CN116254363A - 一种可预示和鉴定西瓜果形以及畸形果的分子标记及应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种可预示和鉴定西瓜果形及畸形果的分子标记及应用，属于生物技术领域。所述分子标记位于西瓜第三号染色体上的IQD基因中的两个位点，所述两个位点其中之一是在IQD基因中的1179位上的碱基对，所述两个位点其中另外一个为IQD基因内的159 bp碱基是否缺失，本发明还公开了一种可预示和鉴定西瓜果形及畸形果的分子标记扩增引物以及方法及其应用。本发明利用该分子标记能够在苗期准确快速的鉴定出西瓜果实形状以及是否畸形，具有检测方便、扩增产物稳定的优点。

Description

一种可预示和鉴定西瓜果形以及畸形果的分子标记及应用
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种可预示和鉴定西瓜果形以及畸形果的分子标记及应用。
背景技术
水果是人类饮食所需营养和矿物质的重要来源。果实在植物物种的进化和适应中发挥了重要作用，正如它们丰富多样的形态所暗示的那样。在众多与果实相关的特征中，果实形状是一种重要的园艺性状，是育种感官评价的一个参数。水果的大小和形状决定了产量、消费者偏好、包装和运输。西瓜[Citrullus lanatus(Thunb .) Matsum&Nadai]是重要的葫芦科一年生作物，是世界上一种重要的园艺经济作物，占世界蔬菜生产面积的7％。西瓜的遗传多样性较为丰富，不同的种质资源之间存在着较多的性状差异，从分子水平上对这些性状进行分析有助于西瓜遗传基础的研究。
分子标记辅助选择是随着现代分子生物学技术的迅速发展而产生的新技术,它可以从分子水平上快速准确地分析个体的遗传组成,从而实现对基因型的直接选择,进行分子育种。分子标记辅助选择成功的关键在于所获得的分子标记是否与待分析的性状相连锁以及是否在同一物种的不同材料间具有通用性。
西瓜果实形状可分为椭圆形、高圆形、圆形三种，同时由于营养、环境等因素，一些品种容易出现畸形果，从而导致商品性大大降低。在先前已对甜瓜、西瓜和黄瓜的果实形状性状进行了深入的遗传学研究。对于瓜果形状，至少构建了5个遗传图谱，共检测到42个QTL，其R2值范围为10.0% ~ 52.2%。在西瓜中，从五个遗传图谱中检测到至少13个果实形状的QTL，三个主要QTL位于Chr3和11。其中一个主要的QTL（fsi3.1）与SUN基因的同源物（Cla011257）高度相关。该SUN同源物被报道为西瓜果实形状指数（FSI）性状的候选基因。
以上研究只能区分出高圆形瓜与其他形状，未能找到与高圆形瓜、椭圆形瓜、圆形瓜紧密连锁的分子标记，并且也没有办法鉴别出畸形瓜。
发明内容
本申请通过提供了一种可预示和鉴定西瓜果形及畸形果的分子标记，可以在在幼苗时期能够预判和鉴定西瓜果形以及畸形瓜，提高西瓜果实选育的准确率以及加快选育过程。
鉴于上述问题，本申请提供了一种可预示和鉴定西瓜果形以及畸形果的分子标记及应用。
首先本发明目的一，为了能检测出西瓜果形以及畸形果，利用分子标记加快选择育种的过程。
本发明解决上述技术问题方案如下，一种可预示和鉴定西瓜果形及畸形果的分子标记，其特征在于，所述分子标记位于西瓜第三号染色体上的IQD基因中的两个位点。所述两个位点其中之一是在IQD基因中的1179位上的碱基对，纯合碱基AA关联椭圆形果形，基因型用AA表示；纯合碱基GG关联圆形果形，基因型用aa表示；杂合碱基AG关联高圆果形，基因型用Aa表示。所述两个位点其中另外一个为IQD基因内的159 bp碱基是否缺失，IQD基因内159 bp缺失，基因型用CC表示，关联西瓜畸形果表型；而IQD基因内的159 bp碱基的未缺失，基因型用cc表示，关联西瓜正常果形表型。C基因影响A基因的表达，即植株基因组中存在显性C基因时，无论控制果实形状的基因为何种基因型，果实均为畸形果；只有cc基因存在时，AA、Aa和aa基因型的品种才能够表现出相应的表现型。
其次本发明目的二，一种用于鉴定西瓜果实形状以及畸形果的PCR扩增引物。本发明的PCR扩增引物，特异性强，用于鉴定西瓜果实形状及畸形果，并且在鉴定过程中灵敏度高，不受环境因素的影响，可精确用于西瓜果实形状的鉴定，还能尽早筛查出畸形果，提高果实的美观性，广泛应用于育种过程中。
