的疾病或病症。
36.根据权利要求35所述的用途，其中所述CDH6相关的疾病或病症包括肿瘤。
37.根据权利要求36所述的用途，其中所述肿瘤包括表达CDH6的肿瘤。
38.根据权利要求36-37中任一项所述的用途，其中所述肿瘤包括肾细胞癌、肾透明细胞癌、乳头状肾细胞癌、卵巢癌、卵巢浆液性腺癌、甲状腺癌、胆管癌、肺癌、小细胞肺癌、肝癌、胶质母细胞瘤、间皮瘤、子宫癌、胰腺癌、威尔姆氏瘤或神经母细胞瘤。
39.根据权利要求35-38中任一项中任一项所述的用途，其中所述药物还包括其他治疗剂。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2021115076855 | 2021-12-10 | ||
| CN202111507685 | 2021-12-10 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN116284394A true CN116284394A (zh) | 2023-06-23 |
Family
ID=86776834
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202211581265.6A Pending CN116284394A (zh) | 2021-12-10 | 2022-12-09 | 分离的抗原结合蛋白及其应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN116284394A (zh) |
-
2022
- 2022-12-09 CN CN202211581265.6A patent/CN116284394A/zh active Pending
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN110606891B (zh) | 一种针对人cldn18.2的抗体分子，抗原结合片段及其医药用途 | |
| EP3808376A1 (en) | Antibody targeting cldn18.2, bispecific antibody, adc, and car, and applications thereof | |
| EP3689909A1 (en) | Tigit antibody, antigen-binding fragment thereof, and medical use thereof | |
| CN113544156B (zh) | 抗Claudin18.2抗体及其应用 | |
| JP6457386B2 (ja) | 抗−ｄｒ５ファミリー抗体、二重特異性又は多価の抗−ｄｒ５ファミリー抗体及びそれらの使用方法 | |
| WO2021185273A1 (zh) | 靶向Sirpα的抗体或其抗原结合片段及其制备和应用 | |
| KR20210087094A (ko) | 항-4-1bb 항체 및 이의 용도 | |
| WO2020168555A1 (zh) | Cd3抗原结合片段及其应用 | |
| EP3943511A1 (en) | Bispecific antibody specifically bound to vegf and ang2 | |
| JP7419238B2 (ja) | Ｐｄ１結合剤 | |
| CN110831968A (zh) | 用于治疗egfr阳性癌症的t细胞重定向双特异性抗体 | |
| CN110790840A (zh) | 结合人her2的抗体、其制备方法和用途 | |
| WO2022121928A1 (zh) | 抗egfr的纳米抗体及其用途 | |
| WO2022051591A2 (en) | Nectin-4 antibodies and uses thereof | |
| CN116234564A (zh) | 抗Nectin-4抗体、包含所述抗体的缀合物及其应用 | |
| JP7430137B2 (ja) | 抗体および使用方法 | |
| US20240117035A1 (en) | Cldn18.2/cd3 bispecific antibodies for the therapy of cldn18.2-expressing solid tumors | |
| EP4070816A1 (en) | Anti-gdf15 antibody | |
| KR20230022974A (ko) | 항-TGFβ 항체 및 이의 치료적 용도 | |
| CN116284394A (zh) | 分离的抗原结合蛋白及其应用 | |
| KR20230145542A (ko) | Tgf-베타-rii 결합 단백질 | |
| WO2022063272A1 (en) | Novel anti-claudin18 antibodies | |
| WO2024088386A1 (en) | Antibody, antigen-binding fragment thereof, and pharmaceutical use thereof | |
| WO2023074888A1 (ja) | 新規なＮａｖ１．７モノクローナル抗体 | |
| KR20230146591A (ko) | 신규 항pad4 항체 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| REG | Reference to a national code |
Ref country code: HK Ref legal event code: DE Ref document number: 40086174 Country of ref document: HK |