本发明解决上述技术问题方案如下，一种可预示和鉴定西瓜果形及畸形果的分子标记，其特征在于，所述分子标记的扩增引物分为上游引物和下游引物，所述上游引物为IQD-F：5'-TTTGTCATTACTGTTTTCGTTTGCT-3'，所述下游引物为IQD-R：5'-TCCACTAAGACTACTTCTCGATTCCATGAAT-3'。
本发明目的三，是提供一种用于鉴定西瓜果实形状及畸形果的方法。本发明的用于鉴定西瓜果实形状及畸形果的方法，采用上述PCR扩增引物，对需要待鉴定的植株DNA进行PCR扩增，通过扩增片段的大小即能鉴定出西瓜果实的形状，该方法适用于西瓜各个时期对果实形状的鉴定，并且准确性高，方便快捷。
本发明解决上述技术问题的技术方案如下：一种鉴定西瓜果形及畸形果的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)提取西瓜基因组DNA；
(2)PCR扩增：利用权利要求2所述的PCR扩增引物对，对待测样品进行PCR扩增以及限制性内切酶酶切反应；
(3)对PCR扩增产物进行凝胶电泳检测，在622 bp条带对应为椭圆形果，在590 bp条带对应为圆形果，在431 bp有条带为畸形果。
优选的在上述（2）中所述PCR扩增的反应体系为：20 ~ 100 ng·μL-1西瓜基因组DNA 1 μL，2.5 μM上下游引物各1 μL，2 × Taq Master Mix 5 μL，ddH2O23 μL，总体积10 μL。
优选的在上述（2）中所述PCR扩增的反应程序为：
阶段1：94℃ 5 min；
阶段2：94℃ 20 s，63℃ 20 s，72℃ 30 s，共35次循环；
阶段3：72℃ 5 min；
阶段4：4℃ ∞。
限制性内切酶EcoRⅠ的酶切体系：PCR产物10 μL，10 ×EcoRⅠ buffer 1.5 μL，EcoRⅠ 0.5 μL，ddH2O 3 μL。
酶切的反应程序为：37℃ 4 h。
本发明的目的之四，是提供上述一种可预示和鉴定西瓜果形及畸形果的分子标记的应用。本发明的用于鉴定西瓜果实形状以及提前鉴定出畸形果。可以在苗期即可筛选出所需要的植株，以及剔除畸形果的瓜苗，不仅减少了育种过程中的占地面积，同时也减少了果实成熟期鉴定所需的人力物力，大大提高育种的效率。
本发明的有益效果：
(1)本发明分子标记的基因，是基于候选基因开发出来的与果实形状以及畸形果紧密相连的分子，利用该标记能够在苗期准确快速的鉴定出西瓜果实形状以及畸形果，通过其在育种进程中的运用可以大大加快西瓜果实形状选择育种的进程，具有检测方便、扩增产物稳定的优点。
(2)本发明的PCR扩增引物组合，特异性强，只能够用于鉴定西瓜果实形状以及畸形果，并且在鉴定过程中灵敏度高，不受环境因素的影响，可广泛应用于西瓜果实形状的鉴定，并且可在育种过程中广泛应用。
(3)本发明的用于鉴定西瓜果实形状及畸形果的方法，采用上述PCR扩增引物组合，对需要鉴定的植株DNA进行PCR扩增，通过扩增片段的大小就能鉴定出西瓜果实的形状或者是否为畸形果，该方法适用于西瓜各个时期对果实形状的鉴定，并且准确性高，方便快捷。
(4)本发明可以应用于西瓜果实形状及畸形果分子标记辅助选择育种中，用于鉴定西瓜果实的形状以及畸形果。可以在苗期中鉴定出所需要的植株，不仅减少了育种过程中的占地面积，通时也减少了果实成熟期鉴定所需的人力物力，大大提高育种的效率。
附图说明
图1为西瓜父本、母本、F1代、F2代群体遗传中果实形状；
图2为不同品种PCR扩增产物酶切结果，M为Marker DL2000；1 ~ 102号为不同的西瓜品系；
图3为西瓜畸形果表现型。
具体实施方式
以下结合附图对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。
实施例1：用于鉴定或者验证西瓜果实形状的控制位点。
一、供试材料
供试材料包括父本、母本、F1代、F2代群体，如附图1所示。
父本：CL-12，优奈尔生物科技有限公司种质资源库，椭圆形果；
母本：CL-38，优奈尔生物科技有限公司种质资源库，圆形果；
F1代：以上述CL-12为父本，CL-38为母本进行杂交获取的F1代；
F2代：上述F1代自交获得的F2代群体，共111株。
通过表型鉴定及卡方检测发现，后代（F1代和F2代）群体果实形状的遗传符合单一基因调控且属于共显性关系（表1和表2），其中椭圆形由基因AA调控，圆形由基因型aa调控，高圆形由基因型Aa调控。
表1 西瓜群体中父本、母本、F1代、F2代果实形状表型：
注：根据数据结果及表型结果，作者将表型结果定义为FSI ≤ 1.3果形为圆形；1.3<FSI ≤ 1.7果形为高圆形，FSI>1.7果形为椭圆形，此结果仅作为参考数据。
表2 西瓜果实形状基因定位群体中父本、母本、F1代、F2代群体的表型
实施例2
本实施例用来说明如何使用开发的分子标记辅助鉴定西瓜果实形状。具体步骤如下：
一、基因组DNA的提取：
用CTAB法分别提取西瓜材料（参见表3中的西瓜材料）的基因组DNA。具体步骤如下：
1、取0.5 g幼嫩叶片于2 mL离心管中，每管加入600 μL CTAB提取缓冲液，放入2粒钢珠，用Tissuelyser-192破碎仪进行破碎，设置频率为60.00 HZ、时间为240 s；
2、破碎完毕后置于65℃水浴60 min，每隔15 min颠倒混匀一次；
3、水浴后加入3 M乙酸铵200 μL，置于冰上冷却10 min，加入600 μL的氯仿、异戊醇混合液（氯仿和异戊醇的体积比为24 : 1），充分混匀，12 000 rpm离心10 min；
4、取600 μL上清液，加入预先加好的600 μL预冷的异丙醇中（于96孔深孔板），轻轻混匀，-20℃放置30 min；
5、于12 000 rpm离心10 min，弃上清，用70%的乙醇洗沉淀1次，室温下风干至无乙醇味；
6、加入200 μL ddH2O 65℃水浴20 min。所述ddH2O：含10 mg/mL的RNase 1 μL；
7、取1 μL样品在NanoPhotometer® N50上检测样品浓度，将样品浓度调为一致。
由之前得出C_：控制畸形果；当cc存在时，AA控制椭圆形果，Aa控制高圆形果，aa控制圆形果，下表中已经省略cc。
表3 96个西瓜品系果实形状表现型和基因型
在提取的DNA中获得用于扩增西瓜果实基因的片段为
椭圆形IDQ基因核苷酸序列：ATGTTCGGCGGCGGCCGGGAAAGATGGGCCTCTGTTAAGATTCAAACTTGCTTCAGAGGATATCTGGTGAGTGAGTGAGTGAGTGATTTCATTTCCTTTGTTCTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTGTTGTTGTTATGTTTTCTGAAGGATTGGGTGAAATTAATTAGGCGAGGAAAGCACTGAGAGCTTTGAAAGGATTGGTGAAATTACAAGCGCTTGTGAGAGGATATTTAGTTCGTAAACAAGCAACAGCAACTCTTCATAGTATGCAAGCTTTAATCAGAGCTCAAGCCACCGTTCGATCTCAGAGAACTCGTAGATTCATAAACGACGAAACAAGACTTGAAATCCGAGCCAGAAAATCAATGGTGAACACTAAGAAACTTTATTTACAATTTGTCATTACTGTTTTCGTTTGCTGAATTGAAATTAAACCCCCAAATAAAATTTTCAATGCAGGAGAGATTTGATGACACAAAAAGCGAACACACAGCTTCGGTACACAGCAGAAGACTCTCTGCTTCATTAGATAACACAGCATTCACAGCAATGGAAGAAAGCCCCAAAATCGTGGAAATCGACACCGGCCGACCAAAATCCTGGTCACGCCGGACGAACACGTCGGCGTCGGAATTAAGCGACGACCTATTTCACCAAACTCTCTCGTCTCCACTCCCTTGCCGGACTCCGTCGCGTTTGCAAATCCCAGATTGCCGGAATTTCCATGACTCTGACTGGTGCGGCGGCGACGACTGGCGTTTAATCTCGACGGCGCAGAGTACTCCACGATTTGTGAACTCTGGCGGTGGATCGAACGGTCCTCCGACGCCGGCGAAGAGTATGTGTGGGGAGAATTTCTTTAAAGGGTATTTGAATTTTCCAAATTACATGGCGAATACTCAATCGTTTAAGGCGAAATTGAGATCTCAGAGTGCACCGAAACAGAGGCCGGAGCTGGGATCGAAGAAAAGGGTTTCGTTGAATGGATTGATGGAATCGAGAAGTAGTCTTAGTGGAGTTAGAATGCAGAGATCTTGTTCTCAAGTTCAAGAAGCCATTAATTTCAAGAACGCAGTGATGAGCAAACTCGATAGGCCATCAGAATTCAACAATTTGCAGAGAAGAATATGA
圆形IDQ基因核苷酸序列：
ATGTTCGGCGGCGGCCGGGAAAGATGGGCCTCTGTTAAGATTCAAACTTGCTTCAGAGGATATCTGGTGAGTGAGTGAGTGAGTGATTTCATTTCCTTTGTTCTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTGTTGTTGTTATGTTTTCTGAAGGATTGGGTGAAATTAATTAGGCGAGGAAAGCACTGAGAGCTTTGAAAGGATTGGTGAAATTACAAGCGCTTGTGAGAGGATATTTAGTTCGTAAACAAGCAACAGCAACTCTTCATAGTATGCAAGCTTTAATCAGAGCTCAAGCCACCGTTCGATCTCAGAGAACTCGTAGATTCATAAACGACGAAACAAGACTTGAAATCCGAGCCAGAAAATCAATGGTGAACACTAAGAAACTTTATTTACAATTTGTCATTACTGTTTTCGTTTGCTGAATTGAAATTAAACCCCCAAATAAAATTTTCAATGCAGGAGAGATTTGATGACACAAAAAGCGAACACACAGCTTCGGTACACAGCAGAAGACTCTCTGCTTCATTAGATAACACAGCATTCACAGCAATGGAAGAAAGCCCCAAAATCGTGGAAATCGACACCGGCCGACCAAAATCCTGGTCACGCCGGACGAACACGTCGGCGTCGGAATTAAGCGACGACCTATTTCACCAAACTCTCTCGTCTCCACTCCCTTGCCGGACTCCGTCGCGTTTGCAAATCCCAGATTGCCGGAATTTCCATGACTCTGACTGGTGCGGCGGCGACGACTGGCGTTTAATCTCGACGGCGCAGAGTACTCCACGATTTGTGAACTCTGGCGGTGGATCGAACGGTCCTCCGACGCCGGCGAAGAGTATGTGTGGGGAGAATTTCTTTAAAGGGTATTTGAATTTTCCAAATTACATGGCGAATACTCAATCGTTTAAGGCGAAATTGAGATCTCAGAGTGCACCGAAACAGAGGCCGGAGCTGGGATCGAAGAAAAGGGTTTCGTTGAATGAATTGATGGAATCGAGAAGTAGTCTTAGTGGAGTTAGAATGCAGAGATCTTGTTCTCAAGTTCAAGAAGCCATTAATTTCAAGAACGCAGTGATGAGCAAACTCGATAGGCCATCAGAATTCAACAATTTGCAGAGAAGAATATGA
畸形果IDQ基因核苷酸序列：
ATGTTCGGCGGCGGCCGGGAAAGATGGGCCTCTGTTAAGATTCAAACTTGCTTCAGAGGATATCTGGTGAGTGAGTGAGTGAGTGATTTCATTTCCTTTGTTCTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTGTTGTTGTTATGTTTTCTGAAGGATTGGGTGAAATTAATTAGGCGAGGAAAGCACTGAGAGCTTTGAAAGGATTGGTGAAATTACAAGCGCTTGTGAGAGGATATTTAGTTCGTAAACAAGCAACAGCAACTCTTCATAGTATGCAAGCTTTAATCAGAGCTCAAGCCACCGTTCGATCTCAGAGAACTCGTAGATTCATAAACGACGAAACAAGACTTGAAATCCGAGCCAGAAAATCAATGGTGAACACTAAGAAACTTTATTTACAATTTGTCATTACTGTTTTCGTTTGCTGAATTGAAATTAAACCCCCAAATAAAATTTTCAATGCAGGAGAGATTTGATGACACAAAAAGCGAACACACAGCTTCGGTACACAGCAGAAGACTCCCTTGCCGGACTCCGTCGCGTTTGCAAATCCCAGATTGCCGGAATTTCCATGACTCTGACTGGTGCGGCGGCGACGACTGGCGTTTAATCTCGACGGCGCAGAGTACTCCACGATTTGTGAACTCTGGCGGTGGATCGAACGGTCCTCCGACGCCGGCGAAGAGTATGTGTGGGGAGAATTTCTTTAAAGGGTATTTGAATTTTCCAAATTACATGGCGAATACTCAATCGTTTAAGGCGAAATTGAGATCTCAGAGTGCACCGAAACAGAGGCCGGAGCTGGGATCGAAGAAAAGGGTTTCGTTGAATGAATTGATGGAATCGAGAAGTAGTCTTAGTGGAGTTAGAATGCAGAGATCTTGTTCTCAAGTTCAAGAAGCCATTAATTTCAAGAACGCAGTGATGAGCAAACTCGATAGGCCATCAGAATTCAACAATTTGCAGAGAAGAATATGA
椭圆形果IDQ基因氨基酸序列：
MFGGGRERWASVKIQTCFRGYLARKALRALKGLVKLQALVRGYLVRKQATATLHSMQALIRAQATVRSQRTRRFINDETRLEIRARKSMERFDDTKSEHTASVHSRRLSASLDNTAFTAMEESPKIVEIDTGRPKSWSRRTNTSASELSDDLFHQTLSSPLPCRTPSRLQIPDCRNFHDSDWCGGDDWRLISTAQSTPRFVNSGGGSNGPPTPAKSMCGENFFKGYLNFPNYMANTQSFKAKLRSQSAPKQRPELGSKKRVSLNGLMESRSSLSGVRMQRSCSQVQEAINFKNAVMSKLDRPSEFNNLQRRI
圆形果IDQ基因氨基酸序列：
MFGGGRERWASVKIQTCFRGYLARKALRALKGLVKLQALVRGYLVRKQATATLHSMQALIRAQATVRSQRTRRFINDETRLEIRARKSMERFDDTKSEHTASVHSRRLSASLDNTAFTAMEESPKIVEIDTGRPKSWSRRTNTSASELSDDLFHQTLSSPLPCRTPSRLQIPDCRNFHDSDWCGGDDWRLISTAQSTPRFVNSGGGSNGPPTPAKSMCGENFFKGYLNFPNYMANTQSFKAKLRSQSAPKQRPELGSKKRVSLNELMESRSSLSGVRMQRSCSQVQEAINFKNAVMSKLDRPSEFNNLQRRI
畸形果IDQ基因氨基酸序列：
MFGGGRERWASVKIQTCFRGYLARKALRALKGLVKLQALVRGYLVRKQATATLHSMQALIRAQATVRSQRTRRFINDETRLEIRARKSMERFDDTKSEHTASVHSRRLPCRTPSRLQIPDCRNFHDSDWCGGDDWRLISTAQSTPRFVNSGGGSNGPPTPAKSMCGENFFKGYLNFPNYMANTQSFKAKLRSQSAPKQRPELGSKKRVSLNELMESRSSLSGVRMQRSCSQVQEAINFKNAVMSKLDRPSEFNNLQRRI。
二、PCR扩增
应用提取的基因组DNA为模板，采用如下引物进行PCR扩增，分别得到PCR扩增产物。
用于扩增西瓜果实形状基因片段的引物如下：
IQD-F（上游引物序列）：5’-TTTGTCATTACTGTTTTCGTTTGCT-3’（序列1）；
IQD-R（下游引物序列）：5’-TCCACTAAGACTACTTCTCGATTCCATGAAT-3’（序列2）。
上述引物均由生工生物工程（上海）股份有限公司（青岛部）合成。
PCR反应体系为：20 ~ 100 ng·μL-1西瓜基因组DNA 1 μL，25 μM正反向引物各1 μL，2 × Taq Master Mix 5 μL，ddH2O 3 μL，总体积10 μL。
PCR扩增反应的反应程序为：
阶段1：94℃ 5 min；
阶段2：94℃ 20 s，63℃ 20 s，72℃ 30 s，共35次循环；
阶段3：72℃ 5 min；
阶段4：4℃ ∞。
限制性内切酶EcoRⅠ的酶切体系：PCR产物10 μL，10 ×EcoRⅠ buffer 1.5 μL，EcoRⅠ 0.5 μL，ddH2O 3 μL。
酶切的反应程序为：37℃ 4 h。
三、电泳检测（产物检测）
用1 × TAE配制3.5%的琼脂糖凝胶，用微波炉加热完全溶解后，冷却至45 ~ 55℃左右，按照1 : 10000的比例加入核酸染料，迅速摇匀。将胶倒入插好梳齿的胶槽中，待胶完全凝固后可以将梳齿拔出。取5 μL酶切产物，加入1 μL 10 × loading buffer，混匀后加入到点样孔中，在130 V下电泳4 h。电泳结束后用凝胶成像仪进行拍照后分析。扩增出622bp条带为椭圆形（A），590 bp为圆形（a），431 bp为畸形果（C）。

Claims (6)

1.一种可预示和鉴定西瓜果形及畸形果的分子标记，其特征在于，所述分子标记位于西瓜第三号染色体上的IQD基因中的两个位点,所述两个位点其中之一是在IQD基因中的1179位上的碱基对，纯合碱基AA关联椭圆形果形，基因型用AA表示；纯合碱基GG关联圆形果形，基因型用aa表示；杂合碱基AG关联高圆果形，基因型用Aa表示,所述两个位点中另外一个为IQD基因内的159 bp碱基是否缺失，IQD基因内159 bp缺失，基因型用CC表示，关联西瓜畸形果表型；而IQD基因内的159 bp碱基的未缺失，基因型用cc表示，关联西瓜正常果形表型,C基因影响A基因的表达，即植株基因组中存在显性C基因时，无论控制果实形状的基因为何种基因型，果实均为畸形果；只有cc基因存在时，AA、Aa和aa基因型的品种才能够表现出相应的表现型。
2.根据权利要求1所述的一种可预示和鉴定西瓜果形及畸形果的分子标记，其特征在于，所述分子标记的扩增引物分为上游引物和下游引物;
所述上游引物为IQD-F：5'-TTTGTCATTACTGTTTTCGTTTGCT-3'；
所述下游引物为IQD-R：5'-TCCACTAAGACTACTTCTCGATTCCATGAAT-3'。
3.一种鉴定西瓜果形及畸形果的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)提取西瓜基因组DNA；
(2)PCR扩增：利用权利要求2所述的PCR扩增引物对，对待测样品进行PCR扩增以及限制性内切酶酶切反应；
(3)对产物进行凝胶电泳检测，622 bp条带对应为椭圆形果，590 bp对应为圆形果，431bp对应为为畸形果。
4.根据权利要求3所述的一种鉴定西瓜果形及畸形果的方法，其特征在于，（2）中所述PCR扩增的反应体系为：20 ~ 100 ng·μL-1西瓜基因组DNA 1 μL，2.5 μM上下游引物各1 μL，2 × Taq Master Mix 5 μL，ddH2O2 3 μL，总体积10 μL。
5.根据权利要求3所述的一种鉴定西瓜果实形状及畸形果的方法，其特征在于，（2）中所述PCR扩增的反应程序为：
阶段1：94℃ 5 min；
阶段2：94℃ 20 s，63℃ 20 s，72℃ 30 s，共35次循环；
阶段3：72℃ 5 min；
阶段4：4℃ ∞;
限制性内切酶EcoRⅠ的酶切体系：PCR产物10 μL，10 × EcoRⅠ buffer 1.5 μL，EcoRⅠ0.5 μL，ddH2O 3 μL;
酶切的反应程序为：37℃ 4 h。
6.如权利要求1所述的一种可预示和鉴定西瓜果形及畸形果的分子标记的应用，其特征在于：它应用于在苗期鉴定和预测西瓜的果实形状以及是否是畸形果，并且能提早剔除畸形果苗。
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